Procedimiento para la obtencion de extractos apolares y

polares de curcuma y aplicaciones de los mismos

WO 1996003999 A1
ABSTRACT
La obtencin del extracto apolar comprende: (a) extraccin de los rizomas con un disolvente
orgnico; (b) filtracin y evaporacin a sequedad del extracto; (c) disolucin de la oleorresina
resultante en caliente, precipitacin dejando enfriar y filtracin del slido; (d) secado y
recristalizacin del slido para obtener un producto con una pureza en curcuminoides superior al
90 %. La obtencin del extracto polar comprende: (a') extraccin de los rizomas con agua a 50-70
C y (b') filtrado y evaporacin del agua. Aplicacin en la fabricacin de composiciones y
preparados tiles como captadores de radicales libres y agentes antienvejecimiento, as como
agentes reductores de los niveles plasmticos de perxidos lipdicos en humanos.

TITULO DE LA INVENCION

Procedimiento para la obtencin de extractos apolares y polares de Curcuma y aplicaciones de los

mismos.

CAMPO TECNICO DE LA INVENCION

La presente invencin se encuadra dentro del campo tcnico de la obtencin de extractos de

plantas con diferentes aplicaciones medicinales, cosmticas, dietticas, etc.

Ms especialmente, la presente invencin proporciona un procedimiento para la obtencin de

extractos apolares y polares de Curcuma que tienen importantes aplicaciones como agentes
captadores de radicales libres y agentes antienvejecimiento.

ESTADO DE LA TECNICA ANTERIOR A LA INVENCION

La curcumina y otros curcuminoides, as como aceites esenciales obtenidos de extractos de

plantas del gnero Curcuma y en general de la familia de las Zingiberaceas son tiles para el
tratamiento y profilaxis de diversas enfermedades. A titulo de ejemplo, se pueden citar: EP568.001
(agentes antivirales), EP440.885 (antiinflamatorios), EP319.058 (contra la cada del cabello),
EP256.353 (tratamiento de sndromes de malabsorcin), US5.108.750, US4.906.471, US4.842.859
(agentes antiagregantes plaquetarios y anticolesterol), W088/05304 (contra hepatitis B y sida),
W088/08713 (tratamiento de desrdenes neurolgicos), US4.568.546 (antiveneno). Tambin son
conocidas las propiedades antioxidantes y colorantes de la curcumina y sus derivados por lo que
suele emplearse ampliamente en alimentacin y cosmtica como conservante natural
(US5.266.344, KK KOBE SEIKO SHO).

Por otra parte, se sabe que el exceso de oxgeno reactivo y de radicales libres en los tej idos
produce alteraciones que conducen al envejecimiento celular prematuro y a la aparicin de
diversas enfermedades. Dada la creciente preocupacin por este fenmeno, no resulta
sorprendente que existan numerosos documentos sobre preparacin de extractos vegetales con
efectos antioxidantes, captadores de radicales libres y por lo tanto tiles en la prevencin del
envejecimiento celular. Sin embargo, en el caso concreto de extractos de Curcuma longa el
nmero de documentos recuperados no es muy abundante, correspondiendo adems en su mayor
parte a literatura no patente.

Entre las referencias bibliogrficas de las patentes de mayor inters que se encuentran recogidas
en los bancos de datos, destaca la solicitud FR2.655.054 (PACIFIC CHEMICAL) sobre agentes de
proteccin celular que contienen curcuminoides (curcumina, 4-hidroxicinamoil (feruloil) metano, bis
(4-hidroxicinamoil) metano, etc) obtenidos de Crcuma longa, cido ascrbico y/o superxido
dismutasa (SOD). Los curcuminoides poseen un conocido efecto antioxidante, as como el cido
ascrbico y la SOD que ejercen un efecto sinrgico.

Por otra parte, la actividad antiinflamatoria de los curcuminoides tambin puede resultar de su
efecto antioxidante. En este sentido, la solicitud EP550.807 (STEIGERWALD
ARZNEIMITTELWERK) describe preparaciones de Curcuma longa tiles para el tratamiento de
enfermedades inflamatorias asociadas con la produccin excesiva de leucotrienos y
prostaglandinas (enfermedad de Crohn, asma bronquial, psoriasis, etc). Segn este documento, la
curcumina ejerce su accin antiinflamatoria por una parte participando en las reacciones de
eliminacin de oxgeno activo y de radicales libres y por otra inhibiendo la ciclooxigenasa y la
lipooxigenasa, enzimas responsables de la sntesis de prostaglandinas y leucotrienos
respectivamente.

En relacin con los procedimientos de extraccin de las fracciones polar y apolar de los rizomas de
Curcuma longa, se trata de procedimientos convencionales que uuilizan disolventes usuales
(lquidos en condiciones normales) o bien CO2 o NO2 lquidos o en condiciones supercrticas, lo
que es igualmente usual para la extraccin de aromas y aceites esenciales de plantas ( "Carbon
dioxide extracted ingredients for fragances", Flavours & Fragances O-5M385P, North Albert Road,
Reigate, Surrey RH2 9 ER, Inglaterra).

No obstante, es un campo de notable inters en el que todava sigue siendo deseable la obtencin
de extractos ms puros el descubrimiento de posibles nuevas aplicaciones de los mismos en el
campo mdico-farmacutico, en el cosmtico, en el diettico, etc.

En esta lnea, la presente invencin proporciona unos extractos apolares y polares de Curcuma
longa con importantes propiedades como agentes captadores de radicales libres y,
consecuentemente, agentes antienvejecimiento celular. Asimismo, estos extractos han mostrado
capacidad para reducir los niveles plasmticos de perxidos lipideos en humanos.

Por otra parte, segn los datos bibliogrficos es conocido que los radicales oxigenados generados
en las clulas son controlados por los sistemas de defensa celular. La excesiva generacin de
tales radicales puede exceder la capacidad protectora del sistema de defensa y conducir a la
oxidacin de los componentes celular, protenas, lpidos y DNA. Estos procesos oxidativos son
relevantes en la patognesis de enfermedades tales como arterieesclerosis y artritis reumatoide.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION

La presente invencin, tal y como se indica en su enunciado se refiere a un procedimiento para la

obtencin de extractos apolares y polares de Curcuma y las aplicaciones de estos extractos.
Las plantas del gnero Curcuma y, en especial, la Curcuma longa son plantas tropicales conocidas
desde la antigedad que pertenecen a la familia de las Zingiberceas y son originarias de Asia. Los
rizomas de Curcuma secados ya se utilizaba en Asia como condimento alimentario y como
colorante textil. Tambin se empleaban en medicina popular para el tratamiento de afecciones
estomacales.

En los ltimos aos, en la literatura cientfica han aparecido nuevas aplicaciones farmacolgicas:
actividad antibacteriana, antiinflamatoria, capacidad de peroxidacin lipdica, antihepatxico y
antitumoral.

Los extractos de Curcuma son pigmentos amari- los denominados curcuminoides,

fundamentalmente constituidos por: curcumina (diferuloilmetano), desmetoxicurcumina
(hidroxicinamoilferuloil-metano) y bisdesoxicurcumina (dihidroxicinamoilmetano).

El procedimiento de la presente invencin, para la obtencin del extracto apolar de Curcuma longa,
se caracteriza porque comprende las siguientes operaciones:

a) someter a un proceso de extraccin en continuo durante unas 48 horas, los rizomas de Curcuma
previamente cortados, secados y pulverizados, empleando un disolvente orgnico en una relacin
rizoma:disolvente de 1:7 peso/volumen, llevndose a cabo el proceso en rgimen estacionario para
evitar prdidas de disolvente, para lo cual se va regulando la temperatura del caldero de
extraccin.

b) filtrar la mezcla de extraccin resultante de la etapa (a) y evaporar el disolvente del filtrado
obtenido a presin reducida obtenindose como residuo seco una oleorresina marrn de olor
caracterstico;

c) disolver la oleorresina resultante de la etapa (b) en acetato de etilo caliente, en una proporcin
del 50% p/p y seguidamente dejar enfriar la disolucin hasta la temperatura ambiente durante unas
24 horas aproximadamente, apareciendo un precipitado anaranjado que se separa por filtracin;

d) secar a presin reducida el filtrado procedente de la etapa anterior para obtener una segunda
oleorresina ms oscura que la anterior, cuyo contenido en curcuminoides oscila entre 20 y 25%;

e) recristalizar el precipitado resultante en acetato de etilo al 50% (p/p) para obtener un slido con
una pureza en curcuminoides superior al 90%.

Por su parte, el procedimiento de la presente invencin para la obtencin de extracto polar de

crcuma longa, se caracteriza porque comprende las siguientes operaciones:

a) someter a un proceso de extraccin con agua los rizomas de Curcuma longa, previamente
cortados, secados y pulverizados, mantenindolos en maceracin durante unas 24 horas a una
temperatura comprendida entre 50 y 70 C;

b) filtrar la mezcla de extraccin resultante de la etapa (a) y evaporar el agua del filtrado as
obtenido a presin reducida, para obtener un residuo que es un slido higroscpico
correspondiente al extracto polar de Curcuma longa.
Asimismo, el procedimiento de la presente invencin se puede llevar a cabo mediante extraccin
supercrtica, para lo cual el rizoma de Curcuma, previamente cortado, secado y pulverizado se
extrae con etanol/CO2 y a una presin de aproximadamente 260 bar, para obtener el
correspondiente extracto apolar con una pureza en curcuminoides del 90%. El extracto apolar as
obtenido es idntico al obtenido mediante la extraccin con disolventes segn lo demuestran sus
datos espectroscpicos y cromatogrficos. De la misma forma, pero empleando agua como
codisolvente se obtiene el extracto polar cuya cromatografa en capa fina es totalmente coincidente
con la del extracto obtenido por maceracin en agua indicado anteriormente.

Preferentemente la obtencin del extracto apolar mencionado anteriormente, mediante extraccin

supercrtica, se lleva a cabo en las siguientes condicio nes:

- Secado de la Curcuma longa troceada a una temperatura de 50C;

- Triturado del rizoma en partculas entre 0,1 y 1 mm;

- Extraccin del rizoma de Curcuma longa utilizando etanol, modificado con una pequea cantidad
de CO2 , como disolvente, a 250 bares y 50 C

- Extraccin del etanol presente en la oleorresina con CO 2 a 280 bares y 50C.

Los extractos apolar y polar de Curcuma as obtenidos tienen capacidad captadora de radicales
libres, en concreto, de radicales hidroxilo OH y superxido O 2, como se demuestra ms adelante
por los estudios llevados realizados por los inventores al respecto. Adems, dichos extractos, como
tambin se demuestra ms adelante, tienen capacidad reductora de los niveles plasmticos de
perxidos lipdicos en humanos. Consecuentemente, tambin tienen efectos beneficiosos en
patologas relacionadas con la oxidacin celular tales como la arterioesclerosis y la artritis
reumatoide.

La presente invencin incluye tambin composiciones y preparados con capacidad captadora de

radicales libres, los cuales son efectivos contra los procesos de envejecimiento, proteccin del
material gentico y capacidad antimutagnica. Asimismo, incluye composiciones y preparados con
capacidad reductora de los niveles plasmticos de perxidoslipdicos.

Las referidas composiciones o preparados contienen como principios activos los extractos polar o
apolar de rizoma de Curcuma longa obtenidos por el procedimiento de la invencin o mezclas de
los mismos, junto con excipientes de calidad farmacutica apropiados para la administracin por
va oral.

Estos preparados orales pueden presentarse en forma slida (polvos, comprimidos, grageas,
cpsulas, etc) o lquida (jarabes o suspensiones).

De acuerdo con lo expuesto anteriormente, los presentes inventores muestran como agente
protector o captador de radicales libres, adems del extracto apolar de Curcuma longa, en el que
estn los curcuminoides, el extracto acuoso o polar de Curcuma longa en el cual no hay curcumina
ni curcuminoides. Adems, los estudios realizados por los citados inventores, demuestran que el
extracto acuoso de Curcuma longa es por s solo un potente captador de radicales libres, en
especial, superxido (O2).
La aplicacin relativa a la disminucin de los niveles de perxidos lipdicos plasmticos, est
basada fundamentalmente en la capacidad captadora de radicales libres de los referidos extractos.

Dentro del campo del estudio del envejecimiento, se deben evaluar distintas variables que
pertenecen a los mbitos de la fisiologa, de la bioqumica y de la psicologa. Los trabajos
encaminados hacia la gerontologa preventiva han desembocado en la confeccin del perfil de la
edad biolgica y estilo de vida, que pretenden ser una herramienta que evale de la forma ms
rigurosa y sencilla posible los parmetros ms sensibles en lo referente a hbitos vitales como:
Tratamiento farmacolgico, tabaco, alcohol, ejercicio, sueo, percepcin de la propia salud y
stress.

Al margen del modo de vida de la poblacin en general existen parmetros bioqumicos como
colesterol total, triglicridos, glucosa, cido rico, y HDL/coles- terol, que tambin se consideran
importantes en la evaluacin del grado de envejecimiento.

En este sentido, por la gran cantidad de informacin que genera, es interesante incluir en el perfil
de la edad biolgica, un parmetro bioqumico, que puede medirse con cierta facilidad en sangre
perifrica: los perxidos lipdicos, resultado de la oxidacin por parte de los radicales libres
derivados del oxgeno, sobre los cidos grasos poliinsaturados que forman parte de los fosfolpidos
de membrana.

Este proceso oxidativo con frecuencia excede la capacidad homeosttica de la clula, pudiendo
ocurrir un proceso de oxidacin anormal e incontrolado con una destruccin masiva de la
membrana celular. Es sabido que en la homeostasis de la peroxidacin intervienen antioxidantes
como los beta-carotenos y los tocoferoles. Por tanto, parece lgico pensar que la administracin
exgena de una sustancia antioxidante, pueda ser til para el restablecimiento de este equilibrio
celular.

Los presentes inventores, han estudiado la capacidad antioxidante de composiciones

farmacuticas a base de los extractos polar y apolar de Curcuma lonqa. por su accin sobre los
niveles sricos de malonaldehido (MDA) en humanos, como indicador de su capacidad de bloqueo
de la accin de los radicales libres de la membrana celular. Las conclusiones obtenidas de este
estudio son las siguientes:

1.- Curcuma longa es un extracto natural que disminuye los perxidos lipdicos plasmticos, lo que
implica un mecanismo protector de la membrana celular.

2.- No presenta toxicidad alguna; la toma durante 105 das de Curcuma longa no modifica las
pruebas hematolgicas hepticas y renales.

3.- El efecto a nivel de los perxidos lipideos es rpido: a los 45 das ya se detect un descenso
de los mismos, prcticamente en todas las dcadas y en ambos sexos.

4.- La inhibicin de los perxidoslipdicos y la captacin de los radicales libres, propiedades

fundamentales de la Curcuma longa. son una de las bases donde se apoyan las teoras de
envejecimiento. BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS

Figura 1: Valores de los ndices de perxidoslipdicos para los Varones del estudio.
Figura 2: Valores de los ndices de perxidoslipdicos para las Mujeres del estudio.

MODOS DE REALIZACION DE LA INVENCION

La presente invencin se ilustra adicionalmente mediante los siguientes Ejemplos, los cuales no
pretenden ser limitativos de su alcance.

EJEMPLO 1

Este ejemplo ilustra la obtencin del extracto apolar de Curcuma de la presente invencin.

Se extrajeron 13-14 kg rizoma de Curcuma seco y molido, en continuo, utilizando 70 litros de

diclorometano. La temperatura del caldern se regul hasta obtener el rgimen estacionario.

La extraccin se consider agotada despus de 48 horas.

El extracto se filtr y el disolvente se evapor a presin reducida (0,5 torr) hasta su total
eliminacin.

El rendimiento de oleorresina utilizando este procedimiento oscil entre 12-15% en base a peso de
rizoma seco de partida.

La oleorresina as obtenida se disolvi en acetato de etilo caliente (50% peso) y se dej estar a
temperatura ambiente durante 24 horas, en el transcurso de las cuales fue apareciendo un
precipitado anaranjado

(curcuminoides) que se separ por filtracin.

El filtrado se sec a presin reducida hasta obtener una segunda oleorresina ms oscura que la
anterior cuyo contenido en curcuminoides oscil entre el 20% y 25%.

El precipitado se recristaliz en acetato de etilo (50% en peso) siguiendo los pasos mencionados
anteriormente, obteniendo as curcuminoides con una pureza superior al 90%.

EJEMPLO 2

Este ejemplo ilustra la obtencin del extracto polar de Curcuma de la presente invencin.

Se extrajeron 30 Kg de rizomas de Curcuma longa molidos con 300 litros de agua a 70C en
maceracion durante 24 horas. La solucin se filtr a travs de placa filtrante y el disolvente se
evapor a presin reducida (0,5 bar) obtenindose 240 gr de un slido higroscopico. Rendimiento
8%.

EJEMPLO 3

En este Ejemplo se pone de manifiesto como se ha optimizado el proceso de extraccin utilizando

fluidos en estado supercrtico, estudiando los siguientes parmetros:
- Estabilidad trmica de los curcuminoides.

- Estudio de la temperatura de extraccin.

- Estudio de la presin de alimentacin.

- Estudio del tamao de partcula.

- Estudio de la humedad de la matriz de partida.

- Estudio del caudal del fluido supercrtico.

- Estudio del uso de etanol como cosolvente.

- Extraccin por tcnicas combinadas.

A partir de los resultados experimentales se han evaluado los costes siendo el proceso ptimo, en
el cual estn las siguientes fases:

- Secado de la Curcuma longa troceada a una temperatura de 50C.

- Triturado del rizoma en partculas entre 0,1 y 1 mm.

- Extraccin del rizoma de Curcuma longa utilizando etanol, modificado con una pequea cantidad
de CO2 como disolvente a 250 bares y 50C.

- Extraccin del etanol presente en la oleorresina con CO 2 a 280 bares y 50C.

La novedad de esta tcnica radica en la utilizacin de etanol modificado con CO 2 para la extraccin
de la Curcuma longa y por otra parte este mtodo reduce los costes para la extraccin de
curcumina frente a las tcnicas convencionales, extraccin con disolventes y/o extraccin
supercrtica con dixido de carbono.

Este mtodo de extraccin aumenta la selectividad de la extraccin de curcumina frente a los otros
curcuminoides.

- Estabilidad en la curcumina

La curcumina presente en la fraccin apolar muestra una degradacin trmica en funcin del
tiempo.

Los resultados indican una prdida de curcuminoides al aumentar la temperatura, sobre todo al
sobrepasar los 50C.

Inicialmente se produce una mayor degradacin que se estabiliza a partir de 24-48 horas de
exposicin. La degradacin se mantiene en un 2% para temperaturas inferiores a los 50C y un 4%
a 80C.
- Estudio de la temperatura de extraccin. Se ha estudiado el rendimiento de extraccin a 250 bar
con un caudal de 3 Kg/h de CO2 y un tamao de partcula entre 0,1 y 1 mm a 35C, 40C, 50C,
55C, obtenindose los mejores rendimientos a 55C.

- Estudio de la presin de alimentacin.

Se ha estudiado el rendimiento de extraccin a distintas temperaturas (30C, 40C, 50C) y

distintas presiones (100 bar, 150 bar, 200 bar, 250 bar) con un caudal de 3 Kg/h de CO2 y un
tamao de partcula entre 0 , 1 y 1 mm. Para todas las temperaturas estudiadas el rendimiento
mximo obtenido ha sido a 250 bares de presin.

- Estudio del tamao de partcula.

Se ha estudiado el rendimiento de extraccin a 50C, 250 bar, y un caudal de 3 Kg/h de CO 2 para

distin tos tamaos de partcula.

El mximo rendimiento se obtuvo para tamaos de partcula entre 0,1 y 1 milmetro.

- Estudio de la humedad de la matriz de partida.

Se ha estudiado el rendimiento de extraccin a partir de distintas muestras de rizoma de Curcuma

con diferente grado de humedad (80%, 50%, 8%). El mayor rendimiento en curcumina se obtiene
trabajando con una humedad en la matriz de partida de 8%, por lo que para la obtencin de la
fraccin apolar el proceso de extraccin se efecta con el sistema deshidratado.

- Estudio del caudal del fluido supercrtico. Se ha observado que conforme disminuye el caudal de
disolvente la aparicin de efectos difusionales se retrasa, aumentando el efecto de solubilidad e
incrementando el rendimiento de extraccin. Por otro lado, caudales excesivamente pequeos y/o
grandes aumentan el tiempo de extraccin.

- Extraccin mediante etanol y dixido de carbono supercrtico.

Se ha estudiado el rendimiento en curcuminoides extrayendo la Curcuma con diferentes

proporciones de cosolvente (etanol) en CO2.

El mayor rendimiento en oleorresina se obtuvo utilizando etanol al 96% con un 4% de CO 2 ,

obtenindose un rendimiento en oleorresina del 11,42% (con un 43% en curcuminoides) que
significa un 98% de la cantidad total de la oleorresina en el producto inicial y un rendimiento del
100% en curcuminoides totales.

- Extraccin mediante tcnicas combinadas.

A partir de extracciones supercrticas a partir de oleorresinas de Curcuma longa obtenidas por

extraccin con disolvente. Se observ que la extraccin era muy rpida al principio pero que iba
ralentizndose con el tiempo por solidificacin de la oleorresina. Este slido tena un aspecto
apelmazado y estaba formado por partculas muy finas.

El extracto tena como principal componente el disolvente utilizado en la extraccin.

En estos ensayos se observ la existencia de un efecto cosolvente grande, ya el extracto obtenido
se volvi a introducir en el equipo para ver si se poda fraccionar y se observ que era muy poco
soluble en CO2 supercrtico.

Se obtuvo una oleorresina con etanol y CO296- 4% a 250 bar y a 50C y posteriormente esta
oleorresina se extrajo a 280 bar, 50C y usando un caudal de 3 Kg/h de CO 2.

La oleorresina slida obtenida mostr un rendimiento similar al rendimiento obtenido por mtodos
convencionales pero se aument en la selectividad de la extraccin de la oleorresina en la
extraccin con etanol frente a la extraccin con disolventes orgnicos. Los resultados se muestran
a continuacin.

Curcumina % Demetoxi % Bisdemetoxi % Oleorresina 34,50% 29,50% 36,00% obtenida por

mtodos convencionales

Oleorresina 72,36% 17,76% 9,88% obtenida

con EtOH

- Estimacin de costes.

A partir de los estudios anteriores se ha realizado una estimacin de costes estudiando diferentes
supuestos, calculando el coste por Kg de curcumina. Los diferentes supuestos son:

a.- Partiendo de Curcuma longa y extrayendo la oleorresina mediante CO2 en estado supercrtico.

1.- Caudal de 3 Kg/h y densidad aparente de la Curcuma de 0,413 Kg/l. Supuesto 1.1.

2.- Caudal de 3 Kg/h y densidad aparente de la Curcuma de 0,573 Kg/l. Supuesto 1.2.

3.- Caudal de 1 Kg/h y densidad aparente de la Curcuma de 0,413 Kg/l. Supuesto 1.3.

b.- Utilizando como materia prima la Curcuma longa y extrayendo la oleorresina mediante un
proceso en lotes utilizando como disolvente una mezcla de etanol/dixido de carbono a presin
elevada. Supuesto 2.

c.- Partiendo de oleorresina extrada con disolventes orgnicos por mtodos convencionales y
extrayendo los disolventes presentes mediante CO2 en estado supercrtico. De esta manera se
obtiene una oleorresina slida ms concentrada en curcumina. Supuesto 3.

d.- Partiendo de oleorresina extrada con etanol/CO2 a alta presin y extrayendo el etanol presente
mediante CO2 en estado supercrtico. De esta manera se obtiene una oleorresina slida todava
ms concentrada en curcumina que la anterior. Supuesto 4.

e.- A partir de Curcuma longa y extrayendo la oleorresina utilizando etanol en una extraccin
soxhlet. Supuesto 5. f.- A partir de Curcuma longa y extrayendo la oleorresina mediante CO 2 SC
modificado con etanol.
1.- Proporcin de etanol en el disolvente del 17%. Supuesto 6.1.

2.- Proporcin de etanol en el disolvente del 34%. Supuesto 6.2.

Operacin.

Para realizar la estimacin de costes, se ha considerado una eficacia del 90% del total de la
operacin.

Se observa que el supuesto ms favorable es el supuesto nmero 4 en el que se extrae el rizoma

de Curcuma longa con etanol a presin y posteriormente la oleorresina se purifica por extraccin
con CO2.

Instalacin.

Para poder llevar a cabo la obtencin de curcumina a partir de su oleorresina, se necesitan dos
extractores y dos separadores, provistos de camisas de calefaccin.
El equipo deber ir equipado con una bomba con refrigeracin interna, capaz de suministrar
presiones de 300 bar. Adems, se necesita un refrigerador para licuar el CO2 que sale del segundo
separador y as poder recircular el CO2abaratando costes de operacin.

El hecho de tener dos extractores es para poder realizar un proceso semicontnuo de extraccin,
ya que durante los tiempos muertos de carga y descarga y presurizacin de la unidad, el proceso
puede seguir funcionando con el otro extractor.

La planta deber ir equipada con un sistema de control de presin y temperatura en el extractor y

separadores, caudal y temperatura del refrigerador. Adems, se deber instalar un sistema de
alarmas de presin y temperatura en los extractores, separadores y camisas de calefaccin, as
como el refrigerador para evitar cualquier accidente.

EJEMPLO 4

Este Ejemplo ilustra una composicin de acuerdo con la presente invencin, para su administracin
por va oral, en forma de comprimidos constituida por:

- Curcuminoides............................................... 15 mg

- Extracto acuoso de Curcuma.................175 mg

- Avicel pH 102............................................. 489 mg

- Almidn........................................................... 45 mg

- Estearato de magnesio................................ 8 mg - Primogel.................................................... 3 mg

- EM compres............................................................ 15 mg

EJEMPLO 5

Este Ejemplo ilustra una composicin lquida, de acuerdo con la presente invencin, para su
administracin por va oral, en forma de emulsin, constituida por:

- Curcuminoides........................................................ 20 mg

- Extracto acuoso de Curcuma........................ 200 mg

junto con cantidades variables de agentes edulcorantes (por ejemplo, sacarosa o fructosa) y de
agentes saborizantes

(por ejemplo, esencias de menta o de fresa) y de aceites vegetales en cantidad suficiente para 100
mi de emulsin.

Los siguientes Ejemplos corresponden a los estudios efectuados sobre los extractos de la
invencin, dirigidos a determinar y evaluar su capacidad captadora de radicales libres, as como su
capacidad reductora de perxidoslipdicos.
EJEMPLO 6

Estudio de la capacidad captadora del radical superxido (O 2 ) por el mtodo del pirogalol.

Se ha estudiado la autoxidacin del pirogalol tras un perodo de induccin de 20 segundos, y

durante 2 minutos, tiempo en el que el incremento de absorbancia es lineal a 420 nm. Se emplea la
inhibicin de la autoxidacin del pirogalol por los extractos de crcuma, para determinar la
capacidad captadora sobre el radical O2 .

La experiencia se realiza a 25 C. El pirogagol se vehiculiza en cido clorhdrico 10 mM. La

reaccin se inicia cuando se aade a una solucin tampn Tris-cido cacodlico saturada con aire,
pH 8,2 que contiene 1 mM de

DTPA el pirogalol. El DTPA es utilizado como quelante para eliminar posibles interferencias de
iones como hierro, cobre o manganeso.

Para los extractos apolares de crcuma se encontr un porcentaje de inhibicin del 40,92% 0,002
(p < 0,01) a una concentracin de 16, 129g/mL en curcuminoides, mientras que la inhibicin de la
SOD es del 95%. EJEMPLO 7

Estudio de la capacidad captadora del radical hidroxilo (OH) por el mtodo del DMSO.

Capacidad captadora del radical hidroxilo por el test del DMSO.

Se ha estudiado la capacidad captadora de radicales libres hidroxilo (OH) por medida del
formaldehdo generado durante la oxidacin del DMSO; potente captador de radicales hidroxilo por
el sistema cido ascrbico/Fe+3. La oxidacin se desencadena por el ascorbato y se cataliza de por
el Fe+3 a 37 C. La mezcla de reaccin est formada de EDTA (0,1 mM), complejo Fe +++ EDTA
(1:2) (167 M) DMSO (33 mM), extracto problema y tampn fosfato 50 mM pH 7,4 en un volumen
final de 3 mL.

Se adiciona el cido ascrbico (2 mM) y despus de 30 minutos de incubacin a 37 C, la reaccin

se detiene con 1 mL de cido trifluoractico al 17,5% (p/v), y se mide en una alcuota de 1,5 mL
mediante espectrofotometra.

Se utiliza la competencia entre el extracto problema y el DMSO por el radical hidroxilo (OH)
generado procedente del sistema ascrbico/hierro, para la estimacin de la actividad captadora del
radical hidroxilo OH de la sustancia problema, expresndola como el porcentaje de inhibicin de la
produccin de formaldehido.

El protocolo seguido es el siguiente:

Be: Blanco del control

C: Control

Bp: Blanco problema

P: Problema

El formaldehido producido se mide en la reaccin anterior por adicin de 2 mL de una mezcla

reactiva de acetato amnico y acetil acetona en tampn fosfato 50 mM pH 7,4, sobre una alcuota
de 1,5 mL. La mezcla se incuba a 58 C durante 5 minutos y seguidamente las muestras se
sumergen en un bao de hielo, y se mide la 3,5-diacetil-1,4-dihidrolutina formada a 412 nm.

Los resultados obtenidos fueron: para la mezcla de curcumoides, extracto apolar, fue del

95,13 2,46% (P < 0,01, n = 6) siendo la concentracin de la muestra 16,129 g/mL.

EJEMPLO 8

Estudio de la capacidad captadora del radical superxido (O2 ) por el mtodo NADH-
fenazinametosulfato- O2-azul de nitrotetrazolio (NBT).

Se estudia la capacidad captadora de radicales libres superxido por la inhibicin de la formacin

de diformarn, compuesto altamente coloreado que presenta un mximo de absorcin a 560 nm.
La mezcla de reaccin est compuesta por tampn fosfato 19 mM pH 7,4 NADH (90M), NBT
(43M), extracto a ensayar (vehculo para el blanco), pH 5 (2,7M), todo ello en un volumen de 3,1
mL. La reaccin de reduccin del NBT se inicia con la adicin del PMS y es seguida
espectrofotomticamente, por medida de la absorban- cia a 560 nm y a 20 C durante 2 minutos
para calcular el incremento de absorbancia por ( A/min). El siguiente esquema muestra el
protocolo seguido:
Be : Blanco del control

C: Control

Bp: Blanco problema

P: Problema

Se obtienen los porcentajes de inhibicin para el extracto polar de Smilax Lundeli para 5 muestras
con una concentracin de 500g/mL, que es del 99,6 0,1 % para p < 0,01.

EJEMPLO 9

Estudio de la capacidad captadora del radical superxido (O 2 ) por el mtodo Xantina-Xantina

oxidasa.

Se ha estudiado la capacidad captadora del radical superxido de la fraccin polar de Curcuma

longa por el mtodo de la xantina-xantina oxidasa producindose una inhibicin del 77,95% para
una concentracin final de 1,25 g/mL en curcuminoides. Se ha comprobado que el extracto no
inhibe a la enzima, indicando esto que este extracto es un poderoso captador de radicales
superxido. EJEMPLO 10

Estudio de los efectos de los extractos de Curcuma lonqa en los niveles de perxidos lipdicos en
sangre en humanos.

Este ejemplo pretende demostrar la accin, sobre los niveles plasmticos de perxidoslipdicos, de
una composicin farmacutica a base de extractos polares y apolares, de Curcuma longa. cuando
es administrada por va oral, en forma de dos comprimidos diarios conteniendo de 7 a 14 mg de
curcumina por comprimido y de 150 a 175 mg de extracto acuoso de Curcuma longa. a un conjunto
de sujetos de ambos sexos sanos, durante un perodo de dos meses y medio. COMPOSICION DE
LOS COMPRIMIDOS DEL PRESENTE EJEMPLO

mg/comprimido

Extracto apolar de Curcuma longa ...................... 60*

Extracto polar de Curcuma longa .................. 175

Avicel pH 102 .......................................... 489

Almidn de maz ................................. 45

Estearato de magnesio ................................ 8

Primogel ................................................ 3

EM Compress ........................ ................ 15

* Equivalente a 12,5 mg de Curcuminoides

METODO

Se ha estudiado una poblacin de 19 varones y 13 mujeres de edades comprendidas entre 27 y 74

aos, tal y como se indica en la siguiente Tabla 1:

TABLA 1: Numero de sujetos estudiados distribuidos por edades y sexo.

Hombres

A estos sujetos, se les extrajo sangre perifrica para la determinacin del hemograma completo, de
los parmetros de evaluacin de la funcin heptica y renal; asimismo se realiz la determinacin
de la tasa de lpidos y de perxidoslipdicos en suero.

Tras el conocimiento de los resultados, se inici el tratamiento consistente en dos comprimidos

diarios de extracto de Curcuma longa. con el siguiente protocolo: segunda extraccin a los quince
das tras la administracin, con la determinacin de los parmetros antes citados. Se mantuvo el
seguimiento del protocolo, repitiendo la analtica a los cuarenta y cinco y setenta y cinco das del
inicio del estudio. Tras cumplirse este protocolo se procede a un perodo de descanso en la
administracin, de treinta das de duracin, tras los que se vuelven a determinar los parmetros
antes reseados . METODOS ANALITICOS

El hemograma fue realizado en un analizador H-1 de Technicon (USA) .

Los parmetros bioqumicos fueron realizados siguiendo los mtodos estandarizados con reactivos
de Boehringer-Mannheim (Alemania), con un autoanalizador Hitachi 717 (Japn).
Los perxidoslipdicos se determinaron como malonaldehido (MDA) por el mtodo de Ohkama,
Ohishi y Yagi (Analytical Biochem. 95 351-358 (1979)), modificado para suero.

RESULTADOS

Los pacientes no refirieron a lo largo del protocolo ninguna de las siguientes manifestaciones:
disfagia, pirosis, nauseas, vmitos, diarrea o estreimiento.

No se observaron alteraciones ni en el hemograma ni en los parmetros bioqumicos, en toda la

poblacin estudiada, sin distincin de sexo ni edad. Se observ que los enzimas marcadores de la
funcin heptica, (GOT, GPT, GGT, fosfatasa alcalina) como indicadores de la toxicidad del
producto y la bilirrubina total, directa e indirecta, no se ven alterados a lo largo de todo el proceso,
como puede apreciarse en la siguiente Tabla 3. En dicha Tabla 3 se muestran los valores iniciales
y finales de GOT, GPT, GGT y fosfatasa alcalina distribuidos por grupo

s de edad en funcin del sexo. Se indican la media y la desviacin standard. Las unidades en dicha
Tabla son las siguientes:

(a) Tiempo Inicial = Tiempo 0

(b) Tiempo Final = a los 105 das del inicio

(c) Valores de referencia para el mtodo analtico indicado.

Como se refleja en la Figura 1, a los 15 das del tratamiento, se observ en los varones una
disminucin en torno al 8% en la tasa de perxidos lipdicos, mientras que a los 45 das del
comienzo del tratamiento, la disminucin alcanza un valor medio de 34%, de manera que la
variacin con respecto a la situacin a los 15 das del conjunto de los varones sujetos al estudio
ser de 59%. En las mujeres, a los 15 das se encontr un aumento medio en la tasa de perxidos
lipdicos (de un 26%), (Fig. 2): sin embargo, al cabo de los 45 das, la disminucin de la tasa de
perxidos es ms evidente (disminuye un 11% de promedio), abarcando prcticamente a la
totalidad de los sujetos; estos resultados implican una disminucin promedio a los 45 das con
respecto a la situacin de las mujeres sujetas al estudio a los 15 das, de un 80%.
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REIVINDICACIONES:
1.- Procedimiento para la obtencin de extractos apolares y polares de Curcuma,
caracterizado porque (I) para la obtencin del extracto apolar de Curcuma longa se efectan
las siguientes operaciones:
(a) someter a un proceso de extraccin en continuo durante unas 48 horas, los rizomas de
Curcuma previamente cortados, secados y pulverizados, empleando un disolvente orgnico
en una relacin rizoma:disolvente de 1:7 peso/volumen, llevndose a cabo el proceso en
rgimen estacionario mediante regulacin de la temperatura;
(b) filtrar la mezcla de extraccin resultante de la etapa (a) y evaporar el disolvente del
filtrado obtenido a presin reducida obtenindose como residuo seco una oleorresina
marrn de olor caracterstico;
(c) disolver la oleorresina resultante de la etapa (b) en acetato de etilo caliente, en una
proporcin del 50% p/p aproximadamente y seguidamente dejar enfriar la disolucin hasta
la temperatura ambiente durante unas 24 horas aproximadamente, apareciendo un
precipitado anaranjado que se separa por filtracin;
(d) secar a presin reducida, el filtrado procedente de la etapa anterior para obtener una
segunda oleorresina ms oscura que la anterior, cuyo contenido en curcuminoides oscila
entre 20 y 25%;
recristalizar el precipitado resultante en acetato de etilo al 50% (p/p) aproximadamente,
para obtener un slido con una pureza en curcuminoides superior al 90%;
y porque (II) para la obtencin del extracto polar de Curcuma longa se efectan las
siguientes operaciones:
(a') someter a un proceso de extraccin con agua los rizomas de Curcuma longa,
previamente cortados, secados y pulverizados, mantenindolos en maceracin durante unas
24 horas a una temperatura comprendida entre 50 y 70 C; (b') filtrar la mezcla de
extraccin resultante de la etapa (a) y evaporar el agua del filtrado as obtenido a presin
reducida, para obtener un residuo que es un slido higroscpico correspondiente al extracto
polar de Curcuma longa;
y porque (III) tambin es posible llevar a cabo las extracciones mediante la tcnica de
extraccin supercrtica empleando etanol/CO2 y a una presin de aproximadamente 260 bar
para obtener el correspondiente extracto apolar con una pureza en curcuminoides del 90%;
o empleando agua como codisolvente en las mismas condiciones para obtener el extracto
polar.
2 . - Procedimiento segn la reivindicacin 1, caracterizado porque la extraccin
supercrtica del extracto apolar se efecta con rizoma de Curcuma longa secado a unos
50C y triturado a un tamao de partcula de 0,1-1 mm, llevndose a cabo la extraccin con
etanol, modificado con una pequea cantidad de CO2 como disolvente a 250 bares y 50C.
3.- Aplicacin de los extractos apolar y polar obtenidos por el procedimiento de la
reivindicacin 1, para la fabricacin de composiciones y preparados tiles como agentes
captadores de radicales, y agentes antienvejecimiento.
4.- Aplicacin segn la reivindicacin 3, del mencionado extracto polar, para la fabricacin
de composiciones captadoras de radicales superxido.
5.- Aplicacin de los extractos apolar y polar obtenidos por el procedimiento de la
reivindicacin 1, para la fabricacin de composiciones y preparados tiles como agentes
reductores de los niveles plasmticos de perxidoslipdicos en humanos.
6.- Aplicacin de los extractos apolar y polar obtenidos por el procedimiento de la
reivindicacin 1, para la fabricacin de composiciones y preparados con efectos
beneficiosos en patologas relacionadas con la oxidacin celular.
7.- Aplicacin segn la reivindicacin 6, caracterizada porque dichas patologas son
arterieesclerosis y artritis reumatoide.
8.- Aplicacin segn las reivindicaciones 3 a 7, caracterizada porque la referida
composicin es oralmente administrable y puede ser slida o lquida.