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ndice

Introduo ............................................................................................................................... III

Auto avaliao ........................................................................................................................ IV
Biologia molecular .................................................................................................................... 5
Dogma central da biologia molecular ....................................................................................... 5
A funo do material gentico DNA e RNA ............................................................................ 9
Bases Fisiolgicas de Dominncia e Recessividade ............................................................... 11
Projecto Genoma Humano ...................................................................................................... 16
Base Celular de Hereditariedade ............................................................................................. 22
Historial da citogenetica ......................................................................................................... 27
As anomalias numricas ......................................................................................................... 31
Mutaes ................................................................................................................................. 42
Recombinao e Evoluo ...................................................................................................... 52
Recombinao ......................................................................................................................... 53
Crossing-over .......................................................................................................................... 59
Crossing-over como medida da distncia gentica ................................................................. 62
Frequncia de recombinao ou permuta e distancia gentica ............................................... 64
Mapeamento Cromossmico .................................................................................................. 66
Mapeamento Citogentico ...................................................................................................... 69
Origem e caracterizao citologica das delees e duplicaes ............................................. 74
Detectando loci ligado por anlise de heredogramas .............................................................. 77
Biotecnologia .......................................................................................................................... 83
Conservao de recursos genticos ......................................................................................... 90
A gesto de recursos genticos animais .................................................................................. 90
Recursos Genticos Vegetais .................................................................................................. 93
Concluso................................................................................................................................ 95
Bibliografia ............................................................................................................................. 96
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Abdul Gafar Dado

Portfolio de Genetica Molecular e Biotecnologia

Curso de Licenciatura em Ensino de Biologia com habilidades em

Qumica/ Gesto de Laboratrio

Universidade Pedaggica
Montepuez
2013
 2

Abdul Gafar Dado

Portfolio de Genetica Molecular e Biotecnologia

Este trabalho de carcter avaliativo

da cadeira de Gentica Molecular e
Biotecnologia, Curso de Biologia, 3
Ano.

Docente: Zacarias Rosalina

Universidade Pedaggica
Montepuez
2013
 III

Introduo

Este portflio apresenta um contedo diversificado da Gentica Molecular e Biotecnologia, em

que foi usada a metodologia baseada na comunicao directa, atravs das aulas dadas pelo
docente, e apresentao de seminrios apresentados pelos colegas. Estas aulas e seminrios
foram leccionadas e apresentadas com uma linguagem acessvel e objectiva. De referir que
cada aula era um aprendizado a mais, pois, a cada aula existiam debates, discusses, reflaxes
e crticas. Alm disso, os temas aqui tratados e as necessidades de desenvolver as informaes
ou temas, usou-se algumas obras que esto citados no texto e constam na bibliografia.

Objectivos relacionados a esta cadeira

Obter o suficiente de conhecimentos sobre:

Resolver com preciso os exerccios da Gentica;

Discutis a implicaes ticas do uso de tcnicas de melhoramento em animais e as suas
implicaes ticas e sociais humanos.

Objectivos do portflio acadmico

Levar o aluno ao universo da pesquisa, desenvolvendo o gosto pela leitura e pela
investigao;
Propiciar o registo, anlise e acompanhamento das aces quotidianas no dirio de
aprendizagem, fazendo com que o aluno aprenda a aprender mais.

Abrir um portfolio bem feito

como abrir uma arca do tesouro.
(Shores e Grace, 2001)
 IV

Auto avaliao

dificil fazer a crtica, mas vejo que ninguem pode fazer por mim. Vou tentar ser justo para
mim e para a cadeira, assim como para o docente.

Eh!!! Chegamos ao fim de mais um semestre!... na verdade no foi nada fcil neste percurso
que acabamos de fazer, mas o que falta a deciso sobre o meu aproveitamento, tendo em
conta com isso, vejo que com o tempo, fui aprendendo algo de novo, consequentemente
fazendo o meu mximo para que melhore minhas notas, cumprindo com um dos objectivos de
um estudante universitrio.

Durante o semestre, fiz alguns trabalhos e provas, dos quais em alguns fui bem e outros mal, e
fazendo o balano disso, no estou indo mal nem muito bem. Durante este perodo todo,
procurei muito ajuda de colegas, obras e de pessoas de fora pra conseguir perceber alguns
aspectos relacionados com a cadeira, principalmente relacionado com a hereditariedade.

Mesmo com notas desequilibradas em trabalhos e testes, eu me dedico e vou me dedicar cada
vez mais. Pois, s com a persistncia e com o tempo que aprendemos.

Aproveito a ocasio de saudar aos meus colegas que esto sempre do meu lado e voc dr.
Zacarias, pela explicao excelente que nos proporcionou durante este semestre.

Obrigado!
 5

Biologia molecular

A biologia molecular o estudo da biologia a um nvel molecular, incluindo a estrutura,

funo e composio de molculas biologicamente importantes, tais como o ADN, o ARN e as
protenas. o ramo da biologia que lida com a formao, estrutura, e funo das
macromolculas essenciais para a vida, tais como os cidos nucleicos e protenas, e
especialmente com o seu papel na replicao das clulas e a transmisso de sua informao
gentica.

A gentica molecular a rea da biologia que estuda a estrutura e a funo dos genes a
nvel molecular. A gentica molecular usa os mtodos da gentica e da biologia molecular.
chamada assim para se diferenciar de outros campos da gentica como a gentica ecolgica e
a gentica populacional. Um campo importante da gentica molecular o uso de informao
molecular para determinar padres de descendncia, e assim a classificao cientfica correcta
dos organismos: a isto chamamos sistemtica molecular.

Junto com a determinao do padro de descendentes, a gentica molecular ajuda a

compreender as mutaes genticas que podem causar certos tipos de doenas. Atravs da
utilizao dos mtodos de gentica e biologia molecular, a gentica molecular descobre as
razes pelas quais as caractersticas so exercidas e como e porque algumas podem sofrer
mutaes.

Uma das primeiras ferramentas a ser utilizada pelos geneticistas moleculares na dcada de
1970 foi o rastreio gentico. O objectivo desta tcnica identificar o gene que responsvel
por um determinado fentipo. Muitas vezes usa-se um agente mutagnico para acelerar este
processo. Uma vez isolados os organismos mutantes, torna-se possvel identificar
molecularmente o gene responsvel pela mutao.

Dogma central da biologia molecular

O dogma central da biologia molecular foi

afirmado por Francis Crick em 1958 e re-
afirmado em um artigo publicado na revista
Nature, em Agosto de 1970. O dogma central
da biologia molecular, afirma que O ADN
actua como um modelo para se replicar, e
tambm transcrito em ARN, e o ARN
traduzido em protena.
 6

O dogma central afirma que uma vez que a informao passe para a protena ela no pode
passar adiante desta. A transferncia de informao de protena para protena ou de protenas
para cido nucleico impossvel. Todas as clulas, desde a mais simples bactria at os seres
humanos, expressam sua informao gentica desta maneira - um principio fundamental deste
dogma. O autmato finito abaixo representa o dogma central:

H casos especiais de transferncia de informaes biolgicas sequenciais. So estas a

transcrio reversa, a replicao do RNA e a traduo directa a partir de ADN para a protena.

Em 1970, os primeiros
relatrios na Nature forneceram a primeira evidncia concreta para a existncia da
transferncia de informao a partir de RNA para DNA em partculas de retrovrus, a
transcrio reversa. O impacto desta descoberta mudou de alguma forma o dogma central da
biologia molecular aceito para o qual a transferncia de informaes unidirecional.

Esta descoberta levou alterao do nome do vrus

de tumor de ARN para retrovrus. A replicao do
ARN a cpia de um ARN para outro. Muitos
vrus se replicam desta forma. As enzimas que
copiam ARN para um novo ARN so chamadas
ARN polimerases dependentes de ARN. Um vrus
de ARN precisa de uma ARN polimerase
dependente de ARN para transcrever os seus genes
em ARNm.

Tcnicas em gentica molecular

Existem trs tcnicas gerais utilizadas para gentica molecular: amplificao, separao e
deteco, e expresso.

A reaco em cadeia da polimerase especificamente utilizada para a amplificao, que um

instrumento indispensvel para uma grande variedade de aplicaes. Na tcnica de
separao e deteco o DNA e o RNAm so isolados a partir de suas clulas. A expresso do
gene em clulas ou organismos feita num local ou tempo que no normal para esse gene
especfico.
 7

Amplificao

H outros mtodos para a amplificao alm da reaco em cadeia da polimerase. Clonagem

de DNA em bactrias tambm uma forma de amplificar DNA em genes.

Reaco em cadeia da polimerase

Os principais materiais utilizados na reaco em cadeia da polimerase so nucleotdeos do

DNA, o DNA molde (template), iniciadores (primers) e a Taq polimerase.

Nucletidos de DNA so a base para o novo DNA, o DNA molde a sequncia especfica a
ser amplificada, iniciadores so nucletidos complementares que podem ir em ambos os lados
do DNA molde, e a polimerase Taq uma enzima termicamente estvel que salta-inicia a
produo de DNA novo s temperaturas elevadas necessrias para a reaco. Nesta tcnica no
necessrio usar as bactrias vivas ou clulas; tudo o que necessrio a sequncia de bases
do DNA e os materiais listados acima.

Clonagem de DNA em bactrias

O termo clonagem para este tipo de amplificao envolve fazer mltiplas cpias idnticas de
uma sequncia de DNA. A sequncia de DNA alvo ento inserida num vector de clonagem.
Uma vez que este vector origina a partir de um vrus auto-replicante, plasmdeo, ou uma clula
superior do organismo, quando o DNA de tamanho apropriado inserido o alvo e fragmentos
de DNA do vector so ento ligados e criam uma molcula de DNA recombinante. As
molculas de DNA recombinantes so depois colocados em uma cepa de bactrias (E.
coli geralmente), que produz vrias cpias idnticas por transformao. A transformao o
mecanismo de absoro de DNA possudo por bactrias. No entanto, apenas uma molcula de
DNA recombinante pode ser clonada dentro de uma nica clula bacteriana, de modo que cada
clone de apenas uma insero de DNA.

Separao e deteco

Na separao e deteco o DNA e o RNAm so isolados a partir de clulas (a separao) e,

em seguida detectados simplesmente pelo isolamento. As culturas celulares so tambm
aumentadas para proporcionar um fornecimento constante de clulas prontas para o
isolamento.

Culturas de clulas

Uma cultura de clulas para a gentica molecular uma cultura que cultivada em condies
artificiais. Alguns tipos de clulas crescem bem em tais culturas como as clulas da pele, mas
outras clulas no so to produtivas em culturas. Existem diferentes tcnicas para cada tipo de
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clula, algumas apenas recentemente encontradas para fomentar o crescimento de clulas-

tronco e nervo. Culturas para a gentica molecular so congeladas, a fim de preservar todas as
cpias do gene espcime e descongeladas apenas quando necessrio. Isto permite um
fornecimento constante de clulas.

Isolamento do DNA

O isolamento do DNA extrai DNA a partir de uma clula de uma forma pura. Em primeiro
lugar, o DNA separado a partir de componentes celulares, tais como protenas, RNA, e
lpidos. Isto feito colocando as clulas escolhidas em um tubo com uma soluo que
mecanicamente, quimicamente, rompe as clulas abertas. Esta soluo contm enzimas,
produtos qumicos, e sais que rompe as clulas excepto o DNA. Ele contm enzimas para
dissolver protenas, produtos qumicos para destruir todos os RNA presentes, e sais para ajudar
a puxar o DNA para fora da soluo.

Em seguida, o DNA separado da soluo ao ser girado em uma centrfuga, o que permite que
o DNA se acumule na parte inferior do tubo. Aps este ciclo na centrfuga a soluo vertida
fora e o DNA ressuspenso em uma segunda soluo o que faz com que se torne fcil de
trabalhar com o DNA no futuro.

Isto resulta em uma amostra de DNA concentrada que contm milhares de cpias de cada
gene. Para projectos de grande porte, tais como o sequencialmente do genoma humano, todo
esse trabalho feito por robs.

Isolamento do RNAm

DNA expresso que codifica para a sntese de uma protena o objectivo final para cientistas e
este DNA expresso obtido atravs do isolamento de RNAm (o RNA mensageiro). Primeiro,
os laboratrios utilizam uma modificao celular normal de ARNm que acrescenta-se a 200
nucletidos de adenina para o fim da molcula (cauda poli (A)). Uma vez que este tenha sido
adicionado, a clula rompida e o contedo da clula exposto a grnulos sintticos que so
revestidos com nucletidos da cadeia timina.

Devido a Adenina e Timina parearem juntas no DNA, a cauda poli (A) e os grnulos sintticos
so atrados um para o outro, e uma vez que eles se liguem a este processo, os componentes
celulares podem ser lavados sem remover o RNAm. Uma vez que o RNAm foi isolado,
a transcriptase reversa empregue para convert-lo para ADN de cadeia simples, a partir do
qual um DNA de cadeia dupla estvel produzido usando DNA polimerase. O DNA
complementar (cDNA) muito mais estvel do que o RNAm e, assim, uma vez que o DNA
de cadeia dupla tenha sido produzido ele representa as sequncias expressas de DNA que os
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cientistas procuram. Uma de suas aplicaes consiste no estudo da mutao e variao de

cepas de bactrias.

Projecto genoma humano

O Projeto Genoma Humano um projecto de gentica molecular, que comeou na dcada de

1990 e foi projectado para levar quinze anos para ser concludo. No entanto, por causa dos
avanos tecnolgicos o andamento do projecto foi adiantado e o projecto terminou em 2003,
tendo apenas treze anos. O projecto foi iniciado pelo Departamento de Energia dos EUA e
do National Institutes of Health em um esforo para atingir seis metas estabelecidas. Estes
objectivos foram:

1. Identificao de 20.000 a 25.000 genes no ADN humano (embora as estimativas

iniciais eram cerca de 100.000 genes),
2. Determinar sequncias de pares de base qumicos no ADN humano (20 aas),
3. Armazenar todas as informaes encontradas em bancos de dados,
4. Melhorar as ferramentas utilizadas para anlise de dados,
5. Transferncia de tecnologias para sectores privados, e
6. Abordar as questes ticas, legais e sociais (ELSI) que pudessem surgir a partir dos
projectos.

Importcias do projecto genoma humano

A grande importncia do Projecto Genoma, tentar melhorar a qualidade de vida humana,

procurar tratamentos para doenas genticas, e outros tipos de doena, como alcoolismo, uso
de drogas e outros vcios.

A funo do material gentico DNA e RNA

DNA O cido desoxirribonuclico uma molcula formada por duas cadeias na forma de uma
dupla hlice. Essas cadeias so constitudas por um acar (desoxirribose), um grupo fosfato e
uma base nitrogenada ((T) timina, (A) adenina, (C) citosina ou (G) guanina). A dupla hlice
um factor essencial na replicao do DNA durante a diviso celular cada hlice serve de molde
para outra nova.

RNA O cido ribonuclico (RNA) uma molcula tambm formada por um acar (ribose),
um grupo fosfato e uma base nitrogenada ((U) uracila, (A) adenina, (C) citosina ou (G)
guanina). Um grupo reunindo um acar, um fosfato e uma base um nucleotdeo.
 10

Cdigo gentico A informao contida no DNA, o cdigo gentico , est registrada na

sequncia de suas bases na cadeia (timina sempre ligada adenina, e citosina sempre com
guanina). A sequncia indica uma outra sequncia, a de aminocidos substncias que
constituem as protenas. O DNA no o fabricante directo das protenas; para isso ele forma
um tipo especfico de RNA, o RNA mensageiro, no processo chamado transcrio. O cdigo
gentico, na forma de unidades conhecidas como genes, est no DNA, no ncleo das clulas.
J a "fbrica" de protenas fica no citoplasma celular em estruturas especficas, os ribossomos,
para onde se dirige o RNA mensageiro. Na transcrio, apenas os genes relacionados
protena que se quer produzir so copiados na forma de RNA mensageiro.

Cada grupo de trs bases (ACC, GAG, CGU etc.) chamado cdon e especfico para um tipo
de aminocido. Um pedao de cido nuclico com cerca de mil nucleotdeos de comprimento
pode, portanto, ser responsvel pela sntese de uma protena composta por centenas de
aminocidos. Nos ribossomos, o RNA mensageiro por sua vez lido por molculas de RNA
de transferncia, responsvel pelo transporte dos aminocidos at o local onde ser montada a
cadeia protica. Essa produo de protenas com base em um cdigo a base da Engenharia
gentica.

Adesina, Citosina, Guanina e Timina so as quatro bases encontradas na

estrutura do DNA.

Principais diferenas entre RNA e DNA

da associao dos diferentes nucleotdeos que

se formam as macromolculas dos dois tipos de
cidos nuclicos: o cido ribonuclico (RNA) e o
cido desoxirribonuclico (DNA). Eles foram
assim chamados em funo dos acar presente
em suas molculas: O RNA contm o acar
ribose e o DNA contm o acar desoxirribose.

Outra diferena importante entre as molculas de DNA e a de

RNA diz respeito s bases nitrogenadas: no DNA, as bases so
citosina, guanina, adenina e timina; no RNA, no lugar da
timina, encontra-se a uracila. A importncia e o funcionamento
dos cidos nuclicos.
 11

RNA: fita SIMPLES; DNA: fita DUPLA

Bases RNA: adenina, guanina, citosina, URACILA; Bases DNA: adenina, guanina,
citosina, TIMINA
Acar RNA: RIBOSE; Acar DNA: Desoxirribose

Constituio do DNA e RNA

Caracterstica DNA RNA
Aucar Desoxiribose Ribose
Grupo Fosfato H3PO4 (cido fosfrico) H3PO4 (cido fosfrico)

Bases Pirimdicas (Citosina e Timina) Pirimdicas (Citosina e Uracilo)

Nitrogenadas Pricas/Purinas (Adenida e Guanina) Pricas/Purinas (Adenida e Guanina)

Funo do material gentico

Os trabalhos decisivos sobre a funo do gene foram apresentados por Beadle e Tatum que
propuseram a teoria um gene - uma enzima. As ideias principais do trabalho realizado por
estes autores foram:

a. Todos os processos bioqumicos dos organismos esto sob controle gentico.

b. Os processos bioqumicos ocorrem numa sequncia de reaces individuais.
c. Cada reaco simples controlada por um gene simples.
d. Cada gene actua atravs do controle e produo de uma enzima especfica.

Na actualidade esta teoria apresenta as seguinte falhas:

a. Um gene pode especificar a sntese de uma cadeia polipeptdica que no apresenta

nenhuma funo enzimtica (Ex.: Hemoglobina).
b. Uma enzima pode ser constituda por mais de uma cadeia polipeptdica (Ex.: RNA
polimerase constituda por vrias cadeias e, consequentemente, esta sob o controle de
vrios genes).
c. Um gene pode controlar a actividade de uma enzima especificada por outro gene (Ex.:
stio operadores, repressores, etc.).

Bases Fisiolgicas de Dominncia e Recessividade

Em todos os sistemas de notaes genticas os genes so representados por letras, a escolha da

letra para simbolizar o alelo dominante ou alelo recessivo que esta relacionada a inicial da
palavra que designa a caracterstica recessiva, utilizando-se neste caso, uma mesma letra: Letra
maiscula para alelo dominante (A) e minscula para alelo recessivo (a). O termo dominante
leva a ideia equivocada que um alelo domina ou inibe a aco do outro. Na maioria, os alelos
 12

alterados (mutantes) recessivos tm sua sequncia de bases nitrogenadas alteradas e no se

expressam correctamente, de modo que as caractersticas recessivas resultam geralmente da
ausncia do produto gnico.

A base fisiolgica de dominncia ou recessividade o gene. Um alelo pode apresentar um

padro de herana dominante em relao a verso normal do gene. Tanto a dominncia, assim
como a recessividade, resulta na alterao da natureza do gene.

Certos casos, a mutao de um gene pode causar ao surgimento de uma doena no individuo
portador. A exemplo disso, na espcie humana a doena da Coreia de huntignton produz uma
protena, a hutingntina, importante para o funcionamento normal das clulas cerebrais, e segue
um padro de herana dominante. O albinismo na espcie humana, resulta da incapacidade das
clulas epidrmicas produzirem melanina, e o alelo recessivo alterado.

O Cdigo gentico

O Cdigo Gentico so elementos que se encontram nas duas molculas de DNA e RNA e
ligado as bases nitrogenadas (Adenina, Guanina, Citosina e Uracilo ).(SNUSTAD e
SIMMONS, 2008:339).

As quatro bases nitrogenadas presentes no RNAm (A,U,C e G), reunidos trs a trs, formam
64 cdons distintos. Dos 64 cdons, 61 correspondem aos 20 tipos de aminocidos que entram
na constituio das protenas, os trs cdosns restantes no correspondem a nenhum
aminocido e funcionam como pontuao, indicando o final da informao gentica na
molcula do RNAm.

Cdigo gentico considerado degenerado porque a maioria dos aminocidos codificada

por mais de um cdon. H apenas dois aminocidos codificados por uma nica trinca, h
tambm, trs trincas sem sentido(UAA,UAG e UGA), que no codificam nehnum
aminocido e sinalizam o final da mensagem. O sistema de codificao gentica basicamente
o mesmo em todos os seres vivos da terra e, por isso, se diz que ele universal.

Enquanto as cadeias peptdicas podem ser comparadas a palavra que utiliza um alfabeto de 20
letras (os 20 aminocidos comuns das protenas). O alfabeto da sequncia nucleotdica colinear
que deve memorizar e transcrever essas palavras que so os quatro nucleotdios fundamentais:
A, G, U e T (ou C).

A unidade de codificao do aminocido , por tanto, o tripleto nucleotdico ou codo, que

um encadeamento de trs nucletidos dispostos por determinada ordem.
 13

O cdigo gentico diz-se degenerado exactamente por essa razo: porque a maior parte dos
aminocidos so especificados por vrios codos.Com a excepo da metionina e do
triptofano, h seis codos para a leucina, arginina, e a serina e entre dois e quatro para os
restantes.

Como ficou evidente que os genes controlam a estrutura dos polipeptdeos, a ateno
concentrou-se na maneira como a sequncia dos quatro nucleotdeos diferentes do DNA pode
controlar a sequncia dos 20 aminocidos presentes nas protenas.Com a descoberta do mRNA
intermedirio, surgiu a dvida sobre como a sequncia de quatro bases presentes nas molculas
de mRNA poderiam especificar a sequncia de aminocidos de um polipeptdio.

Caractersticas do Cdigo Gentico

O cdigo gentico e composto de trincas de nucleotdios;

O cdigo gentico e no-superposto;
O cdigo gentico sem vrgula, no existem vrgulas ou outras formas de pontuao
dentro das regies codificantes;
O cdigo gentico redundante, excepto dois aminocidos, os de mais so
especificados por mais de um cdon.
O cdigo gentico ordenado;
O cdigo gentico conte cdons de incio ao fim.

Sntese de Protenas (Polipeptdios)

Para o DNA e RNA, as snteses das biomolculas polimricas podem ser consideradas em
termos das etapas de iniciao, alongamento e terminao, esses processos fundamentais esto
tipicamente associados a duas etapas adicionais: Activao dos precursores antes da sntese e o
processamento ps-sinttico do polmero completado.

A sntese segue o mesmo padro, a activao dos aminocidos antes da sua incorporao em
polipeptdeos e o processamento ps-traduo do polipeptdeo completado desempenham
papis particularmente importantes em garantir tanto a fidelidade da sntese quanto a funo
apropriada do produto proteico. Assim, este processo, Realiza-se em Cinco Etapas:

Etapa 1. Activao dos Aminocidos - Para a sntese de um polipeptdio com sequncia

definida, dois requerimentos qumicos fundamentais devem ser alcanados:

O grupo carboxila de cada aminocido deve ser activado para facilitar a formao de uma
ligao peptdica;
 14

Um elemento deve ser estabelecido em cada novo aminocido e a informao no mRNA

que o codifica;

Ambos os requerimentos so alcanados pela ligao do aminocido a um tRNA na primeira

etapa da sntese de protenas, a ligao do aminocido correcto ao tRNA correcto crtica, essa
reaco realiza-se no citosol, no no ribossoma.

Etapa 2. Iniciao - O mRNA que possui o cdigo para o polipeptdio a ser sintetizado liga-se
a menor das duas subunidades ribossmicas e ao aminoacil-tRNA de iniciao, depois se liga a
subunidade ribossmica maior para formar um complexo de iniciao.

O aminoacil-tRNA de iniciao pareia com o codon AUG do mRNA que finaliza o inicio do
polipeptdio, esse processo que requer GTP, promovido por protenas citoslicas chamadas
de factores de iniciao

Etapa 3. Alongamento - O polipeptdio nascente aumentado por ligaes covalentes de

unidades sucessivas de aminocidos, cada uma levada ao ribossoma corectamente
posicionado pelo seu tRNA, que pareia com seu codon correspondente no mRNA.

O alongamento requer protenas citoslicas conhecidas como factores de alongamento. A

ligao de cada aminoacil-tRNA que chega e a movimentao ribossomo ao longo do mRNA
so facilitadas pela hidrolise do GTP a medida que cada resduo adicionado ao polipeptidio
crescente.

Etapa 4. Terminao e Libertao - O trmino da cadeia de polipeptidios sinalizada por

um codon de terminao no mRNA, o novo polipeptidio liberado do ribiossoma ajudado por
protenas chamadas de factores de liberao.

Etapa 5. Enovelamento e Processamento Ps-traduo - A fim de alcanar sua forma

biologicamente activa, o novo polipeptidio deve enovelar-se em sua conformao
tridimensional apropriada. Antes e depois do enovelamento, o novo polipeptidio pode sofrer
processamento enzimtico, incluindo a remoo de um ou mais aminocidos (usualmente a
partir do seu terminal amino). A adio de acetila, fosforila, metila, carboxila, ou a ligao de
oligossacarideos ou grupos profticos.

O processo de sntese de uma cadeia polipeptidica consiste em unir aminocidos de acordo

com a sequncia de codons presentees em um RNAm. (AMABIS e MARTHO, 2006:644).

A sntese de um polipeptidio tem incio com a associao entre um ribossoma, um RNAm e

um RNAt especial, que transporta o aminocido metionina.Esse RNAt, cujo anticdon UAC,
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emparalha-se com um cdon AUG presente perto da extremidade inicial da molcula do

RNAm.

Essa trinca AUG constitui o cdon de inicio de traduo, pois ele que determina o local da
molcula do RNAm em que tem inicio a informao para a cadeia polipeptdica.

Crescimento da Cadeia Polipeptidica

O RNAt que especial que inicia a traduo gnica aloja-se em um local do ribossoma sob o
qual se encontra 1codon AUG do RNAm, esse local do ribossoma chamado de stio que
durante o processo da sntese de protenas, sempre ocupado pelo RNAt carregado da cadeia
polipeptdica em formao, dai a denominao P, de polipeptidio. Ao lado do stio P localiza-
se o stio A, assim chamado pelo facto de nele se alojar o RNAt que carrega o prximo
aminocido a ser incorporado na cadeia polipeptidica em formao.Com o prximo RNAt
alojado no sitio P, um segundo RNAt aloja-se no sitio A, o anticodon desse segundo RNAt
ser complementar ao segundo codon do RNAm, que esta sob o sitio A. Por exemplo, se o
codon do RNAm no sitio A for UUU, o RNA que nele se aloja ter o anticodon AAA e,
portanto, transportara o aminocido fenilananina.

Trmino da Sntese da Cadeia Polipeptdica

O ltimo estgio da sntese de um polipeptidio ocorre quando o ribossoma chega a um codon

de parado, ou seja, um dos trs codons para os quais no h aminocidos correspondentes
(AMABIS e MARTHO, 2006:646).

Quando isso acontece ou ocorre, o sitio A do ribossoma ocupado por uma protena
denominada Factor de Libertao e todos os participantes do processo se separam, inclusive
as duas subunidades do ribossoma, soltando a cadeia polipeptidica recm-formadas processo
da sntese de protenas rigorosamente ordenado e garante a sequncia correcta de
aminocidos em uma cadeia polipeptidica, codificada originalmente no gene.

A medida que um ribossoma se desloca sobre um RNAm, traduzindo sua mensagem na forma
de um cadeia polipeptidica, outro ribossoma pode tambm iniciar a traduo do mesmo
RNAm.Assim, vrios ribossomas podem se encachar sucessivamente no incio de um RNAm,
percorrendo-o e saindo na extremidade oposta, todos sintetizando o mesmo tipo de cadeia
polipeptidica.

Comum encontrar de 10-20 ribossomas traduzindo simultaneamente um mesmo

RNAm.Cada ribossoma tem uma cadeia polipeptidica em formao, cujo tamanho depende do
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trecho j percorrido no RNAm.O conjunto formado por vrios ribiossomas traduzindo um

mesmo RNAm chamado de poliribossoma ou polissoma.

As protenas, alem da sua importante funo estrutural, tambm constituem enzimas que
controlam prraticamente todas as reaces metablicas das clulas, portanto, ao controlar a
produo das protenas os genes exercem o controle das caractersticas e das actividades das
clulas.

Projecto Genoma Humano

Um cromossomo comparvel a um livro de receita de protenas, e o ncleo de uma clula

humana comparvel a uma biblioteca, constituda por 46 volumes, que contm o receiturio
completo de todas as protenas do indivduo. O conjunto completo de genes de uma espcie,
com as informaes para a fabricao dos milhares de tipos de protenas necessrios vida,
denominado genoma. Atualmente, graas a modernas tcnicas de identificao dos genes, os
cientistas mapearam o genoma humano atravs do Projeto Genoma Humano.

O projecto genoma humano teve inicio oficialmente em Outubro de 1990, com a publicao de
um plano de pesquisa cujo objectivo era determinar a sequncia de todos os ncleotideos dos
23 cromossomas constituintes do genoma humano (22) autossomos e os cromossomos sexuais
X e Y).

O Projeto Genoma Humano (PGH) teve por objectivo o mapeamento do genoma humano, e
a identificao de todos os nucleotdeos que o compem. Consistiu num esforo mundial para
se decifrar o genoma. Aps a iniciativa do National Institutes of Health (NIH) dos Estados
Unidos, centenas de laboratrios de todo o mundo se uniram tarefa de sequenciar, um a um,
os genes que codificam as protenas do corpo humano e tambm aquelas sequncias de DNA
que no so genes. Laboratrios de pases em desenvolvimento tambm participaram do
empreendimento com o objectivo de formar mo-de-obra qualificada em gnmica.

O principal objectivo do projecto genoma humano foi o de gerar sequncias de DNA de boa
qualidade para os cerca de 3 bilhes de pares de bases e identificar todos os genes humanos.
Outros objectivos importantes incluam o seguimento de genomas de organismo modelos para
auxiliar a interpretar a sequencia do DNA humano, melhorar a capacidade computacional para
suporte a futuras pesquisas de aplicao comercial.

As metas iniciais do projecto genoma humano eram:

1. Identificar todos os genes humanos;

 17

2. Construir um mapa fsico detalhado de todo genoma humano;

3. Determinar a sequncia dos cerca de 3,2 bilhes de pares de bases que compem o
genoma humano;
4. Armazenar a informao em bancos de dados;
5. Transferir a tecnologia relacionada ao projecto para o sector privado;
6. Colocar em discusso, os problemas ticos, legais e scias que pudessem surgir com o
projecto.

Em Maio de 1998, uma companhia particular fundada especialmente para esse fim, Celera
Genomics do genoma humano, prevendo completa-lo em apenas trs anos, o que significava 4
anos antes do previsto pelo consorcio publico. A principal diferena entre os dois projectos era
o mtodo utilizado para determinao das sequncias dos ncleotideos.

A estratgia do consrcio pblico era dividir cada cromossoma em grandes fragmentos e

determinar a sequncia de ncleotideos de fragmentos adjacentes.

Tendo em vista a possibilidade de uma empresa particular tornar-se proprietria exclusiva de

um patrimnio da humanidade do genoma humano. O consrcio pblico redobrou os esforos
para concluir o projecto em menor tempo.

Finalmente em Junho de 2000, os pesquisadores Francs Collins (lder do consorcio publico) e

Crarir Vinter (presidente da Celera Genomics) anunciaram na casa branca, sede do governo
dos estados unidos da Amrica na cidade de Washington a concluso de um esboo geral do
genoma humano.

O genoma humano constitudo por cerca de 3 bilhes de pares de ncleotideos. Para se ter
ideia do que isso representa, se escrevessemos a sequncia de iniciais das bases (A, T, C, G) de
apenas uma das cadeias do DNA humano em tipos bem pequenos, preencheramos mais de
200 volumes equivalentes a grossas lista telefnicas.

Apenas 3% dos 3 bilhes de pares de bases do genoma humano correspondem a genes, 97%
so sequncias no codificantes, isto no transcritas para a molcula de RNA.

O nmero total dos genes humanos entre 30 mil a 40 mil bem menor do que se imaginava.
Isso nos coloca em p de igualdade com os Comundongos e pouco acima das Moscas quanto
ao nmero de genes, cujo genoma possui 13 mil genes.

O sequnciamento do DNA humano revelou que muitos dos nossos genes so semelhantes as
de bactria e vrus.
 18

Enzimas de Restrio

No inicio dos anos 1970 descobriu-se que certas enzimas bacterianas, denominadas
endoncleases de restrio, podiam conter molculas de DNA em partes especificas, quando
fragmentos de tamanho definidos e que poderiam ser analisado.

Segundo (AMABIS e MARTHO, 2004:164) As endonucleases de restrio so enzimas

bacterianas que actuam como uma tesoura moleculares, reconhecendo segmentos de parte de
bases especificais em molcula do DNA e corando-as nesses pontos.

Elas so altamente especficas: cada tipo de enzima reconhece e corta apenas uma determinada
sequncia de nucleotideo, constitudo
por 4 ou 6 pares de bases nitrogenadas.

Acredita-se que as bactrias tenham

desenvolvido as enzimas de restrio ao
longo da sua evoluo, como proteco
ao ataque de bactrias. Uma molcula de
DNA vral que contenha stios para
endonuclease bacteriana, ao ser
injectada na bactria, prontamente
cortada nesses pontos e deixa de
funcionar. Hoje So conhecidas centenas dessas enzimas que so purificadas e comercializadas
por diversos laboratrios no mundo.

A descoberta das enzimas de restrio permitiu grandes avanos na gentica molecular.

Molculas idnticas de ADN tratadas com determinados endonucleases de restrio, so
cortadas nos mesmos pontos, originando fragmentos de tamanhos idnticos. Uma
endonucleases de restrio como um pareamento que permite cortar molculas de ADN de
forma controlada e reproduzvel. Diversos pesquisadores passaram a utilizar a nova tcnica
para mapear o genoma de outros vrus, depois de bactrias e de outros organismos.

Separao eletroferotica de fragmentos de DNA

Os fragmentos diferentes tamanhos, grandes pelo corte de um DNA com determinada

endonuclease de restrio, podem ser separadas uns dos outros por meio de uma tcnica
denominada eletroforese (do grego phoresis, aco de transportar, migrao).
 19

Na viso de AMABIS e MARTHO (2004:165) diz que o processo de eletroforese realizado

em uma placa gelatina especial (gel) a soluo contendo os fragmentos de DNA colocado
em fendas em uma das extremidades do gel, a qual concentrada o plo negativo de uma
fonte geradora de corrente elctrica. Ao plo oposto do gel ligado a plo positivo da fonte.

A aplicao de uma diferena de potncial na placa de gel faz os fragmentos de DNA se

deslocarem em direco ao plo positivo uma vez que eles possuem carga elctrica negativa. O
deslocamento dos fragmento de DNA no gel e comparvel ao de uma corrida de obstculos
(estes so representados pela fibras que formam o gel), o DNA movimenta-se entre as fibras de
gel e quanto menor o tamanho de fragmento, maior a velocidade com que ele se desloca.

Quando o campo elctrico e desligado fragmento de mesmo tamanho estaciona junto em

determinadas posies na placa de gelatina formando uma faixa ou banda. A placa de gelatina
e ento tratado com uma soluo de brometo de etidio (C21H2OBrN3), que adere as molcula
de DNA formando um complexo que emite luz quando iluminado com raios ultravioleta, assim
as bandas formadas pelos fragmentos de ADN podem ser visualizadas.

Identificao de Pessoas pelo ADN

A anlise do padro eletroforetico de fragmentos de ADN, originado pelo corte com enzima de
restrio, hoje o mtodo mais seguro para identificao de pessoas sendo largamento
utilizado em investigaes policiais e em processo judicial. A comprovao de que era
possvel caracterizar molculas de ADN por meio de padres de fragmento gerados pela
digesto com endonuclease de restrio levou-a pesar no emprego dessa metodologia para
identificar pessoas.

O raciocnio foi o seguinte: como as pessoas deferem entre se quanto ao material genticos que
possuem (com excesso dos gmeos univitelinicos), a digesto do ADN de uma pessoa com
um endonuclease de restrio produziram um padro de fragmento tpico dela, comparvel a
um cdigo de barras ou uma impresso digital molecular.

Deteco de fragmento especfico do ADN

Nos organismos eucarioticos o corte do ADN total do genoma por uma endonuclease de
restrio produz tantos fragmentos de tantos tamanhos diferente que impossvel visualizar
bandas individuais na separao eletroforetica. Elas esto prximas uma das outras que
aparecem como uma banda contnua ao longo do gel por isso necessrio utilizar tcnicas
especiais para evidenciar aspectos apenas certos tipos de fragmentos.
 20

Uma dessas tcnicas chamadas de hibridizao molecular, consiste em tratar o gel de modo a
separar as cadeias duplas dos fragmentos de ADN e em seguida colocar sobre ele molculas
detectoras de sequencias especificas as chamadas sondas do DNA. Com isso apenas
determinadas bandas so evidenciadas e podem ser analisadas.

As sequncias do DNA utilizadas na identificao de pessoas

Segundo (AMABIS e MARTHO, 2004:166) Os testes de Identificao de pessoas pelo DNA

utilizam sondas capazes de detectar trechos de DNA humano que variam muito entre as
pessoas de uma populao.

Essas rgios conhecidas pela sigla VNTR, inicial da expresso inglesa variable number of
tandem repeat (n varivel de repeties em sequencia), so constitudo por sequencias
curtas de ate algumas dezenas de pares de nucleotideos que se repetem ao longo do trecho da
molcula do DNA, o numero dessas repeties que variam entre as pessoas, dai esses trechos
de DNA serem chamados VNTRs.

Por exemplo: uma pessoa que possua em ambos cromossomas VNTRs com trs repeties
com a utilizao da mesma sonda apresentara apenas uma banda.

Uma terceira pessoa com cinco repeties em cada cromossoma tambm apresentara uma
nica banda, porem localizada mais prxima do plo negativo ps ter se deslocado menos
durante a eletroferose devido ao seu menor tamanho.

Determinao da paternidade pela analise do DNA

O teste de paternidade foi um dos principais factores de popularizao de sigla DNA, mais
hoje se questiona se este tipo de exame deve ser realizado livremente pelas pessoas. Em alguns
pases a realizao deste exame sem solicitao explicita da justia esta sendo proibida com a
justificativa de que os danos psicolgicos que os resultado dos tais testes podem gerar aos
envolvidos superam, em muitos casos benficos que eles possam trazer.

Identificao de cadveis pelo DNA

O exame de paternidade post mortem atravs da anlise polimorfismo de DNA pode ser
realizados de duas maneiras:

1. Mtodo direito: o DNA extrado de amostras de tecidos de supostos falecidos atravs de

uma exumao de cadver comparado com o DNA do seu parente biolgico
 21

2. Mtodo indirecto: o DNA de amostra sanguneas obtidas de um numero suficiente de

parentes biolgicos prximo do suposto falecido utilizados para reconstituir atravs da
inferncia gentica, o gentipo do suposto falecido.

Estes dados em seguida so comparados com o DNA do seu parente biolgico.

O exame de paternidade pelo mtodo indirecto de reconstruo apresenta, com tudo uma serie
de vantagens sobre exames que envolve exumao entre elas:

1. Evita a exumao de cadveis e contorna, desta forma as dificuldades, constrangimento e

formalidades associadas a este processo.
2. No exame indirecto as amostras biolgicas dos parentes biolgicos garantem a obteno
do DNA em quantidade e qualidade suficiente para a reconstituio do gentipo do
falecido.

Clonagem Molecular do DNA

Em 1972 os pesquisadores Norte Americanos Stanley Cohen e Herbert Boyer, encontraram

se em congresso cientifico no Havai. Cohen trabalhava com plasmidio bacteriano, tentando
isolar genes para a resistncia aos antibiticos, e Boyer trabalhava com enzima de restrio.
Em conversa aps a conferncia eles resolveram tentar algo totalmente novo.

Cortar o DNA de plasmidio emenda-lo um outro DNA, e introduzir a molcula produzida um

DNA recombinante em bactrias.

O objectivo era: verificar se a molcula produzida em um tubo de ensaio era capaz de

multiplicar se na bactria e gerar copias idnticas a esse. A partir dessa ideia Cohen e Boyer
desenvolveram uma das mais revolucionaria metodologia para multiplicar segmentos
seleccionados do DNA que levou a produo de diversas protenas humana de interesse
medico como o hormonio de crescimento, a isulina, o factor VIII de coagulao sangunea e
entre outras. O plasmidio recombinante produzido pela unio do DNA plasmidial ao
seguimento do DNA seleccionado multiplica-se juntamente com a bactria hospedeira. A
partir de uma clula bacteriana transformada e que recebeu o plasmidio recombinante obtm-
se bilhes de bactrias idnticas cada uma com uma ou mais copias de DNA recombinante.

O conjunto de molculas de DNA idnticas obtidas da multiplicao da clula bacteriana

transformada constitui um clone molecular dai a metodologia para obt-lo ser denominada
clonagem molecular (AMABIS e MARTHO 2004:168).
 22

Base Celular de Hereditariedade

Segundo SOARES (1997: 21), clula unidade bsica estrutural e funcional dos seres
vivos.

Hereditariedade um fenmeno que apresenta a condio de semelhanas existentes entre

ascendentes (gerao parental) e descendentes (gerao filiar) atravs da contnua transferncia
instrues em forma de cdigo inscritas no material gentico (DNA cido desoxirribonuclico)
orientando a formao, desenvolvimento e manuteno de um ser vivo).

Assim, a base celular da hereditariedade o DNA. Os eventos biolgicos hereditrios podem

ser classificados em dois tipos:

Hereditariedade especfica: aquela caracterizada por agentes genticos comuns de uma

determinada espcie, conservado a essncia de um grupo taxonmico.

Hereditariedade individual: relativa a expresso de agentes genticos que estabelecem

aspectos individualizado (por ex: fisionomia, traos particular semblante) sendo, portanto um
factor que causa biodiversidade entre indivduos de uma mesma espcie.

Interpretao de Experiencias Realizadas com Alga Acetabularia

Hanmerlg utilizou nas suas experincias uma alga clorofila do gnero acetabularia, uma clula
mais de grande dimenses cerca de 2cm constitudas por uma base, onde se encontra o ncleo
e onde sai rizides, ncleo e donde um caulculo e um chapu, cuja forma varia com a espcie.
Nesta experincia foram utilizadas duas espcies: acetabulria mediterrnea com chapu de
barbo liso e acetabularia crenulada com chapu de barbo rendilhado.

Situao A - foi separada chapu da base em exemplares em ambas espcies e os dos

pedaos colocados em meios nutritivos. Ambos os chapus morreram e ambas as bases
regeneraram chapus. Conclui-se que o ncleo responsvel pela manuteno da vida,
crescimento e regenerao da clula. (Hpt.www.geoties.com\neri
iscp\ICS.html.2013).
Situao B foi estriado caulculo de (a) mediterrnea sobre uma base a crenulada e
colocada sobre o meio nutritivo, verificou-se que regenerava um chapu liso. Conclui-
se que o ncleo comanda qualquer citoplasma regenerar a parte da clula que falta.
Situao C procedeu-se transplante cruzado de ncleo para as bases citoplasmticas
da alga. Verificou-se que regeneravam. Chapus iguais ao tipo de ncleo e no iguais
 23

ao tipo de citoplasma da base. Conclui-se que o ncleo comanda a forma do corpo do

indivduo.

Com as experincias feitas concluiu-se que o ncleo comanda o citoplasma enviando-lhe

mensagens sob forma de um tipo de partculas ou molculas. Seja nos unicelulares como nos
pluricelulares o ncleo responsvel conservao da informao gentica.

Processo de Reproduo Assexuada

A reproduo assexuada ou agmica aquela que se processa sem o concurso de gmetas

indivduo comovente se divide em dois ou mais novos indivduos, que obviamente conservam
em suas clulas os mesmos genes que j existiam naquele que lhes deu origem. (SOARES,
1997: 185).

A reproduo assexuada compreende a diviso binria e a diviso mltipla. No primeiro

caso, o indivduo origina dois descendentes, pois se fendem ao meio e cada uma de suas
metades regenera o que lhe falta. A diviso binria em unicelulares recebe o nome especial de
cissiparidade. Pode ocorrer longitudinalmente ao longo do maior eixo da clula como nos
tripanossomideos e na euglena outra transversalmente como as paramcias. Nas amibas ela
ocorre em qualquer plano, no de bom alvitre usar o termo cissiparidade para designar a
diviso binria dos organismos pluricelulares. A reproduo assexuada abrange, alm da
cissiparidade as formas de diviso mltipla como a gemulao, a especulao, a esquizogonia,
a esquizogenese e a lacerao.

A gemulao, gemi paridade ou abrutamento se caracteriza pelo aparecimento de brotos ou

gemulas na superfcie do organismo. Esses brotos se desenvolvem do novos indivduos, que
se libertam ou permanecem colonialmente ligados uns aos outros.

A esporulao a forma de reproduo assexuada que se faz por meio de esporos. Importante
distinguir esporo e gmeta enquanto gmeta uma clula reprodutora sexuada, formada em
rgo especial para esse fim chamado gonada, e na maioria das vezes s realiza o seu papel
por meio da fecundao (quando se encontra gmetas diferentes) os esporos so clulas
reprodutoras assexuadas que no se formam em gonadas e actuam em independentemente sem
fecundao, basta encontrar condies ambientais para sua germinao.
 24

A esquizogonia um tipo raro de reproduo assexuada que se observa, por exemplo, com o
protozorio causador da malria. A esquizogonia portanto uma forma de diviso de mltipla
em que as clulas filhas permanecem algum tempo reunidas com a disposio roscea.

A esquizognese um tipo de reproduo assexuada observvel em organismos

multicelulares, como a Eunice e a nereide. Ocasionalmente, fragmentam-se em trs ou quatro
pedaos, cada um deles regenerando as partes que lhes falta para se transformar num animal
completo.

A lacerao assemelha-se a esquizognese. Ocorre com as planarias, neste caso a

fragmentao do corpo no to natural e espontnea quanto na esquizognese, mas um tanto
traumtica, pois o animal entra numa espcie de convulso, esticando o corpo exaustivamente
no sentido das extremidades, at romp-lo em dois pedaos.

Processo de Mitose e Seu Significado Biolgico

luz de COCHA (1995: 39), mitose a fase do ciclo celular durante a qual se formam duas
clulas filhas, partir dumas clulas pr-existentes. Durante a mitose h uma duplicao do
nmero inicial de cromossomas. Ao longo da mitose ocorre eventos marcantes para identificar
4 fases do processo em sequncias: Prfase, Metfase, Anafase e telofase. Alguns consideram
uma quinta fase, entre a prfase e metfase, denominada prometa fase.

Prfase a primeira fase onde ocorre a condensao dos cromossomas, o

desaparecimento dos nuclolos, a formao do fuso acromtico e desintegrao da
membrana nuclear;
Metfase caracteriza-se pela disposio dos cromossomas irmos na regio equatorial,
formando a placa equatorial. Estes ligam-se s fibras do fuso acromtico atravs do
centrmero;
Anafasse os cromossomas irmos separam-se e migram para plos opostos da clula.
Ocorre a diviso do centrmero;
Telfase ocorre a formao da nova cartica (membrana nuclear). Os cromossomas
descondensam-se e os ncleos reaparecem, ocorre a diviso do citoplasma, a citocinese
e a formao de novas clulas.

por intermdio da mitose que o nmero de clulas de um organismo aumenta ocorrendo

assim o crescimento.
 25

Processos de reproduo sexuada

Segundo SOARES (1997: 187), a reproduo considerada sexuada sempre que depende, para
acontecer, da aco combinada (ou at mesmo isolada) de clulas especializadas para essa
funo chamadas de gmetas, produzidas em glndulas prprias denominadas gonadas. Por
isso a reproduo sexuada tambm conhecida como reproduo gmica.

A Reproduo Sexuada Compreende

A conjugao uma troca de materiais nucleares genticas entre organismos unicelulares ou

mesmo entre multicelulares muito inferiores, de tal sorte que os descendentes j passam
revelar uma recombinao de caracteres herdveis na proporo de 50% de cada um dos
genitores.

Fecundao forma mais generalizada da reproduo sexuada que se assiste entre os seres. o
processo reprodutivo que se desencadeia pelo encontro ou fuso de um gmeta feminino.
tambm chamada fertilizao e tanto pode ocorrer no meio externo dispensando o acto sexual
quando pode fazer-se dentro do organismo da fmea, exigindo, ento, a contingncia de
alguma aco que leve o gmeta masculino a esse local.

Nas flores a fecundao interna e isso depende apenas da formao do tubo polnico, que
conduz o primeiro ncleo espermtico do garo do plen at no interior do ovrio. A
fecundao pode ser externa quando ocorre no meio ambiente, geralmente na gua, ou interna
quando se processa no interior do organismo da fmea.

Processo da Fecundao

Gametognese o mecanismo da formao dos gmetas. Em organismos inferiores

isso ocorre dentro de estruturas especializadas embora primitivas. Nos animais, a
gametognese se processa em glndulas sexuais denominadas gonadas, que
compreende testculos (gnadas masculinas), onde se passa a espermatogenese nos
ovrios (gnadas femininas), onde ocorre a ovognese. A espermatogenese o
fenmeno de formao dos espermatozides, a ovognse reproduo de vulos.
Partenognese a reproduo pelo desenvolvimento embrionrio a partir de um vulo
que no foi previamente fecundado, o que significa que o vulo neste caso sem o
concurso do espermatozide entra em processo de segmentao originando um novo
indivduo. Esse fenmeno pode ser conseguido artificialmente em laboratrios com o
 26

uso de recursos experimentais que estimulam a clivagem de gmetas feminino.

Devemos considerar a partenognese em dois tipos: Artificial ou experimental e
natural.

Processo de Meiose e seu Significado Biolgico

Meiose significa diminuio, e constitui uma aluso ao facto desse tipo de diviso celular o
nmero de cromossoma ser reduzido a metade nas clulas filhas (AMABIS & MARTHO,
2004: 180).

A reduo de nmero de cromossomas ocorre porque nesse processo h uma nica duplicao
cromossmica seguida de duas divises nucleares consecutivas: Meiose I e Miose II, cada uma
composta por 4 fases.

Meiose I ou Reducional I

Profase - ocorre em vrias subfases: leptoteno, zigoteno, paquiteno, diploteno, e

diacinese. Durante esta fase, ocorre o emparelhamento entre cromossomas homlogos
caracterstico da meiose.
Metafase - ocorre a fragmentao carioteca; os cromossomas unem-se as fibras do fuso
acromtico e ligam-se pelo centrmero.
Anafase - os cromossomas homlogos migram para plos opostos sem ocorrer a
diviso do centrmero.
Telofase - o fuso acromtico desfaz se, os cromossomas descondensam-se os nuclolos
reaparecem e surgem novos ncleos.

Meiose II

Profase II - as clulas resultantes da telofaseI iniciam uma nova diviso celular. Os

cromossomas iniciam uma condensao homognea e a fragmentao da carioteca;
Metafase II - os cromossomas espalham-se no citoplasma. Os cromossomas unem-se
as fibras do fuso acromtico e ficam voltados para um plo celular;
Anafase II - ocorre a diviso do centrmero e os cromossomasirmos migram para
plo opostos;
Telofase II - os cromossomas descondensam-se, as molculas reaparecem, o
citoplasma divide-se e surgem quatro clulas-filhas.
 27

O processo de miose utilizado pelos organismos animais para gerar gmetas, e pelos
organismos vegetais para gerar esporos.

Historial da citogenetica

As primeiras ideias sobre cromossomos surgiram no fim do sculo XIX, quando os primeiros
estudos sobre mitose foram realizados.

Os geneticistas Europeus estudavam o nmero e a estrutura dos cromossomos usando clulas

em diviso com alguns corantes para depois iniciar a examinar. Porem antigamente foi mal
interpretado, erradamente, que as clulas humanas continham 48 cromossomos (SNUSTAD
& SIMMONS, 2008:112).

Em 1866, Haeckel props que o ncleo celular era o principal agente responsvel pela diviso
das clulas.

O primeiro cientista, entretanto, a descrever o processo da diviso celular mittica de forma

clara foi o zologo alemo Anton Schneider, em 1873. Embora os estudos com cromossomos
tenham se tornado frequentes, a ideia de que estavam envolvidos com herana somente surgiu
em 1887, nos trabalhos de Weismann, que os introduziu em sua teoria de herana, mesmo com
total ignorncia das leis de Mendel, as quais foram redescobertas apenas em 1900, por trs
cientistas: Correns, de Vries e Tschermak. Com o renascimento das leis de Mendel, surgiu a
teoria da herana cromossmica, que relaciona os cromossomos com a herana regida pelas
leis mendelianas. Este foi um marco para o estudo dos cromossomos, onde a citologia e a
gentica passaram a sobrepor seus conhecimentos numa rea posteriormente denominada
citogentica.

O progresso da Citogentica clssica se deu a partir do incio do sculo passado

acompanhando o aprimoramento de tcnicas e equipamentos de microscopia. Sacchet, 1999 a
define como a cincia que estuda os constituintes celulares portadores da informao gentica
(cromossomos).

A demonstrao de que os genes residem nos cromossomos aumento o interesse nessa

pesquisa e levou a estudos importantes sobre o nmero e estrutura dos cromossomos. A
tcnica usada actualmente para estudo dos cromossomos a mesma nos seus pontos bsicos,
isto ; o uso de substncias como a colchicina que interrompe a diviso das clulas na
metfase, facilitando a visualizao dos cromossomos que esto no estado mximo de
condensao.
 28

Em relao espcie humana, at meados do sculo passado no se sabia exactamente o

nmero de cromossomos, sendo atribudo a Tjio e Levan (1956) a descoberta de que o genoma
humano constitudo por 46 cromossomos (ou 23 pares), sendo 44 autossmicos e 2 sexuais,
contribuindo de forma decisiva para estudos de doenas genticas e de evoluo. Actualmente
a citogenetica usada para ter cromossomos, para facilitar o diagnstico de sndrome,
anomalias e enfermidades.

Os cromossomos Humanos

Caritipo o conjunto cromossmico de uma espcie. Ele representa o nmero total de

cromossomos de uma clula somtica 2n. Cada espcie possui um conjunto cromossmico
tpico quanto ao nmero e morfologia dos cromossomos. Assim, a organizao dos
cromossomos em pares constitui o caritipo.

Portanto, nos ncleos existem pares de cromossomos homlogos. Denominamos n o nmero

bsico de cromossomos de uma espcie, portanto as clulas diplides apresentaro em seu
ncleo 2n cromossomos e os haplides n cromossomos.

De acordo com ALBERTS, et al. (1997:1294) Nas clulas somticas humanas so

encontrados 23 pares de cromossomos. Destes, 22 pares so semelhantes em ambos os sexos e
so denominados autossomos. O par restante compreende os cromossomos sexuais, de
morfologia diferente entre si, que recebem o nome de X e Y.

Cada cromossomo mittico apresenta uma regio estrangulada denominada centrmero ou

constrio primria que um ponto de referncia citolgico bsico dividindo os cromossomos
em dois braos: p (de petti) para o brao curto e q para o longo. Os braos so indicados pelo
nmero do cromossomo seguido de p ou q; por exemplo, 11p o brao curto do cromossomo
11.

Alm da constrio primria descrita como centrmero, certos cromossomos apresentam

estreitamentos que aparecem sempre no mesmo lugar: So as constries secundrias. De
acordo com a posio do centrmero, distinguem-se alguns tipos gerais de cromossomos:
Metacntrico, Submetacntrico e Acrocntrico.

Metacntrico: Apresenta um centrmero mais ou menos central e braos de comprimentos

aproximadamente iguais.
 29

Submetacntrico: O centrmero excntrico e apresenta braos de comprimento nitidamente

diferentes.

Acrocntrico: Apresenta centrmero prximo a uma extremidade. Os cromossomos

acrocntricos humanos (13, 14, 15, 21, 22) tm pequenas massas de cromatina conhecidas
como satlites fixadas aos seus braos curtos por pedculos estreitos ou constries
secundrias.

Aplicaes Citogenticas em Biologia

Diversas tcnicas so usadas no estudo do caritipo humano, e empregadas em culturas de

fibroblastos de medula ssea, sangue perifrico e pele. As mitoses so bloqueadas com
colchicina (substncia que bloqueia a formao dos microtbulos do fuso) durante a metfase.
O caritipo habitualmente obtido atravs de fotomicrografia.

Cada cromossomo recortado e alinhado com o seu homlogo em uma ordem decrescente de
tamanho. Esta tcnica facilitada pela determinao do ndice centromrico, razo entre os
comprimentos dos braos longos e curtos do cromossomo.

possvel a obteno de clulas para cariotipagem e diagnstico de aberraes cromossmica

mesmo antes do nascimento da criana. Isto possvel atravs da amniocentese, ou seja,
puno da parede uterina com uma agulha para obteno do fluido amnitico, que analisado
para determinar se o feto possui alguma aberrao e at mesmo o sexo deste.

As tcnicas de bandeamento cromossmico expandiram os horizontes da citogentica, e a

primeira aplicao do bandeamento deu-se no pareamento cromossmico. Essas tcnicas tm
possibilitado compreender melhor as alteraes cromossmicas que se estabelecem em cada
gentipo. (GUERRA, 1988:65).

Bandas Q: os cromossomos so submetidos a um tratamento com quinacrina mustarda, uma

substncia fluorescente e passam a apresentar faixas com diferentes intensidades de
fluorescncia, com um padro de bandas brilhantes e opacas caracterstico para cada par. Tais
bandas foram designadas de bandas Q (de quinacrina). O material deve ser analisado em
microscpio de fluorescncia e as regies brilhantes so ricas em bases AT. Tem como
importncia a deteco de delees, inverses e duplicaes em humanos.

Bandas G: os cromossomos so desproteinizados por aco da tripsina e, posteriormente so

corados com Giemsa (de onde deriva o nome bandas G). Os cromossomos mostram um padro
 30

de bandas claras e escuras, no qual as faixas escuras correspondem ao DNA rico em bases AT
e poucos genes activos; as bandas G claras tm DNA rico em bases GC e apresentam muitos
genes activos. Importncia: deteco de deleces, inverses e duplicaes em humanos.

Bandas R: os cromossomos so tratados com soluo salina e calor para uma desnaturao
controlada e depois so corados com Giemsa. O resultado de bandas claras e escuras tpico
de cada cromossomo e representa o inverso daquele produzido pelos bandeamentos Q e G (de
onde deriva sua designao de bandas reversas).

Bandas C: os cromossomos so tratados com soluo ode hidrxido de brio e corados com
Giemsa. Com este mtodo, so coradas regies especficas em que o cromossomo apresenta
DNA altamente repetitivo, como nas regies dos centrmeros e em outras regies
cromossmicas (ex: brao longo do Y e telmeros), correspondendo heterocromatina
constitutiva, motivo de sua denominao.

Bandas NOR: os cromossomos so corados em suas regies satlites, ou seja, na regio

organizadora do nuclolo (constrio secundria). A prata (Ag) um dos corantes mais usados.

Bandeamento de alta resoluo: os cromossomos so analisados em estados de prfase e

pr-metfase e apresentando compactao de metfase. So evidenciadas mais de 2000 bandas
no caritipo humano. A tcnica pode ser usada na identificao das bandas Q, G e R e detecta
alteraes cromossmicas pequenas, como microdelees, importante em estudos evolutivos.

FISH: fluorescence in situ hybridization, o maior progresso da citogentica nos ltimos

anos. A tcnica baseia-se na formao duplex, sob condies bem definidas, de um fragmento
de cido nuclico de fita simples modificado e sua sequncia complementar (seqncia alvo)
em um espcime biolgico fixado. Detecta sequncias especficas de cidos nuclicos, como
regies de microdelees e rearranjos cromossmicos. Essa tcnica pode ser usada para
estudar os cromossomos de clulas em metfase, mas seu principal uso nas clulas em
intrfase, quando anormalidades numricas e algumas estruturais podem ser detectadas.

Uma das principais aplicaes do bandeamento cromossmico a identificao de

cromossomopatias, que so definidas como quaisquer sndromes causadas por anomalias
cromossmicas.
 31

Anomalias cromossmicas humanas

O funcionamento normal do sistema gentico depende da estabilidade do material gentico

contido nos cromossomos. As anormalidades ocorrem na diviso celular ou acidentes nos
cromossomos (mutaes) resultando clulas ou organismos com genomas anmalos. Mutaes
podem ser definidas como um evento que d origem a alteraes qualitativas ou quantitativas
no material gentico.

As anomalias cromossmicas podem ser numricas ou estruturais e envolvem um ou mais

cromossomos autossomos, cromossomos sexuais ou ambos. As anomalias numricas afectam
o nmero do complemento cromossmico normal da espcie humana, podendo resultar em
aumento ou diminuio. As anomalias estruturais modificam a morfologia normal de um ou
mais cromossomos. (ALBERTO, 2006:224)

As alteraes constitucionais fazem parte da constituio do indivduo e esto presentes desde

o inicio de sua formao nas clulas fetais. J as alteraes adquiridas ocorrem durante o
desenvolvimento do indivduo.

As anomalias numricas

De acordo com ALBERTO (2006:228), As anomalias numricas so classificadas em dois

grandes grupos: Euploidia e aneuploidia. As nicas alteraes constitucionais encontradas na
espcie humana so as triploidia (3n) e tetraploidia (4n).

A euploidia - uma modificao onde todos os cromossomos do caritipo esto aumentados

ou diminudos. As alteraes na euploidia ocorrem como consequncia da falha de uma das
divises da maturao do ovcito ou do espermatozide. A sobrevivncia de um indivduo
totalmente euplide impossvel, e quase todos os casos de triploidia (3n) ou de tetraploidia
(4n) somente foram observados em abortos espontneos. Raros foram os casos que chegaram a
termo e, mesmo assim, eram de natimortos ou de morte neonatal.

A triploidia muito frequente em abortos que ocorrem no 1 trimestre de gestao. As

manifestaes clnicas das triploidias em geral so: Degeneraes hidrpicas; Sindactilias e
Espinha bfida.

A triploidia provavelmente resulta de falha de uma das divises da maturao no ovcito ou,
geralmente, no espermatozide. A triploidia pode se dar pelos seguintes mecanismos:
 32

Diandria - um vulo com 23 cromossomos (haplide) fecundada por um

espermatozide com 46 cromossomos (diplide);
Dispermia - um vulo haplide fecundando por dois espermatozides diplides. O
vulo em seu trajecto na tuba uterina envelhece e fica mais susceptvel a ser
fecundado por dois espermatozides.
Diginia - um vulo diplide fecundando por um espermatozide haplide. Nesse
caso o material gentico em excesso de origem materna. Isso faz com que o feto
possua retardo de crescimento e macrocefalia. A placenta nesse caso atrfica.

A tetraploidia (4n) - muito rara entre RN e est presente em 5% dos abortos normais. Pode-
se observar tetraploidia em indivduos mosaicos (4n/2n). A formao de clulas tetraplides se
deve a um erro nas primeiras clivagens do zigoto.

A aneuploidia

De acordo com SNUSTAD & SIMMON (2008:118), aneuploidia descreve uma mudana
numrica em parte do genoma, geralmente uma mudana na dosagem de um nico
cromossomo. So indivduos que tem um cromossomo a mais ou a menos.

A aneuploidia a variao que ocorre no caritipo de um indivduo por causa da diminuio

ou acrscimo de um ou mais cromossomos.

As principais formas de aneuploidias

Nulissomia falta de um par de cromossomos no caritipo normal;

Monossomia falta de um cromossomo no caritipo normal;
Trissomia acrscimo de um cromossomo no caritipo normal;
Tetrassomia acrscimo de um par de cromossomos no caritipo normal.

O mecanismo cromossmico mais comum da aneuploidia a no-disjuno meitica, uma

falha da separao de um par de cromossomos durante uma das duas divises meiticas. As
consequncias da no-disjuno durante a meiose I e a meiose II so diferentes: Quando o erro
ocorre na Meiose I, as gametas apresentam um representante de ambos os membros do par de
cromossomos ou no possuem todo um cromossomo.

Sndrome de Down - A sndrome de Down uma anomalia cromossmica ligada presena

de um cromossomo idntico aos do par 21, por esta razo a Sndrome de Down chamada de
trissomia do 21. a mais frequente das anomalias cromossmicas. O portador da Sndrome de
 33

Down apresenta um fentipo caracterstico: fenda palpebral oblqua, baixa estatura, cabelos
lisos e macios, retardo no desenvolvimento mental e outras.

Sndrome de Klinefelter - A sndrome de Klinefelter causada pela constituio gentica

anmala. O caritipo mais frequente do tipo 47, XXY. Os indivduos portadores desta
sndrome apresentam pnis normal ou diminudo, testculos sempre pequenos e duros, so
estreis.

Sndrome de Turner - Caracterizada pela falta total ou parcial de um cromossomo X. O

caritipo do tipo 45,XO, fenotipicamente so fmeas. Os portadores apresentam estatura
retardada, ovrios rudimentares, no apresentam menstruao e no apresentam caractersticas
sexuais secundrias. O diagnstico das anomalias cromossmicas se d geralmente aps o
nascimento. No entanto, com o advento de novas tecnologias j possvel a identificao de
tais anomalias no pr-natal. As anomalias em cromossomos sexuais so mais difceis de se
detectar no pr-natal, pois elas alteram pouco o fentipo nesta fase.

A Citogenetica molecular

De acordo com GERRA, 2000: 12 A citogenetica o estudo dos cromossomas, de sua

estrutura e sua herana aplicado prtica da gentica mdica. A anlise cromossmica, o
caritipo, com uma resoluo e preciso muitssimo melhoradas, so um procedimento
diagnstico cada vez mais importante em vrias reas da medicina.

Quando o alvo da anlise a molcula do DNA ou partes dela, a anlise denominada

molecular e quando investigado o ncleo interfsico ou metfase, em lminas, com a
utilizao de estratgias moleculares denominada citogentica molecular.

Os distrbios cromossmicos formam uma importante categoria de doenas genticas. Eles

contribuem para uma grande proporo de todas as perdas reprodutivas, malformaes
congnitas e retardo mental, tendo um importante papel na patogenia da malignidade. As
anomalias cromossmicas especficas so responsveis por mais de 100 sndromes
identificveis. Os distrbios citogenticos esto presentes em quase 1% dos nativivos, em
cerca de 2% das gestaes de mulheres com mais de 35 anos que tiveram diagnstico pr-natal
e em metade de todos os abortos espontneos de primeiro trimestre.
 34

Uso da citogenetica molecular em medicina

A gentica molecular uma das reas cientficas que mais tem contribudo para o progresso
recente da medicina. Quase todas as doenas tem uma base gentica e os enormes avanos
cientficos obtidos aps o sequenciamento do genoma humano esto a permitir trazer para a
prtica mdica novas formas de diagnstico e de teraputica.

Os testes citogenticos permitem tambm detectar o reaparecimento das primeiras clulas

tumorais e cancergenas em doentes em fase de remisso, isto , sem sintomas aps terapia,
Indicando aos mdicos a necessidade de iniciar um novo ciclo de tratamento.

Nos ltimos anos foram desenvolvidos diversos medicamentos para o tratamento de infeces
pelos vrus causadores de SIDA e das hepatites. No entanto estes vrus tem uma grande
capacidade de mutar, isto , alterar o seu genoma, tornando-se resistentes a algumas drogas
usadas no seu tratamento.

As doenas geneticamente determinadas so classificadas em trs categorias principais:

cromossmicas (que so aquelas com envolvimento de vrios genes localizados no
cromossomo alterado), monognicas (com um gene envolvido com padro de herana
especifico) e multifatoriais (envolvimento de vrios genes e participao do ambiente),
embora, alm dessas, duas outras categorias, actualmente devem ser consideradas, as de
origem mitocndriais e do distrbio das clulas somticas (cncer), (CESAR e CEZAR,
1979:203). A anlise gentica do vrus permite detectar a ocorrncia destas mutaes,
permitindo aos mdicos recorrer precocemente a outras drogas de modo a continuar a
combater com eficcia a infeco.

Hoje sabe-se como importante controlar a concentrao de colesterol no sangue

(colesterolmia) uma vez que nveis elevados de colesterol podem provocar aterosclerose e
ataques cardacos. Conhece-se e consegue-se identificar alguns erros genticos (mutaes)
responsveis pelo aumento da colesterolmia em indivduos jovens. A realizao de um teste
gentico permite aos mdicos diagnosticar a doena e iniciar a medicao para baixar o nvel
de colesterol, evitando assim o alto risco de um ataque cardaco a que estas pessoas estariam
sujeitas.

Atravs das citogentica pais podem ficar sabendo antecedentes se o bebe possui alguma
deficincia e podem preparar-se psicologicamente para enfrentar a situao.

A citogentica pode ser usada nos casos de:

 35

Neoplasias - uma proliferao celular no controlada, sem resposta a fatores

reguladores da diferenciao celular, com invaso dos tecidos adjacentes e metstases
para rgos distantes, pela disseminao de clulas atravs da corrente sangunea e
linftica.

As neoplasias hematolgicas se dividem em: sndromes mielodisplsicas, mieloma mltiplo,

gamopatias monoclonais, sndromes mieloproliferativas, leucemias e linfomas. O estudo das
alteraes cromossomicas presentes nas neoplasias principalmente hematolgicas, tem grande
impacto no auxlio de diagnstico, no prognstico e na monitorizao da doena.

Leucemia - A caracterstica comum a todas as leucemias uma proliferao

desregulada, na medula ssea, de uma clula hematopoitica. A clula leucmica
cresce mais que Os elementos normais e os substitui em todas as reas da medula,
consequentemente, a medula aspirada de qualquer local vai revelar infiltrado
leucmico. A clula leucmica tambm prolifera em locais extramedulares de antiga
hematopoiese fetal, isto , o fgado e o bao e, nas leucemias linfocticas, nos
linfonodos. Uma vez detectada pela citogentica tradicional, pode-se notar quais as
alteraes sofridas na fase de diagnstico e a citogentica atravs da tcnica de FISH
(hibridao em situ fluorescente). Assim fazendo-se um acompanhamento para a
monitorizao do tratamento ou deteco de doena residual e para avaliao de
quimeras aps transplante de medula.

A anlise cromossmica das doenas hematolgicas malignas eficiente no s para um

diagnstico mais refinado, mas tambm para a compreenso dos mecanismos envolvidos na
malignidade e para encontrar genes de importncia biolgica. As anormalidades cariotpicas
esto confinadas aos clones malignos, desaparecem durante a remisso hematolgica e
reaparecem com a recidiva, algumas vezes demonstrandoevidncia de novas alteraes
supostas ao clone anormal original (FARIAS e CASTRO, 2004).

A vantagem da citogentica que ela capaz de detectar alteraes clonais, estruturais e

numricas, e, quando presentes, mesmo em um nmero pequeno de clulas, apenas duas a trs
metfases sero suficientes para determinar um clone neoplsico. Outra vantagem que a
citogentica poder detectar alteraes clonais novas, ou seja, evolues clonais.

O futuro da citogentica

H uma crescente necessidade para melhorias no diagnstico molecular de doenas em

crianas. Pelo facto da progresso das doenas ser extremamente rpido, embora com muita
 36

heterogeneidade de sintomas e sinais clnicos, o diagnstico molecular rpido facilita as

decises clnicas de impacto.

Felizmente nos ltimos anos, os equipamentos de sequenciamento do DNA ou a chamada

next generation sequence juntamente com melhores ferramentas de anlise de dados tm
sido capazes de facilitar o diagnstico de doenas genticas em poucos dias e no mais em
semanas ou anos, e podemos esperar que isso seja realizado em poucas horas pois as
tecnologias neste campo esto evoluindo muito rpido.

A maioria das doenas genticas no tem tratamento ainda, no entanto, para as que j foram
identificadas e existem tratamentos, este tipo de testes ira aumentar as chances de
sobrevivncia e evitar os problemas causados por uma condio no diagnosticada.

O futuro da citogentica promissor uma vez que permite a comparao da arquitectura

genomica de espcies distantes representando desta forma uma atractiva para a construo de
cariotipos ancestral assim como para estudos filogenticos.

Com o surgimento de tcnicas da citogentica molecular que permitem a identificao de

bandas de heterocromatina bem como sequncias especficas de DNA nos cromossomos novas
perspectivas se abriram para a caracterizao citogentica das espcies.

Mais recentemente, tornou-se possvel analisar como os genes se expressam, ou so

silenciados, nos diferentes tecidos, ou num tumor e no tecido normal adjacente. Esse o
campo da genmica funcional. O prximo passo, que j est sendo dado, a protemica:
entender como as protenas, codificadas pelos genes, so geradas, modificadas e interagem no
ambiente intracelular .

O extraordinrio avano da biologia molecular, bioqumica e informtica permite analisar o

genoma no estudo das patologias tumorais, possibilitando: identificar genes envolvidos nos
processos tumorais, como aqueles que normalmente inibem a proliferao celular (genes
supressores de tumor), os que ativam a proliferao (oncognes) e os envolvidos no reparo do
DNA.

Mutao: Fonte da variabilidade gentica necessria para evoluo

De acordo com SIMMONS e SNUSTAD (2008:355) as mutaes, mudanas herdadas no

material gentico, fornecem uma grande variao gentica que permite a evoluo dos
organismos.
 37

As mutaes so importantes sob ponto de vista evolutivo, pois so elas que do origem
variabilidades gentica de indivduos de uma populao sobre a qual actua a seleco natural.
Ela especialmente significativa porque fonte primria da mudana evolutiva; novos alelos
surgem em todos os organismos, alguns espontaneamente e outros resultantes da exposio a
radiao ou substncias qumicas no ambiente.

A mutao e a recombinao agem em conjunto, a mutao modifica o ADN e a recombinao

realiza uma mistura entre as partes modificadas de dois organismos. Um organismo que
apresenta um fentipo novo resultante de uma mutao chamado mutante.

Alteraes mutacionais no gentipo de um organismo incluem mudanas no nmero e na

estrutura dos cromossomas, bem como nas estruturas de genes individuais. Mutaes que
envolvem alteraes em stios especficos eu um gene so denominados mataces de ponto.
Elas incluem a substituio de um par de bases por outro ou a deleco de um ou alguns pares
de nucleotdeos em um local especfico de um gene.

A mutao a principal fonte da variao gentica. Ela fornece a matria-prima para a

evoluo. Os mecanismos de recombinao rearranjam a variabilidade gentica em novas
combinaes mais bem adaptadas s condies existentes no ambiente ou desejadas pelos que
fazem cruzamentos de animais ou plantas.

Sem mutaes todos os genes existiriam de uma nica forma e populaes de organismos no
seriam capazes de evoluir e se adaptar a mudanas ambientais. Algum nvel de mutao
essencial para dar nova variabilidade gentica e permitir que os organismos se adaptem a
novos ambientes. Todavia, se as mutaes ocorressem com muita frequncia perturbariam a
fiel transmisso de informao gentica de gerao a gerao.

Caractersticas Bsicas dos Processos Mutagnicos

As mutaes ocorrem em todos os genes de todos organismos vivos. Essas mutaes fornecem
nova variabilidade gentica que permite aos organismos adaptar-se a mudanas ambientais.
Elas podem ocorrer espontaneamente ou serem induzidas por agentes mutagnicos.

Mutao Somtica ou Germinativa

Na viso de SNUSTAD e SIMMONS (2008:355) uma mutao pode ocorrer em qualquer

clula e em qualquer estgio de desenvolvimento de um organismo multicelular.
 38

Os efeitos imediatos da mutao sua capacidade de produzir uma mudana fenotpica so

determinados por sua dominncia, pelo tipo de clula na qual ocorre e pela poca em que
ocorre durante o ciclo de vida do organismo.

As mutaes somticas ocorrem em clulas somticas, ou seja, durante a replicao do DNA

que precede uma diviso mittica. Se a mutao ocorre em uma clula somtica, o fentipo
mutante compromete somente o indivduo afectado, causando alguns tipos de cncer ou
cancros, por exemplo. Geralmente no so mutaes transmitidas a prole.

As mutaes germinativas ocorrem durante a replicao do DNA que precede a meiose. A

mutao afecta os gmetas e todas as clulas que deles descendem aps a fecundao
transmitida a descendncia.

Se mutaes dominantes ocorrem em clulas germinativas, seus efeitos podem ser expressos
imediatamente na prole. Se as mutaes so recessivas, seus efeitos em geral so obscurecidos
em diplides. Mutaes germinativas podem ocorrer em qualquer estgio no ciclo reprodutivo
do organismo. Se a mutao surge em um gmeta, apenas um nico membro da prole
provavelmente ter o gene mutante. Se uma mutao ocorre em uma clula primordial da
linhagem germinativa do testculo ou ovrio, vrios gmetas podem receber o gene mutante,
acentuando seu potencial de perpetuao. Entretanto, a dominncia de um alelo mutante e o
estgio do ciclo reprodutivo no qual ocorreu uma mutao so os principais factores para
determinar a probabilidade de que o alelo mutante se manifeste em um organismo.

Mutao Espontnea ou Induzida

As mutaes espontneas so aquelas que ocorrem sem uma causa conhecida. Elas podem ser
verdadeiramente espontneas, resultando de um nvel baixo de erros metablicos inerentes, ou
podem ser causadas por agentes desconhecidos presentes no ambiente.

Mecanismos de mutaes espontneas

As mutaes espontneas surgem de uma variedade de fontes. Uma fonte e o processo de

replicao de DNA. Embora a replicao de DNA seja um processo marcantemente preciso,
so cometidos erros na c6pia de milhes (e mesmo bilhes) de pares de bases em um genoma.
As mutaes espontneas tambm surgem em parte porque o DNA e tuna molcula muito
frgil, e o prprio ambiente celular pode danifica-la.
 39

Erros na replicao do DNA: Um erro na replicao do DNA pode ocorrer quando se forma
um par errado de nucleotdeos na sntese de DNA (exemplo: A C), levando a uma
substituio de bases que pode ser uma transio ou uma transverso. A transio a
substituio que ocorre em razo de troca de uma base nitrogenada purina (adenina e guanina)
por outra purina, ou de uma pirimidina (citosina e timina) por outra pirimidina.

A transverso o inverso da transio, pois a substituio de uma purina por uma pirimidina,
ou vice-versa.

Mudanas de matriz de leitura: outros erros podem adicionar ou subtrair pares de bases de
modo que criada uma mudana de matriz de leitura. Quando ocorre por adio ou subtraco
(insero ou dileco) de bases, altera o cdigo gentico, definindo uma nova sequncia de
bases, que consequentemente pode alterar o tipo de aminocido includo na cadeia proteica,
tendo a protena outra funo ou mesmo inactivao da expresso fenotpica. Como o caso
da presena de valina ao invs de glutamato no sexto aminocido da cadeia polipeptdica da
hemoglobina, que causa a doena gentica denominada de anemia falciforme.

Leses espontneas: Alm dos erros de replicao, as leses espontneas, os danos de

ocorrncia natural ao DNA, podem gerar mutaes. Duas das mais frequentes leses
espontneas resultam de depurinao e desaminao. A depurinao, a mais comum das duas,
e a perda de uma base purina. A depurinao consiste na interrupo da ligao glicosidica
entre a base e a desoxirribose e a perda subsequente de uma guanina ou uma adenina do DNA.

Mutaes Induzidas

Segundo SNUSTAD e SIMMONS (2008:357) as mutaes induzidas so aquelas resultantes

da exposio de organismos a agentes fsicos e qumicos que causam mudanas ao DNA (ou
RNA em alguns vrus). Tais agentes so chamados mutagnos.

Os mutagnos induzem mutaes por uma variedade de mecanismos. Alguns mutagnos

mimetizam bases normais e so incorporados ao DNA, onde podem parear errado. Outros
danificam bases e causam mal pareamento especfico ou destroem o pareamento causando o
nao-reconhecimento de bases. Os agentes mutagnos incluem irradiao ionizante, luz
ultravioleta e uma ampla variedade de substncias que aumentam a taxa com a qual as
mutaes ocorrem.
 40

As mutaes induzidas podem ser encontradas por acaso no curso cotidiano ou

intencionalmente aplicadas no laboratrio. A produo das mutaes no laboratrio pela
exposio a mutagnos chamada de mutagnese, e o organismo e dito mutagenizado.

Mecanismos de Mutagnese

Os mutagnos induzem mutaes por pelo menos trs mecanismos diferentes:

Eles podem substituir uma base no DNA;

Alterar uma base de modo que ela faa um pareamento especificamente errado com
outra base;
Danificar uma base de modo que ela no possa mais parear com qualquer base sob
condies normais.

Incorporao de anlogos de bases: Alguns compostos qumicos so suficientemente

similares as bases nitrogenadas normais do DNA de modo que sejam ocasionaln1ente
incorporadas ao DNA em lugar das bases normais; tais compostos so chamados de analogos
de bases. Aps estarem no lugar, esses anlogos trn propriedades de pareamento diferentes
das bases normais; assim, podem produzir mutaes fazendo com que nucleotideos incorrectos
sejam inseridos em oposio a eles na replicao. O anlogo original de bases existe apenas
em um nico filamento, mas pode causar uma substituio de par de nucleotdeos que
replicada em todas as cpias do DNA descendentes do filamento original.

Agentes intercalares: Os agentes intercalares formam uma outra classe importante de

modificadores de DNA. Esse grupo de compostos inclui proflavina, acridina laranja e uma
classe de substncias chamadas compostos ICR. Esses agentes so molculas planares que
mimetizam pares de bases e so capazes de inserir-se (intercalar-se) entre bases nitrogenadas
empilhadas no cerne da dupla hlice de DNA. Nessa posio intercalada, tal agente pode
causar uma insero ou deleco de um nico par de nucleotdeos.

Danos a bases: Um grande nmero de mutagnos danifica uma ou mais bases, e, assim, no e
possvel um pareamento especfico de bases. O resultado um bloqueio de replicao, porque
a sntese de DNA no ocorrer alem de uma base que no possa especificar seu parceiro
complementar por pontes de hidrognio.

Na ptica de GRIFFITHS et, all (2008:451) A luz ultravioleta geralmente

causa danos a bases nucleotidicas na maioria dos organismos. A luz
ultravioleta gera um nmero de tipos distintos de alteraes no DNA,
 41

chamados de fotoprodutos. O mais provvel desses produtos para levar a

mutaes duas leses diferentes que unem pirimidinas adjacentes no
mesmo filamento.

A radiao ionizante resulta na formao de molculas ionizadas e excitadas que podem

danificar o DNA. Devido a natureza aquosa dos sistemas biolgicos, as molculas geradas
pelos efeitos da radiao ionizante na gua produzem os maiores danos.

Mutao, Geralmente um Processo Aleatrio, No Adaptativo

A mutao geralmente um processo no adaptativo em que um estresse ambiental

simplesmente selecciona organismos com mutaes preexistentes de ocorrncia aleatria.

Por exemplo, se cortar a cauda de Camundongos por vrias geraes, ser que produzir uma
linhagem de camundongos sem cauda? A respeito da crena de Jean Lamarck e Trofim
Lysenko, que acreditavam na herana de caractersticas hereditrias caractersticas impostas
ao organismo por factores ambientais a resposta no. Os Camundongos continuaro a
nascer com cauda.

Mutagnese Adaptativa, ou de Fase Estacionria, em Bactrias

Uma mutao adaptativa fornece uma vantagem selectiva ao organismo mutante quando
cultivado no ambiente em que se originou. A formao de mutaes adaptativas chamada
mutagnese estacionria porque ocorre quando populaes de bactrias param de crescer
entram em uma fase estacionria devido a inanio ou algum outro tipo de estresse
ambiental. Bactrias na fase estacionria ou param de se dividir ou morem na mesma taxa em
que novas clulas esto produzidas.

As mutaes adaptativas nestas clulas de fase estacionria so produzidas juntamente com

outras mutaes que ocorrem aleatoriamente (mutaes no adaptativas); isto , resultam de
um aumento induzido por estresse na taxa de mutao. O termo adaptativo significa que
algumas mutaes que do uma vantagem selectiva a bactria ocorreram em resposta ao
estresse, juntamente com outras mutaes no adaptativas. A mutagnese adaptativa, ou de
fase estacionria, generalizada em bactrias, e contribui para a sua capacidade de se adaptar a
diversos ambientes.
 42

Mutao: Um Processo Reversvel

Uma mutao em um gene tipo selvagem pode produzir um alelo mutante que resulta em um
fentipo anormal. Entretanto, o alelo mutante tambm pode sofrer uma mutao reversa para
uma forma que restaura o fentipo tipo selvagem Isto , a mutao um processo reversvel.

A mutao de um gene tipo selvagem para uma forma que resulta em fentipo mutante
referida como mutao directa. Quando uma mutao restaura o fentipo original perdido por
causa de uma mutao anterior, o processo chamado de mutao reversa ou mutao de
reverso.

A reverso pode ocorrer de dois modos diferentes:

Por mutao reversa - uma segunda mutao que ocorre no mesmo ponto do gene que
a mutao original, restaurando a sequncia nucleotdica tipo selvagem.
Pela ocorrncia de uma mutao supressora uma segunda mutao que ocorre em
um local diferente no genoma, que recompensa os efeitos da primeira mutao.

Mutaes supressoras podem ocorrer em pontos distintos do mesmo gene que a mutao
original ou em genes diferentes, at mesmo em cromossomas diferentes. Algumas mutaes
revertem primariamente por retromutao, enquanto outras o fazem exclusivamente pela
ocorrncia de mutaes supressoras. Se o fentipo tipo selvagem restaurando por uma
mutao supressora, a mutao original ainda estar presente e pode ser separada da mutao
supressora por recombinao. Se o fentipo tipo selvagem restaurando por retromutao,
toda a prole do retrocruzamento ser tipo do selvagem

Mutaes

As mutaes da linhagem germinativa so transmitidas para prole, ou seja uma mutao que
ocorre nos gmetas hereditria e as que ocorre nas clulas somticas no so hereditrias.
Elas podem ocorrer espontaneamente, e, serem induzidas por agentes mutagnicos no
ambiente; ser causadas por erros de cpia do material durante a diviso celular, por exposio
a radiao ultra violeta (RUV) ou Ionizante, Agentes Qumicos Mutagnicos ou Vrus. A
clula pode tambm causar mutaes deliberadamente durante processos conhecidos como
hipermutao. Em conformidade com as suas manifestaes, registam-se diversificados tipos
de mutaes:
 43

Mutao pontual, uma mudana que afecta uma nica posio no gene. Isto pode causar
mudanas na protena por ele codificada. As mutaes pontuais so muitas vezes geradas por
erros na duplicao do DNA ou na hora de transcrever o DNA para RNA.

Mutaes cromossmicas so alteraes no nmero dos cromossomas de uma clula, ou pode

ser alteraes estruturais, rearranjo do DNA. Elas podem ser provocadas durante algumas das
etapas da diviso celular, durante a segregao dos cromossomos, ou durante o momento do
crossig-over. Podem existir agentes mutagenicos, que induzem as mutacoes, corrantes
artificiais, conservantes, radiao, ondas electromagnticas, so alguns deles. A sndrome
Down ou mogonismo, uma doena provocada por uma mutao cromossomica numrica, uma
trissomia no cromossomo 21. O crompossomo pode perder um pedao, mutao estrutural
chamada de deficincia; esse pedao pode inserir-se em outro cromossomo, acontece ento
uma translocao, que uma anomalia estrutural na qual um pedao de um cromossomo se
insere em outro no homlogo. O cromossomo pode sofrer duas quebras e o pedao
intermedirio sofre um giro de 180 e solde-se as extremidades de uma forma invertida, a
inverso.

Efeitos fenotpicos

De acordo com SNUSTAD e SIMMONS (2008:360), os efeitos de mutao sobre o fentipo

variam de alteraes to pequenas que s podem ser detectadas por tcnicas genticas ou
bioqumicas especiais a grandes modificaes morfolgicas e alteraes letais.

Um gene uma sequncia de pares de nucleotdeos que geralmente codificam um polipeptdeo

especfico. De acordo com a variabilidade mutagnica sobre o fentipo, elas podem ser
deletrias, isoalelos, neutras, alelos nulos, letais recessivos e favorveis.

Mutaes deletrias so aquelas desfavorveis e sua frequncia pode ser reduzida na

populao por meio da seleco natural.

Isoalelos so genes contendo mutaes sem efeitos sobre o fentipo, ou que produzem
pequenos efeitos reconhecveis por tcnicas especiais.

Mutaes neutras so aquelas que seus efeitos no influenciam o fentipo do indivduo;

podendo se acumular se ao longo do tempo devido a deriva gentica.

Mutaes de alelos nulos resultam da faltam de produtos gnicos ou produtos gnicos

totalmente no funcionais. Este tipo de mutaes ocorrer em genes necessrios para o
 44

crescimento do organismo, os indivduos que so homozigotos para a mutao no sobrevive,

tais mutaes se denominam de mutaes letais recessivas.

Ao contrrio destas, existem mutaes cujos seus efeitos sobre o fentipo duma populao
manifesta-se positivamente, a estas so chamadas de mutaes benficas ou favorveis. Podem
se acumular em mudanas evolutivas. Algumas mutaes foram seleccionadas pelo homem
por apresentar interesse econmico. A laranja baiana um exemplo tpico, ela devida a
uma mutao que ocorreu em 1870 numa nica laranjeira da bahia e, posteriormente foi
cultivada pelo homem.

As mutaes podem ser recessivas ou dominantes. Em organismo monoploides tais como vrus
e bactrias, tanto mutaes recessivas quanto dominantes podem ser reconhecida pelo seu
efeito sobre o fenotipo do organismo no qual eles ocorrem. Em organismos diploides tais
como a-mosca-das-frutas e seres humanos, as mutaes recessivas iro alterar o fentipo
apenas quando presentes na condio homozigota.

Efeitos de mutaes em genes de globina humana

A forma principal de hemoglobina em adultos (hemoglobina A) conte duas cadeias alfa ()

idnticas e duas cadeias beta () idnticas. Cada polipeptdeo alfa () consiste em sequncias
de 141 aminocidos enquanto cadeia beta () possui 146 aminocidos. Devido s similaridades
em sequncias de aminocidos acredita-se que todas as cadeias de globina e, por tanto, seus
genes estruturais evoluram de um genitor comum.

Mutantes variantes diferentes da hemoglobina dos adultos foi identificada em populaes

humanas e varias delas tem graves efeitos fenotpicos. Muitas das variantes foram inicialmente
detectadas por seu comportamento eletrofortico. As variantes de hemoglobina fornecem uma
excelente ilustrao dos efeitos de mutaes nas estruturas e funes de produtos genicos e,
finalmente nos fentipos das pessoas afectadas.

Efeitos mutagnicos em humanos: mutaes em vias metablicas

Os efeitos de mutaes no metabolismo humano podem ocorrer em qualquer via metablica.

Entretanto, o metabolismo dos aas aromatizantes so exemplos de mutacoes em humanos que
revelaram bloqueio nessas vias. Os defeitos herdados podem causar vrios distrbios ou at
ento doenas, tal como o caso de fenilcetonria causada pela ausncia de fenilalanina-
hiroxilase, a enzima que converte a a fenilalanina em tirosina; alcaptonria causada por
mutacoes autossmicas recessivas;tirosinese e tirosinemia; o albinismo, que resulta do
 45

bloqueio mutacional na converso da tirosina em melanina, entre outras e varia doenas ou

distrbios.

A base molecular de mutao

As mutaes alteram as bases de nucleotdeos dos genes de vrios modos por exemplo a
substituio de um par de bases por outro ou a delao ou adio de um ou alguns pares de
bases.

Quando Watson e Crick descreveram a estrutura de dupla hlice do DNA e propuseram a sua
replicao semiconservativa com base no pareamento especifico de base para explicar a
transmisso precisa da informao gentica de gerao em gerao, eles tambm propuseram
um mecanismo para explicar a mutao espontnea. Indicaram que as estruturas das base no
DNA no so estticas. Os tomos de hidrognio podem mover-se de uma posio em uma
purina ou purimidina para outra posio. Tais flutuaes qumicas so chamadas mudanas
tautomricas.

Embora essas mudanas seja muito raras, elas podem ser de considervel importncia no
metabolismo do DNA porque algumas alteram o potencial de pareamento das bases. Se uma
bases existir em sua forma rara no momento da replicao ou incorporao de cadeia de DNA
nascente, resultar uma mutao.

Mutaes que resultam de mudanas tautomericas nas base do DNA envolvem as substituio
de uma purina em um filamento do DNA por outra purina e a substituio de uma purimidina
no filamento complementar por outra pirimidina. Tais substituies de pares de bases so
chamadas transies. E substituies de purina por pirimidinae vice-versa, denominam-se
transverses.

Existem trs substituies, uma transio e duas transverses, possveis para cada par de
bases. So possveis em um total de quatro transies diferentes e oito transverses diferentes.

Outro tipo de mutao de ponto envolve a adio ou deleo de um ou alguns pares de bases.
Adies e delees de pares de bases so colectivamente chamadas mudanas de matriz de
leitura porque alteram a matriz de leitura de todas as trincas de pares de bases (trincas de
DNA que especificam codons no mRNA e aminocidos no produto polipeptidico do gene) nos
genes que esto distais do stio no qual ocorreu a mutao.
 46

Todos os tipos de mutaes de ponto, transies, transverses e mudanas de matrizes de

leitura esto presentes entre mutaes de ocorrncia espontnea. Uma surpreendente grande
proporo de mutaes espontneas adies e delees de um nico par de bases, e no
substituies de pares bases. Estas mudanas de matriz de leitura resultam na sntese de
produtos gnicos proteicos no funcionais.

Mutaes induzidas

Mutaes induzidas so mudanas que no ocorrem naturalmente. Podem ocorrer por

influncia de vrios factores, como raios X, substncias qumicas, radiao, elementos
genticos de transposio, entre outros.

Mutaes induzidas por substncias qumicas

Os mutagenios qumicos podem ser divididos em dois grupos:

Os que so mutagenicos para o DNA replicante e no replicante , tais como os agentes

alquilantes e acido nitroso .
Os que so mutagenicos apenas para o DNA replicante tais como anlogo de bases-
purinas e pirimidinas com estruturas similares as base normais no DNA.

Os anlogos de bases devem ser incorporados as cadeias de DNA no lugar de bases normais
durante a replicao para exercer seus efeitos mutagenicos. O segundo grupo de mutageneos
tambm inclui os corantes acridina, que se intercalam no DNA e aumentam a probabilidade de
erros durante a replicao.

Os anlogos de bases mutagnicos tem estruturas similares as bases normais e so

incorporados ao DNA durante a replicao, so suficientemente diferentes das bases normais
no DNA aumentando a frequncia de parmetros errados e assim as mutaes durante a
replicao. Os dois pares de bases anlogos mais comummente usados so 5- bromoacil e 2-
amino purina.

Uma das substancias qumicas com um grande teor de mutagenidade que actua no DNA
replicante e nao replicante o cido nitroso (HNO2), que causa desaminacao oxidativa de
grupos amino em adenina, guanina em citosina.
 47

Triagem de substncias qumicas quanto a mutagenicidade: o teste de Ames.

Segundo SNUSTAD e SIMMONS (2008:375), os agentes mutagenicos tambm so

carcingenos, induzem o cncer. A caracterstica que os diversos cnceres tm em comum
de que as clulas malignas continuam se dividir aps a diviso celular ter parado em clulas
normais. Genes especficos codificam produtos que regulam a diviso celular em resposta a
sinais intracelulares, intercelulares e ambientais. Quando tais genes passam por mutaes para
estados no funcionais, s vezes resultam em diviso celular descontrolada.

Vulgarmente, a carcinogenicidade de substncias qumicas feita em camundong neonatais,

um tipo de roedores cujo seu cuidado muito caro, e culminam com exames de tumores. Os
testes de mutagenicidade so feitos de modo similar; a mutao um evento de baixa
frequncia e sendo caro a manuteno de grandes nmeros de roedores, os testes tm sido
relativamente insensveis o que faz com que baixos nveis de mutao no sejam detectadas.

Foi com estas razoes que Bruce Ames e seus colaboradores desenvolveram tcnicas sensveis
que permitem testar rapidamente mutagenicidade de grandes nmeros de substncias e a um
custo baixo.

Ames e seus colaboradores usaram como material de trabalho, bactrias da espcie Salmonella
typhimurium que leva muitos tipos de mutaes, transies, transverses e mudanas de matriz
de leitura, em genes necessrios para a biossntese do aminocido histidina. Eles monitoraram
a reverso dos mutantes auxotroficos para prototrficos. Avaliou a capacidade de induzir tipos
diferentes de mutaes usando de linhagens testadoras que levaram tipos diferentes de
mutaes, uma linhagem de transio, uma de transverso, de mudana de matriz de leitura,
em diante.

Ames e seus colaboradores observaram uma correlao maior entre a mutagenicidada e a

carcinogenicidade das substncias testadas. Os testes de mutagenicidade de Ames
demonstraram a presena de mutgenos de matriz de leitura em vrios componentes de fumo
de cigarro condensado e fraccionado quimicamente. O teste de Ames fornece um
procedimento rpido, barato e sensvel para testar mutagenicidade de substncias qumicas.

Mecanismos de reparo do DNA

A clula no pode tolerar danos no DNA que compreende a integridade e a sensibilidade das
informaes essenciais do genoma.
 48

As clulas vivas contem varias enzimas que constantemente percorre o DNA a procura de
pares de nucleotdeos incorrectos ou danificados. Quando detectados esses efeitos so
corrigidas por um pequeno exerccios de enzimas de reparo do DNA. (SNUSTALD e
SIMNONS, 2008: 355).

Cada enzima contribui para combater um tipo particular de mudanas ou danos. Danos ao
DNA alteram a configurao especial da hlice e dai a alterao pode ser detectada pela clula.
Uma vez localizado o dano, e lanada a molcula especifica do reparo do DNA (enzima
especifica) ao local e se liga a regio na extremidade do local do dano incluindo outras
molculas.

Os tipos de modelos envolvidos e o mecanismo de reparo que mobilizado depende do tipo de

danos de DNA. Quando somente uma das fitas de um DNA tem defeito, a outra fita pode ser
usada como modelo para gerir correco da fita (hlice) danificada.

Reparo por mecanismos de exciso que se remove ao nucleotdeo na fita de DNA

complementar.
Reparo por exciso de nucleotdeos (Ner-nucleotdeo exciso) ou repara os danos
retirando os nucleotdeos, este reparo, incluem mecanismos de distoro de hlice
assim como a desmerizao de demidina causada por luz ultravioleta bem como a
quebras das fitas simples.

Uma forma especializada de Ner conhecido como reparo de transcrio (TCR-Transcripton-

compled repair) que descarrega prioritariamente enzimas de reparo(NER) em genes que
estejam em actividade.

Reparo de pareamento errado (MMR-imbunater repair) que corrige erros de replicao

gentica que usam empareamento esrenio em nucleotdeos seguida a uma replicao do
DNA quebrado em fita dupla.

Em clulas em diviso o dano do DNA pode ocorrer em ambas fitas (hilice); neste caso o
reparo feito pelo mecanismo conhecido como unio terminal no homologo. Na tentativa do
mecanismo de reparo arranjo dos erros detectados ao longo do processo de reviso da
replicao do DNA podem ocorrer substituies de nucleotdeos em locais no especficos
provocando efeitos do reparo de DNA que pode ocorrer tanto no gentipo como no fentipo.
 49

Doenas humanas herdadas com efeito no reparo de DNA

Os efeitos de mutaes sobre o fentipo variam de alteraes no pequenas que s podem ser
detectados por tcnicas genticas ou bioqumicas especiais a grande modificaes e as
alteraes letais. Qualquer mutao que ocorre dentro de determinado gene produzir um novo
alelo deste gene. As mutaes podem ser recessivas ou dominantes; em organismos diploides
no caso de seres humanos, as mutaes recessivas iro alterar o fentipo apenas quando
presentes na condio homozigta e no estado de heterozigtico no so reconhecidas no
gentipo (SNUSTAD e SIMMONS, 2008:360).

As mutaes recessivas ligadas ao sexo X no homem iro alterar a proporo dos sexos na
prole porque os hemizigtos portadores de letais no sobrevivero.

Ex: No cruzamento entre homem normal e mulheres normais ambos com genes letais no
cromossoma X.

FP: Homem normal X Mulher normal

a A a Xa Y
G: XY X X X
XA XAXa XAY Portanto, o individuo no 3 no
g: Xa ,Y XA, Xa sobrevivera
Xa XaXa XaY

Efeitos de mutaes em genes de globina humana

A forma principal de hemoglobina em adultos (hemoglobina A/ contem duas cadeias ()

idnticas as duas cadeias ). Cada polipeptdeo consiste em uma sequncia especfica de 141
aminocidos enquanto cada cadeia possui 146 aminocidos. Devido a essa similaridade em
duas sequencias de aminocidos acredita-se que as cadeias de globina (e, portanto seu genes
estruturais) evoluram de um progenitor comum. Muitas variantes foram inicialmente
detectadas por seu comportamento eletrofortico alterado (movimento a um campo elctrico a
diferena de carga).

Uma pessoa com anemia falciforme tem hemoglobina S que difere da hemoglobina A em
apenas uma posio o sexto aminocido a partir da ponta amino da cadeia da hemoglobina A
o cido glutmico (um aminocido de carga negativa). A cadeia da hemoglobina S conte
valina (sem carga em PH neutro ou nesta posio as cadeias de hemoglobina A e
hemoglobina S so idnticas portanto a mudanas de um nico aminocido em um
polipeptdeo pode ter graves efeitos no fentipo.
 50

Nessa alterao houve: de HBA que d origem HBs foi uma substituio de um par de bases T-
A POR A-T. So conhecidos mais de (100) cem variantes de hemoglobinas com mudanas de
aminocidos na cadeia . a maioria delas difere de hemoglobinas . normal com hemoglobina
A pela substituio de um nico aminocido. (SNUSTAD e SIMMONS, 2008:363).

Fonte: Adaptado pelo autor (SNUSTAD e SIMMONS, 2008:363).

Bloqueio em vias metablicas

O controlo gentico de vias metablicas, em cada etapa em uma via catalisada por uma
enzima codificada por um ou mais genes. Quando ocorrem mutaes em tais genes, eles em
geral causam bloqueios metablicos eles levam os fentipos anormais. Este quadro de controlo
getico do metabolismo vlido para todos os organismos vivos, incluindo humanos. Enfoque
tcnico: doena de tay-sachz uma tragdia na infncia.

A fenilalamina e tirosina so aminocidos essenciais necessrios para a sntese de protenas;

eles no so sintetizados de novo em humanos, como o so em microrganismos. Assim, ambos
aminocidos devem ser obtidos da protena da dieta.

O defeito herdado mais bem conhecido no metabolismo de fenilalamina-tirosina a

fenilcetonria, que causada pela ausncia da fenilalamina hidroxilase a enzima que converte
a fenilalamina em tirosina. Fenilcetonria, uma doena autossmica recessiva, desenvolve
retardo mental grave se no forem colocados em dieta pobre em fenilalamina.
 51

O primeiro distrbio herdado na via metablica de fenilalamina-tirosina a ser estudado em

humanos foi a alcaptonria, que causada por mutaes autossmicas recessivas que
inactivam a enzima oxidase do cido omogentico.

Dois outros distrbios herdados so causados por mutaes que codificam enzimas necessrias
para o catabolismo da terosina ambos herdados como autosssmicos recessivos. Tirosinose e
tirosenemia resultam da falta das enzimas tirosina transminase e oxidase. Pessoas com
tirosinose apresentam um aumento acentuado nos nveis de tirosina no sangue e na urina e tem
vrias anomalias congnitas.

Pessoas com tirosinomia tm nveis elervados tanto ao tirosina quanto de cido

phidroxifenipirvico no sangue e na urina. A maioria dos neonatos com tirosinomia morrem a
pois de seis meses a pois o nascimento por influencia heptica.

De todos distrbios humanos herdados, um dos mais trgicos a doena de Tay-sach ataca as
crianas em que os homozigotos para o gene mutante que causa doena so normais ao
nascimento; entre tanto dentro de alguns meses tornam-se hipersensveis a barulhos altos e
desenvolvem um ponto vermelho-cereja na retina do olho. Estes primeiros sintomas da doena
em geral no so detectados pelos pais e mdico.

De seis meses a um ano a pois o nascimento crianas com tay-sach comeam a sofrer uma
degenerao neurolgica progressiva que rapidamente resulta em retardo mental, cegueira,
surdez e perda geral do controlo das funes corporais. Aos dois anos de idade, elas em geral
esto totalmente paralisadas e desenvolvem infeces respiratrias crnicas que podem causar
a morte aos seus trs quatro anos de idade.

Segundo SNUSTAD e SIMONS (2008:364) a mutao que causa a doena tay-sach esta
situado nos genes HEXA que codifica a enzima da exosaminidase A. Esta enzima actua em um
lpido complexo chamado gangliosdeo Gm2, clivando o em gangliosdeo menor Gm3

A funo de gangliosdeo M2 de revestir as clulas nervosas isolando-os de eventos que

ocorrem nas clulas vizinhas, acelerando assim a transmisso de impulso nervosos. Na
ausncia de enzimas que o quebra o gangliosdeo Gm2 acumula-se e literalmente encobrem as
clulas nervosas. Esse acmulo de lpidos complexos nos neurnios bloqueia sua aco
provocando degenerao do sistema nervo e finalmente paralisia.
 52

Recombinao e Evoluo

Recombinao uma caracterstica essencial da reproduo sexual. Durante a meiose, quando

os cromossomas se juntam e fazem o crossing-over, h uma oportunidade para criar novas
recombinaes de alelos, em que algumas delas podem ser benficas ao organismo acentuando
a sobrevivncia ou a capacidade reprodutiva.

Significado evolutivo da recombinao

No organismo assexuado, no h possibilidade que a segunda mutao seja recombinada com

a primeira, mas no organismo sexuado, as duas mutaes podem ser recombinadas para
produzir uma linhagem que melhor do que qualquer um dos mutantes isoladamente. Essa
linhagem recombinante ser capaz de se espalhar por toda a populao da espcie.

Assim, como a mutao, a recombinao gnica contribui para a diversidade gentica de uma
populao, que a base do processo evolutivo.

Supresso de recombinao por inverso

Genes supressores so genes que codificam protenas que actuam na regulao negativa do
ciclo celular, impedindo a proliferao descontrolada das clulas.

Genes supressores revertem o efeito de manuteno de outro gene, restaurando o fentipo

infectado. Nos genes modificadores, uma mutao altera um segundo loco genico, mudando a
expresso de um gene mutado anteriormente, em um primeiro loco. No caso da supressao de
recombio por inverso, O efeito do embarralhamento de genes da recombinao pode ser
bloqueado por rearranjos cromossmicos. O crossing-over inibido perto dos pontos de
quebra de um rearranjo na condio heterozigota, porque o rearranjo perturba o pareamento
cromossmico.

Para observar este efeito de supresso de recombinao, considere-se que uma inverso no
brao longo de um cromossoma. Se um crossing ocorre entre cromatides invertida dentro de
tetrade, ela produzira duas cromatides recombinantes. Entretanto, ambas as cromatides
provavelmente sero perdidas durante ou aps a miose este efeito final de perda de cromatides
suprimir a recombinao entre cromossomos invertidos e no invertidos nos heterozigotos.

Controle gentico de recombinao

A recombinao envolve os produtos de muitos genes. E alguns dos produtos gnicos tem um
papel no pareamento cromossmico, e outras catalisam o processo de troca e ainda outros
 53

ajudam a reunir segmentos de cromatides quebradas. Existem enzimas especializadas que

auxiliam na reparao do dano do ADN. Estas enzimas catalisam a alguns processos que
ocorrem dentro das clulas e protegerem o DNA contra danos e mudar.

Ligao, Recombinao e Crossing- Over

Ligao um fenmeno fisicamente em que os genes esto ligados a mesma estrutura, pois
eles devem viajar como uma unidade durante a meiose.

Os genes que esto no mesmo cromossoma viajam juntos a miose; entretanto, alelos de genes
cromossomicamente ligados podem ser recombinados por crossing over.

Os primeiros geneticistas no estavam seguro quanto a natureza da ligao, mas alguns deles
incluindo Morgan e seus estudantes, pensavam que os genes estavam ligados uns aos outros
como as conta um colar. Assim, tais pesquisadores claramente tinham em mente um modelo
linear de organizao do cromossomo.

Recombinao

Recombinao a mistura de genes que ocorre durante a meiose, para formao dos gmetas.
Essa recombinao responsvel pela singularidade de cada indivduo de uma mesma espcie.
A probabilidade de que dois indivduos da mesma irmandade sejam iguais praticamente zero.
Em suma recombinao a troca aleatria de material gentico durante a meiose; era difcil
explicar pela simples teoria
gentica.

Uma hiptese foi que durante a

meiose, quando os cromossomos
homlogos formam pares, uma
troca fsica de material separava
e recombinava os genes. Esta
ideia foi inspirada pela
observao mitolgica de que os cromossomos podiam ser visto em configuraes de pares
sugestivas de que trocavam pedaos uns com os outros.
 54

Crossing-over

Para CURTIS (2009:929) Crossing- over um processo de troca de segmentos

correspondentes de material gentico entre cromatides de cromossomos homlogos durante a
miose.

Na primeira diviso meitica (profase I) ocorre o crosisng-over que o sobre cruzamento das
cromtides homlogas, no-irms que se encontram lado a lado. Durante a profase da primeira
diviso da meiose, os cromossomos homlogos duplicados se emparelham e formam um
conjunto de quatro cromtides.

A ligao entre genes localizados em um mesmo cromossomo no completa porque durante

a meiose ocorrem quebras e troca de pedaos entre cromatideos de cromossomos homlogos
que conhecida por permutao ou crossing-over, Segundo AMABIS & MARTHO
(2004:102).

Nesse momento aps desse fenmeno ocorre uma ressoldagem. Quando ocorre a permutao,
um gene situado acima do ponto de quebra se desliga de outro situado abaixo desse ponto.

Nos pontos de troca, os dois homlogos eram cruzados, como se cada um tivesse sido
quebrado e ento reunido a seu parceiro e ao ponto de crossing chamou de quiasma, da
palavra grega que significa "cruz".

Os geneticistas comearam a usar o termo crossing-over para descrever o processo que criava
os quiasmas, isto , o processo de troca entre os cromossomos pareados. Eles consideraram a
recombinao a separao de genes ligados e a formao de novas combinaes de genes
como resultado do evento do crossing- over.

Excepes ao Principio Mendeliano da Distribuio Independente

Os fenmenos de ligao e recombinao foram primeiro descobertos por W. Bateson e R. C.

Punnett pois a redescoberta do trabalho de Mendel no inicio do sculo XX.

Inicialmente, essa ligao foi vista como uma exceo ao principio Mendeliano da
Distribuio Independente algumas das primeiras evidencias de ligao, e contra a distribuio
independente vieram com experimento com ervilheiras, em que Bateson e Punnett cruzaram
variedades que diferiam em duas caractersticas, cor da flor e tamanho do plen.
 55

Eles cruzaram plantas com flores vermelhas gro de plen longos e planta com flores brancas
gro de plen pequenos. Todas as plantas da F1 tinham flores vermelhas e longas de gro de
plen, indicando assim que os alelos para estes dois fenotipos eram dominantes.

Segundo BATESON e PUNNETT citado por SNUSTAD e SIMMONS (2008:136) embora

tivessem uma explicao complicada para seus resultados, ela se demonstrou errada. A
explicao correcta que os genes para a cor da flor e tamanho do gro de plen esto
situados no mesmo cromossomo. Consequentemente, eles tendem viajar juntos na meiose.

F. P. Flores Vermelho Gro de Plen Longos x Flores Brancos Gro de Plen Pequenos
Genotipo Progenitores: RRLL x rrll

Gmetas: R ,L r,l

RL RL
rl RrLl RrLl
rl RrLl RrLl

Genotipo: 100% de RrLl

Fenotipo: 100% de flores vermelhas de gro de plen longo.

RL Rl rL rl

RL RRLL RRLl RrLL RrLl
Rl RRLl RRll RrLl Rrll
rL RrLL RrLl rrLL rrLl
rl RrLl Rrll rrLl rrll
RL--- Flores Vermelhas de Gro de Plen Longo ou 9/16;
Rl---- Flores Vermelhas de Gro de Plen Pequeno ou 3/16;
rL---- Flores Brancas de Gro de Plen Longo ou 3/16;
rl---- Flores Brancas de Gro de Plen Pequeno ou 1/16.

Frequncia de Recombinao como uma Medida de Intensidade de Ligao

Podemos usar a frequncia de recombinaro para medir a intensidade de ligao entre genes.
Genes que esto fortemente ligados raramente se recombinam, enquanto genes que esto
fracamente ligados recombinam-se com frequncia.
 56

O modo mais directo de estimar a frequncia de recombinao usar o cruzamento teste, no

qual o indivduo a ser analisado geneticamente cruzado com um homologo que conduz os
alelos recessivos (SNUSTAD e SIMMONS, 2008:136).

A ttulo de exemplo, as ervilhas heterozigotas da F1 discutidas podiam ser cruzadas com

homozigotos condutores de alelo recessivos dos genes para a cor das flores e tamanho dos
plenes. Podemos usar a prole deste cruzamento teste revelaria portanto que tipo de gmetas as
plantas da F1 produziram e em que propores.

Cada Fenotipo destacado por uma cor diferente no quadrado de Punnett. Este fenmeno no
aparecem em uma proporo 9:3:3:1 porque os genes para a cor da flor e o tamanho do plen
esto situados no mesmo cromossomo.

Nos gmetas da F1, esta ligao faz com que as combinaes parentais de alelos para a cor da
flor e tamanho do plen sejam mais frequentes que as combinaes no parentais-os
recombinantes.

RL RL
L RrLl RrLl
l RrLl RrLl

Da teremos a autofecundaco de modo a obter indivduos parentes e os recombinastes.

RL Rl rL rl

RL RRLL RRLl RrLL RrLl

Rl RRLl RRll RrLl Rrll
rL RrLL RrLl rrLL rrLl
rl RrLl Rrll rrLl rrll

RrLl Rrll rrLl rrll

450 42 38 470

80 Recombinantes

920 Parentais

n total de Recombinantes
F.R = n de Recombinantes + n total de parentais
 57

Entre uma prole de 1000 estudadas, 920 assemelhavam uma as outras com s linhagens
parentais, e as 80 restantes eram recombinantes produzidos pelas plantas herozigotas de F1
portanto 80/1000 = 0,08.

Para quaisquer dois genes, a frequncia de gmetas recombinantes nunca ultrapassa 50%. Este
limite superior alcanado quando os genes esto muito distantes, talvez nas extremidades
opostas de um cromossomo.

Crossing-over Como Base Fsica da Recombinao

Como resultado do crossing-over, so produzidos gmetas recombinantes entre cromossomos

homlogos. Este processo envolve uma troca fsica entre cromossomo.

O evento de troca ocorre durante a profase da primeira diviso meiotica, quando os

cromossomos duplicados formaram pares. Embora quatro cromtideos homologam estejam
presentes, formando o que chamado de uma ttrade, apenas duas cromtides fazem crossing
em um ponto determinado.

De acordo com SNUSTAD e SIMMONS (2008:138) diz que cada uma dessas cromtides
quebrada no ponto de crossing, e os pedaos resultantes renem se para produzirem
recombinantes.

As outras duas cromtides no se recombinam neste mesmo local. Cada evento de crossing
produz, portanto, duas cromtides recombinaste de um total de quatro.

Consequncias da Recombinao

Em organismos assexuados, genes so herdados juntos, ou ligados, j que eles no podem se

misturar com genes de outros organismos durante a reproduo. Por outro lado, a prole de
organismos sexuados contm uma mistura aleatria dos cromossomos de seus pais, que
produzida a partir da segregao cromossomicamente.

No processo relacionado de recombinao gnica, organismos sexuados podem trocar DNA

entre cromossomos homlogos nesses processos de embarrilamento. Podem permitir que
mesmo alelos prximos numa cadeia de DNA segreguem independentemente.

No entanto, como ocorre cerca de um evento de recombinao para cada milho de pares de
bases (em humanos), genes prximos num cromossomo geralmente no so separados, e
tendem a ser herdados juntos. Essa tendncia medida encontrando-se com qual frequncia
 58

dois alelos ocorrem juntos, medida chamada de desequilbrio de ligao. Um conjunto de

alelos que geralmente herdado em grupo chamado de hapltipo, e essa co-herana pode
indicar que o locus est sob seleco positiva.

As vantagens da Recombinao e do Sexo

O sexo no dos fenmenos mais fceis de explicar, pelo menos, no de um ponto de vista
evolutivo. Tudo isso exige grande esforo fsico, portanto, investimento energtico, alm de
poder tomar muito tempo e expor os animais a riscos que podem.

Simplesmente tomar suas vidas eliminado por completo as perspectivas de reproduo, seja
pela exposio a predadores, seja pelo conflito com outros conspecficos, no caso de disputas
entre indivduos por parceiras, ou seja por estresse imunolgico. Alm de tudo isso, o que se
consegue passar apenas metade do seu gene s geraes futuras.

Evidencias de que o crossing-over causa recombinao

Em 1931, Harriet Creighton e Barbara McClintock obtiveram evidncias de que a

recombinao gentica estava associada a uma troca de material entre cromossomos.
Creighton McClintock estudaram cromossomos homlogos em milho que eram
morfologicamente distinguveis. A meta era determinar se a troca fsica entre esses homlogos
estava correlacionada a recombinao entre alguns dos genes que eles levavam.

Duas formas de cromossomo 9 estavam disponveis para a anlise; uma era normal e a outra
tinha anomalias citolgicas em cada ponta, uma protuberncia em uma ponta e um pedao de
cromossomo diferente na outra. Estas duas formas de cromossomo 9 tambm eram
geneticamente marcadas para detectar recombinao. (SNUSTAD e SIMMONS, 2008:139).

Um gene marcador controla a colorao dos graus (C-colorido; c-incolor) e o outro a textura
do gro (Wx-amiloso; wx-gorduroso. Creighton McClintock fizeram o seguinte cruzamento
teste:
Fp: Gene de gro colorido e amiloso X um gene de gros incolores gorduroso.
G: CcWx X ccwx

g: CW, Cx, Wc, cx X cw, cx, cw, cx

 59

CW Cx Wc cx
cw CcWw Ccwx ccWw+ ccwx : Indivduos parentais: 9/16 =0,56 = 56%

cx CcWx Ccxx+ ccWx+ ccxx+ +: Indivduos recombinantes: 7/16 = 0,44 = 44%

cw CcWw Ccwx+ ccWw+ ccwx
cx CcWx Ccxx+ ccWx+ ccxx+

Eles ento examinaram a prole recombinante quanto a evidncia de troca entre duas formas
diferentes de cromossoma 9. Seus resultados mostraram que os recombinantes levaram um
cromossomo com apenas um dos marcadores citolgicos anormais; o outro marcador anormal
havia evidentemente sido perdido por uma troca com o cromossoma 9 normal.

O percentual de recombinao igual a distncia entre os genes medida em unidade

recombinante (U.R.), isto , quanto mais distantes esto os genes maior a chance de ocorrncia
de crossing-over, e consequentemente maior o percentual de recombinao gnica.

Consequncias da Recombinao

Em organismos assexuados, genes so herdados juntos, ou ligados, j que eles no podem se

misturar com genes de outros organismos durante a reproduo. Por outro lado, a prole de
organismos sexuados contm uma mistura aleatria dos cromossomos de seus pais, que
produzida a partir da segregao cromossmica.

No processo relacionado de recombinao gnica, organismos sexuados podem trocar ADN

entre cromossomos homlogos nesses processos de embarrilamento. Podem permitir que
mesmo alelos prximos numa cadeia de ADN segreguem independentemente. No entanto,
como ocorre cerca de um evento de recombinao para cada milho de pares de bases (em
humanos), genes prximos num cromossomo geralmente no so separados, e tendem a ser
herdados juntos.

Essa tendncia medida encontrando-se com tal frequncia dos alelos ocorrem juntos, medida
chamada de desequilbrio de ligao. Um conjunto de alelos que geralmente herdado em
grupo chamado de hapltipo, e essa co-herana pode indicar que o locus est sob seleo
positiva.

Crossing-over

O crossing-over consiste na troca de segmentos entre dois cromatdeos homlogos. S ocorre

entre um cromatdeo de um cromossoma e um do outro cromossoma mas homlogos nunca se
 60

faz entre dois cromatdeos do mesmo cromossoma, por esta razo diz-se que o crossing-over
ocorre entre cromatdeos homlogos porm no irmos envolvendo somente dois dos quatro
fios e ocorrendo em qualquer parte do cromossoma.

Uma fita de uma das molculas faz pareamento de bases com uma das fitas da outra molcula,
criando a juno alternativa (staggered joint),
usualmente chamada de juno heterodplex, entre as
duas diferentes hlices duplas. (SOARES, 1997:74).

Esta troca responsvel pela recombinao gentica

que tem como consequncia uma organizao dos
alelos entre os cromossomas homlogos. Os pontos do
cromossoma em que ocorre o crossing-over so
visveis durante a meiose e designam-se pontos de quiasma.

A recombinao gnica ocorre durante o processo de meiose, que consiste em um tipo

de diviso celular que acontece na fase de formao dos gametas tanto femininos quanto
masculinos (vulos e espermatozoides, respectivamente), conferindo a eles o nmero correto
de cromossomos. (http://www.infoescola.com/genetica/crossing-over/).

Aps a fertilizao, quando a gameta masculino se une ao feminino, cada um apresentar

somente a metade do nmero de cromossomos das demais clulas do organismo, pois se no
fosse assim, a clula fertilizada apresentaria mais cromossomos do que o normal.

No interior de duas clulas germinativas, os cromossomos homlogos ficam pareados. Durante

a compresso dos mesmos, pode haver um entrelaamento entre os cromatdeos homlogas
dos cromossomos, mas que no so irms, seguido de uma quebra os cromatdeos em
determinados pontos e troca de genes entre as mesmas. Aps a separao dos cromossomos,
cada um apresenta material gentico do outro, apresentando, deste modo, verses de genes
distintas da original. Uma vez que este processo ocorre somente com uma das cpias do
cromossoma, o grupo de informaes iniciais no completamente perdido, resultando em um
aumento de variabilidade.

O rastreamento dos movimentos dos genes durante o crossing-over permitiu que os

pesquisadores determinassem a distncia entre dois genes em um mesmo cromossomo. Uma
vez que as chances da roptura do cromossomo ocorrer entre dois genes que se encontram
distantes so menores, a probabilidade de que o gene permanea no cromossoma original so
maiores, enquanto o outro realiza o crossing-over.
 61

Deste modo, genes que se encontram mais distantes, apresentam maiores chances de ficarem
em cromossomos distintos, enquanto que genes que se encontram muito prximos apresentam
maior probabilidade de serem separados pelo crossing-over.

Os genes que durante o crossing-over tendem a permanecer juntos so chamados de ligados.

Este conhecimento til, pois um gene em um par ligado funciona como um marcador, que
pode ser utilizado por pesquisadores para inferir a presena de outro gene, como nos casos de
genes indutores de doenas. Este fenmeno (crossing-over) tambm pode ocorrer durante a
mitose, mas um fenmeno muito raro. Neste processo (mitose) o fenmeno mais comum a
troca de segmentos de ADN entre cromatdeos irmos durante as suas fases ou etapas.

Quiasma e a poca de Crossing-over

Segundo SADLER,T.W. (2001) Um quiasma um ponto de encontro entre os cromatdeos

mediante a diviso celular.

Na meiose I, cada cromossomo em uma clula replicado para produzir um cromatdeo irm
duplicada para cada membro dos cromossomos homlogos.

O contacto fsico entre os cromatdeos pode ocorrer,resultando na

formao de quiasma (do grego Kiasma=atravs).

Essa estrutura conforma-se nos cromossomas homlogos quando,

na meiose, parte do brao de cada cromossoma se quebra e recomposta no respectivo
homologo. O quiasma representa o processo de crossing-over e ocorre pelo menos uma vez por
par de cromossoma.

Deste modo um haplotipo parental (o arranjo de muitos alelos ao longo de um cromossoma)

nao permanecer intacto sobre a transmisso a um descendente, mas ao inves disso, se tornar
uma nova combinao dos haplotipos originais maternos e paternos. Aps este processo de
crossing-over, pelo menos dois dos quatro cromatdeos tornam-se nicos.

Essas translocaes ou permutaes ocorrem durante a meiose I da diviso celular, na fase de

prfase I, mas precisamente na subfase paquteno, momento de maior aproximao (quiasma)
entre cromossomos homlogos pareados, em que os braos de ambos se cruzam havendo
intercmbio de segmentos allicos.
 62

Crossing-over como medida da distncia gentica

A segunda lei de Mendel vlida quando estudamos dois ou mais pares de genes que esto
situados em cromossomos homlogos diferentes. Porm, a segunda lei de Mendel no se
aplica a pares de genes situados no mesmo par de cromossomos homlogos, pois esses genes
no tero segregao independente. Genes presentes no mesmo cromossomo tendem a
permanecer juntos durante a formao dos gmetas.

Essa explicao foi dada por Morgan, em 1910, e chamado linkage ou vinculao. Morgan
sups que a tendncia de os genes vinculados conservarem suas combinaes originais era
devida a se encontrarem ligados no mesmo cromossomo.

A frequncia de recombinao de um par de genes ligados , em condies uniformes do

ambiente, constante e caracterstica de cada par de genes. Morgan emitiu a hiptese (1911) de
que a intensidade do linkage de um par de genes isto , a frequncia de recombinaes
observadas depende da distncia entre estes genes no cromossomo.

Os genes muito prximos um do outro, no mesmo cromossomo, estaro fortemente ligados e

no apresentaro recombinao; isso chamado de ligao completa. Entretanto, genes
ligados nem sempre ficam juntos, devido ao fato que as cromtides homlogas poderem trocar
pedaos entre si (fenmeno conhecido como crossing-over ou permutao) durante a prfase
I da meiose. Quanto maior for essa distncia, mais provvel ser, em geral, que ocorra
recombinao entre os dois genes; a isso chamamos de ligao incompleta.

O crossing-over depende da sobreposio e da troca de pedaos entre as cromtides

homlogas. Isso pode ocorre com igual probabilidade em qualquer ponto do cromossomo.
Ento, pode-se deduzir que quanto mais distantes estiverem dois genes no cromossomo, maior
a probabilidade de que ocorra um crossing-over entre eles. Por outro lado, quanto mais
prximos estiverem os genes no cromossomo, menor a probabilidade de que haja um crossing-
over entre eles, o que acaba diminuindo a formao de gmetas recombinantes.
(http://www.brasilescola. com/biologia/genes-ligados.htm).

Mapeamento de recombinao com um cruzamento de teste de dois pontos

a anlise de 2 loci, cada um deles segregando 2 alelos, por exemplo, em Drosfila, o gene
recessivo band (bn) causa uma barra transversa no trax, e o detached (det) controla a
existncia de uma ligao entre duas nervuras longitudinais da asa.
 63

Loci o plural de locus, que significa lugar. uma palavra do latim usada em textos de
gentica para o local do cromossomo que contm um gene.

Uma mosca com o corpo bandeado e com asas com nervuras desconectadas cruzada com
uma mosca com o fentipo selvagem, ou seja, o normal para estas duas caractersticas. O
resultado uma F1 Dihbrida onde as fmeas desta F1 so ento cruzadas com machos duplos
homozigotos recessivos para estes dois genes, ou seja, o conhecido cruzamento teste feito
por Mendel. Se a segregao dos genes fosse independente, quatro tipos fenotpicos seriam
esperados nas propores de 1:1:1:1. Entretanto, em 1.000 moscas avaliadas, foram observadas
2:483:512:3, ou seja, longe do esperado de 250:250:250:250. O que chama a ateno que nas
moscas avaliadas, a primeira e a ltima categoria parecem equivalentes, assim como tambm
so as do meio. As categorias mais numerosas, ou seja, as do meio possuem o mesmo fentipo
dos parentais (P1) usados no incio dos cruzamentos, e por isto chamados de parentais ou
no recombinantes. As prognies obtidas em menor proporo so diferentes porque exibem
as caractersticas de ambos os parentais envolvidos e por isto so chamadas de no parentais
ou recombinantes.

A explicao seria que os loci bn e det esto muito prximos uns dos outros e no mesmo
cromossomo. Como consequncia, muitos deles acabam se comportando como ligados e
movem-se juntos durante a meiose, diminuindo ento a frequncia de recombinantes.
Sturtevant sugeriu ento, que a frequncia de recombinantes (expressa em percentagem) seria
proporcional distncia fsica entre os genes, e a chamou de Centimorgan (abreviado como
cM em homenagem ao seu orientador Thomas Hunt Morgan). Como sinnimo a Centimorgan
tem-se usado unidade de mapa (abreviao u.m.). No caso ilustrado, 99,5% dos indivduos
obtidos eram de fentipos parentais e 5% de recombinantes, ou seja, bn e det, teriam uma
distncia entre si de 5 cM ou 5 u.m., que devem ter sido decorrentes de um crossing over de
cromossomos homlogos durante a meiose.

O arranjo dos alelos bn e det

no dihbrido mostrado na
tabela acima, chamado de
configurao trans (trans
significa cruzado) ou seja em cada cromossomo o alelo mutante est ligado a um selvagem.
Alternativamente tem-se a configurao cis ou seja, cada cromossomo carrega dois alelos
mutantes ou dois alelos selvagens. A configurao trans tambm referida como repulso
a cis como pareada.
 64

Quanto a configurao ou arranjo

dos alelos nos cromossomos eles
podem ser: cis (ou pareados) quando
ambos os selvagens ou ambos os
recessivos se encontram em um mesmo cromossomo; trans (ou em repulso) quando se tem
um selvagem e um recessivo no mesmo cromossomo (GRIFFITHS et all, 2002:428).

Esta primeira explicao serve para determinar a distncia relativa entre dois locus, mas para a
construo de um mapa, necessrio definir a relao de cada um dos loci em relao a outros
loci.

Assim, mapa gentico ou cromossmico a representao da posio dos genes no

cromossomo. Este, est diretamente relacionada a taxa de crossing.

Unidades de Recombinao (U.R.) ou Morgandeos (M) so as unidades usadas para

determinar a posio dos genes no cromossomo e correspondem a taxa de crossing.

Exemplo: Em um cromossomo h a seguinte frequncia de recombinao entre os genes

A,B,C e D: A-B 45% A-C 20% C-B 25% B-D 5% C-D 20% A-D
40% - Qual a posio dos genes no cromossomo?

Se as taxas de crossing-over que ocorrem

entre dois determinados genes refletem a
maior ou menor distncia entre eles no
cromossomo, convencionou-se que 1% do
nmero de gametas recombinantes indica a
distncia de uma unidade de recombinao (U.R.) ou um morgandeo (homenagem a Thomas
Morgan) entre os genes, no mapa gentico. Em outras palavras, a taxa de recombinao reflete
diretamente a distncia entre os loci gnicos no cromossomo.

Frequncia de recombinao ou permuta e distancia gentica

Considere como frequncia de permuta entre dois

genes a porcentagem de gametas recombinantes.

No esquema abaixo, a frequncia de permutao

de 10%.
 65

Determinao da frequncia ou taxa de permutao

Determina-se a frequncia de permutao por meio dos resultados obtidos num cruzamento-
teste (AB/ab x ab/ab), como exemplifica-se a seguir:

Frequncia de permutao = 100 ou seja:

98+102
Frequncia de permutao = 100 = 10%
2000

Construo de mapas genticos ou cromossmicos

Construir um mapa gentico determinar a posio relativa dos genes no cromossomo. Para
tanto, partimos de dois princpios bsicos.

1. Os genes dispem-se linearmente ao longo dos cromossomos.

2. A permutao ocorre em qualquer ponto do cromossomo e, por tanto, quanto maior a

distncia entre dois genes, maior ser a probabilidade de ocorrer permuta entre eles; por outro
lado, entre genes prximos diminui a probabilidade de permuta.

Convencionou-se que a frequncia de permuta entre dois genes igual distncia que os
separa no cromossomo.

Assim, por exemplo, se a percentagem (frequncia) de permuta entre dois genes for de 10%,
eles distaro de 10 unidades no mapa gentico. A citada unidade foi chamada de morgandeo,
em home nagem a Morgan, principal responsvel por tais conceitos.

Exemplos prticos: Os genes A, B, C e D esto situados no mesmo cromossomo e permutam,

entre si, com as seguintes frequncias de permuta: A e B 16%, B e C 8%;
A e D 10%; D e C 14% e B e D 6% .
A partir desta tabela,
constri-se o seguinte mapa
cromossmico:
 66

Mapeamento Cromossmico

Mapeamento cromossmico uma metodologia baseada nas estimativas de frequncias de

gmetas recombinantes vai fazendo alinhar os loci em cada grupo de ligao
(Hppt.wikipedia.org/wiki/mapeamentocromossomico).

uma experincia tpica de mapeamento que envolve trs loci ligados para a medio de duas
taxas de recombinao, e o testcross aos tri-hbridos da F1, havendo dois passos na anlise dos
resultados na F2:

i) Determinar qual a ordem dos loci (por exemplo, XYZ)

ii) Medir as duas distncias intercalares (de X para Y e de Y para Z).
Exemplo
P FFggHH ffGGhh
G FgH fGh
F1 (hapltipos) FgH / fGh ffgghh
F2 (fentipos esperados) FgH FGH FGh Fgh
fGh fgh fgH fGH

Repare-se que cada coluna da F2 representa duas populaes de gmetas da F1 que so

produtos complementares do mesmo tipo de meiose, e pela 1 lei de Mendel as suas
frequncias esperam-se iguais entre si. A primeira coluna corresponde aos hapltipos da F1,
e conter por isso o par mais frequente. Em contrapartida, o par menos frequnte ser aquele
que resulta da dupla recombinao, isto , de um crossover em cada um dos dois segmentos
em estudo. Introduzindo frequncias hipotticas na F2:

F2 (N=1200) FgH 520 FGH 9 FGh 0 Fgh 81

fGh 502 fgh 12 fgH 0 fGH 76

H um par que no aparece, presumivelmente porque a dimenso da amostra no era

suficiente para revelar os eventos de recombinao dupla, mas isso s se comprova
aumentando-a numa repetio desta experincia (por exemplo para 12000 indivduos na F2).
Entretanto, vai partir-se dessa hiptese (o par ausente seriam os duplos recombinantes) para
identificar a ordem dos loci: o que h de comum entre os hapltipos parentais e os supostos
duplos recombinantes o arranjo em repulso gH / Gh, indicativo que so estes dois loci
que se encontram nas extremidades do segmento cromossmico em estudo, donde
G F H
 67

Cada classe dupla-recombinante resulta se haver um

crossing-over num dos segmentos e outro crossing-
over no outro segmento, restabelecendo os hapltipos
da F1 para as extremidades, com o rearranjo dos genes
centrais:
Tendo assim determinado o arranjo dos loci, h apenas que efectuar o clculo das duas
distncias, GF e FH:

rGF = (9 + 12 + 0 + 0) / 1200 = 1, 75% rFH = (81 + 76 + 0 + 0) / 1200 13,08%

Os duplos recombinantes, se os houvesse, entrariam em ambos os clculos. O mapa fica

assim:

1,75 13,08
G F H

A unidade de mapa o centiMorgan (cM), correspondendo 1 cM a 1% de taxa de

recombinao.

Tendo estes dados, talvez seja de admirar que no houvesse duplos recombinantes, pois no
conjunto das duas classes esperar-se-iam NrGFrFH 2,75 indivduos.

Embora se possam invocar os acasos da amostragem (a distribuio de Poisson prev a

probabilidade de e2,75 0,064 para 0 ocorrncias), sabe-se que em regra os duplos
recombinantes ocorrem abaixo da expectativa devido a um fenmeno de que pode ser
entendido da seguinte forma: se houver um crossover num dos segmentos, por exemplo no
F H, ento torna-se "menos provvel" que haja, na mesma clula, tambm um crossover
no outro segmento (G F).

Frequncia de Quiasmas e Distncia gentica de mapa

A recombinao entre marcadores genticos um resultado do Crossing-Over. O outro a

formao de Quiasmas durante a profase 1 da meiose. Cada Quiasma tido como
representante da resoluo de um crossing que ocorreu no inicio da profase.

Assim, contando os Quiasmas, somos capazes de estimar a ocorrncia do nmero mdio de

crossings em um cromossoma, o que podemos ento usar como uma estimativa do tamanho de
mapa gentico.
 68

Segundo AMABIS e MARTHO (2004:190) Quiasma (do grego: chiasma, cruzadas, em

forma de X). Os Quiasmas so a evidncia visual da permutao; no ponto em a permutao
ocorreu, as cromtides permutadas ficam cruzadas, dando origem ao Quiasma.

Suponhamos por exemplo que, em um grupo de 100 clulas que passam pela meiose, 5 clulas
apresenta 5 Quiasmas em um determinado par de cromossomas, 15 mostram 4 Quiasmas nesse
par, 15 mostram 3, 30 mostram 2, 25 mostram 1 e 10 no mostram nenhum.

Por clulas, o nmero mdio de quiasmas neste par de cromossomas 2.25. Isto significa uma
media de 1,07 Quiasmas por cromtideo, No de No de clulas
Produto (A x B)
porque cada quiasma afecta, apenas 2 das Quiasmas (A) observadas (B)
4 cromatides no par de cromossomas. 5 5 25
4 15 60
Assim, no trmino da meiose, o nmero 3 15 45
mdio de crossing por cromatide ser de 2 30 60

1.07. isto significa que tamanho gentico 1 25 25

0 10 0
desse cromossoma de 1.07 M, ou 107
100 215
cM. Se uma media de 2,15 quiasma
equivalente a 107 cm, ento uma media de um quiasma equivalente a 107/2,15 = 50Cm
(SNUSTAD e SIMMONS:2008:147).

Nmero mdio de Quiasma por clulas = 215/100=2,15

Nmero mdio de Quiasmas por cromtide = 2,15/2=1,07

Tamanho gentico de cromossoma = 1,07 Morgans = 107 centiMorgans (cM)

Relao entre tamanho gentico e nmero mdio de Quiasma = 107cM/2,15 Quiasmas= 50

cM/Quiasmas

Em geral, podemos concluir que em mdia cada quiasma corresponde a 50 cM no mapa

gentico.

Distncia gentica de mapa

Os procedimentos para medir a distncia gentica e construir mapas de recombinao, so

baseados na incidncia de crossing-over entre cromossomas pareados. Assim, esperamos que
cromossomas mais grandes tenham mais crossings que os pequenos e que essa correlao se
reflicta nos tamanhos de seus mapas genticos.
 69

Na maior parte, nossa suposio verdadeira, entretanto, dentro de um cromossoma algumas

regies so mais propensas as crossing do que outras. Assim, as distancias no mapa gentico
no corresponde exactamente s distncias fsicas ao longo do mapa citolgico.

O crossig-over ocorre menos provavelmente perto das pontas de um cromossoma e ao redor do

centrmero. Consequentemente, tais regies, estas causadas no mapa gentico. Outras regies,
nas quais crossing ocorre mais frequentemente, esto expandidas.

Muito embora no exista uma relao uniforme entre distncias genticas e fsicas, os mapas
genticos e citolgicos de um cromossoma so colineares; isto , stios particulares tm a
mesma ordem. O mapeamento de recombinao revela portanto, a ordem verdadeira dos genes
ao longo de um cromossoma. Entretanto, ele no nos diz as distncias fsicas reais entre eles.

Mapeamento Citogentico

Na ptica DE ROBERTIS e HIB (2006:323) citogentica uma cincia estuda as bases

cromossomicas e molculas da hereditariedade e ajuda resolver importantes problemas no
campo de medicina, da pecuria e da agricultura.

Citogenetica uma cincia que estuda a estruturas da gentica da clula atravs dos
cromossomas. Cromossomas so estruturas formadas durante a diviso celular que levam a
informao gentica de um indivduo.

O mapeamento de recombinao permite-nos determinar as posies relativas dos genes

usando a frequncia de crossing como medida de distncia. Entretanto, isto no nos permite
localizar os genes com relao a marcos citolgicos, tais como bandas, em cromossomas.

Este tipo de localizao requer um procedimento diferente que envolve estudar os efeitos
fenotipicos rearranjos cromosssmicos, tais como delees e duplicaes. Como tais tipos de
rearranjos podem ser reconhecidos citologicamente, seus efeitos fenotipicos podem ser
correlacionados com regies particulares ao longo do tamanho de um cromossoma.

De acordo SNUSTAD e SIMMONS (2006:147), mapeamento citogentica so efeitos

fenotpicos podem estar associados a genes que j foram posicionados em um mapa de
recombinao. Ento as posies de mapa desses genes podem ser associadas a locais no
mapa citolgico de um cromossoma.

Foi bem desenvolvido em gentico de Drosophila, onde os grandes cromossomas politnicos

bandeados fornecem aos pesquisadores mapas citolgicos extraordinariamente detalhados.
 70

Mapeamento gnico por frequncia de recombinao

Na ptica de GUERRA (2000:67), a distncia entre dois locos definida pela frequncia de
recombinao entre eles. Para facilidade de trabalho, convencionou-se que a distancia entre
dois locos, que a carreta uma frequncia de recombinao de 1%, seria dita de uma unidade
mapa (um) .

A maior frequncia de recombinao entre dois locos ligados, possveis de ser detectada,
sempre inferior a 50%. Isso se deve ao facto de que genes separados por distncia igual ou a
superior a 50 um se segregam como gene no ligados.

Por exemplo, um duplo heterozigotico AaBb formar 50% de gmetas AB e ab (25% de cada)
e 50% Ab e aB (25% de cada) se os locos estiverem ligados a uma distncia igual ou superior a
50 unidade mapa ou esses locos estiverem em cromossomas diferentes.

Os cruzamentos realizados para observar a frequncia de recombinao envolvem sempre um

heterozigotico e o homozigotico recessivo para os mesmos genes. Isso porque utilizando um
homozigotico recessivo, os genes dele no interferir na expresso fenotipica dos genes
contidos nos gmetas dos heterozigoticos (GUERRA, 2000:67).

Veja no esquema os tipos gmetas de gentipos e fentipos que um duplo-heterozigotico e um

duplo- homozigotico produzem. Observa que devido ao homozigotico recessivo, o fentipo de
cada indivduo exactamente igual gentipo do gmeta doado pelo heterozigotico.

Clculo da distncia genica nesse

caso muito simples. Num
cruzamento do tipo
esquematizado abaixo se na
descendncia tivermos por
exemplo, 41 indivduos AB,
41ab, 9 Ab e 9 aB, diramos que
a frequncia de recombinantes
de 18% (9 Ab + 9 aB num total
de 100 indivduos). Portanto, a distncia entre os locos A e B seria de 18 unidade mapa.
 71

Determinao de frequncia de genes de recombinao

Na viso de GUERRA (2000:68), para fazer mapeamento necessrio conhecer no apenas

a distncia entre os locos, mas tambm a posio relativas de todos os locos no cromossoma.
Para isso, a maneira mais eficiente consiste na utilizao do chamado de teste de trs pontos,
o qual permite ao mesmo tempo calcular a distncia de trs locos e dizer em que ordens estes
se encontram no cromossoma.

No teste dos trs pontos, cruzam-se um triplo-heterozigotico dominante com um triplo

heterozigotico recessivo. Na descendncia vai encontrar uma classe de no-recombinante, uma
classe de recombinante simples onde o quiasma ocorre entre primeiro e segundo loco, outra
classe de recombinantes simples, com o quiasma incidindo entre o segundo e terceiro loco e
uma classe de duplo-recombinantes em que ocorre um quiasma entre cada dois desses locos.
Veja o esquema ao lado:

Para a anlise desse esquema, devemos considerar os seguintes pontos:

As classes acima so reconhecidas pelas frequncias que apresentam, sendo sempre a

classe mais frequente de no-recombinantes, a classe menos frequente de duplo-
recombinantes e as duas classes intermedirias as que apresentam recombinante
simples.
Os que no-recombinantes tm os genes ordenados em seus cromossomas exactamente
como estavam no pai heterozigtico. Isso quer dizer que se os genes do pai
heterozigtico estiverem em cis (ABC/abc) ou em trans (AbC/aBc, Abc/aBc, ABc/abC)
eles sero evidenciados por esta classe.
As duas classes com recombinaes simples so reconhecidas basicamente pela
combinao de caracteres que apresentam. No caso acima, claro que Abc e aBC so
derivados de um mesmo conjunto de quiasma e portanto constituem ambos uma nica
classe. O mesmo pode ser dito para abC e ABc.
Os duplo-recombinantes permitem identificar a ordem (ABC, ABC ou BAC) correcta
dos genes.
O clculo das distncias entre cada dois locos obtido pela soma de frequncia de
recombinantes simples para esses dois locos mais a frequncia de duplo-recombinantes.
Isso porque nesses ltimos est tambm includo recombinantes para os locos em
estudo.
 72

Localizao de Genes Usando-se Delees e Duplicaes

Na viso de GUERRA (2000:103) deleo ou deficincia entende-se a perda de um pedao

qualquer do cromossoma, que no inclua o centrmero (a perda de centrmero levaria a uma
monossomia) .

A deleo pode ser terminal ou intercalar (tambm chamada intersticial). A terminal, apesar de
mais simples, porque envolve a penas uma quebra do cromossoma, muito rara. As delees
so conhecidas em muitos organismos, principalmente no estado de heterozigotico, onde
menos prejudicial. No homem, o exemplo mais conhecido deleo de parte de brao do curto
do cromossoma cinco (5), que a correcta a sndrome do cri du char.

Os produtores dessa sndrome se caracterizam por apresentar um choro semelhante ao miado

do gato.

O processo espontneo de deleo deve incluir duas quebras para a sada do segmento do
meio. Caso as duas extremidades criadas se juntem e uma delas possua o centrmero ser
criado um cromossoma de tamanho reduzido, e esse ser dito carregador de uma deleo,
(JORGE, 2002:5).

O fragmento deletado cntrico (no possui centrmero), consequentemente imvel e ser

perdido. Um mutgeno eficiente para causar delees a radiao ionizante, que altamente
energtica e causa quebras cromossomas. A forma como a quebra se religa determina o tipo de
rearranjo produzido. Dois tipos de delees so possveis:

1. Duas quebras podem produzir uma deleo intersticial;

2. A princpio, uma quebra pode causar uma
deleo terminal, mas devido necessidade
dos telmeros mais provvel que as
delees terminais incluam duas quebras,
sendo uma dela prxima ao telmero.

Os efeitos das delees dependem de seu tamanho. Uma deleo pequena dentro de um gene,
chamada deleo intragnica, inativa apenas aquele gene, tendo o mesmo efeito de qualquer
outra mutao que anulasse o gene. No entanto, as delees intragnicas normalmente no so
reversveis, e essa caracterstica usada para distingui-las das outras mutaes.
 73

Delees multignicas so aquelas que removem de dois a alguns milhares de genes e tm

conseqncias muito severas. Atravs de autofecundao podem ser originados zigotos
homozigotos para essa deleo, mas quase sempre isso letal. Isso mostra como a maioria das
regies dos cromossomos essencial para a viabilidade normal e a eliminao de qualquer
segmento do genoma deletrio. At mesmo indivduos heterozigotos para a deleo
multignica podem no sobreviver. Existem diversos motivos para essa falha, dentre elas se
destacam:

Existe uma regulao fina da expresso gnica e as delees que atrapalham esse
balano;
O genoma possui uma vasta gama de alelos recessivos letais que normalmente esto
escondidos graas aos genes normais presentes nos cromossomas homlogos. Caso
haja a deleo de algum desses genes normais o alelo letal deixa de ter seu efeito
sobreposto.

Tambm podemos usar duplicaes para determinar a localizao citolgico dos genes. O
procedimento similar ao que usa delees, exceo de que procuramos uma duplicao que
mascara o fentipo de uma mutao recessiva.

Delees e duplicaes tm sido extraordinariamente teis na localizao de gene em mapas

citogenetica de cromossomas Drosophila.

O princpio bsico no mapeamento de deleo que em uma deleo que revela uma mutao
recessiva deve faltar uma cpia do tipo selvagem do gene mutante. O facto localiza esse gene
dentro dos limites da deleo.

Duplicaes

Na perspectiva de GUERRA (2000:103), afirma que duplicao a repetio anormal de um

segmento cromossomca qualquer. O segmento duplicado poder estar no mesmo cromossoma
em tandem, em outo ponto qualquer do cromossoma, ou ainda em outro cromossoma.

O processo de mutao cromossomca s vezes produz uma cpia extra de alguma regio do
cromossoma. As regies duplicadas podem estar localizadas adjacentes uma outra ou uma
das regies duplicadas pode estar em sua regio normal e a outra em alguma outra parte do
cromossoma ou at mesmo de um cromossoma diferente. Em um organismo diplide, o
conjunto de cromossomas contendo uma duplicao normalmente est associado a um
 74

conjunto de cromossomas sem a duplicao, as clulas de tal organismo tero ento trs cpias
da regio do cromossoma em questo.

Os heterozigotos para duplicaes apresentam estruturas de pareamento interessantes durante a

meiose. A estrutura formada depende do tipo de duplicao.

O presente exemplo poder considerar-

se apenas duplicaes adjacentes: A B C
B C D; ou reversa como no exemplo: A
B C C B D. Diferentes tipos de
pareamento so demonstrados na figura
ao lado:

A regio extra de uma duplicao est livre para sofrer mutaes genticas porque as funes
bsicas necessrias da regio sero realizadas pela outra cpia. Mutao na regio extra uma
oportunidade para divergncia na funo dos genes duplicados, o que pode ser vantajoso na
evoluo do genoma.

Duplicaes tandem so raras em humanos. A maioria das duplicaes consiste em um brao

ou um pedao de brao extra, geralmente associado a um cromossomo no homlogo.
Diferentemente das delees, duplicaes no revelam genes letais recessivos, sendo assim, as
anormalidades ligadas s duplicaes esto associadas a uma quebra no balano de expresso
gnica devido cpia extra da regio. Em geral, duplicaes so difceis de detectar e raras, no
entanto so um mecanismo muito til para a evoluo, (JORGE, 2002:6).

O princpio bsico no mapeamento de duplicao que duplicao que encobre uma

mutao recessiva deve conter uma cpia do tipo selvagem do gene mutante. Este facto
localiza dentro do gene dos limites da duplicao.

Origem e caracterizao citologica das delees e duplicaes

As delecoes podem se originar simplesmente por quebra e eliminao cromossomicas. Alm

disso delees e duplicaes podem se originar simplesmente como consequncia de dois tipos
de distrbios mitticos:

1. Pareamento metico incorrecto, seguido de permutao desigual.

2. Distribuio desigual da cromatina, como consequncia de translocao ou inverses.
 75

Em alguns casos, o fentipo observa-se que indivduos que j possuem uma duplicao tm
uma chance maior que os normais de
sofrerem outra duplicao de um
segmento de DNA maior a chance de ele
efectivar um pareamento errado e, com
isso, aumentar ao seu nvel de
Fonte: (GUERRA, 2000:104)
repetitividade.

A identificao citologica dessas alteraes pode ser feita pela anlise dos mercadores
cromosssmicos (bandas, faixas, alo, mdulos), pela medio da extenso de cromossomas
mitticas e pela anlise dos paquitnicos heterozigotos para duplicao ou deleo. Se houve
uma deleo intercalar, a bivalente heterozigotico ser mais curto e formar uma ala no
homlogo normal, permitindo o pareamento de todo o cromossoma.

Fonte: (GUERRA, 2000: 104)

A duplicao intercalar formar uma figura semelhante, embora a bivalente no altera o

tamanho e a ala se forme homologo com duplicao. As configuraes meticos no caso
delees ou duplicaes terminais so fceis de serem reduzidas.

Delees ou duplicao muito curtas podem no ser detectada na meiose. Nesse caso, a
abordagem mais segura a anlise dos politnicos. No heterozigotico, o politenico aparece
assimtrico nessa regio mas no altera o pareamento das demais faixas.

Significado evolutivo das delees e duplicaes

Nas aneuploidias, a carncia de um segmento cromossomca mais prejudicial que um

segmento e excesso. No homem conhecido um nmeros de duplicaes (ou trissomias
parciais) muito superior ao de delees (monossomias parciais). Por outro lado, a duplicao
parece ter desempenhado um papel ainda mais importante na evoluo, como fonte de matria-
prima para a formao dos novos genes. Teoricamente, as espcies poderiam aumentar a sua
qualidade de informaes genticas duas maneiras:

1. Por mutaes de DNA no codificante.

 76

2. Por duplicao gnica seguida de mutao

Crossing-over como medida da distncia gentica

Morgan em 1910, sups que a tendncia de os genes vinculados conservarem suas

combinaes originais era devida a se encontrarem ligados no mesmo cromossomo.

Alm disso, emitiu a ideia bsica de que o grau ou fora de ligao depende da distncia que
separa os genes vinculados no cromossomo. A partir disso evoluiu a teoria da disposio
linear dos genes nos cromossomos e depois partiu-se para a elaborao dos mapas genticos
ou dos genes ligados aos cromossomos.

A frequncia de recombinao de um par de genes ligados , em condies uniformes do

ambiente, constante e caracterstica de cada par de genes. Morgan emitiu a hiptese (1911) de
que a intensidade do linkage de um par de genes isto , a frequncia de recombinaes
observadas depende da distncia entre estes genes no cromossomo.

Os genes muito prximos um do outro, no mesmo cromossomo, estaro fortemente ligados e

no apresentaro recombinao; isso chamado de ligao completa. Entretanto, genes
ligados nem sempre ficam juntos, devido ao fato que as cromtides homlogas poderem trocar
pedaos entre si (fenmeno conhecido como crossing-over ou permutao) durante a prfase
I da meiose. Quanto maior for essa distncia, mais provvel ser, em geral, que ocorra
recombinao entre os dois genes; a isso chamamos de ligao incompleta.

O crossing-over depende da sobreposio e da troca de pedaos entre as cromtides

homlogas. Isso pode ocorre com igual probabilidade em qualquer ponto do cromossomo.
Ento, pode-se deduzir que quanto mais distantes estiverem dois genes no cromossomo, maior
a probabilidade de que ocorra um crossing-over entre eles. Por outro lado, quanto mais
prximos estiverem os genes no cromossomo, menor a probabilidade de que haja um crossing-
over entre eles, o que acaba diminuindo a formao de gmetas recombinantes.

Anlise de Ligao em Humanos

Na perspectiva de SNUSTAD e SIMMONS (2008:150) as anlises de heredrograma e as

tcnicas de cultura de clulas, fornecem meios para localizar genes em cromossomas
humanos.
 77

Para detectar e analisar a ligao em humanos os geneticistas devem colectar dados dos
heredrogramas. Geralmente esses dados so limitados ou incompletos, ou as informaes que
eles do so ambguas.

Os estudos clssicos de ligao em humanos enfocavam heredrogramas nas quais erra possvel
seguir a herana de dois ou mais genes simultaneamente. Hoje em dia, mtodos moleculares
modernos permitem que os pesquisadores analisem a herana de dzias de marcadores
diferentes no mesmo conjunto de heredrograma. Essa anlise de loci mltiplos aumentou
muito a capacidade de detectar ligaes e construir mapas cromossomicos detalhados.

Alem disso as inovaes em citogenetica e tcnica de cultura de clulas permitiram que os

geneticistas liguem esses mapas a cromossomas individuais e localizem os genes em regies
especficas dentro deles.

Detectando loci ligado por anlise de heredogramas

As relaes de ligao que so mais fceis de estudar em seres humanos so aquelas entre
genes no cromossomo X. Tais genes seguem um padro de herana que prontamente
identificado. Se dois genes apresentam este padro, eles devem estar ligados. A determinao
da ligao entre genes autossmicos muito mais difcil (SNUSTAD e SIMMONS,
2008:150).

O genoma humano tem 22 autossomos diferentes, e um gene que no apresente ligao ao X

pode estar em qualquer um deles. Em qual autossomo est o gene, que outros genes esto
ligados a ele e quais so as posies de mapa desses genes. Estas so perguntas desafiadoras
para o geneticista humano.

O estudo de Renwick e Lawler dos loci NPS1 e ABO estabeleceu que estes dois genes esto
ligados, mais no podem identificar o autossomos especifico que os levava. A primeira
localizao de um gene em um autossomo humano especifico veio em 1968, quando R. P.
Donahue e colaboradores demostraram que o locus do grupo sanguneo Duffy, chamado FY,
esta no cromossomo 1. Esta demostrao levou a descoberta de uma variante do cromossomo 1
que era maior que o normal.

A anlise de heredogramas mostrou que em determinada famlia esse longo cromossomo

segregou com alelos FY especficos. Assim o locus FY foi situado no cromossomo 1. Pesquisas
subsequentes colocaram este locus na regio 1p31 deste cromossomo. Usando-se tcnicas
 78

diferentes, os loci NPS1 e ABO foram situados perto da ponta do brao longo do cromossomo
9.

At o incio dos 1980, o progresso no mapeamento gnico humano foi extremamente lento
porque era difcil encontrar heredogramas que segregavam marcadores ligados, por exemplo,
duas doenas diferentes.

Tcnicas de clulas somticas para situar genes em cromossomos

De acordo com SNUSTAD e SIMMONS (2008:152), A anlise de dados recombinantes de

heredogramas permite que geneticistas construam mapas de ligao de cromossomos.
Entretanto, excepto no caso da ligao ao X, esta anlise no nos diz qual cromossomo esta
sendo mapeado.

At aos anos 1970, associao de mapas de ligao e genes individuais cromossomos

humanos era uma tarefa extremamente difcil. Dois avanos tcnicos tornaram esta tarefa mais
fcil:

Novos corantes permitam que cromossomos individuais fossem distinguidos dentro das
clulas;
Os pesquisadores descobriram modos de cultivar clulas somticas que foram formadas
pela fuso de clulas de espcies diferentes.

Embora tais hbridos de tais clulas somticas possam parecer irrelevantes para o problema de
situar genes em cromossomos, eles deram aos pesquisadores um modo de testar cromossomos
humanos individuais quanto a presena de determinados genes.

Os procedimentos para produzir hbridos de clulas somticas foram desenvolvidos por G.

Barski e B. Ephrussi nos anos 1960.

Hoje, clulas hibridas so formadas misturando-se clulas humanas com clulas de outro
animal, geralmente um roedor tal como camundongo ou hamster.

Na optica de SNUSTAD e SIMMONS (2008:152) As clulas so misturadas em cultura na

presena de polietilenoglicol, uma substancia qumica que induz a fuso de membranas
celulares.
 79

Se uma clula humana se funde com uma clula de roedor, a clula resultante ter
cromossomos de ambas as espcies. Entretanto, quando tal clula se divide, os cromossomos
humanos so aleatoriamente perdidos.

Aps muitos ciclos de diviso, o contedo cromossmico de clulas cultivadas se estabilizam.

Nesse ponto, cada clula tem um complemento total de cromossomos de roedor e uma amostra
aleatria de cromossomos humanos. Outra diviso de uma clula particular ir produzir uma
linhagem que leva um conjunto caracterstico de cromossomos humanos.

Por exemplo, os cromossomos 8, 13 e 17. Outra linhagem celular pode conter os cromossomos
humanos 2, 6, 19 e 22. As clulas hibridas com apenas alguns cromossomos humanos podem
ser usadas para localizar um gene humano.

Um problema com este procedimento que ocorre fuso entre clulas da mesma espcie bem
como entre clulas de espcies diferentes. Para selecionar clulas hibridas interespecficas, os
pesquisadores cultivaram misturas de clulas em um meio no qual apenas clulas hibridas
sobrevivem.

Alm de materiais nutritivos, o meio preferido continha trs substncias qumicas como: a
bipoxantina, a aminopterina e a timidina. Consequentemente, ele chamado de meio HAT.
Este meio impede o crescimento de clulas com alguns tipos de defeitos bioqumicos. Em
particular, as clulas deficientes em uma das enzimas timidina-cinase (TK) ou hipoxantina-
fosforribosiltransferase (HPRT) no podem crescer em meio HAT.

Assim, clulas humanas que so TK- (deficientes em timidina-cinase) e clulas de

camundongo que so HPRT- (deficiente de hipoxantina-fosforrilbosiltransferase) so colocadas
em meio HAT, nenhum dos tipos crescer. Entretanto, se os dois tipos de clulas se fundem, as
hibridas resultantes crescero em meio HAT porque as clulas fusionadas compensam os
defeitos uma da outra.

Embora deficientes da enzima TK, as clulas humanas podem produzir HPRT (isto , elas so
HPRT+), e, embora deficientes em HPRT, as clulas de camundongo podem produzir TK (isto
, elas so TK+). Assim, os hbridos formados por fuso de clulas humanas e de camundongo
produzem ambas as enzimas que so capazes de sobreviver em meio HAT. Outros tipos de
clulas, incluindo clulas no fusionadas humanas e de camundongo, fuses camundongo-
camundongo e fuses humana-humana morrem.
 80

Aps as clulas hibridas terem sido selecionadas por cultivo em meio HAT, podem ser
estabelecidas linhagens celulares individuais. Os cromossomos humanos nessas linhagens
podem ser identificados por anlise citolgica. Ento, cada linhagem pode ser testada quanto a
presena de um determinado gene humano, geralmente por triagem do produto polipeptdico
do gene, (SNUSTAD e SIMMONS, 2008:152).

Experimentos feitos por Oscar Miller e seus colaboradores para localizar os genes
humanos para as enzimas TK e HPRT

Em um experimento, clulas de camundongo que eram TK- e HPRT+ foram fundidas com
clulas humanas que eram TK+ e HPRT-. As clulas hibridas que foram formadas por estas
fuses foram selecionadas em meio HAT e usadas para estabelecer linhagens celulares
distintas, que foram submetidas a anlise citolgica para determinar que cromossomos
humanos estavam presentes. Em uma dessas linhagens, apenas um nico cromossomo
humano, numero 17, foi encontrado. Como esta linhagem sobreviveu ao meio HAT, ela deve
ter sido capaz de produzir a enzima TK. Assim, o gene para esta enzima est situado no
cromossomo humano 17.

Em outro experimento, Miller e seus colegas fundiram clulas de camundongo TK+ e HPRT-
com clulas humanas TK- e HPRT-. Todas as linhagens celulares hibridas que sobreviveram
levavam o cromossomo X humano. Assim, o gene para a enzima HPRT deve estar ligado ao
X.

Nesses experimentos, os genes TK+ e HPRT+ so marcadores gentico selecionveis. Sem

eles, as clulas cultivadas em meio HAT morrero. Qualquer clula que sobreviva dele deve
levar ambos os genes. Entretanto, as clulas que sobrevivem levam outros genes que no so
essenciais para o crescimento em meio HAT. Os pesquisadores podem triar linhagens de
clulas hibridas quanto presena desses genes no selecionados e correlacionar sua presena
em cromossomos humanos em particular. Deste modo, praticamente qualquer gene pode ser
mapeado em um cromossomo humano especfico.

Por exemplo, um pesquisador pode triar linhagens celulares hibridas quanto a presena da
enzima fosfatase acida (AP). Em tais experimentos, todas as linhagens que produzem esta
enzima levam o cromossomo humano 2. Portanto, o gene para AP esta situado nesse
cromossomo humano.

Segundo SNUSTAD e SIMMONS (2008:153) diz que Hbridos de clulas somticas

tambm podem ser usados para localizar genes em cromossomos.
 81

Conceitualmente, o procedimento similar ao mapeamento de deleo e duplicao em

Drosophila. Um pesquisador simplesmente procura anomalias citologicamente identificveis
que influenciem a capacidade de uma linhagem celular hibrida de fazer um determinado
produto gnico. Por exemplo, linhagens celulares que possuem o brao longo do cromossomo
X humano. Pode ser obtida a localizao ainda mais precisa estudando-se linhagens celulares
nas quais apenas uma parte do brao longo do cromossomo X esta ausente. Usando este tipo de
anlise, os pesquisadores mapearam o gene para HPRT em uma pequena regio, a banda
Xq26, prximo da ponta distal do brao longo do cromossomo X.

Recombinao e Evoluo

A recombinao gnica (ou gentica) refere-se troca de genes entre duas molculas de cido
nuclico, para formar novas combinaes de genes em um cromossoma. Recombinao
tambm a troca aleatria de material gentico durante a miose. A recombinao gentica
um mecanismo que serve para reorganizar os genes existentes nos cromossomas.

Se dois cromossomas se rompem e se unem novamente, alguns genes transportados por esses
cromossomas so trocados, processo esse denominado crossing-over. Os cromossomas
originais se recombinam, de modo que cada um agora transporta uma parte dos genes do outro.

Em eucariotos, a recombinao gentica um processo ordenado, que normalmente ocorre

como parte do ciclo sexual do organismo. A recombinao geralmente acontece durante a
formao das clulas reprodutivas, de modo que essas clulas contenham DNA recombinante.
J em bactrias, a oportunidade para a recombinao gentica pode surgir de vrias maneiras
diferentes, mas em todos os casos, duas molculas de DNA so unidas.

Na ptica de SNUSTAD e SIMMONS (2008:154) diz que recombinao uma

caracterstica essencial da reproduo sexual. Durante a miose, quando os cromossomas se
juntam e fazem o crossing, h uma oportunidade para criar novas recombinaes de alelos, em
que algumas delas podem ser benficas ao organismo acentuando a sobrevivncia/ sobre vida
ou a capacidade reprodutiva.

A recombinao meitica portanto um meio de embaralhar a variao gentica para

potencializar a mudana evolutiva. A recombinao, ou a sua ausncia, desempenha um papel
fundamental na evoluo.
 82

Significado evolutivo da recombinao

Pode-se apreciar a vantagem evolutiva da recombinao comparando-se duas espcies, em

que uma capaz de se reproduzir sexualmente e a outra no (SNUSTAD e SIMMONS, 2008).

Nessa vertente suponha-se que uma mutao benfica surgiu em cada espcie, e com o tempo
espera-se que tais mutaes se espalhem. Tambm pode se propor que em que enquanto elas
esto se espalhando, uma outra mutao esta benfica ocorre em um indivduo no mutante
dentro de cada espcie.

No organismo assexuado, no h possibilidade que a segunda mutao seja recombinada com

a primeira, mas no organismo sexuado, as duas mutaes podem ser recombinadas para
produzir uma linhagem que melhor do que qualquer um dos mutantes isoladamente. Essa
linhagem recombinante ser capaz de se espalhar por toda a populao da espcie.

Nessa vertente em termos evolutivos, a recombinao pode permitir que alelos favorveis de
genes diferentes se juntem no mesmo organismo. As mutaes so importantes sob ponto de
vista evolutivo, pois so elas que do origem variabilidades gentica de indivduos de uma
populao sobre a qual actua a seleco natural.

Na ptica de CASE (2005) conclui que Assim como a mutao, a recombinao gnica
contribui para a diversidade gentica de uma populao, que a base do processo evolutivo.

Supresso de recombinao por inverso

Genes supressores so genes que codificam protenas que actuam na regulao negativa do
ciclo celular, impedindo a proliferao descontrolada das clulas. Estes, revertem o efeito de
manuteno de outro gene, restaurando o fentipo infectado. Nos genes modificadores, uma
mutao altera um segundo loco genico, mudando a expresso de um gene mutado
anteriormente, em um primeiro loco.

Muitos rearranjos esto associados a reduo na frequncia de recombinao, e esse efeito

mais pronunciado em inverso heterozigota porque a inibio do crossing que ocorre perto dos
pontos de quebra da inverso composta da perda selectiva de cromossomas que sofreram
crossing dentro da regio da inverso.

Para observar este efeito de supresso de recombinao, considere-se que uma inverso no
brao longo de um cromossoma. Se um crossing ocorre entre cromatides invertida dentro de
tetrade, ela produzira duas cromatides recombinantes. Entretanto, ambas as cromatides
 83

provavelmente sero perdidas durante ou aps a miose este efeito final de perda de cromatides
suprimir a recombinao entre cromossomos invertidos e no invertidos nos heterozigotos.

Na viso de SNUSTAD e SIMMONS (2008:155), diz que Os geneticistas exploram as

propriedades de supresso de recombinao de inverses para manter juntos alelos de genes
diferentes no mesmo cromossoma.

Esta tcnica de supresso de recombinao tem sido frequentemente usada em experimentos

com Drosophila, em que o cromossoma invertido geralmente leva uma mutao dominante
que lhe permite ser rastreado em uma serie de cruzamentos sem exame citolgico. Tais
cromossomas marcados por inverso so chamados de balanceadores porque permitem que
um cromossoma mutante seja mantido na condio heterozigota na situao de inverso.

O enfoque tcnico: Divergncia evolutiva dos cromossomas X e Y humanos sugere um papel

para a inverso no processo da evoluo dos cromossomas.

Controle gentico de recombinao

Na luz de SNUSTAD e SIMMONS (2008:155) afirma que estudos com vrios organismos,
incluindo leveduras e Drosophila, demonstraram que a recombinao envolve os produtos de
muitos genes. E alguns dos produtos gnicos tem um papel no pareamento cromossmico, e
outras catalisam o processo de troca e ainda outros ajudam a reunir segmentos de cromatides
quebradas.

Existem enzimas especializadas que auxiliam na reparao do dano do ADN. Estas enzimas
catalisam a alguns processos que ocorrem dentro das clulas e protegerem o DNA contra
danos e mudar.

Biotecnologia

Biotecnologia o conjunto de tcnicas

que permite a indstria farmacutica
cultivar microrganismo para produzir os
antibiticos que sero comprados na
farmcia.

E tambm biotecnologia o processo que

permite o tratamento de despejos
Fonte: Adaptado pelo autor
sanitrios pela aco de organismos em
fossas spticas.
 84

A Engenharia Gentica ocupa um lugar de destaque como tecnologia inovadora, seja porque
permite substituir mtodos tradicionais de produo (harmnios de crescimento, insulina), seja
porque permite obter produtos internamente novos (organismos transgnicos).

A Biotecnologia aplicada em inmeras reas, como na Agricultura, na Medicina, na

Biocincia dos alimentos, no meio Ambiente e seu futuro.

Biotecnologia na Agricultura

Nos ltimos anos, o extraordinrio desenvolvimento da biologia molecular, a sequenciao

completa e cada vez mais rpida de genomas de muitas espcies de plantas e de animais
domsticos, e a emergncia da gnmica e da biotecnologia ameaam mudar drasticamente a
agricultura tradicional.

Para isso conta com tcnicas to variadas como a inseminao artificial, a produo de animais
e plantas transgnicos, a clonagem, a deteco e anlise dos genes que determinam as
caractersticas complexas, a seleco assistida por marcadores, entre muitas outras. No geral, a
crescente aplicao destas tcnicas poder conduzir a uma situao de progressiva
homogeneizao gentica do muito reduzido nmero de espcies domsticas que
proporcionam a grande parte dos recursos alimentares de mais de seis bilies de pessoas. Ao
mesmo tempo, a enorme diversidade de populaes, raas e variedades locais de plantas e
animais que o homem aperfeioou desde o Neoltico, e a que hoje se chama recursos genticos,
corre um srio risco de extino cujas implicaes sero imensas

Biotecnologia Alimentar

A tendncia actual de incluir no termo Biotecnologia, em seu aspecto mais essencial, a

Microbiologia Industrial, que trata do aproveitamento dos microrganismos como agentes de
degradao e sntese. De certa forma, os processos de fermentao representa uma evoluo,
que liga as antigas artes de elaborao de alimentos (queijo, vinho), mediante o uso de uma
flora microbiana natural com a moderna industria de fermentao de alimentos que utilizava
cultivos puros e sofisticados equipamentos de controle do processo.

A produo em larga escala de protenas de organismos unicelulares, produo de antibiticos,

produo de clulas animais e vegetais e a produo compostos qumicos a partir de matrias-
primas renovveis em substituio aos combustveis fsseis, so exemplos de outras reas
onde os processos fermentativos podem ser.
 85

Assim, os produtos fermentados tornaram-se de grande importncia no mercado alimentar

permitindo preservar a carne e atribuir a ela sabor e aroma caractersticos da tecnologia usada.
Antonie van Leeuwenhoek, um pioneiro no uso do microscpio, foi o primeiro a examinar em
1856-1857: Louis Pasteur, aps investigaes detalhadas sobre as leveduras da cerveja e do
vinho, concluiu finalmente que leveduras vivas fermentavam o acar em etanol e CO2 quando
em anaerobiose.

Fermentao de po, queijo e cerveja bem como bebidas alcolicas desenvolveram-se para
satisfazer as exigncias comerciais modernas de produo em grande escala, com qualidade
elevada e constante, custos competitivos e variedade de produtos. Produo de cultivos para
produtos lcteos e o emprego de enzimas industriais melhoraram a eficincia dos processos,
assim como a automao e controle da qualidade na produo de po e produtos lcteos.

A Biotecnologia no Meio Ambiente

A incidncia da biotecnologia no sector ambiental, est relacionada fundamentalmente com o

monitoramento da contaminao ambiental.

Na ptica de LIMA & MOTA (2003:21), a poluio do ar, quer seja de natureza qumica,
fsica ou biolgica, tornou-se recentemente um aspecto crtico nas exigncias e das
populaes, dando as consequncias negativas que produz sobre a qualidade do meio
ambiente e, consequentemente, sobre a sade humana.

O histrico da degradao do meio ambiente e o uso dos recursos naturais, mostram ao longo
das ltimas dcadas, que a gesto sustentvel desses recursos passou a ser uma das
propriedades da humanidade.

O aumento de conscientizao de conservao ambiental por parte da populao bem como

expresses de organizaes sociais e da constituio de alguns pases, atravs do cdigo
florestal para reas de recursos hdricos, resduos slidos, entre outras, associadas a uma
actuao no controlo ambiental, fizeram surgir crescentes melhorias na gerncia ambiental,
com necessidade especfica de tcnicas de biorremediao de reas contaminadas/ degradadas.

Portanto, tcnicas de biorremediao, manuseio, tratamento de resduos, agrcolas e industrias,

tm evoludo acentuadamente nos ltimos anos. A aplicao de processos biotecnolgicos para
a remediao, tratamento e conservao de grande parte dos resduos, tm sido crescentes.
 86

Um dos campos mais promissores da biotecnologia no meio ambiente, que visa ao emprego de
microrganismos, direcciona-se para os locais contaminados por uma ampla variedade de
poluentes ambientais. A biorremediao e a biossegurana podem ser aplicadas como
tecnologias eficientes no controlo da poluio causada pelo derramamento de petrleo em rios
e mares.

Biorremediao o processo pelo qual organismos vivos, como, microrganismos, fungos,

algas verdes e plantas ou suas enzimas so usadas para reduzir, remover ou remediar
contaminaes no meio ambiente.

A biorremediao consiste em recuperar guas ou solos contaminados e actua atravs de

processos biolgicos adicionais para a decomposio dos resduos que favorecem e
incrementam a velocidade do processo natural de degradao. O processo de biorremediao,
se d pelo facto de microrganismos como as bactrias utilizarem substratos orgnicos e
inorgnicos (Ex: carbono) como fonte de alimentao.

Objectivos da Biotecnologia no Meio Ambiente

J que, Biotecnologia o conjunto de conhecimentos que permitem a utilizao de tcnicas

cientficas e de agentes biolgicos (organismos, clulas, organelas e molculas) para obter ou
modificar certos produtos. Ento a biotecnologia no meio ambiente, tem os seguintes
objectivos:

Apresentar e discutir aspectos relacionados poluio ambiental, bem como as

principais formas de se evitar e/ou minimizar os efeitos nocivos dos compostos txicos
despejados no meio ambiente;
Proporcionar os passos, elaborao de estudos de biorremediao ambiental dentro de
fundamento tcnico utilizado, e domnio das diversas inter-relaes no uso sustentvel
de recursos naturais e a preveno dos mesmos, por intermdio de mecanismo
prevencionistas e adequados;
Caracterizar os principais factores dos recursos naturais, com nfase nas formas de
poluio do ambiente;
Estabelecer noes de tcnicas de controlo e reduo da poluio hdrica, atmosfrica e
do ar;
Apresentar tcnicas analticas (biolgicas, fsicas e qumicas), utilizadas para deteco
e controlo de contaminantes ambientais.
 87

A moderna biotecnologia pode contribuir para a preservao da biodiversidade. A invaso e

colonizao por plantas exticas, a principal causa da reduo da biodiversidade no meio
ambiente. (http://ude.tv.paibn.biotecnologiambiental/br.htm).

A Biotecnologia na Medicina

A medicina, tambm utiliza conhecimentos da Biotecnologia. Graas a ela que, hoje em dia j
possvel tratar algumas e varias doenas.

Na perspectiva de LIMA & MOTA (2003:41) O grande avano da medicina, foi a produo
da insulina humana utilizando bactrias. Esta, essencial para os doentes de diabete e a
inveno da vacina.

Hoje, a vacina uma das principais tcnicas de preveno de vrias doenas quer para seres
humanos como para animais.

Desde a primeira vacina desenvolvida por JENNER h 200 anos atrs, a profilaxia atravs de
vacinas tem tido um enorme impacto na reduo de incidncia e mortalidade e nmero cada
vs maior de doenas.

H menos de uma gerao atrs, a poliomielite era uma das doenas infecciosas mais temidas.
Desde ento, tem vindo a ser desenvolvido um esforo concertado de vacinao escala
mundial, coordenado pela Organizao Mundial de Sade (OMS), com vista a erradicao da
doena no inicio do sculo XXI.

Com o aumento de esperana de vida e consequente envelhecimento da populao, outras

doenas como o cancro, as doenas cardiovasculares, entre outras, tm assumido uma
relevncia cada vs maior. Por outro lado, o surgimento da SIDA e a identificao de vrias
doenas genticas, tem contribudo para o desenvolvimento de novas tecnologias para a
profilaxia de doenas e para o tratamento de defeitos genticos. Assim, a Biotecnologia mdica
moderna, trs novas e vrias alternativas possveis para a transferncia de DNA (Terapia
Genica) e das maiores tecnologias de vacinao (as novas vacinas).

Todas as protenas so codificadas por DNA, sendo muitas doenas so resultantes da

expresso de uma ou mais protenas diferentes, como protenas de Encogene e Patognicos, ou
ainda de uma forma no funcional destas.
 88

Com os avanos da biotecnologia medica, foi possvel descobrir que existem essencialmente
duas (2) abordagens para a introduo de DNA nas clulas: Vectores Virais e Vectores no
Virais, os quais so diferentes em termos de eficincia e segurana para os pacientes.

Vectores Virais os genes so fornecidos ou integrados no genoma da linha celular

produtora ou num plasmdeo de modo a reduzir a sua patogenicidade, sem anular totalmente o
seu poder de infectar as clulas do hospedeiro.

Vectores no Virais so aqueles que os mtodos no virais de transferncia de DNA

requerem apenas um reduzido numero de protenas e no possui capacidade mutagnica.

Produtos de Origem Biotecnolgica da Medicina

Como bem sabido que a medicina tambm utiliza conhecimentos da biotecnologia, para alm
da insulina, harmnios, os produtos abaixo citados, so originrio da biotecnologia:
Antibiticos, Vacinas, Testes Diagnsticos, Medicamentos e Interfron Humano (Substancia
natural sintetizado no organismo humano para defesa contra vrus).

De um modo geral, a aplicao da biotecnologia na medicina, trouxe um grande avano e

desenvolvimento por parte da populao, por trazer benefcios na cura de algumas doenas.
Assim, os conhecimentos biotecnolgicos modernos da medicina, produziu vrias vacinas
como: Vacinas Bacterianas, Vacina de DNA, Vacina da Hepatite B e alguns antibiticos como
os anti-retrovirais, entre outras.

Vacinas Bacterianas so vacinas baseadas em componentes celulares que resultam num

melhor controlo e diminuio da infeco bacteriana.

Vacina de DNA consiste na administrao do material gentico (DNA na forma de

plasmdeo) que conduz a expresso in vivo de protenas que induzem a resposta pelo sistema
imunitrio. Este mtodo de vacinao muito simples, constituindo uma alternativa de grande
potencial de vacinao clssica, apresentando dois (2) tipos de vantagens:

O DNA mais estvel a nvel trmico, qumico e biolgico que a maioria das vacinas
clssicas;
A sntese dos antingnios in vivo sem recorrer qualquer infeco, pode ser aplicada em
casos de tratamento de indivduos infectados.

Vacina da Hepatite B uma infeco pelo vrus da Hepatite B, transmitido por via
sangunea, sexual e at salivar. A preveno desta doena atravs de vacinao, uso de
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preservativo, entre outras formas de preveno. Este vrus, manifesta-se como uma infeco
crnica podendo resultar em danificao do fgado e at provocar a morte.

Os anti-retrovirais So medicamentos que podem enfraquecer o vrus que causa o SIDA

inibindo a sua maior multiplicao e fazer com que um indivduo infectado fique bem durante
muito tempo.

Objectivos da Biotecnologia na Medicina

O principal objectivo da Biotecnologia na Medicina criar, fabricar e aplicar os materiais de

uso medicinal e farmacutico, para resolver problemas da sade humana.

Atravs destes conhecimentos Biotecnolgicos, os cientistas pretendem descobrir, desenvolver

e at conhecer vrios processos que criam problemas na vida das populaes como:

Saber como que uma pessoa tem a probabilidade de nascer com uma doena
hereditria;
Curar doenas transmitidas de pai para filho;
Curar doenas como diabete, hipertenso, cncer e a AIDS;
Desenvolver remdios especficos para cada pessoa e prevenir outras tantas doenas.

O Futuro da Biotecnologia

A Biotecnologia uma rea em forte desenvolvimento a nvel mundial. Assim, ela tem ainda
um longo caminho a desenvolver e possivelmente no futuro desenvolver programas de
colaborao entre empresas e universidades que desenvolvem iniciativas nesta rea.

O futuro da Biotecnologia depende dos factores econmicos e sociais que condicionam o

desenvolvimento industrial. Ela, possui grande potencial para expandir a base gentica das
variedades actualmente cultivadas (http://www.revista.ufg.br/index.php/fen.htm).

A preocupao com o meio ambiente, sade humana, produo agrcola, entre outras reas, o
grande enfoque para a sociedade em todo o planeta.

Assim, espera-se que a Biotecnologia desenvolva e traga no futuro novas e vrias tecnologias
mais avanadas para, reduzir e destruir resduos perigosos, processos biolgicos produo de
materiais e substncias de uso industrial, medicinal e farmacutico, processos para o
tratamento e a eliminao de poluentes no lixo, na gua, no solo e no ar, e frequentemente
aplicadas para minimizar esses processos na rea ambiental.
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Conservao de recursos genticos

Considera-se recurso gentico animal, um animal com potencial de ser utilizado na produo
de alimentos, aliado ao conhecimento tradicional e ao contexto econmico e ambiental onde a
raa foi desenvolvida. J o termo conservao de recursos genticos refere-se s aes que
garantam a manuteno da diversidade dos recursos genticos, a contribuio destes na
produo agropecuria e a preservao de valores ecolgicos e culturais.

Assim, a conservao de recursos genticos animais (CRGA) compreendida como a gesto

sustentvel de um material gentico tradicional, ora denominado de crioulo e
internacionalmente reconhecido como raa local.

Os recursos genticos podem ser conservados in situ ou ex situ, onde a conservao in situ a
manuteno e recuperao de populaes viveis de espcies em seus meios naturais, e ex
situ a conservao fora dos seus habitats naturais, geralmente por mtodos de
criopreservao de material gentico, como smen, embries e DNA.

A gesto de recursos genticos animais

Ao longo de milhares de anos, o homem domesticou plantas e animais muito diferentes e

transportou-os para lugares distantes, onde os cruzou com formas selvagens e domsticas
locais, moldando-os lentamente para satisfao das suas necessidades. Da enorme diversidade
e complexidade deste processo resultaram inmeras populaes, raas e variedades locais que
hoje se designam por recursos genticos animais e vegetais, e que se encontram em grande
parte ameaados de extino pelos sistemas de produo intensiva surgidos na era ps-
Revoluo Industrial. Actualmente, a adopo e aplicao de medidas agro-ambientais que
promovem uma poltica de desenvolvimento sustentvel, associadas emergncia da genmica
e da biotecnologia aplicadas, deixam antever um futuro mais promissor para a utilizao,
gesto e conservao dos recursos genticos animais e vegetais. (BEJA-PEREIRA e DE
ALMEIDA, 2005:15).

Assim, a gesto dos recursos genticos animais abrange toda a gama de medidas tomadas no
intuito de entender, usar, desenvolver e manter esses recursos. Pressupe a avaliao das
caractersticas dos recursos genticos animais disponveis no contexto das condies de
produo predominantes e das demandas sociais. Alm disso, deve-se levar em considerao a
diversidade de espao e de tempo, bem como as tendncias projectadas para o futuro.
 91

Mtodos para a caracterizao dos recursos genticos animais

A caracterizao abrange identificao, descrio e documentao de raas, em relao aos

habitats e aos sistemas de produo nos quais essas raas se desenvolveram e aos quais esto
adaptadas.

Um de seus objectivos avaliar o nvel de desempenho de determinadas raas dentro dos

vrios sistemas de produo encontrados em um pas ou regio, e assim orientar os produtores
rurais e aquelas pessoas que impulsionam o desenvolvimento em sua tomada de decises que
podem ser tomadas com base nas caractersticas de adaptao, no valor relativo para a
alimentao e a agricultura, ou ainda com base no valor histrico ou cultural das raas em
questo.

Algumas informaes ajudam muito no delineamento e na implantao de programas de

conservao ou de desenvolvimento de raas locais: caractersticas de adaptao, sua relao
gentica com outras raas, prticas de manejo em seu ambiente normal de produo, bem
como qualquer outro conhecimento associado s raas locais.

A caracterizao gentica (molecular) permite que se explore a diversidade gentica dentro

das populaes de animais e entre elas, e que se determinem as relaes genticas entre
populaes (FAO, 2007:35).

O monitoramento peridico do tamanho e da estrutura da populao importante para adaptar

as estratgias de manejo caso seja necessrio. Outro aspecto importante do processo de
caracterizao o facto de disponibilizar os resultados a uma ampla gama de partes
interessadas: responsveis pela elaborao de polticas, profissionais do desenvolvimento,
produtores que conservam as raas e pesquisadores. A ligao entre as informaes colectadas
sobre as raas e os mapas climticos e de sistemas de produo seria de grande ajuda para a
tomada de decises (FAO, 2007:35).

Melhoramento gentico

Melhoramento gentico o conjunto de processos que visam a aumentar a frequncia dos

genes desejveis ou das combinaes genticas boas em uma populao. O melhoramento
gentico animal tem por finalidade aperfeioar a produo dos animais que apresentam algum
interesse para o homem. (http://www.ebah.com.br/content/ABAAAelHsAD/ melhoramento-
genetico-animal).
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O melhoramento gentico um elemento vital para satisfazer a crescente demanda por

produtos de origem animal. A gentica e a biotecnologia reprodutiva progrediram muito, o que
permitiu rpidos avanos em sistemas de produo altamente controlados. Nos ltimos anos,
porm, tem-se percebido cada vez mais que a seleco feita apenas visando a taxas produtivas
por animal leva deteriorao da sade, ao aumento do estresse metablico e reduo da
longevidade.

Recentemente, passou-se a prestar mais ateno s caractersticas funcionais, tais como

resistncia a doenas, fertilidade, facilidade de parto, longevidade e comportamento animal. Os
objectivos do melhoramento gentico tambm precisam ajustar-se s novas demandas dos
consumidores, que podem estar preocupados com o bem-estar animal, com os impactos
ambientais, ou ainda buscando sabores especiais nos alimentos. Alm disso, cada vez mais
importante assegurar-se de que a diversidade gentica intra-racial no seja comprometida. O
melhoramento gentico de pequenas populaes includas em programas de conservao um
campo que requer estratgias de gesto especficas.

Mtodos para o melhoramento gentico

Os mtodos para o melhoramento gentico so a Seleco (natural e artificial) e cruzamento.

A natureza, ao longo de milnios selecionou os organismos atravs da seleo natural, a

seleo artificial realizada em um programa de melhoramento visa influenciar diretamente nos
acasalamentos (no sendo mais aleatrio). Essa manipulao dos acasalamentos - escolhendo
os machos e fmeas que iro se acasalar - levar a um aumento na proporo de loci com
alelos que codifiquem caractersticas fenotpicas favorveis nos descendentes.

A seleo consiste em escolher os pais da prxima gerao que apresentam um maior nmero
de alelos favorveis (ex: Crescimento, resistncia a doenas, produo de sementes, produo
de leite, etc.) http://pt.wikipedia.org/wiki/Melhoramento_gen%C3%A9tico.

O cruzamento consiste em acasalar indivduos diferentes geneticamente (ex. Bovino Gir x

Bovino Holands) para desfrutar da heterose e complementariedade. Heterose o fenmeno
que ocorre quando o desempenho mdios dos filhos superior a mdia dos pais, esse
fenmeno ocorre porqu a maioria das caractersticas desejveis apresentam carter
dominante, e, ao se cruzar indivduos puros diferentes, h um aumento no nmero dos loci em
heterozigose (ex. AaBbCcDd) esse fato leva a prognie possuir mais alelos favorveis.
 93

Recursos Genticos Vegetais

Recurso gentico, por definio, todo germoplasmo que tem ou pode vir a ter valor
econmico ou utilitrio, actual ou futuro, sendo especialmente importante e entende-se por
germoplasmo toda base fsica do cabedal gentico que rene o conjunto de materiais
hereditrios de uma espcie.

O termo germoplasma foi criado pelo August Weisman em 1883, a palavra germoplasma em
que o prefixo germ- indica do qual algo nasce e o sufixo -plasma, do material que dele se
constitui. Poderamos afirmar que genes e germoplasma poderiam significar materiais
similares, no entanto, os genes fazem parte do processo de hereditariedade, ogermoplasma
quem governa esse processo.

Importncia dos recursos genticos vegetais

Os recursos genticos vegetais constituem parte essencial da biodiversidade e so responsveis

pelo desenvolvimento sustentvel da agricultura e da agro-indstria. A importncia dos
recursos genticos como fonte de alimentos enorme, constituindo a sua perda uma sria
ameaa para a segurana alimentar no mundo.

Os Recursos Genticos Vegetais tm pois ultimamente comeado a ser reconhecidos em todo o

mundo, como algo muito importante pelo seu contributo imprescindvel para a sobrevivncia
da humanidade e do equilbrio ambiental, sendo considerados com um componente importante
da soberania, intimamente ligados segurana alimentar.

Os recursos genticos vegetais e o estudo dos genes neles contidos so estratgicos para
satisfazer as crescentes demandas alimentares da populao mundial.

Tem como importncia na agrcola, na propagao ou variabilidade de tecidos e rgos de

plantas arbreas e herbceas de espcies florestais, medicinais, aromticas insecticidas, e
corantes, na indstria tradicionais so impotentes na produo de biomassa microbiana como
fonte proteica suplementar para produtos de uso tradicional, melhoramento de processos
fermentativos, para produo de lacticnios

E na indstria moderna: Na produo de substncias biologicamente activas por meio do uso

de microrganismos transformados por engenharia gentica na produo de insecticidas e de
agentes de controlo biolgica, produo de kits para o diagnstico de patgenos, assim como
na produo de aditivos, corantes e aromatizantes.
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Utilizao dos recursos genticos vegetais

O uso desses componentes genticos e qumicos destas plantas usam-se na produo de etanol,
acetona, butanol, protenas, enzimas e polissacardeos, na produo de antibiticos, enzimas,
vacinas, produo de alimento, produo de bebidas, fermentos, protenas no defensivos
agrcolas como pesticidas microbiais, na prestao de servios de tratamento (despoluio) de
gua, assim como no tratamento de lixo e esgoto, usado na perfumaria nativa e como
repelentes de alguns insectos.

Conservao dos Recursos Genticos Vegetais

A conservao dos recursos genticos significa algo mais que o impedimento de extino das
espcies, significa antes, a conservao de espcies, populao e gentipos potencialmente
teis hoje ou no futuro. Neste contexto, objectivo deve ser conservar suficiente diversidade
entre espcies, de forma assegurar que o seu potencial gentico esteja plenamente disponvel
para as prximas geraes. Para a conservao dos recursos genticos vegetais existem duas
formas ou estratgias: A conservao in-situ e a conservao ex-situ.

A Conservao in-situ: envolve a conservao do ecossistema e do habitat natural e, noo

das espcies domesticadas ou cultivadas, do local onde essas desenvolveram a sua
caractersticas adaptativas envolvendo os sistemas tradicionais agrcolas. Exemplo a tcnica
on-farm, onde se tem valorizado o papel das comunidades tradicionais de agricultores na
conservao dos recursos genticos.

A conservao ex-situ: refere-se conservao dos recursos genticos fora do seu habitat
natural ou por meio do estabelecimento de Bancos de Germoplasma. A conservao ex-situ
em geral, mais indicada para a conservao de espcies cultivadas e espcies afins e espcies
selvagens.

Portanto a estratgia ex-situ envolve tambm tcnica de armazenamento in vitro que feita a
partir espcies vegetais (amostras de tecido) num ambiente estril e livre de agentes patognico
e tambm em jardins botnicos feita a colheita de sementes ou material vivo num local e vai
ser plantadas em outro lugar sob forma de coleco de plantas vivas num jardim. As sementes
podem ser; (recalcitrantes) so sementes que no podem ser dessecadas a baixa temperatura,
exemplo: caf e Cacau. Enquanto as sementes ortodoxas so armazenadas a parte porque tem a
capacidade de serem dessecadas a baixas temperaturas, exemplo: Soja, Feijo, Milho e
Tabaco.
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Concluso

com muito orgulho fecho este meu portflio e o fim da cadeira, que embora para chegar at
aqui foi uma longa e difcil caminhada, mas esta, no deixa de ser to pequena quanto aquele
que ainda terei que percorrer. Durante nesses meses que estudei alguns contedos da Gentica
Molecular e Biotecnologia, foi uma experincia que valeu a pena, pois, o que me comoveu, foi
de puder fazer um trabalho relacionado com conservao e gesto de recursos genticos, assim
como, pude fazer alguns clculos sobre a frequncia de recombinao e gostei ainda da
construo do mapa gentico.

Tendo em conta que a academia ensina as pessoas a mudarem de atitudes gradualmente para o
melhor, e com a ajuda deste processo to rico que a aprendizagem, me trouxe um novo olhar
e uma transformao na minha forma de pensar, no s acerca das questes da aprendizagem,
mas muito alm dos conceitos e teorias. Dizer que, foi ptimo o facto de estar em conjunto
com os meus colegas, em especial os colegas que fizeram tanto esforo para apresentarem
seminrios e de congratular a presena constante e disponibilidade de um docente, neste caso o
dr. Zacarias Rosalina Joo da Silva, que nos motivou e forneceu-nos inmeros conhecimentos
que esto patentes neste portflio.

O homem primeiro tropea,

depois anda, depois corre e um dia voar.

Bartolomeu de Gusmo (O Padre Voador)

 96

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