INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

CINETICA ENZIMATICA
EFECTO DEL PH Y CONCENTRACION DE ENZIMA SOBRE
LA VELOCIDAD DE REACCION
Casillas Ramos Guillermo Arturo, Orta Camargo Berenice
3FV2 SECCION 2

Objetivo General:
Tablas de resultados pH.
- Analizar algunos factores que modifican la velocidad Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo
1 2 3 4 5
de la reaccin catalizada por la invertasa y Absorbancia 0.308 0.992 1.167 1.344 0.674
caracterizar de esta manera a dicha enzima.
Azcar reductor 3.3 10.7 2.6 14.55 7.3
(moles)
Objetivo especfico:
- Analizar la importancia del pH del medio sobre la Velocidad (U.I.) 0.33 1.07 1.26 1.45 0.73
velocidad de una reaccin enzimtica y su efecto
sobre el carcter inico de la enzima y del sustrato PH 3.5 4.5 5.5 6.5 7.5
- Demostrar que la velocidad de la reaccin
enzimtica es directamente proporcional a la
concentracin de enzima
Discusiones:
Introduccin: La sacarosa es un acetal que no se oxidan con facilidad,
porque ambos tomos de carbono anomricos estn fijos en
un enlace glicosdico, El cido 3,5 dinitrosaliclico (DNS),
Las enzimas son catalizadores proteicos, que aceleran la
reacciona nicamente con los azcares reductores. La
velocidad de una reaccin enzimtica. Estas reducen la
sacarosa es un disacrido no reductor, pero tras su hidrlisis
energa de activacin, que es esencial para el inicio de
se libera glucosa y fructuosa, que son reductores y
cualquier tipo de reaccin qumica. Con un requisito de bajo
reaccionan con el DNS generando un producto coloreado
consumo de energa para la activacin, la reaccin tiene
que es posible analizar en el espectrofotmetro, Al aadir el
lugar ms rpidamente, De forma general, la velocidad de
3,5-DNS ocurre una reaccin de xido-reduccin, en la cual
una reaccin catalizada enzimticamente es proporcional a
el 3,5-DNS (amarillo) es reducido por la glucosa al cido 3-
la cantidad de enzima en la mezcla de ensayo
amino-5-nitrosaliclico (rojo), mientras que la glucosa se
Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos,
oxida a cido D-glucnoico, Se adiciono DNS porque este,
amino, tiol, imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus
cumple con varias funciones como proporciona el pH
aminocidos. Segn el pH del medio, estos grupos pueden
alcalino necesario para que ocurra el equilibrio ceto
tener carga elctrica positiva, negativa o neutra, La
enlico, en el cual la DFructosa se isomeriza formando D
conformacin de las protenas depende, en parte, de sus
glucosa y viceversa, adems inactiva la accin de la enzima.
cargas elctricas, habr un pH en el cual la conformacin
La velocidad de reaccin es proporcional a la concentracin
ser la ms adecuada para la actividad cataltica. Este es el
de enzima, pues a mayor cantidad de enzima, es posible
llamado pH ptimo y depende de la secuencia de
transformar ms sustrato en menor tiempo, ya que se forma
aminocidos que conforman la enzima. Cualquier cambio
una cantidad mayor del complejo ES. La cantidad de
brusco en el pH, afecta las propiedades catalticas de una
molculas de sustrato presente en la mezcla de reaccin es
enzima.
demasiado alta en comparacin con las molculas de
enzima, por lo que, al adicionar enzima, est siempre tendr
Resultado: sustrato disponible para reaccionar, es decir el sustrato
nunca ser el reactivo limitante.
Tabla resultados [E]. La actividad de la invertasa se ve afectada por el pH al cual
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 se lleva a cabo la reaccin. La curva actividad-pH puede ser
Absorbancia 0.041 0.469 0.520 1.132 1.477
diferente para cada tipo de enzima, pero en el caso de la
enzima utilizada, muestra una tendencia grfica parecida a
Azcar reductor 0.04 4.9 5.6 12.1 15.7
(moles)
una campana o parbola
Velocidad (U.I.) 0.004 0.49 0.56 1.21 1.57 El pH modifica la velocidad de reaccin de distintas
maneras. Una de ellas es por la ionizacin del sitio activo,
Concentracin 1 2 3 4 5 en donde el proceso cataltico usualmente requiere que la
de enzima (g/ enzima y el sustrato tengan grupos qumicos en una
2.0 mL)
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forma inica particular para poder interactuar. Otro aspecto
en la que el pH se ve involucrado es en la desnaturalizacin
de la enzima, ya que pH extremos pueden ocasionar que la
enzima pierda su estructura nativa y por tanto su actividad o
funcin, debido al cambio de las interacciones inicas,
tambin la estabilidad de la enzima, se ve modificada.
La actividad mxima de la enzima, ocurre en el pH ptimo.
Aunque experimentalmente, los valores obtenidos en la
Absorbancia no fueron los esperados, debido posiblemente
a la medicin inadecuada del tiempo de reaccin de la
invertasa o a la adicin de diferentes volmenes de
reactivos, es posible observar en la representacin grfica
que para la invertasa el pH optimo se encuentra en un rango
de pH de 6 a 6.5. Si el medio se torna muy cido o muy
bsico la enzima se desactiva y se desactiva de manera
irreversible.

Conclusiones:
La velocidad de reaccin es directamente proporcional a la
concentracin de enzima y la concentracin del sustrato
tambin aumenta la velocidad de reaccin hasta que llega a
una velocidad mxima.
El pH ptimo de la invertasa es un rango de 6 a 6., a valores
inferiores o superiores la actividad de la enzima disminuye.

Bibliografa:
Voet, Pratt, 2007, Fundamentos de bioqumica, la
vida a nivel molecular, 2 edicin, editorial mdica
panamericana pp: 250-273