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Microscopio ptico el objetivo.

Esta parte del microscopio consiste bsicamente en un


En el microscopio ptico la muestra es iluminada mediante luz visible. Esto conjunto de lentes que reciben la luz proveniente de la muestra y permiten
significa que existe un foco de luz apuntando hacia la muestra. Esa misma aumentar la imagen observada. Por ltimo, el ocularampla la imagen
luz es conducida a travs del objetivo y del ocular hasta llegar a formar la proveniente del objetivo y es a travs de l que se puede observar
imagen en el ojo del observador. Este es el tipo de microscopio ms finalmente la muestra.
habitual pero su resolucin est limitada por la difraccin de la luz. En cuanto al sistema mecnico hay en primer lugar una base o pie que
El aumento mximo que se puede obtener con este tipo de microscopio permite mantener el microscopio en posicin estable. El brazo es la
alcanza alrededor de 1500x estructura principal del microscopio y conecta la base con el sistema
Partes del microscopio ptico ptico. El sistema mecnico incluye tambin la platina, es decir, la pieza
horizontal donde se coloca la muestra. La platina no est conectada de
En un microscopio ptico podemos distinguir entre el sistema ptico y el
forma fija con el brazo sino que su posicin se puede regular mediante
sistema mecnico. los tornillos macromtrico y micromtrico. El revlver es la parte del
microscopio donde estn montados los objetivos, normalmente 3 o 4, y
El sistema ptico incluye el conjunto de lentes y elementos de que puede girar para seleccionar el objetivo deseado. Finalmente,
manipulacin de la luz necesarios para generar una imagen el tubo conecta los objetivos con el ocular.
aumentada. Funcionamiento del microscopio ptico
El sistema mecnico proporciona el soporte estructural a los
anteriores elementos. La siguiente imagen muestra las partes
El principio de funcionamiento de un microscopio ptico se basa en la
esenciales del microscopio.
propiedad de algunos materiales que permiten cambiar la direccin de los
rayos de luz. Esto permite fabricar lentes capaces de hacer converger o
divergir los rayos de luz. Mediante la combinacin de estas lentes se
puede generar una imagen aumentada de cualquier objeto. El ejemplo
ms sencillo sera utilizar una sola lente, como en el caso de una lupa,
para producir una imagen aumentada de una muestra.
En el caso de un microscopio ptico se genera la imagen aumentada a
partir de distintas lentes. Algunas de ellas montadas en el objetivo del
microscopio y otras en el ocular. En primer lugar las lentes del objetivo
generan una imagen real aumentada de la muestra. Esta imagen real es a
continuacin ampliada mediante las lentes del ocular dando lugar a una
imagen virtual de tamao superior a la muestra original.

Partes del microscopio


Dentro del sistema ptico se incluye un foco (tambin denominado
fuente de luz) que emite rayos de luz dirigidos hacia la muestra. Antes de
llegar a la muestra los rayos atraviesan un condensador, la funcin del
cual es concentrar los rayos de luz sobre la preparacin a observar.
Habitualmente el condensador est acoplado con un diafragmapara
regular la cantidad de luz incidente. El siguiente elemento ptico es Representacin del funcionamiento del microscopio ptico
El otro elemento esencial para el funcionamiento del microscopio ptico es El principio de funcionamiento de un microscopio electrnico se basa en
la luz. Es por este motivo que los microscopios pticos vienen equipados utilizar electrones en lugar de luz visible. La longitud de onda con la que
con un foco de luz y un condensador para focalizar un haz de luz hacia la se mueve un electrn es inversamente proporcional a su velocidad. Esto
muestra. Una vez la luz ha atravesado la muestra, las lentes son las significa que si los electrones son acelerados a altas velocidades pueden
encargadas de desviar esta luz de forma correcta para generar la imagen obtenerse longitudes de onda muy cortas.
aumentada. Un microscopio electrnico utiliza esta idea para observar las muestras. A
un nivel muy bsico consiste en una fuente de electrones que son
acelerados a gran velocidad. Estos electrones impactan con la muestra
Microscopio electrnico de modo equivalente a como la luz podra iluminarla. Algunos de estos
En el microscopio electrnico la muestra no es iluminada con luz sino que electrones son reflejados por la muestra y otros la atraviesan. Mediante
se utilizan electrones. Los electrones impactan contra la muestra dentro la deteccin estos electrones es posible reconstruir una imagen de la
de una cmara de vaco. Existen diferentes tipos de microscopio muestra.
electrnico pero su principio de funcionamiento se basa siempre en Los microscopios pticos pueden clasificarse entre microscopios de luz
capturar los electrones dispersados u omitidos por la muestra y as poder transmitida y microscopios de luz reflejada. De un modo similar,
reconstruir una imagen. dependiendo de la tcnica utilizada en los microscopios electrnicos,
La ventaja principal de este tipo de microscopio es que puede obtenerse puede distinguirse entre microscopios electrnicos de
un nivel de aumento muy superior al del resto de microscopios. Sin transmisin y microscopios electrnicos de barrido.
embargo, es necesario preparar la muestra y colocarla en una cmara de A continuacin presentamos los elementos principales de este tipo de
vaco de modo que no es posible observar muestras biolgicas vivas. Los microscopio. Tambin presentamos brevemente la historia de este invento
dos tipos de microscopio electrnicos principales son el microscopio y una explicacin en detalle de los distintos tipos de microscopio
electrnico de barrido y el microscopio electrnico de transmisin. electrnico.
El microscopio electrnico Partes del microscopio electrnico
Microscopio electrnico en la universidad de Regensburg (Fuente: High
Contrast, Licencia: CC-BY-3.0-DE) Las partes principales de un microscopio electrnico incluyen aquellos
elementos utilizados para generar electrones y dirigirlos hacia la muestra.
El microscopio electrnico es un instrumento de gran utilidad en la Esto incluye:
investigacin cientfica gracias a su gran poder de aumento. Mediante este
Fuente de electrones
tipo de microscopio es posible aumentar imgenes de muestras hasta
niveles muy superiores a los del microscopio ptico.
Para entender cmo funciona un microscopio electrnico es necesario Es equivalente a la fuente de luz en un microscopio ptico. En este caso
definir algunos conceptos fsicos. Uno de estos conceptos es la longitud es necesario disponer de un emisor de electrones. En general se utiliza un
de onda. filamento de tungsteno. Este filamento es calentado de modo que la
Dada una onda peridica, la longitud de onda es la distancia entre dos energa de sus tomos y electrones aumenta. A partir de un cierto nivel
ciclos consecutivos. En el caso de la luz visible, cada onda de un energtico los electrones poseen suficiente energa para escapar de sus
determinado color tiene una longitud de onda especfica. Este concepto es tomos. Estos electrones libres son a continuacin dirigidos hacia la
importante en el campo de la microscopa ptica porque est relacionado muestra.
con el mximo aumento que puede alcanzarse. El mximo aumento de Lentes electromagnticas
un microscopio es proporcional a la longitud de onda del medio con el que
se observa. A menores longitudes de onda, mayor resolucin puede Los microscopios pticos utilizan lentes convergentes y divergentes para
obtenerse. Por este motivo, el mximo aumento que se puede obtener con desviar los rayos de luz y aumentar as la imagen de la muestra. Este
un microscopio ptico difcilmente supera los 1500 aumentos. mismo procedimiento no puede ser aplicado para desviar la trayectoria de
los electrones. En lugar de utilizar lentes de vidrio, los microscopios Partes del microscopio electrnico
electrnicos utilizan lentes electromagnticas. Estas lentes generan
campos elctricos y magnticos de modo que su interaccin con los Tipos de microscopios electrnicos
electrones hace que sus trayectorias diverjan o converjan en un punto.
Cmara de vaco Existen dos tipos principales de microscopios electrnicos. Los
microscopios electrnicos de transmisin y los microscopios electrnicos
El procedimiento expuesto anteriormente debe llevarse a cabo dentro de de barrido. A continuacin presentamos sus detalles:
una cmara de vaco. De lo contrario, los electrones interactuaran con las Microscopio electrnico de transmisin (MET)
molculas del aire y no sera posible determinar sus trayectorias
adecuadamente. La muestra que se observa debe colocarse tambin Microscopio de fluorescencia
dentro de la cmara de vaco. Este es uno de los motivos por el cual no es Los microscopios de fluorescencia son aquellos que utilizan las
posible observar muestras vivas con un microscopio electrnico. propiedades de fluorescencia para generar una imagen de la muestra.
Detector (Pantalla fluorescente) Este microscopio permite observar sustancias que emiten luz
propia cuando son iluminadas con una longitud de onda determinada.
Una vez los electrones han impactado contra la muestra es necesario Para ello la muestra es habitualmente iluminada con una lmpara xenn o
medir algn tipo de informacin para poder reconstruir la imagen de la con una lmpara de vapor de mercurio. Estos microscopios incorporan
muestra. Una opcin consiste en utilizar una pantalla fluorescente. Esta adems filtros de luz para aislar la luz correspondiente a la muestra.
pantalla reacciona de modo distinto segn cual sea el nmero de TECNOLOGA:
electrones que impactan en ella. De este modo es posible detectar las La imagen fluorescente usa iluminacin de alta intensidad para excitar
zonas donde impactan ms o menos electrones y deducir as la imagen de molculas fluorescentes en la muestra. Cuando una molcula absorbe
la muestra. Existen alternativas a las pantallas fluorescentes, por ejemplo, fotones, los electrones son excitados a un nivel de energa ms alto.
sensores CCD. Conforme los electrones se relejan a su estado cero, se pierde la energa
A continuacin, la informacin capturada por la pantalla fluorescente es vibracional y, como resultado, el espectro de emisin se mueve a
transmitida a un ordenador que puede asignar colores artificiales a la longitudes de onda ms largas.
imagen obtenida. En los microscopios pticos estos componentes no son La fluorescencia que emana desde la muestra (y no la luz iluminante). En
necesarios porque la luz proveniente de la muestra es directamente los microscopios de ep-fluorescencia, el objetivo enfoca tanto la luz de
observada con el ojo humano. Dado que nuestros ojos no estn excitacin como colecta la luz que regresa al ocular o detector. La
preparados para detectar electrones debemos incorporar este elemento fluorescencia se separa de la lul de excitacin por un espejo dicroico y los
detector en un microscopio electrnico. filtros apropiados: la luz de excitacin se refleja de regreso dentro del
objetivo mientras que se transmite la fluorescencia. Los filtros, excluyendo
y/o transmitiendo longitudes de onda de luz seleccionadas, optimiza
fluorescencia y reduce el ruido de fondo no deseado.
Varias sustancias autofluorescen y esto has sido explotado especialmente
en botnica, petrologa, y la industria de semiconductores. Los fluorforo
disponibles comercialmente, con espectros de excitacin y emisin bien
definidos, se pueden usar para manchar estructuras especficas o
molculas en un espcimen. La eleccin juiciosa de fluorforos permiten la
identificacin de varios objetivos mientras que los espectros de emisin se
pueden separar limpiamente y distinguirse de la auto fluorescencia.

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