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PRCTICAS DE LABORATORIO 2

CB
PRCTICA 4: EXTRACCIN Y AISLAMIENTO DE
ADN
ALUMNO: FECHA:
OBJETIVOS
Romper o lisar con detergentes la pared celular, la membrana plasmtica y la
membrana nuclear para dejar libre el ADN y hacer que precipite en alcohol, para poder
visualizar las fibras del ADN.

QU ES EL ADN?
El ADN es la abreviatura del cido desoxirribonucleico.
Es la molcula de la vida pues constituye el material gentico
de todos los organismos vivos y se encuentra en el interior
del ncleo de las clulas. El ADN es el componente qumico
primario de los cromosomas y el material que constituye los
genes.
Su funcin esencial es la de conservar la informacin durante la divisin celular,
transmitirla de generacin en generacin y hacer efectiva la informacin gentica que
contiene.

ETAPAS Y FUNDAMENTO DE LA EXTRACCIN DE ADN DE PLANTAS


1.- La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas: En primer lugar tiene que
romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la
clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el
ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lpidos de las membranas
celulares y las rompen.
2.- La sal evita la unin de las protenas al ADN.
3.- Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua,
pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y
precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Adems
de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de
otros componentes celulares, los cuales son dejados en la
solucin acuosa.

APLICACIONES
Agricultura y ganadera:
Nos ayuda a conocer el genoma de los seres vivos para saber ms de ellos. Gracias al
estudio del ADN podemos distinguir entre especies y variedades, encontrar caractersticas
de inters agronmico (produccin, sabor, color, resistencias a enfermedades,..), obtener
nuevas variedades mejoradas.

PROTOCOLO DE EXTRACCIN DE ADN


MATERIAL
Tubos de ensayo
Vasos de precipitado Hielo
Colador Agua destilada
Cucharilla de caf Detergente lavavajillas
mortero, cuchillo Sal
Gasa para colar Muestra vegetal: Puede tratarse de cebolla, tomate,
pltano, germen Alcohol de 96 muy fro de trigo o un puado de
guisantes.

MANIPULACIN
1. En el vaso de precipitado pequeo echa 3 cucharaditas de detergente lavavajillas.
2. Aade una cucharada de sal.
3. Aade 250 mililitros de agua destilada.
4. Corta la zona central del vegetal elegido en cuadrados. Tritura los trozos del vegetal
(en el vaso de precipitado grande) con un poco de agua en la batidora (la mezcla de
clulas y agua debe ser opaca), accionando 2 veces las cuchillas a impulsos de 10
segundos. As se rompern muchas clulas.
5. Mezcla en el recipiente grande el triturado celular con la disolucin inicial del vaso.
6. Agita vigorosamente la mezcla durante al menos 5 minutos, sin formar espuma.
7. Haz pasar el lquido obtenido por un colador.
8. Retira 5 mililitros de la mezcla a un tubo de ensayo y aade con la pipeta otros 5
mililitros de alcohol enfriado a 0 C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por
la cara interna del tubo de ensayo, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar
flotando sobre la mezcla.
9. Deja reposar durante 5 minutos hasta que se forme una zona turbia entre las 2 capas.
(Mientras esperas este tiempo, puedes ir recogiendo y limpiando todos los recipientes
empleados anteriormente).
10.Introduce una varilla justo debajo del alcohol (la
zona turbia que queda entre las 2 capas).
Remueve la varilla hacia delante y hacia atrs y
poco a poco se irn enrollando los fragmentos de
mayor tamao de ADN.
11.Pasado un minuto, retira la varilla atravesando la
capa de alcohol, con lo cual el ADN quedar
adherido a su extremo, con el aspecto de un copo de
algodn mojado.
12.Si quieres conservar el ADN puede dejarse secar sobre un papel de filtro.

RESULTADOS:
El producto filamentoso obtenido de la extraccin no es ADN
puro, ya que, entremezclado con l, hay fragmentos de ARN. Una
extraccin profesional se realiza aadiendo enzimas que
fragmentan las molculas de ARN y que impiden que se unan al
ADN.

Informacin que debe adquirir o cuestiones que debe resolver


el alumno con el desarrollo de la prctica:

Para qu se utiliza el detergente y el NaCl en la extraccin?


Qu componente aporta el zumo de pia o de papaya y cul es su utilidad?
Por qu se incorpora finalmente el etanol muy fro al medio?