Definicin de resistencia a fungicidas

El trmino resistencia a fungicidas , tal como es usado por FRAC, se refiere

a una reduccin hereditaria adquirida en la sensibilidad de un hongo a un agente
antifngico especfico (o fungicida). Para manejar la resistencia de manera
efectiva, los cientficos estudian la resistencia a fungicidas en muchos niveles
diferentes, incluyendo el nivel celular, organizacional o de poblacin /
campo. Los estudios de resistencia del campo (es decir, donde los cultivadores
observaron una eficacia reducida de un producto que ha demostrado
previamente eficacia contra ese patgeno particular) deben ser confirmados por estudios a nivel organizacional
que muestren una reduccin en la sensibilidad del (de los) aislado (s) fngico El fungicida especfico. Algunos
cientficos usan los trminos sensibilidad reducida o tolerancia Cuando se hace referencia a reducciones
menores en la sensibilidad que pueden tener poco o ningn impacto en el uso de fungicidas en el campo y
guardar el trmino "resistencia" para grandes reducciones en la sensibilidad de aislados individuales que
puedan afectar la eficacia de un fungicida especfico en condiciones de campo si Los aislamientos resistentes
se generalizan en la poblacin de patgenos. El trmino resistencia de campo tambin se puede usar para
indicar esta prdida de control bajo condiciones de campo.

El desarrollo de la resistencia a los fungicidas es un proceso evolutivo. Los hongos, al igual que otros
organismos, estn cambiando constantemente. Ocasionalmente, bajo ciertas condiciones, estos cambios
proporcionan una ventaja o desventaja en trminos de la capacidad de la progenie para sobrevivir y reproducir
otra generacin. Los cambios ventajosos permiten que la persona que contiene el cambio sobreviva y se
reproduzca a mayores velocidades, de modo que su progenie sea un porcentaje mayor de la poblacin en las
generaciones posteriores. Esto puede ocurrir con relativa rapidez en los hongos, ya que su frecuencia
reproductiva (es decir, el nmero de progenies producidas a partir de un solo individuo y la rapidez con que
completan su ciclo de vida es rpida) es alta. Por ejemplo, un solo Phytophthora infestansLa lesin puede
producir miles de esporas y una espora puede producir una nueva lesin esporulosa en 3-5 das. El cambio
puede ser evolutivamente neutro, o incluso ligeramente desventajoso, en la mayora de las condiciones y slo
ser ventajoso cuando estn presentes ciertos factores. Este es el caso con la resistencia a fungicidas. En la
mayora de los casos de resistencia a fungicidas, el cambio que conduce a una sensibilidad reducida es
evolutivamente neutro excepto cuando se aplica el fungicida especfico. El fungicida est ejerciendo presin
de seleccin sobre la poblacin de patgenos, ya que est matando a la poblacin inicial (o de tipo salvaje )
pero no mata a la poblacin modificada (o mutante) poblacin. Cuando los cambios son ligeramente
desventajosos en condiciones normales (es decir, en ausencia del fungicida), la frecuencia de la poblacin
cambiada puede disminuir cuando se elimina la presin de seleccin. Esto se denomina una penalidad de
fitness.

Monitoreo de Resistencia
El monitoreo de la resistencia es crucial para entender los cambios que la poblacin puede estar
experimentando. Antes de lanzar nuevos ingredientes activos como nuevos productos, se debe establecer una
lnea de base. Una lnea de base Describe la sensibilidad de una determinada coleccin de aislamientos a un
fungicida especfico antes de su exposicin a ese fungicida. Es importante establecer mtodos validados para
crear la lnea de base, as como para describir la poblacin de patgenos en el futuro, ya que diferentes mtodos
pueden dar lugar a diferentes sensibilidades de lnea de base. La sensibilidad de muchos hongos puede medirse
en estudios de agar modificados simples, mientras que los patgenos obligatorios necesitan ser probados en
material vegetal vivo (a menudo discos de hojas para aumentar el rendimiento). Durante estas pruebas de
sensibilidad, se usan dosis mltiples del fungicida para determinar una EC50 que significa control efectivo al
50% (es decir, la dosis que proporciona una inhibicin del 50% del aislado en comparacin con un control no
modificado con fungicida). Estos valores EC50 se grafican en un histograma de frecuencia para determinar la
lnea de base (Fig. 1). Es necesario un muestreo adecuado de la poblacin para medir la variabilidad inherente
a la sensibilidad de la poblacin al fungicida.

Fig. 1A. Ejemplo hipottico de una lnea base fungicida mostrada como un histograma de
frecuencia. 1B. Histograma de frecuencia que muestra una resistencia de tipo cuantitativo o
cambiante. 1C. Histograma de frecuencia que demuestra la deteccin temprana de la resistencia cualitativa. En
este ejemplo, se detectaron unos aislamientos, que estn encerrados en rojo, que caan fuera de la lnea de
base. 1D. El histograma de frecuencia que ejemplifica la resistencia cualitativa despus de una presin de
seleccin significativa ha desplazado a la poblacin a un valor EC50 medio mucho ms alto.

El monitoreo de rutina de la poblacin de campo puede entonces llevarse a cabo recolectando nuevos
aislamientos y comparando su sensibilidad con la lnea de base. Si el valor medio de EC50 de las muestras
recogidas es estadsticamente mayor que el valor medio de EC50 de la lnea de base, entonces la sensibilidad
de la poblacin ha cambiado (figura 1B, ao 5). Si la presin de seleccin contina ejercindose sobre la
poblacin, el valor medio de EC50 puede cambiar an ms (Fig. 1B, ao 10). Este tipo de resistencia de tipo de
cambio se llama cuantitativo (o multi-paso o continuo) Resistencia. En promedio, estos aislamientos son
controlados por dosis ligeramente superiores de fungicida en el bioensayo de laboratorio. En las primeras
etapas de la resistencia cuantitativa, el fungicida en cuestin todava puede proporcionar un control adecuado
en condiciones de campo a las tasas de uso actuales. A medida que el valor medio de EC50 de la poblacin se
hace ms grande, pueden ser necesarias dosis mayores del fungicida para proporcionar control. Los
productores siempre deben seguir las etiquetas de los fabricantes al aplicar fungicidas.

En ocasiones se encuentran aislados que tienen valores EC50 significativamente ms altos que la media de la
lnea de base (Fig. 1C en crculo rojo). Estos individuos se consideran resistentes ya que la dosis necesaria
para controlar estos aislamientos es mucho mayor y puede no ser prctica en las condiciones del bioensayo de
laboratorio. El trmino resistencia cualitativa (o disruptiva o discreta ) se utiliza para describir este tipo
de resistencia. Las dosis mayores requeridas para controlar estos aislamientos son an menos probables de
ser prcticas en condiciones de campo. Si, o cuando, estos aislamientos se vuelven prevalentes en la poblacin,
una probable prdida de actividad ser observada por los cultivadores.

Cuando la monitorizacin de la resistencia no es una prctica rutinaria, los problemas de resistencia

generalmente se identifican por primera vez cuando los cultivadores observan una marcada falta de control de
productos previamente eficaces. Las muestras de la enfermedad son tomadas entonces de estos campos para
confirmar una reduccin en sensibilidad bajo condiciones controladas en el laboratorio. Esta etapa de
confirmacin es crucial ya que existen muchas razones por las que los compuestos previamente eficaces no
son eficaces en ningn campo dado (por ejemplo, presin intensa de la enfermedad, cobertura de aplicacin
incompleta, dosificacin incorrecta o tiempo de aplicacin, etc.). Si se confirma la sensibilidad reducida, es
probable que los aislados resistentes ya sean prevalentes en esa poblacin de campo local, ya que ya se ha
observado una marcada prdida de eficacia. El muestreo de las reas circundantes puede ayudar a los
cultivadores a entender qu tan extendido estn los aislados resistentes y puede proporcionar alguna
orientacin sobre el uso del producto para la prxima temporada para manejar la resistencia. Se recomienda el
monitoreo de rutina siempre que sea posible con la esperanza de que los cientficos puedan identificar individuos
resistentes antes de que se generalizen en la poblacin de patgenos. Se espera que las buenas prcticas de
manejo de la resistencia las mantendrn en baja frecuencia en la poblacin de manera que el fungicida de
inters contine proporcionando buena eficacia bajo condiciones de campo.
Sitio de Accin y Mecanismo (s) de Resistencia

Sitio / Modo de accin

Muchos procesos celulares en organismos eucariticos dependen del funcionamiento adecuado del
citoesqueleto. La divisin celular, el mantenimiento de la forma celular, el movimiento intracelular de organelos,
todos estos procesos dependen del citoesqueleto. En los hongos filamentosos, el citoesqueleto tambin
desempea un papel clave en la transduccin de seal, adhesin, crecimiento de la punta de hifa, septacin,
motilidad cuando estn involucrados flagelos, as como en la patognesis. Los microtbulos, un tipo de filamento
del citoesqueleto, regulan la posicin y el movimiento de la organela dentro de la clula. Los microtbulos son
cilindros largos y huecos de dmeros repetidos de - y -tubulina. Aunque altamente conservadas, las
secuencias de aminocidos en los genes tubulina pueden variar significativamente sin destruir la funcin del
gen. Como consecuencia, la sensibilidad a los inhibidores tambin es altamente variable. De hecho, existe
suficiente diversidad para permitir la seleccin de una amplia gama de inhibidores en muchos organismos diana
diversos, as como la selectividad del husped necesaria para el uso teraputico exitoso. En los ltimos 50 aos,
la formacin y funcionamiento de los microtbulos ha sido un objetivo fructfero no slo para los fungicidas, sino
tambin para otros plaguicidas, incluidos insecticidas, miticidas, nematicidas y herbicidas.

Los benzimidazoles son potentes inhibidores de la polimerizacin de -tubulina en muchas especies de hongos
y se han utilizado para el control de enfermedades de las plantas desde fines de los aos sesenta. Aunque las
interacciones directas de los inhibidores con la -tubulina parecen ser los procesos inhibidores predominantes
para esta clase qumica, tambin se han informado las interacciones con otras formas de tubulina, as como las
interacciones diferenciales con la tubulina en los estados libre y polimerizado.

Dependiendo de su concentracin, tiempo de incubacin y tipo de medio, los benzimidazoles parecen inducir
anormalidades en la germinacin de esporas, el alargamiento de los tubos germinales, la multiplicacin celular
y el crecimiento micelial de hongos sensibles. Las etapas iniciales de la germinacin de las esporas a menudo
no se ven afectadas por los bencimidazoles. Los benzimidazoles impiden la divisin celular, sin embargo, que
se requiere para el alargamiento continuo del tubo germinal y la infeccin.

Los fungicidas de benzimidazol controlan un espectro notablemente amplio de hongos patgenos de plantas,
pero no controlan los Oomycetes como Pythium, Phytophthora y organismos que son responsables de las
enfermedades del mildiu de muchos cultivos. Curiosamente, se ha informado que el fungicida benzamida
zoxamida introducido ms recientemente ha afectado las interacciones tubulina y microtbulos en Oomycetes,
as como otros hongos.

Mecanismo de resistencia

Los estudios han demostrado que la actividad fungicida y la resistencia se determinan por afinidad de inhibidores
especficos para sitios diana sobre la protena -tubulina. Las alteraciones en el gen de la -tubulina que afectan
la sensibilidad a los fungicidas de benzimidazol usualmente son de poca importancia prctica para el manejo
de la resistencia, ya que dan lugar a una mayor sensibilidad a los inhibidores. La resistencia a los fungicidas de
benzimidazol est relacionada principalmente con alteraciones especficas en los sitios de unin de la protena
-tubulina. Muchas mutaciones que confieren resistencia a los benzimidazoles se han identificado en el gen -
tubulina en estudios de laboratorio con una amplia gama de diferentes hongos. Sin embargo, la prdida de
rendimiento en el campo se ha asociado con 6 mutaciones en el sitio diana, en los codones 6, 50, 167, 198,
200, 240. Las mutaciones ms comunes e importantes ocurren en los codones 198 y 200. En el codn 198, los
mutantes varan de moderadamente a muy altamente resistentes dependiendo del aminocido especfico que
reemplaza el cido glutmico presente en el tipo salvaje sensible. En el codn 200, los aislamientos resistentes
se caracterizan por una sola sustitucin de fenilalanina por tirosina (F200Y) que generalmente confiere niveles
moderados a altos de resistencia a bencimidazol.

Tambin se han reportado otros posibles mecanismos de resistencia. En algunos hongos como Colletotrichum
acutatum inherentemente menos sensibles a los benzimidazoles, la sobreexpresin de la protena -tubulina
puede ser un factor que contribuye al aumento de la tolerancia. En algunos casos, los bajos niveles de
resistencia se han asociado con la resistencia a mltiples frmacos. Otros mecanismos como el aumento del
metabolismo o la absorcin reducida de los inhibidores no parecen ser factores importantes para esta rea de
la qumica.

Resistencia cruzada con otros fungicidas

Generalmente no hay resistencia cruzada entre los benzimidazoles y los fungicidas comerciales de otras clases
qumicas. Por lo tanto, las combinaciones de benzimidazoles con fungicidas compaeros con diferentes sitios
diana son un medio eficaz para reducir el riesgo de resistencia.

El fenmeno de resistencia cruzada negativa tambin ha sido reportado entre los fungicidas de benzimidazol y
algunas otras clases qumicas, incluyendo N-fenilcarbamatos y ms recientemente benzamidas. Por ejemplo,
los aislamientos fngicos sensibles a los benzimidazoles son resistentes a los N-fenilcarbamatos como el
diethofencarb. Sin embargo, los aislamientos que son resistentes a los benzimidazoles son sensibles a los N-
fenilcarbamatos. Este fenmeno permiti que las mezclas de estas dos clases fueran utilizadas comercialmente
en los viedos europeos para el manejo de la resistencia en Botrytis cinerea hasta que aparecieran aislados
con la mutacin F200Y con resistencia a ambas clases. Aunque se han detectado aislamientos resistentes a
ambas clases, Aislamientos resistentes resultados en esta mezcla que sigue siendo eficaz en algunas reas.

Para N-fenilcarbamatos y benzamidas, la resistencia cruzada negativa depende de las mutaciones especficas
presentes en el codn 198 del gen de la -tubulina. Los aislamientos de tipo salvaje que son sensibles a los
benzimidazoles son insensibles al diethofencarb ya la zoxamida. En presencia de una mutacin de cido
glutmico a la alanina (E198A), los aislamientos pierden sensibilidad a los benzimidazoles pero se vuelven
sensibles al diethofencarb ya la zoxamida. Un cido glutmico a la mutacin de lisina (E198K), sin embargo, los
resultados en la prdida de sensibilidad a las 3 clases.

Ha habido algunos informes de resistencia cruzada negativa dentro de la clase de qumica de

benzimidazol. En Aspergillus nidulans , por ejemplo, una mutacin en el codn 165 confera resistencia al
tiabendazol pero aumentaba la sensibilidad al carbendazim. Una mutacin en el codn 167 en Saccharomyces
cerevisiae dio lugar a la resistencia a carbendazim, pero el aumento de la sensibilidad a benomyl. Sin embargo,
para aplicaciones prcticas, los aislados fngicos resistentes a un fungicida de benzimidazol suelen ser
resistentes a otros miembros de esta clase qumica. Por lo tanto, las combinaciones de varios fungicidas de
benzimidazol no pueden usarse como una herramienta de manejo de resistencia.
Aptitud y persistencia de aislamientos resistentes

Algunas mutaciones en el gen de -tubulina causaron una mayor y menor estabilidad de los microtbulos
despus del ensamblaje, ambos efectos reduciendo la aptitud de los organismos afectados. Varias mutaciones
tambin resultaron en una mayor sensibilidad a temperaturas extremas. La reduccin de la aptitud asociada con
la resistencia al benzimidazol sugiere que la resistencia puede no ser estable y podra disminuir si se reduce o
se elimina la presin de seleccin proporcionada por aplicaciones repetidas de fungicida. Sin embargo, la
experiencia prctica demostr que la resistencia a bencimidazol se mantuvo estable en algunas reas 10 aos
o ms despus de que se detuvo el uso de benzimidazol. Ha habido algunas excepciones. Benomyl se utiliz
con xito durante ms de 10 aos en algunas partes de los Estados Unidos para el control del mildi de la
cucurbitcea aunque los aislamientos resistentes fueron detectados por primera vez antes del primer uso
comercial del fungicida. El monitoreo demostr que la proporcin de aislamientos resistentes cay despus de
la reduccin del uso de fungicidas y la eficacia de campo fue recuperada. Con el uso repetido, sin embargo, la
proporcin de aislamientos resistentes a benomil aument y la eficacia de campo disminuy hasta el punto en
el que el benomil ya no era altamente eficaz. Una situacin similar se report para los benzimidazoles utilizados
para el control de la Sigatoka bananera en Amrica Latina. Por lo tanto, no se puede confiar en las penalidades
de acondicionamiento fsico asociadas con las mutaciones para reducir el riesgo de resistencia. El monitoreo
demostr que la proporcin de aislamientos resistentes cay despus de la reduccin del uso de fungicidas y
la eficacia de campo fue recuperada. Con el uso repetido, sin embargo, la proporcin de aislamientos resistentes
a benomil aument y la eficacia de campo disminuy hasta el punto en el que el benomil ya no era altamente
eficaz. Una situacin similar se report para los benzimidazoles utilizados para el control de la Sigatoka
bananera en Amrica Latina. Por lo tanto, no se puede confiar en las penalidades de acondicionamiento fsico
asociadas con las mutaciones para reducir el riesgo de resistencia. El monitoreo demostr que la proporcin de
aislamientos resistentes cay despus de la reduccin del uso de fungicidas y la eficacia de campo se
recuper. Con el uso repetido, sin embargo, la proporcin de aislamientos resistentes a benomil aument y la
eficacia de campo disminuy hasta el punto en el que el benomil ya no era altamente eficaz. Una situacin
similar se report para los benzimidazoles utilizados para el control de la Sigatoka bananera en Amrica
Latina. Por lo tanto, no se puede confiar en las penalidades de acondicionamiento fsico asociadas con las
mutaciones para reducir el riesgo de resistencia.