Micro 2017b

PROFESOR: Mg.
Sonia Herrera Snchez
INTEGRANTES:
FLORES GARAY, SARAY
FLORES MANSILLA, MICAELA
PEBES CABRERA, IVETTE
VASQUEZ CONDOR, ROSA LUZ
2017
M
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO FACULTAD DE INGENIERA QUMICA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
I. INTRODUCCION
El trabajo de laboratorio implica el adoptar una actitud muy cuidadosa y responsable

para poder actuar de manera correcta dentro del mismo, es importante considerar
ciertas reglas concretas.
Antes de comenzar a realizar cualquier prctica en un laboratorio ya sea en
universidades, industrias o cualquier otro entorno que disponga de instrumentos para
realizacin de experimentos es necesario conocer de ante mano los protocolos y las
normas de seguridad, tanto para evitar accidentes o saber actuar ante cualquier
eventualidad que se presente; esto con el fin de garantizar el bienestar de todo el
personal del laboratorio.
Tambin, es importante identificar todos los materiales que se emplean en la

prctica y su correcto uso para que todas las observaciones e informaciones obtenidas
a travs del experimento sean confiables y correspondan a un exitoso resultado. Por lo
anterior, el objetivo de esta prctica consiste en aprender y aplicar todas las normas
bsicas de seguridad; conocer los materiales y equipos del laboratorio, saber en qu
momento y cmo utilizarlos.
II. OBJETIVOS
El Conocer las normas de seguridad, polticas de trabajo y el manejo adecuado

de sustancias txicas y desechos peligrosos en un laboratorio para evitar
riesgos y accidentes dentro del laboratorio.
Reconocer todas las metodologas para la desinfeccin y esterilizacin de los
materiales y equipos que sern usados en las prcticas de laboratorio.
Identificar con totalidad los materiales y equipos del laboratorio de
microbiologa con el fin de desarrollar de la mejor manera las prcticas de
laboratorio.
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III. MARCO TERICO
BIOSEGURIDAD
El trmino contencin se utiliza para describir mtodos seguros para manejar materiales
infecciosos en el medio ambiente del laboratorio donde son manipulados o conservados.
El objetivo de la contencin es reducir o eliminar la exposicin de quienes trabajan en

laboratorios u otras personas, y del medio ambiente externo a agentes potencialmente
peligrosos.
La contencin primaria, proteccin del personal y del medio ambiente inmediato del
laboratorio de la exposicin a agentes infecciosos, es provista tanto mediante buenas
tcnicas microbiolgicas como a travs del uso de equipos de seguridad adecuados. El uso
de vacunas puede brindar un mayor nivel de proteccin del personal.
La contencin secundaria, proteccin del medio ambiente externo al laboratorio de la

exposicin a materiales infecciosos, se logra a travs de una combinacin del diseo de la
instalacin y prcticas operativas. Por lo tanto, los tres elementos de contencin incluyen
prcticas y tcnicas de laboratorio, equipos de seguridad y el diseo de la instalacin.
PRCTICAS Y TCNICAS DE LABORATORIO.
El elemento ms importante de la contencin es el cumplimiento estricto de las prcticas y

tcnicas microbiolgicas estndar.
Las personas que trabajan con agentes infecciosos o materiales potencialmente infectados
deben conocer los riesgos potenciales, y tambin deben estar capacitados y ser expertos en
las prcticas y tcnicas requeridas para manipular dichos materiales en forma segura.
El director o la persona a cargo del laboratorio es responsable de brindar u organizar la

capacitacin adecuada del personal. Cada laboratorio est obligado a desarrollar o adoptar
un manual de operaciones o de bioseguridad que identifique los riesgos que se encontrarn
o puedan producirse, y que especifique las prcticas y procedimientos destinados a
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minimizar o eliminar las exposiciones a estos riesgos. Se debe alertar al personal acerca de
los riesgos especiales y se le debe exigir que lea y cumpla las prcticas y procedimientos
requeridos.
Cuando las prcticas de laboratorio estndar no son suficientes para controlar los riesgos
asociados a un agente o a un procedimiento de laboratorio particular, quizs sea necesario
aplicar medidas adicionales. El director del laboratorio es responsable de seleccionar
prcticas de seguridad adicionales, que deben guardar relacin con los riesgos relacionados
con el agente o procedimiento.
Equipos de Seguridad (Barreras Primarias). Los equipos de seguridad incluyen gabinetes de

seguridad biolgica (BSCs), recipientes cerrados, y otros controles de ingeniera destinados
a eliminar o minimizar las exposiciones a materiales biolgicos peligrosos.
El gabinete de seguridad biolgica (BSC) es el dispositivo principal utilizado para

proporcionar contencin de salpicaduras o aerosoles infecciosos generados por diversos
procedimientos microbiolgicos. Las clases de gabinetes de seguridad biolgica son (Clase
I, II, III) utilizados en laboratorios microbiolgicos.
Los gabinetes de seguridad biolgica Clase I y Clase II de frente abierto son barreras
primarias que ofrecen niveles significativos de proteccin del personal de laboratorio y del
medio ambiente cuando se los utiliza en combinacin con buenas tcnicas microbiolgicas.
El gabinete de seguridad biolgica Clase II tambin brinda proteccin contra la

contaminacin externa de los materiales (por ejemplo, cultivos celulares, stocks
microbiolgicos) que se manipulan dentro del gabinete. El gabinete de seguridad biolgica
Clase III estanco al gas ofrece el mayor nivel de proteccin posible para el personal y el
medio ambiente.
Un ejemplo de otra barrera primaria es la cubeta centrfuga de seguridad, un recipiente

cerrado destinado a prevenir la liberacin de aerosoles durante el centrifugado.
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Para minimizar este riesgo, se deben utilizar controles de contencin tales como BSCs o
cubetas centrfugas cuando deban manipularse agentes infecciosos que puedan
transmitirse a travs de la exposicin a aerosol.
Los equipos de seguridad tambin incluyen elementos de proteccin personal, tales como
guantes, ambos, delantales, cobertores de zapatos, botas, respiradores, mscaras faciales,
anteojos de seguridad o antiparras.
Los equipos de proteccin personal se utilizan en general en combinacin con gabinetes de

seguridad biolgica y otros dispositivos que contienen los agentes, animales o materiales
que se manipulan. En algunas situaciones en las cuales resulta poco prctico trabajar en
gabinetes de seguridad biolgica, los equipos de proteccin personal pueden formar la
barrera primaria entre el personal y los materiales infecciosos.
CLASIFICACIN DE LOS MICROORGANISMOS INFECCIOSOS POR GRUPOS DE RIESGO
Grupo de riesgo 1(riesgo individual y poblacional escaso o nulo.
Nivel de Bioseguridad 1. Las prcticas, los equipos de seguridad, el diseo y la construccin

de la instalacin del Nivel de Bioseguridad 1 son adecuados para laboratorios destinados a
la educacin o capacitacin secundaria o universitaria, y para otros laboratorios en los
cuales se trabaja con cepas definidas y caracterizadas de microorganismos viables que no
se conocen como generadores sistemticos de enfermedades en humanos adultos sanos.
El Bacillus subtilis, Naegleria gruberi, el virus de la hepatitis canina infecciosa, y los

organismos exentos conformes a las NHI Recombinant DNA Guidelines (Normas de ADN
Recombinante de NIH) son representativos de los microorganismos que cumplen con estos
criterios.
Muchos agentes no comnmente asociados con procesos de enfermedades en humanos

son, no obstante, patgenos oportunistas y pueden causar infeccin en individuos jvenes,
ancianos, inmunodeficientes o inmunodeprimidos.
Grupo de riesgo 2 (riesgo individual moderado, riesgo poblacional bajo)
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Nivel de Bioseguridad 2. Las prcticas, los equipos, el diseo y la construccin de

instalaciones del Nivel de Bioseguridad 2 son aplicables a laboratorios educativos, de
diagnstico, clnicos u otros laboratorios donde se trabaja con un amplio espectro de
agentes de riesgo moderado que se encuentran presentes en la comunidad y que estn
asociados con enfermedad humana de variada gravedad.
Con buenas tcnicas microbiolgicas, estos agentes se pueden utilizar en forma segura en
actividades realizadas en una mesa de trabajo, siempre que el potencial de que se
produzcan salpicaduras o aerosoles sea bajo.
El virus de la Hepatitis B, el HIV, SalmonelaS, Toxoplasma spp. Bordettela Pertussis son

representativos de los microorganismos asignados a este nivel de contencin.
El Nivel de Bioseguridad 2 es adecuado cuando se trabaja con sangre derivada de humanos,

fluidos corporales, tejidos o lneas de clulas primarias humanas donde puede
desconocerse la presencia de un agente infeccioso. (El personal de laboratorio que trabaja
con materiales derivados de humanos debe consultar el Estndar de Patgenos de
Transmisin por Sangre precauciones especficas requeridas).
Los riesgos primarios del personal que trabaja con estos agentes estn relacionados con
exposiciones accidentales de membranas mucosas o percutneas, o ingestin de materiales
infecciosos. Debe tenerse especial precaucin con agujas o instrumentos cortantes
contaminados. Si bien no se ha demostrado que los organismos que se manipulan de rutina
en el Nivel de Bioseguridad 2 sean transmisibles a travs de la va de aerosoles, los
procedimientos con potencial de producir aerosoles o grandes salpicaduras -que pueden
incrementar el riesgo de exposicin de dicho personal- deben llevarse a cabo en equipos de
contencin primaria o en dispositivos tales como un BSC o cubetas centrfugas de seguridad.
Se deben utilizar las dems barreras primarias que correspondan, tales como mscaras
contra salpicaduras, proteccin facial, delantales y guantes. Se debe contar con barreras
secundarias, tales como piletas para lavado de manos e instalaciones de descontaminacin
de desechos a fin de reducir la contaminacin potencial del medio ambiente. Son
considerados agentes patgenos que pueden provocar enfermedades humanas o animales
pero que tienen pocas probabilidades de entraar un riesgo grave para el personal de
laboratorio, la poblacin, el ganado o el medio ambiente. La exposicin en el laboratorio
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puede provocar una infeccin grave, pero existen medidas preventivas y teraputicas
eficaces y el riesgo de propagacin es limitado.
Grupo de riesgo 3 (riesgo individual elevado, riesgo poblacional bajo)
Nivel de Bioseguridad 3. Las prcticas, equipos de seguridad y el diseo y la construccin

de las instalaciones del Nivel de Bioseguridad 3 pueden aplicarse a instalaciones clnicas, de
produccin, investigacin, educacin o diagnstico, donde se trabaja con agentes exticos
o indgenos con potencial de transmisin respiratoria, y que pueden provocar una infeccin
grave y potencialmente letal. Mycobacterium tuberculosis, Neisseria Meningitidis, Virus
Influenza, Brucellas, Virus de la encefalitis de St. Louis, Coxiella burnetii son representativos
de los microorganismos asignados a este nivel. Son definidos como agentes patgenos que
suelen provocar enfermedades humanas o animales graves. Existen medidas preventivas y
teraputicas eficaces.
Los riesgos primarios del personal que trabaja con estos agentes estn asociados a la auto
inoculacin, ingestin y exposicin a aerosoles infecciosos. Al manipular agentes del Nivel
de Bioseguridad 3 se pone mayor nfasis en las barreras primarias y secundarias para
proteger al personal en reas contiguas, a la comunidad y al medio ambiente de la
exposicin a aerosoles potencialmente infecciosos. Por ejemplo, todas las manipulaciones
de laboratorio se deben llevar a cabo en un BSC u otros equipos cerrados, tales como
cmaras de generacin de aerosoles estancas al gas.
Las barreras secundarias para este nivel incluyen el acceso controlado al laboratorio y
requisitos de ventilacin que minimizan la liberacin de aerosoles infecciosos desde el
laboratorio.
Grupo de riesgo 4 (riesgo individual y poblacional elevado)
Nivel de Bioseguridad 4. Las prcticas, equipos de seguridad, diseo y la construccin de

instalaciones del Nivel de Bioseguridad 4 son aplicables al trabajo con agentes peligrosos o
txicos que representan un alto riesgo individual de enfermedades que ponen en peligro la
vida, que pueden transmitirse a travs de aerosoles y para las cuales no existen vacunas o
terapias disponibles. Los agentes con una relacin antignica cercana o idntica a los
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agentes de los Niveles de Bioseguridad 4 deben manejarse conforme a las recomendaciones

de este nivel.
Cuando se han obtenido datos suficientes, el trabajo con estos agentes puede continuarse
a este nivel o a un nivel inferior. Los virus como Marburg o la fiebre hemorrgica Congo-
Crimeana se manipulan al Nivel de Bioseguridad 4. Agentes patgenos que suelen provocar
enfermedades graves en el ser humano o los animales y que se transmiten fcilmente de
un individuo a otro, directa o indirectamente.
Normalmente no existen medidas preventivas y teraputicas eficaces.
Los riesgos principales para el personal que trabaja con agentes del Nivel de Bioseguridad 4
son la exposicin respiratoria a aerosoles infecciosos, la exposicin de membranas mucosas
o piel lastimada a gotitas infecciosas y la auto inoculacin.
Todas las manipulaciones de materiales de diagnstico potencialmente infecciosos, cepas

puras y animales infectados en forma natural o experimental, implican un alto riesgo de
exposicin e infeccin para el personal de laboratorio, la comunidad y el medio ambiente.
El aislamiento completo del personal de laboratorio de los materiales infecciosos en aerosol

se logra principalmente trabajando en un BSC Clase III o en un traje de cuerpo entero, con
provisin de aire y presin positiva. Por lo general, la instalacin del Nivel de Bioseguridad
4 es un edificio separado o una zona totalmente aislada con sistemas de gestin de
desechos y requisitos de ventilacin especializados y complejos para prevenir la liberacin
de agentes viables al medio ambiente.
DESINFECCION Y AGENTES DESINFECTANTES

La desinfeccin consiste en la destruccin selectiva de los organismos que causan
enfermedades. No todos los organismos se destruyen durante el proceso, punto en el que
radica la principal diferencia entre la desinfeccin y la esterilizacin, proceso que conduce
a la destruccin de la totalidad de los organismos. En el campo de las aguas residuales, las
tres categoras de organismos entricos de origen humano de mayores consecuencias en la
produccin de enfermedades son las bacterias, los virus y los quistes amebianos. Las
enfermedades bacterianas tpicas transmitidas por el agua son: el tifus, el clera, el
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paratifus y la disentera bacilar, mientras que las enfermedades causadas por los virus
incluyen, entre otras, la poliomielitis y la hepatitis infecciosa)
DESINFECTANTE
Producto qumico cuyo uso conlleva la destruccin de microorganismos patgenos y la

inactivacin de virus presentes en tejidos vivos.
Se destinan a destruir, contrarrestar, neutralizar, impedir la accin o ejercer un control de

otro tipo sobre cualquier organismo nocivo. Carecen de actividad selectiva ya que eliminan
todo tipo de grmenes. Su espectro de actuacin, tiempo de inicio de activacin, tiempo de
actividad, efecto residual, toxicidad, capacidad de penetracin y posibles materiales o
circunstancias que los inactiven pueden variar de un producto a otro.
Los antispticos son eficaces si cumplen la condicin de reducir el nmero de colonias de

microorganismos a menos de 100.000 colonias por gramo de tejido en menos de 5 minutos
y, en al menos, cuatro tipos de cepas bacterianas. La actividad de los antispticos puede
inhibirse por la existencia de materias orgnicas como sangre o tejidos desvitalizados y,
determinadas soluciones antispticas pueden contaminarse a travs del aire o por contacto
directo. Segn la FDA, un desinfectante de alto nivel es un compuesto sinttico que
depositado sobre material vivo o inerte y alterando lo menos posible el sustrato donde
residen, destruye en 10-15 minutos todos los grmenes patgenos, tales como bacterias,
hongos y virus, excluyendo el virus de la Hepatitis B.
NIVELES DE DESINFECCION
Desinfectantes de bajo nivel. No son capaces de destruir en un periodo breve de

tiempo esporas bacterianas, micobacterias y todos los hongos y/o virus no lipdicos
o de pequeo tamao. El tiempo de contacto mnimo para una desinfeccin de bajo
nivel es de 10 minutos.
Desinfectantes de nivel intermedio. No eliminan necesariamente las esporas

bacterianas, pero inactivan bacterias vegetativas. El tiempo de contacto mnimo
para una desinfeccin de nivel intermedio con estos desinfectantes es de 10
minutos.
Desinfectantes de alto nivel. Inactivan todas las formas vegetativas de los

microorganismos, pero no destruyen toda forma de vida microbiana, puesto que no
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siempre eliminan todas las esporas. La mayora requieren un tiempo de unos 20

minutos para ejercer una accin desinfectante de alto nivel; algunos precisan para
destruir las esporas bacterianas un tiempo de contacto prolongado (entre 6 y 10
horas, segn el desinfectante). La limpieza inicial del objeto es fundamental para
que la desinfeccin sea eficaz, ya que muchos desinfectantes pierden total o
parcialmente su actividad en presencia de materia orgnica.
CRITERIOS EN LA ELECCION DE UN DESINFECTANTE
Un desinfectante ideal debe aproximarse a las siguientes propiedades:
Ser fcil de usar.

Que no necesite proteccin especial
Nula toxicidad
Capacidad de limpieza
Olor agradable
Que no oxide ni altere el material
Que sea respetuoso con el medio ambiente y el medio laboral
DESINFECTANTES MS USADOS EN EL LABORATORIO
cido peracetico
Agua oxigenada
Alcohol etlico
Alcohol isoproplico
Aldehdos
Formaldehido
Glutaraldehido
Hipoclorito de sodio
ESTERILIZACIN
La esterilizacin del material de laboratorio es un proceso que permite eliminar la carga
microbiana patgena y no patgena, includas las esporas, de productos e instrumentos que
lo requieran como el instrumental mdico o los medios de cultivo. Para que sea eficaz debe
realizarse sobre materiales limpios y respetando los parmetros y procedimientos definidos
para cada mtodo.
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Para decidir si un objeto debe esterilizarse o es suficiente con una desinfeccin pueden
consultarse los criterios de clasificacin del Dr. E. H. Spaulding, ampliamente aceptados por
la FDA y los profesionales mdicos, epidemilogos y microbilogos. Segn esta clasificacin,
los objetos considerados crticos deben esterilizarse, los semi-criticos deben someterse a
una desinfeccin de alto nivel y los no-crticos deben limpiarse y someterse a una
desinfeccin de bajo nivel.
La esterilizacin puede conseguirse usando calor, productos qumicos y radiacin.
El mtodo que elegir depender del material a esterilizar y del equipo e instalaciones
disponibles. Con los objetos de acero inoxidable y de vidrio podemos usar cualquier
mtodo, pero en el caso de los materiales plsticos debemos tener en cuenta su
composicin para evitar deformaciones e incluso la destruccin del material.
AUTOCLAVE
Es el mtodo de referencia, utiliza calor hmedo en equipos que se denominan autoclaves,

formados por un recipiente o cmara de esterilizacin de paredes gruesas y cierre
hermtico que permite usar vapor a presin y temperatura elevada. El fundamento fsico
es el de una olla a presin. Se considera el mtodo ms efectivo porque acta coagulando
las protenas de los microorganismos, provocando su eliminacin. Los factores ms
importantes en este proceso son:
La eficacia y rapidez del equipo para remover el aire de la cmara y sustituirlo por
vapor evitando fluctuaciones de la temperatura.
El vapor debe proceder de agua limpia, sin contaminantes y generarse con un
porcentaje de agua lquida muy bajo (menor del 3%).
El vapor debe estar en contacto directo con todo el material, el apilamiento excesivo
o incorrecto pueden disminuir la eficacia del proceso.
Las piezas deben estar limpias, el vapor no penetrar una costra de suciedad.
Pueden esterilizarse en autoclave los objetos de acero inoxidable, vidrio y plsticos como el
PP (polipropileno), PMP (polimetilpenteno) o PTFE/PFA (tefln).
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TINDALIZACION (esterilizacin intermitente)

Consiste en someter el producto a
calentamientos intermitentes entre 56
y 100C durante 30 minutos con lo que se
asegura destruir las formas vegetativas. En los
intervalos se mantiene a
temperatura ambiente o a 37C, las esporas
germinan y las bacterias resultantes se hacen
ms sensibles al calentamiento posterior.
RADIACIONES
LUZ UV
Es absorbida a una longitud de onda de 240 a 280 nm
por cidos nucleicos causando daos genticos
alterando las bases. Se la utiliza en la preparacin
de vacunas, cabinas de seguridad biolgica, lugares
de trabajo como mesadas de laboratorios.
RADIACIONES IONIZANTES
Actan lesionando cidos nucleicos. Se la utiliza sobre todo en procesos industriales para
esterilizar dispositivos quirrgicos, guantes, jeringas, etc.
FLAMEADO
Pasar dos o tres veces por la llama del mechero de Bunsen varillas de vidrio, bocas de
tubos, frascos y similares. Las asas y otros utensilios metlicos se someten a la llama
directa hasta calentarse al rojo. Las pinzas se sumergen en alcohol y luego se secan a la
llama. Estos mtodos son instantneos y no mantienen la esterilidad en el tiempo.
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IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Identificar los materiales y equipos que se tiene en el

laboratorio de microbiologa
MATERIALES
Placa Petri
Es un recipiente redondo, de cristal o plstico, con una

cubierta de la misma forma que la placa, pero algo ms
grande de dimetro, para que se pueda colocar encima y
cerrar el recipiente, aunque no de forma hermtica. Es parte
de la coleccin conocida como material de vidrio. Se
utiliza en Microbiologa para cultivar clulas, observar la
germinacin de las semillas o examinar el comportamiento
de pequeos animales.
Tubo de ensayo
Es parte del material de vidrio de un laboratorio

de qumica. Consiste en un pequeo tubo cilndrico de
vidrio con un extremo abierto (que puede poseer una tapa)
y el otro cerrado y redondeado, que se utiliza en los
laboratorios para contener pequeas muestras lquidas o
slidas, aunque pueden tener otras fases, como
realizar reacciones qumicas en pequea escala, estn
disponibles en una multitud de tamaos, comnmente de 1 a 2 cm de ancho y de 5 a
20 cm de largo.
Gradilla
Es una herramienta que forma parte del material de laboratorio (principalmente en

laboratorios de biologa molecular, gentica y qumica) y es utilizada para sostener y
almacenar gran cantidad de tubos de ensayo . Su principal funcin es facilitar el manejo
de los tubos de ensayo. Normalmente es utilizado para sostener y almacenar este
material. ste se encuentra hecho de madera, plstico o metal; pero las ms comunes
son las de madera
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Probeta
Es un instrumento volumtrico que consiste en un cilindro graduado
de vidrio que permite contener lquidos y sirve para medir
volmenes de forma aproximada.
Est formado por un tubo generalmente transparente de unos
centmetros de dimetro y tiene una graduacin desde 5 ml hasta el
mximo de la probeta, indicando distintos volmenes. En la parte
inferior est cerrado y posee una base que sirve de apoyo, mientras
que la superior est abierta (permite introducir el lquido a medir) y
suele tener un pico (permite verter el lquido medido). Generalmente
miden volmenes de 25 o 50 ml, pero existen probetas de distintos
tamaos; incluso algunas que pueden medir un volumen hasta de
2000 ml.
Asa bacteriolgica o asa de platino

Es un instrumento de laboratorio tipo pinza que
consta de una base que puede estar hecha
de platino, acero, aluminio y un filamento que puede
ser de nicromo, tungsteno o platino que termina o en
un arito de 5 mm o en punta.
Se emplea para transportar o arrastrar o trasvasar inculos (pequeo volumen que
contiene microorganismos en suspensin) desde la solucin de trabajo tambin
llamada solucin madre al medio de cultivo (slido o lquido) o de un medio a otro
(resiembra). Tambin sirve para la realizacin de frotis.
Frascos
Los frascos de fondo plano Se utilizan para la preparacin

de determinadas disoluciones, fabricndose de diferentes
tamaos, debiendo ser termorresistentes por si se
requiere someterlos a la accin del calor. En el trabajo
microbiolgico se utilizan regularmente para la
preparacin del antgeno de cardiolipina, utilizado en las
pruebas serolgicas VDRL.
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Pipetas
Tubos cilndricos delgados terminados en punta, graduados al dcimo o al centsimo de mI.
Se emplean en la medicin de pequeas cantidades de lquidos. Pueden ser
-Serolgicas: son terminales y con capacidad de 0.1 a 25 ml.
-Volumtricas: se reconocen por presentar una dilatacin bulbosa central con unas marcas
de aforamiento conocida, en el extremo proximal angosto de la pipeta, se les llama tambin
pipetas de bola, las medidas ms conocidas son de 10, 25, 50 y 100 ml.
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-Pipetas Pasteur: Confeccionados de varillas de vidrio de dimetro de 4 x 20mm de 30

40cm de longitud. La calidad de vidrio debe facilitar reblandamientos a la accin directa
de la llama del mechero, para conseguir por estiramiento la capilaridad deseada. Se
emplea para la toma de pequeos inculos de siembra.
Vasos de precipitado
Un vaso de precipitados es un recipiente cilndrico de vidrio borosilicado fino que se utiliza

sobre todo, para preparar o calentar sustancias y traspasar lquidos. Son cilndricos con un
fondo plano; se les encuentra de varias capacidades, desde 1 ml hasta de varios litros.
Normalmente son de vidrio, de metal o de un plstico en especial y son aqullos cuyo
objetivo es contener gases o lquidos. Tienen componentes de tefln u otros materiales
resistentes a la corrosin. Suelen estar graduados, pero esta graduacin es inexacta por la
misma naturaleza del artefacto; su forma regular facilita que pequeas variaciones en la
temperatura o incluso en el vertido pasen desapercibidas en la graduacin. Es
recomendable no utilizarlo para medir volmenes de sustancias, ya que es un material que
se somete a cambios bruscos de temperatura, lo que lo descalibra y en consecuencia nos
entrega una medida errnea de la sustancia
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EQUIPOS
El microscopio
Es aquel instrumento diseado especialmente para poder

apreciar elementos muy pequeos que resultan
imperceptibles para la visin humana.
El tipo de microscopio ms comn que se creo fue el ptico,
el cual consiste en una o varias lentes las cuales permiten
obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona
gracias a la refraccin. Algunos otros tipos son: microscopio
simple, compuesto, de fluorescencia, de luz polarizada, con
focal electrnico de transmisin, electrnico de barrido, de
iones de campo, de sonda de barrido, de fuerza atmica, de
efecto tnel, virtual y antimateria.
Incubadora
Es un dispositivo que sirve para mantener y hacer crecer cultivos
microbiolgicos o cultivos celulares. La incubadora mantiene la temperatura,
la humedad y otras condiciones en grado ptimo, tales como el contenido de dixido
de carbono (CO2) y de oxgeno en su atmsfera interior. Las incubadoras son esenciales
para una gran cantidad de trabajos experimentales en biologa celular,
la microbiologa y en biologa molecular y se utilizan para cultivos celulares,
tanto bacterianos como de clulas eucariotas.
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Las incubadoras son tambin utilizadas en la industria

de cra de aves de corral para que acten como un
sustituto de las gallinas en el proceso
de incubacin de los huevos fecundados. Esto se
traduce a menudo en tasas de eclosin muy altas
debido a la capacidad de controlar la temperatura y la
humedad. Varias marcas de incubadoras estn
disponibles en el mercado para los ganaderos.
Horno de laboratorio
Es un tipo de horno comnmente usado para

deshidratar reactivos de laboratorio o secar
instrumentos. El horno aumenta su
temperatura gradualmente conforme pase el
tiempo as como tambin sea su programacin,
cuando la temperatura sea la ptima y se
estabilice, el trmico mantendr la
temperatura; si esta desciende volver a
activar las resistencias para obtener la
temperatura programada; posee un tablero de
control que muestra el punto de regulacin y la
temperatura real dentro del horno, est
montada al frente para su fcil lectura, aunque algunos modelos anteriores no lo tienen,
estos cuentan con una perilla graduada la cual regula temperatura del horno.
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Balanza analtica
Es una clase de balanza de laboratorio diseada para medir
pequeas masas, en un principio de un rango menor del
miligramo (y que hoy da, las digitales, llegan hasta la
diezmilsima de gramo: 0,0001 g o 0,1 mg). Los platillos de
medicin de una balanza analtica estn dentro de una caja
transparente provista de puertas para que no se acumule el
polvo y para evitar que cualquier corriente de aire en la
habitacin afecte al funcionamiento de la balanza
Contador de colonias
Es un instrumento utilizado para contar

colonias de bacterias o de
otros microorganismos que crecen en
una placa de agar. Los contadores ms
recientes intentan contar las colonias por va
electrnica, mediante la identificacin de
reas individuales de oscuridad y luz, de
acuerdo a los umbrales definidos por el
usuario, contando los puntos en los que se
aprecia contraste, o de modo automtico
mediante registro electrnico tras presionar con cualquier tipo de marcador.
Autoclave de laboratorio
Es un dispositivo que sirve para esterilizar material de laboratorio, utilizando vapor de

agua a alta presin y temperatura, evitando con las altas presiones que el agua llegue a
ebullir a pesar de su alta temperatura. El fundamento del autoclave es que coagula las
protenas de los microorganismos debido a la presin y temperatura, aunque
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recientemente se ha llegado a saber de algunas formas a celulares, tal como los priones,
que pueden soportar las temperaturas de autoclave.
Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada

o generacin de vapor de agua pero
restringiendo su salida, hasta obtener una
presin interna de 103 kPa, lo cual provoca que
el vapor alcance una temperatura de 121 grados
centgrados. Un tiempo tpico de esterilizacin a
esta temperatura y presin es de 15-20 minutos.
Las autoclaves ms modernas permiten realizar
procesos a mayores temperaturas y presiones,
con ciclos estndares a 134 C a 200 kPa durante
5 min para esterilizar material metlico; llegando
incluso a realizar ciclos de vaco para acelerar el secado del material esterilizado.
Medio de cultivo
Consta de un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir,
en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento
de virus, microorganismos, clulas, tejidos vegetales o incluso pequeas plantas. Segn
lo que se quiera hacer crecer, el medio requerir unas u otras condiciones.
Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser
preparados; ya preparados pueden encontrarse en estado slido, semislido o lquido.
El objetivo ltimo del cultivo es variado: antibiograma, identificacin, multiplicacin.
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio
de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms
de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin
de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante.
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Bao Mara
Este equipo se utiliza para el calentamiento

indirecto, por conveccin trmica del medio y de
sustancia, se basa en un mtodo empleado para
conferir la temperatura uniforme a una sustancia
liquida o slida, sumergiendo el recipiente que lo
contiene en otro mayor con agua que se lleva
hasta la ebullicin.
Tambin es utilizado para
realizar pruebas serolgicas y
procedimietosde incubacion, agitacion, inactivacion,biomedicos, farmamaceuticos.
Por lo general, se utilizan con agua, pero tambin se puede trabajar con aceite. Los
rangos de temperatura en los cuales normalmente son utilizados estan entre
temperatura ambiente (20-22C) y los 60C. Tambin se pueden seleccionar
temperaturas de 100C.
2. Revisar las normas de seguridad que se deben considerar en el

laboratorio de microbiologa.
Normas de seguridad en el laboratorio de microbiologa

- Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar las carteras, libros y otros objetos
personales en el lugar que se les indique para tal fin.
- Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe permanecer
completamente cerrada.
- Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la
sesin prctica.
- Lavar las manos con agua y jabn antes de realizar las actividades programadas,
antes de salir del laboratorio y siempre despus de manejar materiales que se sabe
o se sospecha que son contaminantes.
21
- Trabajar cerca del mesn, adoptando una buena postura y estando fsicamente
cmodo.
- Llevar un calzado apropiado, preferiblemente cerrado y de suela antideslizante en
las reas de laboratorio.
- Evitar llevar en el laboratorio accesorios que podran ser fuente de contaminacin
(por ejemplo joyas).
- Recoger el cabello largo.
- Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos. Hablar slo lo
indispensable.
- No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios,
aplicarse cosmticos ni ponerse o quitarse lentes de contacto en ningn rea del
laboratorio.
- Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de iniciar las
actividades indicadas en la prctica. Si usted tiene alguna duda, dirjase al profesor.
- Mantener el rea de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos u objetos
personales, exceptuando aquellos equipos y materiales necesarios para la
realizacin del trabajo prctico.
- Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero. Nunca debe dejar ste
desatendido.
- Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero, etc.), limpios y
de manera ordenada a su respectivo lugar una vez finalizada la actividad. Reporte
cualquier dao de los mismos al profesor.
- Colocar los materiales de vidrio contaminados en los recipientes dispuestos para tal
fin, por ejemplo: las pipetas en los pipeteros, tubos y placas de Petri en las ollas de
desecho, etc.
- No usar ningn reactivo que no est debidamente identificado, verificar las
etiquetas de los mismos y estar seguro de cmo emplearlo.
- No devolver sustancias a sus envases originales.
22
- Emplear la propipeta al medir lquidos. Est rigurosamente prohibido pipetear con

la boca. De igual manera las pipetas tendrn tapones de algodn para reducir la
contaminacin de estos dispositivos de pipeteo.
- Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no llevar a cabo
experimentos no autorizados.
- Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de material
contaminado, heridas, quemaduras, etc.), ninguno puede ser catalogado como
menor.
- Reducir al mnimo la formacin de aerosoles durante la realizacin de cualquier
trabajo prctico.
- Extremar las precauciones cuando se utilicen agujas y jeringas para evitar la
inoculacin accidental y la generacin de aerosoles durante su manipulacin y
desecho.
- Emplear tcnicas aspticas para el manejo de cultivos de microorganismos.
Riesgos biolgicos
El Riesgo Microbiolgico se encuentra presente cada vez que se realiza una actividad
prctica en el Laboratorio, donde se requiera la manipulacin de cultivos de
microorganismos, los cuales pueden alcanzar concentraciones muy elevadas y
pueden llegar a provocar una infeccin si no son manipulados adecuadamente. Para
23
que se produzca un accidente por un agente biolgico deben estar presente

bsicamente 4 elementos: un husped susceptible, un agente infeccioso, una
concentracin suficiente de ste y una ruta de transmisin adecuada; siendo este
ltimo punto el que mejor se puede controlar en el laboratorio.
V. RECOMENDACIONES
a. Los materiales deben ser resistentes para soportar los golpes, las inclemencias del
tiempo y de agresiones medio ambientales.
b. Las seales se deben instalar preferentemente a una altura y en una posicin
apropiadas en relacin al ngulo visual, teniendo en cuenta posibles obstculos que
se puedan presentar en el laboratorio.
c. El lugar de emplazamiento debe estar iluminado, ser accesible y visible para realizar
los experimentos.
VI. CONCLUSIONES
a. Se debe tener en cuenta todas las medidas de seguridad en el laboratorio de

microbiologa.
24
b. Se reconoci la utilidad de los diferentes materiales y equipos de laboratorio.
c. Se identific los mtodos de esterilizacin y desinfeccin.
VII. REFERENCIAS
a.
b.
c.
d.
25

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