Tuberculose: formas de transmissão e diagnóstico laboratorial

Homenagens e agradecimentos
Agradecimentos
Laboratrio Central de Sade Pblica do Cear - LACEN-CE

Laboratrio Central de Sade Pblica do Distrito Federal -
LACEN-DF
Instituto Nacional de Pesquisas da Amaznia - INPA
Instituto Adolfo Lutz - IAL - LACEN - SP
Instituto de Pesquisa Biolgica - IPB - LACEN - RS
Centro de Referncia Professor Hlio Fraga - Rio de Janeiro - RJ
Organizao Panamericana da Sade/OPAS - Brasil
Instituto Adolfo Lutz - IAL - Ribeiro Preto -SP
Laboratrio Central de Sade Pblica "Dr. Milton Bezerra Sobral"/
FUSAN - Recife-Pe
Universidade Federal do Esprito Santo -UFES
Agradecimentos Especiais
Ao Laboratrio Central de Sade Pblica do Distrito Federal,
a Maria do Carmo Gomes Pinheiro e Fbio Toms de Souza, pelo apoio

incondicional para a execuo deste projeto.
Os responsveis pela implantao do TELELAB empenharam toda

sua capacidade profissional para tornar este projeto digno da qualidade
tcnica e cientfica e da eficincia que nossa coordenadora geral sempre
imprimiu s realizaes do Programa Nacional de DST e Aids do Minis-
trio da Sade.
Dra. Lair Guerra de Macedo Rodrigues, exemplo de coragem e
liderana, dedicamos este trabalho.
Maringela Batista Galvo Simo
Tuberculose - Diagnstico Laboratorial - Baciloscopia 1

Tuberculose: formas de transmisso
e diagnstico
Formas de transmisso
Introduo
Em 1882, Robert Koch descobriu o agente etiolgico da tuberculose, o que fez crescer a expectativa em rela
o cura e erradicao dessa doena, que desde a antigidade atinge pessoas de todas as classes sociais.
Hoje mais de um sculo depois, mesmo com mtodos adequados de diagnstico e esquemas de tratamento
com drogas especficas capazes de curar a maior parte dos casos, a tuberculose ainda persiste como um grave prob
lema de sade pblica no Brasil e em muitos outros pases.
A emergncia da Sndrome da Imunodeficincia Adquirida (Aids) veio agravar a situao constituindo, alm
das condies precrias de vida de grande parte da populao, um dos principais fatores relacionados a alta pre
valncia da tuberculose.
Ateno
Um diagnstico rpido e seguro, acompanhado de tratamen
to precoce, so medidas fundamentais para quebrar a cadeia
de transmisso e controlar a tuberculose no Brasil.
O treinamento dos profissionais uma estratgia fundamental para possibilitar a realizao do diagnstico
da tuberculose, com tcnicas padronizadas, critrios de controle de qualidade e de biossegurana, em qualquer
laboratrio da rede pblica.
O que a Tuberculose?
A tuberculose uma doena infecciosa que acomete, geralmente, os pulmes, mas pode ocorrer em qual
quer outro rgo ou ainda se desenvolver ao mesmo tempo, em vrios rgos do corpo humano. Confira na Figura
1, as localizaes mais comuns da doena:
Meningite Tuberculosa
TB Pericrdica TB Ganglionar
TB Heptica TB Pulmonar
TB Pleural
TB Cutnea
TB Renal TB ssea
Figura 1: Localizaes mais comuns da tuberculose no organismo humano.

Voc sabia?
A designao tuberculose veio do fato de a doena provocar leses nodulares firmes denominadas de tubr
culos, nos tecidos em que se desenvolve.
Quais os microrganismos que causam a tuberculose?

A tuberculose causada por cinco espcies de bactrias pertencentes ao gnero Mycobacterium: M. tubercu-
losis, M. bovis, M. africanum, M. microti e M. canetti. Essas espcies esto agrupadas e definidas como "complexo M.
tuberculosis".
Gnero Mycobacterium (Micobactria) - designa as bactrias que apresentam algumas caractersticas se

melhantes aos fungos quando cultivadas em meio lquido.
No Brasil, quase todos os casos tm como agente etiolgico o M.tuberculosis conhecido como bacilo de Koch
(BK) e, muito raramente, a tuberculose tem sido relacionada ao M. bovis. As espcies M.africanum, M. microti e M.
canetti , tm sido identificadas em outras partes do mundo.
Alm das espcies do "complexo M. tuberculosis" existem pelo menos 81 outras espcies classificadas como
Micobactrias Atpicas, ou Ambientais, ou MNT.
MNT - micobactria no tuberculosa, anteriormente referida como MOTT - Mycobateria Other Than Tu
bercle Bacilli = outra micobactria que no o bacilo da tuberculose.
Quais as principais caractersticas das micobactrias?
Veja na Figura 2:
Observe que:
as micobactrias tm a forma de um bastonete e, por isso, todas as espcies so classificadas mor
fologicamente como bacilos;
Citoplasma Membrana citoplasmtica

Material Gentico
Grnulos de Polifosfato Parede Celular
Figura 2 - Representao esquemtica das principais caractersticas das micobactrias
Observe que:
as micobactrias tm a forma de um bastonete e, por isso, todas as espcies so classificadas morfologi
camente como bacilos;
no citoplasma so produzidas as enzimas necessrias para a biossntese celular, dentre elas encontra-
se a nitrato-redutase. A membrana citoplasmtica sintetiza pigmentos carotenides e niacina. A nitrato-
redutase, os pigmentos e a niacina so utilizados nos testes de identificao do M. tuberculosis;
os grnulos de polifosfato ficam armazenados no citoplasma para uso nas atividades energticas, como
a multiplicao. No microscpio, eles podem aparecer como pequeninos gros escuros localizados nas
extremidades do bacilo;
a parede celular constituda principalmente por grandes quantidades de lipdios. Os cidos miclicos,
que so componentes dos lipdios, retm corantes e so responsveis pela propriedade da lcool-cido
resistncia;

Propriedade da lcool-cido resistncia - a capacidade das
micobactrias de reter corantes, no descorando mesmo aps a lavagem com uma soluo de lcool-cido, du
rante os procedimentos do mtodo
de colorao no laboratrio.
Por esse motivo, as micobactrias so classificadas como Bacilos lcool-cido Resistentes, que a prtica
clnica e laboratorial identifica apenas como BAAR.
tembm na parede celular que se encontra o composto 6,6 dimicolato de trealose, responsvel pelo
aspecto agregado dos bacilos (fator corda) em leitura microscpica e pela pelcula que o M. tuberculosis
forma em meio de cultura lquido. A parede celular d forma e rigidez ao bacilo.
Como se adquire o bacilo da tuberculose?

O bacilo da tuberculose adquirido, principalmente, pela inalao de partculas infectantes suspensas no
ar.
Partculas infectantes - so gotculas com dimetros de at 5 micra contendo bacilos, espalhadas no ar

pela tosse, fala e espirro de um paciente com tuberculose pulmonar.
Atravs da respirao, os bacilos chegam aos alvolos pulmonares onde podem ser destrudos, permanecer em
estado de latncia ou se multiplicar.
Voc sabia?
Raramente, o complexo M. tuberculosis adquirido atravs do
contato da pele lesada (cortes ou feridas) com secrees de
pacientes com tuberculose. Nesse caso, o bacilo pode ficar na prpria pele ou migrar para outras partes
do corpo humano, como por
exemplo o pulmo.
Raramente, tambm, o M. bovis adquirido junto com a ingesto
de produtos como, por exemplo, o leite ou seus derivados
no pasteurizados.
Todas as pessoas que adquirem o bacilo desenvolvem tuberculose?
No. Apenas cerca de 10% a 20% se tornaro doentes. Isto porque, para que os bacilos se multipliquem e a
doena se manifeste, o indivduo precisa estar com seu sistema de defesa imunologicamente deficiente, seja por
debilidades nutricionais ou outras causas de desgastes fsicos, pelo uso de medicamentos imunodepressores ou por
doenas imunossupressoras, como por exemplo a aids.
Aps a multiplicao bacilar ocorre a disseminao para todo o organismo atravs da corrente sangnea e do
sistema linftico e, a partir da, a tuberculose pode surgir em qualquer parte do corpo humano.
Qual das formas de tuberculose mais freqente?

a Tuberculose Pulmonar que, alm de mais freqente, a mais importante e preocupante em termos
de Sade Pblica, porque a forma que produz as partculas infectantes responsveis pela transmisso da doena.
As demais formas so relatadas como Tuberculose Extrapulmonar e, no Brasil, acometem em torno de 15% dos
doentes.
Quais os sintomas da tuberculose pulmonar?

Alm da tosse com expectorao constante por mais de 3 semanas, que identifica o sintomtico respira-
trio, so tambm comuns os seguintes sinais e sintomas clnicos: febre, suor noturno, falta de apetite, cansao, falta
de ar e emagrecimento rpido. Algumas vezes, a leso tuberculosa atinge vasos sangneos pulmonares e o escarro
apresenta-se sanguinolento.

Tuberculose: formas de transmisso
e diagnstico
Mtodos de Diagnstico
Como feito o diagnstico da tuberculose?
O diagnstico da tuberculose feito por:
exame clnico: baseado nos sintomas relatados e no exame fsico que possibilitam o diagnstico preliminar
zda doena a ser confirmada por outros exames;
exame radiolgico de trax: pode revelar imagens no pulmo sugestivas de tuberculose, mas sua simples
realizao no suficiente para confirmar a doena;
prova ou reao tuberculnica: tambm conhecida como PPD (Purified Protein Derivative - derivado puri-
ficado de frao protica antignica do bacilo) ou reao de Mantoux, em homenagem ao cientista que aper-
feioou essa prova criada por Koch. uma reao intradrmica que apenas verifica se o indivduo teve ou no
contato com o bacilo.
diagnstico laboratorial: o que confirma o diagnstico da tuberculose.

Como feito o diagnstico laboratorial da tuberculose?
O diagnstico laboratorial da tuberculose feito atravs dos seguintes mtodos bacteriolgicos:
Baciloscopia - ou exame microscpico, a pesquisa de bacilos lcool-cido resistentes - BAAR em esfregaos
da amostra, preparados e corados com metodologia padronizada.
Figura 1 Lmina de escarro corada pelo mtodo de Ziehl Neelsen
Cultura - o exame que permite o isolamento e a multiplicao de BAAR, a partir da semeadura da amostra
em meios de cultivo especficos para micobactrias.
Figura 2 Meio de Lowenstein-Jensen com colnias de micobactrias
Como qualquer espcie de micobactria pode se desenvolver nesses meios, preciso realizar testes de iden-
tificao, que possibilitam a diferenciao do M. tuberculosis de outras micobactrias, em amostras de culturas
positivas para BAAR. Os testes mais utilizados so:
prova de crescimento de colnias bacterianas em PNB (cido p-nitrobenzico): consiste na observao
do crescimento de colnias de micobactrias em meio de cultura contendo PNB. O meio de cultura contendo
este tipo de cido (PNB) inibe a multiplicao do M. tuberculosis no ocorre a formao de colnias bacteria-
nas;
prova de produo da niacina: detecta a niacina produzida pelo M. tuberculosis e acumulada no meio de
cultura. As outras micobactrias no produzem niacina em quantidade suficiente para a deteco nessa
prova;
p
rova de reduo do nitrato: detecta o nitrito produzido pela reduo de nitratos, devido a presena da
enzima nitrato-redutase.
obrigatrio realizar a baciloscopia e a cultura em todas as amostras?
Quadro 1 - Recomendaes para realizao da Baciloscopia e/ou Cultura

Baciloscopia obrigatria n a anlise de t odas a s
amostras, tanto para o diagnstico quanto para o controle
-
do tratamento.
Cultura obrigatria para:
Na Tuberculose - O diagnstico e m todas a s outras amostras, que no o escarro.
Pulmonar:
-
Na Tuberculose obrigatria a realizao simultnea da baciloscopia e

Extrapulmonar da cultura em todas as amostras menos no sangue.

Ateno
no sangue realiza-se somente a cultura, uma vez que a baci-
loscopia nesse tipo de amostra, apresenta com muita freqncia
resultado falso-negativo.
recomenda-se a baciloscopia e a cultura, em qualquer amostra
de pacientes HIV positivos, uma vez que eles podem ser aco-
metidos por outras micobactrias, que exigem identificao da
espcie para adequao do tratamento.
Em que se baseia a obrigatoriedade da baciloscopia para o diagnstico da tubercu-

lose pulmonar?
A baciloscopia obrigatria na tuberculose pulmonar porque identifica a maioria dos casos bacilferos, que so as
fontes mais importantes de transmisso da doena, alm de ser um mtodo simples, rpido e de baixo custo.
No Brasil, conforme estimativas do Ministrio da Sade, em torno de 70% dos portadores de tuberculose pulmonar
possuem amostras de escarro com grande quantidade de bacilos.
Qual a importncia da Baciloscopia para o controle do tratamento?

A baciloscopia de controle importante porque permite avaliar o sucesso ou a falncia do tratamento. Para
isso, indispensvel que esse controle seja realizado, pelo menos, ao final do 2o, do 4o e do 6o ms de tratamento.
O ideal fazer a baciloscopia ao final de cada ms. Com os resultados mensais, o mdico pode construir uma Curva
Baciloscpica.
Confira nos exemplos que seguem:
Exemplo 1
Veja que o paciente apresentou baciloscopia negativa ao final do 2 ms e permaneceu assim at ao final.
Essa uma curva que demonstra a cura da doena.

Exemplo2
Neste exemplo o paciente, voltou a ter baciloscopia positiva a partir do 2 ms. Houve falncia do tratamento
que pode estar relacionada aos seguintes motivos:
irregularidade do tratamento: o paciente no toma os medicamentos corretamente; ou
resistncia a uma ou mais drogas do esquema de tratamento.

Diagnstico laboratorial - amostras
Que amostras so utilizadas no diagnstico laboratorial da Tuberculose?

Depende da forma de tuberculose que est sendo investigada, se pulmonar ou extrapulmonar. Veja no
Quadro 1 as amostras mais freqentemente encaminhadas para baciloscopia e cultura.
Tuberculose Pulmonar Tuberculose Extrapulmonar

escarro urina
lquidos: pleural; sinovial; peritoneal;
lavado brnquico
pericrdico
secrees ganglionares e de ndulos
lavado bronco-alveolar
mamrios
lavado gstrico lquor
fragmentos de tecidos (bipsias
cutneas, de rgos e de ossos)
fragmento de tecido pulmonar
secrees purulentas de pele, nariz,
(bipsia pulmonar)
ouvido, olhos, garganta
sangue e aspirado de medula
Quadro 1 - Tipos de amostras freqentemente utilizadas no diagnstico laboratorial
Ateno
Amostras de fezes no devem ser utilizadas para baciloscopia e nem
para cultura, uma vez que esse material apresenta com muita freqncia
resultado falso positivo. O diagnstico da TB intestinal realizado por meio
de bipsia.
Neste curso sero detalhados os procedimentos da coleta e da baciloscopia de escarro, que a amostra mais
utilizada para diagnstico da tuberculose pulmonar.

Etapas para realizao da baciloscopia
Preparo do Esfregao
1 Preparo do material e
2 3 Distenso do escarro na
organizao da bancada lmina
4 Secagem do esfregao 5 Fixao do esfregao

(temperatura ambiente) (usar a chama)
Colorao do Esfregao
6 Preparo do material 7 Colorao com fucsina 8 Lavagem
necessrio
9 Descolorao 10 Lavagem 11 Colorao de fundo
12 Lavagem 13 Secagem (temperatura ambiente)
Leitura no microscpio
14 Preparo do material 15 Registro da lmina no 16 Leitura, anotao e
interpretao dos resultados no
e do microscpio papel quadriculado
papel quadriculado
17 Registro dos resultados 18 Conferncia e liberao dos resultados

na requisio e no livro
Figura 1 - Etapas da Baciloscopia

Baciloscopia - coleta de escarro
Que recipiente deve ser utilizado para a coleta do escarro?

A coleta do escarro deve ser feita em um pote, fornecido pela unidade de sade, preferencialmente com as
caractersticas apresentadas na Figura 3:
50 mm
boca larga
Tampa rosquevel
40 mm
Altura
plstico transparente
mnima
Capacidade de 35 ml a 50 ml
pote descartvel
Figura 3 - Caractersticas do pote para a coleta de escarro
fundamental que o nome completo do paciente e a data da coleta sejam escritos no corpo do pote, com
uma letra que possa ser compreendida por qualquer outra pessoa.
Ateno
No Anexo 1, deste manual, voc encontra um exemplo de requisio.
Quantas amostras de escarro devem ser coletadas para diagnstico?

Devem ser coletadas duas amostras de escarro de cada paciente, para aumentar as chances de se obter um
resultado positivo. Essas amostras devem ser coletadas de acordo com o seguinte esquema:
primeira amostra - coletada quando o sintomtico respiratrio procura o atendimento na unidade de
sade, para aproveitar a presena dele e garantir a realizao do exame laboratorial. No necessrio
estar em jejum;
segunda amostra - coletada, na manh do dia seguinte, assim que o paciente despertar. Essa amostra,
em geral, tem uma quantidade maior de bacilos porque composta da secreo acumulada na rvore
brnquica por toda a noite.
Observao: para o controle do tratamento coleta-se apenas uma amostra.
Que orientaes devem ser fornecidas para o paciente coletar as amostras do escarro?
fundamental que o profissional de sade:
entregue as orientaes por escrito e converse com os pacientes sobre todas elas para verificar se ele tem
dvidas, pois parte deles pode no saber ler e ter vergonha de declarar isso. Se possvel, faa uma demon-
strao dos procedimentos de coleta.
deixe bem claro para o paciente que a requisio do exame no deve ficar dentro do mesmo saco plstico
onde ele colocou a amostra.

Ateno
Veja, no Anexo 2, as orientaes que devem ser fornecidas ao paciente
para coleta da primeira e da segunda amostra.
Qual o procedimento de coleta quando o paciente tem pouca secreo e no con-

segue expelir o escarro?
Quando o paciente no consegue coletar normalmente a 1 e a 2 amostras, feita a coleta por induo, de
acordo com a orientao mdica.
Coleta de escarro por induo

Feita aps a realizao de nebulizao com soluo salina hipertnica a 3% durante no mnimo 5 e no
mximo 20 minutos. A nebulizao fluidifica a secreo do pulmo e provoca uma irritao que leva tosse e facilita
a expulso do escarro. Esse procedimento deve ser acompanhado por profissional treinado e em unidade de sade
equipada.
Aps a nebulizao, o paciente deve seguir as mesmas orientaes para forar a tosse e coletar o escarro,
apresentadas no Anexo 2.
Ateno
Na coleta por induo preciso orientar o paciente para: ingerir, no mnimo,
8 copos de lquido (gua, refrescos) e dormir sem travesseiro no dia anterior;
fazer a higiene oral apenas com bochechos de gua e comparecer ao exame
em jejum.
No corpo do pote, alm do nome completo do paciente e data da coleta, deve estar escrito coleta por indu-
o, uma vez que esse escarro menos viscoso e semelhante saliva.
A coleta de escarro por induo especialmente til para pacientes com Aids, grupos indgenas e em controle
de tratamento.

Baciloscopia - recepo e transporte das
amostras de escarro
Quais os procedimentos ao receber as amostras de escarro?

A amostra deve ser recebida em qualquer horrio de funcionamento da unidade de sade. Na recepo, jun-
tamente com a pessoa que trouxe a amostra, importante adotar os seguintes procedimentos:
1. verificar a identificao da amostra, no corpo do pote. Se for necessrio, escreva de novo o nome completo do
paciente e a data da coleta;
2. verificar se a requisio do exame est preenchida corretamente e com todos os dados. Ateno especial
deve ser dada aos endereos do paciente e da unidade solicitante. Se faltar alguma informao, pea esclare-
cimentos pessoa que estiver entregando a amostra;
3. conferir se o nome do paciente que consta na requisio o mesmo que est no pote da amostra;
4. observar se o pote contm realmente a amostra e se a requisio para diagnstico ou controle de trata-
mento. Anote essas informaes na requisio;
5. informar pessoa que entregou a amostra, quando e onde pegar o resultado;
6. encaminhar a amostra imediatamente para o laboratrio. Se isso no for possvel, para garantir a quali-
dade da amostra preciso obedecer s seguintes orientaes:
se o envio ao laboratrio for realizado no mximo em 24 horas, as amostras de escarro podero

ficar em temperatura ambiente, protegidas da luz solar;
se a demora para o envio ao laboratrio for no mximo de 7 dias, as amostras de escarro de-
vero ser mantidas refrigeradas entre 2C e 8C, em geladeira exclusiva para armazenar mate-
rial contaminado;
se no for possvel encaminhar em 24 horas ou se no houver geladeira disponvel para arma-
zenar material contaminado, a unidade dever processar as amostras, ou seja, preparar e fixar
os esfregaos, seguindo os procedimentos descritos no bloco "Baciloscopia", deste manual.
Ateno
Utilize equipamentos de proteo individual - (EPI) e manipule as

amostras como material potencialmente infectantes
Como transportar as amostras de escarro da recepo para o laboratrio?

O transporte de amostras de escarro deve ser feito em caixa prpria, com as caractersticas apresentadas no
exemplo da Figura 1:
tampa com
fechamento hermtico
grades Internas para

material no poroso, acondicionamento dos
rgido, resistente potes em p
descontaminao Smbolo de
risco biolgico
Figura 1 - Exemplo de caixa para transporte de amostras de escarro

O preparo para o transporte, envolve os seguintes procedimentos:
1. conferir cada uma das solicitaes com a amostra correspondente;

2. colocar os potes, com as tampas bem fechadas e voltadas para cima, dentro da caixa. recomendvel colo-
car cada um dos potes dentro de um saco plstico por questo de biossegurana. Desse modo, em caso de
extravazamento da amostra, o risco biolgico fica limitado ao saco plstico e no se espalha por toda a caixa;
3. acondicionar as solicitaes correspondentes, dentro de um envelope protegido com um saco plstico
bem fechado, e envi-las junto com a caixa de transporte de amostras para o laboratrio;
4. colocar a caixa com as amostras dentro de uma caixa trmica. Se o tempo de transporte for superior a 24
horas, coloque gelo reciclvel. Se o servio no tiver gelo reciclvel, acondicione cubos de gelo comum
dentro de um saco plstico resistente e bem vedado. A quantidade de gelo utilizada deve corresponder a,
no mnimo, 1/3 do volume (cubagem) da caixa trmica;
5. fechar a caixa trmica hermeticamente e prender firmemente com fita adesiva, em cima da tampa ou do
lado externo da caixa, o envelope plstico com as solicitaes. Jamais coloque as solicitaes dentro da
caixa junto com as amostras;
6. colar sobre a tampa ou do lado da caixa uma etiqueta com o nome e endereo do laboratrio destinatrio,
nome da unidade de sade remetente, endereo, telefone e fax;
7. entrar em contato com o laboratrio destinatrio para comunicar o envio das amostras. No envie amostras
s sexta-feiras, sbados, domingos e feriados a no ser que o destinatrio autorize.
Importante
Se o laboratrio estiver localizado em outro servio preciso

continuar a preparao das amostras para o transporte, de acordo com os
prximos passos:

1. fechar a caixa trmica hermeticamente e prender firmemente com fita adesiva, em cima da tampa ou do
lado externo da caixa, o envelope plstico com as solicitaes. Jamais coloque as solicitaes dentro da
Recebimento e registro de amostras
caixa junto com as amostras;
2. colar sobre a tampa ou do lado da caixa uma etiqueta com o nome e endereo do laboratrio destinatrio,
no laboratrio
nome da unidade de sade remetente, endereo, telefone e fax;
3. entrar em contato com o laboratrio destinatrio para comunicar o envio das amostras. No envie amostras
s sexta-feiras, sbados, domingos e feriados a no ser que o destinatrio autorize.
Como receber e registrar amostras no laboratrio?

1- Abra as caixas e verifique se os potes esto ntegros. Se tiver algum pote derramado, importante que voc:
anote esse fato na requisio correspondente;

pea nova amostra unidade de sade remetente;
faa imediatamente o descarte dessa amostra, de acordo com as orientaes de biossegurana;
Se houver material derramado dentro da caixa, antes de tirar as outras amostras preciso en-
volver os sacos plsticos contendo os potes em algodo embebido com fenol a 5%, fechar a
caixa, deixar por 5 minutos.
Veja como preparar o fenol a 5% no bloco Frmulas;
2- retire as amostras da caixa, tire o saco plstico delas e coloque-as enfileiradas em cima de uma bandeja for-
rada com um papel absorvente (tipo papel toalha);
3- descarte os sacos plsticos e descontamine a caixa, seguindo os procedimentos do bloco Biossegurana;
4- identifique a requisio correspondente a cada amostra;
5- 0bserve, olhando por fora do pote, sem abri-lo, o aspecto da amostra;
Confira, na Figura 1, os aspectos que podem ser observados nas amostras de escarro
saliva
mucopurulento mucoso
sanguinolento
Figura 1 - Aspectos observados nas amostras de escarro
6- registre o aspecto observado no escarro, no campo apropriado da requisio correspondente;

7- deixe os potes na bancada e faa o registro das amostras do seguinte modo:
pegue as solicitaes e numere cada uma delas de acordo com a ordem seqencial da numerao
do livro de "Registro de baciloscopia para diagnstico e controle da tuberculose". No Anexo 3,
voc encontra um exemplo de pgina desse livro;
coloque as solicitaes em ordem crescente seguindo o nmero seqencial j registrado nelas;
escreva os dados de cada uma das solicitaes nos campos correspondentes no livro. Lembre-se:
confira sempre se voc registrou todos os dados de forma correta e completa.
8- escreva no corpo do pote da amostra o mesmo nmero que est na requisio correspondente;
9- prepare, fixe e faa a colorao do esfregao, conforme descrito no bloco Baciloscopia, deste manual.

Ateno
O laboratrio deve processar a amostra de escarro no mesmo

dia do recebimento. O prazo mximo para a liberao do resultado
de 24 horas.
Importante
As amostras de escarro coletadas para controle do tratamento de-

vem ser processadas independentemente da qualidade e quantidade.

Baciloscopia - preparao do esfregao
Onde so realizados os procedimentos para preparar o esfregao?

O esfregao pode ser preparado na bancada do laboratrio desde que sejam atendidas as seguintes condies:
bancada instalada em ambiente arejado;
bico de Bunsen aceso entre o tcnico e a amostra que est sendo manipulada, durante todos os procedimentos. O
calor da chama forma uma barreira de proteo para os aerossis formados durante a preparao do esfrega-
o. Recomenda-se que, sempre que possvel, os procedimentos para preparao do esfregao sejam realizados
em cabine de segurana biolgica.
Com exceo do bico de Bunsen aceso, os procedimentos na cabine ou na bancada, so os mesmos.
Proteja-se dos riscos de contaminao:
utilize sempre Equipamentos de Proteo Individual - EPI;
Figura 1 - Equipamentos de proteo individual
mantenha o bico de Bunsen aceso durante todos os procedimentos da preparao do esfregao, realiza-
dos fora da cabine de segurana biolgica;
siga as orientaes de biossegurana em todos os procedimentos.
Quais os procedimentos recomendados para preparao do esfregao?

O esfregao pode ser preparado de duas formas:
aps a digesto da amostra com agentes mucolticos e centrifugao (exame de escarro aps concen-
trao). Essa forma exige equipamentos e procedimentos especficos, apresentados no Anexo 5 deste
manual;
por distenso do escarro diretamente sobre a lmina (exame direto). Essa a forma mais comum e uni-
versalmente utilizada. Voc deve preparar o esfregao para o exame direto, de acordo com os seguintes
procedimentos:
Ateno
As lminas tm que ser novas, sem uso. Lminas arranhadas

podem reter a fucsina e simular a presena de bacilos na amostra,
confundindo a leitura.

1. verifique se as lminas a serem utilizadas esto limpas. A limpeza da lmina feita antes de se iniciar a
preparao do esfregao, pois freqentemente elas vm de fbrica engorduradas pelo polimento. Nesse
caso, preciso:
lavar essas lminas com gua e detergente neutro, enxagu-las bem e depois coloc-las imersas em um
recipiente com lcool etlico comercial e tampa. Voc vai retir-las e sec-las no momento do uso;
secar com gaze as lminas que vo ser utilizadas. Pegue as lminas pela borda fosca para no
engordur-las novamente;
2. forre a bancada com papel toalha ou outro capaz de absorver respingos;
3. providencie os materiais para preparar e fixar o esfregao, e organize tudo na bancada de forma a assegu-
rar um fluxo de trabalho lgico e seguro. Mantenha na bancada papel toalha ou jornal e fenol a 5%, para
cobrir os respingos antes da desinfeco.
4. coloque enfileirados, na sua frente, os potes das amostras que vai processar primeiro. Siga o nmero de
ordem delas. Para evitar trocas, recomenda-se processar no mximo 12 amostras de cada vez;
5. identifique uma lmina para cada amostra. Para isso, escreva, com lpis grafite, na borda fosca da lmina o
mesmo nmero colocado no corpo do pote. Coloque cada lmina identificada exatamente em frente
ao pote da amostra com o nmero correspondente;
6. coloque, entre voc e as amostras, uma bandeja de inox forrada com papel absorvente. Essa bandeja ser
sua rea de trabalho para preparar cada esfregao;
Se estiver trabalhando fora da cabine de segurana biolgica, acenda o bico de Bunsen entre
voc e a bandeja. Mantenha a chama acesa at o final dos procedimentos. Cuidado para no
se queimar!
7. coloque, em cima da bandeja, somente a lmina e o pote da amostra que vai processar. Para evitar a troca
de resultados, s continue depois de verificar se a lmina e a amostra esto identificadas com o mesmo
nmero;
8. tire lentamente a tampa da amostra, para evitar a formao de aerossis, e coloque-a virada para cima,
na bandeja;
9. quebre ao meio um palito de madeira;
10. retire, com as duas pontas farpadas do palito, a partcula maior e mais purulenta da amostra e deposite-a
na lmina prximo borda fosca.
Figura 2 - Exemplo de retirada da partcula da amostra de escarro e colocao na lmina.
Quando existirem apenas pequenas partculas purulentas ou mucosas, voc deve pegar trs
pores ou mais, deposit-las na lmina e mistur-las com a ponta do palito.

11. distenda a amostra na lmina, com uma das partes do palito em posio horizontal. Faa movimentos de vai-e-
vem em cima da amostra, at obter um esfregao homogneo que cubra 2/3 da lmina, sem deixar espaos
vazios.
Figura 3 - Distenso da amostra
jamais aquea a lmina durante a preparao do esfregao. Esse procedimento uma fonte
importante de formao de aerossis no ambiente laboratorial e, alm disso, produz precipi-
tados granulosos que prejudicam a colorao e a deteco do bacilo.
Ateno
Esfregaos muito finos ou muito grossos dificultam a leitura e

podem levar a resultados falso negativos. Por isso, se houver excesso
de escarro na lmina, retire, com o mesmo palito, e devolva para o
pote. Se o esfregao ficar muito fino, pegue mais amostra e repita os
passos 10 e 11.
12. descarte as duas partes do palito, num recipiente com tampa. O recipiente para descarte pode ser de
metal, (uma lata, por exemplo), vidro ou uma caixa de papelo rgido. Coloque sempre um saco plstico
autoclavvel dentro do recipiente utilizado para descarte;
13. coloque a lmina, com o esfregao voltado para cima, para secar em temperatura ambiente, numa super-
fcie forrada com papel seco. Voc pode usar uma outra bandeja em cima da bancada. Cuidado para no
tocar na superfcie da lmina e remover o esfregao;
14. feche bem o pote da amostra, j utilizada, e coloque-o num espao reservado na bancada para as amostras
j trabalhadas;
15. repita os passos de 7 a 14, at processar todas as amostras;
16. guarde, em geladeira, as amostras processadas. Os potes com as amostras devem ficar guardados at a libera-
o dos resultados, para o caso de ser necessrio repetir a baciloscopia ou realizar a cultura.
Importante
Quando as lminas estiverem completamente secas, fixe o esfregao.

Como fixar o esfregao?
preciso fixar o esfregao, de acordo com os seguintes procedimentos:
1. pegue a lmina, com o esfregao voltado para cima, e passe-a rapidamente, por 3 vezes, sobre a chama
do bico de Bunsen;
2. coloque a lmina, com o esfregao voltado para cima, numa bandeja. As lminas devem ser colocadas
umas separadas das outras;
3. repita os procedimentos 1 e 2 at fixar todos os esfregaos processados;
Figura 4 - Fixao do esfregao
Ateno
Aquecimento excessivo pode danificar o bacilo e prejudicar a

leitura da lmina; aquecimento insuficiente pode impedir a fixao.
4. descarte o papel que est forrando a bancada de trabalho e faa a descontaminao seguindo os procedi-
mentos de biossegurana;
Depois da fixao, os esfregaos ficam aderidos s lminas e esto prontos para a colorao.
Em unidades de sade que apenas preparam e fixam os esfregaos, as lminas devem ser
acondicionadas, em caixa prpria, e enviadas ao laboratrio que realizar a colorao e a leitura.
Como transportar as lminas com esfregaos j fixados para o laboratrio que vai
fazer a colorao e a leitura?
O transporte dos esfregaos fixados deve ser feito em caixa plstica porta-lmina, bem vedada com fita
crepe e identificada com os nomes e endereos dos laboratrios destinatrio e remetente.
Figura 5 - Caixa plstica porta-lmina
Cuidado
Mesmo aps a fixao ainda podem existir bacilos viveis no

esfregao. Siga as normas de biossegurana para o transporte e iden-
tifique a caixa com o smbolo de risco biolgico.

Baciloscopia - colorao
Quais os mtodos de colorao recomendados na baciloscopia?

Recomenda-se a utilizao rotineira do mtodo de Ziehl-Neelsen, uma vez que ele possibilita a identificao
mais segura de BAAR; exige apenas microscpio ptico comum; rpido e de baixo custo.
No entanto, se forem examinadas mais de 50 amostras de escarro diariamente, pode-se optar pela utiliza-
o da Microscopia por Fluorescncia com Auramina O com o objetivo de triagem, para reduzir o tempo de leitura
dos exames negativos.
Nos casos positivos, corados com a auramina, os exames devero ser confirmados pelo mtodo de Ziehl-
Neelsen. Isso permitir a emisso do resultado de acordo com os critrios de leitura padronizados para o mtodo de
Ziehl-Neelsen, pela Organizao Mundial de Sade - OMS, que voc vai ver na continuao desse bloco.
Em que se baseia o mtodo de colorao de Ziehl-Neelsen?

Baseia-se na propriedade da lcool-cido resistncia. Veja na Figura 1:

Figura 1 - Representao esquemtica das etapas da colorao pelo mtodo de Ziehl-Neelsen
Observe que:
na etapa 1, adiciona-se a fucsina sobre o esfregao previamente fixado;
na etapa 2, faz-se o aquecimento at a emisso de vapores, por 3 vezes, para facilitar a penetrao da
fucsina;
na etapa 3, derrama-se o corante na pia e lava-se o esfregao com gua;
na etapa 4, faz-se a descolorao com lcool-cido e lava-se o esfregao com gua. Apenas os BAAR presentes no
esfregao retero a fucsina;
na etapa 5, adiciona-se azul de metileno;
na etapa 6, lava-se o esfregao com gua e faz-se a leitura.
Se houver BAAR na amostra eles ficaro vermelhos devido reteno da fucsina e sero visualizados micro-
scopicamente. O fundo azul no esfregao, faz o contraste para essa visualizao.
Se no houver BAAR na amostra, a fucsina ser retirada e todos os elementos do esfregao sero visualiza-
dos em azul.

Como corar os esfregaos pelo mtodo de Ziehl-Neelsen?
1. Providencie os materiais para corar, descorar e fazer a colorao de fundo. Organize tudo em cima da
bancada da pia;
2. coloque as lminas j fixadas no suporte para corar;
3. coloque papel de filtro num funil de vidro e filtre a fucsina fenicada a 0,3%, dentro de um frasco conta-gotas.
fundamental filtrar a fucsina, na hora do uso, para retirar os cristais que se formam nela e prejudi-
cam a colorao dos esfregaos.
Filtre apenas o volume suficiente para cobrir os esfregaos das lminas que voc vai corar;
4. cubra, com a fucsina filtrada, todo o esfregao de cada uma das lminas;
5. enrole um chumao de algodo na ponta de uma haste de metal, com proteo contra aquecimento na
outra extremidade;
6. umedea o algodo com lcool. Cuidado para no escorrer lcool na haste. Mantenha o lcool longe do
fogo;
7. coloque fogo no algodo umedecido com lcool;
8. aquea a fucsina do seguinte modo:
a) passe a chama lentamente por debaixo das lminas, at ocorrer a emisso de vapores. Retire a chama
imediatamente e marque o tempo de 5 minutos;
b)Passe novamente a chama por debaixo das lminas at a emisso de vapor. Repita esta operao mais uma vez.
No total, voc passa a chama lentamente por debaixo da lmina at a emisso de vapores, por 3
vezes, no tempo mximo de 5 minutos.
Figura 2 - Aquecimento da fucsina na lmina
Figura 1 - Colocao da fucsina na lmina
Ateno
A fucsina no pode ferver e deve cobrir o esfregao durante todo o

processo. Se ela evaporar ou derramar durante o aquecimento, co-
loque mais fucsina sobre o esfregao e continue o procedimento. Se
a fucsina ferver ou ficar seca na lmina, sero formados cristais que
podero ser confundidos com bacilos na leitura.

9. incline cada uma das lminas e derrame a fucsina na pia. Cuidado para no respingar fucsina de uma
lmina nas outras.
10. abra devagar a torneira at obter um filete de gua corrente;
11. deixe a gua cair sobre o nmero da lmina, para que escorra suavemente sobre o esfregao at eliminar
todo o corante.
Figura 3 - Lavagem da fucsina em gua corrente
Cuidado
Jatos fortes de gua podem desprender o esfregao.
12. lave a lmina tambm no lado oposto ao esfregao para tirar a fucsina;
13. coloque a lmina de volta no suporte com o esfregao voltado para cima.
Como descorar o esfregao pelo mtodo de Ziehl-Neelsen?

1. Cubra completamente todas as lminas com a soluo de lcool-cido a 3% e espere 1 minuto;
2. segure pela borda numerada e incline a lmina at derramar a soluo de lcool-cido na pia;
3. deixe o filete de gua corrente cair sobre o nmero da lmina, para que escorra suavemente sobre o es-
fregao eliminando o lcool-cido;
Ateno
Os procedimentos de 1 a 3 no devem ultrapassar 3 minutos no trabalho

com 12 lminas.

4. verifique se os esfregaos ficaram descorados. Considera-se descorado o esfregao que apresentar colo-
rao esbranquiada ou levemente rosada.
Figura 4 - Esfregao descorado
Se algum esfregao ainda no estiver descorado, faa uma segunda descolorao de acordo com os se-
guintes procedimentos:
a) cubra novamente a lmina com lcool-cido;
b) pegue, com a pina, a lmina pela extremidade numerada e faa, no mximo por 1 minuto, um movi-
mento de vai-e-vem inclinando de um lado para o outro, de modo que a soluo de lcool-cido v de-
scorando o esfregao. Quando o esfregao adquirir a cor ligeiramente rosada, lave a lmina com um filete de gua
Ateno
Se na segunda descolorao o esfregao no ficar descorado descarte essa

lmina e prepare um novo esfregao. Depois de descorar os esfregaos,
faa a colorao de fundo.

Como realizar a colorao de fundo?
1. Coloque papel de filtro num funil de vidro e filtre o azul de metileno a 0,3 % num frasco conta-gotas. Filtre
apenas o volume suficiente para cobrir o esfregao das lminas;
2. Cubra os esfregaos das lminas com o azul de metileno j filtrado. Espere 30 segundos;
Figura 5 - Lmina com azul de metileno.
3. derrame o azul de metileno na pia;

4. lave cada lmina em um filete de gua corrente;
Figura 6 - Lavao da lmina com azul de metileno.
5. umedea uma gaze com lcool etlico comercial, e limpe a lmina do lado contrrio ao esfregao.
Cuidado para no tocar no esfregao.
6. coloque cada uma das lminas para secar, em p, em uma estante de tubos forrada com papel absorvente, de
preferncia papel de filtro.
Figura 7 - Lminas em estante de tubos para secar depois da colorao de fundo
Ateno
A estante no deve ficar exposta luz solar. Quando as lminas estiverem

secas faa a leitura microscpica e a interpretao.
Lembre-se de limpar a pia depois da colorao.

Baciloscopia - Leitura e interpretao
dos resultados
Como os BAAR podem se apresentar na visualizao microscpica?

No mtodo Ziehl-Neelsen, alm da colorao vermelha, os bacilos podem se apresentar isolados, em grupos ou
fragmentados. Veja na Figura 1:
Figura1 - Formas de apresentao dos BAAR na visualizao microscpica.

Observe que:
os BAAR, mesmo isolados, podem estar longitudinalmente muito prximos, em uma disposio que lem-
bra um acento circunflexo. Essa imagem indicativa da etapa final da multiplicao bacilar;
a quantidade de bacilos existentes nos agrupamentos varivel. Lembre-se: o aspecto agregado dos
bacilos devido produo do "fator corda";
o aspecto fragmentado encontrado com freqncia nas baciloscopias de controle de tratamento. A fragmenta-
o decorrente, principalmente, da perda da integridade da parede celular do bacilo, pela ao das drogas do
tratamento antituberculose ou tuberculostticos.
Quais os critrios para interpretao dos resultados da baciloscopia, padronizados
para o mtodo de Ziehl-Neelsen pela Organizao Mundial da Sade?
Em amostras de escarro, quando:
no so encontrados BAAR em 100 campos = relata-se o resultado como negativo;
so encontrados de 1 a 9 BAAR em 100 campos = relata-se apenas a quantidade de BAAR encontrada;
so encontrados de 10 a 99 BAAR, em 100 campos = relata-se o resultado como positivo +;
encontrada em mdia de 1 a 10 BAAR por campo, nos primeiros 50 campos observados = relata-se o
resultado como positivo ++;
encontrada em mdia mais de 10 BAAR por campo, nos primeiros 20 campos observados = relata-se
o resultado como positivo +++.
Em outras amostras, quando:
no so encontrados BAAR = relata-se o resultado como negativo;
so encontrados BAAR em qualquer quantidade, em 100 campos = relata-se o resultado como positivo.

Leitura e interpretao da baciloscopia - Mtodo Ziehl-Neelsen
Como fazer a leitura do esfregao?
Limpe o microscpio, objetivas e oculares, antes do uso.
Verifique se os materiais necessrios esto na mesa de leitura. Siga a ordem crescente de numerao das
lminas para fazer a leitura;
1. Verifique se os materiais necessrios esto na mesa de leitura. Siga a ordem crescente de numerao das
lminas para fazer a leitura;
2. registre, no papel quadriculado, o n da lmina e se para diagnstico ou controle do tratamento;
Figura 2 - Registro da leitura
No ANEXO 10 voc tem modelos de registros da leitura para impresso.
3. pingue uma gota de leo de imerso, prximo ao nmero e no centro da lmina. Voc vai fazer a leitura
em linha reta e no sentido horizontal;
Figura 3 - Gota de leo e sentido de leitura da lmina

Cuidado
Para no tocar o conta-gotas no esfregao. Se isso acontecer,
alguns bacilos podero ser transferidos para o leo e da para a prx-
ima lmina e serem causa de resultado falso positivo. Por isso, se ne-
cessrio, descarte todo o leo e limpe o conta-gotas lcool antes de
utiliz-lo novamente.
4. Coloque a lmina no charriot do microscpio;

5. gire o canho at que a objetiva de 10X esteja sobre a lmina, foque a imagem com os botes macro e
micromtricos;
6. ajuste a distncia entre as lentes oculares de acordo com a distncia entre seus olhos, de modo que voc enx-
ergue apenas uma imagem;
7. gire o boto para ajustar a altura do condensador e abra o diafragma para obter uma boa luminosidade;
8. troque a objetiva de 10X pela objetiva de 100X imergindo-a no leo;
9. aproxime a objetiva de 100X lentamente para no quebrar a lmina;
10. ajuste o foco com o boto micromtrico at que a imagem fique ntida. Durante toda a leitura voc deve
ir ajustando o foco apenas com esse boto;
11. divida mentalmente o campo microscpico, que voc est visualizando, em quatro quadrantes, utilizando
os nmeros 12, 3, 6 e 9, como no mostrador de um relgio.
12
9 3
6
Figura 4 - Diviso imaginria do campo microscpico
12. inicie a leitura pelo quadrante superior direito, entre os nmeros 12 e 3. Utilize o boto micromtrico para
verificar a presena de BAAR na superfcie e em profundidade. Se voc encontrar bacilos neste quadrante,
conte quantos existem;
13. continue a leitura dos outros quadrantes no sentido dos ponteiros do relgio. Sempre que encontrar bacilos em um
quadrante, conte cada um deles e some ao nmero total de bacilos que voc encontrou nos outros quadrantes;
12
9 3
6
Figura 5 - Diviso imaginria do campo microscpico

14. anote no papel quadriculado o nmero total de bacilos que foram encontrados nesse campo:
15. divida mentalmente o prximo campo microscpico em quatro quadrantes, faa a leitura e anote os
resultados no papel quadriculado, da mesma maneira que voc fez no primeiro campo;
Ateno
Para separar um campo microscpico do prximo sem que fiquem sobrepostos, o ponto
chave o do nmero 3.
Qualquer estrutura observada nesse ponto, uma clula, uma fibra, um bacilo, dever ficar
imediatamente antes do nmero 9 do campo seguinte.
Campo anteriror Campo seguinte
16. faa a leitura e anote os resultados at completar 20 campos, seguindo os mesmos procedimentos;
17. some os resultados dos 20 campos e calcule a mdia;

18. analise a mdia obtida para os resultados nos 20 primeiros campos observados, considerando as se-
guintes possibilidades:
se a mdia for de mais de 10 BAAR por campo, estar encerrada a leitura. Essa amostra positiva +++;
Diagnstico X Controle
Lmina n 122 Cd: ______________

15 81 01 37 12 18 94 6
25 19 12 30 18 10 13 11 81 3
N DE BACILOS: 261
N DE CAMPOS: 20
RESULTADO (CRUZES): +++
MDIA = 261 = 13,05

20
Figura 6 - Papel quadriculado com resultado da leitura de 20 campos e clculo da mdia
se a mdia for inferior a 10 BAAR por campo ou no contiver BAAR, continue a leitura at comple-
tar 50 campos.
20. some os resultados dos 50 campos e calcule a mdia;
21. analise a mdia obtida para os resultados dos 50 campos observados, considerando as seguintes pos-
sibilidades:
se a mdia for de 1a10 BAAR por campo, estar encerrada a leitura. Essa amostra positiva ++;
Figura 7 - Papel quadriculado com resultado da leitura de 50 campos e clculo da mdia.

se a mdia for inferior a 1 BAAR por campo ou no contiver BAAR, continue a leitura at completar
100 campos.
23. some e analise os resultados dos 100 campos considerando as seguintes possibilidades:
se for encontrado um total de 10 a 99 BAAR nos 100 campos examinados, estar encerrada a leitura. Essa
amostra positiva +;
se for encontrado um total de 1 a 9 BAAR nos 100 campos examinados, relate o nmero exato de
BAAR encontrados;
se no forem encontrados BAAR, nos 100 campos observados, essa amostra negativa.
Figura 8 - Papel quadriculado com resultado negativo da leitura de 100 campos
Repita todos os procedimentos de leitura e interpretao da

baciloscopia para cada uma das lminas a serem lidas.
Ateno
Limpe bem a lente da objetiva com papel absorvente cada vez que
terminar a leitura de uma lmina positiva. Lembre-se: voc pode carregar frag-
mentos de esfregao na lente de uma lmina para outra. Isto pode ser causa de
resultado falso positivo.

Como proceder com as lminas quando terminar a leitura?
1. Limpe as lminas, depois de lidas, pressionando levemente o esfregao com papel absorvente. Cuidado para
no remover o esfregao;
2. coloque as lminas, organizadas em seqncia numrica, dentro de uma caixa porta-lminas, identificada
com o smbolo de risco biolgico, o ms e o nome do laboratrio e do municpio;
3. Conserve a caixa com as lminas, em temperatura ambiente, por 3 meses. Durante este perodo o Laboratrio
Central -LACEN ou regional, pode solicitar que elas sejam enviadas para o controle de qualidade externo. O envio
feito junto com a "Relao de Lminas para Controle de Qualidade", formulrio padronizado que voc encontra
no Anexo 6. Veja mais orientaes no bloco "Controle de Qualidade".
Biossegurana
Descarte todos os potes com o resto das amostras (que voc guardou
na geladeira) e todo o lixo produzido durante os procedimentos, de acordo
com as orientaes de biossegurana.
Como fazer o registro dos resultados?

Faa o registro dos resultados, de acordo com os seguintes procedimentos:
1. organize as solicitaes de exame em ordem numrica;
2. transcreva o resultado anotado no quadriculado para sua respectiva requisio; Muita ateno na tran-
scrio, para no haver troca de resultados;
3. confira o resultado transcrito em cada requisio;
4. pegue as solicitaes e faa o registro dos resultados no livro de registro de baciloscopia. Os resultados
positivos devem ser registrados em vermelho para permitir uma rpida localizao. Veja um exemplo, no
Anexo 3;
5. confira a transcrio do registro e coloque a data da liberao do exame no livro;
6. date, assine e encaminhe, imediatamente, a requisio com o resultado transcrito para entrega ao paci-
ente ou unidade de sade solicitante.
O laboratrio dever enviar para o laboratrio de referncia, o Informe Mensal da Baciloscopia de Tubercu-
lose, formulrio padronizado, que voc encontra no Anexo 7. Alm disso, todo laboratrio deve notificar os casos
positivos para BAAR Vigilncia Epidemiolgica local.
Como realizar a baciloscopia pelo mtodo da fluorescncia?

No Anexo 8, voc encontra orientaes para corar, descorar, fazer a colorao de fundo, a leitura e a interpretao
pelo mtodo da fluorescncia.
dever do laboratrio: liberar o resultado da baciloscopia em no mximo 24 horas.
Ateno
um direito do paciente: receber seu resultado o mais rpido possvel e,

se o escarro estiver positivo, iniciar o tratamento imediatamente para que
possa recuperar sua sade e no contaminar outras pessoas.

Anexo 6
Relao de lminas para controle de qualidade externo
Programa de Garantia da Qualidade da Baciloscopia Relao de Lminas para Controle

de Qualidade Externo
Laboratrio:
Municpio: UF:
Ms: Ano:
Resultados do controle de
Informao do laboratrio local
qualidade externo
Baciloscopia Numerao
N da lmina Resultado (1) Obs. (2) Esfrega (5) Colorao (6)
(3) (4)
REA PARA DOBRAR
Total de baciloscopias realizadas:
(1) Resultado da Baciloscopia no laboratrio local: anotar negativo ou positivo (em cruzes), ou
n de bacilos = ou < que 9
(2) Observaes: anotar o tipo de amostra quando no escarro;
(3, 4, 5 e 6): campos preenchidos pelo supervisor

O espao marcado como rea para dobrar deve ser dobrada e grampeada, de modo que o
nmero da lmina cubra o resultado. Faa isso antes do envio ao laboratrio supervisor, para
que a releitura das lminas seja feita sem a informao prvia do resultado.

Baciloscopia e biossegurana
Quais os requisitos de biossegurana para as instalaes do laboratrio que realiza

diagnstico da tuberculose?
As instalaes do laboratrio que realiza diagnstico da tuberculose, devem atender aos seguintes requisitos:
1. requisitos gerais exigidos para qualquer laboratrio de diagnstico, ou seja, paredes, pisos e bancadas
lavveis e apenas os equipamentos e materiais necessrios aos procedimentos, para facilitar a limpeza e
a descontaminao alm de evitar acidentes, como voc pode ver no curso Telelab "Biossegurana em
unidades hemoterpicas e laboratrios de sade pblica";
2. requisitos especficos para o diagnstico laboratorial da tuberculose. Esses requisitos variam de acordo
com o exame realizado, ou seja, se baciloscopia e/ou cultura.
Quais os requisitos de biossegurana especficos para as instalaes do laboratrio

que realiza a baciloscopia?
As instalaes do laboratrio que realiza a baciloscopia devem atender, no mnimo, aos seguintes requisitos
de biossegurana:
1. rea de recepo de amostras o mais perto possvel da sala de procedimentos;
2. rea equipada com autoclave para descontaminao de materiais;
3. reas para procedimentos limpos como: atividades administrativas, armazenamento de materiais;
4. reas para armazenamento e preparo de corantes, desinfetantes e solues, equipada com capela de
exausto qumica;
Capela de exausto qumica: um equipamento que protege os profissionais na manipulao

de substcias que liberam vapores txicos ou irritantes.
Ateno
Jamais prepare os corantes e as outras solues fora da capela de

exausto qumica. O fenol irritante para os olhos e cancergeno. Se
o laboratrio no dispuser dessa capela, os corantes e o fenol a 5%
devero ser preparados e distribudos pelo laboratrio de referncia.
5. ambiente adequado para a preparao do esfregao. Esse ambiente pode ser conseguido de dois modos:
sala de procedimentos equipada com cabine de segurana biolgica. Sempre que possvel, deve-se utilizar
a cabine para a preparao do esfregao.
bancada instalada em sala arejada e apropriada para a preparao do esfregao.

Que condies deve atender a sala da preparao do esfregao?
Sala ventilada, com janelas que possibilitem a renovao natural de ar e a entrada de luz solar. A localizao
da sala e o posicionamento das janelas, porta e bancada devem facilitar a circulao do ar e a disperso dos aero-
ssis, diminuindo o risco de contaminao para o tcnico, sem expor as pessoas que esto em outras reas.
Figura 1 - Exemplo de planta da sala de baciloscopia
Observe que o ar potencialmente contaminado sai pela janela e se dispersa numa rea isolada, no exterior da
unidade. O ideal que esta sala seja exclusiva para a baciloscopia.
Onde no houver condies apropriadas de ventilao, recomenda-se tambm a instalao de um exaustor, com
capacidade de 6 a 12 ciclos por hora, para facilitar a retirada do ar contaminado do ambiente laboratorial.
Como diminuir o risco de contaminao por aerossis contendo o bacilo, durante a

baciloscopia do escarro?
Para diminuir o risco de contaminao pelos aerossis formados durante a manipulao da amostra, fun-
damental que as instalaes do laboratrio estejam de acordo com os requisitos mnimos de biossegurana, j
apresentados.
importante destacar que quando a baciloscopia realizada fora da cabine de segurana biolgica, os aero-
ssis produzidos durante a manipulao da amostra se espalham no ambiente. Quanto mais arejado estiver o
ambiente e quanto mais rigorosamente os profissionais responsveis pelo trabalho, tcnicos e chefias, observarem
as medidas de biossegurana recomendadas, menor o risco de contaminao.
Na cabine de segurana biolgica, os aerossis formados se concentram e ficam retidos nos filtros, no se
espalhando no ambiente laboratorial. No entanto, o uso inadequado da cabine, com excesso de materiais e equi-
pamentos em seu interior, e a falta de manuteno favorecem a sada de aerossis para o ambiente laboratorial.
Nesse caso, a cabine deixa de proteger o profissional e o ambiente, e o risco de contaminao aumenta, uma vez que
salas com esse tipo de equipamento no possuem fluxo de ar constante.

Utilize sempre EPI - equipamentos de proteo individual
filtro de eficincia igual ou maior do
que 95% para reter partculas de 0,3
micra
ajustada ao rosto
Figura 2 - Caractersticas da mscara apropriada para a baciloscopia

Ateno:
s utilize mscaras com filtro aprovado para reter partculas de 0,3 micra,
com eficincia igual ou maior do que 95%; e
que esteja bem ajustada ao seu rosto, sem deixar vos para a entrada de ar.
Que medidas de biossegurana devem ser observadas na recepo da amostra no

laboratrio?
O uso de luvas, mscaras e aventais deve sempre fazer parte da rotina de recebimento, uma vez que os potes
ou recipientes com amostras de escarro so contaminados em sua parte externa. Uma recepo envidraada, que
permita apenas a passagem da amostra e da requisio de exames, representa uma medida de proteo comple-
mentar. As amostras devem ser colocadas em uma bandeja com as requisies ao lado.
Que medidas de biossegurana devem ser observadas durante o transporte das amostras
da recepo at a rea de procedimentos ou de exames?
importante adotar as seguintes medidas de biossegurana:
1. transportar as amostras em caixa prpria com tampa, preferencialmente de metal, para que possa ser
descontaminada posteriormente por mtodos qumicos (fenol 5%) ou fsicos (autoclave). Em caso de aci-
dente, o risco de contaminao fica limitado caixa de transporte;
2. escolher o caminho mais curto e com menos obstculos.
Que medidas de biossegurana especficas devem ser adotadas durante a realizao

da baciloscopia?
uso de EPI para a realizao dos procedimentos;
ambiente arejado e bico de Bunsen permanentemente aceso entre o tcnico e a amostra ou uso de cabine
de segurana biolgica.
Alm dessas, fundamental tambm a adoo das seguintes medidas:
1. manter um frasco com fenol a 5%, fechado, na bancada, prximo a rea de trabalho, para as desinfeces
e a conteno de acidentes, quando necessrio;
2. manipular amostras cuidadosamente, ou seja, sem pressa e sem movimentos bruscos para evitar a pro-
duo de aerossis e o derrame para fora do recipiente;
3. utilizar palitos de madeira para a preparao do esfregao. Jamais utilize ala de platina, pois a flambagem
da ala o procedimento que mais produz aerossis;
4. manter na bancada um recipiente, de metal, vidro ou caixa de papelo rgido, com tampa e um saco auto-
clavvel dentro, para descarte de material - palitos, algodo;
5. colocar os potes de escarros, os papis utilizados durante o procedimento para forrar a bancada e as
bandejas, etc. num saco de autoclavao ou caixa com tampa que resista a autoclavao;
6. autoclavar o material reutilizvel (bandejas, etc.) e o lixo produzido, antes de encaminhar para o descarte
final.
Biossegurana
Descontamine a bancada do laboratrio e a Cabine de Segurana

Biolgica com gaze embebida em lcool 70% (p/p), no inico e no tr-
mino do procedimento..
1. Cubra imediatamente o local onde o escarro est derramado para evitar que a produo de aerossis con-
tinue. Utilize qualquer papel absorvente disponvel, como por exemplo, papel toalha ou jornal;
2. derrame sobre o escarro j coberto, fenol a 5%, at que tudo fique bem molhado e deixe em repouso pelo
menos por 5 minutos;
3. recolha com um papel absorvente os materiais envolvidos no acidente (potes e o material usado na lim-
peza); coloque tudo dentro de uma lata com tampa ou caixa de papelo resistente com tampa ou de um
saco de lixo autoclavvel;
4. encaminhe para autoclavao e depois para descarte final;
5. limpe o local do acidente.

Mtodo de colorao fluorescente
Reagentes para o mtodo de colorao fluorescente
Auramina fenicada
Para o preparo de 1 litro de Auramina fenicada necessrio que sejam preparadas, separadamente, uma
soluo de Auramina (soluo A) e uma soluo de Fenol aquoso (soluo B).
Materiais necessrios:
balana semi-analtica 1 balo volumtrico de 100ml
3 provetas: 1 de 100 ml; 200ml
papel de pesagem e 1 esptula
e 1 de 1.000ml
1 balo de fundo chato
funil
de 1.000ml
Soluo da auramina - Soluo A

Frmula:
lcool etlico PA (95%) - 100mL
Auramina O - 1g
Preparo da auramina (soluo A)
a) Pese 1 grama de auramina-O e coloque em um balo volumtrico de 100 ml;

b) coloque 70 ml de lcool etlico 95% PA em uma proveta de 100 ml;
c) adicione aos poucos o lcool auramina;
d) agite o balo suavemente at completa dissoluo;
e) coloque no balo o restante do lcool etlico 95% PA, agite e guarde fechado.
Fenol aquoso (soluo B)

Frmula:
Cristais de fenol - 30g
gua destilada - 870mL
Preparo do fenol aquoso (soluo B)

a) pese 30g de fenol e coloque em um balo de fundo chato de 1.000 ml;
b) coloque 700 ml de gua destilada em uma proveta de 1.000 ml;
c) adicione lentamente a gua no fenol;
d) aquea em banho-maria at que o fenol dissolva completamente;
e) retire do banho-maria, acrescente 170 ml de gua destilada com o auxilio de uma proveta de at 200 ml e
deixe esfriar temperatura ambiente.

Preparo final da soluo de auramina fenicada
a) misture todo volume da soluo B na soluo A;

b) coloque em um frasco escuro, bem vedado e com rtulo contendo as seguintes informaes: nome do coran-
te, data da preparao e de validade.
Auramina fenicada
Datas: preparao validade
Ateno: Esta soluo pode ser usada at

3 meses aps a preparao.
c) armazene a soluoauramina ao abrigo da luz e temperatura ambiente.
Soluo descorante de lcool-cido - (auramina)
1 balo fundo chato de 1.000 ml 1 pipeta de 10 ml
1 proveta de 1.000 ml 1 funil
Frmula:
lcool etlico a 70% - 1000mL
cido clordrico concentrado - 5 mL
Preparo do lcool cido
a) Com auxlio de uma proveta coloque 1000mL de lcool a 70% em um balo de fundo chato;
b) adicione lentamente 5 ml de cido clordrico ao lcool, com uma pipeta de 10 ml. Cuidado: deixe o
cido clordrico escorrer lentamente pelas paredes do balo de fundo chato que contm o lcool;
c) agite o balo suavemente;
d) coloque a soluo descorante de lcool-cido em um frasco bem vedado e identificado:
Soluo descorante de lcool-cido

(auramina)

.
e) armazene a soluo de lcool-cido temperatura ambiente.

Soluo de permanganato de potssio- (auramina)
Balana semi-analtica 1 proveta de 100ml
Papel de pesagem Papel de filtro comum
1 esptula 1funil
1 balo volumtrico de 1.000 ml
Frmula:
permanganato de potssio - 5g
gua destilada - 1000mL
Preparo do permanganato de potssio
a) pese 5 gramas de permanganato de potssio e coloque em um balo;

b) com auxlio de uma proveta, adicione parte da gua destilada ao permanganato de potssio. Agite;
c) continue colocando a gua e agitando at a completa dissoluo do permanganato e at utilizar todo
o volume de gua;
d) coloque a soluo de permanganato em um frasco mbar bem vedado e identificado:
Soluo de permanganato de potssio

(auramina)

.
e) armazene o frasco com a soluo de permanganato ao abrigo da luz e temperatura ambiente.

Soluo descontaminante de fenol a 5%
1 balo volumtrico 1.000 ml 1 proveta de 1.000ml
Fenol aquoso a 5% (soluo B)

Frmula:
gua destilada qsp - 1000mL
Preparo do fenol a 5%
a) pese 50 gramas de fenol e coloque em um balo volumtrico de 1.000 ml;

d) coloque para aquecer em banho-maria a 56C at que o fenol dissolva completamente;
e) retire do banho-maria, acrescente gua destilada at completar 1.000 ml;
f) deixe esfriar em temperatura ambiente.
g) coloque a soluo em um frasco com tampa de rosca e identificado:
Soluo descontaminante de
fenol a 5%

.

Soluo de hidrxido de sdio a 4%
1 balo volumtrico 1.000 ml 1 proveta de 1.000ml
hidrxido de sdio a 4%
Frmula:
hidrxido de sdio - 40g
Preparo do hidrxido de sdio a 4%
a) pese 40 g de hidrxido de sdio e coloque no balo volumtrico de 1.000 ml;

b) com auxlio de uma proveta adicione lentamente 700mL de gua destilada ao balo contendo o hidrxido
de sdio.;
c) agite o balo ate que o hidrxido dissolva completamente;
d) coloque o restante da gua destilada no balo at a quantidade suficiente para (qsp) 1000mL;
e) tampe esse balo com uma bucha de algodo, coloque papel alumnio ao redor e autoclave a 121 C, por
15 minutos;
f) deixe esfriar em temperatura ambiente. Assepticamente coloque em um frasco estril, com tampa de rosca
e identificado:
Hidrxido de sdio a 4%

.

Mtodo de Colorao de Ziehl-Neelsen
Biossegurana
A fucsina, o fenol, a soluo descorante de lcool-cido e o azul de

metileno devem ser preparados, obrigatoriamente, em capela de
exausto qumica e com a utilizao de EPIs apropriados.
Reagentes do Mtodo de Colorao de Ziehl-Neelsen
Fucsina fenicada a 0,3%

Para obter 1 litro de fucsina fenicada a 0,3% necessrio que sejam preparadas, separadamente, uma soluo
de fucsina bsica (soluo A) e uma soluo de fenol aquoso (soluo B).
Equipamentos e materiais necessrios

balana semi-analtica 2 provetas de 100 e 1.000 ml
banho-maria papel de pesagem e esptula
2 bales volumtricos de 1.000 ml funil e papel de filtro comum
Fucsina bsica - Soluo A

Frmula:
lcool etlico PA (95%) - 100mL
Fucsina bsica - 3g
Ateno
Trs gramas a quantidade indicada na frmula, desde que a
fucsina tenha no mnimo 88% de concentrao de corante. Se a
concentrao for menor, preciso calcular o fator de correo do
peso e depois multiplic-lo por 3 gramas, para encontrar a quanti-
dade de fucsina necessria obteno de um corante adequado.
1
Fator de correo do peso =
equivalente decimal da concentrao do corante
percentual de concentrao do corante

Equivalente decimal =
100
Correo do peso da fucsina = 3g x equivalente decimal

Por exemplo: fucsina em p com concentrao do corante = 75%
75 = 0,75
100
Fator de correo = 1 = 1,33

0,75
Correo do peso da fucsina = 3g x 1,33 = 3,99g
Neste exemplo, preciso pesar 3,99g de fucsina para preparar a soluo A.
Preparo da fucsina bsica (soluo A)
a) pese 3g de fucsina bsica ou a quantidade corrigida.

b) coloque a fucsina bsica pesada em um balo de 1.000ml;
c) coloque 100 ml de lcool etlico 95% PA em uma proveta.Recomenda-se o lcool etlico 95% PA porque ele dissolve
melhor a fucsina;
d) adicione aos poucos todo o volume de lcool etlico sobre a fucsina;
e) agite o balo suavemente at a completa dissoluo da fucsina.
Fenol aquoso a 5% (soluo B)

Frmula:
Preparo do fenol aquoso a 5% (soluo B)

a) pese 50 gramas de fenol e coloque em um balo volumtrico de 1.000 ml;
d) coloque para aquecer em banho-maria a 56C at que o fenol dissolva completamente;
e) retire do banho-maria, acrescente gua destilada at completar 1.000 ml;
f) deixe esfriar em temperatura ambiente.

Preparo final da soluo de fucsina fenicada a 0,3%
a) Com auxlio de uma proveta transfira 900 ml do fenol aquoso a 5% (soluo B) para o balo contendo
a fucsina bsica (soluo A) e agite a mistura. Reserve os 100mL restantes do fenol aquoso a 5%.
b) tampe a boca do balo com papel alumnio e deixe repousar por 24 horas;
c) filtre, em funil com papel de filtro, diretamente em frasco mbar de 1.000 ml j rotulado com as se-
guintes informaes:
Fucsina fenicada a 0,3%

FILTRE ANTES DE USAR
Ateno: este corante pode ser usado at

d) armazene a fucsina fenicada a 0,3% ao abrigo da luz e temperatura ambiente.
Ateno
Os 100 ml do fenol aquoso (fenol a 5%) que sobraram podem ser

utilizados como soluo descontaminante.
Soluo descorante de lcool - cido a 3%
1 balo volumtrico 1.000 ml 1 proveta de 1.000 ml
1 proveta de 100 ml 1 funil
Frmula:
lcool etlico comercial - 970mL
cido clordrico concentrado - 30mL
Preparo de lcool - cido a 3%
a) Com auxlio de uma proveta coloque 970mL de lcool no balo volumtrico de 1.000 ml;
b) coloque 30 ml de cido clordrico em uma proveta de 100 ml;
c) adicione o cido clordrico, lentamente, deixando escorrer pelas paredes do balo volumtrico que
contm o lcool. Cuidado: sempre adicione o cido cuidadosamente sobre lcool, pois esta mistura
aquece;
d) agite o balo suavemente;

e) coloque o lcool-cido, com o auxlio de um funil, em um frasco de 1.000 ml rotulado com as seguintes
informaes:
lcool - cido a 3%

f) armazene essa soluo em temperatura ambiente.
Azul de metileno a 0,3%
balana semi-analtica 1 proveta de 100 ml
papel de pesagem e 1 esptula 1 funil e papel de filtro comum
1 balo volumtrico de 1.000 ml
Frmula:
Azul de metileno - 3g
Ateno
Trs gramas a quantidade indicada na frmula, desde que o
azul de metileno tenha no mnimo 82% de concentrao de
corante. Se a concentrao for menor, preciso calcular o fator de
correo do peso e depois multiplic-lo por 3 gramas, para encon-
trar a quantidade de azul de metileno necessria obteno de um
corante adequado.
1
Fator de correo do peso =
equivalente decimal da concentrao do corante
percentual de concentrao do corante

100
Correo do peso da fucsina = 3g x equivalente decimal

Preparo de azul de metileno a 0,3%
a) pese 3g de azul de metileno ou a quantidade corrigida e coloque em um balo volumtrico de 1.000
ml;
b) coloque gua destilada em uma proveta 100 ml;
c) adicione a gua destilada ao azul de metileno;
d) agite o balo suavemente at completa dissoluo.
e) complete o volume com gua destilada em quantidade suficiente para (qsp) 1000mL. Agite bem.
f) filtre, em funil com papel de filtro, diretamente em um frasco mbar de 1.000 ml j rotulado com as
seguintes informaes:
Azul de metileno a 0,3%

FILTRE ANTES DE USAR
Ateno: este corante pode ser usado at

g) armazene a soluo de azul de metileno ao abrigo da luz e temperatura ambiente.

Referncias bibliogrficas
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WORD HEALTH ORGANIZATION. Laboratory Services in Tuberculosis Control: Part II microscopy. Italy: Word Health
Organization, 1998. 61 p.

Crditos e autoria
MINISTRIO DA SADE
Lilian Amaral Inocncio

Assessora Tcnica da Unidade de Laboratrio do PN DST/AIDS - MS
Autores:
Creusa Lima Campelo
Francisco Duarte Vieira
Jlia Ignez Salem
Maria Alice da Silva Telles
Roslia Maia
Susana Beatriz Vianna Jardim
Wanir Jos Barroso
Maristela Arantes Marteleto (pedagogia)
Colaboradores:
Ademir Albuquerque Gomes
Daisy Nakamura Sato
Maria Lcia Fernandes Penna
Maria Madileuza Carneiro Neves
Moiss Palaci
Helosa da Silveira Paro Pedro
Eliana Cardoso Vieira

Coordenao de Poltica Nacional de Sangue e Hemoderivados
Miriam Franchini
Coordenadoras do Projeto TELELAB - Srie 3
Simone Monzani Vivaldini

Cludia Beatriz Oliveira
Coordenadoras do TELELAB - Reviso

Tuberculose: formas de transmissão e diagnóstico laboratorial

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Homenagens e agradecimentos

Laboratrio Central de Sade Pblica do Cear - LACEN-CE

Ao Laboratrio Central de Sade Pblica do Distrito Federal,

a Maria do Carmo Gomes Pinheiro e Fbio Toms de Souza, pelo apoio

Os responsveis pela implantao do TELELAB empenharam toda

Maringela Batista Galvo Simo

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Quadro 1 - Recomendaes para realizao da Baciloscopia e/ou Cultura

Na Tuberculose obrigatria a realizao simultnea da baciloscopia e

Tuberculose - Diagnstico Laboratorial - Baciloscopia 6

Em que se baseia a obrigatoriedade da baciloscopia para o diagnstico da tubercu-

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Tuberculose Pulmonar Tuberculose Extrapulmonar

Tuberculose - Diagnstico Laboratorial - Baciloscopia 9

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9 Descolorao 10 Lavagem 11 Colorao de fundo

12 Lavagem 13 Secagem (temperatura ambiente)

17 Registro dos resultados 18 Conferncia e liberao dos resultados

Figura 1 - Etapas da Baciloscopia

Tuberculose - Diagnstico Laboratorial - Baciloscopia 10

Que recipiente deve ser utilizado para a coleta do escarro?

Quantas amostras de escarro devem ser coletadas para diagnstico?

Tuberculose - Diagnstico Laboratorial - Baciloscopia 11

Qual o procedimento de coleta quando o paciente tem pouca secreo e no con-

Coleta de escarro por induo

Tuberculose - Diagnstico Laboratorial - Baciloscopia 12

Quais os procedimentos ao receber as amostras de escarro?

se o envio ao laboratrio for realizado no mximo em 24 horas, as amostras de escarro podero

Utilize equipamentos de proteo individual - (EPI) e manipule as

Como transportar as amostras de escarro da recepo para o laboratrio?

grades Internas para

Tuberculose - Diagnstico Laboratorial - Baciloscopia 13

1. conferir cada uma das solicitaes com a amostra correspondente;

Se o laboratrio estiver localizado em outro servio preciso

Tuberculose - Diagnstico Laboratorial - Baciloscopia 14

Como receber e registrar amostras no laboratrio?

anote esse fato na requisio correspondente;

Figura 1 - Aspectos observados nas amostras de escarro

6- registre o aspecto observado no escarro, no campo apropriado da requisio correspondente;

Tuberculose - Diagnstico Laboratorial - Baciloscopia 15

O laboratrio deve processar a amostra de escarro no mesmo

As amostras de escarro coletadas para controle do tratamento de-