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Materiais e Mtodos
Substncias teste
Losartan Valsartan
Ensaio de toxicidade para avaliar o efeito crnico (Embriolarval) de curta durao com
Lytechinus variegatus (ECHINODERMATA, ECHINOIDEA).
Os ensaios crnicos foram realizados de acordo com a ABNT/NBR 15350/2012 e
consiste na exposio de embries de ourio-do-mar (Lytechinus variegatus) por um perodo
de 24 a 28 horas, a vrias diluies da substncia que ser analisada durante o perodo de
desenvolvimento embriolarval.
Inicialmente, gametas de L. variegatus foram obtidos atravs de uma injeo de KCl
0,5 M. Aps induzir a liberao dos gametas, as fmeas foram acondicionadas em recipiente
menor que o seu dimetro com a superfcie aboral voltada para baixo, onde os ovcitos, de
colorao amarelo-alanajados, foram mantidos at o momento da fertilizao. Os machos
foram estimulados e os espermatozoides (de colorao branca) foram coletados com uma
pipeta Pasteur e colocados em bqueres de 30 mL. Em seguida, foi preparada uma soluo de
0,5 mL de espermatozoide avolumada para 25 mL com gua de diluio. Essa soluo foi
agitada para evitar a formao de grumos. Aps este procedimento, foi adicionado de 1,2 mL
a 2 mL da soluo de espermatozoides no recipiente com os ovcitos, com leve agitao
durante 10 minutos para fertilizao. Aps este perodo, foram retiradas trs alquotas de 10
L desta soluo para observao em cmara de Sedgwick-Rafter para verificar a taxa de
fertilizao dos ovcitos, a qual, pelos critrios de aceitabilidade do ensaio, deve ser de no
mnimo 80%.
Foram realizados trs ensaios crnicos com o Losartan e dois ensaios crnicos com o
Valsartan. Cada ensaio foi conduzido com quatro rplicas para cada diluio, em tubos de
ensaios de 10 mL. Os compostos foram diludos em gua marinha natural filtrada em uma
membrana de celulose (0,45 m de porosidade), com valores de pH, oxignio dissolvido e
salinidade dentro dos padres de aceitabilidade do mtodo. Para o Losartan foram
estabelecidas as concentraes de 3, 125; 6,25; 12,5; 25; 50; 100; 200 mg.L-1 e um controle
para os ensaios preliminares. E as concentraes definitivas (denominadas solues-teste)
para o Losartan foram de 50; 70; 98; 137,2; 192,08 mg.L -1 e um controle. Para as diluies do
frmaco Valsartan, foi necessrio a utilizao do solvente dimetilsufxido (DMSO) para a
solubilizao inicial deste frmaco. As concentraes estabelecidas para os ensaios definitivos
Resultados e Discusso
Os resultados obtidos nos ensaio de toxicidade para avaliao dos efeitos crnicos dos
frmacos Losartan e Valsartan so apresentados na tabela 1. Os valores foram expressos como
a mdia de trs ensaios para o Losartan e dois ensaios para o Valsartan.
CENO CEO
Apesar de ambos os frmacos terem sido projetados para atuao no mesmo alvo
molecular (receptor AT1 para Ang II) as diferenas observadas para os valores de CENO e
CEO poderiam ser justificadas pelas diferenas nos valores de Kow para as duas molculas,
aonde se observam efeitos para o Valsartan, cujo valor de log Kow de 3,65, em
concentraes inferiores deste frmaco, enquanto os valores superiores observados para
CENO e CEO nos ensaios com o Losartan poderiam ser um reflexo do seu baixo valor de
log Kow, que de 1,19.
Concluses
O efeito crnico do frmaco Losartan nos ourios-do-mar Lytechinus variegatus foi
observado na concentrao de 70 mg.L-1 , j para o frmaco Valsartan observou-se efeitos a
partir da concentrao de 25 mg.L-1, diferenas que podem ser justificadas pelos valores de
Kow destes frmacos. improvvel a ocorrncia de efeitos adversos crnicos destes frmacos
no ambiente aqutico marinho, pois as concentraes de efeitos so superiores s
concentraes j relatadas em ambiente aqutico.
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