Art 1 Traduccion

Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189 - 259
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examen
morfolgico de hongos y produccin de metabolitos sumergidos en procesos micelial
Maria Papagianni
departamento de higiene y tecnologa de los alimentos de origen animal de la Facultad de

Veterinaria de la Universidad Aristteles de Salnica, 54006 Thessaloniki, Grecia
acept el 29 de septiembre de 2003
Resumen
El uso de hongos para la produccin de productos comerciales es muy antiguo, pero ha aumentado
rpidamente en los ltimos 50 aos. Los hongos son organismos complejos morfolgicamente, que
difieren en su estructura en distintos momentos de su ciclo de vida, que difieren en forma entre la
superficie y el crecimiento sumergidas, difiriendo tambin con la naturaleza del crecimiento y
medio ambiente fsico. Muchos genes y mecanismos fisiolgicos estn involucrados en el proceso
de morfognesis. En cultivo sumergido, un gran nmero de factores que contribuyen al desarrollo
de un determinado formulario morfolgicas. Factores que afectan a la morfologa incluyen el tipo y
la concentracin de sustrato de carbono, los niveles de nitrgeno y fosfato, oligoelementos,
dixido de carbono y el oxgeno disuelto, el pH y la temperatura. Factores fsicos que afectan a la
morfologa incluyen fermentador, geometra, sistemas de agitacin, reologa y los modos de la
cultura, ya sea por lotes, fed-batch o continuo. En muchos casos, formas morfolgicas particular
lograr el mximo rendimiento. Es una tarea muy difcil deducir inequvoca relaciones generales
entre las variables de proceso, producto y formacin de hongos morfologa desde demasiados
parmetros influyen en estas relaciones y el papel de muchos de ellos es todava no se
comprenden totalmente.
El uso de los sistemas de anlisis automtico de la imagen durante la ltima dcada han sido un
instrumento inestimable para caracterizar complejos morfologas micelial, los estados fisiolgicos y
las relaciones entre la morfologa y la productividad. Cuantificar informacin morfolgica puede
ser usada para construir modelos estructurados morfolgicamente de valor predictivo. La
modelacin matemtica del crecimiento y rendimiento del proceso ha conducido a mejoras en el
diseo y operacin de fermentaciones micelial y ha mejorado la capacidad de los cientficos para
traducir las observaciones de laboratorio en la prctica comercial.
Sin embargo, an es necesario desarrollar mejores y nuevas tcnicas experimentales para la

comprensin de los fenmenos tales como los mecanismos de fragmentacin micelial y no
destructivos de medicin de perfiles de concentracin en agregados micelial. Esto permitira la
creacin de
Fax: +30-2310-999829.
E-mail: Mp2000@vet.auth.gr (M. Papagianni).
0734-9750/$ - vase front matterD 2003 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.
doi:10.1016/j.biotechadv.2003.09.005
190 M. Papagianni / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259
un control de proceso sobre una base fisiolgica. Esta revisin se centra en los factores que
influyen en la produccin de metabolitos y morfologa de los hongos en cultivo sumergido.
D 2003 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.
Palabras clave: hongos filamentosos; Morfologa; efectos de cizalla
1. Introduccin
El uso de hongos para la produccin de productos comercialmente importantes ha aumentado

rpidamente durante la segunda mitad del siglo pasado. La explotacin de hongos por el hombre
no es un fenmeno reciente. Numerosos ejemplos que indican que el hombre ha sido consciente
de que el valor de los hongos desde los albores de la civilizacin son conocidos. La fermentacin de
bebidas alcohlicas, practicada en la poca de los Faraones, es uno de los primeros ejemplos
conocidos de la explotacin de las actividades bioqumicas de un hongo por los seres humanos. El
uso de la levadura a la levadura del pan tambin se remonta a los tiempos bblicos. Los hongos
superiores han sido utilizados por el hombre. rganos de fruta y basidiomyces ascomyces han
recogido y comidos por las civilizaciones de todo el mundo (Hayes y Nair, 1978). La produccin de
bebidas alcohlicas, la biomasa y la fabricacin de compuestos teraputicos, junto con la
produccin de compuestos orgnicos simples, siguen siendo los principales campos en los que los
hongos son utilizados.
Aparte de la ms rudimentaria, las tcnicas utilizadas para la produccin y el mantenimiento-

nanzas de la levadura de la cerveza y la industria panificadora, la deliberada el crecimiento de
hongos con fines comerciales no comenzara hasta bien entrado el siglo XX. El desarrollo del
proceso de sulfito para la produccin de glicerol por una fermentacin de la levadura, que fue
ampliamente utilizado durante la I Guerra Mundial, probablemente marca el comienzo de la
micologa industrial. Sin embargo, desde el advenimiento del cultivo sumergido tcnicas utilizadas
en la fermentacin de penicilina que la mayor expansin en el uso de los hongos en la industria ha
tenido lugar. En la actualidad, un nmero cada vez mayor de productos comercialmente
importantes estn siendo producidos a partir de hongos. Los cuadros 1 y 3 presentan las clases
principales de enzimas de hongos filamentosos, antibiticos y cidos orgnicos de importancia
comercial y algunas de sus fuentes. Por extensas listas de los productos industriales y los nombres
preferidos de los hongos filamentosos que producen, se remite al lector a los ''ATCC nombres de
hongos industrial''(Jong et al., 1994).
Los hongos filamentosos son morfolgicamente complejo microorganismos, que exhiben

diferentes formas estructurales a lo largo de sus ciclos de vida. La estructura del crecimiento
vegetativo bsico consta de un filamento tubular conocida como hypha que procede de la
germinacin de una sola espora reproductiva. Como la hypha contina creciendo, frecuentemente
ramas varias veces para formar una masa de filamentos hifales denominado micelio. Cuando se
cultiva en cultivo sumergido, estos hongos exhiben diferentes formas morfolgicas, desde
dispersas filamentos micelial a densamente entretejidos masas micelial contemplados como
pellets.
La forma particular exhibido est determinada no slo por el material gentico de las especies
fngicas, sino tambin la naturaleza del inculo, as como los componentes qumicos (mediano) y
fsica (temperatura, pH, las fuerzas mecnicas) condiciones de cultivo (Atkinson y Daoud, 1976;
Kossen, 2000). Con algunas fermentaciones hongos un particular
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Tabla 1 clases principales de enzimas de hongos filamentosos de importancia comercial y algunas

de sus fuentes
fuentes de la enzima
a-amilasa como. Nger. oryzae, como awamori, Au. pullulans, Rhizopus oryzae, Trichoderma viride
h-amilasa R. niveus amiloglucosidasa. Nger. oryzae, como awamori, A. phoenicis, Au. pullulans, R.
niveus, Rhizop. oryzae catalasa como. Nger, Eupenicillium javanicum, Penicillium vitale celulasa
como. Nger, A. terreus. soyae, P. citrinum, P. funiculosum, T. longibrachiatum, T. reesei, Tr. viride
Dextranase A. carneus, Chaetomium gracile, P. funiculosum, P. lilacium, P. pinophilum a-
Galactosidasa como. awamori,. Nger. oryzae, Mortierella vinaceae, P. dupontii h-galactosidasa
como. awamori,. nidulans como. Nger, como oryzae,. Fusarium oxysporum, N. crassa, P.
funiculosum h-glucanasa Acremonium, persicinum. Nger. oryzae, E. javanicum, G. candidum, Tr.
viride, T. reesei Glucoamylase como. Nger. awamori,. oryzae, Au. pullulans, Rhizop. oryzae, R.
niveus aerohydrogenase glucosa como. Nger glucosa oxidasa como. Nger, E. javanicum, P.
amagasakiense, P. simplicissimum, P. vermiculatum a-glucosidasa como. awamori, Aspergillus
flavus, A. fumigatus, como Nger, Mu. circinelloides A-D-glucosidasa. Nger como h-glucosidasa
como. Nger. oryzae, T. reesei Hemicelulasa. Nger. oryzae, A. phoenicis, T. longibrachiatum, Tr.
viride Hesperidinase como. Nger como invertasa. awamori,. Nger. oryzae, N. crassa lipasa como.
Nger. oryzae, G. candidum, Humicola sp., Rhizomucor, Rhizomucor miechei sp., R. arrhizus, R. P.
roqueforti niveus, actividades de pectinasa A. alliaceus. niger, Aspergillus sp., Rhizop. oryzae,
Rhizopus sp., Sclerotinia libertiana fitasa como. Nger, A. ficuum como proteasa. Nger, A. melleus.
oryzae, A. saitoi, P. dupontii, Penicillium sp., Rhizopus sp.
Rennets Cryphonectria parasitica, R. meihei, R. pusillus Tanase como. Nger, A. tamarii xilanasa T.
reesei
formulario puede ser preferible para conseguir el mximo rendimiento. Crecimiento filamentosa
de Asper- gillus Nger es preferido para la produccin de enzimas de pectina, mientras que la forma
peleteada es preferido para la produccin de cido ctrico (acero et al., 1954; Kristiansen y Bullock,
1988).
Tabla 2 clases principales de antibiticos de hongos filamentosos de importancia comercial y

algunas de sus fuentes
fuentes antibiticos
cefalosporinas Acremonium chrysogenum, A. persicinum kiliense, Ac., Fusarium solani, Nectria

lucida ciclos porrinas F. solani, Tolypocladium inflatum geodes, T., Trichoderma polysporum
Echinocandin. B como A. nidulans rugulosus Fusidic acid Calcarisporium arbuscula, F. Mortiella
ramannianua coccophilum, griseofulvina, P. aurantiogriseum Penicillium griseofulvum, P. italicum
penicilinas Ac. chrysogenum, Ac., persicinum. flavus, A. giganteus, Como. nidulans como. Nger.
oryzae, A. parasiticus, Aspergillus sp., P. chrysogenum baculatum, Pe., P.
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Cuadro 3 principales clases de hongos filamentosos cidos orgnicos de importancia comercial y

algunas de sus fuentes
fuentes de cido orgnico
cido ctrico Aspergillus clavatus citricus, A., como el Nger. A. phoenicis, Penicillum decumbens, P.
isariiforme, Tr. viride cido fumrico Rhizop. oryzae, Rhizop. stolonifer cido glucnico A.
carbonarius. Nger. oryzae, A. wentii, E. javanicum, Pe., P. chrysogenum luteum", P. simplicissimum
A. itaconicus Itaconic cido, como el cido kjico A. terreus candidus. flavus,. oryzae, A. parasiticus,
A. tamarii, P. jensenii, R. microsporus, Rhizop. oryzae, Rhizop. stolonifer
D-cido lctico Rhizop. oryzae

, el cido L-mlico A. atroviolaceus. citricus. flavus, como Nger, A. ochraceus. oryzae, A. wentii,
Rhizop. oryzae
D-cido Araboascorbic Pe. chrysogenum cido Erythorbic P. griseoroseum
tambin, Konig et al. (1982) mostraron que la forma de Penicillium chrysogenum peleteado es
deseable para la produccin de penicilina en un biorreactor de torre.
El cambio en la morfologa durante el crecimiento afecta el consumo de nutrientes y la tasa de

absorcin de oxgeno en cultivo sumergido (Schugerl et al., 1983). Adems, las caractersticas
morfolgicas formas de crecimiento pueden tener un efecto significativo sobre la reologa de los
caldos de fermentacin y, por lo tanto, el rendimiento del bioreactor. Los resultados de crecimiento
filamentosas en caldos altamente viscoso con no-newtoniano pseudoplstico, comportamiento de
flujo (Kristiansen y Bullock, 1988). La alta viscosidad tiene un impacto negativo sobre las
propiedades de transferencia de masa del caldo, especialmente el gas lquido - tasa de
transferencia de masa. Peleteado crecimiento exhibe baja viscosidad y enfoque newtoniano
comportamiento (Cadena et al., 1966). Como era de esperar, la mayor potencia de entradas son
necesarias para el crecimiento versus filamentosas peleteado en el logro de una agitacin
adecuada y la transferencia de oxgeno. No obstante, frecuentemente, en la regin central de
mayor pellets sufre autolisis como resultado de la limitacin de nutrientes. Este autolisis pueden
tener un efecto significativo en el metabolismo celular y la sntesis de productos (Philips, 1966;
Elmayergi et al., 1973).
Por lo tanto, grnulos pequeos frente a las grandes, en general, se considera deseable en el
desarrollo de hongos filamentosos fermentaciones.
El xito de la produccin de un metabolito de hongos requiere un conocimiento detallado de las

caractersticas de crecimiento y la fisiologa del hongo en cuestin. No slo la produccin de
metabolitos diferentes requieren diferentes condiciones fisiolgicas sino tambin cada hongo es
nico en su anatmicas, morfolgicas y fisiolgicas de desarrollo. As, para cada uno de
fermentacin, las condiciones fisiolgicas y precisa la fase correcta del desarrollo debe ser
establecida para la formacin de producto mxima. En otras palabras, el control de la forma de
estos microorganismos es un problema real que requiere gran atencin, a fin de hacer un uso
ptimo de su potencial capacidad de produccin. Muchos cientficos han estudiado este problema
desde el punto de vista de la ingeniera desde hace ms de cinco dcadas, mientras que la
contribucin de los fisilogos est creciendo constantemente a medida que ms y ms detalles de
los procesos de transporte y las cinticas involucradas en la morfognesis son conocidos.
El resultado es un paisaje impresionante de resultados sobre la morfologa y la sobreproduccin de

metabolitos de hongos y este extenso comentario es acerca de este paisaje. Es una encuesta
M. Papagianni / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259 193
de todas las principales lneas de desarrollo de una zona muy interesante de la investigacin en
biotecnologa:
mecanismos de crecimiento micelial, la dinmica de agregacin, fenmenos de transporte,

fragmen- tation, crecimiento en cultivo sumergido y los parmetros de proceso, la cuantificacin
de la morfologa y la modelizacin del crecimiento y la formacin de producto.
2. Mecanismos de crecimiento de hongos filamentosos
bajo las condiciones apropiadas, el micelio vegetativo da lugar a un micelio reproductivo que
apoya la produccin de esporas reproductivas. El tipo de la esporulacin y la morfologa de las
esporas y estructuras de cojinete de esporas son las caractersticas claves de identificacin de
hongos. Las esporas de hongos, por lo tanto, puede ser considerado como el comienzo y el final del
proceso de diferenciacin. En el hongo micelial, las hifas se extienden por un proceso altamente
polarizado de extensin celular conocida como punta de extensin. Como sugerencia se extiende,
peridico de las ramas se forman en o cerca de la cspide de la punta. Estas ramas tambin se
extienden en una manera polarizada como nuevos consejos. Los dos procesos de punta y la
ramificacin de extensin permiten al organismo a colonizar y utilizar eficientemente el sustrato, y
rara vez se encuentran en los organismos distintos de los hongos, lo que lleva a ser llamado
distintivos de los hongos del reino (Heath, 1995).
2.1. Extensin punta hifales
germinacin de esporas resulta en la formacin de un germen tubo, cuyo rpido crecimiento es

apoyado por la movilizacin y la utilizacin de compuestos de almacenamiento en la espora. Como
el tubo germinal desarrolla, contribuye a la biosntesis y extensin por la absorcin y metabolismo
de los nutrientes desde el medio. Extensin hifales es un ejemplo extremo de crecimiento celular
de clulas polarizadas desde la extensin est limitado a una zona estrecha definida por el apex
hifales oblicuos. La tasa de sntesis de la pared en el apical de las 1 am de un hypha puede ser 50
veces mayor que 50 Am detrs (Gooday, 1971; y Gooday Trinci, 1980). Aunque este patrn de
crecimiento apical ha sido conocido por ms de un siglo (Reinhardt, 1892), los mecanismos
subyacentes que representan el crecimiento hifales polarizada no se entiende todava. Tasa de
extensin se acelera a medida que aumenta la longitud del tubo germinal y el crecimiento se
convierte en autocatalytic.
Sugerencia El crecimiento es un proceso que tiene muchas similitudes en diversas clulas

amurallada como hifas, los tubos polnicos y pelos. Gran parte de la investigacin se ha centrado
en el mecanismo de extensin de punta. Anlisis de la literatura sobre hongos, con comparacin
seleccionada con otra sugerencia: cultivo de clulas de plantas, muestra que la tasa de crecimiento
y la morfologa de las hifas son sensibles a los factores que influyen en Ca2+ intracelular. Estos
factores incluyen variaciones en extracel-
2 + 2 + 2 + lular concentraciones de Ca, Ca ionophores, inhibidores del transporte de Ca y bferes

introducido en el citoplasma (Jackson y Heath, 1993; Parton et al., 1997). Los efectos de estos
agentes parece estar mediada por una punta de alto gradiente libre citoplsmico de Ca 2+, que se
presente y participa obligatoriamente en crecimiento activo. Observaciones ms recientes
coinciden en que la pendiente es muy pronunciada, disminuyendo rpidamente dentro de 10 - 20
hs de la punta (Jackson y Heath, 1993). Este gradiente parece ser generada por los efectos
combinados de una afluencia de Ca2 +, a travs de la membrana plasmtica, posiblemente stretch-
los canales activos localizados en la punta, y subapical hifales expulsin o secuestro de estos iones.
Se sugiere que el
2 + el reglamento del Ca degradado, a su vez, modula las propiedades de la actina-basada
componente del citoesqueleto, lo cual a su vez controla la extensibilidad y, posiblemente, la

sntesis de los hifales y Geitmann apex (Heath, 2000).
El proceso de mitosis, y la ramificacin septation han sido estudiados en el indiferenciado y mycelia

hypha principal de Aspergillus nidulans, que forma septos incompletos (y Trinci Fiddy, 1976). Tras la
germinacin de esporas, los ncleos se dividen sincrnicamente hasta del tubo germinal de hifas
contienen 8 o 16 ncleos. La mitosis ocurre cuando el volumen del citoplasma por ncleo es de
aproximadamente 60 a 3 m . Desarrollo Intercompartment no sincronizar y mitosis en el micelio
como un todo se convierte en asincrnico. Durante la etapa de desarrollo del compartimento
asincrnica, los ncleos, membranas, ramas y longitud total de mycelia indiferenciado aumentan
exponencialmente a aproximadamente la misma velocidad especfica (y Trinci Fiddy, 1976). El
promedio de tiempo necesario para la formacin de un grupo de los septos, segn se informa, est
a unos 9 min. Cada hypha formas hasta 9 diafragmas en un grupo a la vez. El intervalo promedio
entre ciclos sucesivos de septation en un hypha es aproximadamente el mismo que el tiempo de
duplicacin del organismo. Un muy alto coeficiente de correlacin se comunic entre septation,
sucursal de iniciacin y la mayora de los compartimentos intercalario formaron inicialmente una
sola rama (y Trinci Fiddy, 1976).
Mitosis sincrnica tambin ha sido observado durante las primeras etapas de crecimiento de
Como.
nidulans de esporas (Rosenberger y Kessel, 1967) y en los compartimentos de las principales hypha
apical de Alternaria solanis (Rey y Alexander, 1969) y como. nidulans (Clutterbuck, 1970). En ambas
especies, mitosis en hifas principal es seguida despus de un pequeo intervalo por septation.
Estas observaciones sugieren la existencia de un ciclo de duplicacin en compartimentos apical
que es anlogo al ciclo celular de las clulas uninucleate. Los principales eventos de este ciclo de
duplicacin son los siguientes: (1) reduccin del compartimiento apical a casi la mitad de su
longitud por septation; (2) El recin formado compartimiento apical sigue aumentando en longitud
a un ritmo lineal; (3) el volumen del citoplasma por ncleo aumenta hasta una proporcin crtica
cuando los ncleos son inducidos a dividir ms o menos sincrnicamente; y (4) la mitosis seguida
por septation, el cual es completado cuando el compartimiento apical es aproximadamente el
doble de su longitud original (y Trinci Fiddy, 1976).
En consecuencia, la longitud hifales aumenta exponencialmente a un ritmo especfico constante

que puede ser significativamente mayor que la mxima tasa de crecimiento especfico en el medio
lquido equivalente a causa de la contribucin de las reservas de esporas endgenas. Crecimiento
exponencial no puede continuar indefinidamente y tasa de extensin eventualmente alcanza un
valor constante, es decir, la extensin es lineal. Esto ocurre cuando la punta ya no puede
incorporar la mayor cantidad de material alimentado o, ms probablemente, cuando el transporte
de material procedente de regiones muy distantes de la punta es limitada. Este ltimo puede ser el
resultado de una ruptura de la polaridad apical, de tal manera que el transporte se produce a una
tasa inferior a la tasa de extensin hifales (Prosser, 1995). Una explicacin ms comn es la
formacin de los septos que impiden el transporte de material a la punta. Tasa de extensin ser
dependiente de la biosntesis dentro del compartimento nicamente apical (Prosser, 1995).
Ambos hifales y extensin de la longitud de la punta de apoyo crecimiento hypha varan

considerablemente dentro de los hongos. Por ejemplo, el crecimiento lineal ocurre en Rhizopus
stolonifer cuando el tubo germinal es slo de 40 am en longitud, mientras que el crecimiento
exponencial de sporangiophores de Phycomyces blakesleeanus contina hasta que tienen 4 mm de
longitud (Trinci, 1969). Extensin hifales velocidad depender de la cantidad de material
suministrado a la punta y en la superficie de la zona de extensin, que aumentar con dimetro
hifales y con mayor disminucin de
la punta. Se ha trabajado muy poco sobre la relacin entre la extensin y la forma de la punta de
velocidad, pero la tasa de extensin se encuentra generalmente a aumentar con dimetro hifales
dentro de un nico organismo. La relacin no es siempre bien definidos. Zhu y Gooday (1992)
encontraron una relacin directa entre la tasa de extensin hifales y el cuadrado del dimetro para
hypha de Botrytis cinerea, sugiriendo la tasa de extensin depende de la tasa de suministro de
material a la punta. En Mucor rouxii, sin embargo, a pesar de que aument la tasa de extensin
con un dimetro, ninguna relacin cuantitativa exacta podra ser identificados (Zhu y Gooday,
1992).
2.2. Ramificacin
2.2.1. Crecimiento exponencial crecimiento microbiano se asocia normalmente con el aumento
exponencial de la biomasa cuando las condiciones son favorables para el crecimiento y cuando los
nutrientes son en exceso. Crecimiento exponencial requiere que todos o un porcentaje constante
de la masa de los microorganismos presentes, contribuyen a un nuevo crecimiento. Si todo
crecimiento tiene lugar en el segmento apical de las hifas y el individuo hypha extender a una
velocidad lineal constante, entonces el crecimiento exponencial que requerir nuevas ramas se
producen a un ritmo proporcional a la tasa de aumento de la masa celular.
La primera rama generalmente se forman a partir del tubo germinal hacia el final del perodo de
ampliacin exponencial (Prosser, 1995). Esta rara vez afecta la tasa de extensin del progenitor
hypha, aunque el crecimiento temprano de la subdivisin est apoyada por el material
proporcionado por el padre hypha. Longitud de ramal aumenta a un ritmo acelerado, antes de
llegar a un valor constante, que en young mycelia, es igual que la de sus padres hypha. En trminos
de la cintica de crecimiento, formacin de rama puede considerarse equivalente a la divisin
celular en los organismos unicelulares.
Se ha informado que la frecuencia de ramificacin como. nidulans fue proporcional a la tasa de

crecimiento especfico cuando el crecimiento en diferentes medios se compar (Katz et al., 1972).
Hifas individuales tambin puede crecer exponencialmente en lugar de linealmente en

determinadas circunstancias. Se ha reportado un crecimiento exponencial del tubo germinal
durante una excrecencia. nidulans y tambin en el perodo crtico del crecimiento despus de la
rama de la formacin. Contina el crecimiento de hongos a una tasa proporcional a la longitud de
la hypha hasta que se alcanza el mximo de la caracterstica del organismo (Katz et al., 1972). La
tasa de crecimiento apical puede considerarse que dependen de la capacidad de la hypha
biosinttico. Cuando se excede la capacidad de la regin apical a utilizar los productos de la
biosntesis de una nueva rama es iniciado. Por lo tanto, el crecimiento exponencial se produce a
travs de un aumento exponencial en el nmero de ramas, cada una de las cuales se extiende al
mismo ritmo constante. Esto fue demostrado experimentalmente para el geotrichum candidum,
Neurospora crassa, Pe. chrysogenum y Como. nidulans por Trinci (1974). Este trabajo tambin
demostr que las tasas especficas de aumento en la longitud total del micelio y el nmero total de
sucursales son iguales a la tasa de crecimiento especfico de estos microorganismos crecen en
medios lquidos equivalentes pero en cultura, con concentraciones de biomasa determinada por
las mediciones de peso seco.
Una tasa lineal de extensin impone una restriccin al crecimiento global, que en los organismos
unicelulares avanza a un ritmo exponencial, y esto se ha solucionado por rama de formacin:
Smith (1924) observaron un aumento exponencial en la longitud combinada de los padres y la
rama de hifas, aunque hifas individuales se estaban extendiendo linealmente y Plomley (1959)
observaron un aumento exponencial en total longitud micelial en Chaetomium globosum.
(2) la primera sucursal est formado antes del tubo germinal hypha crece linealmente, aunque
posiblemente no antes de la fase de desaceleracin; (3) rama de produccin inicialmente es
discontinuo, pero despus de las 10 sucursales se han formado el nmero aumenta de forma
exponencial con una tasa especfica igual que para el total de la longitud micelial; y (4) este tipo
especfico es igual a la tasa de crecimiento especfico durante el crecimiento exponencial en medio
lquido, medido en trminos de aumento de peso en seco. Los resultados de este estudio (Trinci,
1974) apoyan la hiptesis de que el crecimiento micelial implica la duplicacin de una ''unidad de
crecimiento'' que contiene una sugerencia y una cierta longitud media de hifas. Plomley (1959)
sugiere que los hongos filamentosos tienen una unidad de crecimiento, que se reproduce a un
ritmo constante (crecimiento lineal) mientras todo el micelio crece exponencialmente. ;H Trinci
(1974) estudi la cintica de crecimiento de la colonia temprana como. nidulans, N. crassa, Mucor
hiemalis y G. candidum en agar y encontr que las cuatro especies mostraron una cintica similar.
Se exhiben cuatro caractersticas: (1) Total de longitud micelial aumenta exponencialmente
durante al menos 11
Caldwell y Trinci (1973) estudi la unidad de crecimiento hifales (HGU) de G. candidum lotes
cultivados en la cultura. El micelio creci en la forma filamentosa mientras la fragmentacin hifales
ocurrieron durante el crecimiento. Durante la primera parte de la fase estacionaria, la fragmentos
hifales tena una longitud media de 300 - 400 Am. El peso en seco total longitud hifales, nmero de
consejos y la turbidez de la cultura aument exponencialmente en una tendencia similar a la tasa
de crecimiento especfico. Los resultados sugieren una unidad funcional de crecimiento
consistente de una punta hifales asociado con una constante la longitud promedio de las hifas. La
unidad de crecimiento hifales, G, se define como la proporcin del total de longitud hifales en el
nmero total de sucursales y es, por lo tanto, la duracin media de la hypha asociado con un pice.
En el caso de G. candidum, esta unidad era de aproximadamente 100 am y se mantuvo constante,
mientras que la tasa de crecimiento especfico vara en funcin de los cambios en la temperatura y
la fuente de carbono (Steele y Trinci, 1975). Por lo tanto esta unidad representa la longitud media
de la hypha necesarios para apoyar el crecimiento de la punta, mientras que la zona de
crecimiento perifrico representa la longitud mxima. Mientras que la zona de crecimiento
perifrico y la tasa de crecimiento especfico estn relacionados por la tasa mxima de extensin,
la unidad de crecimiento hifales ( G) est relacionada con la tasa de crecimiento especfico por el
promedio de la tasa de extensin y Trinci (Steele, 1975). Esto se calcula como:
2Ht E 1H0 B0 Bt
donde E es el promedio de la tasa de extensin, H0 y Ht representan el total de las longitudes

hifales 0 y 1 h despus, y B0 y Bt representan los nmeros respectivos de consejos hifales. Esto
est relacionado con la tasa de crecimiento especfico por la ecuacin:
E Gl 2
valores de G aumente durante el desarrollo micelial y haga oscilar hasta las ramas se forman
continuamente, cuando G alcanza un valor constante. As, mientras que la tasa de crecimiento
especfico proporciona una indicacin de la cintica de la rama de formacin, el crecimiento hifales
unidad proporciona informacin sobre la densidad de ramificacin, aumentando como
ramificacin se vuelve ms dispersa (Bull y Trinci, 1977). El crecimiento hifales unidad es una
propiedad del micelio y sus propiedades matemticas y su relacin con otros parmetros de
crecimiento micelial y hifales han sido ampliamente analizados por Kotov y Reshetnikov (1990). La
relativa constancia de la longitud de la unidad de crecimiento hifales indica la existencia de un

mecanismo de reglamentacin, en la que una rama est formado en algn lugar del micelio
cuando el valor de G, caractersticas del organismo y las condiciones de crecimiento, se ha
superado.
La discusin anterior se refiere a los jvenes en el desarrollo de mycelia hifas. Como una colonia de
formularios, la cintica de crecimiento y ramificacin hifales en el centro de la colonia estar
influenciado por la reduccin en las concentraciones de nutrientes y oxgeno, la acumulacin de
productos finales inhibitoria, la produccin de metabolitos secundarios y los cambios en los
factores ambientales tales como el pH (Prosser, 1995). La importancia relativa de estos factores en
la formacin de la biomasa en el desarrollo mycelia es desconocido, pero obviamente llevar a una
disminucin en la tasa de crecimiento, con los consiguientes efectos sobre la formacin de la rama
y la morfologa de los elementos hifales Dispersados libremente.
Trinci (1971) ha relacionado la tasa a la que las colonias de hongos crecieron en agar a su tasa de
crecimiento en cultivo sumergido usando el concepto de un anillo perifrico en el que el micelio
crece exponencialmente. Midiendo el ancho de la zona de crecimiento perifrico (w) y la tasa de
crecimiento radial colonia lineal (Kr), Trinci utiliza la ecuacin:
Dr lw 3 dt Kr
para calcular la tasa de crecimiento especfico (l) en el caso de nueve especies de hongos. l
encontr que el valor calculado es igual a la tasa de crecimiento especfico medido en cultivo
sumergido. La tasa de crecimiento radial de Colonia tambin se veran afectados por la densidad
hifales o frecuencia de ramificacin, lo cual puede ser un factor determinante de la anchura de la
zona de crecimiento. Bainbridge y Trinci (1971) observ que un mutante de Como. nidulans fue
ms ramificado que su organismo parental bajo las mismas condiciones. Haba casi idntico al de la
tasa de crecimiento especfico en cultivo sumergido sino una colonia sustancialmente menor tasa
de crecimiento radial y una pequea zona de crecimiento perifrico cuando se cultiva en agar.
Eq. (3), utilizado por Trinci Pirt (1971) y (1967) para expresar la colonia lineal crecimiento radial
puede ser re-escrita como:
Dr lbk 4 dt donde b es la densidad hifales y k es una constante. Densidad hifales puede estar
directamente relacionado con la frecuencia de ramificacin si la longitud del entrenudo es usado o
la longitud hifales total dividido por el nmero creciente de consejos. Y Righelato Morisson (1974)
han utilizado el EQ. (4) relacionar las mediciones de la tasa de crecimiento especfico y la
ramificacin hifales en cultivo sumergido a colonia tasa de crecimiento radial en agar. Sus
resultados sugieren que la anchura de la zona de crecimiento perifrico de las colonias crecen en
agar podra cambiar a medida que los cambios en la tasa de crecimiento especfico.
Recientemente, el uso del anlisis de imgenes en el estudio de Christiansen et al. (1999) permiti
una determinacin en lnea de la cintica de crecimiento de la nica de las hifas de Aspergillus
oryzae en un flujo a travs de la celda a diferentes concentraciones de glucosa. La tasa de
extensin de punta de las hifas individuales fueron descritos con saturacin tipo cinticas con
respecto a la longitud de las hifas. Se observ que la tasa de extensin mxima de punta era
constante para todas las hifas medidos en el mismo la concentracin de glucosa, mientras que la
saturacin constante para las hifas vari considerablemente entre las hifas incluso dentro del
mismo elemento hifales.
La extensin punta tasa disminuy temporalmente cuando se produjo ramificaciones apicales. El

nmero de ramas formaron en un hypha era proporcional a la longitud de la hypha que supera una
determinada longitud mnima requerida para apoyar el crecimiento de una nueva rama.
Los intentos por comprender el crecimiento de la punta y la ramificacin han empleado diversos
enfoques.
Anlisis citolgico ha identificado varias sustancias clave que intervienen en el proceso,

especialmente la actina y calcio (Heath, 1995; Grinberg y Heath, 1997; Hyde y Heath, 1997; Jackson
y Heath, 1993; Kaminsky y Heath, 1996). Estudios ultraestructurales han demostrado la
importancia de tip-crecimiento (vesculas Bartnicki-Garcia- Bartnicki, 1990; Garca et al., 1989;
Prosser y Trinci, 1979; Trinci, 1969). El anlisis gentico de mutantes naturales o inducidos ha
identificado ms de 100 loci que codifican productos que pueden afectar el crecimiento de la
punta y la ramificacin de N. crassa (Perkins et al., 1982; Scott, 1976). Producto de extensin de
punta a travs de la polarizacin exocitosis de tip-crecimiento (vesculas Bartnicki-Garcia, 1990;
Bartnicki-Garcia et al., 1989; Prosser y Trinci, 1979; Scott, 1976). Deposicin de vesculas parece
estar orquestada por la Spitzenkorper, una coleccin suelta de vesculas cerca del pice hifales
(Grove y Bracker, 1970; Howard, 1981).
2.2.2. Punta de modelado de crecimiento y ramificacin cualquier sugerencia modelo integral para
el crecimiento y la ramificacin principal debe incorporar la fenomenologa asociada con estos
procesos. Se produce a travs de la extensin de la punta- tosis exocy apical de tip-crecimiento
subapically vesculas fabricado y transportado a la punta. As, la concentracin de punta de
vesculas y cualquier otra sugerencia factores extensin depende del equilibrio entre las tasas de
alimentacin (sntesis y transporte) y el consumo (ya sea la deposicin o destruccin). Las
bifurcaciones, la cual es desencadenada por la tasa de acumulacin en la punta, es proporcional al
exceso de produccin de vesculas a travs de la deposicin de punta. Ramificacin ha demostrado
ser al menos parcialmente controlados por factores o proximal a la rama anterior punto (Watters
et al., 2000a).
La base de vesicular crecimiento hifales y ramificacin se incorpor en un modelo por Trinci (1974).
Un elemento clave de este modelo fue el crecimiento hifales unidad. La apertura de una nueva
sucursal ha sido propuesto para ser controlado por los cambios en el volumen citoplsmico de
ramificacin, por lo que se produce cuando un valor crtico de la media unidad de crecimiento
hifales es alcanzado. De esta manera, el protoplasma bastante distante de la punta creciente
podra tener un papel en la rama que aportan la iniciacin. En una elaboracin ulterior de este
modelo, Prosser y Trinci (1979) propuso que las concentraciones de vesculas y ncleos regular el
aumento de longitud hifales y la aparicin de las ramas y los septos. Prosser (1979) tambin ha
desarrollado un modelo de crecimiento hifales y ramificacin, que se refiere a acontecimientos
citolgicos cintica de crecimiento. El modelo cuantifica las teoras del crecimiento cualitativo
hifales que vesculas que contienen precursores de la pared y/o enzimas necesarias para la sntesis
de la pared son generados a una tasa constante durante todo el micelio y viajar a las puntas donde
ellos se fusionan con la membrana plasmtica. Esto es seguido por la liberacin de su contenido en
la pared y aumento de la superficie de las hifas para dar el alargamiento. La hiptesis seala que
existe un ciclo de duplicacin en las hifas, que es equivalente a la observada en el ciclo celular en
los organismos unicelulares.
Watters et al. (2000b) mostraron que en N. crassa la rama de distribucin de intervalos es

independiente del tipo de extensin de punta, como controlada por la temperatura. Aunque el
enfriamiento rpido perturba esta distribucin, la distribucin normal predeterminado de
intervalos de rama fue pronto
restaurado a la nueva temperatura. As, la distribucin estadstica de la rama a la rama intervalos a

lo largo de un hypha parece constituir un punto de ajuste homeosttico. La falta de dependencia
de la rama de distribucin de temperatura (o tasa de crecimiento) se explica en el trabajo de
Watters y Griffiths (2001), quienes desarrollaron y probaron un modelo en el que la formacin de
una rama lateral en N. crassa fue determinado por la acumulacin de punta- el crecimiento de las
vesculas causada por el exceso de la tasa de oferta por encima de la tasa de deposicin en el
pice. El modelo explica cmo pueden ser independientes de ramificacin extensin punta rate
bajo condiciones de estado estable mientras responde espectacularmente a las condiciones
cambiantes.
Aparte de las descritas anteriormente, muchos otros modelos vesicular diferentes enfoques han
sido adoptados en la modelizacin de las primeras etapas del crecimiento de hongos filamentosos.
Poblacin hifales modelos en los que el promedio de las propiedades de todas las hifas dentro de
un micelio son considerados, han sido descritos por Edelstein (1982), y Edelstein y Segal (1983).
Modelos estocsticos, que tengan en cuenta la variabilidad natural dentro de un sistema y las
consecuencias de tal variabilidad, han sido descritas por Hutchison et al. (1980). Yang et al. (1992)
propone un modelo de crecimiento micelial, que combina el modelo de Prosser y Trinci (1979) con
el enfoque estocstico aprobado por Hutchison et al. (1980) para describir la direccin de la punta
del crecimiento y ramificacin, y el sitio de la rama de formacin.
Un vnculo entre la poblacin micelial macroscpicos y modelos de crecimiento fue presentada

recientemente por el modelo de Viniegra-Gonzales et al. (1993), que se basa en las matemticas
de rboles simtricos. El modelo considera el micelio como una poblacin de interprofesionales de
segmentos de longitud media, definida como: Lav
Lav Lt 5 Ns
donde Lt es el total de longitud hifales ns y el nmero de segmentos y equivale a 2(NT 1), donde
NT es el nmero total de consejos. Este modelo predice que el crecimiento especfico de la unidad
G ser mayor en los niveles superiores de ramificacin. Esto ha sido sugerido por Caldwell y Trinci
(1973), pero las expresiones modelo proporcionar relaciones cuantitativas que muestran un buen
acuerdo con los datos experimentales sobre el crecimiento de los jvenes mycelia de G. candidum.
Este modelo se desarroll para permitir la prediccin de la tasa de crecimiento especfico,
determinado en trminos de biomasa, incorporando una distribucin de frecuencia para la
proporcin de biomasa que est inactivo. Este ''macroscopic'' modelo predice la diferencia
observada en la tasa de crecimiento especfico entre los tubos germinales y mycelia aumentan
exponencialmente. Tambin se utiliza para predecir el crecimiento en cultivo batch como. Nger y
ofrece un nuevo enfoque para las descripciones de crecimiento micelial y valioso en la vinculacin
de las propiedades morfolgicas de cintica. Prueba del modelo ser facilitado con tcnicas de
anlisis de imagen que se utiliza ahora para la cuantificacin de morfologa micelial.
Informacin morfolgica cuantificados obtenidos con anlisis de imgenes on-line fue empleada
en el modelo reportados por Christiansen et al. (1999) para el crecimiento temprano de Como.
oryzae. La cintica observada en este estudio se utilizaron para simular el resultado de un
elemento hifales desde una sola espora utilizando una tcnica de simulacin de Monte Carlo. La
simulacin mostr que la observada para la cintica de hifas individuales dio lugar a un patrn de
crecimiento verificado experimentalmente con crecimiento exponencial en ambos hifales total
longitud y nmero de puntas.
3. La dinmica de agregacin micelial
en culturas sumergidas, muchos microorganismos filamentosos tienden a agregado y crecer como

pellets de la compacidad de la cual vara considerablemente. Pellets sean esfricas o elipsoidales
masas de hifas con estructura interna variable, desde libremente empaquetadas hifas formando
''fluffy'', pellets, tupida y compacta, densa y Kogane pellets (Yanagita, 1963). Wittler et al. (1986)
propone la existencia de cuatro regiones. La regin exterior se compone de hifas viables y rodea
una capa de hifas mostrando signos de autolisis. En huecos de pellets, se encuentra una tercera
capa que contiene hifas con estructura de pared irregular, mientras que el centro del pellet no
contiene mycelia reconocible. La densidad de hifas dentro de pellets es de importancia para la
difusin de los nutrientes y el oxgeno a la biomasa micelial, con los consiguientes efectos en el
crecimiento, especialmente en el centro de pellets compacto.
Control de morfologa micelial en fermentacin es a menudo un requisito previo para la aplicacin

industrial. En algunos procesos, libre mycelia son necesarios, como en la produccin de penicilina
de Pe. chrysogenum. Mientras que en otros procesos, pellets o clulas inmovilizadas son preferidas
para el aumento de los rendimientos, como en la produccin de cido ctrico de Como. Nger (Islas
Salomn, 1980; Metz, 1976). Las desventajas del crecimiento micelial dispersos han sido discutidos
y incluyen una reduccin en la eficiencia de la mezcla y el suministro de oxgeno, as como un
aumento del crecimiento de pared. Estos problemas pueden ser resueltos en cierta medida por el
crecimiento en forma de pellets, que tambin mejoran la cosecha a travs de filtrado mejorado
caractersticas del caldo. La metodologa de formacin de pellets durante varios microorganismos
ha sido revisada (acero et al., 1954; Whitaker y Long, 1973; Brown y Zainudeen, 1977; van Suijdam
et al., 1980).
Aplicacin de agregados para la produccin de metabolitos micelial depende de la obtencin de

pellets uniforme del tamao deseado. Esto no es fcil de realizar, ya que hay muchos factores que
influyen en la formacin de pellets. Entre los factores que influyen en la agregacin celular son el
tamao del inculo, tipo y edad (acero et al., 1954; Calam, 1987; Gerlach et al., 1998; Papagianni
et al., 1999d, 2001; y Papagianni Moo-Young, 2002), los factores genticos y la capacidad de
producir bioflocculants (Prosser y resistente, 1991; Braun y Vecht-Lifshitz, 1991), medio
(composicin Charley, 1981; Gerlach et al., 1998; Papagianni et al., 1999d; Papagianni, 1999), la
biosntesis o adicin de polmeros, surfactantes y quelantes (Pirt y Callow, 1959; Jones et al., 1989;
Papagianni, 1999), las fuerzas de cizallamiento (van Suijdam y Metz, 1981; Braun y Vecht-Lifshitz,
1991), temperatura y presin (Smith y Anderson, 1973; Toro y Bushell, 1976) y de viscosidad media
(Gerlach et al., 1998; Papagianni et al., 2001). La morfologa de un desarrollo de hongos
filamentosos que en cualquier sistema de fermentacin podra considerarse como un resultado
final de influencias en pugna, un equilibrio entre las fuerzas de la cohesin y la desintegracin.
Fuerzas de corte puede ser inequvocamente asignado el papel de factores solubles. En los valores
de pH por encima de 5.5, las paredes celulares de la mayora de los microorganismos estn
cargadas negativamente, tiende a provocar la separacin de la agregacin de clulas mediante
repulsin electroesttica. Esto puede ser reprimida
2 + por un aumento de la fuerza inica, puente o celdas con iones de Ca (Braun y Vecht- Lifshitz,
1991). Adems de polycations generalmente induce agregacin, mientras que el poli- aniones
suprimirla (Elmayergi et al., 1973; 1975; Elmayergi Domingues et al., 2000).
La chemico-termodinmicos base para el efecto de las condiciones de crecimiento en la formacin

de pellets como. Nger fue investigado por Ryoo y Choi (1999).
M. Papagianni Thesurface / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259 201
equilibrio termodinmico entre la clula fngica y medios lquidos fue hallado responsable de
formacin de pellets, ya que la energa libre de Gibbs de pellet formacin de
2 medios de cultivo inicial ( 73 a 81 ergs/cm ) se incrementaron a 13 a 46 ergs/
2 cm a las 48 h. Anlisis FTIR mostr que los factores que inducen la formacin de pellets
aumentaron simultneamente la hidrofobicidad de la pared celular como. Nger.
Los factores genticos influyen en la composicin de la pared celular y las propiedades de la

superficie y determinar la formacin y composicin de una capa de limo. La gentica y los factores
ambientales son los responsables de la produccin de los agentes superficie-activos y de las
lectinas. Ambos afectan a fuerzas de cohesin y/o repulsin entre las clulas. Segn la clasificacin
de Takahashi et al. (1958) y Takahashi y Yamada (1959), dos tipos de formacin de pellets puede
ser distinguido. Formacin de pellets en Como. Nger pertenece al tipo coagulativa (y Kogane
Yanagita, 1963), donde las esporas se coagule mientras germina y da lugar a una red de hifas
entrelazadas. Pellets de Pe. chrysogenum pertenecen a la no-tipo coagulativa (Metz, 1976), donde
un pellet es producido a partir de una espora. Coagulacin de la espora puede jugar un papel en la
formacin de pellets, a condicin de que desarrollar redes-trampa, aunque plets forman con
frecuencia en la ausencia de aglutinacin de esporas. Incluso en Como. Nger, el nmero de
pastillas es igual al nmero de acumulaciones espora inicial slo a baja potencia de entrada; con el
aumento de la potencia de entrada, las esporas a pellet relacin tiende hacia la unidad como.
Nger (Vecht- Lifshitz et al., 1989), mientras que en otros organismos de formacin de pellets, esta
proporcin puede llegar a alcanzar varios rdenes de magnitud por debajo de la unidad (Elmayergi
et al., 1973).
Evaluar los factores que influyen en la formacin de pellets en hongos filamentosos, a menudo es
difcil definir un mecanismo de formacin de pellets de resultados reportados, como a menudo
ms de un parmetro se ajusta cambiando slo una variable. Incluso para el ms estudiado,
industrialmente importantes especies de Penicillium y Aspergillus los informes son contradictorios
(Islas Salomn, 1980; Whitaker y Long, 1973; Metz et al., 1979; Gmez et al., 1988).
Los intentos de tratar la formacin de pellets como un fenmeno general son frecuentemente se
reuni por microbilogos industriales con desconfianza. Sorprendentemente, el efecto de los
diferentes parmetros de fermentacin en pellet formacin parece ser bastante similares en
sistemas filamentosas como genticamente remota como hongos y actinomicetos. Por ejemplo, en
Pe. chrysogenum (Metz, 1976). Niger (van Suijdam et al., 1980), Streptomyces (Vecht-Lifshitz
tendae et al., 1989) y S. Y Vecht-Lifshitz griseous (Braun, 1991), los pellets se form en el inculo
11 3 niveles por debajo de 10 esporas m , mientras que a mayor inculo, filamentosas predomina
el crecimiento.
Asimismo, factores que favorecen el aumento de las tasas de crecimiento, como son los medios
ricos en nutrientes fcilmente asimilables, reducir la formacin de pellets en hongos
(Hemmersdorfer et al., 1987) y actinomicetos (Vecht-Lifshitz et al., 1989). Tales observaciones
condujeron a una limitacin hiptesis que sugiere que la falta de nutrientes, oxgeno, induce la
formacin de pellets (Hemmersdorfer et al., 1987). De hecho, aument la agregacin micelial se
seal como consecuencia de la limitacin de nitrgeno en muchos casos (Vecht-Lifshitz et al.,
1989; Hemmers- dorfer et al., 1987). Sin embargo, hay pocos informes contradiciendo la limitacin
hiptesis con respecto al oxgeno. Hockenhull (1980) destaca que el pelleted morfologas
predominan en los primeros aos de vida de una cultura cuando el suministro de oxgeno es
suficiente, mientras que las culturas antiguas tienden a ser filamentosas.
Formacin de pellets micelial es considerada, en algunos casos, un requisito previo para el xito de
la produccin de ciertos metabolitos, tales como los cidos ctrico y itaconic (Metz et al., 1979;
Gmez et al., 1988), hongos y algunas enzimas como la glucosa oxidasa (
202 M. Papagianni Zetelaki / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259
y Vas, 1968), (Hemmersdorfer polygalacturonidase et al., 1987), la fitasa (Papagianni et al., 1999d)
y (E Papagianni glucoamylase Moo-Young, 2002). Diferenciacin de mycelia durante la formacin
de pellets en resultados sorprendentes efectos sobre la produccin de enzimas. Poli-
galacturonidase sntesis se asocia con la morfologa del hongo como. Nger. El ms compacto el
pellet, mayor la polygalactorunidase sntesis. Independientemente del medio utilizado, un
aumento de dos rdenes de magnitud en la Concentracin de enzima y la tasa de produccin entre
el libre y el micelio filamentosas peleteado tipo fue observado (Hemmersdorfer et al., 1987). Se
observaron aumentos similares en las tasas de produccin glucoamylase por pellets de Como.
Nger (Papagianni y Moo-Young, 2002). Estos fenmenos pueden estar relacionados a diffusional
limitaciones en pellets, que reduzca el grado de represin catablica en pellets o limitar el
suministro de oxgeno, evitando de esta manera una inactivacin oxidativa de un conjunto
especfico de enzimas.
La magnitud de la diferencia entre la produccin de enzimas en pellets y en libre mycelia

filamentosos a diferentes concentraciones de catabolites (Hemmersdorfer et al., 1987) parece
indicar la existencia de factores adicionales, como los degradados de productos metablicos en
pellets que sirven como seales biolgicas (moduladores). De hecho, el elevado nivel de clula a
clula y sealizacin de interaccin resultantes de cortas distancias en diffusional agregados
micelial conduce a un estado de diferenciacin cualitativamente diferente del de libre mycelia
filamentosas. En un comentario sobre los factores que afectan la agregacin micelial, Braun y
Vecht-Lifshitz (1991) han declarado que los agregados micelial puede considerarse no slo como
conglomerados de mecnico, sino como complejos tejidos diferenciados fenotpicamente
caracterizada por actividades metablicas especficas. Segn ellos, la analoga ms cercana a este
concepto sera la distincin evidente entre las formas unicelulares o pluricelulares de un molde de
slime.
4. Crecimiento de hongos pellets
peleteado culturas son tradicionalmente asumidas a seguir a raz de cubo, cintica, tras las
observaciones iniciales de Emerson (1950), sobre el crecimiento de N. crassa, andMarshall y
Alexander (1960), quien investig una serie de hongos. Estas cinticas son descritos por la
ecuacin:
1=3 1=3 M 1/4 M0 kt 6
Donde M representa la concentracin de biomasa y k es una constante. Pirt (1966) explica estas
cinticas considerando la heterogeneidad dentro de pellets en manera similar a que dentro de las
colonias crecen en sustrato slido: un precipitado se considera como una masa esfrica de la no-
creciente mycelia rodeado por una capa exterior de hifas activo.
As, un precipitado se supone que aumenta en el radio a un ritmo constante a travs de un

crecimiento exponencial de mycelia dentro de la cscara del activo de las hifas. La anchura de la
carcasa exterior, w, est determinado por las propiedades de difusin de material a travs del
micelio y depende de la estructura de pellets. Por lo tanto, no es directamente equivalente a la
zona de crecimiento perifrico. Por lo tanto, las concentraciones en estado estable de la biomasa y
el sustrato y la tasa de dilucin crtica no slo dependen de la difusividad sino tambin en el
tamao de pellet y fragmen-
cacin y las condiciones de crecimiento reflexionando sobre ellas. Cambios en pellet radius son
descritos por la ecuacin:
r r0 wlt 7 Donde, r y r0 representan pellet radios en los tiempos t y 0. El exterior tiene un

shell activo w anchura y l la tasa de crecimiento especfico. Si el precipitado se supone para ser
esfrica y tener una densidad de biomasa constante q, la ecuacin anterior puede escribirse en
trminos de biomasa, como:
M 1/4 M0 8 1=3 4 pqn wlt 3
donde M y M0 son la biomasa de pellets en los tiempos t y 0, respectivamente, y n es el nmero

de pellets. Esto es equivalente a la ecualizacin. (6), con
k 9 1=3 4 pqn lt 3
El modelo predice un crecimiento exponencial en el lote cultura hasta restricciones a la difusin de

los nutrientes a travs de la masa de pellet reducir las tasas de crecimiento en el centro de los
pellets.
El posterior crecimiento seguir entonces cubo-cintica de raz. Cube-cintica de raz han sido
observados experimentalmente (Trinci, 1970), pero dificultades prcticas para medir con precisin
las concentraciones de biomasa de hacer la distincin de los diferentes tipos de cintica de
crecimiento difcil.
Aunque cube-root pronosticados para la cintica de crecimiento de pellet, es difcil distinguirlos de

cintica exponencial. Koch (1975) construy un modelo que proporciona un enfoque unificado
para el crecimiento en sustrato slido y lquido y predice la mayora de cintica de crecimiento
observado experimentalmente, como colonia expansin lineal, exponencial, cuadradas y cbicas
cintica de raz para la biomasa y explica en trminos de la capacidad de colonizar mycelia regiones
desocupadas de sustrato.
Koch (1975) montado Trinci's datos a la ecuacin logstica, modificado para tener en cuenta el
crecimiento micelial. La ecuacin logstica fue construida originalmente para describir el
crecimiento de los individuos dentro de una poblacin y se basa en el supuesto de que la tasa de
crecimiento especfico disminuye como una funcin lineal negativa del tamao de la poblacin,
tiene la siguiente forma:
rN 2 dN rN10dt k,
donde N es el nmero de individuos, r la tasa intrnseca de crecimiento poblacional y k el

rendimiento o la capacidad de carga del medio ambiente. La ecuacin anterior da:
rt kN0exp N k11N0 N0exprt
donde N0 es el nmero celular inicial. La ecuacin predice una curva de crecimiento sigmoidal.
Para describir el crecimiento micelial, Koch sustituye el nmero de individuos por la biomasa
micelial W, ocupando el volumen unidad de espacio, dV. N0 y k fueron reemplazadas por la inicial
(S) y la mxima (K) por unidad de volumen de biomasa micelial y t fue reemplazado por (T). T es el
tiempo, puesto que el crecimiento de la colonia comenz, mientras que t es el tiempo en el que el
crecimiento primero ocurri dentro del elemento de volumen considerado. La primera ecuacin
puede ser reescrita para (T)>0, como
rT SKexp t dW12DT K S SexprT dV t
restriccin de crecimiento a dos dimensiones para formar una colonia de altura h, que crece a una
tasa constante de crecimiento radial, y considerando el desfase y perodos de crecimiento
exponencial como insignificantes, conduce a la expresin:
Z T rT t SKexp 2 W13
0 K S SexprT t 2ph tdt
mientras se deriva una expresin equivalente para el crecimiento tridimensional, describiendo el

crecimiento en medios lquidos en forma de pellets. El modelo fue resuelto mediante tcnicas de
aproximacin numrica. La cintica de crecimiento fueron fuente depende de la proporcin de
2 a mxima densidad, biomasa inicial K/S. Para K/S valores en el rango de 10 4 -10 , se prev que el
crecimiento sea exponencial y la curva lineal. Los datos experimentales de Como. nidulans pastillas
fueron mejor caracterizado por un valor de K/S aproximadamente 1 y el pronstico de crecimiento
exponencial seguida por cubo-root cintica para la biomasa total y lineal de expansin radial. Pellet
se caracteriza por su rpido crecimiento y simultneo de la colonizacin del medio que rodea el
precipitado por hifas densamente cubriendo la superficie de pellets. Efectivamente, esto no deja
ningn espacio desocupado para su posterior crecimiento, dando la baja observada proporcin
K/s.
5. Efectos de diffusional limitaciones dentro de pellets
aunque el enfoque anterior proporciona informacin sobre los cambios en la densidad de plets,
hay una pequea indicacin de la heterogeneidad caracterstica de pellets y un eslabn faltante
entre la Descripcin microscpica de pellets y el crecimiento micelial, y el proceso global. La causa
principal de la heterogeneidad dentro de pellets se diffusional limitacin de nutrientes y oxgeno
que surge de la densidad de embalaje hifales. El alcance de esta limitacin depende de la densidad
de la estructura; as, en pelotillas compactas, la produccin de biomasa en el centro de la pellet
dejar y, eventualmente, la celda autolisis ocurrir. Este pellet morfologa se ha observado con
frecuencia, por ejemplo, en la fermentacin de cido ctrico sumergidas (Clark, 1961). Como
densos. Nger pellets al final de la fermentacin (140 h) constaba de un shell del micelio ocupan
menos del 50% del volumen de pellet (Clark, 1961). La proporcin de la biomasa metablicamente
activo en este caso est restringida a la zona exterior del micelio menos densa. En menos densos
pellets, creciendo activamente la zona exterior es ms amplio, sustratos difundir libremente dentro
del sedimento y la transferencia de masa puede ocurrir a travs de la difusin y el flujo turbulento
convectivo segn Wittler et al. (1986) y Gerlach et al. (1998).
La importancia de la limitacin de nutrientes y oxgeno en el crecimiento de plets y peleteado

heterogeneidad fisiolgica de la biomasa ha sido tenida en cuenta en la modelacin del
crecimiento de pellets.
Pirt's (1966) el modelo de crecimiento de pellets se basa en el crecimiento de una zona perifrica
activa
que rodean un pellet esfricos y fue utilizada para obtener una expresin para la radio de plets,
RC, en el que la difusin de nutrientes para el ncleo est limitada por la mayor densidad de
biomasa. El nutriente que pueda limitar el crecimiento primero y el uso de oxgeno es el
coeficiente de difusin para el oxgeno y el crecimiento de los parmetros cinticos para pe.
chrysogenum predijo un radio crtico que respondi bien con el radio determinado
experimentalmente. La crtica de radio, RC, fue dada por la expresin
Rc 1/4 m 1=2 6DVYsm 14 ql
donde DV es el coeficiente de difusin, Ysm es el rendimiento de biomasa, q su densidad y l la tasa

de crecimiento especfico.
Modelos ms detallados para la difusin y la utilizacin de oxgeno dentro de pellets se present y

explic la importancia de la limitacin de oxgeno en pellet crecimiento. En el modelo descrito por
Aiba y Kobayashi (1971), la respiracin y la difusin hacia adentro fueron considerados en el
clculo del balance de oxgeno dentro de un precipitado. Ecuaciones de difusin fueron aplicadas y
los ndices relativos de la respiracin en el sedimento y en el medio circundante qVO2=qO2 se
determinaron mediante la expresin:
D15 2 D C 2dC c 2dr2 qqO rdr2 Km c
donde r es el radio de plets y q la densidad de biomasa dentro del sedimento.

En otro modelo, Kobayashi et al. (1973), introdujo un factor de eficacia para describir la reduccin
de la respiracin con el aumento de la distancia desde la superficie de pellets. Se investigaron
varias situaciones, con la respiracin constante dentro del pellet, respiracin varan con la edad y
tambin la respiracin depende de la adaptacin del micelio a limitacin de oxgeno. Los datos
experimentales derivados de peleteado de culturas como. Nger indic la ltima de estas
situaciones como la ms probable.
Michel et al. (1992) compararon los datos experimentales de peleteado culturas Phanerochaete
chrysosporium con las predicciones de los modelos para Vmax y Km de oxgeno dentro de los
pellets.
Estos valores se utilizan para predecir la limitacin de oxgeno en funcin del tamao de pellet y la
concentracin de oxgeno disuelto. Las predicciones de CO2 Evolucin de poblaciones de plets en
el lote se obtuvieron tambin la cultura y acord con los datos experimentales.
6. El envejecimiento celular y autolisis
un aspecto importante del crecimiento de pellets es la fragmentacin o ruptura de pellets. Se ha

observado que el aumento inicial de pellet concentracin en cultivos de hongos es seguida por un
rpido descenso que coincide con una disminucin en la tasa de crecimiento especfico (Nielsen et
al., 1995). Esta ruptura es causada por la lisis celular dentro de plets, en virtud de la cual la
estabilidad del pellet se pierde, y se vuelve ms susceptible a los daos por fuerzas mecnicas.
Adems de pellet ruptura, elementos hifales son arrancado en el sedimento superficial, debilitado
por el proceso de envejecimiento natural de la vacuolizacin. Debido a la fragmentacin de los
pellets y la prdida de
206 M. Papagianni hifales / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259
elementos de la superficie de pellet, la morfologa macroscpica de un cultivo de hongos

cultivados en sustrato lquido cambia drsticamente, por ejemplo, desde el pelleted al disperso
(Justen et al., 1996; Paul et al., 1999), modificando las propiedades reolgicas del caldo y sus
capacidades de transferencia de masa.
A pesar de las diferencias provocadas por las condiciones de cultivo, las hifas conservar algunas
caractersticas, que pueden ser indicadas como sntomas de envejecimiento. Una creciente
septadas hypha pueden separarse en al menos tres zonas: (1) la zona apical (vase la seccin 1); (2)
la zona subapical, rico en componentes del plasma; y (3) la zona de vacuolizacin en los que el
tamao de vacuolas aumenta con la distancia desde el pice, es decir, con la edad de los
compartimentos.
La pared celular, tambin se somete a un proceso de envejecimiento. Diferencias estructurales
entre la pared del pice y de la parte inferior de la hypha han sido indicados por Marchant y Smith
(1968) y Strunk (1963). Autorradiografa estudios de sntesis de la pared muestran un progresivo
engrosamiento de las paredes en las partes ms alejadas del pice. Anlogamente, la autolisis de
las paredes es relativa a su edad. Observaciones sobre la composicin y la desigualdad estructural
de las paredes hifales causados por el envejecimiento han sido hechas por muchos investigadores
(Katz y Rosenberg, 1971; Gooday, 1971; Gaviota y Trinci, 1974; Chang y Trevithich, 1974), y la
relacin entre las caractersticas morfolgicas y fisiolgicas funciones de piezas hifales de distinta
edad es evidente. Sin embargo, a menudo es difcil distinguir si los cambios bioqumicos
observados en las hifas durante el curso del envejecimiento son evocadas por envejecimiento o
son slo debido a condiciones de cultivo. Autorradiografa estudios sobre Como. Nger durante las
distintas fases del desarrollo de la cultura mostr que durante la fase estacionaria en algunas
partes de la hypha irreversiblemente pierden su capacidad para sintetizar ARN y protena y
comienzan a autolyse. En otras partes, la tasa de sntesis se disminuy un 15 - 20% en comparacin
con las hifas de la fase exponencial (Fencl, 1978). Esto se explica por la asuncin de streaming
protoplsmico y el transporte de los nutrientes de los mayores a los ms jvenes las piezas de las
hifas, resultando en una exposicin a la muerte por inanicin de las partes ms antiguas. El apical
de las piezas no estn expuestos al hambre y conserven una mayor capacidad de regeneracin. Sin
embargo, esta hiptesis no es vlida ya que generalmente en algunas partes viejas de hifas, existe
la posibilidad potencial de pasar a un estado fisiolgicamente ms jvenes si un compartimiento
constituye una nueva rama. Entonces esta parte aumentar sus tarifas de ARN y la sntesis de las
protenas a los niveles de la parte apical (Machek y Fencl, 1973).
En contraste con una cultura creciente de la libre forma filamentosa, en pellets, hay una mayor
diferenciacin en los filamentos causado por el transporte de nutrientes desde la zona exterior
hacia el interior, y por la excrecin de los productos metablicos en el exterior de los pellets. Esta
diferenciacin puede ser influenciado por la auto-toxicidad inducida por metabolitos excretados,
como observan con N. crassa mutante que segrega un mucopolisacrido que inhibe el crecimiento
(Reining y Glasgow, 1971). Slo una fina capa en la zona perifrica de pellets se biosynthetically
activa, como se muestra en estudios con Aspergillus y Penicillium.
Autolisis es considerada como la ltima etapa de la cultura de desarrollo incluso cuando se observa
en partes de hifas durante la fase estacionaria (Fencl, 1978). La principal causa de la lisis es el
desequilibrio material en las hifas causado tanto por factores internos o externos. De los factores
internos, podra ser una alteracin de las organelas o una acumulacin de metabolitos txicos. La
externa podran ser factores fsicos y qumicos, la falta de nutrientes, as como influencias de
enzimas que rompen la pared celular estructuras (Fencl, 1978; Nombela et al., 1993). Agotamiento
de los nutrientes del medio representa una de las ms comunes de
razones para una cultura alcanzar gradualmente autolisis. La transicin a la autolisis es gradual y la
falta de nutrientes se refleja en las hifas durante la fase pre-autolticos por una mayor
diferenciacin. Righelato et al. (1968) observ que el suministro de glucosa en la tasa de
mantenimiento continuo en culturas de Pe. chrysogenum causado mayor vacuolizacin y
predispuesta a la cultura a los daos mecnicos y el aumento de la fragmentacin. Righelato et al.
(1968) lleg a la conclusin de que la edad de los micelios no aparece para controlar el proceso de
envejecimiento, sino que el envejecimiento y la lisis se determina por la cantidad de energa
disponible.
Transicin a la fase pre-autolticos en Pe. chrysogenum se produce en el momento en que la

cantidad de glucosa suministrado a la cultura enfoca la energa de mantenimiento que se calcul
en 0,022 g de glucosa/g de peso seco del micelio/h. Por debajo de este nivel, autolisis establece en.
La tasa de degeneracin de los componentes de la biomasa individual depende de las condiciones
de cultivo bajo las cuales la cultura ha crecido.
Limitacin de nutrientes provocado fuertemente vacuolated hifas y posterior fragmentacin en

fed-batch culturas de Pe. chrysogenum en la obra de Paul et al. (1994a). Durante la fase de rpido
crecimiento hubo poca vacuolizacin y la media principal y longitudes hifales total y el promedio
del nmero de consejos por el micelio aument o se mantuvo estable. Limitacin de glucosa
siguientes, los valores de los parmetros disminuy considerablemente, lo que indica un proceso
de fragmentacin que fue ms grave cuando la vacuolizacin hifales significativo fue establecida,
es decir, durante la fase de produccin. Los autores basndose en la informacin cuantitativa sobre
la vacuolizacin y morfologa obtenida por anlisis de imagen, lleg a la conclusin de que, adems
de cizalla, efectos fisiolgicos pueden aumentar la fragmentacin, y esto apoya la idea de que slo
podra ser rompible eficaz cuando las hifas se han debilitado considerablemente por procesos de
desintegracin interna. El proceso de autolisis en cultivos discontinuos de Pe. chrysogenum bajo
un rango de velocidades de agitacin tambin fue investigado por Harvey et al. (1998) quien
inform de la degradacin de la Penicilina V como consecuencia de la cultura autolisis. La relacin
entre la vacuolizacin, la fragmentacin y la produccin de cido ctrico por As. Nger fue
investigado en lote y fed-batch cultura por Papagianni et al. (1999a,b,c,d). La informacin
cuantitativa sobre la morfologa y la vacuolizacin obtenidos por anlisis de imagen, junto con
tasas de crecimiento y productividad, se utilizaron para establecer un vnculo entre estos bajo
diferentes condiciones de agitacin y los niveles de glucosa. Aument la vacuolizacin y bajas tasas
de produccin especficas fueron observados en los niveles bajos de glucosa, mientras que la
vacuolizacin debilit las hifas y el micelio ms susceptibles a las fuerzas de cizalla en mayores
niveles de agitacin.
Cuando el hongo se cultiva en exceso de nitrgeno y el crecimiento est limitado por la fuente de
carbono, el componente de protenas de la clula se degrada ms rpidamente (Lahoz et al., 1970;
Lahoz y Miralles, 1970). Por el contrario, si el exceso de carbono est presente en los medios de
comunicacin, la autolisis eleva la cantidad de sustancias reductoras. Adems, mientras que los
polisacridos normalmente son lisadas lentamente, los lpidos son preferencialmente degradada
(Lahoz et al., 1967). Mono- sacridos, as, siempre pueden ser detectadas en el micelio lisis (Lahoz
et al., 1970).
Crecimiento del PE. chrysogenum en exceso de la penicilina precursor cido fenilactico, ha sido
asociada con el aumento de la autolisis celular, la reduccin de la biomasa y la produccin de
penicilina, mientras que los niveles de concentracin de precursores controlados dentro del
intervalo ptimo para la produccin de penicilina tiene poco impacto en la degradacin o
diferenciacin dentro de una cultura industrial de Penicillium (Blanco et al., 1999).
Autolisis no proceder de forma sincrnica en todo el filamento pero slo en cada uno de sus
compartimentos (Trinci y Righelato, 1970). En un compartimiento, el lisadas
208 M. Papagianni / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259 la
resistencia individual de los orgnulos no es el mismo. Las mitocondrias son mucho ms estables
que los ribosomas, y la descomposicin de las organelas del mismo tipo es sincrnica, es decir,
libre de clulas, catalizada por enzimas (Trinci y Righelato, 1970). En contraste con otros
organismos, los lisosomas y la autofagia no juegan un papel sustancial en la autolisis de citoplasma
en hongos (Fencl, 1978). Protoplasma hifales sufre lisis debido a una disminucin en la cantidad o
defectos en la composicin de orgnulos, o a una falta de mantenimiento proporcionan energa. La
vacuolizacin y la perturbacin de orgnulos, incluyendo una mayor actividad hidrolasa puede
observarse en las partes ms antiguas de hifas, sin embargo, el fisiolgicos de la edad y la
antigedad del compartimento no necesitan coincidir (Fencl, 1970). Por esta razn, no hay
regularidad en la lisis de hifas desde la base hacia la punta y los compartimentos son lisadas
irregularmente localizados en diferentes partes de las hifas. La excrecin de enzimas lticas, como
h-N-acetil-glucosamidase, h-1-3 glucanasa, chitinase, la invertasa y la fosfatasa cida fue
encontrado para ser coherente con el grado de autolisis (Lahoz et al., 1967), sin embargo, las hifas
contienen sus propias sustancias protectoras a travs de los cuales soportan lisis por sus propias
enzimas y se ha demostrado que slo tras la eliminacin de su barrera protectora se Las quitinasas
y glucanasas intracelulares atacan a las paredes (Wessels y Koltin, 1972). Aunque las enzimas
autolticos estn localizados directamente en paredes hifales, debido a su proteccin de la pared
celular es slo lentamente la autlisis (Trinci, 1974).
Ambos Lahoz et al. (1986) y Trinci y Righelato (1970) seal que la persistencia de las paredes
celulares de hongos intactos despus de muchos das de autolisis, que implicaba una gran
protelisis. En contraste con el interior de hifas, donde autolisis afecta compartimentos
irregularmente, la lisis de las paredes producto regularmente desde la punta de las secciones
anteriores, reflejando as la composicin qumica de las paredes.
A pesar de su importancia, la autolisis hongos ha recibido mucho menos atencin en comparacin

a la lisis de las bacterias y levaduras comercialmente importantes. Los mtodos utilizados para
evaluar el grado de autolisis en culturas de hongos implicados el promedio de disminucin de la
biomasa, celular
+ Productos de descomposicin, por ejemplo, NH4 release, ensayos de actividad enzimtica y la

medicin directa de la autolysing regiones mediante tcnicas de anlisis de imagen. Este ltimo,
relativamente recientes mejoras en nuestra capacidad para seguir los procesos de crecimiento y
diferenciacin en hongos sumergidas las culturas, permite la extraccin de informacin
cuantitativa detallada en el micro- morfologa de hongos filamentosos cultivadas en forma dispersa
en fermentaciones sumergidas.
Los estudios del embalador y Thomas (1990), Makagiansar et al. (1993), Nielsen et al. (1995), Paul
et al. (1994a,b), Papagianni et al. (1999b) y mcintyre et al. (2001) describen el anlisis de imgenes
de estudios que midan la diferenciacin y el crecimiento en cultivo sumergido e investigar la
relacin entre la degeneracin hifales y vacuolizacin y productiv- lidad. Anlisis de la imagen es,
por lo tanto, un mtodo ms directo de la ''filtracin'' de sonda Nestaas y Wang (1983) para la
aplicacin de estrategias de control de las fermentaciones de antibiticos se basa en simples
diferenciacin.
7. Fragmentacin de elementos hifales y pellets de
fragmentacin de elementos hifales y pellets durante la fermentacin sumergida a menudo resulta

en el crecimiento de la renovacin desde los fragmentos pueden actuar como centros de nuevo
crecimiento, permitiendo la siembra del pellet poblacin. Lamentablemente, a pesar de su
importancia, ha habido
algunos estudios sobre las propiedades fsicas de plets y mycelia dispersos, debido a dificultades
tcnicas y experimentales. En los ltimos aos, la utilizacin de tcnicas de anlisis de imagen
permite la cuantificacin del comportamiento de fragmentacin de hongos de las culturas, y la
investigacin de la relacin entre la viscosidad y la fuerza tensil hifales y morfologa. Desde que las
fuerzas de cizallamiento representan la principal causa de daos hifales y la fragmentacin, el
proceso de fragmentacin y recrecimiento con respecto a actividad hifales ser discutido en la
seccin de agitacin.
En la modelacin del crecimiento micelial de hongos filamentosos, la fragmentacin ha sido

considerada slo en pocos casos. Fragmentacin del micelio dar como resultado una poblacin de
elementos hifales individuales que pueden tener una morfologa variables, por ejemplo, de
diferente longitud y nmero de puntas y "pellets" de diverso tamao distribuciones. Los modelos
empricos que considerar la fragmentacin de plets, en forma relativamente simple y fcilmente
simulado, han sido presentados por Taguchi (1971) y van Suijdam et al. (1982). El primero, se
describe el efecto de la velocidad del rotor y el dimetro El dimetro y el nmero de pellets no
perturbado plets, considerando tanto la extraccin de material de la superficie de plets y
completa ruptura de pellets. La segunda, que se basa en la suposicin de que la limitacin de
oxgeno, utilizado un factor de eficacia para corregir la tasa de crecimiento especfico y la
produccin de biomasa en grnulos para los efectos de la limitacin diffusional. Una de las
principales hiptesis de estos modelos es que las culturas son neous homoge- con respecto al
tamao y densidad de plets y que dispers el crecimiento es insignificante. Esta hiptesis no es
vlida, y la variacin en el tamao de pellets ser el resultado de las diferencias en el nmero de
esporas agregacin dar pellets original y de fragmentacin, que conducen a la produccin de
pequeos fragmentos de pellets y mycelia dispersos. La distribucin del tamao de pellets y pellets
nmero es fundamental, ya que determina la proporcin de micelio crece activamente en contacto
con el sustrato, y la proporcin de biomasa en pellet que pueden estar activos en la produccin de
metabolitos secundarios, pero no el crecimiento. Adems, dispersado mycelia producida a travs
de la fragmentacin tendr diferentes cintica de crecimiento y utilizacin de substratos
caractersticas a pellets.
Edelstein y Hadar (1983) fueron los primeros en considerar distribuciones de tamao de pellets en
la modelizacin del crecimiento y la produccin de biomasa de Sclerotium rolfsii. Tambin fueron
los primeros en considerar la siembra de pellet poblaciones por fragmentos de micelio producido a
travs de la fragmentacin. El modelo describe el crecimiento precipitado como paso de partculas
esfricas a travs de una serie de clases de tamao, con el aumento de tamao de pellet
modelados por ecuaciones diferenciales en derivadas parciales que describen los cambios en pellet
radio (r). El modelo se presenta mediante la siguiente ecuacin:
2 dp pK br ed p16 drp dt d Dr.2
donde p es equivalente a p(r, t), el nmero de pastillas de radio r en el tiempo t. K es la tasa de

aumento en la r debido a su crecimiento, y b es la tasa de aumento debido a la cizalla. d(r) es un
trmino de muerte, representando la prdida de grnulos de cada clase de tamao a travs de
efectos de cizallamiento o decolorar. e isa coeficiente de dispersin que representa la distribucin
de las tasas de crecimiento entre los pelets. En cualquier momento, la siembra est determinado
por la proporcin de fragmentos viables, /, resultantes de la fragmentacin de pellets.
La complejidad de este modelo evita solucin analtica y su forma bsica es relativamente

inflexible. Un tamao inicial distribucin fue definida, basada en datos experimentales,
distribuciones de tamao y luego fueron derivados de una serie de intervalos de tiempo durante el
crecimiento en cultivo batch. Los valores altos de /, por ejemplo, el 50% resiembra, result en el
desarrollo de una amplia gama de tamaos de pellets y la distribucin de tamaos se caracteriz
por un hombro. En la parte inferior / valores, 10 - 30% de siembra, la distribucin de tallas
mostraron un pico y la tasa de acumulacin de biomasa se redujo.
En el modelo presentado por Nielsen (1992), la fragmentacin era considerado en la estimacin de

la morfologa de los elementos hifales individual para un nmero de microorganismos
filamentosos. Combinando un modelo estructurado morfolgicamente y un modelo de poblacin,
crecimiento de microorganismos filamentosos tanto en un medio slido y en cultivo sumergido, y
las propiedades de los elementos hifales en cultivo sumergido fueron descritos correctamente por
el modelo completo que puede ser valiosa para la interpretacin del nmero creciente de datos
experimentales obtenidos mediante el anlisis de imgenes. Se lleg a la conclusin de que para
algunas especies, la fragmentacin puede ser descuidado, pero para pe.
chrysogenum, es importante tener en cuenta que cuando existen datos morfolgicos para ser
evaluados. Una correlacin lineal entre la tasa especfica de la fragmentacin y la entrada de
energa al bioreactor indic claramente que la fragmentacin fue causado principalmente por
factores fsicos. Una evaluacin adecuada de los hidrodinmicos y otras fuerzas fsicas en el
entorno de la cultura sumergida de un bioreactor, por lo tanto, es importante para la comprensin
del comportamiento y correlacionar la fragmentacin de al menos algunos hongos. Caracterizacin
de los distintos hydrody- namic y otras fuerzas en biorreactores se ha debatido en profundidad por
Chisti (1999a).
Un modelo cintico estructurado describiendo el crecimiento, la diferenciacin y la produccin de

penicilina sumergida fed-batch Pe. chrysogenum fermentaciones fue reportada por Paul y Thomas
(1996a,b). El modelo incorpora la estructura fisiolgica de la biomasa fngica y la ms novedosa
parte del estudio fue la descripcin mecanicista de la vacuolizacin y degeneracin. La descripcin
de la diferenciacin y la produccin de penicilina fue a la luz de una mayor comprensin de los
procesos subyacentes, basados en la informacin cuantitativa obtenida por el anlisis de la
imagen. La autolisis y el posterior proceso de fragmentacin fueron expresados por una cintica de
primer orden con respecto a la cantidad de regiones degeneradas. En este modelo, el parmetro
de velocidad de agitacin fue excluida desde todas las fermentaciones se realiza a la misma
velocidad, la fragmentacin observada fue, por lo tanto, el resultado de mayor vacuolizacin
causada por la limitacin de la glucosa (1994a). Cuando la tasa de alimentacin de glucosa para la
produccin de cultura se conmuta entre un valor alto y un valor bajo, el modelo puede predecir
satisfactoriamente los cambios dinmicos de la diferenciacin y la penicilina resultante de la
produccin causada por las variaciones en las condiciones de nutrientes.
8. Crecimiento en cultivo sumergido
se dice a menudo que la cintica de crecimiento de hongos filamentosos en cultivo sumergido son
bastante similares a los de los organismos unicelulares que se reproducen por fisin binaria. De
hecho, debido a las dificultades prcticas que afectan a los estudios de microorganismos
filamentosos en cultivo sumergido, cintica de crecimiento se basan principalmente en estudios
con organismos unicelulares. Fijacin y crecimiento en biorreactores" paredes, agitadores, sondas
y deflectores conducen a un grado de heteroge-
neity dentro de la biomasa que es ms pronunciada en el caso de peleteado de crecimiento. Zonas

de cultivo y no la produccin de biomasa en el interior del biorreactor influyen en la cintica de
crecimiento global. Adems de esto, el mecanismo de crecimiento hifales s contribuye a la
heterogeneidad con extensin, pero poco de la biosntesis de novo en la punta, activa la biosntesis
detrs de la punta y la reducida actividad en regiones ms distantes como edad y vacuolate hifas
(Prosser, 1995).
8.1. Cultura Lote
Lote el crecimiento est dividido en una serie de fases. La fase lag representa un perodo durante
el cual las clulas de hongos o esporas adaptarse a un nuevo entorno.
La adaptacin incluye formacin de enzimas y productos intermedios para apoyar la reanudacin

del crecimiento. La duracin de esta fase depende no slo del estado fisiolgico del hongo, pero
tambin en la morfologa y el nivel de inculo. Espora inculos requieren un perodo de
germinacin y Calam (Smith, 1980), mientras que el pelleted inculos pueden requerir un cierto
grado de interrupcin mecnica antes de la inoculacin (Greasham, 1991). Phys- iological
adaptacin del organismo incluye sntesis de sistemas enzimticos necesarios para la utilizacin de
substratos, o extraccin de compuestos inhibitorios prorrogados por el inculo (Prosser, 1995).
La fase exponencial se caracteriza por un aumento significativo de la masa celular. La tasa de

crecimiento hifales depende no slo de la cepa del hongo, pero tambin sobre las propiedades
fsico-qumicas de las condiciones ambientales. Como en medios slidos, el crecimiento
exponencial de los resultados autocatalysis mediante produccin exponencial de ramas, cada una
de las cuales se extiende a un ritmo lineal. Una reduccin en la tasa de crecimiento especfico se
produce cuando el hongo comienza a experimentar un crecimiento desfavorable entorno, tales
como la limitacin de nutrientes necesarios, el desarrollo de un valor pH adversas o la acumulacin
de productos finales del metabolismo que son inhibidoras. Siempre que los dos ltimos son no
reduce el crecimiento, el efecto de limitar la concentracin de sustrato sobre la tasa de crecimiento
especfico (l) puede ser expresado por el Monod (1942) modelo de crecimiento microbiano:
S L lmax 17KS S
donde lmax es la mxima tasa de crecimiento especfico, S es la concentracin de sustrato y Ks es

la constante saturacin igual a la concentracin de sustrato a l = 0.5lmax. Pirt (1975) inform de la
saturacin constante, KS, para el crecimiento de Aspergillus en glucosa para ser de 5,0 mg/l.
As, cuando la concentracin de glucosa disminuye por debajo de 10 mg/l, una reduccin en la tasa
de crecimiento especfico es observado. Aunque eucaryotes tienden a crecer ms lentamente que
las bacterias, hongos filamentosos como Aspergillus y Penicillium tienen mximo
1 tasas de crecimiento especfico en el orden del 0,1 - 0,3 h , equivalente a tiempos de duplicacin
de 2 - 7 h.
Los muchos factores que rigen la entrada en la siguiente fase de desaceleracin y el crecimiento
durante el mismo han recibido poca atencin. Cintica de crecimiento durante esta fase es en gran
medida no caracterizados, a pesar de la importancia de esta fase para procesos biotecnolgicos,
como el perodo cuando comienza la produccin de metabolitos secundarios. La desaceleracin en
la tasa de crecimiento debido a la limitacin de oxgeno es de particular importancia para las
culturas de
hongos filamentosos, debido a la influencia de su morfologa en propiedades reolgicas.
Crecimiento disperso conduce a no-Newtonianas comportamiento reolgico. La viscosidad

aparente aumenta con el crecimiento econmico, reducir el transporte de nutrientes, oxgeno y
calor. El aumento de la energa necesaria para un mezclado eficiente y transferencia de oxgeno
aumenta significativamente el coste de fermentacin fngica en gran escala. Limitaciones de
nutrientes puede acelerar la entrada en la fase de desaceleracin, en comparacin con las culturas
unicelular de biomasa y la actividad equivalente.
La fase estacionaria puede ser definido simplista como el equilibrio entre la masa hifales aumentar
y disminuir. Sin embargo, si la masa hifales acumula material de almacenamiento intracelular
durante la fase de crecimiento reducido, ligero aumento de masa hifales puede ser observada
durante el metabolismo endgeno de estos materiales de almacenamiento. Adems, si las hifas
comienzan a autolyse, nuevo crecimiento que se poda esperar de los productos de la autolisis, por
ejemplo, la liberacin de nutrientes limitados.
8.2. El cultivo continuo
cultivo continuo suele ir precedida por el crecimiento del hongo en el lote cultura a la fase
estacionaria. Cuando el suministro de un medio fresco se inicia el crecimiento avanza y material del
buque se lava fuera, hasta que la concentracin del medio se reduce a un nivel en el que se limita
la tasa de crecimiento especfico. En estudios fisiolgicos, el medio est diseado para determinar
qu lmites de sustrato de crecimiento ofreciendo todos los dems componentes en exceso. La
relacin entre la tasa de crecimiento especfico y la concentracin de un sustrato encalado, S
puede ser descrito por las Monod (1942) modelo (eq. (17)). Se han propuesto alternativas en
muchos casos para describir los datos experimentales que no obedecen al modelo de Monod.
Desviaciones de la ecuacin de Monod pueden proporcionar informacin til sobre la fisiologa de

los organismos que crecen bajo la limitacin de sustrato. Descripciones alternativas de limitacin
del crecimiento son generalmente ms complejos que el EQ. (17) y son, por tanto, menos
descriptivo y de uso prctico, aunque algunas (Dabes et al., 1973) puede tener una ms slida base
mecanicista.
Los cambios en la biomasa y concentraciones de sustrato durante el crecimiento en cultivo

continuo puede ser descrito por las siguientes ecuaciones:
dX lX DX18 dt
dS lX DSr DS19 dt y donde l es descrito por la ecuacin de Monod, Sr es la concentracin del

sustrato limitante en el medio entrante, X es la concentracin de biomasa y d es la tasa de dilucin,
definida como la tasa de flujo dividido por el volumen de lquido de la cultura. Si D es menor que
lmax un estado estacionario es establecido. Estableciendo las ecuaciones anteriores igual a cero,
expresiones de estado estacionario de la biomasa y las concentraciones de sustrato como
funciones de tasa de dilucin puede ser obtenido. Adems, en estado estacionario, la tasa de
crecimiento especfico ser igual a la tasa de dilucin. Por lo tanto,
Tasa de crecimiento especfico puede controlarse modificando la tasa de dilucin, la mayora

convenientemente mediante el ajuste de la tasa de flujo. La composicin del medio entrante
puede ser manipulado para obtener la limitacin del crecimiento por diferentes nutrientes,
permitiendo la investigacin de su papel en el crecimiento y formacin de producto.
Los problemas del crecimiento filamentosas sumergido en la cultura del lote son exacerbadas en
cultivo continuo. El crecimiento de la pared aumenta continuamente y mantenimiento de estado
estacionario es difcil. Rotura de mycelia para proporcionar nuevos centros de crecimiento puede
ser una solucin.
Otro problema de gran importancia es el mantenimiento de la estabilidad de los hongos

filamentosos en un cultivo prolongado. La importancia del mantenimiento de la estabilidad ha
aumentado recientemente debido al uso de dichos organismos como anfitriones de la expresin y
la secrecin de protenas heterlogas (Peberdy, 1994). Cultura continua estudios se han utilizado
para determinar los valores de los parmetros de crecimiento de hongos filamentosos, como Y y Ks
y tambin la capacidad para controlar la tasa de crecimiento especfico. Estos estudios han
proporcionado informacin valiosa sobre la cintica de la rama de formacin. Robinson y Smith
(1979) en estudios con G. candidum crecido bajo la limitacin de glucosa mostraron que un
aumento en la tasa de crecimiento especfico se traduce en un aumento del dimetro hifales y
disminucin de la longitud de la unidad de crecimiento hifales pero no tienen un efecto
significativo sobre el crecimiento hifales unidad de volumen. Asimismo, las ramas laterales son de
1 formado en tasas de crecimiento especfico inferior a 0,4 h , mientras que las ramas apicales y
aumentar la tasa de extensin a altas tasas de dilucin. Smith y Robinson (1980) tambin demostr
las similitudes entre las dimensiones de la celda y tasas de extensin hifales en glucosa continua
limitada culturas y en cultivos en medios slidos con bajas concentraciones de glucosa inicial.
Withers et al. (1994) estudiaron el desarrollo de heterogeneidad morfolgica en glucosa-limited

chemostat culturas de Como. Nger. Cuatro mutantes morfolgicas fueron aisladas de quimiostatos
en ese estudio y entre ellos una ms escasamente ramificados uno de la cepa parental que
apareci en altas concentraciones en el extremo de la quimiostatos sugiriendo que estaba bien
adaptado para el crecimiento en el tanque agitado reactores. La seleccin de mutantes
morfolgicas apropiado puede ser un factor determinante del rendimiento biolgico de cultivos de
microorganismos filamentosos. Withers et al. (1994) sugieren que el ''fermentador adaptado''
mutantes pueden conducir a ms estable de fermentaciones industriales inculos para y por los
complejos efectos de morfologa micelial sobre cultura reologia y (tal vez) la secrecin de
protenas, variantes seleccionadas en flujo continuo fermentaciones pueden prestar mayor
rendimiento biolgico en fermentaciones industriales y ser un importante mtodo de seleccin de
la cepa.
A bajas tasas de dilucin, concentracin de biomasa en estado estacionario disminuye, mientras

que la ecuacin de Monod predice eficazmente concentraciones de biomasa constante como D se
aproxima a cero. Esto es debido al consumo de sustrato para el mantenimiento celular y requiere
modificacin de EQ.
(19) para dar (Pirt, 1965):
dS lX DS mX20 dt
donde Yg Yg DSr es el verdadero crecimiento y rendimiento m es el coeficiente de mantenimiento.

Eq. (20) proporciona la forma ms simple y ms ampliamente aplicables descripcin de cambios en
la concentracin del sustrato en un cultivo continuo y permite el clculo de la proporcin de
sustrato contribuyendo a
214 M. Papagianni / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259 de

mantenimiento. Righelato (1979) mostr que durante el crecimiento de pe. chrysogenum en
glucosa- quimiostatos limitada, el 10% de sustrato es utilizado para el mantenimiento al mximo
1 1 La tasa de crecimiento especfico de 0,8 h y 70% a una tasa de crecimiento especfico de 0,05
h . Los estudios sobre el crecimiento y la formacin de producto con As. Nger y glucoamylase
transformant chemostat y reciclaje en cultivos realizados por Schickx et al. (1993) mostraron que
los requisitos de mantenimiento dependen de la tasa de crecimiento especfico en todo el
intervalo de medida de las tasas de crecimiento. Dos regiones de determinadas tasas de
crecimiento se observ en este estudio, uno en tasas de crecimiento especfico inferior (I) y un
dominio en determinadas tasas de crecimiento mayores a 0.12
1 h (dominio II). En el dominio I, los cambios en la morfologa y la formacin de conidios fueron

observadas. Los autores sugirieron que las desviaciones de la linealidad de la ecuacin lineal de
utilizacin de substratos deben ser considerados cuando continuas culturas con hongos
filamentosos son realizadas.
Los factores que afectan a la morfologa del hongo en cultivo continuo pueden ser numerosas y
estn interrelacionados, por ejemplo, parmetros mecnicos de la fermentacin, la naturaleza del
sustrato limitado, la tasa de dilucin. El nmero de estudios sobre el efecto de la tasa de dilucin
de morfologa micelial es limitado. Trinci y Wiebe (1990) estudi dos cepas del hongo Fusarium
graminearum en cultivo continuo, relativamente escasamente ramificados cepa parental (3/5) y
relativamente muy ramificadas variante colonial (C106). En cualquier tasa de dilucin, la
concentracin de fragmentos de micelio presente en estado estable de ambas cepas permaneci
aproximadamente constante con el tiempo, sugiriendo que la fragmentacin del micelio producido
en forma regular. No obstante, para ambas cepas, fragmentos disminuyeron con el aumento de la
tasa de dilucin. La longitud de la unidad de crecimiento hifales de 3/5 aumenta con el aumento
de la tasa de dilucin, mientras que en todos los ndices de dilucin, C106 producido por lo menos
10 veces ms macro-conidias de 3/5.
8.3. Fed-batch cultura
la mayora de los industriales a gran escala y la fermentacin fngica implican fed-batch de la

cultura en la que la biomasa se cultiva inicialmente en la cultura de lotes hasta un componente
elegido del sustrato se utilicen plenamente. A continuacin se agrega nutrientes frescos y el
volumen de cultivo est aumentando constantemente. Es ms comn una forma concentrada de
un componente del medio original que se suministra ms que medio completo. El objetivo es
fomentar la formacin de producto en lugar de la biomasa. Sustrato se convierte de inmediato en
el momento de la entrada en el bioreactor por altos niveles de biomasa activa. As, el metabolismo
es dirigido hacia la formacin de producto en lugar de crecimiento, y la utilizacin de substratos y
la represin catablica se minimizan. Una diferencia importante entre la Fed-batch y cultivo
continuo es que la tasa de crecimiento especfico no es constante en la antigua. Ms bien
disminuye a medida que aumenta el volumen de cultivo. La Fed-batch mode de la cultura
representa una herramienta til en estudios de sustrato limitaciones y diversos fenmenos de
inhibicin. Sin embargo, estudios de fisiologa bajo las condiciones transitorias han recibido poca
atencin y cuantitativa fiable cintica de crecimiento no han sido caracterizado. Informacin
sobre el desarrollo morfolgico de lote alimentado. bajo condiciones de cultivo tambin es
limitado. (1995) y Papagianni Papagianni et al. (1999c) estudi el desarrollo morfolgico de
productoras de cido ctrico como. Nger en fed-batch cultura para encontrar que las principales
observaciones morfolgicas estuvieron relacionados con la tasa de crecimiento especfico, el cual
fue restringido por la concentracin de glucosa y, por lo tanto, indirectamente relacionado con la
concentracin de glucosa en el medio de fermentacin.
9. Influencia de los parmetros de proceso en la morfologa fngica y la productividad
9.1. Inculo
entre los factores que determinan la morfologa y el curso general de fermentacin fngica, la
cantidad, tipo (espora o vegetativo) y edad del inculo son de primordial importancia. Se hicieron
intentos para estandarizar los inculos para la produccin de cido ctrico en cultivo sumergido por
Martin y Aguas (1952), Steel et al. (1954) y Clark (1961). van Suijdam et al. (1980) inform que
como pellets. Nger slo formulario en
8 tamaos de inculo por debajo de 10 esporas/ml, mientras que segn Calam (1987), pe.
chrysogenum formas pellets en
4 tamaos de inculo por debajo de 10 esporas/ml. En el ltimo caso, la produccin de penicilina

en produccin
2 4 matraces planteadas bruscamente desde 500 a 5000 U/ml como el tamao del inculo
aument de 10 a 10 esporas/ml. van Suijdam et al. (1980) trabajando con cepas de Pe.
chrysogenum, Sporo- trichum pulverulentum y Como. Nger, desarroll una tcnica de preparacin
del inculo para la produccin de pellets de hongos en una burbuja de la columna. La tcnica hizo
uso de micelio filamentosos desde un precultivo como inculo, produciendo muchos pequeos
grnulos con un tamao bastante homognea distribucin. En una fase temprana de crecimiento,
la presencia del polmero Carbopol-934 ha demostrado ser muy importante para la forma esporas
germinaron y rebaj la aglomeracin de tendencia, mientras que en una etapa posterior de
crecimiento, la influencia de fuerzas de cizallamiento se volvi ms predominante.
Durante la ltima dcada, la aplicacin de tcnicas de anlisis de imagen para la cuantificacin de

la morfologa en fermentaciones hongos result en ms estudios sistemticos sobre los efectos del
inculo. En estudios anteriores, el efecto del inculo se evalan principalmente por la presencia o
ausencia de pellets y sus caractersticas (Vecht-Lifshitz et al., 1989; Smith y Calam, 1980) debido a
la falta de un mtodo adecuado para supervisar la morfologa micelial durante las fermentaciones.
Morfologa fue cuantificada mediante un mtodo de anlisis de imgenes (Tucker et al., 1992) en
el trabajo de Tucker y Thomas (1992), donde una brusca transicin de peleteado de formas de
crecimiento disperso para pe. chrysogenum crecido en lote
5 Cultura fue informado, como los niveles de inculo se elev hacia 5 10 esporas/ml, pero por
encima de ese nivel, hubo poco efecto adicional.
La funcin crtica del inculo en el desarrollo de hongos durante la fermentacin de morfologa y

su relacin con la produccin de metabolitos fue mostrada en la obra de Nielsen et al. (1995) con
pe. chrysogenum. La influencia de la concentracin inicial de espora y velocidad de agitacin en la
aglomeracin que conducen a la formacin de pellets fue estudiada. Para Pe. chrysogenum,
formacin de pellets se produce por la aglomeracin de mycelia dispersos, y el nmero de
elementos hifales en un pellet es del orden de 2 - 4, segn la concentracin de esporas. En bajas
concentraciones, la aglomeracin de elementos hifales era limitado y se formaron pequeos
grnulos. A altas concentraciones de esporas, aglomeracin aumentaron y se formaron grandes
pellets. Esto es diferente de lo que se observa para los microorganismos donde los pelets estn
formados por la aglomeracin de esporas (Yanagita y Kogane, 1963; Vecht-Lifshitz et al., 1989). En
el trabajo de Tucker y Thomas (1992), se encontr que muy pocas pastillas fueron
5 formado a altas concentraciones de esporas (supra 5 10 esporas/ml), aunque se observ cierta

aglomeracin a bajas tasas de agitacin. La conclusin es que la aglomeracin que conducen a la
formacin de pellets no es simplemente determinado por la probabilidad de contacto fsico entre
elementos hifales. El mismo efecto de tamao del inculo fue reportado para el esteroide
216 M. Papagianni / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259 la
transformacin de hongos filamentosos que Rhizopus nigricans por Znidarsic et al. (2000). El
tamao de pellets se encontr que dependen principalmente de la espora el tamao del inculo,
mientras que la estructura de pellets dependa principalmente de la temperatura del cultivo. Un
cierto tipo morfolgico, que suave de plets, inducidas por las elevadas tasas de agitacin, las
temperaturas bajas y altas concentraciones de nitrgeno, se propuso como un requisito previo
para la aplicacin ulterior en el proceso de biotransformacin de esteroides.
La concentracin de esporas del inculo parece ser un factor crtico para el resultado de proceso
tambin en culturas inmovilizada. Los efectos de la carga de esporas en el crecimiento de pe.
chrysogenum inmovilizadas en kappa-carragenina beads fueron estudiadas por Mussenden
3 et al. (1991). A alta carga de esporas (10 4 -10 esporas viables/cordn) la concentracin de
biomasa fue baja y la mayora de la biomasa respirando activamente estaba ubicado en la periferia
del cordn. Reducir la carga de esporas a 50 esporas viables por cordn, result en una
cuadruplicacin de la concentracin de biomasa inmovilizada. La carga de esporas tambin afect
a la morfologa de las hifas y creciente el grado de crecimiento celular gratis.
El tipo de inculo, espora o vegetativa, y sus efectos sobre el desarrollo de la morfologa en el

fermentador, cultura y produccin de metabolitos, se investig en los procesos de la fitasa y
produccin glucoamylase. Nger (Papagianni et al., 1999d, 2001; y Papagianni Moo-Young, 2002).
En presencia de salvado de trigo, una liberacin lenta, fuente de fosfato en el inculo, el hongo en
forma de grnulos finos y matas, que dio un inculo ms adecuado en trminos de biomasa y
produccin de fitasa en ambos sumergidos y fermentaciones en estado slido. En la ausencia de
salvado, pellets y se formaron grandes productividades se redujeron en ambos tipos de
fermentaciones. En el proceso de produccin por un glucoamylase wild-type como. Nger cepa,
morfologa fngica fue manipulado por medio de calidad y el nivel de inculo en un intento para
reducir la secrecin de proteasas nocivos. Diferentes niveles de inculos de esporas y vegetativo
inculos fueron utilizados para el desarrollo de formas morfolgicas distintivas en la cultura
principal, y se comprob que los grandes pastillas fueron asociados con un aumento de actividades
glucoamylase especficos y actividades proteasa especfico inferior en comparacin con
morfologas filamentosas.
Fragmentado mycelia del hongo Cunninghamella echinulata fueron usados como inculos en g-
linolnico (GLA) produccin por Chen y Liu (1997). Pellets micelial eran fcilmente formado por
hifas fragmentados. El floc masividad del inculo y el inculo al caldo ratio determinada el nmero,
el tamao y la densidad de los pellets en el final de la cultura.
Se formaron pequeos grnulos de floc superior masivo y mayores ratios de inculo.
El crecimiento de los micelios en forma de pellets pequeo y compacto conducido al aumento de

la biomasa y la produccin de lpidos debido a la menor limitacin de transferencia de oxgeno y
nutrientes, en cuyo caso un incremento sinrgico en GLA fue observada. Se lleg a la conclusin de
que desde los puntos de vista econmico y aplicacin prctica, el medio de GLA produccin deben
ser inoculados con un grueso de micelio flocs suficientes para prevenir la formacin de grandes
pellets o esteras micelial que son bajas en la biomasa y la densidad del contenido de lpidos.
9.2. Composicin medio
sumergidos los medios utilizados en fermentaciones industriales favorecen tanto el crecimiento

como la formacin de productos de alto rendimiento: hongos conidial requieren agua, oxgeno
molecular, una fuente de carbono orgnico y la energa, fuente de nitrgeno distinto de nitrgeno
molecular y varios otros

elementos. Al menos 13 elementos son esenciales para el crecimiento, es decir, oxgeno, carbono,
hidrgeno, nitrgeno, fsforo, potasio, el azufre, el magnesio, manganeso, hierro, zinc, cobre y
molibdeno. Los ocho primeros son necesarios en cantidades relativamente grandes
(macronutrientes). Las ltimas cinco son requeridos en pequeas cantidades (micronutrientes).
Medios de fermentacin puede ser qumicamente definidas (sinttico) o complejos. Cuando se
utilicen materias primas, pueden requerir de purificacin previos como algunos metales traza
afecta ciertos procesos, como la estudiada por fermentacin de cido ctrico como. Nger. En
fermentaciones de antibiticos, los medios de comunicacin contienen, adems de las habituales
fuentes de carbono, nitrgeno, minerales y bferes, precursores para aumentar el rendimiento del
antibitico, como en el caso de la penicilina y Mavituna (Atkinson, 1991).
Para la produccin industrial de enzimas y antibiticos, medios complejos con un sustrato slido se
utilizan a menudo (Chisti, 1999b); sin embargo, la informacin sobre tales las fermentaciones con
respecto al crecimiento, la cintica y la morfologa es escasa en la literatura. El uso de medios
complejos en fermentaciones sumergidas de hongos filamentosos ha demostrado influir en la
morfologa y la cintica de crecimiento. Comparando con los trabajos sobre medio sinttico, Cui et
al.
(1998b) encontraron diferencias importantes en las fermentaciones con Aspergillus awamori con
salvado de trigo como fuente de carbono. El salvado de trigo no fue consumida completamente
como glucosa o sacarosa y hongos y adherencia variaba segn los inculos utilizados. Utilizando
4 espora concentraciones superiores a 1,8 10 esporas/ml, adherencia dominados, mientras que el

crecimiento en los niveles inferiores, salvado de trigo gratis pastillas fueron formados. Sustrato
slido suprime el crecimiento de la libre forma filamentosa. La cintica con medio complejo parece
ser esencialmente la misma que con medio sinttico. Aspectos de la utilizacin de medios
complejos para la fermentacin sumergida de xilanasa produciendo como awamori. ha sido objeto
de investigaciones de Schugerl et al. (1998). En cultivos en reactores de tanque agitado, la parte
predominante del hongo se adjunta a las partculas de salvado de trigo, que la protega de la
cizalladura.
Cambiando la velocidad del agitador, la morfologa no ha cambiado. Pellets siempre estaban

formados, que fueron rodeados por el salvado de trigo. Sin embargo, en la mayor velocidad de
agitacin (750 rpm), el hongo fue parcialmente separada del salvado de trigo y con mayor tiempo
de cultivo, el salvado se descompone gradualmente y se desintegr y el micelio del hongo se
fueron parcialmente disueltas, lo que reduce el contacto ntimo y la proteccin de las hifas del
efecto de cizalla. Actividades enzimticas fueron inferiores cuando se utiliz salvado de trigo
molido. Bajo las mismas condiciones de cultivo, el uso de salvado de trigo molido condujo a la
formacin tanto de los pellets y matas, que aumenta la viscosidad del caldo y caus problemas de
transferencia de masa.
Los slidos en el lquido sustrato han demostrado en muchos casos para inducir la formacin de
pellets en hongos filamentosos (Braun y Vecht-Lifshitz, 1991; Schugerl et al., 1998). Sin embargo,
esto no fue as en el caso del estudio de Papagianni et al. (1999d) sobre la fermentacin por la
fitasa como. Nger, donde adems de salvado de trigo inducida morfologas filamentosos y
mejorado tanto el crecimiento de la produccin y de la fitasa. Esto fue considerado como un efecto
de una mayor disponibilidad de fsforo en el medio. Durante la descomposicin de salvado de
trigo, el fsforo es liberada por la fitasa ya producida por el micelio y su lenta liberacin garantiza
una presencia continua de fsforo en el medio y la prevencin de la limitacin del fsforo. Estudios
sobre otras fermentaciones, por ejemplo, el cido ctrico por fermentacin como. Nger (Charley,
1981; Papagianni, 1995, 1999; Papagianni et al., 1999a) y la xilanasa fermentacin por Como.
awamori (Schugerl et al., 1998), han demostrado que el aumento de
concentraciones de fosfato de provocar un desplazamiento de la sobreproduccin de metabolitos a

un sobrecrecimiento del organismo. Las caractersticas de esta condicin incluyen el aumento de
las tasas de crecimiento, aumento de las reacciones colaterales y morfologas no deseados. Sin
embargo, ningn cambio de producto a la biomasa formacin fue observada desde la fitasa se
intensific notablemente la produccin. Esto fue debido a la lenta liberacin de fosfatos desde el
salvado de trigo o una induccin de fitasa por la presencia de cido ftico en el medio.
El uso de medios complejos pueden afectar no slo la formacin, sino tambin la tasa de
degradacin del producto. Christensen et al. (1994) mostraron que la tasa de degradacin de la
Penicilina V fue significativamente superior en medios que contienen maz-licor empinadas (CSL),
una fuente de nitrgeno de crudo que contiene fosfato, fueron utilizadas en lugar de medios
qumicamente definidas. Esto puede ser un grave problema a la hora de llevar a cabo repetidas
fermentaciones fed-batch donde el maz-licor escarpada y, por consiguiente, fosfato, tambin se
agrega en tiempos en que la concentracin de penicilina es relativamente alta.
9.3. Tipo y concentracin de la fuente de carbono
como todos los Hongos, hongos filamentosos son hetertrofas. Esto significa que requieren que los
compuestos orgnicos como fuente de carbono y energa. Algunos informes indican que la
excepcional hongos filamentosos pueden fijar el dixido de carbono. Mirocha y de Vay (1971)
inform de que el Fusarium sp. y Cephalosporium sp. no slo fijar el dixido de carbono, sino
tambin crecen en un medio de sales inorgnicas sin adicin de carbono. Compatibles con la
mayora de los compuestos orgnicos son generalmente de crecimiento azcares (por ejemplo, D-
D-glucosa, fructosa, sacarosa) que son rpidamente adoptadas. Los polisacridos, aminocidos,
lpidos, protenas, cidos orgnicos, alcoholes y hydro- carbonos tambin se utilizan. Una pequea
cantidad de carbono pueden ser exgenos necesarios para mantener el hongo incluso cuando no
est creciendo. Carter et al. (1971) estima que en la tasa de crecimiento cero como. nidulans
consumido 0,029 g de glucosa por gramo de biomasa fungal por hora. La afinidad de Como.
nidulans para glucosa (Ks) determinaron glucosa en chemostat por Carter y Bull (1969) fue de 80 -
120 mg/l.
Carter y Bull (1971) han publicado los resultados del primer anlisis sistemtico de los factores
ambientales (tasa de dilucin, la tensin de oxgeno disuelto (DOC)) sobre el carbono catablica
pathways en hongos. Encontraron funcional - Embden Meyerhof - Parnas (EMP) y la pentosa
fosfato (PP) en Pathways chemostat culturas de Como. nidulans y que el flujo a travs de la va del
PP fue mejorado en tasas de dilucin acercando lmax y a bajos valores de tensin de oxgeno
disuelto. El aumento de la actividad de la PP pathway tambin fue caracterstica de crecimiento
exponencial de cultivos discontinuos y perodos anteriores a la esporulacin. Estos cambios en el
catabolismo de la glucosa fueron interpretados en trminos de las exigencias biosinttica del
hongo en respuesta a circunstancias cambiantes del crecimiento. Estos estudios fueron ampliados
a la glucosa- hambriento y glucosa-mantenido culturas de Como. nidulans (Bainbridge et al., 1971)
para encontrar que todas la glucosa era catabolized a travs del EMP camino dentro de las 10 h de
terminacin del suministro de glucosa o reducirla a cerca de la tasa de mantenimiento, un cambio
paralelo al completar el decaimiento de la actividad del PP. Los hallazgos de este tipo han sido
confirmados y ampliados por Ng et al. (1972) con Como. Nger. En otro estudio, Ng et al. (1974)
describieron la tasa de crecimiento depende de cambios en las enzimas del EMP y el PP pathways,
el glioxilato shunt y el ciclo del cido tricarboxylic bajo condiciones de glucosa y limitacin de
citrato. En virtud de la limitacin de la glucosa, las enzimas del ciclo de TCA aumentaron en
actividad como la tasa de dilucin fue
plantea, un resultado menos corroborando las observaciones detalladas en Como. nidulans (Carter,
1971; y el Toro Toro y Bushell, 1976). Para ambas especies, las pruebas de glucosa la induccin de
ciertas enzimas va EMP y PP fue obtenida.
El enfoque de mucho estudio ha sido la fuente de carbono para la fermentacin de cido ctrico,
frecuentemente con miras a la utilizacin de fuentes de polisacridos (Gupta et al., 1976; Hossain
et al., 1984; Xu et al., 1989a). La naturaleza de la fuente se ha demostrado en muchos casos que
afectan a la produccin de cido ctrico, ya que ejerce un fuerte efecto en los niveles de enzimas en
el ciclo TCA. El ltimo rendimiento molar de cido ctrico aumenta cuando la concentracin de
azcar inicial es mayor y slo algunos carbohidratos son buenas fuentes de carbono para la
acumulacin de cido ctrico (Xu et al., 1989b). Una interpretacin general de esta observacin es
que slo fuentes de carbono permitiendo un crecimiento rpido de Como. Nger llevan a tasas de
carbono necesario para el catabolismo de desbordamiento y Wolschek citrato (Kubicek, 1999).
Hossain et al.
al 14% aument el tiempo de retraso de crecimiento de 12 a 18 h y disminuy la tasa de

crecimiento en torno al 20%. %1 (1984) ha sugerido que las altas concentraciones de fuentes de
carbono apropiado llevar a represin de a-cetoglutarato deshidrogenasa, lo que explica el efecto
de la concentracin de azcar y fuente en trminos de enzima de la represin. En su papel de
referencia, Shu y Johnson (1984) inform que la concentracin final de cido ctrico aumenta con
el aumento inicial de la concentracin de azcar en el rango de 14 - 22%. Los resultados
presentados por Honecker et al. (1989) estn de acuerdo con esto. La superioridad de la sacarosa
en glucosa y fructosa ha sido documentado por Gupta et al. (1976), Hossain et al. (1984), y Xu et al.
(1989a). La ltima prueba, maltosa, sacarosa, glucosa, fructosa, manosa y observar los
rendimientos ms altos en la concentracin de azcar del 10% w/v, con la excepcin de la glucosa,
donde el 7,5% dio los mejores resultados. Sin el cido ctrico fue producida en medios que
contienen menos del 2,5% de azcar. Se observ tambin que el aumento en la concentracin de
azcar a partir de
los efectos del tipo de la fuente de carbono de hongos morfologa y ultraestructura estn ilustradas
en la obra de Cundell et al. (1976) con pe. chrysogenum. El hongo micelial como huecos pellets
individuales que rodea las gotas de hidrocarburos en n-hexadecane como slido y pellets de
peptona. Una densa capa de micelio de hongos que mostraron las formas irregulares, la fusin y el
aumento de tamao hifales formada en el hidrocarburo - Interfaz del agua.
Inclusin estaban presentes en el hongo cultivado hexadecane que estaban ausentes cuando el
hongo se cultiva en peptona.
Estudios en lotes convencionales cultura confirm esa inicial de la concentracin de glucosa en el

medio de fermentacin afecta tanto la tasa de cido ctrico por fermentacin como. Nger y la
morfologa del organismo productor (Papagianni et al., 1999c). Para eliminar los efectos de
disminuir la concentracin de azcar en lote de experimentos, una serie de fed-batch (glucostat) se
llevaron a cabo experimentos en los que la concentracin de glucosa se mantuvo constante,
mientras que todas las otras condiciones se pueden cambiar. El nivel de glucosa tuvo un marcado
efecto en las tasas de produccin; la tasa de crecimiento especfico de formacin de cido ctrico
se incrementaron con el aumento de la concentracin de glucosa inicial (lote cultura) o los niveles
de glucosa (glucostat cultura), y en ambos mtodos de cultivo, la tasa de crecimiento especfico
aument con la disminucin de la concentracin de glucosa durante las primeras 48 h de
fermentacin. La reduccin observada en la longitud media de los filamentos en niveles bajos de
glucosa se explica por el aumento de la frecuencia de ramificacin como resultado del aumento de
la tasa de crecimiento especfico en las primeras fases de la fermentacin. Las principales
observaciones morfolgicas en ambos lotes y cultivos glucostat pareca estar relacionado con la
tasa de crecimiento, que est restringida por la concentracin de glucosa,

y por lo tanto, indirectamente relacionado con la concentracin de glucosa en el medio de
fermentacin. Adems, los niveles de glucosa en el medio fueron mostrados al plomo no catalizado
la entrada de glucosa en el micelio, que representaba para el cido ctrico y los cambios de la tasa
de crecimiento de la productividad.
Muller et al. (2000) investigaron el papel de la fuente de carbono en la mitosis y la extensin

hifales. Nger y Como. oryzae crecido en cultivo sumergido. En las dos especies de Aspergillus, la
longitud del compartimiento apical, el nmero de ncleos en el compartimiento apical, y el
dimetro hifales estaban regulados en respuesta a la concentracin de glucosa en el medio. Un
largo compartimento apical con muchos ncleos fue el resultado de la alta concentracin de
glucosa, mientras que un corto apical de compartimiento con pocos ncleos fue el resultado de
una baja concentracin de glucosa.
Como se explica en la seccin 6, limitacin de carbono contribuye enormemente al proceso de

envejecimiento celular y autolisis en cultivos de hongos, resultando en fuertemente vacuolated
hifas y fragmentacin.
9.4.
Nitrgeno nitrgeno y fosfato pueden ser suministrados como amonaco, como el nitrato o en
compuestos orgnicos, como los aminocidos o protenas. La melaza de remolacha o de caa de
azcar, maz y empinadas, Pharmamedia licor, suero en polvo, harina de soja, extracto de levadura
y otros son utilizados como materias primas industriales, ricos en nitrgeno. El fosfato es un
cmodo y fcil de utilizar la fuente de fsforo, mientras que las formas orgnicas son tambin
utilizados en procesos industriales. Ambos juegan un papel importante en la sobreproduccin de
metabolitos y afectar la morfologa fngica. En el proceso por el cido ctrico como. Nger, a fin de
acumular cido ctrico, el crecimiento tiene que ser restringido, pero an no est claro si el fosfato
o nitrgeno necesario es el factor limitante. Segn Shu y Johnson (1984), el fosfato no tiene por
qu ser limitante, pero cuando metales traza no son limitantes, el fosfato adicional resulta en
reacciones secundarias y el aumento del crecimiento. Kubicek y Rohr (1977) mostr que el cido
ctrico acumulan cuando el fosfato se limita incluso cuando el nitrgeno no estaba. En contraste
Kristiansen y Sinclair (1979), usando un cultivo continuo concluy que la limitacin de nitrgeno es
esencial para la produccin de cido ctrico.
Omisin de nitrgeno en el medio afecta mucho al crecimiento del hongo y la produccin de

metabolitos. Schrickx et al. (1995) estudiaron el comportamiento del crecimiento y la produccin
por un glucoamylase wild-type como. Nger y una cepa glucoamylase oveproducer transformant en
cultura de reciclaje sin una fuente de nitrgeno. En ambas cepas, punta hifales extensin y
produccin glucoamylase todava se producen, pero la sobreproduccin de cepa transformant
glucoamylase por el detenido. El micelio retenidos bajo la actividad metablica y las hifas apareci
parcialmente vacos y roto en la punta. Como la fermentacin procedi, la fragmentacin se
convirtieron en la caracterstica dominante en la cultura.
Entre los factores considerados para inducir la formacin de pellets en hongos filamentosos es la
limitacin de determinados nutrientes, como nitrgeno y Vecht-Lifshitz (Braun, 1991). Por otra
parte, los factores que favorecen el aumento de las tasas de crecimiento, incluido el exceso de
fosfatos concentraciones, han demostrado que reducen la formacin de pellets (Katz et al., 1972).
Existen dictions anti- sin embargo, como en la obra de Znidarsic et al. (2000), donde el aumento de
las concentraciones de nitrgeno condujo a mayores y ms densas estructuras de pellets Rhizop.
nigricans, mientras que a la baja de los niveles de nitrgeno, pellets pareca pequea, muy ligera y
suave, y el hongo mostraron una mayor tendencia a formar grumos. El efecto de la fuente de
nitrgeno sobre la morfologa y
La produccin de antibiticos fue estudiada con otra cepa, Rhizopus Rhizopus byDu chinesis, et al.
(2002). En los medios de comunicacin que contienen diferentes compuestos de nitrgeno, la
morfologa, en trminos de longitud hifales y grado de ramificacin, vari considerablemente. La
actividad del antibitico tambin vara con la fuente de nitrgeno. La mayor produccin de
antibiticos, acompaado por el crecimiento precipitado, se logr en un medio conteniendo maz-
empinada licor.
Los pellets eran suaves con un ncleo compacto y suelta la zona exterior y un dimetro promedio
de 3 mm. Al sulfato de amonio fue utilizado como fuente de nitrgeno, las pastillas eran ms
grandes (4 mm), compactos, con una superficie suave y el uso de antibiticos fue menor
productividad. El mismo fue el efecto con pe. chrysogenum en el estudio del Pirt y Callow (1959);
sulfato de amonio en el mediano causado pellet compacta el crecimiento, mientras que CSL
producido looser estructuras.
Relaciones Cuantitativas entre las concentraciones de fosfato en los medios de comunicacin y

como. Nger la morfologa y la produccin de cido ctrico, fueron investigados por Papagianni
(1995) y Papagianni et al. (1999a) en un bucle tubular bioreactor. Un pequeo aumento en la
concentracin de fosfato en el medio (de 0,1 a 0,5 g/l de KH2PO4) condujo a una fuerte cada en la
productividad de cido ctrico (70% en el tiempo de circulacin del 18 s, al 39%), mientras que la
concentracin de biomasa al final del proceso de 7 das se duplic. Son los cambios drsticos en la
morfologa, que fueron supervisadas por el anlisis de la imagen. El permetro de cmulos se
convirti casi tres veces mayores, mientras que sus ncleos siguen siendo pequeos a mayores
concentraciones de fosfato, dando una apariencia floja agregados micelial que representaron un
aumento de viscosidades de caldo, bajar los niveles de oxgeno disuelto y, en consecuencia,
disminuir la productividad. Frecuencia de ramificacin y la longitud de los filamentos se
incrementaron con el aumento de las concentraciones de fosfatos. En otro estudio (Papagianni et
al., 1999d), una liberacin lenta de un fosfato orgnico durante el formulario como. Nger fitasa
fermentacin condujo a un cambio de la morfologa del peleteado de filamentosas y mayor
produccin de biomasa, mientras que en contraste con el caso de cido ctrico, tambin aument
la produccin de enzimas.
9.5. Y otros iones de metales
determinados metales esenciales son necesarios para el crecimiento de hongos. Existe amplia
informacin sobre los efectos de metales y otros iones sobre crecimiento del hongo y la
produccin de metabolitos. La mayora de esta informacin fue obtenida en el lote de
experimentos. Los efectos del mono y cationes divalentes, sobre el crecimiento de los hongos
marinos Dendryphiella salina han sido examinados por Allaway y Jennings (1970). El crecimiento se
redujo en un 40% y un 25% en presencia de 200 mM de NaCl y KCl, respectivamente. Los iones del
sodio inhibe la absorcin de glucosa por
+ inhibiendo su catabolismo que, a su vez, al parecer como resultado de una fuga de K del micelio.
La inhibicin se invirti casi en su totalidad por 10 mM CaCl2
+, que redujo la prdida de K + , Na y alcoholes de azcar proveniente de los hongos. Una

inhibicin del transporte de glucosa result ser la base del efecto de potasio.
Alberghina et al. (1971) estudi la concentracin de Mg2 + dependencia de la tasa de crecimiento

de
2 + N. crassa e inform Ks por Mg de 7 Amol/l. Un aumento significativo en la concentracin de

poliaminas producido en mycelia de mg lote limitado de culturas tan pronto como los niveles
intracelulares de Mg2 +cay, pero el contenido de ARN y de crecimiento no fueron afectadas
(Viotti et al., 1971).
Fluctuaciones de la poliamina y Mg2 + concentracin en respuesta a tasa de dilucin han sido

observados en carbono-limited chemostat culturas de Como. nidulans (Bushell y Bull, 1974a).
concentracin de magnesio en el micelio descendi de 100 a unos 20 Amol/g
1 de biomasa, como la tasa de dilucin se elev de 0,05 a 0,18 h . En contraste, las concentraciones
de espermidina aumentaron durante esta tasa de dilucin de tal manera que la proporcin molar
de poliamina plus
+ 2 mg de ARN permaneci constante en aproximadamente 2. El mantenimiento de esta relacin

puede ser fundamental para la estabilidad de los ribosomas o para la sntesis de ARN.
Se ha realizado un gran trabajo en metales traza con As. Nger sobre el crecimiento y la produccin
de cido ctrico. Zinc, manganeso, cobre, hierro, metales pesados y metales alcalinos ha
demostrado afectar tanto la morfologa de hongos y la produccin de cido ctrico. Shu y Johnson
(1984) informaron de niveles ptimos de Zn y Fe en 0,3 y 1,3 ppm, respectivamente. Los niveles de
Fe y Zn estn probablemente relacionados con la desviacin de carbono entre la biomasa y el cido
ctrico (Mattey, 1992). Adems de zinc para las culturas en fase de acumulacin en la labor de Wold
y Suzuki (1976) result en su reversin a la fase de crecimiento. Haq et al. (2002) informaron sobre
el efecto de los iones de cobre como. Nger la morfologa y la produccin de cido ctrico.
5 2 + Adicin de 2 a 10 m de CuSO4 para el mediano redujo la concentracin de Fe, actuando

contra sus efectos perniciosos sobre el crecimiento de hongos. Los iones de cobre tambin indujo
una floja- peleteado forma de crecimiento, la reduccin de los niveles de biomasa y el aumento de
la productividad volumtrica de cido ctrico.
Cualquier adicin de Mn en una concentracin tan baja como 3 Ag/l reduce drsticamente el
rendimiento de cido ctrico lo contrario bajo condiciones ptimas (Clark et al., 1966). Bowes y
Mattey
2 + (1979) inform de que la adicin de 10 mg/l de Mn redujo la acumulacin de cido ctrico.
Las investigaciones realizadas por Clark (1961) y Kisser et al. (1980) confirmaron la naturaleza
reguladora clave de iones Mn. La influencia de los iones de Mn en la sntesis de protenas se
consideraba de gran importancia desde la cicloheximida, un inhibidor de la sntesis de protenas de
novo, fue encontrado para antagonizar el efecto de la adicin de manganeso. Anabolismo celular
de Como. Nger se deteriora bajo la deficiencia de Manganeso y/o limitacin de nitrgeno y
fosfato. La prdida de protena en Mn deficiencia ocasiona una alta concentracin intracelular de
NH4 + que provoca la inhibicin de la enzima phosphofructokinase (una enzima esencial en la
conversin de la glucosa y la fructosa a piruvato), provocando un flujo a travs de la gluclisis y la
formacin de cido ctrico (Kubicek y Rohr, 1977; Habison et al., 1979).
Los iones de manganeso son conocidos por ser especialmente involucrado en muchos procesos
celulares, como la sntesis de la pared celular y la esporulacin. Kisser et al. (1980) estudiaron el
desarrollo de la morfologa y la composicin de la pared celular como. Nger bajo condiciones de
deficiencia de Manganeso y suficiente de cultivo en un medio de produccin de cido ctrico en
caso contrario. Omisin
7 iones de manganeso (de menos de 10 M) desde el medio nutriente result en desarrollo

morfolgico anormal, caracterizada por el aumento de la inflamacin y de esporas en cuclillas,
bulbosa de hifas. La inhibicin de la rotacin glucoprotein causada por la ausencia de iones de
manganeso en el mediano provoc la prdida de polaridad hifales y el aumento de la ramificacin
y de la sntesis de quitina. Fig. 1 muestra la morfologa caracterstica del micelio de productoras de
cido ctrico como. Nger en una deficiencia de manganeso-medio. El desarrollo morfolgico
anormal con hifas bulbosa es evidente en la fotografa, que fue tomada a las 120 h de
fermentacin en un biorreactor de tanque agitado a 500 rpm y pH 1,6 (Papagianni, 1995). Clark et
al. (1966) tambin examin los cambios en la morfologa. Nger tras la adicin de Mn.
Los autores notaron un cambio indeseable en la morfologa de la forma peleteada filamentosas

con la adicin de 2 ppb de Mn de ferrocianuro tratados con melaza. Los cambios morfolgicos, que
incluyen la prevencin de la aglutinacin, ausencia de clulas inflamadas y reducido
Fig. 1. La morfologa caracterstica del micelio de productoras de cido ctrico como. Nger en un
medio deficiente de manganeso. La fotografa (400 ) fue tomada a las 120 h de fermentacin en un
biorreactor de tanque agitado, a 500 rpm y pH 1.6.
Dimetros hifales, acompaado por una reduccin del 20% en rendimiento de cido ctrico, tras la
adicin de 30 Ag/L Mn Mn-mediana gratis, tambin han sido reportadas (Papagianni, 1999a).
9.6. La tensin de oxgeno disuelto
Tabak y puente Cooke (1968) revisaron la literatura anterior sobre los efectos de los ambientes
gaseosos sobre hongos. Sobre la base de la presente informacin se desprende que la mayora de
los hongos requieren oxgeno molecular para crecer. Los hongos pueden crecer en muy amplias
gamas de tensiones de oxgeno y muchas de las primeras investigaciones de requerimientos de
oxgeno fueron limitados por la imposibilidad de medir muy bajas concentraciones de oxgeno y
establecer rigurosas condiciones anaerbicas (Bull y Bushell, 1976).
La produccin industrial de diversos metabolitos de hongos filamentosos es susceptible a la

regulacin de la tensin de oxgeno disuelto del medio (Kubicek et al., 1980). Como en la mayora
de los casos, estos productos son producidos por las clulas diferenciadas, es evidente que el
punto crtico para el crecimiento y el punto crtico para la formacin de producto son distintos
parmetros y, en general, ste es significativamente mayor. Esta es una caracterstica comn del
metabolismo de hongos y apunta a una funcin general de oxgeno en la regulacin metablica. En
el caso de la produccin de cido ctrico por As. Nger, la influencia de oxgeno ha sido bien
establecido (Shu y Johnson, 1984; Clark y Lentz, 1961). Las interrupciones de la aireacin hasta 20
min no reducir la viabilidad de Nger, pero como resultado de la prdida completa de la capacidad
para producir cido ctrico (Kubicek et al., 1980). El oxgeno acta como regulador directo de
acumulacin de cido ctrico.
Kubicek et al. (1980), investigando el mecanismo del control de acumulacin de cido ctrico por
oxgeno, por medio de una planta piloto como. Nger Las fermentaciones, inform el punto crtico
para la absorcin de oxgeno a los 18 - 21 y 23 - 26 mbares para trophophase y idiophase,
, respectivamente. Puntos mnimos para la produccin de cido ctrico fue alrededor de 25

milibares, mientras que la produccin aument de forma constante entre 40 y 150 mbar. Sin
embargo, los informes sobre el efecto de un punto sobre la morfologa de Como. Nger sugieren
que no existe una relacin directa entre los dos. Gmez et al. (1988) encontr que no hay
diferencia en la morfologa de pellets y filamentos podran atribuirse a niveles de puntos, aunque
la produccin de cido ctrico fue mejorada, especialmente a partir de pelets, aumentando el
oxgeno disuelto en diferentes etapas de fermentacin. Asimismo, en la obra de Carter y Bull
(1971) con Como. nidulans, morfologa no se vio afectada por
1 punto. Las culturas en las que la tasa de crecimiento especfico se mantuvo constante en 0,05 h y
el punto vari de 1 a 156 mm Hg y morfologa filamentosa desarrollado tanto el promedio de la
longitud del segmento hifales y el grado de ramificacin parece ser independiente de la DOT.
DOT, demostrando que el punto crtico de valores para la produccin de penicilina y el consumo de
oxgeno son diferentes. De nuevo, no hay relacin directa entre el TOD y la morfologa de
Penicillium ha reportado hasta la fecha. van Suijdam y Metz (1981) mostraron que la tensin del
oxgeno en el rango de 12 - 300 mg Hg no tuvo ninguna influencia en la morfologa del PE.
chrysogenum. Estos informes contradicen la hiptesis de limitacin de Hemmersdorfer et al.
(1987), lo que sugiere una falta de nutrientes especficos, incluyendo el oxgeno, induce la
formacin de pellets en hongos filamentosos. %7 la produccin de penicilina por pe. chrysogenum
es tambin muy sensible a punto. Vardar y Lilly (1982) estim la produccin de penicilina tasas
especficas ( qpen constante) en los diferentes niveles de puntos y encontr que por debajo del
30% de saturacin de aire qpen disminuy considerablemente, mientras que la produccin no fue
observado por debajo del 10% DOT. La absorcin de oxgeno de la cultura fue afectado
significativamente por debajo de la
morfologa fngica parece ser ms sensible al punto en el proceso de produccin de cido

araquidnico por los hongos filamentosos Mortiella alpina. Higashiyama et al. (1999), en un
intento de mantener una concentracin superior a 7 ppm, utilizan dos mtodos, el
enriquecimiento de oxgeno (OE) mtodo (25 - 90% de oxgeno gas suministrado) y la presurizacin
(PR) mtodo (180 - 380 kPa de presin headspace). Como resultado, el rango de concentracin
ptima de hacerlo fue encontrado para ser 10 - 15 ppm. En este intervalo, el cido araquidnico se
mejor el rendimiento de aproximadamente 1,6 veces en comparacin con la obtenida en 7 ppm, y
no hubo diferencias en la produccin entre los dos mtodos. Cuando la concentracin se mantiene
en 20 - 50 ppm utilizando el mtodo de OE, la morfologa cambi de filamentosas de peleteado, y
el rendimiento de producto disminuy drsticamente debido a la limitada capacidad de las tasas
de transferencia de masa a travs de las paredes de pellets. Cuando la concentracin se mantiene
en 15 - 20 ppm utilizando el mtodo PR, la morfologa no cambi y el rendimiento disminuye
gradualmente.
El oxgeno fue encontrado para ser el principal efector de desarrollo morfolgico del hongo
dimorfo Mucor circinelloides en el estudio de mcintyre et al. (2002). Crece en cultivos
discontinuos, fue posible inducir el cambio dimorfo controlando la atmsfera de gas de afluente.
Cultivos puros de la levadura de gemacin multipolar forma fueron obtenidas bajo condiciones
anaerbicas (con 70% N2/30% CO2 o 100% N2 como el sparged gas y sin aireacin), mientras que
las culturas puramente filamentosas aerobias resultado de cultivos.
9.7. Tensin de dixido de carbono disuelto
los procesos de evolucin y la absorcin de dixido de carbono son fundamentales para la

actividad de muchos microorganismos (Dixon y Kell, 1989). Desde la afirmacin de Rockwell y
Highberger (1927) que el CO2 es un requisito previo esencial para el crecimiento de bacterias,
levaduras y hongos, una serie de informes han descrito sus efectos estimulantes sobre el
crecimiento de hongos, por ejemplo, Rhizopus (Barinova, 1954), Fusarium (Stover y Freiberg, 1958)
y los hongos del suelo (Macauley y Griffen, 1969). Otros autores han considerado que el CO2 como
un inhibidor de hongos. Tabak y puente Cooke (1968) lleg a la conclusin de que el gas las
mezclas que contengan ms del 95% de CO2 son, en general, inhibitoria. Fijacin de Dixido de
carbono tiene un papel importante en la produccin de cidos orgnicos importantes
comercialmente por hongos filamentosos. La formacin de cido ctrico a partir de hexosas como
producto. Nger a travs de una divisin en dos compuestos C3, uno de los cuales es
decarboxylated a C2 y el otro es carboxylated a C4.
La condensacin de la C2 y C4 se produce productos entonces para formar cido ctrico (Bentley y

Thiessen, 1957; Kubicek y Roh, 1989). Itaconic cido producido por Aspergillus terreus, est
formado de manera similar (Bentley y Thiessen, 1957; Wilke y Vorlop, 2001), de la CEI- aconitate
est formado a partir de la cual es luego decarboxylated citrato para formar itaconato. Overman y
Romano (1969) fueron los primeros en demostrar la importancia de piruvato carboxilasa en la
produccin de cido fumrico Rhizop. nigricans. La continuacin de la actividad de la enzima
despus de la cesacin del crecimiento parece proporcionar una fuente de carbono para la sntesis
de cido fumrico en forma de CO2 fijo.
En culturas saturadas de oxgeno como ptima para el crecimiento y la produccin de antibiticos,

por encima de este nivel crtico de produccin de penicilina fue afectada. Bushell y Bull (1974b) en
estudios con Como. nidulans concluy que una crtica de la presin parcial de CO2 era necesaria
para el xito de la creacin continua de culturas de espora inculos. La fijacin del CO2 a travs de
piruvato carboxilasa y phosphoenol piruvato carboxilasa fue responsable por el rendimiento de
biomasa aumenta de 23% cuando la concentracin de bicarbonato en el caldo de cultivo se elev
de 2,5 a 7,0 mM. Actividad de la enzima y de las consiguientes tasas de fijacin del CO2 se
encontraron fuertemente dependiente de la tasa de crecimiento. La piruvato carboxilasa
disminuy en actividad como la tasa de dilucin se increment, mientras que la actividad piruvato
carboxilasa phosphoenol alcanz un mximo en una tasa de dilucin equivalente a
aproximadamente 1/2lmax. %1 en la prctica, los parmetros de ventilacin en cido orgnico de
fermentacin son empricamente. El trmino ''ventilation" fue acuado byNyiri y Lengyel (1968) en
la descripcin de los procesos de transferencia de CO2 para distinguirlos de los efectos de
aireacin que se ocupan de la transferencia de oxgeno y la disponibilidad. Las condiciones ptimas
debera proporcionar suficiente concentracin de CO2 gaseoso en la cultura para evitar la
solubilidad equilibrio entre bicarbonato disuelto y CO2 gaseoso se convierta en un factor limitante
en la fijacin del CO2. En los estudios de la fermentacin de penicilina Nyiri y Lengyel (1965)
encontraron una concentracin de CO2 de
un considerable debate rodea los mecanismos por los cuales el CO2 inhibicin del crecimiento y el
metabolismo mediado (Dixon y Kell, 1989; Jones y Greenfield, 1982). En cultivo sumergido,
tampoco est claro de qu forma de CO2 es el responsable de los efectos, con
CO2 en la corriente de entrada de los gases no tena marcados efectos sobre la morfologa y la
produccin; como la concentracin de CO2 se aument la produccin de penicilina, cay a un 10%
del control en el 20% de CO2, mientras que el desarrollo de una morfologa aberrante se seal.
Microscopa de Luz, condujo a la observacin de que el carbono disuelto %5 CO2 (AQ) [CO2
disuelto], iones de bicarbonato (HCO3), e incluso una breve dmeras H2C2 o estar implicados
(Covington, 1985). Para hongos filamentosos, efectos pronunciados tanto en morfologa y
formacin de producto han sido asociados con niveles elevados de CO2. Estudios con pe.
chrysogenum (Pirt y Mancini, 1975; Smith y Ho, 1985; Ho y Smith, 1986) mostraron que los niveles
inferiores a
afectados dixido de la morfologa del PE. chrysogenum con las hifas normal y saludable,
convirtindose en largo, fino y difuso cuando son expuestos a mayores concentraciones (Smith y
Ho, 1985). Se propuso que los efectos observados en los pe. chrysogenum se debieron a que los
altos niveles de CO2 podra afectar las propiedades de transporte de la membrana de la clula o
que las clulas fueron sometidas a hinchazn osmtica (Smith y Ho, 1985; Ho y Smith, 1986). El
estudio de Edwards y Ho (1983) se centr en el efecto del CO2 en Pe. chrysogenum sntesis de
quitina. Este proceso y el resultado de las fibrillas de quitina en gran medida determinan la forma y
la direccin de crecimiento de hifas individuales (Steward y Rogers, 1983). Aumento de las
concentraciones de CO2 han demostrado que conducen a una reduccin de la sntesis de quitina
sitios causando esfrica o levadura-como el crecimiento se produzca. Aparte del proceso de
sntesis de quitina, otros sitios propuestos de CO2 accin incluyen membranas biolgicas (Sears y
Eisenberg, 1961) y las enzimas citoplasmticas. Un factor probable en la eficacia de CO2 es la
capacidad de penetrar en las membranas bacterianas causan cambios en el pH intracelular. Es
posible que los cambios de pH resultante podra ser suficiente para perturbar equilibrios
enzimticos internos.
CO2, plante el CO2 se asoci con una disminucin de la biomasa y las concentraciones de citrato,
disminucin del consumo de sustrato y cambios morfolgicos. %3 Mcintyre y McNeil (1997a)
estudiaron los efectos del CO2 en la morfologa, el crecimiento y la produccin de cido ctrico por
As. Nger en cultivos discontinuos y comunic informacin cuantitativa sobre los cambios
morfolgicos mediante el anlisis de imgenes. En los procesos en los que el flujo del gas de
admisin contiene ms que
un aumento en el valor de la unidad de crecimiento hifales, media longitud hifales y media

longitud de rama fue observado como afluentes de CO2 ha aumentado por encima del 5%.
Extender su estudio en chemostat culturas (MCINTYRE y McNeil, 1997b), los mismos autores
informaron de que, aunque los niveles elevados de CO2 no inhiben el crecimiento y la formacin
de cido y, en general, llevaron a un aumento en el valor de los parmetros morfolgicos, estos
efectos fueron ms modestos que podra haberse esperado en funcin de los resultados de su
estudio anterior. Las diferencias observadas entre el lote y cultura chemostat estudios se explica en
trminos de la naturaleza de los sistemas experimentales.
9.8. Cultura pH
El pH del medio es muy importante, pero que a menudo se ha descuidado el factor ambiental.
Puede afectar profundamente cualquier actividad que estn siendo estudiados. El pH de una
solucin es una medida de
la concentracin de H + iones presentes. Diferentes puntos de un pH - crecimiento parcela puede

ser interpretado en trminos de efectos sobre el transporte de los nutrientes, nutrientes
solubilidades, reacciones enzimticas o fenmenos superficiales. Hongos Conidial puede crecer en
una amplia gama de pH. La mayora tolera un rango de pH de 4 a 9, pero crecer y esporuladas
mximamente cerca de pH neutro (Cochrane, 1958).
La composicin del medio pueden afectar el pH inicial y la magnitud y direccin de pH deriva

durante el crecimiento del hongo. Bfer mal los medios que contengan sales de amonio son
susceptibles de ser ms cida durante el crecimiento, mientras que los soportes que contienen
nitrato estn propensos a ser alcalina. Minimizar pH deriva durante el crecimiento es un objetivo
deseable que a menudo es difcil de lograr. Las altas concentraciones de iones como los fosfatos
que son necesarios para lograr cierto grado de estabilidad de pH suele influir sensiblemente la
actividad biolgica que se miden (por ejemplo, el crecimiento y la actividad de la enzima). Como se
mencion en la seccin anterior, la cultura pH influye en la concentracin de bicarbonato disuelto
formado a partir de CO2 gaseoso. De esta manera, prevalece la capacidad de buffer y pH del medio
de cultivo puede influir en el crecimiento de hongos y la formacin de producto.
El efecto de variar el pH en el estado estacionario chemostat culturas de Como. nidulans en

rendimiento de biomasa ha sido estudiada por Bull y Bushell (1976), manteniendo la concentracin
de bicarbonato disuelto constante. El pH ptimo para el crecimiento bajo condiciones de limitacin
y glucosa al 30 jC fue de 6,9; el rendimiento cay bruscamente a valores de pH en ambos lados de
la ptima. En un estudio de produccin de melanina por As. nidulans Rowley y Pirt (1972)
encontraron que el pH 3.0 era el lmite inferior para el crecimiento y que descolorar del chemostat
ocurri a valores de pH entre 3.0 y 2.7.
Cultura El pH afecta tambin a la morfologa fngica. Y Pirt Callow (1959) inform de que al
aumentar el pH de las culturas en estado estable de Pe. chrysogenum por encima de pH 6.0
provoc una disminucin correspondiente en la longitud hifales que alcanz un valor mnimo a pH
7.0 - 7.4.
A mayores valores de pH, amplia formacin de clulas inflamadas fue observada. Una interpre-
tacin de estos resultados es que un cambio de pH-dependiente en la estructura de las paredes
hifales toma lugar, resultando en una disminucin de la resistencia al cizallamiento de hifas
impelente. Como el pH ptimo para la produccin de penicilina es de aproximadamente 7.4, este
LED Pirt y Callow (1959) a concluir que un ideal de flujo continuo, Sistema de cultivo para la
produccin de antibiticos constara de dos etapas, la primera para el crecimiento con un valor pH
no superior a 7,0 y una segunda etapa con un pH ms altos para la produccin de penicilina. Dos
etapas similares estrategias han sido propuestos para el glucano sintetizando hongo
Aureobasidium pullulans (Lacroix et al., 1985), y el hongo charide exopolysac- producir esclerocios
glucanicum (Wang y McNeil, 1995). El efecto del pH sobre la morfologa chrysogenum pe. en lote y
culturas chemostat fue estudiada por millas y Trinci (1983). Espesor de pared y la longitud de la
unidad de crecimiento hifales resultaron ser muy sensible a los cambios de pH. Crecido en la
cultura chemostat Mycelia alcanz su mximo crecimiento hifales longitud de unidad a pH 6,0.
El fenmeno de formacin de pellets est fuertemente influenciada por el pH (Whitaker y Long,

1973; Gerlach et al., 1998; Braun y Vecht-Lifshitz, 1991). En general, la tendencia de los micelios
para formar pellets aumenta a medida que el valor del pH de la cultura plantea.
Galbraith y Smith (1969) han encontrado como. Nger que el pH del medio de cultivo desempea
un papel importante en el proceso de formacin de pellets, especialmente en la coagulacin de las
esporas.
A pH 5.0, prevaleci la coagulacin, mientras que a pH 2.0, no se observ la coagulacin. Los

autores concluyeron que las propiedades de la superficie de las esporas fueron influenciados por el
pH. Las observaciones fueron similares de Carlsen et al. (1995), quienes llevaron a cabo cultivos
batch de Como.
8 oryzae en un reactor de tanque agitado con un inculo, consta de 4 a 10 esporas/ml. En los
valores de pH por debajo de 2.5, el micelio creci fuertemente vacuolated y las clulas parecan
hinchados, resultando en un crecimiento deficiente. A pH 3.0 - 3.5 Dispersados libremente
elementos hifales provocado, mientras que a pH 4,0 - 5,0, el caldo const tanto de pellets y
dispersados libremente las hifas. A valores de pH superiores a 6.0, slo pastillas fueron observados
y el tamao de pellets se incrementaron con el aumento de valor de pH. Formacin de pellets fue
causado por la aglomeracin de esporas en los valores de pH por encima de 4.0. Steel et al. (1954)
tambin observ que el crecimiento de filamentosas como. Nger se ha producido en los valores de
pH por debajo de 5.0.
Adems de la influencia sobre el crecimiento y la morfologa, Carlsen et al. (1995) investigaron la

influencia del pH sobre la a-amilasa formacin. a-amilasa tuvo una fuerte produccin mxima a pH
6.0, en contraste con la tasa de crecimiento, que tena un amplio mximo entre pH 3,0 y 7,0. La
produccin de enzimas como awamori. Segn Smith y
Wood (1991) es una funcin slida del valor pH. Produccin de cidos orgnicos por cepas de
Aspergillus es tambin una fuerte funcin del pH, ya que ciertas enzimas en el ciclo TCA son pH
sensible (Mattey, 1992; Smith y Wood, 1991). El mantenimiento de un pH bajo durante la
fermentacin de cido ctrico es vital para un buen rendimiento, y generalmente se considera
necesario para el pH a caer alrededor de 2.0 dentro de unas pocas horas despus de la iniciacin
del proceso, de lo contrario, los rendimientos son reducidos (Mattey, 1992). El efecto del pH sobre
la morfologa del cido ctrico como productoras. Nger ha sido investigado por Papagianni et al.
(1994, 1999a). Se proporcion informacin cuantitativa sobre el tiempo cursos de ciertos
parmetros morfolgicos con un semi-automtico sistema de anlisis de imagen (Papagianni et al.,
1994, 1999a). En fermentaciones realizadas en un reactor de tanque agitado a 500 rpm, los
1 valores ms altos de tasas de produccin especfico (0.35 h ) se obtuvo a pH controlado en 2.1.

Bajar (pH 1,6) y superior (pH 3,0) cultura pHs redujo las tasas de produccin especfico para el
1 de 0,18 h y dio lugar a formas morfolgicas asociadas con escasa productividad. En pHs muy baja
( < 2.0), un nmero inusualmente elevado de clulas inflamadas y consejos fueron obtenidos; el
micelio formaron pequeos grumos y los filamentos son cortos. Aumentar la cultura a pH 3.0, el
tamao de los agregados micelial se duplic, al igual que la longitud de los filamentos.
9.9.
Los estudios de temperatura efectos de la temperatura sobre el crecimiento y la produccin de

metabolitos son pocos con respecto a los hongos filamentosos. Los sistemas de cultivo cerrados
son altamente inadecuados para la elucidacin de los efectos de la temperatura sobre el
crecimiento de hongos. Aunque la temperatura es un parmetro ambientales que sea fcil para
controlar los cambios en la temperatura producen cambios simultneos en otras variables de
cultura. Un aumento en la temperatura de incubacin dentro de rangos ological physi- mejora la
tasa de crecimiento y valores de Q10 de 2 y 30 son comunes en la literatura (Bull y Bushell, 1976).
[Q10 es el factor por el que la tasa de mortalidad aumenta para un aumento de la temperatura
10jC.] La tensin de oxgeno disuelto es tambin dependiente de la temperatura y vara
inversamente con el aumento de la temperatura. Asimismo, nutricionales y pH requieren- ciones
de crecimiento puede ser influenciada por la temperatura.
La tasa de evaporacin media es tambin muy afectados por la temperatura, especialmente en

cultivo continuo. Si no se contabiliza de evaporacin o compensados, los errores pueden ser
realizados en la medicin del crecimiento constantes como Y y m. Segn King et al. (1972), estos
errores pueden ser particularmente graves en bajas tasas de dilucin que son comnmente
establecida con cultivos de hongos, y a altas temperaturas. Los factores que determinan la
temperatura mnima de crecimiento parecen ser la inactivacin de soluto los sistemas de
transporte y el gradiente de protones en la formacin que los resultados de ''congelamiento'' de la
membrana protoplsmico. Sensibilidad a la temperatura de la membrana protoplsmico en
presencia de carbono metabolizable sustratos pueden ser un importante determinante de la
temperatura mxima de crecimiento (Madigan et al., 2000).
Y Pirt Rowley (1972) observaron que a medida que la temperatura de las culturas en estado
estable de Como.
nidulans se elev de 23 a 37jC jC del qO2 aument de 1,54 a 3,24. Los autores interpretan estos
resultados en trminos de un mayor mantenimiento el requisito de energa debido a las mayores
tasas de rotacin de protenas y cidos nucleicos a temperaturas elevadas. A lo largo de un rango
de temperaturas similares la tasa de crecimiento especfico. nidulans aument de 1.54 a 3.24
h 1 , y un aumento comparable a la tasa de crecimiento de la colonia, Kr, fue observado por Trinci
(1969). Trinci concluy que Kr fue una medida fiable de la temperatura ptima de crecimiento de
hongos, una conclusin a la que ha sido confirmada por el anlisis de N. crassa (Trinci, 1973). La
influencia de la temperatura sobre la cintica de crecimiento de cultivo de Como. oryzae ha sido
investigado por Carlsen et al. (1995) en una serie de experimentos de lotes. La tasa de crecimiento
especfico de los hongos cultivados en forma de pellets con aproximadamente el mismo tamao, el
aumento de la distribucin como la temperatura aument de 27 a 35 jC para alcanzar su valor
mximo a 35 jC. Cohen et al. (1969) han descrito un mutante de Como. nidulans que produce
paredes con reducido contenido de quitina cuando crecido a altas temperaturas. Anderson y Smith
(1971) han demostrado que las temperaturas elevadas producen notables cambios morfolgicos
en los conidios y recin formada de hifas como. Nger. Millas y Trinci (1983) estudiaron el efecto de
la temperatura sobre la morfologa del PE. chrysogenum chemostat en lote y culturas. El
crecimiento hifales unidad de longitud y espesor de pared se incrementaron con el aumento de las
temperaturas en el rango de 15 - 30 jC en ambos lotes y chemostat culturas.
Este efecto fue ms pronunciado en mayores tasas de dilucin.
Formacin de pellets es afectado por la temperatura. Braun y Vecht-Lifshitz (1991) sugieren que la
reduccin de la temperatura, entre otros enfoques posibles, para inducir la formacin de pellets
micelial en la fermentacin de las culturas. Esto est de acuerdo con el estudio de Schugerl et al.
(1998) sobre la produccin de xilanasa por As. awamori. Agitar el matraz estudios en velocidad de
rotacin constante revel que el volumen celular y las cantidades de diversas formas morfolgicas
fueron determinadas por la temperatura en el rango de 25 - 35 jC. El mayor volumen de celda fue
obtenido en 25 jC, donde slo pellets fueron observadas. Al 30 de jC, los pellets se form
inicialmente descompuesto despus de 50 h de micelio y filamentosas en 35 jC, principalmente
micelio filamentosos y slo una baja cantidad de pellets y matas fueron formadas.
Sin embargo, el micelio se convirti en aglomeraciones despus de 20 h, cuyo tamao se redujo

con el tiempo. Segn los autores, estas investigaciones indican que a mayor temperatura, el
suministro de oxgeno a las clulas es insuficiente. Por lo tanto, los pellets se transformaron a
micelios filamentosos en 30 jC, pero a 35 jC, debido a la alta cizalladura, cmulos se formaron.
Temperatura tambin afectaron la produccin de xilanasa, con el mximo de productividad
obtenidos en 35 jC. En la investig el rango de temperatura de 27 - 40 jC byCarlsen et al. (1995), a
pH por encima de 4.0 y con inculo consistente de esporas, pastillas fueron formados y la
distribucin de tamao de pellet fue encontrado para ser independiente de la temperatura.
9.10. Las fuerzas mecnicas
en fermentaciones sumergidas, la agitacin es importante para una buena mezcla y masa y

transferencia de calor. En los procesos aerbicos, la mezcla es necesaria para garantizar la
transferencia de oxgeno suficiente a lo largo de todo el buque. En el caso de un biorreactor de
tanque agitado convencionales, el buque puede ser dividido en dos regiones. La regin alrededor
del rodete representa una zona de alta disipacin de energa y, por lo tanto, buena masa y
transferencia de calor. El resto de la fermentacin volumen puede estar sujeto a una provisin
inadecuada de oxgeno debido a la mala calidad de la mezcla. En grandes fermentadores,
gradientes de transferencia de masa a travs del buque sea significativa y esto puede afectar el
crecimiento micelial y la formacin de producto. La agitacin aplicados durante la fermentacin
crea fuerzas de cizallamiento que pueden afectar a los microorganismos en varias formas, por
ejemplo, daos a la estructura celular, cambios morfolgicos, as como variaciones en la tasa de
crecimiento y
Formacin de producto. La magnitud y variacin de cizallamiento y otras fuerzas en biorreactores

sumergidas han sido discutidas extensamente en la literatura (Chisti, 1999a).
Markl y Bronnenmeier (1985) sugiere que los daos a los microorganismos en un fermentador de
turbina podra ser el resultado de rpidas fluctuaciones de presin alrededor de la hoja y de la
cizalladura creada por las puntas de las aspas de una turbina Rushton. Se consideraron varias
posibilidades para la forma en que los microorganismos responder a esas tensiones. Microorgan-
ismos expuesta a la zona alta disipacin de energa alrededor del rotor puede estar daado, pero
puede gestionar para recuperarse. La exposicin a una zona de alto cizallamiento no puede causar
dao instantneo, sin embargo, el dao puede ocurrir gradualmente debido a tensiones
hidrodinmico. Esto implica que el microorganismo tiene la capacidad de adaptarse a un cierto
nivel de estrs mecnico. Por ltimo, estos efectos pueden depender de la edad de la clula.
Posibles daos a los microorganismos pueden limitar la velocidad del rotor o la potencia de
entrada y, por consiguiente, la capacidad de transferencia de oxgeno y nutrientes de un
fermentador, y, en ltima instancia, la productividad volumtrica. Adems, los cambios en la
morfologa puede alterar la viscosidad de los caldos de fermentacin filamentosas, con efectos
adicionales sobre la mezcla y transferencia de masa. Para cada cultura, ptimas condiciones de
agitacin existir que dependern en parte de la resistencia de las hifas a las fuerzas mecnicas y
tambin sobre su estado fisiolgico (Moo-Young et al., 1992; Paul et al., 1994a; Papagianni et al.,
1999b).
Varios estudios han demostrado los efectos de las fuerzas mecnicas sobre la morfologa de los
microorganismos filamentosos y la productividad global del proceso. Sin embargo, por la forma de
crecimiento disperso filamentosas, los efectos superpuestos de agitacin son difciles de
cuantificar. Por ejemplo, en muchos casos, mejora el crecimiento micelial debido al aumento de las
tasas de transferencia de oxgeno se afirma como un efecto de agitacin, posiblemente para
contrarrestar los daos de cizalla. Para Pe. chysogenum en un fermentador de 24 l, agitacin
velocidades de 1250 y 1500 rpm dio como resultado la reduccin de la produccin de penicilina y
mayor crecimiento celular en comparacin con los de 900 y 100 rpm (Konig et al., 1981). A 700
rpm, se observ limitacin de oxgeno y la produccin de penicilina fue tan baja que la que se
encuentra a 1500 rpm. Sin embargo, los resultados fueron insuficientes para concluir
inequvocamente que una intensa agitacin caus baja productividad.
Rotor de alta velocidad fue encontrado para promover el crecimiento y posiblemente para
estimular las vas metablicas que se traduca en una baja productividad de la penicilina.
Dion et al. (1954) investigaron los cambios en la morfologa y la produccin de penicilina.
chrysogenum Pe 3 por encima del rango de escalas de fermentacin (0,01, 3, y 12 m ). Se encontr

que la concentracin de la biomasa no vara con la velocidad de agitacin. La penicilina fue mejor
producida por hifas cortas con suficiente aireacin y agitacin ptima. Bajo condiciones de
agitacin intensa, las culturas consista predominantemente de corto, grueso y muy ramificado
mycelia que se supona eran relativamente jvenes hifas. Metz et al. (1981) en estudios con pe.
chrysogenum mostraron que la longitud de las partculas micelial disminuyeron con el aumento de
la potencia absorbida por unidad de masa en el reactor, como el aumento de la agitacin causada
las hifas que se hacen ms cortos, ms grueso y muy ramificado. Altas tasas de agitacin redujo la
aglomeracin de Pe. chrysogenum elementos hifales y caus una reduccin en ambos dimetros
de pellet y la concentracin de pellets en la obra de Nielsen et al. (1995). Sin embargo, no existe
ninguna relacin entre la morfologa macroscpica y la produccin de penicilina por pe.
chrysogenum fue identificado. Smith et al. (1990) tambin observaron una disminucin de la
productividad de Pe. chrysogenum y redujo las longitudes hifales como aumento de la agitacin.
Sus datos para la tasa de produccin de penicilina (unidades/ml h) de 10 y 100 l de
volumen de trabajo fermentadores
3 mostraron buena calidad de acuerdo con su propuesta de modelo de parmetro P/D TC, basada
en
3 una combinacin de la media de la potencia absorbida por unidad de volumen por rodete ( P/D )
y frecuencia de circulacin (1/TC).
La reduccin de la media longitud hifales de Pe. chrysogenum y especfico de la tasa de produccin

de penicilina a altas velocidades de agitacin tambin fue reportado por Makagiansar et al. (1993),
que investig la influencia de fuerzas mecnicas resultantes de la rotacin de los rotores de turbina
y morfologa de los hongos en la produccin de penicilina en tres escalas de fermentacin (5, 100 y
1000 l) con el rotor de velocidad punta que van desde 2,5 a 6,3 m/s. La concentracin de oxgeno
disuelto nunca cay por debajo del nivel crtico para la mxima produccin de penicilina durante
todas las fermentaciones. Las mediciones morfolgicas usando anlisis de imagen mostraron que
la media principal y la media longitud hifales hifales unidad de crecimiento aument durante el
perodo de rpido crecimiento y luego disminuy a un valor relativamente constante depende de la
intensidad de agitacin. La tasa especfica de la produccin de penicilina y el promedio de longitud
hifales principal durante la fase de produccin de penicilina lineal fueron inferiores a alta velocidad
de agitacin, que promovi la ms rpida y una mayor fragmentacin micelial frecuencia de
ramificacin.
La comparacin de los resultados de las tres escalas mostraron que el impulsor de velocidad de
punta de pala es pobre, mientras que el parmetro de escala un mandato basado en circulacin
micelial a travs de la zona de alta disipacin de energa equipado los datos bien.
El efecto de la velocidad del agitador en el crecimiento y la productividad de tres cepas. Nger

como fue reportado por Ujcova et al. (1980). Altas velocidades result en ms gruesas y ms
densamente ramificada en filamentos. La produccin de cido ctrico era ptimo dentro de un
estrecho rango de velocidades.
Hubo una cada en la productividad a velocidades ms altas, aunque el crecimiento sigue siendo
rpido. Gmez et al. (1988) presentaron los resultados de Como. Nger morfologa y rendimiento
de cido ctrico como una funcin de las condiciones de agitacin. A mayores velocidades de
agitacin (1000 rpm) el formulario de pequeo, compacto pellets predomin, mientras que a bajas
velocidades (450 rpm) una mezcla de libre filamentos y grnulos sueltos existentes. Las culturas de
pequeo y compacto de pellets arrojaron niveles ms altos de cido ctrico que hicieron las
culturas compuesta principalmente de libre filamentos y grnulos sueltos.
Altamente ramificados micelio y pequeos agregados de estructura compacta, fueron observados

en funcin de la velocidad de cizallamiento en las fermentaciones de Como. Nger (Mitard y Riba,
1988).
Sin embargo, menores ndices de cizallamiento muy fuerte de las tasas de crecimiento especfico
eran bajas y al mismo tiempo una liberacin de nucletidos fue observada. Una relacin entre las
tasas de crecimiento especfico del organismo y la ruptura de los agregados micelial tambin fue
observado. Como los agregados estaban rotas, la tasa de crecimiento especfico reducido;
aument nuevamente como los filamentos liberadas continu creciendo.
Reduce la productividad de la enzima recombinante en mayor potencia del impulsor en una escala
de produccin como. oryzae fed-batch fermentacin fueron denunciados por Li et al. (2002c).
Esto se atribuy a la alteracin de la morfologa fngica, el aumento de la fragmentacin, la

reduccin de la biomasa, as como la mezcla o indeseables efectos de transferencia de masa. Los
efectos de la agitacin y la fragmentacin de una cepa recombinante de Como. oryzae y sus
consiguientes efectos sobre la produccin de la protena fueron investigados por Amanullah et al.
(1999) en las culturas chemostat
1 (5,3 l) a una tasa de dilucin de 0.05 h . La produccin de la protena fue independiente de la

velocidad de agitacin en el rango de 550 - 1000 rpm, a pesar de cambios significativos en la
morfologa.
Morfologa micelial no afectaba directamente a la produccin de la protena en una tasa de

dilucin constante y, por lo tanto, la tasa de crecimiento especfico. En otro conjunto de
condiciones de funcionamiento (Amanullah et al., 2002) en el Fed-batch culturas, biomasa en
concentraciones de hasta 34 g de peso de celda seca por litro
y tres velocidades de agitacin (525, 675 y 825 rpm), se obtuvieron resultados similares. Aunque la
morfologa micelial fue significativamente afectada por cambios en la intensidad de agitacin,
enzima ttulos bajo condiciones de sustrato de crecimiento limitado y controlado de oxgeno
disuelto >50% no cambi.
El efecto de la agitacin en Como. Nger la morfologa y la produccin de cido ctrico ha sido

investigado por Papagianni (1995) y Papagianni et al. (1994, 1998) en un tanque agitado y un
biorreactor de bucle tubular, a travs de una serie de lotes y fed-batch experimentos. Morfo- gica
mediciones usando anlisis de imagen mostraron que al aumentar la intensidad de la agitacin, el
tamao de cmulos disminuy, al igual que la longitud de los filamentos que surgieron a partir de
los ncleos de los cmulos, mientras que los dimetros de los filamentos aumentado. Tanto en los
fermentadores, tasas especficas de formacin de cido ctrico aument con la agitacin; la
cantidad de cido ctrico que se produce al final de las carreras (168 h) depende de la velocidad de
agitacin y el tiempo de circulacin. En el reactor de tanque agitado, la produccin de cido ctrico
aumenta con la velocidad del agitador hasta un punto (500 rpm) ms all de que la produccin se
mantuvo constante. Variando la intensidad de agitacin, diferentes patrones de desarrollo
morfolgico, fueron observados en ambas fermentadores. Fig. 2, 3 y 4 muestran el desarrollo de
caractersticas como la morfologa. Nger bajo diferentes niveles de agitacin. Fig. 2 muestra una
fotografa del micelio vegetativo (tiempo en el momento de la inoculacin con inculo cultivado
durante 30 h en agitar matraces). En la Fig. 3, la fotografa fue tomada al final de un ciclo (168 h) a
200 rpm en el biorreactor tanque agitado, mientras que en la Fig. 4, al final de una ejecucin a 500
rpm en el mismo bioreactor. Bajo condiciones de agitacin intensa un ciclo de fragmentacin y
recrecimiento fue observada, mientras que a bajas intensidades de agitacin, un gradual proceso
de envejecimiento y predominaron los filamentos creci mucho, con pocas ramas y dio mayores
valores promedios de amontonarse permetros. El promedio de los dimetros de los filamentos
tambin cambi durante la fermentacin; filamentos delgados se convirti con el tiempo en todos
los experimentos realizados tanto en los fermentadores. La reduccin del dimetro hifales fue
encontrado a la
Fig. 2. Como micelio. Nger en el momento de la inoculacin: inculo vegetativo crecido durante 30
h en agitar los frascos (100 ).
Fig. 3. Morfologa caracterstica de Como. niger cultivado en un biorreactor de tanque agitado

durante 168 h a 200 rpm y pH 2,0 (100 ).
Depender de agitacin: el ms rpido el caldo circulacin y cuanto mayor sea la velocidad del
agitador, ms rpida es la disminucin.
En otro estudio con As. Nger (Papagianni et al., 1999b), perfiles de tiempo de morfo- parmetros
lgicos (es decir, promedio de permetro de matas, longitud de filamentos, vacuolas) obtenidos
mediante el anlisis de imgenes, junto con tasas de crecimiento y productividad, se utilizaron para
establecer
Fig. 4. Morfologa caracterstica de Como. niger cultivado en un biorreactor de tanque agitado

durante 168 h a 500 rpm y pH 2,0 (100 ).
una relacin entre vacuolizacin, fragmentacin y formacin de producto bajo diferentes

condiciones de agitacin y los niveles de glucosa. Bajo condiciones de agitacin intensa (500 rpm) y
durante las primeras etapas de fermentacin, las caractersticas observadas fueron el aumento de
las tasas de crecimiento y ramificacin hifales, junto con los bajos niveles de la vacuolizacin. Estos
fueron seguidos por la fragmentacin de la altamente vacuolated partes de filamentos y
recrecimiento en etapas posteriores. Contrariamente a esto, bajos niveles de agitacin creado las
condiciones que limitan la renovacin del micelio, que apareci en una condicin de decaimiento
con una gran proporcin de su volumen degenerado. A 200 rpm, un alto grado de aglomeracin se
observ y concentraciones de oxgeno disuelto cayeron un 40% a las 72 h de fermentacin y se
mantuvo baja posteriormente. En 400 y 600 rpm, la concentracin de oxgeno disuelto fue superior
al 80% de saturacin de aire a lo largo de las fermentaciones. La morfologa obtenida en 200 rpm
cre las condiciones de transferencia de masa reducida, no es compatible con el aumento de la
produccin de cido ctrico.
Aument la vacuolizacin y bajas tasas de produccin especficas fueron observados en los niveles
bajos de glucosa en fed-batch de la cultura. Los resultados mostraron que la vacuolizacin debilit
las hifas y la baja de los niveles de glucosa cre las condiciones que favorecieron la fragmentacin y
el micelio ms susceptibles a ella cuando expuesta al aumento de la agitacin.
Ayazi Shamlou et al. (1994), investigando el impacto del bioreactor hidrodinmica de rotura hifales
de Pe. chrysogenum, sugiri que en un biorreactor agitado mecnicamente, rotura hifales es
probable que ocurra en la zona del impulsor como resultado directo de la fluctuacin subraya
actuando en los lados opuestos de la hypha. Estas tensiones pueden estar relacionados con la
media turbulenta caractersticas del lquido en el reactor suponiendo una turbulencia constante
factor. Sus datos experimentales sugieren que la rotura hifales es aproximadamente un proceso
cintico de primer orden con una tasa constante que parece ser moderadamente dependiente
sobre el producto de la media de la tasa de disipacin de energa y el recproco del impulsor del
tiempo de circulacin. Un similar fragmentacin hifales de primer orden ha sido reportada por
muchos otros (Chisti, 1999a).
Li et al. (2000) estudi la relacin entre la fragmentacin micelial y agitacin en
3 escala de produccin (80 m ) withAs. oryzae usando anlisis de imagen. En fermentaciones fed-
batch, realizados en dos diferentes niveles de potencia del impulsor (un 50% mayor que el otro),
encontraron que, contrariamente a la literatura (Makagiansar et al., 1993; Markl y Bronnen-
Meier, 1985; Smith et al., 1990; Johansen et al., 1998), el aumento de la potencia del impulsor tuvo
poco efecto en la concentracin de biomasa, morfologa fngica o fragmentacin de
comportamiento. Adems, matas no eran tan abundantes como ha sido descrito previamente
(Tucker et al., 1992; Olsvik y Kristiansen, 1992a,b), y la fragmentacin fue encontrado a dominar la
proliferacin fngica y ramificados. Al final de cada una de las fermentaciones estudiados, la
mayora de la biomasa fngica ( f 80%, medido por el rea proyectada) existi como pequeo,
escasamente ramificados, libre de elementos hifales. Usando un modelo de balance de poblacin
para analizar los datos morfolgicos, llegaron a la conclusin de que la fragmentacin es el proceso
dominante en los FED-batch fermentaciones. Los mismos investigadores en otro trabajo (Li et al.,
2002b) con el mismo organismo y bajo las mismas condiciones de cultivo, utiliz la teora
hidrodinmica turbulento para desarrollar una correlacin que permita que los datos
experimentales de la morfologa y la hidrodinmica para ser utilizado para estimar la relacin
(pseudo) fuerza tensil de hongos filamentosos. Ellos encontraron que la viscosidad cinemtica, v,
aument ms de 100 veces durante la fermentacin y, por consiguiente, Kolmo- goroff microescala
(k) tambin ha cambiado significativamente con el tiempo. En la zona de descarga del impulsor,
donde la fragmentacin hifales se cree que realmente tenga lugar, el valor de k se calcul en
700 - 3500 Am, que es grande en comparacin con el tamao tpico de hifas de hongos (100 - 300
AM). Segn ellos, esto implicaba que los remolinos en el subrango viscoso son responsables de la
fragmentacin. Adems, la resistencia a la traccin hifales fue encontrado a cambiar
significativamente en el transcurso de la fermentacin fngica (Li et al., 2002a). Los autores
sugirieron que los actuales modelos de fragmentacin y morfologa pueden ser mejoradas por la
contabilidad de las variaciones en la fuerza tensil hifales con tiempo (Li et al., 2002a).
Es obvio que el tamao del pellet es influenciada en gran medida por el nivel de agitacin aplicada
a la suspensin micelial. Agitacin fuertes resultados en grnulos ms pequeos y compactos. Es
generalmente reportados en la literatura (Joshi et al., 1996) que pellets se romper si son ms
grandes que un tamao crtico y el tamao crtico es una funcin de la intensidad de agitacin. Dos
mecanismos de cambiar el tamao de un pellet fueron reportados por Taguchi et al. (1968) y
Nielsen et al. (1995); uno de ellos es la disminucin del dimetro de chipping pellicles por fuera de
la superficie de los grnulos, y la otra es la ruptura de la estructura de plets a mayores cargas
hidrodinmicas. Sin embargo, el estudio de la CUI et al.
(1998a) con Como. awamori no admite el mecanismo anterior. Las fermentaciones realizadas en
reactores de tanque agitado de 2, 15 y 100-l volmenes de trabajo mostr que el pellet tamao
estaba influida por la cantidad de sustratos disponibles por pellet, la densidad de los pellets,
agitacin de intensidad y la duracin del perodo de crecimiento de pellets. Para la misma
densidad y la misma intensidad de agitacin, una mayor concentracin de azcar en la masa, un
menor nmero de pastillas y un largo perodo de crecimiento condujo a la formacin de un
precipitado ms grande que cuando la concentracin de azcar fue menor, con un mayor nmero
de pastillas estaban presentes y el periodo de crecimiento fue menor. El tamao de los pellets es
controlado ms por el crecimiento que por rotura.
Los cambios en la morfologa fngica asociada con las fuerzas mecnicas producidas por Rushton
turbinas han sido observados en muchos casos (Dion et al., 1954; Metz et al., 1981; Makagiansar
et al., 1993; Shamlou et al., 1994; Cui et al., 1998a), y a veces han sido modeladas (van Suijdam y
Metz, 1981; Nielsen, 1993; Shamlou et al., 1994). Un estudio particularmente interesante para
penicilina fermentaciones fue realizado por Smith et al.
(1990), como se mencion anteriormente en esta seccin. Sus datos para la tasa de produccin de
penicilina (unidades/ml h) de 10 y 100 l de volumen de trabajo fermentadores mostraron buena
calidad
3 de acuerdo con su propuesta de modelo de parmetro P/D TC en las diferentes escalas, aunque
esto no pudo ser probado en escalas de produccin. Makagiansar et al. (1993) mostraron que el
mismo parmetro puede utilizarse tambin como un parmetro para correlacionar cambios
morfolgicos, as como para aumentar la productividad a escalas de hasta 1000 litros. Adems de
la potencia de entrada particular impelente parmetros geomtricos, tales como el dimetro del
impulsor para el dimetro del vaso ratio (D/T), la altura de la hoja al dimetro del impulsor (ratio
W/D), nmero de hojas (n) y el ngulo de la hoja (a) tambin tienen que tenerse en cuenta con el
fin de correlacionar los daos mecnicos (Justen et al., 1996). Justen et al.
(1996) examin la influencia de las condiciones de agitacin en la morfologa del PE.
chrysogenum utilizando el impulsor de flujo radial (Rushton turbinas, compresores), impulsores de

flujo axial (agudo, hlice, blades Prochem Maxflow T) y contraflujo impulsores (Intermig). Para
caracterizar la intensidad de los daos causados por diferentes impulsores, el promedio total de la
longitud de los hifales libremente de forma dispersa y la media del rea proyectada para todas
formas incluyendo los agregados dispersos fueron medidos utilizando el anlisis de la imagen. A
1,4 l escala y una determinada P/VL (potencia absorbida por unidad de volumen de lquido en el
depsito), los cambios en la morfologa depende significativamente de la geometra del impulsor.
Los datos morfolgicos obtenidos con
diferentes geometras y distintos P/VL se correlacionaron los niveles sobre la base de igualdad de
velocidad punta y otras dos menos simple parmetros de mezcla. Uno se basa en la tasa de
disipacin de energa especfica en la regin del impulsor, mientras que la otra se basa en una
combinacin de la tasa de disipacin de energa especfica en el rodete barri el volumen y la
frecuencia de circulacin micelial a travs de ese volumen. La funcin derivada de este ltimo
concepto se denomina ''la disipacin de energa/circulacin'' funcin (EDC). Para probar la validez
de estas correlaciones ms amplia escala, se llevaron a cabo experimentos en tanques de mezcla
de 1,4, 20 y 180 l con una turbina Rushton y caldo forman un fed-batch de la fermentacin. La
funcin de EDC se encontr una correlacin razonable parmetro de dao hifales en toda esta
gama de escalas, mientras que la velocidad punta, P/VL y tasa de disipacin de energa especfica
en el rodete regin eran pobres. Trabajar ms por el mismo grupo (Amanullah et al., 2000),
demostraron que la funcin de EDC puede ser aplicado con xito para correlacionar la
fragmentacin micelial de especies tomadas de la cultura chemostat distinto del Pe., es decir,
como chrysogenum. oryzae, nuevamente utilizando distintas intensidades de agitacin y diferentes
paletas.
Aparte de la fragmentacin hifales, liberacin de material intracelular en el caldo de fermentacin,

debido a cambios en la estructura y la permeabilidad de la membrana, es tambin atribuido a las
fuerzas mecnicas. Tanaka (1976) informaron de los resultados de extensos experimentos con
suspensiones micelial de Mucor javanicus y Rhizopus javanicus. La agitacin se tradujo en la fuga
de sustancias intracelulares compuesto de ARN nucletidos relacionados, en su mayora mono-
nucletidos, con un mximo de absorcin a 260 nm. Este fenmeno no se acompaa por cualquier
fractura de mycelia. La composicin de los nucletidos es la misma independientemente de la
cultura material y la cultura de la edad. La tasa de fuga observada depende de la velocidad de
agitacin y en cualquier constante la velocidad del agitador, los nucletidos se filtr desde mycelia
en proporcin directa al tiempo de agitacin. Tanaka et al. (1975) estudiaron el efecto de la
agitacin en caldos micelial de 18 cepas de microorganismos filamentosos que incluye especies de
Mucor, Rhizopus, Aspergillus, Penicillium, Neurospora, Pircularia, Cephalosporium y Streptomyces.
Se comprob que la fuga de nucletidos en agitacin molecular bajo suspensiones micelial es un
fenmeno comn en los microorganismos filamentosos. La tasa de fuga se correlacionaban bien
con las condiciones de cultivo, edad de mycelia, viscosidad del caldo, nmero Reynolds, entrada de
alimentacin y la velocidad punta del impulsor. La fuga de los nucletidos afectado el crecimiento.
Y Mitard Riba (1988) tambin lleg a la conclusin de que la prdida de nucletidos fue
responsable de la baja tasa de crecimiento especfico bajo fuertes tensiones de cizallamiento.
Los fenmenos de adaptacin son observados en el crecimiento de las culturas. Durante el cultivo
de Como.
Nger S59, Ujcova et al. (1980) encontraron una menor fuga de material intracelular a altas
velocidades de agitacin. Es posible que la razn de esta observacin es sugerido por Musilcova et
al.
(1981). Alta conduce a una agitacin morfolgicamente compacto y fuerte el micelio y, adems, la
pared celular proporciona una mayor resistencia a la accin de hidrolasas. Este efecto fue
demostrado en experimentos con dos como. Nger mutantes midiendo la cantidad de protoplastos
liberados tras una accin de 2-h de caracol de los jugos gstricos. La cantidad de los protoplastos
liberados de hifas de Como. Nger fue menor despus del cultivo a mayor velocidad del rotor. Las
hifas cultivadas en la menor velocidad del rotor son los ms sensibles a las enzimas lticas.
La mayor parte de la literatura publicada sobre los efectos de la agitacin de hongos morfologa y
productividades de proceso se basa en experimentos realizados en biorreactores de tanque
agitado.
Comparacin de los datos obtenidos de diferentes tipos de reactores (p. ej., neumticamente
versus agitado mecnicamente o reactores agitados con diferentes geometras) es limitada. Desde
una comparacin directa no se puede hacer, a menudo es una tarea difcil para identificar un
parmetro que puede ser utilizado con xito para la caracterizacin de la situacin hidrodinmica
en biorreactores dismiles geomtricamente (Viesturs y Vanags, 1996). Trager et al. (1989)
compar las morfologas de Como. Nger crecen en un tanque agitado y un fermentador de
transporte areo. La formacin de grnulos finos predominaron en el transporte areo, donde el
esfuerzo cortante fue ms leve en comparacin con el depsito de agitacin, mientras que en el
depsito de agitacin, el microorganismo creci como mycelia sueltos. Esto contradice el estudio
de Gmez et al.
(1988), que obtuvo una buena formacin de pellets como. Nger en alta turbulencia logra
exponiendo la cultura en un reactor de tanque agitado a una mayor velocidad del agitador.
Schugerl et al.
(1998) y Gerlach et al. (1998) compararon los resultados obtenidos con distintos tipos de reactores
y tipos de cizalladura (agitar matraces, tanque agitado, transporte areo biorreactores) en estudios
con la xilanasa fermentacin por Como. awamori. Grande, flojo, hairy pastillas fueron formados en
reactores mixtos neumticamente (torre de puente areo loop), mientras que el pequeo y
compacto de pellets formada en agitar los frascos y tanque agitado reactores. En el primer caso de
los pellets, se mejor la transferencia de masa interna debido a la elevada flexibilidad de los
pellets. Teniendo en cuenta esta alta tasa de transferencia de masa, el suministro de nutrientes a
las clulas en el centro de pellet fue satisfactoria, mientras que el sustrato y concentraciones de
oxgeno disuelto en el medio lquido eran altas.
La influencia de las dos geometras de mezcla (a la misma escala) con diferentes distribuciones de
energa de flujo sobre el rendimiento de la fermentacin de cido giberlico y sobre la morfologa
del hongo Fusarium productores monilliforme fue investigado por Priede et al. (1995). Las
fermentaciones se realizaron mediante un sistema de mezcla de turbina (TMS) y un sistema de
mezcla de contraflujo (CMS), que fueron de alta y de baja potencia de varios sistemas de mezcla,
respectivamente. Morfologa de ambas libremente mycelia dispersos y matas se caracteriza por el
anlisis de la imagen. Una mayor proporcin de agrupada mycelia con acumulaciones de mayor
rea, permetro y la aspereza se observ en el TMS. Una correlacin entre la morfologa y la
productividad fue encontrado, y TMS favorecieron el desarrollo de ms productivos mycelia con
ms largas y delgadas hifas.
Papagianni et al. (1998) investigaron la relacin entre la morfologa de Como.
Nger y la produccin de cido ctrico en dos sistemas de reactores con distintas configuraciones,
un bucle tubular y un biorreactor tanque agitado convencionales, que operan con volmenes de 6
y 8 l, respectivamente. Morfologa se caracteriza por el anlisis de la imagen. En cada sistema,
morfologa, caracterizada por el parmetro P (media de cmulos) perimetral convexa, y la
produccin de cido ctrico eran dependientes de agitacin y estrechamente vinculados. Aumento
de la agitacin caus una reduccin de tamao y se agrupan los resultados de ambos reactores,
demostraron que la P no debera exceder un valor de umbral a fin de lograr una mayor
productividad. Los resultados obtenidos de los dos reactores estaban de acuerdo, tanto cualitativa
como cuantitativamente. Reducir las condiciones de mezcla fundamentalmente diferente de los
dos sistemas para el orden de la relacin adimensional tiempo de mezcla (tm), los resultados
mostraron que el bucle simularon el tanque agitado. Adems, las relaciones vlidas para un
sistema descrito con precisin los resultados obtenidos en el otro sistema, demostrando la validez
de la relacin entre la morfologa y la productividad para la fermentacin especial,
independientemente del tipo de reactor.
10. Morfologa fngica y la reologa de los caldos de fermentacin

el comportamiento del flujo de los caldos de fermentacin con microorganismos filamentosos
difiere considerablemente de la de la mayora de los cultivos bacterianos, debido a la compleja
morfologa de estos microorganismos. Varios estudios han demostrado que la fermentacin caldos
que contienen mayor concentracin de microorganismos filamentosos son altamente viscoso y se
caracterizan por la velocidad de cizallamiento de viscosidades dependientes (Charles, 1978; Ruess
et al., 1982; Ju et al., 1991; Olsvik y Kristiansen, 1992a) y por un rendimiento estrs (Olsvik y
Kristiansen, 1992b; Berovic et al., 1993). Caldo de fermentacin reologia afecta enormemente a los
fenmenos de transporte en el bioreactor, que, a su vez, tienen una fuerte influencia en la eficacia
y la productividad de todo el proceso. Por lo tanto, entender el comportamiento del flujo de caldo
es necesario para desarrollar el diseo de estrategias que ayuden a superar las posibles
limitaciones de peso, impulso y transferencia de calor en los fermentadores.
Aunque peleteado caldos de fermentacin puede ser newtonianos y de baja viscosidad, pueden
surgir problemas con el transporte de los nutrientes dentro de los pellets, reduciendo as la
productividad. La dispersin de las formas, por tanto, predominan en la mayora de las
fermentaciones industriales (Riley et al., 2000). Pequeos incrementos en la concentracin de
biomasa en fermentaciones tales pueden causar grandes aumentos en caldo viscosidad. Incluso en
las primeras etapas de muchos hongos de fermentacin el caldo puede exhibir varias
caractersticas no-Newtonianas, posiblemente incluyendo un rendimiento- el estrs. Las
propiedades reolgicas de una fermentacin filamentosas se consideran normalmente ser
determinado por la concentracin de biomasa y la forma morfolgica de los mycelia (Metz et al.,
1979; Charles, 1978), que se encuentra parcialmente afectada por las condiciones de
funcionamiento en el fermentador (Metz et al., 1979; van Suijdam y Metz, 1981). Para controlar el
rendimiento de fermentacin, es necesario saber cmo estn influyendo en las condiciones de
funcionamiento las propiedades reolgicas del caldo de fermentacin filamentosas. Como estos
dependen de la morfologa del hongo, la relacin entre la reologa y morfologa es vitalmente
importante.
Las correlaciones entre los parmetros que describen los parmetros reolgicos de caldo y su
concentracin de biomasa han sido sugeridos por muchos investigadores (Deindoerfer y Gaden,
1955; Carilli et al., 1961; Solomons y Weston, 1961; Metz et al., 1979). Por la dispersin de las
formas de crecimiento, se ha sugerido que (en el caso de la ley de potencia tiene el caldo-como
comportamiento) el ndice de concordancia vara con la concentracin de biomasa, normalmente a
la potencia de 0.3 - 3.3 (Fatile, 1985; Allen y Robinson, 1990; Kim y Yoo, 1992; Olsvik et al., 1993;
Tucker y Thomas, 1993; Olsvik y Kristiansen, 1994; Tucker, 1994). Comparativamente menos son los
informes sobre las correlaciones entre los parmetros morfolgicos y caldo de propiedades
reolgicas, y esto es debido a la gran variabilidad que existe en la morfologa de mycelia crecido en
culturas sumergidas (Metz et al., 1981), lo que hace difcil su caracterizacin, y tambin debido a la
falta, hasta hace poco, de los instrumentos apropiados para hacer mediciones morfolgicas no slo
sobre las hifas individuales sino tambin agregados micelial. Usando anlisis de imagen, Paul y
Thomas (1998) mostr que para muchos Pe. chrysogenum cepas, el micelio cmulos pueden dar
cuenta de >90% (en trminos de porcentaje de rea proyectada, que se utiliza como estimacin
de amontonarse en el tamao) de la biomasa micelial dentro de los caldos de fermentacin y esto
tambin es cierto para otros hongos (Papagianni, 1995). Por lo tanto, se sugiri que la reologa de
los caldos de fermentacin fngica deben estar relacionados a amontonarse propiedades en lugar
de a la morfologa de
pequeas cantidades de Dispersados libremente mycelia (Tucker y Thomas, 1993). Estudios

cuantitativos sobre la morfologa y la reologa, incluir las obras de Roels et al. (1974), Metz et al.
(1979), Fatile (1985), Kim y Yoo (1992), Liu y Yu (1993), Olsvik et al. (1993), Tucker y Thomas (1993),
Olsvik y Kristiansen (1994), Tucker (1994), Mohseni y Allen (1995), Johansen et al. (1998), Bocking
et al. (1999), Riley et al. (2000), Sinha et al.
(2001a,b) y Pollard et al. (2002).
Tucker y Thomas (1993) investigaron las distintas influencias de la biomasa concentracin y la
morfologa micelial en caldo reologia utilizando una cepa industrial de Pe.
chrysogenum y sugiri la correlacin
b v RP constante un cm roughness compactness
donde RP es el parmetro reolgico bajo examen, el CM es la concentracin de biomasa y a, b y c

son los exponentes de cada parmetro reolgico. La compacidad y la aspereza se amontonen
propiedades que pueden ser cuantitativamente se caracteriza por el anlisis de la imagen.
Las correlaciones anteriores eran bastante xito en predecir la reologa de caldo de fermentacin
por lotes. Tucker (1994), ms tarde estableci que era esencialmente constante a lo largo de una
fermentacin por lotes. Olsvik et al. (1993) utiliz el mtodo de anlisis de imagen de Tucker et al.
(1992) sobre Como. Nger caldos de 7-l quimiostatos con diferentes tasas de dilucin y tensiones
de oxgeno disuelto. Cambios en las propiedades reolgicas de los caldos (medidos on-line),
representado por el ndice de concordancia de la ley de potencia, dependa de la concentracin de
biomasa y se agrupan aspereza. Como este ltimo aument, lo hizo tambin el ndice de
concordancia. Posteriormente, Kristiansen y Olsvik (1993) propone una correlacin similar para el
lote y fermentaciones fed-batch de Como. Nger.
Mohseni y Allen (1995) utiliza el anlisis de imagen para examinar la influencia de la concentracin
de biomasa y la morfologa de las partculas sobre la obtencin de propiedades de caldos
filamentosas como. Nger. Se encontraron correlaciones con el libremente de la biomasa de forma
dispersa, la concentracin media longitud adimensional, y la media de crecimiento hifales unidad.
Los estudios por Mohseni y Allen (1995), Olsvik et al. (1993), Kristiansen y Olsvik (1993), Tucker et
al. Y Tucker (1992) y Thomas (1993) parecen coincidir en que se aglutinan morfologa y en
particular se aglutinan aspereza es importante en la determinacin de la reologa caldo de hongos.
Sin embargo, en todos los casos, los datos son limitados, y ninguna indicacin fue hecho sobre la
significacin estadstica de las predicciones realizadas mediante el parmetro reolgico
correlaciones. Una gama mucho ms amplia de los datos presentados por Riley et al.
(2000) a partir de la cual otra correlacin para el ndice de concordancia se propuso, con el anlisis
de errores:
3 3 K m C2 D5 10 10 21
donde k es el ndice de concordancia, el CM es la concentracin de biomasa y d es la media

mxima dimensin.
Johansen et al. (1998) estudi la relacin entre como. awamori morfologa y produccin de
protenas heterlogas durante una serie de fermentaciones con un lote fase seguido de un FED-
batch fase. Velocidad de agitacin y concentracin del inculo se utilizaron como variables
controladas para generar morfologas diferentes hongos en 20 reactores tanque agitado l.
un triple aumento en longitud hifales aument la viscosidad aparente del caldo por un factor de 7.
Las diferencias morfolgicas observadas slo ha tenido un efecto limitado en la formacin del
producto, lo que sugiere que las caractersticas estructurales tales como longitud hifales y nmero
de puntas eran de menos importancia para la formacin de producto. El principal efecto de la
morfologa del producto formacin fue debido a su viscosidad.
11. Caracterizacin de la morfologa en fermentaciones de hongos
se han hecho muchos intentos para relacionar la morfologa de los hongos filamentosos y
produccin de metabolitos. Aunque la morfologa de estos organismos refleja su fisiologa durante
la fermentacin y est estrechamente vinculado con el desempeo del proceso, poco los trabajos
cuantitativos para evaluar su importancia se llev a cabo hasta 1970. Las investigaciones iniciales
sobre la morfologa micelial se bas en mediciones manuales realizadas bajo un microscopio, ya
sea por observacin directa o fotografa. Posteriormente, se utilizaron tablas de digitalizacin
simple por Metz et al. (1981) y van Suijdam y Metz (1981).
Fotografas de partculas micelial fueron hechas a travs de un microscopio y se proyectan sobre

un cuadro de digitalizacin electrnica conectada a un equipo. El cuadro de digitalizacin
determinan las coordenadas x e y de un punto tocado por un cursor. Parmetros morfolgicos
como principal hifales, longitud total longitud hifales y nmero de puntas fueron calculados. El
mtodo fue intensiva en mano de obra, consume mucho tiempo y no del todo precisa o exacta.
Tambin era difcil de automatizar.
Para cuantificar la morfologa durante la fermentacin, un mtodo automatizado para analizar un

nmero significativo de mycelia de cada muestra es deseable. En 1988, Adams y Thomas present
un mtodo para mediciones morfolgicas basadas en anlisis de imgenes (Adams y Thomas,
1988). El mtodo era ms rpido y ms exacto que las mesas de digitalizacin aunque una
considerable intervencin manual es todava necesaria. Es evidente que todo el potencial del
anlisis de imgenes slo podra lograrse mediante la automatizacin. La potencia del anlisis de
imgenes consiste en extraer informacin cuantitativa a partir de una imagen en una forma
automatizada y reproducibles. Muchas aplicaciones de anlisis de imgenes en estudios de la
morfologa y la diferenciacin han aparecido desde el primer trabajo de Adams y Thomas (1988). El
principio de las etapas de anlisis de la imagen son la captura de imgenes y la mejora, la
segmentacin, deteccin de objetos, medicin y anlisis (Paul y Thomas, 1998). En la captura de la
imagen, una cmara de televisin est montada sobre un microscopio y la imagen de la cmara se
digitaliza, a travs de un digitalizador, tanto en el espacio y el tono produciendo una matriz de
elementos de imagen o pxeles.
En la segmentacin, la regin de inters se separa del fondo, es decir, todos los tonos por debajo
de un nivel seleccionado pueda ser tratada como negro y todos encima como blanco. Deteccin de
objeto es un paso de reduccin de datos que produce una descripcin del objeto de inters para
medir- ciones y anlisis. Las mediciones repetitivas pueden automatizarse y lo hizo de forma ms
precisa y reproducible.
En 1990, Packer y Thomas present un software para un sistema totalmente automatizado

utilizando un analizador de imgenes de propsito general (empaquetador y Thomas, 1990). El
mtodo fue probado en Streptomyces clavuligerus y pe. chrysogenum muestras. La automatizacin
y la velocidad del proceso hecho prctico medir las distribuciones de los parmetros hifales dentro
de una muestra. Tambin revel que la fermentacin filamentosas caldos contienen cantidades
significativas
de material agregado (cmulos)-una observacin no aparente usando los mtodos anteriores.
Debido a la prevalencia de la aglutinacin en fermentaciones filamentosas, y el hecho de que en

matas mycelia no pueden aislarse para mediciones independientes, Tucker et al. (1992) desarroll
un mtodo que podra dar mediciones importantes sobre montculos. Informacin detallada como
rea proyectada (racimos) de rea, permetro, compacidad y dureza, circularidad, as como el
grado de ramificacin fue presentado por San clavuli cuantitativamente- gerus y pe. chrysogenum.
El mtodo de Tucker et al. (1992) fue utilizada por Amanullah et al. (2001) para describir la
dinmica de agregacin micelial en lotes y cultivos de chemostat como. oryzae.
Paul et al. (1993) desarroll un mtodo de anlisis automtico de la imagen para poner a prueba la
viabilidad y caracterizar la germinacin de las esporas fngicas en procesos sumergidas. Los
procesos de inflamacin y germinacin de esporas constituyen una parte importante de la fase lag
y el subsiguiente cultivo morfologa y la productividad puede ser influenciado grandemente por la
concentracin inicial y el estado de las esporas. El mtodo de Paul et al. (1993) ofrece una serie de
ventajas sobre el photomicroscopy o recuento de colonias. Es rpida, ms precisa y puede
discriminar entre no germinaron y esporas germinadas. En particular, esto puede utilizarse en
esporas germinando en medio de fermentacin sumergida real. Las variaciones estructurales
durante la germinacin, por ejemplo, la inflamacin, la formacin del tubo germinal y elongacin
fueron medidos en trminos de su distribucin de Spore, el volumen y la longitud del tubo
germinal y volumen.
La complejidad estructural de los micelios cultivados en forma dispersa en procesos sumergidos

fue cuantificado por primera vez por Paul et al. (1992) utilizando un mtodo de anlisis de
imgenes totalmente automtica. El mtodo es capaz de diferenciar entre clulas completamente
llenos de materiales, clulas vacuolated citoplsmico y degenerado o celdas vacas.
Las proporciones de estos tres regiones fueron cuantificados. La vacuolizacin tambin fue
expresada en trminos de la distribucin en volumen y forma (circularidad) de vacuolas y celdas
vacas.
El mtodo fue probado por vigilar estos parmetros a lo largo de una escala de laboratorio
alimentados- penicilina por lotes de la fermentacin. Ms tarde, un mtodo simple para la
diferenciacin de Pe.
chrysogenum fue desarrollado por el mismo grupo (Paul et al., 1994b). El resultado de la
informacin cuantitativa sobre la biomasa estructura permite un potente modelo estructurado
para la fermentacin de penicilina para ser concebido (Paul y Thomas, 1996a,b). Estas tcnicas de
anlisis de imagen permiten la medicin rpida y precisa de la simple diferenciacin celular de
hongos y representan una valiosa herramienta en los estudios de los vnculos entre la
diferenciacin y la produccin de metabolitos, y podra ser utilizada en el control de procesos de
fermentacin fngica.
Hay una serie de mtodos de anlisis de imgenes disponibles para caracterizar de pellas de
fermentaciones sumergidas. Reichl et al. (1992) utilizando un sistema de anlisis de imagen se
describe la morfologa de plets durante el crecimiento de San tendae por numerosas funciones,
tales como las distribuciones de frecuencia media, tamao, contenido de pellets y la forma de
pellets. El factor de forma fue la primera propuesta para la discriminacin cualitativa entre los
pelets. Durant et al. (1994b) discrimina entre zonas precipitado enjuagando una mancha que hizo
el anlisis de la imagen sea mucho ms fcil. El mtodo se perfeccion mediante el procesamiento
de imgenes en color (Durant et al.
1994a). Pichon et al. (1993) y Cox y Thomas (1992) proponen mtodos de anlisis de imgenes
para caracterizar pellets, basado en la presencia de un ncleo central. Cox y Thomas (1992)
clasifican los pellets en suave y peludo tipos mediante el anlisis automtico de la imagen.
aplicaciones de anlisis de imagen en fermentaciones de hongos han sido examinadas

recientemente por Paul y Thomas (1998) y Thomas y Paul (1996). Mtodos de anlisis de imagen
han encontrado aplicacin en estudios de crecimiento temprano de hongos filamentosos,
desarrollo morfolgico durante fermentaciones sumergidas, por ejemplo, la dinmica de
agregacin, vacuolizacin, la fragmentacin, la autolisis, la fisiologa y la reologa de estudios. La
mayora de estas aplicaciones han sido revisados en este trabajo. Otras aplicaciones incluyen la
estimacin del volumen celular micelial y biomasa, as como la conexin entre la superficie y
morfologas sumergidas, el screening de morfologas favorable, la seleccin de los mutantes y la
cultura del mantenimiento.
Nestaas y Wang (1983) desarroll una sonda y filtracin a travs de un anlisis terico del
comportamiento de la filtracin mycelia fueron capaces de estimar el volumen de clulas micelial.
Tambin, a partir de la torta de filtro, el volumen total de la masa de clula podra ser estimado.
Sin embargo, la sonda de filtracin no proporcionan una medicin directa del volumen celular y
morfologa. La metodologa diseada por Packer et al. (1992), usando anlisis de imagen para la
cuantificacin directa de diferenciacin micelial y medicin de resultados de volumen celular
adems en una estimacin de la biomasa en la fermentacin.
La conexin entre la superficie y morfologas sumergidas ha sido investigado por Larralde-Corona

et al. (1994). Estos autores desarrollado y probado un modelo para correlacionar datos
morfomtricos de Gibberella fujikuroi cultivados en medios slidos con observado tasas de
crecimiento especfico en fermentadores agitados. Sin embargo, la conexin entre la superficie y
morfologas sumergidas an es poco conocido, aunque podra ser explotado para el screening de
morfologas favorable, la seleccin de los mutantes y la cultura del mantenimiento. Un problema
importante en la seleccin de mutantes mejorados de hongos que producen las enzimas es tener
in situ y tcnicas no destructivas para evaluar sus fenotipos que puede estar relacionada con su
capacidad para producir y excretar enzimas. Carlsen et al. (1994, 1995) han utilizado el anlisis de
imagen de culturas sumergidas de Como. oryzae para relacionar su morfologa a un- amilasa la
produccin. Minjares-Carranco et al. (1997) demostr que el anlisis de la imagen de las colonias
de algunos como cepas. Nger ayud a relacionar sus caractersticas morfolgicas (sporu- bianos y
tasas de extensin apical) para las actividades de pectinasa caractersticas de produccin. Loera y
Viniegra- Gonzlez (1998) utiliza el anlisis de imagen para clasificar (sobre la base de la tasa de
crecimiento especfico) actividades de pectinasa un exceso de produccin de mutantes como.
Nger en medios de cultivo selectivos. Tal pheno- tpica clasificacin puede estar relacionada con
los niveles de produccin de enzimas, ayudando a relacionar el efecto de ciertas mutaciones en
diferentes tipos de procesos fisiolgicos. Los autores sugieren que su enfoque puede ayudar a
mejorar los procedimientos de seleccin para la enzima en las cepas productoras especialmente
adaptadas a los diferentes tipos de medios de cultivo con diferentes valores de actividad de agua,
por ejemplo, memoria de estado slido o fermentaciones sumergidas.
El anlisis de la imagen puede ser combinada con diferentes tcnicas de tincin en fisiologa y
diferenciacin estudios de hongos filamentosos a fin de visualizar las organelas o la pared celular.
Manchas fluorescentes junto con el anlisis de la imagen han sido utilizados por Vanhoutte et al.
(1995), Agger et al. (1998) y Hamanaka et al. (2001). Vanhoutte et al. (1995) present un mtodo
de anlisis de imagen cuantitativo para caracterizar la fisiologa del PE. chrysogenum. El mtodo
que se basa en un procedimiento de tincin diferencial mostraron y cuantificados de seis estados
fisiolgicos: cultivo de material (zona 1), tres estados diferenciados caracterizados por un aumento
de la granulacin (zonas 2, 3, 4), un estado altamente vacuolized (zona 5) y segmentos muertos por
haber perdido su citoplasma (zona 6). El software de anlisis de imgenes,
con versiones escritas para imgenes en color y monocromo, consisti de una mscara binaria
semiautomtico de computacin totalmente el paso y una segmentacin automtica paso basado
en una clasificacin difusa. El uso de un nuevo procedimiento de tincin y la multa la
discriminacin de los estados fisiolgicos por anlisis de imagen color arrojar una nueva luz sobre
el crecimiento y la diferenciacin de Pe. chrysogenum.
Agger et al. (1998) utiliza microscopa de fluorescencia y el anlisis de imgenes automatizado en

los estudios de crecimiento y formacin de producto como. oryzae. Las organelas dentro de las
hifas as como la pared celular estaban manchadas. La relacin entre las zonas proyectadas de las
organelas y todo el elemento hifales fue llevado a ser proporcional a la fraccin de clulas activas
en un modelo estructurado morfolgicamente describiendo el crecimiento y formacin de
producto en fed-batch y chemostat culturas. Cuando se aplica a la Fed-batch y chemostat
experimentos, el doble mtodo de tincin confirm la estructura morfolgica bsica del modelo.
Microscopa de fluorescencia y el anlisis de imgenes tridimensionales fueron usados por
Hamanaka et al. (2001) para el estudio de la distribucin de productos intracelulares dentro de los
grnulos del productor de cido araquidnico Mo. alpina. La combinacin de estos mtodos
permite la visualizacin de la hora curso de pellet, morfologa y demostr que el lpido fue
producida en el borde de los pellets, una zona donde la densidad micelial fue mayor en
comparacin con las otras regiones.
Caracterizacin morfolgica de microorganismos filamentosos es ms comnmente realizadas

mediante el anlisis de imgenes. Otros mtodos de cuantificacin morfolgica tambin han sido
empleados. Liu y Yu (1993) utiliz la reologa de filtracin y mtodos para caracterizar la morfologa
del PE. chrysogenum, mientras que la citometra de flujo tambin pueden ser utilizados.
Gerlach et al. (1998) utilizan redes neuronales y anlisis de cluster en los estudios de morfologa
como awamori. Anlisis de la imagen es generalmente limitada por tiempos de procesamiento
relativamente largo, el grado de intervencin del operador y la necesidad de off-line preparacin
de muestras y anlisis.
Sin embargo, acontecimientos recientes permiten el uso del anlisis de imgenes on-line.
Christiansen et al.
(1999) estudi la cintica de crecimiento de solo como. oryzae hifas por anlisis de imgenes on-
line mediante un flujo a travs de la tcnica de cell. Treskatis et al. (1997) trabaj en la
caracterizacin morfolgica de los microorganismos filamentosos en culturas sumergidas por on-
line el anlisis digital de imgenes y reconocimiento de patrones. Bittner et al. (1998) utiliza la
microscopia in situ para la determinacin en lnea de biomasa.
12. Modelizacin del crecimiento y la formacin de productos de fermentacin fngica
ha habido muchos tipos diferentes de los modelos cinticos para microorgan filamentosas- ismos
en la literatura (Nielsen, 1992; y el Krabben, 1998; Nielsen, 1998; Bellgardt Wayman et al., 1999).
Los modelos no estructurados utilizar un nico componente de biomasa para describir la
concentracin de biomasa total en condiciones de estado estable. Ellos son deterministas en su
enfoque y realizar mal significativamente cuando se aplican a diferentes condiciones de
funcionamiento.
Modelos estructurados tambin son deterministas, pero son una mejora de los modelos no
estructurados, ya que pueden usar ms de un conjunto de ecuaciones que representan distintas
fases de crecimiento y produccin. Tambin es posible representar la biomasa como ms de un
componente para describir el estado fisiolgico de los microorganismos durante la fermentacin.
Ambos tipos de modelo implica la tasa de crecimiento especfico (l) como una funcin de la
concentracin de sustrato

(S), el producto (P) y la biomasa. Los modelos mecanicistas describir la conversin de sustratos en
productos aplicando las concentraciones conocidas de metabolitos y propiedades de todas las
enzimas de la secuencia de reaccin. Dichos modelos estn estrechamente relacionados con los
modelos utilizados para el anlisis de control metablico, donde la actividad de enzimas
individuales est relacionada con su efecto sobre la velocidad de reaccin global. Este proceso se
ha llevado a cabo para la produccin de cido ctrico a travs de la va mediante gliclisis por As.
Nger por Torres (1994a,b) y tuvo xito en demostrar que las actividades de las enzimas mediante
gliclisis tienen poca influencia en la tasa de formacin de producto en ese sistema.
Varios modelos estructurados para hongos de fermentacin son disponibles que considere hifales,
diferenciacin y crecimiento de la produccin de metabolitos. Modelos estructurados para
Aspergillus el crecimiento y la produccin de cido ctrico han sido presentados por Kristiansen y
Sinclair (1979), Roh et al. (1981), Ho et al. (1994) y Torres et al. (1996). En la labor de Roh et al.
(1981), el crecimiento celular y la formacin de producto se subdivide en varias fases, cada una de
ellas se describe mediante un simple modelo determinista. Formacin de producto estaba
relacionado con la tasa de crecimiento por una modificacin Luedeking - Piret ecuacin. Aunque
las mismas descripciones son aplicables tanto para el crecimiento como para la formacin de
cido, la cintica de formacin de cido usualmente diferenciada de la cintica de crecimiento por
un trmino que representa el tiempo de posposicin, que tambin es conocido como el tiempo de
maduracin, cuando la cultura ha tomado todos los iones de amonio pero an no producen cido
ctrico. El modelo se asemejan a los datos de la produccin de cido ctrico. Ho et al. (1994)
desarroll su modelo de una manera similar a la de Roh et al.
(1981) Al graficar los resultados de las fermentaciones y la identificacin de fases donde las
expresiones simples podra utilizarse para describir el amonio y la captacin de la glucosa, la
disminucin del pH y la acumulacin de biomasa y cido ctrico. El modelo difiere de la del Roh et
al.
(1981) porque las relaciones lineales simples fueron utilizados para describir todas las
caractersticas con respecto a un factor limitante por fase. Todas las etapas vinculadas entre s para
lograr un grado de superposicin en el lote. Se utilizaron cuatro diferentes ecuaciones para la tasa
de crecimiento con diferentes valores de la mxima tasa de crecimiento especfico. Es posible que
ms de una expresin sea vlida en cualquier momento, pero era poco probable que una situacin
se producira cuando todas las expresiones son vlidas. El modelo es bastante complejo, pero
todava era un modelo determinista, y no poda simular con precisin los resultados de otras
condiciones del lote.
El crecimiento y la produccin de metabolitos de hongos filamentosos estn asociadas con la

compleja y no bien entendido de los procesos. La estructura multicelular del micelio, la
heterogeneidad morfolgica y la heterogeneidad en la fisiologa y diferenciacin a lo largo de la
longitud de las hifas y durante la fermentacin hace difcil construir modelos matemticos de
fermentacin fngica a utilizar para simulaciones predictivas o control de procesos. Para tener en
cuenta estas variaciones en el estado de la biomasa, diferenciacin incluyendo caractersticas
estructurales deberan incorporarse en los modelos de crecimiento y produccin de metabolitos.
En estos modelos, las caractersticas estructurales, idealmente, deberan estar relacionados con los
estados fisiolgicos subyacentes de las hifas y, consecuentemente, a la produccin de metabolitos
(Paul y Thomas, 1996a,b).
La labor de Megee et al. (1970) fue un criterio fundamental en el que las hifas de Como. awamori
se dividieron en cinco estados de diferenciacin, asumiendo diferentes actividades y la sntesis de
los metabolitos de los compartimentos hifales. En fermentacin sumergida, se supona que el
crecimiento activo de hifas ocurrieron en las puntas. Esta regin apical fue asumida para dar lugar
a una segunda regin caracterizada por la produccin de un crecimiento-
producto asociado. Las otras tres regiones se han clasificado sobre la base de tres diferentes tipos
de no-crecimiento-productos asociados. El modelo implic un gran nmero de parmetros que son
difciles de validar experimentalmente. Ms tarde, un modelo estructurado simplificados pero
similar fue desarrollado por Nestaas y Wang (1983) para la fermentacin de penicilina. Las hifas se
divide en tres regiones: creciendo activamente consejos, no regiones productoras y degenerado
regiones. Este modelo tambin fue difcil de aplicar a los procesos reales y requieren un conjunto
de ecuaciones para la fase de crecimiento y otro conjunto para la produccin. Un conjunto
unificado de ecuaciones para toda la fermentacin se utiliza por Cagney et al. (1984). Sin embargo,
no fue posible verificar el modelo debido a la falta de datos experimentales.
Nielsen (1992) describieron un modelo estructurado para el crecimiento de microorganismos

filamentosos. El mecanismo de diferenciacin considerado en el modelo es similar al descrito por
Megee et al. (1970). Las hifas se divide en tres regiones: subapical, apical y hifales. El modelo
describe los mecanismos de crecimiento de microorganismos filamentosos, es decir, la punta de
extensin y ramificacin, y tambin considera la fragmentacin en la estimacin de la morfologa
de los elementos hifales individuales en un cultivo sumergido. El modelo fue la combinacin de un
modelo estructurado morfolgicamente simple describiendo la cintica de crecimiento de los
distintos elementos hifales y un modelo de poblacin, en el que se describen las propiedades de
los elementos hifales en la cultura. Las dos partes se describen por separado antes de que stas se
combinan en el modelo completo.
Comparacin del modelo completo con los datos experimentales de diferentes especies de
microorganismos filamentosos (G. candidum, S. hygroscopicus y pe. chysogenum) ilustra el poder
predictivo del modelo completo. Una cierta desventaja del modelo era que ningn mecanismo fue
considerado para la formacin de producto como consecuencia de la diferenciacin.
Paul y Thomas (1996a,b) reconsiderar el enfoque de modelado estructurado propuesto

originalmente por Megee et al. (1970), y ms tarde simplificada por Cagney et al. (1984) para la
fermentacin de penicilina. La diferenciacin de las hifas se incorpor en un modelo sobre la base
de informacin cuantitativa obtenida mediante el anlisis de imgenes de las mediciones. En este
modelo, la vacuola formacin fue considerado como un importante proceso fisiolgico durante el
crecimiento y el envejecimiento de las hifas. El modelo divide la biomasa en tres regiones distintas
de acuerdo a las actividades y la estructura de los compartimientos: hifales creciendo activamente
las propinas, los no-crecientes regiones productoras de penicilina y el degenerado o inactivas
metablicamente regiones que estaban sujetos a la fragmentacin y la autolisis. Un enfoque
mecanicista fue llevado a dar descripciones cuantitativas de diferenciacin y degeneracin como
consecuencia de la vacuolizacin. El modelo supone que apareci vacuolas recin generado por
diferenciacin de regiones sanas, crecieron en tamao, con limitacin de substrato disponible y
finalmente dio lugar a compartimentos hifales vaca. La produccin de penicilina fue relacionada
con las cantidades de la no-regiones productoras de las hifas. El modelo utilizado para el xito de
las predicciones de los montos de las cuatro regiones hifales y la tasa de produccin de penicilina
en fed-batch de fermentaciones industriales Pe. chrysogenum cepa bajo diferentes regmenes de
alimentacin de glucosa. Cuando la glucosa se encendi la tasa de alimentacin entre un alto y un
valor bajo el modelo podra predecir satisfactoriamente los cambios dinmicos de la diferenciacin
y la penicilina resultante de la produccin causada por las variaciones en las condiciones de
nutrientes. El uso de anlisis de imagen para caracterizar la diferenciacin como base para
estructurar la modelizacin de los
246 M. Papagianni / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259 de la
fermentacin de penicilina parece ser un mtodo poderoso que tiene un gran potencial para su
uso en la simulacin de procesos y el control de las fermentaciones de antibiticos.
13. Uso comercial de datos morfolgicos
La cantidad de investigaciones realizadas sobre la morfologa de los hongos filamentosos, ha sido

impresionante. Sin embargo, la aplicacin de estos resultados en la industria de fermentacin es
limitado. Aunque existen modelos altamente estructurado para la morfognesis y la relacin entre
la morfologa y la productividad, la aplicacin de estos modelos en la industria parece ser bastante
limitado por razones prcticas. La presin de la economa y el tiempo de fermentacin en la
industria no deje de perder el tiempo con prcticas. Esto significa que muy a menudo la morfologa
problemas son solucionados por mtodos empricos basados en una amplia experiencia. Para
ampliamente los modelos de estimacin de parmetros estructurados, sigue siendo un gran
problema, ya que es a menudo ms tiempo que la instalacin del mismo modelo.
Respecto de las aplicaciones industriales, el efecto de subir la escala de los valores de los
parmetros es a menudo descuidado. Morfologa fngica es muy dependiente de las condiciones
ambientales, que son de por s muy a menudo depende de la escala. La mayora de parmetros
han sido obtenidos a partir de experimentos a pequea escala, porque los datos de las
operaciones a escala de produccin no estn generalmente disponibles para su publicacin. Otros
factores relacionados con el aumento de la escala y capaces de influir en el comportamiento de un
cultivo de hongos son los tipos de sustratos (sustrato puede ser bastante diferente en escala de
produccin frente a los utilizados en escala de laboratorio) y el nmero de pasos de inoculacin. El
ltimo aumento de uno en la escala de laboratorio a aproximadamente cuatro a escala de
produccin.
Los modelos y prcticas actuales se basan casi exclusivamente en la influencia de factores

ambientales sobre la morfologa. Cada vez ms, la contribucin de los fisilogos puro al
conocimiento de la morfologa est creciendo constantemente a medida que ms detalles del
transporte y la cintica de los procesos involucrados en el desarrollo de la morfologa sea
conocido. Lo que es lamentable es que los modelos mecanicistas estructurado, basado en
reacciones intracelulares a nivel molecular, estn ausentes y la informacin sobre la gentica que
rigen el desarrollo de la morfologa es limitado. La manipulacin de la morfologa, a travs de
protocolos de inoculacin, parmetros de proceso y el cribado de las culturas necesitan ser
invocado hasta el conocimiento de la morfologa gentica bsica se ha desarrollado
suficientemente.
14. Observaciones finales El
hongo micelial son ampliamente usados para la produccin de antibiticos, enzimas y muchos
otros metabolitos tiles. Cada vez ms, los hongos son utilizados para producir protenas
recombinantes y otros compuestos. En muchos casos, la morfologa fngica directa o
indirectamente influye en la productividad de la fermentacin fngica. Un gran nmero de factores
que contribuyen al desarrollo de un determinado formulario morfolgicas en fermentacin
sumergida y es difcil deducir inequvoco de las relaciones generales entre las variables de proceso,
producto, formacin de hongos y la morfologa. Demasiados parmetros influyen en estas
relaciones y el papel de muchos de ellos es todava no se comprenden totalmente. Sin embargo,
M. Papagianni / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189 259 247
El uso relativamente reciente del anlisis de imgenes ha demostrado ser un valioso instrumento
para caracterizar la compleja morfologa micelial, los estados fisiolgicos, y sus interacciones con
fer- cacin condiciones. Informacin cuantitativa de diferenciacin micelial puede usarse para
construir modelos estructurados y valor predictivo de esta comprensin debe conducir a mejoras
en el diseo y operacin de fermentaciones micelial. Aunque los modelos pueden ayudar a hacer
un mejor uso de los datos experimentales disponibles, es absolutamente necesario para
desarrollar mejores y nuevas tcnicas experimentales y los mtodos de medicin para comprender
fenmenos tales como la rotura de hifas y su relacin con el estrs mecnico. Esto permitira seguir
avanzando hacia una mejor comprensin de los procesos de produccin de hongos filamentosos y
ayudar a establecer sistemas de control de proceso en una verdadera base fisiolgica.
Aunque cualquier tipo morfolgico es el resultado del genotipo de los animales y el medio
ambiente, los modelos y prcticas actuales se basan casi exclusivamente en la influencia de los
factores ambientales sobre la morfologa. Poco conocimiento disponible sobre el efecto de los
genes en la morfologa. Esto hace ms difcil controlar la morfologa, porque los factores
ambientales varan considerablemente durante la produccin y con la escala de operacin. La
gentica de la morfognesis puede ser muy complicado y, como Kossen (2000) seal, hay pocas
esperanzas de que su dilucidacin en el futuro cercano.
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Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189 - 259

morfolgico de hongos y produccin de metabolitos sumergidos en procesos micelial

departamento de higiene y tecnologa de los alimentos de origen animal de la Facultad de

acept el 29 de septiembre de 2003

Sin embargo, an es necesario desarrollar mejores y nuevas tcnicas experimentales para la

E-mail: Mp2000@vet.auth.gr (M. Papagianni).

190 M. Papagianni / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259

D 2003 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.

Palabras clave: hongos filamentosos; Morfologa; efectos de cizalla

El uso de hongos para la produccin de productos comercialmente importantes ha aumentado

Aparte de la ms rudimentaria, las tcnicas utilizadas para la produccin y el mantenimiento-

Los hongos filamentosos son morfolgicamente complejo microorganismos, que exhiben

M. Papagianni morfolgicas / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259 191

Tabla 1 clases principales de enzimas de hongos filamentosos de importancia comercial y algunas

Tabla 2 clases principales de antibiticos de hongos filamentosos de importancia comercial y

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192 M. Papagianni turbatum / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259

Cuadro 3 principales clases de hongos filamentosos cidos orgnicos de importancia comercial y

fuentes de cido orgnico

D-cido lctico Rhizop. oryzae

D-cido Araboascorbic Pe. chrysogenum cido Erythorbic P. griseoroseum

El cambio en la morfologa durante el crecimiento afecta el consumo de nutrientes y la tasa de

El xito de la produccin de un metabolito de hongos requiere un conocimiento detallado de las

El resultado es un paisaje impresionante de resultados sobre la morfologa y la sobreproduccin de

mecanismos de crecimiento micelial, la dinmica de agregacin, fenmenos de transporte,

2. Mecanismos de crecimiento de hongos filamentosos

2.1. Extensin punta hifales

germinacin de esporas resulta en la formacin de un germen tubo, cuyo rpido crecimiento es

Sugerencia El crecimiento es un proceso que tiene muchas similitudes en diversas clulas

2 + 2 + 2 + lular concentraciones de Ca, Ca ionophores, inhibidores del transporte de Ca y bferes

2 + el reglamento del Ca degradado, a su vez, modula las propiedades de la actina-basada

194 M. Papagianni / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259

componente del citoesqueleto, lo cual a su vez controla la extensibilidad y, posiblemente, la

El proceso de mitosis, y la ramificacin septation han sido estudiados en el indiferenciado y mycelia

En consecuencia, la longitud hifales aumenta exponencialmente a un ritmo especfico constante

Ambos hifales y extensin de la longitud de la punta de apoyo crecimiento hypha varan

M. Papagianni / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259 195

Se ha informado que la frecuencia de ramificacin como. nidulans fue proporcional a la tasa de

Hifas individuales tambin puede crecer exponencialmente en lugar de linealmente en

donde E es el promedio de la tasa de extensin, H0 y Ht representan el total de las longitudes

M. Papagianni / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259 197

relativa constancia de la longitud de la unidad de crecimiento hifales indica la existencia de un

198 M. Papagianni / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259

La extensin punta tasa disminuy temporalmente cuando se produjo ramificaciones apicales. El

Anlisis citolgico ha identificado varias sustancias clave que intervienen en el proceso,

Watters et al. (2000b) mostraron que en N. crassa la rama de distribucin de intervalos es

M. Papagianni / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259 199

restaurado a la nueva temperatura. As, la distribucin estadstica de la rama a la rama intervalos a

Un vnculo entre la poblacin micelial macroscpicos y modelos de crecimiento fue presentada

3. La dinmica de agregacin micelial

en culturas sumergidas, muchos microorganismos filamentosos tienden a agregado y crecer como

Control de morfologa micelial en fermentacin es a menudo un requisito previo para la aplicacin

Aplicacin de agregados para la produccin de metabolitos micelial depende de la obtencin de

La chemico-termodinmicos base para el efecto de las condiciones de crecimiento en la formacin

M. Papagianni Thesurface / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259 201

2 medios de cultivo inicial ( 73 a 81 ergs/cm ) se incrementaron a 13 a 46 ergs/

Los factores genticos influyen en la composicin de la pared celular y las propiedades de la

202 M. Papagianni Zetelaki / Los avances en biotecnologa 22 (2004) 189-259

La magnitud de la diferencia entre la produccin de enzimas en pellets y en libre mycelia

4. Crecimiento de hongos pellets

1=3 1=3 M 1/4 M0 kt 6

As, un precipitado se supone que aumenta en el radio a un ritmo constante a travs de un

r r0 wlt 7 Donde, r y r0 representan pellet radios en los tiempos t y 0. El exterior tiene un

M 1/4 M0 8 1=3 4 pqn wlt 3