Mtodos de tincin

Una tincin o coloracin es una tcnica auxiliar utilizada para mejorar el contraste en la
imagen vista al microscopio. Los colorantes son sustancias que usualmente se utilizan
para aumentar la definicin y examinar poblaciones celulares.

Tipos de tcnicas de tincin

Tinciones simples

Se usa un nico colorante, que siempre es de tipo bsico. Se utilizan solamente para
incrementar el contraste; todas las clulas absorbern el colorante y quedarn teidas
del mismo color. Se fija el espcimen, se aade el colorante y se deja el tiempo
adecuado para que se absorba, se retira el exceso de colorante y la preparacin ya
est lista para ser observada.

Tinciones diferenciales

Se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos. La tcnica de tincin

diferencial consta de dos etapas: una tincin simple seguida de una tincin de
contraste. En la tincin de contraste se utiliza otro colorante que tie (y por tanto,
revela) las clulas no teidas por el primer colorante. Estas tinciones son muy
utilizadas en microbiologa.

Tinciones especficas

Se utilizan para incrementar el contraste en las clulas microbianas y revelan

estructuras particulares, entre las que se incluyen en los flagelos y las cpsulas.

Tincin adecuada

En su forma ms simple, el verdadero proceso de tincin puede implicar la inmersin

de la muestra en la solucin colorante, seguido del aclarado que es un lavado para
eliminar el exceso de colorante y la observacin. Muchos tintes, sin embargo, requieren
del uso de un mordiente. Cuando la solucin de colorante en exceso se elimina durante
el aclarado, la tincin mordentada permanece.

Tincin negativa

Un mtodo sencillo de tincin para bacterias, que adems es un claro caso de

cromofobia y que por lo tanto funciona aun cuando los mtodos de tincin positiva
fallan, es la tincin negativa. Esto puede ser conseguido simplemente extendiendo la
muestra en un portaobjetos y aplicando directamente sobre ella una gota de nigrosina
o tinta china y cubriendo luego la muestra humedecida con un cubreobjetos. Luego de
esto, los microorganismos pueden ser observados fcilmente por medio de microscopa
en campo claro como inclusiones claras muy bien contrastadas contra el medio oscuro
que las rodea.

Tincin indirecta
Se denomina de este modo a las tinciones que hacen uso de un mordiente. Un
mordiente habitual es el cido tnico.

Tincin directa

Hablamos de tincin directa cuando el colorante interacciona directamente con el

sustrato, sin otro tratamiento previo.

Tincin Gram.

La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el laboratorio

bacteriolgico. Su utilidad en la prctica de referencias a la morfologa celular
bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, etc.) se basan justamente en la tincin
de GRAM

1. Se tie el espcimen con el primer colorante, cristal violeta.

2. Se aade el mordiente, yodo.

3. Se aplica el agente decolorante, normalmente una solucin de acetona o etanol. En

este momento, las bacterias Gram negativas pierden su tincin violeta, pero las Gram
positivas retienen el colorante.

4. Como colorante de contraste se aade safranina, que tie de rosa las bacterias
Gram negativas, previamente decoloradas; mientras que a las bacterias Gram positivas
les proporciona un color violeta ms intenso.

Una tincin cido-alcohol resistente se realiza segn los siguientes pasos:

1. Tincin primaria con fucsina bsica, que tie todas las clulas de rojo.

2. Calentamiento suave de la preparacin para facilitar la penetracin del colorante en

el interior de la clula.

3. Decoloracin con una solucin de cido clorhdrico en etanol. Este decolorante

elimina la fucsina de todas las clulas excepto de las micro bacterias, que la retienen
debido a su superficie crea.

4. Coloracin de contraste con azul de metileno. Se tien de azul todas las clulas
previamente decoloradas, lo que facilita la diferenciacin entre las clulas de
Mycobacterum, an teidas de rojo, v las clulas restantes del espcimen.

Tincin rodamina-auramina.

Los cidos miclicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen afinidad para
los fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a las bacterias, que
aparecen de color amarillo o naranja brillante contra un fondo verdoso. El
permanganato de potasio, empleado como contraste, evita la fluorescencia
inespecfica. Todos los microorganismos cido-alcohol resistentes, incluyendo los
esporozoaros parsitos, se tien con estos colorantes.

Un aspecto importante de la coloracin rodamina-auramiria es que luego los frotis

pueden ser reteidos con la coloracin de Ziehl-Neelsen o Kinyoun directamente sobre
la tincin con el fluorocromo, si se elimina antes el aceite de inmersin. De esta forma,
los resultados positivos pueden ser confirmados con las coloraciones tradicionales, que
adems permiten la diferenciacin morfolgica.

Tincin naranja de acridina.

El fluorocromo naranja de acridina se une al cido nucleico ya sea en su forma nativa o

desnaturalizada. En algunas preparaciones de naranja de acridina, el color de la
fluorescencia puede variar, dependiendo del pH y de la concentracin. El naranja de
acridina ha sido empleado como colorante vital, que da una fluorescencia verde si el
microorganismo est vivo y roja si est muerto. De todos modos, como el colorante se
intercala en el cido nucleico, el germen viable se inactivar poco tiempo despus de la
tincin.

Colorantes: La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen

alguna afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados
con frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con
intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los
cidos nucleicos y los polisacridos cidos.

Azul de metileno: El azul de metileno se utiliza para teir clulas animales, para hacer
ms visibles sus ncleos. Es tambin utilizado para teir los extendidos de sangre para
ser utilizados en citologa y como colorante vital en el recuento de reticulocitos.

Azul Nilo: Tie los ncleos de color azul. Tambin puede ser utilizado para teir clulas
vivas.

Cristal violeta: El cristal violeta, al ser combinado con un mordiente adecuado, tie las
paredes celulares de color prpura. El cristal violeta es un componente importante en
la coloracin de Gram.

Eosina: La eosina se utiliza ms frecuentemente como contra coloracin de la

hematoxilina, impartiendo un color que va del rosado al rojo al material citoplasmtico,
membrana celular, y algunas estructuras extracelulares. Adems imparte un fuerte
color rojo a los eritrocitos. La eosina puede ser utilizada tambin en algunas variantes
de la coloracin de Gram, y en muchos otros protocolos de tincin.

Safranina: La safranina es un colorante nuclear. Colorea los ncleos celulares de rojo,

y se utiliza principalmente como contra coloracin. Tambin puede ser utilizada para
darle una coloracin amarilla al colgeno.

Verde de metilo; El verde de metilo se utiliza frecuentemente en microscopia de campo

claro, para teir la cromatina de las clulas y facilitar as su visualizacin.

Bibliografia:

http://microbiologia3bequipo5.blogspot.mx/2014/10/metodos-y-tecnicas-de-
tincion.html