Capitulo 2 1 Parte 2017

211303
BIOQUMICA Y LICENCIATURA EN QUMICA
Capitulo 2
PTICO QUMICO
Dra. Claudia Mardones Pea

Temario
Propiedades de la Radiaciones Electromagnticas (REM)
Espectro de Radiaciones Electromagnticas
Absorcin de Radiacin
Ley de Lambert Beer (LLB)
Validez de LLB
Instrumentacin
Error fotomtrico
Tipos de absorcimetros
Aplicaciones cualitativas y cuantitativas
Otras consideraciones
MTODOS PTICO-QUMICOS:
Conjunto de mtodos analticos que aprovechan la
interaccin de la luz con los componentes de la
materia, tanto con fines cualitativos como
cuantitativos.
NATURALEZA DE LA RADIACION ELECTROMAGNE-

TICA (REM):
Energa que se propaga por el espacio (o el vaco), no
necesitando un medio de transporte y que puede
adoptar diversas formas (luz, calor, etc.)
SU NATURALEZA PUEDE EXPLICARSE POR DOS

MODELOS:
A) Modelo ondulatorio: l, u, velocidad, amplitud
B) Modelo corpuscular: Fotones
Dra. C. Mardones Depto. A. Instrumental. Fac. Farmacia, U.de Concepcin
NATURALEZA ONDULATORIA DE LA LUZ
REPRESENTACIN DE UN HAZ DE RADIACIN MONOCROMTICO
(POLARIZADO EN EL ESPACIO)
Campo
elctrico
Campo
magntico
E
H
Direccin de
propagacin
Dra. C. Mardones Depto. A. Instrumental. Fac. Farmacia, U.de Concepcin

PARMETROS DE ONDA
l : Longitud de onda
Longitud de un ciclo o l
distancia entre dos mximos
o dos mnimos Unidades:
mm = 10-6 m, nm = 10-9 m, A = 10-10 m
: Frecuencia 1 seg
Nmero de oscilaciones o
ciclos que pasan por un punto
= 3Hz
en una unidad de tiempo
Unidades:
= c/l Ciclos/seg = Hz = seg-1
donde c = velocidad de la luz Nmero de onda

c = 2.99 * 10 8 m/seg Nmero de ondas por =1/l = /c
c = 299.792 Km/seg centmetro
Amplitud
(relacionada con
intensidad o potencia)
Propiedades de REM que son explicadas por su naturaleza ondulatoria
Interferencia: Cuando dos o ms ondas atraviesan la misma regin del espacio,
se produce un desplazamiento igual a la suma de los desplazamientos de
ambas ondas
Interferencia constructiva
+ =
Interferencia destructiva
+ =
Se usa en:
Separadores espectrales en espectroscopa
de absorcin molecular:
Filtros de interferencia
Redes de reflexin
Transformada de Fourier: Descomposicin

de ondas en componentes simples (sen;
cos) y se usa en varios tipos de
ESPECTROSCOPA (IR)
Propiedades de REM que son explicadas por su naturaleza ondulatoria
Difraccin: Cuando un haz de luz paralelo pasa por un obstculo agudo o a

travs de una obertura el haz de luz se curva
Haz paralelo Haz difractado
EJEMPLO
RENDIJAS EN LOS MONOCROMADORES
DE LOS INSTRUMENTOS DE
ESPECTROSCOPA MOLECULAR
Refraccin: Cuando un haz de luz incide con cierto ngulo sobre la interfase
entre dos medios transparentes, que tienen densidades diferentes, se observa
un cambio brusco de direccin producto de un cambio de velocidad.
1
M1 Ley de Snell
Densidad sen 1/ sen 2 = n2/ n1= v1/v2
M1 < M2
M2 n: ndice de refraccin
2 v: velocidad de REM en el medio
EJEMPLO:
Refractmetro de Inmersin
Reflexin: Cuando la radiacin atraviesa una interfase entre medios con
distinto ndice de refraccin, se produce una reflexin.
1 r
M1
M2
2
r :ngulo reflejado
Dispersin: Cuando un haz de luz atraviesa por un medio con partculas,
dependiendo del tamao, cada partcula aparece como un nuevo foco emisor
de luz (ej. efecto Tyndall)
Polarizacin: La REM vibra en una serie infinita de planos. Es posible

eliminar planos de vibracin y permitir que la REM vibre en un solo plano. Ej.
polarmetro
Haz de luz no polarizado Haz de luz polarizado

(vibra en todos los planos) (vibra en un solo plano)
(Mirando en haz de luz con un corte trasversal)

NATURALEZA CORPUSCULAR DE LA LUZ
Considerando la luz como una partcula de energa (fotn o cuanto de energa)
h: cte de Planck
E=h* E = h * c/l h = 6.625 * 10 -27 erg/seg
Propiedades de la REM que son explicadas por su naturaleza

corpuscular
Absorcin: Cuando una REM atraviesa un slido, lquido o gas, ciertas
frecuencias son eliminadas selectivamente por absorcin de la energa, la
cual es transferida a los tomos, iones o molculas, pasando stas de un
estado fundamental a uno excitado.
REM REM
INCIDENTE TRANSMITIDA
REM
ABSORBIDA
E REM absorbida = E REM transicin electrnica
Emisin: Se produce cuando tomos, iones o molculas pasan de un estado
excitado a un estado fundamental, emitiendo su exceso de energa en forma
de fotones.
Esquema del fenmeno de emisin de REM (atmica y molecular)
ENERGA
ESPECTRO DE REM
103 10 10-1 10-3 10-5 10-7 10-9 10-11
l (m)
Virus
Punto Clula Bacteria Protena Molec.

Estadio Ondas de radio
Tennis Infrarrojo Ultravioleta Rayos X Xagua
Rayos
Visible
Microondas Rayos X Rayos gama

(ciclo/seg) 106 108 1010 1012 1014 1016 1018 1020
E foton
(eV) 10-9 10-7 10-5 10-3 10-1 101 103 105
ESPECTRO DE REM
103 10 10-1 10-3 10-5 10-7 10-9 10-11
l (m)
Virus
Punto Clula Bacteria Protena Molec. agua

Estadio Tennis
Casa
Infrarrojo Ultravioleta Rayos X

Ondas de radio
Visible
Microondas Rayos X Rayos gama

(ciclo/seg) 106 108 1010 1012 1014 1016 1018 1020
E foton
(eV) 10-9 10-7 10-5 10-3 10-1 101 103 105
Ultravioleta cercano: 10 380 (200 - 380) nm
Visible: 380 - 780 nm
Infrarrojo: 0.78-1000 (2.5-15) um
ABSORCIN DE RADIACIN
Slido
transparente,
REM incidente lquido REM transmitida
o gas
Radiaciones (REM) que no emergen son ABSORBIDAS
REM ABSORBIDA ES TRANSFERIDA a tomos, molculas o iones

capaces de absorber la radiacin, pasando de un estado fundamental a
uno excitado.
tomos, molculas y iones presentan un nmero limitado

de niveles energticos discretos y cuantizados
Clase 2 Absorciometra Dra. C. Mardones / Dr. D. von Baer, Depto. A. Instrumental. Fac. Farmacia, U.de Concepcin
NIVELES DE ENERGA DE UNA MOLCULA ORGNICA FLUORESCENTE
E Electrnica:
Energa electrnica
de la molcula o
tomo
E vibracional:
Energa resultante de
vibraciones de varios
tomos
E rotacional:
Energa resultante de
la rotacion molecular
en torno a su centro
de gravedad
Niveles de
Energa rotacional
Dra. C. Mardones / Dr. D. von Baer, Depto. A. Instrumental. Fac. Farmacia, U.de Concepcin
NIVELES ENERGTICOS
E ROTACIONAL< E VIBRACIONAL< E ELECTRNICA
PARA QUE OCURRA ABSORCIN

E FOTON
DE REM
D E = E Foton
ESPECTROSCOPA: Es el estudio de las transiciones tpicas de una especie

(tomo, in, molcula), con lo que es posible su caracterizacin
A
Lo que se obtienes es un
ESPECTROGRAMA
lo
TOMOS ESPECTROSCOPA DE
ESPECIES QUE PUEDE ABSORCIN ATMICA
ABSORBER REM MOLCULAS ESPECTROSCOPA DE
ABSORCIN MOLECULAR
ESPECTROS ATMICOS SON MS SENCILLOS
QUE ESPECTROS MOLECULARES
3s 3p
TOMOS
MOLCULAS
Absorcin molecular
involucra transiciones
ELECTRNICAS
VIBRACIONALES
ROTACIONALES
ABSORCIN MOLECULAR
E = E ELECTRNICA + E VIBRACIONAL + E ROTACIONAL
Aumenta E electrnica de la molcula:

E del fotn permite que los electrones pasen de un
nivel electrnico a otro superior. Este cambio va
ABSORCIN DE REM DE acompaado de cambios vibracionales y rotacionales.
REGIN UV-VIS
(l =200-780 nm) E captada puede disiparse a la forma de calor
(vibraciones, rotaciones) o a la forma de
Fluorescencia.
ABSORCIN REM DE Aumenta E vibracional de la molcula:

REGIN IR cercana y me- E del fotn permite que las molcula vibren alrededor
dio (l =0.78 50 um) de sus enlaces
ABSORCIN DE REM DE Aumenta E rotacional de la molcula:

REGIN IR lejana y E del fotn permite que las molcula roten en torno a
microondas su eje.
(l = 50 -100 um)
Esp. de absorcin atmica

De absorcin
Esp. de absorcin molecular
ESPECTROSCOPA
De emisin Esp. de emisin atmica
Esp. de emisin molecular
ESPECTROSCOPA: Es el estudio de las transiciones tpicas de una especie
(tomo, in, molcula), con lo que es posible su caracterizacin
A
Lo que se obtienes es un
ESPECTROGRAMA
l max lo
e %T
l max lo l max lo
ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN MOLECULAR
La absorcin de REM por un medio depende de:
1. l de la radiacin (en otras palabras, de su energa)
2. Naturaleza de la especie molecular que absorbe
3. Concentracin de la especie molecular que absorbe
4. Camino ptico que debe recorrer la REM a travs del medio que absorbe
Pi: Pot. Lum. Incidente

PR: Pot. Lum. Reflejada por pared
del recipiente
PA (cub): pot. Lum. Absorbida
Haz de luz
monocromtico
Pi P por pared del recipiente
PA (solvente):pot. Lum.
Absorbida por solvente
PA (soluto): Pot. Lum. Absorbida
por soluto
P: Potencia que emerge de la
P
PR PA(cub) PA(solvente) A(soluto) muestra
MUESTRA Pil=PR+PA+PA+PA+P P = POTENCIA LUMINOSA QUE

EMERGE DE LA MUESTRA
BLANCO Pil=PR+PA+PA+PA+Po Po = POTENCIA LUMINOSA QUE

EMERGE DEL BLANCO
0 Dra. C. Mardones / Dr. D. von Baer, Depto. A. Instrumental. Fac. Farmacia, U.de Concepcin
MUESTRA BLANCO
Igualando Pil
tenemos:
PR+PA+PA+PA+P = PR+PA+PA+P0
Entonces: PA + P = P0
Dividiendo ABSORCIN + TRANSMISIN = 1

por P0: PA/P0 + P/P0 =1
% ABSORCIN + % TRANSMISIN = 100
Potencia luminosa transmitida por la muestra

TRANSMISIN: T =
Potencia luminosa transmitida por el blanco
Potencia luminosa transmitida por la muestra x 100

% TRANSMISIN: % T =
Potencia luminosa transmitida por el blanco
Lmites de T y %T:
Si P = P0 T=1 %T = 100
Si P = 0 T=0 %T = 0
RELACION DE POTENCIA LUMINOSA TRANSMITIDA Y EL ESPESOR OPTICO
Ley de Lambert - Bouger
P0 P P
100 25 12.5
50
b b b b
Si un haz de REM monocromtico incide en forma perpendicular sobre una superficie
absorbente, y si el espesor ptico de dicha sustancia (b) aumenta linealmente, la
potencia luminosa emergente disminuye en forma logartmica o exponencial.
Constante Espesor ptico
P
P0
P = P0 x10-kb P/P0 = 10-kb
Linealizando: T
b 2b 3b 4b b (cm)
log P/P0 = -kb
RELACION DE POTENCIA LUMINOSA TRANSMITIDA Y LA CONCENTRACIN
Ley de Beer-Bernard Si un haz de REM monocromtico incide en forma
perpendicular sobre una superficie absorbente, y
si la concentracin de la especie absorbente
aumenta linealmente, la potencia luminosa
emergente disminuye en forma logartmica o
P0 P
C exponencial.
P Constante
P0
P=P0x10-kc Concentracin
P0 1/4 P
2C
c 2c 3c 4c C
P0
3C 1/8 P
log P/P0=-kc
Considerando ambas leyes:
log P/P0= -kb log P/P0 = -kc
log P/P0= -kbc
log P/P0 = log T = - kbc Absorbancia
log P0/P = log1/T = - log T = kbc = A
A = - log T = log 100 - log %T = 2- log %T
Ley de Lambert
- BEER (LBB) A=kbc a y e dependen de:
e : absortividad molar k = e si c (moles/L) Naturaleza de la

sustancia
a : absortividad k = a si c (g/L) Longitud de onda
Unidades de e y a
A = a (e) x b x C
a = A / b c = 1 / cm x (g/L) 1 L= 1000 mL= 1000 cm3
2
a = 1 / cm x (g/1000cm3)
a = cm2 / mg
mg
M= moles/L
e=A/bc = 1 / cm x (mol/L)
1 L= 1000 mL= 1000 cm3
2
e = 1 / cm x (moles/1000cm3) e = cm2 / mmol
mmol
a y e dependen de:
Por lo tanto: a x PM = e Naturaleza de la sustancia
Longitud de onda
Ecuacin
y = b mx
A= a (e) x b x c
de una
recta A = 0 + (ab) x C
A = 0 + (eb) x C
%T -Log T A
Dy/Dx = m = a*b (e*b) Dy/Dx = m = a*b (e*b)

C
C C
CURVAS DE CALIBRACIN
Previamente hay que determinar la l a la que se hace una Curva de calibracin:
l se elige a travs del espectrograma
A
Espectrograma A Curva de calibracin Pendientes de l1 y l2 son distintas:
l1 tiene mayor pendiente, lo que
l1 corresponde a un mximo de
absorcin.
l2 Curva de Calibracin adecuada es
la de mayor absorcin (tiene mayor
sensibilidad).
l1 l2 l C Para obtener concentracin de M.P
MP se interpola en la curva adecuada.
La absorcin de REM por un medio
depende de:
1. l de la radiacin
2. Naturaleza de la especie molecular

que absorbe (a o e)
3. Concentracin de la especie
A (l) = a (e) (l) x b x c
molecular que absorbe
4. Camino ptico que debe recorrer la

REM a travs del medio que absorbe
VALIDEZ DE LA LLB
Como toda ley, tiene restricciones
Es vlida para luz monocromtica (una sola l), porque A = f(l)
Es vlida para soluciones diluidas (10-2-10-3 M como max.)
Es vlida para soluciones verdaderas (no suspensiones, etc)
Es vlida para T cte. y n cte.
Desviaciones LLB:
Origen Qumico (+ o -)
Origen Instrumental (-)
Desviaciones de origen qumico (+ o -) :

Indica presencia de un equilibrio qumico (el analito se disocia, asocia o
reacciona con el solvente, dando un producto con un espectro de absorcin
diferente que el del analito).
La desviacin puede ser positiva o negativa (se visualiza en la c. de c.)
Ejemplo Cr2O7= + H2O 2 CrO4= + 2H+
pH
Curva de calibracin
(sin ajuste de pH)
l = 450
A
Espectrograma
CrO4=/OH- Desv. Neg.

A
Cr2O7=/H+ C
Curva de calibracin
(sin ajuste de pH)
l = 375 Desv. positiva
375 450 l
A
C
Desviaciones de origen instrumental (-):
Pueden producirse por falta de monocromaticidad
Pueden producirse por presencia de luz parsita o esprea (luz que proviene de
otras fuente y no del haz de luz incidente).
Falta de monocromaticidad
Haz monocromtico
%T A
l1
100 50 50 0.301
C
l1
100 25 25 0.602
2C
l1
100 12.5 12.5 0.903
3C
Desviaciones de origen instrumental:
Pueden producirse por presencia de luz parsita o esprea (luz que
proviene de otras fuente y no del haz de luz incidente).
Haz policromtico
%T A
l1 (50)
25
l2 (50) 50 75 0.125
C
Haz policromtico
%T A
l1 (50)
25
l2 (50) 50 75 0.125
C
l1 (50)
12.5
l2 (50) 50
62.5 0.240
2C
Haz policromtico
%T A
l1 (50)
25
l2 (50) 50 75 0.125
C
l1 (50)
12.5
l2 (50) 50
62.5 0.240
2C
l1 (50)
6.25
l2 (50) 50
3C 56.25 0.250
Haz policromtico
%T A %T A
l1 (50)
25
l2 (50) 50 50 0.301 75 0.125
C
l1 (50)
12.5
l2 (50) 50
25 0.602 62.5 0.240
2C
l1 (50)
6.25
l2 (50) 50
3C 12.5 0.903 56.25 0.250
GRAFICANDO AMBAS CURVAS DE CALIBRACIN TENEMOS:
A1
0.8 Haz
monocromtico
0.6
0.4
Haz
policromtico Desviacin
0.2 negativa de
LLB
0
0 1 C 2C 3 C C4
Desviaciones de la Ley de LLB por efecto de radicacin policromtica
(suponiendo que a l 1 tenemos e1 y a l2 tenemos e2)
Desviaciones de la LLB por efecto de radicacin policromtica
Espectrograma Curva de calibracin
Presencia de luz parsita o esprea:

Corresponde a luz que llega al detector, pero que no forma parte del haz de
medida.
Es producto de dispersiones y reflexiones en varias superficies internas del
instrumento.
Cuando hay luz esprea (Ps), la A est dada por:
A= log (P0 + Ps) / (P + Ps)
Mientras menor es P,
mayor efecto produce Ps
La presencia de luz esprea hace que A aparente < que A terica, diferencia que
aumenta con la concentracin.
Produce desviacin negativa de la LLB ya que al aumentar concentracin del
analito que absorbe, P disminye y Ps permanece constante:
P + Ps = Ps
EFECTO DEL % DE LUZ ESPREA SOBRE LA LINEALIDAD DE LLB
ABSROBANCIA
(Ps/P0) x100
Luz esprea 0.1% es

fuente potencial de error
Concentracin M x 103
EFECTO DE LA LUZ ESPREA EN MEDIDAS DE ABSORBANCIA
A % A
Verdadera Luz esprea Observada
Medidas absorciomtricas a
longitudes de onda extremas de
un instrumento. Espectrofotmetro UV/VIS
Espectrofotmetro VIS sencillo

a = cm2/mg
e= cm2/mmol
RESUMEN: LLB: A = a x b x c dependen de l y de la
naturaleza de la sustancia
Valores de A : entre 0 y infinito
A= - log T 2 - log %T Valores de T : entre 0 y 1
Valores de % T: entre 0 y 100
Limitaciones de LLB:
Desviaciones de origen Qumico: Desviaciones de origen Instrumental:
Equilibrios qumicos Falta de monocromaticidad del haz de medida
Desviaciones + Desviaciones
Presencia de luz esprea
Desviaciones -
Para dilucidar si existe desviacin de LLB: A

Hacer curva de calibracin de A vs C
y verificar linealidad
Desv. negativa
Si el resultado es:
Una recta: no hay desviacin
Desv. +: Desv. Orig. Qumico C
Desv. -: Desv. Orig. Qumico o
Instrumental
Para dilucidar si la desviacin es de origen qumico o instrumental:
Graficar A=f (C) pero con el producto b * C constante (aumentar C y
disminuir b)
A
Si obtenemos una recta:
Desv. Qumica
Si la recta se curva: Desv. Instrumental
Desv. Qumica
C
Si el resultado es una recta, significa que e=cte (b*c cte), y por lo tanto no es el
sistema qumico que falla.
Si hay desviacin significa que e cte entonces si hay un equilibrio qumico de por
medio que hace que e vare.
2C = C
b 2b
APLICACIONES CUANTITATIVAS
1.- Mtodo absoluto: cMP = A MP/ a (e) x b
Aplicacin directa de la LLB Donde a (e) se ha determinado
Mtodo exige que se cumpla LLB previamente con un patrn de
concentracin conocida
2.- Mtodo del factor:
Se prepara una solucin patrn de la A MP = a x b x cMP
sustancia (concentracin conocida) y
se hace regla directa con la muestra
A ST = a x b x cST
problema (MP)
Mtodo exige que se cumpla LLB C MP = A MP x c ST /A ST
3.- Mtodo de la curva de calibracin: factor
Se preparan varias soluciones de A
concentraciones conocidas del patrn
y se grafica vs A de cada solucin.
m=axb
La muestra problema se interpola A MP
m=exb
dentro del rango lineal obtenido
a o e se obtienen como un valor C MP C
promedio por lo tanto es la
mejor manera de determinarlo
EJEMPLOS APLICADOS
1.- La potencia incidente de un haz luminoso de determinada frecuencia, se

reduce en un 20 % al pasar a travs de una cubeta de espesor 1 cm que contiene
una solucin coloreada. Cul ser la reduccin despus de pasar por una de 5
cm de la misma solucin?
%T= 80 %
T= 0.8
A= -log T= -log 0.8 = 0.097
A=axbxc C=cte
a: coef. Absortiv (cte)
0.097 1 cm
X 5 cm
A= 0.484
Antilog-0.484 = T
T= 33 %
Respuesta: Reduccin de radiacin ahora es de 67 %
2.- Una solucin de permanganato de potasio tiene una transmitancia de 60% en
celdas de 1 cm a una longitud de onda determinada. Si se dobla la
concentracin:
a) Cul ser la transmitancia?,
b) Cul ser la absorbancia?
c) y cual ser la concentracin que dar % T = 60 % en celdas de 10 cm?.
%T= 60
T = 0.6
A= -log T= -log 0.6=0.222
0.222 1C
X 2C
b) A= 0.444
a) Antilog -0.444= T= 0.36= %T=36
c) Concentracin = 0.1C
EJEMPLO APLICADO:
Se desea determinar la concentracin del compuesto XXZ en el producto final de un
proceso industrial.
Para ello, previamente se ha preparado un espectrograma del compuesto sintetizado
con una concentracin de 2.5 x 10 -4 M el cual present una mxima absorcin de 0.729
a 520 nm de long. de onda.
Su muestra problema (el producto final de un proceso industrial) present una A= 0.690
a 520 nm.
Determinar la concentracin del producto XXZ en su muestra.
Con la solucin de concentracin conocida
A= e x b x c e = A/ (b x c) b = 1 cm
e = 0.729 / 2.5 x 10 -4 M = 2916 cm2/mmol
Para la muestra problema con e calculado se determina C
C = A / (b x e) = 0.690 / 2916 = 2.37 x 10-4 M
a = cm2/mg
e= cm2/mmol
RESUMEN: LLB: A = a x b x c dependen de l y de la
naturaleza de la sustancia
Valores de A : entre 0 y infinito
A= - log T 2 - log %T Valores de T : entre 0 y 1
Valores de % T: entre 0 y 100
Limitaciones de LLB:
Desviaciones de origen Qumico: Desviaciones de origen Instrumental:
Equilibrios qumicos Falta de monocromaticidad del haz de medida
Desviaciones + Desviaciones
Presencia de luz esprea
Desviaciones -
Para dilucidar si existe desviacin de LLB: A

Hacer curva de calibracin de A vs C
y verificar linealidad
Desv. negativa
Si el resultado es:
Una recta: no hay desviacin
Desv. +: Desv. Orig. Qumico C
Desv. -: Desv. Orig. Qumico o
Instrumental
APLICACIONES CUANTITATIVAS
1.- Mtodo absoluto: cMP = A MP/ a (e) x b
Aplicacin directa de la LLB Donde a (e) se ha determinado
Mtodo exige que se cumpla LLB previamente con un patrn de
concentracin conocida
2.- Mtodo del factor:
Se prepara una solucin patrn de la A MP = a x b x cMP
sustancia (concentracin conocida) y
se hace regla directa con la muestra
A ST = a x b x cST
problema (MP)
Mtodo exige que se cumpla LLB C MP = A MP x c ST /A ST
3.- Mtodo de la curva de calibracin: factor
Se preparan varias soluciones de A
concentraciones conocidas del patrn
y se grafica vs A de cada solucin.
m=axb
La muestra problema se interpola A MP
m=exb
dentro del rango lineal obtenido
a o e se obtienen como un valor C MP C
promedio por lo tanto es la
mejor manera de determinarlo
EJEMPLO APLICADO:
Se desea determinar la concentracin del compuesto XXZ en el producto final de un
proceso industrial.
Para ello, previamente se ha preparado un espectrograma del compuesto sintetizado
con una concentracin de 2.5 x 10 -4 M el cual present una mxima absorcin de 0.729
a 520 nm de long. de onda.
Su muestra problema (el producto final de un proceso industrial) present una A= 0.690
a 520 nm.
Determinar la concentracin del producto XXZ en su muestra.
Con la solucin de concentracin conocida
A= e x b x c e = A/ (b x c) b = 1 cm
e = 0.729 / 2.5 x 10 -4 M = 2916 cm2/mmol
Para la muestra problema con e calculado se determina C
C = A / (b x e) = 0.690 / 2916 = 2.37 x 10-4 M
Haz de luz
monocromtico
P 0 P
C
Concepto Significado Valores
TRANSMITANCIA T = P/P0 0-1
% TRANSMITANCIA %T=(P/P0) *100 0 - 100
ABSORBANCIA A = log P0/P = -log P/P0
ebc
0-2o3
ABSORBANCIA A = a b c (g/L) = (M)
COEF. ABSORTIVIDAD e= cm /mmol = L/(mol cm)

2 0 - 105
MOLAR
COEF. ABSORTIVIDAD a= cm2/mg = L/(g cm) a x PM = e

Dra. Claudia Mardones, Departamento de Anlisis Instrumental, Facultad de Farmacia, Universidad de Concepcin 2004
ESPECTROGRAMA: SE HACE PARA DETERMINAR A QU l SE DEBE HACER
CURVA DE CALIBRACIN
%T
A
l max lo l max lo
e Log e
l max lo l max lo
A Curva de calibracin
l1
Se debe elegir l con mayor absorcin
l2 (mayor sensibilidad)
MP C
LLB: A = a b c
Toda ley tiene restricciones

Es vlida para luz monocromtica (una sola l), porque A = f(l)
Es vlida para soluciones diluidas (10-2-10-3 M como max.)
Es vlida para soluciones verdaderas (no suspensiones, etc)
Es vlida para T cte. y n cte.
+
Desviaciones: A
Origen Qumico (+ o -) -
Origen Instrumental (-)
DESVIACIONES QUMICAS
Equilibrio qumico (- o +) C
Solvente (- o +)
Emisin de Fluorescencia (-) DESVIACIONES INSTRUMENTALES
Falta de monocromaticidad (-)
Luz esprea (-)
Complete segn corresponda. Considere que se
cumple la LLB y que el paso ptico es 1 cm.
A= a(e) x b x c
a e
l (nm) %T A CM Cg/L cm2/mg cm2/mmol PM
480 20 0,12 280
510 0,444 11700 330
PROBLEMA
Se desea determinar la concentracin del compuesto yzx en una MP. Para

ello se realiza la siguiente curva de calibrado a 530 nm en cubetas de 1 cm.
0 (mg/L) 100 %
2 65
4 40
6 25
8 16
10 10
12 6
Se toma una alcuota de 2 mL de MP y se diluye a un volumen final de 25 mL y

se lee bajo las mismas condiciones de la curva de calibrado, dando un %T de
33%. (PM yzx= 150 g/mol)
a) Evale la linealidad de su curva de calibrado
b) Calcule a y e
c) Determine la concentracin de su MP diluida
d) Calcule la concentracin original de su MP
INSTRUMENTACIN EN ABSORCIOMETRA
ABSORCIMETROS
FOTMETROS DE FILTRO
ESPECTROFOTMETROS
ABSORCIMETROS
FOTMETRO DE FILTRO
SELECIONADOR
DE LONGITUD DE
FUENTE ONDA (FILTRO)
LUMINOSA
DETECTOR SISTEMA DE
PRESENTACIN
DE DATOS
CONTROL DE PORTAMUESTRA
INTENSIDAD AMPLIFICADOR
LUMINOSA DE SEAL
ABSORCIMETROS
ESPECTROFOTMETRO
SELECIONADOR DE
LONGITUD DE ONDA
(MONOCROMADOR)
FUENTE
LUMINOSA DETECTOR
SISTEMA DE
PRESENTACIN
DE DATOS
LUMINOSA DE SEAL
SELECIONADOR DE
LONGITUD DE ONDA
(MONOCROMADOR)
FUENTE
LUMINOSA DETECTOR
SISTEMA DE
PRESENTACIN
DE DATOS
LUMINOSA DE SEAL
SELECIONADOR DE
LONGITUD DE ONDA
(MONOCROMADOR)
FUENTE
LUMINOSA DETECTOR
SISTEMA DE
PRESENTACIN
DE DATOS
LUMINOSA DE SEAL
SELECIONADOR DE
LONGITUD DE ONDA
(MONOCROMADOR)
FUENTE
LUMINOSA DETECTOR
SISTEMA DE
PRESENTACIN
DE DATOS
LUMINOSA DE SEAL
ESPECTROGRAMA OBTENIDO CON ESPECTROFOTMETRO
Log. onda (l) nm
NO SE PUEDE OBTENER ESPECTROGRAMA CON FOTMETRO DE FILTRO

PARTES DE UN ABSORCIMETRO
FUENTES
LUMINOSA FUNCIN: Proporcionar la REM de trabajo
TIPOS: Continuas, que emiten dentro de cierto rango de ls

Discontinuas, que emiten ciertas ls discretas
P Terico REQUISITOS:
Emisin constante: Potencia luminosa constante en funcin del
Real
tiempo
Tiempo
P = f (t) = cte.
P Terico b) Distribucin espectral constante: Que a las distintas longitudes de

onda de emisin, la potencia luminosa sea constante.
Real
P = f (l) = cte.
l
En la prctica, que emita en el rango espectral en el que se har
la medicin .
Lmpara de filamento de wolframio o tungsteno
(medidas absorciomtricas en regin Vis-IR)
FUNCIONAMIENTO:
Vidrio
Se calienta el filamento de W a travs de una corriente
Filamento estabilizada e igual como un cuerpo caliente, emite
de W radiacin dependiendo de la temperatura de
calentamiento.
Vaco CARACTERSTICAS:
Emite un espectro continuo entre 350 nm y 2,5 um.
La potencia luminosa depende directamente de la
temperatura de calentamiento del filamento. A mayor
temperatura, menor l.
Se utiliza para hacer determinaciones absorciomtricas
en la regin visible e infrarroja.
Lmparas de tungsteno-halgeno:
Contiene una pequea cantidad de I2 en
el filamento, lo que le da un tiempo de
vida til mayor y emiten radiacin
abarcando parte de la regin UV.
En este caso el bulbo es de cuarzo.
Lmpara de deuterio e hidrgeno
(medidas absorciomtricas en regin UV)
FUNCIONAMIENTO:
Cuarzo Una descarga elctrica disocia al deuterio o hidrgeno
contenido en la lmpara, el cual, al recombinarse
emite radiacin en la regin UV.
Deuterio o
hidrgeno a CARACTERSTICAS:
baja presin Emite un espectro continuo desde 160-375 nm.
Tambin emite espectro discontinuo (lneas) a ls
superiores de 400 nm
Electrodo Es la lmpara de eleccin para trabajar en la en la
metlico regin UV.
El espectro discontinuo muchas veces es utilizado para
Filamento la calibracin de escalas de longitudes de ondas de
calentado espectrofotmetros.
Otras lmparas de descarga elctrica usadas en absorciometra
Espectro lmpara de xenon
Lmpara de arco de xenn:

Se hace pasar una corriente por
una atmsfera de xenn
Emite radiacin continua entre
200 -1000 nm
Espectro lmpara de mercurio
Lmpara de vapor de
mercurio: Emite radiacin
discontinua (espectro de lneas)
Lmpara de vapor de sodio
Lmpara de vapor de Nen, etc
RESUMEN DE LOS ESPECTROS DE EMISIN DE DISTINTAS
FUENTES DE EMISIN
CONTROL DE
INTENSIDAD FUNCIN: Regular potencia luminosa que sale de la Fuente luminosa
LUMINOSA
TIPOS: a) Aquellas que actan sobre la fuente luminosa, variando la
corriente de alimentacin de sta.
b) Aquellas que actan sobre la luz emitida, mediante :
Diafragmas, cuas o ranuras.
Cua Diafragma Ranura
PORTA
MUESTRAS FUNCIN: Contener la muestra, tanto si esta es lquida o si es gaseosa
CARACTERSTICAS: Deben ser transparentes a la radiacin en la regin
espectral donde se est trabajando
Su colocacin debe ser reproducible
Debe ser resistente a la muestra
Debe tener un espesor ptico definido (b)
MATERIAL PTICO: Su eleccin es exclusivamente dependiente de la regin espectral

donde se est trabajando.
VISIBLE: Vidrio Transparente entre 325 nm 3um

Poliestireno Transparente entre 340 nm 3um
Metacrilato Transparente entre 285 nm -750 nm
UV: Cuarzo Transparente entre 200 nm 3um

Metacrilato Con ciertas limitaciones y precauciones (l<285 nm)
ESPESOR PTICO (b) : 1 -100 mm

NORMALMENTE 10 mm (1 cm)
TRANSMISIN DE MATERIALES PTICOS MS USADOS EN ABSORCIOMETRA
CUARZO
VIDRIO
FORMAS Y TIPOS DE CUBETAS
Tipos:
A. Cilndricas
B. Prismticas
C. Semi-micro cubetas
D. Micro-cubetas
E. Cubetas de Flujo
F. Cubetas de succin
A B B C/D E E F
SELECIONADOR
DE LONGITUD DE FUNCIN: Seleccionar cierta l o un intervalo de l (LLB rige
ONDA para luz monocromtica o sta tiende a serlo).
TIPOS: a) Discontinuos: Aislan un intervalo o banda de ls

(FILTROS PTICOS)
b) Continuos: Permiten aislar cualquier l dentro de

cierto rango espectral (MONOCROMADORES)
Filtro Monocromador
CLASIFICACIN: Segn el principio en el que se basan:
1.- Absorcin selectiva de la regin espectral que NO interesa medir

FILTROS DE ABSORCIN. FOTMETRO DE FILTRO
2.- Difraccin de la radiacin incidente
FILTRO DE INTERFERENCIA FOTMETRO DE FILTRO
MONOCROMADORES DE RED DE DIFRACCIN ESPECTROFOTMETRO
3.- Refraccin de la luz incidente
MONOCROMADOR DE PRISMA ESPECTROFOTMETRO
SELECIONADOR DE
LONGITUD DE ONDA
(MONOCROMADOR)
FUENTE
LUMINOSA DETECTOR
SISTEMA DE
PRESENTACIN
DE DATOS
LUMINOSA DE SEAL
1.- FILTROS DE ABSORCIN
Absorben selectivamente la regin espectral que NO INTERESA, dejando pasar la REM
requerida para la medicin, es decir, aquella donde el compuesto que queremos
estudiar presente un mximo de absorcin (e o a alto).
Se construyen en base a vidrio coloreado con sales inorgnicas o gelatina coloreada
entre 2 vidrios.
Son usados para absorcin en regin VIS
Caractersticas generales de un filtro de absorcin
%T
Longitud de onda nominal (lN): l que se transmite con
I mayor intensidad a travs del filtro.
Pasabanda (Dl): Rango de ls que son transmitidas
por el filtro con una intensidad igual o mayor que la
I/2 mitad de la intensidad de la lN.
Banda espectral (2Dl): Son todas las ls que deja
pasar el filtro y corresponde a 2Dl.
I: Intensidad mxima de transmisin del filtro

lN l (nm)
I/2: Mitad de intensidad mxima de transmisin
Dl
2Dl Pasabandas (Dl) de filtros de absorcin van
de 30 a 100 nm
Filtro de corte A: Permite el paso
o las ls cortas (azul - verde) Filtros de corte B: Permite el paso de
ls altas (filtros amarillos - rojos)
Filtros de absorcin combinado: Se

combinan los filtros de corte A y B
2.- FILTROS DE INTERFERENCIA
Su funcionamiento se basa en los fenmenos de interferencia que sufren las REM.
Capa de
lN =f (d) ml = 2dn Vidrio Dielctrico
(MgF2 o CaF2)
m: orden de interferencia Pelcula
d: espesor del dielctrico Metlica
n: ndice de refraccin del dielctrico (Ag)
Filtro corte Filtro

rojo Coloreado
I 400 nm (de corte)
2er orden
1er orden 2do orden
3er orden 1er orden
l
Si hay interferencia constructiva se suman intensidades y la l se potencia
Si las interferencias son destructiva, la radiacin se anula
Hay ms de una l que cumple con la relacin, por lo que emergen mltiplos de la l seleccionada
(ordenes de interferencia).
Filtro coloreado elimina ordenes de interferencia no deseados
La Dl son ms estrechas y la intensidad generalmente mayores que filtros de absorcin
COMPARACIN DE LAS CARACTERSTICAS DE TRANSMISIN DE
FILTRO DE ABSORCIN Y FILTRO DE INTERFERENCIA
%T
Espectro de absorcin
de una muestra X
lmin: Longitud de onda de mnima transmisin,

es decir, de mxima absorcin (donde e o a es
grande y se tiene alta sensibilidad para
determinaciones cuantitativas
l min l (nm)
%T Espectro de transmisin
de un filtro
Es necesario que el filtro presente una alta transmisin

a la l N, la cual debe coincidir con lmax. de absorcin
del compuesto.
Tambin es deseable que el filtro presente una
pasabanda estrecha para as lograr una mayor
monocromaticidad
lN (nm) l (nm)
Elemento seleccionador de ls de un ESPECTROFOTMETRO, lo que permite variar en forma
continua un intervalo de ls, es decir, barrer distintas ls (con el se puede obtener un
ESPECTROGRAMA)
Componentes: Interesa tener:

1.- Ranura de entrada: Fija ancho de haz luminoso Alta pureza espectral (pasabanda
2.- Lente colimador o espejo cncavo estrecha)
3.- Elemento dispersor (prima o red de difraccin) Alta intensidad de radiacin
4.- Lente focalizador o espejo cncavo emergente del monocromador
5.- Ranura de salida: Fija la banda espectral (rango Bajo porcentaje de luz esprea
de ls ) y por lo tanto la PUREZA del haz de medida
Elemento
dispersor
MONOCROMADOR DE PRISMA
Por qu el prisma como elemento dispersor?
Porque al incidir REM policromtica sobre un prisma, la radiacin se refracta
(pasa de un medio de menor densidad a uno de mayor), variando la direccin
del haz
Como la refraccin (n) depende de l , cada l se refractar con un ngulo
distinto y se separar
Para ello el prisma debe ser transparente a la regin espectral de trabajo
Espectro de luz blanca difractada por un prisma
EL PRISMA
COMO
ELEMENTO 30
DISPERSOR
60
EL PRISMA
COMO
ELEMENTO 30
DISPERSOR
60
EL PRISMA
COMO
ELEMENTO 30
DISPERSOR
60
EL PRISMA
COMO
ELEMENTO 30
DISPERSOR
60
EL MONOCROMADOR
DE PRISMA
30
60
EL MONOCROMADOR
DE PRISMA
EL MONOCROMADOR
DE PRISMA RANURA
DE SALIDA
MONOCROMADOR
DISPERSION ANGULAR d d
------- = ------
d
x -------
DEL PRISMA dl d dl

Depende de < y < i
b
Dispersin Lineal Red de Difraccin
Dispersin ANGULAR Prisma de Vidrio
ABSORCION
Dispersin ANGULAR Prisma de Cuarzo
Como la dispersin de las ls no es constante, los monocromadores de

prima deben tener ranura de salida de ancho variable
El material del prisma debe ser transparente a la regin de trabajo porque
si no ocurre absorcin
MONOCROMADORES DE RED DE DIFRACCIN
QU ES UNA RED DE DFRACCIN?
Es una placa donde se ha dibujado una

serie de lneas paralelas y equidistantes
pero muy prximas entre si.
Cuando incide REM policromatica sobre
una raya, esta acta como un nuevo foco
emisor, reflejando la REM y dispersndola
1, 2, 3: Luz blanca
1
2 r
3
r r
i i i
d
PORQU SE SEPARAN LAS
DISTINTAS ls?
Si hay interferencia constructiva, las REM
de una determinada ls se potencian.
Si hay interferencias destructivas, se
anulan
_ l1;_l2
d

anulan
_ l1;_l2
d

anulan
_ l1;_l2
d
MONODROMADORES DE RED DE DIFRACCIN

anulan
_ l1;_l2
Interferencia Interferencia
constructiva destructiva
d
MONODROMADORES DE RED DE DIFRACCIN

anulan
Para obtener una interferencia constructiva
se tiene:
m l= d (seni+senr)
_ l1;_l2
m: orden de interferencia
d: Distancia entre lneas de la red
i: ngulo radiacin incidente
r: ngulo radiacin reflejada
d
RED DE DIFRACCION
Rayo Incidente Orden Cero
Red Difracc.
RED DE DIFRACCION
1er Orden
(n = 1)
Red Difracc.
RED DE DIFRACCION
2o Orden
(m = 2)
1er Orden
(m= 1)
Red Difracc.
3er Orden
RED DE DIFRACCION
(m = 3)
2o Orden
(m = 2)
1er Orden
(m= 1)
Red Difracc.
3er Orden RANURA
MONOCROMADOR
RED DE DIFRACCION (n = 3) DE SALIDA
2o Orden
(n = 2)
1er Orden
(n= 1)
Red Difracc.
Filtro de absorcin elimina
espectros de orden superior
MONOCROMADOR
RED DE DIFRACCION 3er
Orden
(n = 3)
600 nm
2o Orden
(n = 2)
1er
Orden
(n= 1)
Red Difracc.
Como red de difraccin genera espectros
de orden superior, se necesita un filtro de
corte para eliminarlos
Dispersin Lineal Red de Difraccin
Dispersin ANGULAR Prisma de Vidrio
La separacin de las distintas ls es constante, por lo que es espectro es

ABSORCION
lineal (no es imprescindible contar con ranuras de salida de ancho variable)
Dispersin ANGULAR Prisma de Cuarzo
Dispersin angular:
Como la dispersin de las ls no es constante,
los monocromadores de prima deben tener ranura de salida de
ancho variable
DETECTORES
FUNCIN: Transformar la seal luminosa (REM) en seal elctrica
CARACTERSTICAS DE UN DETECTOR IDEAL:
Sensible: Obtener una alta seal elctrica con una baja seal
luminosa (alta pendiente (m) de la curva de respuesta).
Relacin seal/ruido alta: para una fcil amplificacin
Respuesta Lineal: Seal proporcional a la potencia luminosa
Respuesta constante: frente a distintas ls.
Tiempo de respuesta rpido
Seal elctrica =0 en ausencia de iluminacin
Seal elctrica proporcional a potencia luminosa
Respuesta: S = kP + k
S: Seal elctrica
S k: Constante dependiente de la l
P: Potencia luminosa
k k: Corriente oscura: corriente proveniente del
detector que se produce sin que le llegue luz.
k Es necesario su ajuste, cada vez que se comienza

P a trabajar con un absorcimetro. Para ello se
obstruye el paso de luz al detector y se lleva la
lectura a %T=0 o A=
FOTOTUBO
FOTOMULTIPLICADOR
CARACTERISTICAS DETECTORES RANGO UV Y VISIBLE
ESCALA DE LECTURA EN ABSORCIOMETRIA
A = 2 log % T
Absorbancia
oo 1 0,7 0,52 0,4 0,3 0,22 0,15 0,097 0,047 O A
70 80 90 100 % T
0 10 20 30 40 50 60
1 Ajuste de
3 Lectura MP 2 Ajuste de blanco
corriente oscura
(cubeta con MP, (cubeta con blanco,
(paso luz
paso luz abierto) paso luz abierto)
interrumpido)
CONDICIONES PTIMAS PARA DETERMINACIONES CUANTITATIVAS
1.- Seleccionar lT
2.- Verificar cumplimiento de LLB
3.- Asegurarse que %T o A medidas estn en un

INTERVALO ADECUADO
ERROR QUE SE COMETA EN LA MEDIDA SEA PEQUEO

(incertidumbre sea pequea)
RUIDO
Ruido (R):
Seal aleatoria que aparece superpuesta a la seal producida por el analito y que afecta la
exactitud y la precisin de la medida.
Relacin seal/ruido S/R

En la mayora de los casos el ruido es constante e independiente de la magnitud, razn por la
cual afecta en mayor forma a seales pequeas que a seales grandes (error relativo aumenta
con disminucin de la seal)
X = media
S/R = X/s
s = desv. estndar
Fuentes de ruido:
Ruido qumico: Variables incontroladas que afectan la qumica del sistema (ej. T,
humedad, presin, etc).
Ruido instrumental: Se asocia a cada componente de un instrumento y tiene distintos
orgenes
Ruido trmico o Johnson: Producto de agitacin trmica de que generan variacin
aleatoria de la tensin elctrica
Ruido de parpadeo: Sus causas no se conocen claramente pero se relaciona
inversamente con la frecuencia
Ruido ambiental: Mezcla de ruidos que provienen del entorno.
COMO AFECTA EL RUIDO A LA MEDIDA Serie1
DE TRANSMITANCIA?
Escala de % T
0 20 40 60 80 100 120
1 Ajuste de corriente 3 Lectura MP 2 Ajuste de blanco

oscura
RUIDO
RUIDO RUIDO
INCERTIDUMBRE
NETA DE T
CMO AFECTA LA INCERTIDUMBRE EN LA MEDIDA DE T
A LA MEDIDA DE CONCENTRACIN?
A=ebC
-logT = e b C
- 0.434 ln T = e b C /derivada
(-0.434 1/T ) dT = e b dC
- logT= e b C
e b = -logT /C
(-0.434 /T ) dT= -log T/C dC reordenando
(0.434 /T log T) dT= dC /C

Desviacin
DC/C = 0.434 DT
Desviacin
estndar absoluta
estndar relativa
de concentracin T log T de la medida de T
Caso 1: DT es constante y no vara en funcin de T
DT f(T)
Absorciometros sencillos, baratos y tambin los ms

antiguos.
DC/C = 0.434 DT
T log T
Absorciometros sencillos, baratos y tambin los ms antiguos.
Para un error fotomtrico
DC/C = 0.434 DT
de T (DT) = 1 %
%T T A DC/C
x100 T log T
80 0.80 0.097 5.60
70.0 0.70 0.155 4.00 7.0
65.0 0.65 0.187 3.57 6.0

50.0 0.50 0.301 2.88
5.0
44.7 0.45 0.350 2.78
D C/C
40.0 0.40 0.398 2.73 4.0
36.8 0.37 0.434 2.72

3.0
32.7 0.33 0.485 2.73
2.0
30.0 0.30 0.523 2.77
26.9 0.27 0.570 2.83 1.0
25.0 0.25 0.602 2.88
0.0
20.0 0.20 0.699 3.10 0 20 40 60 80 100 %T
15.8 0.16 0.801 3.43
8.0 0.08 1.097 4.95
6.3 0.06 1.200 5.74
de T (DT) = 1 %
7.0
%T T A DC/C
x100
6.0
80 0.80 0.097 5.60
70.0 0.70 0.155 4.00 5.0
65.0 0.65 0.187 3.57

D C/C
4.0
50.0 0.50 0.301 2.88
3.0
44.7 0.45 0.350 2.78
40.0 0.40 0.398 2.73 2.0
36.8 0.37 0.434 2.72

1.0
32.7 0.33 0.485 2.73
0.0
30.0 0.30 0.523 2.77
0 20 40 60 80 100 %T
26.9 0.27 0.570 2.83
25.0 0.25 0.602 2.88
Mnimo error DC/C
20.0 0.20 0.699 3.10
%T = 36.8
15.8 0.16 0.801 3.43 A = 0.434
8.0 0.08 1.097 4.95
6.3 0.06 1.200 5.74
de T (DT) = 1 % 7.0
%T T A DC/C 6.0
x100
80 0.80 0.097 5.60 5.0
70.0 0.70 0.155 4.00
D C/C
4.0
65.0 0.65 0.187 3.57
3.0
50.0 0.50 0.301 2.88
44.7 0.45 0.350 2.78 2.0
40.0 0.40 0.398 2.73

1.0
36.8 0.37 0.434 2.72
0.0
32.7 0.33 0.485 2.73
0 20 40 60 80 100 %T
30.0 0.30 0.523 2.77
26.9 0.27 0.570 2.83
25.0 0.25 0.602 2.88 Rango donde DC/C es
20.0 0.20 0.699 3.10 relativamente constante
% T = 20 - 65 %
15.8 0.16 0.801 3.43
A = 0.700 - 0.187
8.0 0.08 1.097 4.95
6.3 0.06 1.200 5.74
de T (DT) = 1 % 7.0
%T T A DC/C 6.0
x100
80 0.80 0.097 5.60 5.0
70.0 0.70 0.155 4.00
D C/C
4.0
65.0 0.65 0.187 3.57
3.0
50.0 0.50 0.301 2.88
44.7 0.45 0.350 2.78 2.0
40.0 0.40 0.398 2.73

1.0
36.8 0.37 0.434 2.72
0.0
32.7 0.33 0.485 2.73
0 20 40 60 80 100 %T
30.0 0.30 0.523 2.77
26.9 0.27 0.570 2.83
25.0 0.25 0.602 2.88 Rango donde DC/C no es superior a
20.0 0.20 0.699 3.10 2 veces el error mnimo
%T = 8-80 %
15.8 0.16 0.801 3.43
A = 1.1-0.1
8.0 0.08 1.097 4.95
6.3 0.06 1.200 5.74
Por esos los lmites de 0,2 a 1,2 de absorbancia para la curva de calibracin
1.1
0.1
C
Caso 2: DT no es constante y vara en funcin
de T.
DT = f(T)
DT= kT2 +T
Espectrofotmetros UV/vis e IR de alta calidad
DC/C = 0.434 k
1/T + T
log T
Caso 3: DT no es constante y vara en funcin

de T.
DT = f(T)
DT = kT
Espectrofotmetros UV/vis e IR de alta calidad
DC/C = 0.434 k
log T
Incertidumbres relativas en la concentracin por distintas
categoras de ruidos instrumentales
Caso 1 DT= cte
Por lo tanto hay otros tipos de

DC/C x 100
absorcimetros que permiten

medir absorbancias mayores con
una incertidumbre razonable
Caso 2 DT= f(T)

DT=kT2+T
Caso 3 DT= f(T)

DT=kT
PROBLEMA
El e prctico obtenido a 467 nm para el compuesto ZZZ es de 213 L/cm mol. Usted
necesita medir unas muestra que tienen un contenido de dicho compuesto entre 1,5
x10-3 y 3,0 x 10-3 M, y que el error relativo de concentracin no debe exceder el 2%.
Calcule la sensibilidad mnima que debe tener el instrumento si la escala es lineal en
% de transmisin. Considere cubetas de 1 cm.
C (M) A T %T dT % dT
1,5*10-3 0,320 0,479 47.9
3,0*10-3 0,640 0,229 22,9
DC/C= [0,434dT]/[TlogT] = 0,02
Error relativo de Sensibilidad mnima

concentracin del instrumento
Para T=0,479
0,434dT/0,02= 0,479*log0,479
dT = -0,0071
Para T= 0,229
0,434dT/0,02= 0,229*log0,229
dT = -0,0068
C (M) A T %T dT % dT
1,5*10-3 0,320 0,479 47.9 0,0071 0,71
3,0*10-3 0,640 0,229 22,9 0,0068 0,68

Capitulo 2 1 Parte 2017

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211303

BIOQUMICA Y LICENCIATURA EN QUMICA

Dra. Claudia Mardones Pea

NATURALEZA DE LA RADIACION ELECTROMAGNE-

SU NATURALEZA PUEDE EXPLICARSE POR DOS

Dra. C. Mardones Depto. A. Instrumental. Fac. Farmacia, U.de Concepcin

donde c = velocidad de la luz Nmero de onda

Transformada de Fourier: Descomposicin

Difraccin: Cuando un haz de luz paralelo pasa por un obstculo agudo o a

Haz paralelo Haz difractado

Polarizacin: La REM vibra en una serie infinita de planos. Es posible

Haz de luz no polarizado Haz de luz polarizado

(Mirando en haz de luz con un corte trasversal)

Propiedades de la REM que son explicadas por su naturaleza

Punto Clula Bacteria Protena Molec.

Punto Clula Bacteria Protena Molec. agua

Infrarrojo Ultravioleta Rayos X

Radiaciones (REM) que no emergen son ABSORBIDAS

REM ABSORBIDA ES TRANSFERIDA a tomos, molculas o iones

tomos, molculas y iones presentan un nmero limitado

PARA QUE OCURRA ABSORCIN

ESPECTROSCOPA: Es el estudio de las transiciones tpicas de una especie

Aumenta E electrnica de la molcula:

ABSORCIN REM DE Aumenta E vibracional de la molcula:

ABSORCIN DE REM DE Aumenta E rotacional de la molcula:

Esp. de absorcin atmica

Pi: Pot. Lum. Incidente

MUESTRA Pil=PR+PA+PA+PA+P P = POTENCIA LUMINOSA QUE

BLANCO Pil=PR+PA+PA+PA+Po Po = POTENCIA LUMINOSA QUE

Dividiendo ABSORCIN + TRANSMISIN = 1

Potencia luminosa transmitida por la muestra

Potencia luminosa transmitida por la muestra x 100

log P/P0= -kb log P/P0 = -kc

log P/P0= -kbc

log P/P0 = log T = - kbc Absorbancia

log P0/P = log1/T = - log T = kbc = A

A = - log T = log 100 - log %T = 2- log %T

e : absortividad molar k = e si c (moles/L) Naturaleza de la

a = A / b c = 1 / cm x (g/L) 1 L= 1000 mL= 1000 cm3

Dy/Dx = m = a*b (e*b) Dy/Dx = m = a*b (e*b)

2. Naturaleza de la especie molecular

4. Camino ptico que debe recorrer la

Desviaciones de origen qumico (+ o -) :

CrO4=/OH- Desv. Neg.

Espectrograma Curva de calibracin

Presencia de luz parsita o esprea:

Luz esprea 0.1% es

Espectrofotmetro VIS sencillo

Para dilucidar si existe desviacin de LLB: A

1.- La potencia incidente de un haz luminoso de determinada frecuencia, se

Respuesta: Reduccin de radiacin ahora es de 67 %

Con la solucin de concentracin conocida

e = 0.729 / 2.5 x 10 -4 M = 2916 cm2/mmol

Para la muestra problema con e calculado se determina C

C = A / (b x e) = 0.690 / 2916 = 2.37 x 10-4 M

Para dilucidar si existe desviacin de LLB: A

Con la solucin de concentracin conocida

e = 0.729 / 2.5 x 10 -4 M = 2916 cm2/mmol

Para la muestra problema con e calculado se determina C

C = A / (b x e) = 0.690 / 2916 = 2.37 x 10-4 M

Concepto Significado Valores

TRANSMITANCIA T = P/P0 0-1

% TRANSMITANCIA %T=(P/P0) *100 0 - 100

ABSORBANCIA A = log P0/P = -log P/P0

Dy/Dx = m = ab (eb) Dy/Dx = m = ab (eb)