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Presentacin

Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Presentacin
Bio-Aventura es un programa de educacin que invita a descubrir
y explorar el mundo de la biotecnologa agrcola, dirigido a maes-
tros de educacin secundaria, nios y nias, tanto en zonas rura-
les como urbanas. Este programa definido como la Exploracin al
Mundo de la biotecnologa agrcola ha sido concebido como una
manera de entender el uso, impacto, potenciales riesgos y benefi-
cios de la biotecnologa agrcola.

Ha sido creado para introducir, ampliar y fortalecer las bases del


conocimiento y la comprensin de los docentes y estudiantes
sobre esta aplicacin tecnolgica. Bio-Aventura busca abrir espa-
cios que faciliten el entendimiento de la sociedad y el mejora-
miento de la formacin de los docentes, principales promotores y
multiplicadores del conocimiento, en relacin con los nuevos
avances tecnolgicos logrados a partir de las ciencias biolgicas.

A travs de la exploracin en el mundo de la biotecnologa agrco-


la el docente cuenta con una nueva fuente de material de capaci-
tacin con contenidos cientficos y de fcil comprensin, con
herramientas guas para que la biotecnologa vegetal sea una
ciencia ms VIVA, que puede ser introducida en forma didctica y
sencilla en los contenidos temticos escolares. Como punto de
partida para el desarrollo temtico, se inicia desde la base del
conocimiento con el objeto de lograr un mejor entendimiento de
los conceptos y en el transcurso del programa se presenta un
carcter integral de la informacin.

Lo ms importante para Bio-Aventura es permitir a los docentes y


alumnos, viajar por el mundo de la biologa vegetal moderna,
guiados pero libres, para explorar esta nueva experiencia y permi-
tir el anlisis y razonamiento como vehculo para lograr una real
apropiacin del conocimiento.

Los invitamos a explorar y descubrir la naturaleza desde una


perspectiva tecnolgica, que les permitir acercar los desarrollos
cientficos a la cotidianidad a travs de una divertida Bio-Aventura.

1/ Presentacin
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

ISBN 958-33-6854-7
Mdulo 1

Mdulo 1

Viaje al interior de
la clula
Introduzcmonos al interior de la clula y familiaric-
monos con las estructuras y procesos importantes
para su funcionamiento. Centremos nuestra atencin
en las molculas y componentes responsables de la
informacin hereditaria involucradas en la expresin
de las caractersticas de los seres vivos.

Contenido
4 La clula
y sus estructuras

11 de la vida
El ADN es la molcula

18 Del gen a la protena


Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia

Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola
3
Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola
Dinmica:

La clula
y sus estructuras DINMICA

Exploracin
OBJETIVO de Preconceptos
1. Identificar las estructuras celulares de especial inters en la
biotecnologa vegetal y sus principales funciones.
Materiales:

2. Reconocer las diferencias entre las clulas procariotas y


Tiras de papel con los nombres de las
eucariotas para un mejor entendimiento de la complejidad estructuras celulares
de stas y la importancia de su material gentico. Baln de icopor grande dividido en dos
mitades
Tarros de plastilina de colores
SECUENCIA Palillos y palos de pincho
Pelotas de icopor de diferentes tamaos
Membrana celular - Citoplasma - Organelos - Material gentico
Globos redondos y largos

Contexto
CONTENIDOS
1. Teora celular Imagnese que el baln de icopor es una
2. Clulas: procariotas y eucariotas clula. Coloque las tiras de papel enrolladas
con los nombres de los componentes de las
clulas en una de las mitades del baln de
icopor. Extraiga por parejas o grupos una tira
Teora Celular de papel e identifique el organelo o estructura
En 1839 el botnico Mattias Schleiden y el zologo Theodor celular que le corresponda representar.
Schwan formularon la teora que todos los seres vivos estn
Represente con los materiales suministrados,
formados por clulas. Sin embargo, fue necesario esperar 50
cada organelo. Presntela al grupo y ubquela
aos para que los cientficos entendieran otros conceptos bsi-
en la clula, utilizando para esto el baln de
cos de la clula. Las clulas vivas son producidas por otras icopor. Cuando todos los organelos hayan
clulas vivas, La ms pequea unidad viviente en estructura y sido ubicados, una las dos mitades del baln.
funcin es la clula y Todos los organismos vivos estn consti- Tenga presente que ciertos organelos estn
tuidos por una o ms clulas. Con base en estos tres conceptos estrechamente interrelacionadas en su funcio-
nace la teora celular. namiento, de lo cual depende su ubicacin
(por ejemplo el retculo endoplasmtico es
contiguo al ncleo).
La idea de que la clula representa la unidad de la vida, es
un concepto que con el transcurso de los aos ha sido apoya- Reflexin
do de acuerdo con las siguientes evidencias:
La clula, mnima unidad de todo ser vivo, es
1. Todos los seres vivos existen en alguna forma celular una estructura tridimensional que est confor-
mada por un conjunto de organelos con
2. Toda clula proviene de la divisin celular de otra clula pre-
funciones especficas, para mantener viva a
existente
la clula. La clula est separada del ambiente
3. La informacin hereditaria pasa de la clula progenitora circundante por la membrana celular y en su
a la clula hija interior estn distribuidas los organelos.

Ideas para discutir con los estudiantes:


Son los virus organismos vivos?

Claves para el docente:


Los virus no son organismos vivos, son estructuras moleculares consti-
tuidas por un cido nucleico y un cpside proteica que necesitan de un
organismo vivo (clula) para poder multiplicarse.

4/ La clula y sus estructuras


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Clulas: procariotas y eucariotas

Las clulas pueden ser agrupadas en dos grandes grupos: procariotas y eucariotas, siendo mucho
ms antiguas las procariotas. Las clulas procariotas precedieron a las eucariotas en 2 mil millones
de aos, aproximadamente. Estos trminos fueron propuestos en 1920 por E. Chatton, pero sola-
mente 30 aos ms tarde fueron aceptados.

Una breve historia de la vida en la tierra

4.500 millones de aos Se form la tierra


3.500 millones de aos Surgen primeras formas de vida - clulas procariotas
1.500 millones de aos Surgen clulas nucleadas - clulas eucariotas
500 millones de aos Explosin Cmbrica - Surgen organismos multicelulares - clulas eucariotas

La clula procariota es un organismo unicelular con


toda la maquinaria necesaria para su buen funcionamiento;
un ejemplo de ellas son las bacterias. Tiene una pared
celular que protege y da soporte a la clula y una membra-
na plasmtica que separa el interior de la clula de su am-
citoplasma biente externo, regulando el paso de materiales hacia
adentro o hacia fuera. Su material gentico (ADN)
nucleoide
(ADN)
es circular, de doble cadena representa-
do en un cromosoma que se en-
grnulo de alimento cuentran libre en el citoplasma, en
un sitio denominado nucleoide
plsmido (ADN)
(regin con ADN), que no se
ribosomas
separa del resto de la clula
conformando un ncleo
(como en las eucariotas).
flagelo
(procaritico) Adicionalmente, algunas
clulas procariotas pueden
presentar un ADN
extracromosmico, conocido como
plsmido. Los plsmidos son secuencias
de ADN circular, muy cortas, capaces de
transferir informacin gentica de una clula a otra.

Las funciones metablicas en este tipo de clulas se desarro-


membrana plasmtica pilus o
llan en la membrana celular o en el citoplasma, en el que se
fimbria
pared celular encuentran complejos moleculares (por ej. grnulos de
cpsula o
alimento) y en donde se localizan tambin algunas estructu-
capa
ras como los ribosomas, que intervienen en la sntesis de
mucilaginosa
protenas.

TAnto las clulas procariotas como las clulas eucariotas, se


encuentran organizadas en compartimentos, conformados
por estructuras internas membranosas denominadas
organelos. A manera de espacios independientes, cada uno
de ellos se especializa en funciones especficas.

5/ La clula y sus estructuras


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Las clulas eucariotas componen la mayor parte de Clula animal


los organismos vivientes y se encuentran en los reinos
protista (ej. paramecium, amoeba); hongos (ej. levadura);
vegetal (ej. musgos, helechos, conferas, plantas con flores) y cromatina (ADN)
animal (en este reino se incluye el hombre). envoltura nuclear ncleo

En las clulas eucariotas se pueden distinguir dos grandes nucleolo


regiones: el citoplasma y el ncleo. La membrana celular aisla
la clula de su ambiente exterior y controla el paso de sustan-
cias. En clulas vegetales existe una pared celular que le da
soporte a la clula. mitocondria

En el citoplasma de las eucariotas se encuentran los organelos


(ej. retculo endoplasmtico liso y rugoso, aparato de golgi,
ribosomas, mitocondrias, cloroplastos -en clulas vegetales-, centrolo
vacuolas y vesculas, etc.). El citoplasma no corresponde a
una simple solucin acuosa en la cual flotan las organelos,
sino que tiene estructuras filamentosas o citoesqueleto con-
formando un esqueleto interno. El citoesqueleto membrana
plasmtica
da sostn a la clula y permite una distri-
bucin organizada de los organelos al
interior de sta y facilita los movimientos
celulares.

filamentos intermedios

citoplasma

vescula

ribosomas

aparato de Golgi

microtbulos

lisosoma
retculo
endoplasmtico
rugoso

retculo
endoplasmtico
liso

6/ La clula y sus estructuras


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

A diferencia de las procariotas el material gentico (ADN) en Cuadro comparativo de estructuras y organelos
las clulas eucariotas se encuentra rodeado por una membra-
na nuclear, conformando el ncleo. Esta separacin fsica de ESTRUCTURA BACTERIA PLANTA ANIMAL
Ncleo - + +
la informacin gentica del resto de la clula, genera conse-
Membrana celular + + +
cuencias importantes para su funcionamiento, en especial en
Pared + + -
los procesos de transcripcin (sntesis de ARN a partir del
ADN + + +
ADN en el ncleo) y traduccin (lectura del ARN y forma- Plsmidos + - -
cin de cadenas proteicas en los ribosomas en la regin ADN asociado a protenas - + +
citoplasmtica), que sern tratadas ms adelante. La organi- Mitocondrias - + +
zacin del material gentico en las clulas eucariotas es ms Ribosomas + + +
compleja que la procariotas, debido a que cuentan con infor- Aparato de Golgi - + +

macin de 100 a 1000 veces ms importante en tamao, Retculo endoplasmtico - + +


Cloroplastos - + -
aunque no en nmero de genes.

La clula vegetal

cloroplastos aparato de Golgi


cromatina (ADN)
mitocondria
envoltura nuclear ncleo

nucleolo

pared celular

microtbulos

membrana
plasmtica

retculo
endoplasmtico
liso

ribosomas
retculo
endoplasmtico
rugoso

vacuola

filamentos intermedios

7/ La clula y sus estructuras


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Revisados los conceptos anteriores, entremos a explorar


con ms detalle el citoplasma y los principales organelos mitocondria
de la clula eucariota:
cloroplastos

Como ya se plante, en el citoplasma se encuentran


algunos organelos delimitados por su membrana
como son la mitocondria y el cloroplasto (en
clulas vegetales):

Las mitocondrias constituyen la central energti-


ca de la clula. Son de forma ovalada, tienen
doble membrana y su funcin es la respiracin
celular. Emplean el oxgeno que proviene del
medio y rompen las molculas con enlaces
altamente energticos como la glucosa, para
liberar la energa utilizable para las actividades
celulares en forma de Adenosin Trifosfato (ATP),
moneda energtica de la clula. En caso necesa-
rio pueden a partir de compuestos intermedios
(cidos grasos y protenas), generar tambin ATP.
Los cloroplastos se presentan slo en las clulas
vegetales, son los organelos responsables de la
fotosntesis, proceso en el cual la energa lumnica del
sol es atrapada y utilizada para la sntesis de compuestos
ricos en energa como la glucosa.

Origen de los organelos


Evolucin de los organelos
Se cree que tanto las mitocondrias como los
ADN del cloroplastos aparecen en el proceso evolutivo
husped
eubacterios de las clulas como consecuencia de un evento
ancestral
simbitico (relacin de dos organismos para
ncleo
mutuo beneficio), cuando clulas procariotas
que cumplan funciones similares a las
cloroplastos
mitocondrias actuales o a la de los cloroplastos,
se alojan clulas ms grandes y permanecen en
el interior de stas sin ser digeridas. As las
clulas ms grandes les brindaron proteccin y
nutrientes a las ms pequeas y a su vez estas
cianobacteria
mitocondrias ltimas, les suministraron a las clulas grandes,
energa a travs de un proceso similar a la
respiracin celular y la fotosntesis.

Ideas para discutir:


Comparar clulas procariotas y eucariotas Por qu las clulas eucariotas no desplazaron a las
procariotas, cuando aparecieron en la tierra?

Claves para el docente:


Los dos tipos de clulas son diferentes e importantes en lugares especficos. Aunque las clulas
eucariotas pueden ser ms complejas que las procariotas, el funcionamiento bsico de ambas es
similar. Ambas tienen adaptaciones evolutivas especficas que les ha permitido sobrevivir y perma-
necer exitosamente en ambientes especficos

8/ La clula y sus estructuras


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

En el citoplasma se ubican otras estructuras


membranosas como el retculo endoplasmtico,
asociado a la sntesis de protenas y de lpidos y el
aparato de golgi, asociado a la clasificacin, altera-
cin qumica y ensamblaje de biomolculas como Ribosomas
por ej. la formacin de glucolpidos y
glucoprotenas, etc. Igualmente se encuen-
tran vesculas membranosas en las cuales Subunidad
las sustancias producidas o no en la clula grande
viajan hacia el interior o exterior de la
clula, los lisosomas tipo de vescula relati-
vamente grande con enzimas para la diges-
tin intracelular. Las vacuolas alimenticias
vesculas con partculas de alimento a las 5 3
cuales se unen los lisosomas para digerirlo,
peroxisomas vesculas grandes con A G G A U G G C G
enzimas encargadas de la degradacin del
perxido de hidrgeno, que es altamente U A C
txico para la clula y resulta del metabo-
lismo celular. En las clulas vegetales se
P
encuentra una gran vacuola central con Subunidad
solucin acuosa y desechos, que le da pequea
presin de turgencia en su interior y le
proporciona soporte a la clula.

Otros organelos son los ribosomas los


cuales pueden estar temporalmente libres en el
cromatina (ADN)
citoplasma o se asocian al retculo endoplsmico
envoltura nuclear ncleo
(RE rugoso). Los ribosomas estn constituidos por
dos unidades la subunidad pequea y la grande y
nucleolo
participan en la sntesis de protenas.

Ahora conozcamos la otra gran regin


de la clula eucariota: El Ncleo

El ncleo est conformado por una


envoltura nuclear y en su interior
se encuentran los cromosomas,
compuestos por el cido
desoxirribonucleico ADN. En
eucariotes el ADN est rodeado de
protenas histonas y no histonas,
que lo protegen y estabilizan. En
el ncleo se encuentra codificada
la informacin gentica que pasa
de una clula progenitora a la clula
hija. En la siguiente seccin se
profundizar sobre esta temtica.

9/ La clula y sus estructuras


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Ideas para discutir con los estudiantes:


Compare una bacteria (clula procariota) con una clula vegetal (clula eucariota), considerando entre
otros aspectos su material gentico. Por qu una bacteria puede ser un vehculo para transmitir la
informacin gentica a otra clula?

Claves para el docente:


Las clulas bacterianas son organismos ms verstiles que las clulas vegetales. Adicionalmente, las
bacterias presentan un plsmido, que es el elemento gentico capaz de transferirse de un organismo a
otro en procesos diferentes a la divisin celular, (conjugacin y transformacin), por ello representan
una herramienta fundamental en la transformacin gentica.

Repaso de Conceptos Claves: La Clula

Existen clulas procariotas y eucariotas cada una con diferentes niveles de complejidad.

La clula procariota presenta estructuras genticas extracromosomales independientes, llamadas


plsmidos.

La clula eucariota esta constituida por dos grandes regiones intracelulares: citoplasma y ncleo.

Taller de comprensin de la seccin para realizar con los estudiantes

Metas de Comprensin

Los niveles de complejidad de los diferentes tipos de clulas, segn sus estructu
ras, organelos y funciones

El uso de las bacterias como vehculos para la transferencia de informacin de


una clula a otra

1. Materiales

Papel peridico o cartulina de diferentes colores, marcadores o lpices de colores, tijeras,


cinta adhesiva

Procedimiento

Asignar por grupos los roles de cada organelo de la clula. Cada grupo representar con
el papel o la cartulina el organelo que le correspondi y que le servir a su vez como un
escudo distintivo para los integrantes del grupo. Hacer una pequea representacin
teatral, con el profesor genial viajando al interior a travs de la clula procariota y
eucariota.

2. Construccin de una clula


- Gelatina
- Bolsas resellables
- Dulces, gomas

10/ La clula y sus estructuras


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

El ADN es la molcula
de la vida
El ADN es el material gentico responsable de la herencia y
de las caractersticas fsicas y metablicas de un organismo.
Sus unidades bsicas de informacin son los genes.

OBJETIVOS
1. Identificar las principales caractersticas y organizacin de
las molculas responsables de la herencia (ADN, ARN y
protenas).

2. Comparar el nivel de complejidad del genoma de


eucariotas en relacin con el genoma de procariotas.

SECUENCIA
ADN - Cromosoma - Gen - Genoma

DINMICA
CONTENIDOS
1. Definicin y estructura del ADN
2. Cromosoma Exploracin
3. Genes y genoma de Preconceptos
4. Definicin y estructura del ARN y las protenas

El ADN es el material gentico responsable de la herencia y Contexto


de las caractersticas fsicas y metablicas de un organismo. La
Repartir los roles de las diferentes organelos por
unidad bsica del ADN, conocida como nucletido, est
grupos. A partir de las funciones de los diferentes
conformada por la unin de una molcula de fosfato (P), un organelos y estructuras celulares, identificados en
azcar (desoxirribosa) y una base nitrogenada: Adenina (A), la anterior seccin, hacer que cada grupo re-
Timina (T), Citosina (C) y Guanina (G). flexione sobre la importancia del ADN en la
clula y qu le pasara a la funcin de cada
La molcula de ADN consta de dos cadenas lineales que se organelo que representa, si el ADN se desnatura-
liza y deja de cumplir su funcin en la clula.
unen entre s por complementariedad entre sus nucletidos
(A=T y G =C), formando una doble hlice, que semeja una Reflexin
escalera en caracol. La parte externa de esta estructura
helicoidal o las barandas de la escalera en caracol, est La importancia del ADN como codificador de la
conformada por unidades de azcar-fosfato y los peldaos de informacin hereditaria y necesaria para el
la escalera los conforman las bases nitrogenadas, que se unen funcionamiento de la clula.
complementariamente por puentes de hidrgeno.

11/ El ADN es la molcula de la vida


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

El modelo de Watson & Crick: Diagrama de empaquetamiento del ADN

En 1953, despus de prolongados esfuerzos de investigacin


Watson y Crick, propusieron la estructura del ADN y llegaron
a la siguientes conclusiones utilizando tcnicas de
cromatografa y difraccin de rayos X: Cromosoma

Dos cadenas lineales de nucletidos estn enrollados alre-


dedor de un eje formando una hlice con giro a la derecha

Las dos cadenas son antiparalelas. Una va en sentido C-5-C-3


y la otra al contrario C-3-C-5 (los dos extremos de una
cadena lineal de ADN son diferentes: El extremo 5 tiene
un fosfato no enlazado o libre; el extremo 3 tiene un
azcar no enlazado o libre)

Las bases de las dos cadenas estn apiladas con una distan-
cia de 3.4 Angstrms*

Las bases nitrogenadas se unen por puentes de hidrgeno


con complementariedad A-T y G-C entre las dos cadenas

Cada vuelta completa de la hlice es de 34 Angstrm, es


decir, hay 10 bases por cada vuelta
Enrollamiento
En cualquier segmento de la molcula ADN se alternan el
surco mayor y el surco menor

La doble hlice mide 20 Angstrm de dimetro

* Un Angstrms es igual a 0.0000001 mm

Nucleosoma
Conceptos Claves: El ADN:
Almacena toda la informacin y por procesos de divisin celular
asegura que se transfiera.
Permite que al reproducirse los seres den origen a descendientes
que mantienen las caractersticas de la especie
Tolera cierta variabilidad, lo cual dentro de las especies asegura su
posible evolucin

Ideas para discutir: Doble hlice


Un ncleo de una clula humana tiene 0.006 mm de dimetro y
almacena 2 m de ADN Cmo se explica que una molcula tan
larga est contenida en una estructura tan pequea como el
ncleo?

Claves para el docente:


La respuesta est en el enrollamiento y empaquetamiento del ADN

Cromatina

12/ El ADN es la molcula de la vida


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Las clulas eucariotas contienen mayor cantidad de


ADN que las procariotas. El ADN forma un comple-
jo con protenas histonas y no histonas, formando
la cromatina, que significa hebras teidas por el
color que toma con colorantes especficos. La
cromatina se encuentra organizada a manera de
cuentas de un collar en nucleosomas, que consti-
tuyen la unidad de empaquetamiento fundamental
de la cromatina.

Esto pone en evidencia el alto nivel de


compactacin del ADN de las clulas eucariotas.

Taller para realizar con los estudiantes

Metas de Comprensin

Construye una estructura tridimensional de


un cromosoma y una doble hlice

Materiales sugeridos

- Cromosoma
- Estropajo, hilo alambre
-ADN
- Alambre, mangueras,
bolas de icopor, papel, etc.

Ideas para el docente


Puede representar el cromosoma empleando dos estropajos y unirlos
en el centro con un hilo alambre. Con esta estructura se observa
por un lado la forma de los cromosomas y por el otro el
enrollamiento.

13/ El ADN es la molcula de la vida


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

cariotipo

El ADN est organizado


en los cromosomas
El cromosoma es un cuerpo con aspecto de filamen-
to. Solamente puede ser visto durante la divisin
celular, bien sea en la mitosis o meiosis, momento en
el cual la cromatina se condensa, haciendo visible los
cromosomas.

El conjunto de cromosomas es denominado cariotipo.

El ADN se encuentra organizado en secuencia de ADN


nucletidos (A, G, C, T) que forman segmentos de
ADN denominados genes, los cuales cumplen una
funcin especfica y determinan la secuencia de P
P

aminocidos de una protena. D D


D

A C A
Los genes son los portadores de la informacin
hereditaria y controlan las caractersticas espec- A G
A
G
ficas de un organismo. El gen se expresa en
forma de protenas que representan las caracte- D D
D
rsticas fsicas (apariencia), metablicas y P
P D
moleculares (caractersticas bioqumicas), de
P
cualquier organismo). D

En eucariotas, las secuencias de nucletidos que


conforman un gen se pueden dividir en dos
tipos:

Secuencias codificadoras, llamadas exones y las no


codificadoras llamadas intrones. La secuencia de
exones no es continua, est interrumpida por los
intrones.

Cuanto ms evolucionada es una especie ms canti-


dad de intrones presenta. Sin embargo, no todas las
caractersticas son codificadas por Exones / Intrones
un solo gen, por ello se habla de
caracteres monognicos o Bacteria Regiones Intergnicas
polignicos dependiendo del
20 kb
nmero de genes que participan
Levadura
en su regulacin y expresin. 20 kb
Drosophila
20 kb
Intrn Exn
20 kb
Humano

14/ El ADN es la molcula de la vida


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Transposon
Por otra parte, los genes han sido clasifica-
dos de acuerdo con sus secuencias, de las Elemento transponible

cuales se reconocen: A B C D E F

Repetitivas funcionales: secuencias de Copia del elemento


nucletidos que codifican alguna caracte- transponible

rstica y se encuentran en mltiples copias. A B C D E


Funcionales no codificantes: secuencias Gen F interrumpido
simples de ADN que no codifican para y por lo tanto no funcional

ARN o protena. Transposn


Sin funcin conocida.
Altamente repetitivas.
Transponibles, conocidos tambin como Elemento transponible Otros Elemento transponible
genes saltarines, elementos controla- Genes
dores, genes mviles o transposones;
secuencias capaces de moverse dentro de un
mismo cromosoma o a diferentes cromosomas.

El conjunto de genes de un organismo vivo


se conoce como genoma y su tamao es variable de
acuerdo con el organismo. Qu tan grande es el genoma?

Angiospermas
Aves
Mamferos
Reptiles
Anfibios
Teleosteos
Cartilaginosos
Equinodermos
Crustceos
Insectos
Moluscos
Gusanos
Mohos
Algas
Hongos
Gram+
Gram-
Micoplasma
103 104 105 106 107 108
Tamao del Genoma (kb)
El tamao del genoma no es medido por el nmero de cromosomas sino en unidades de
miles de pares de nucletidos (kilobases Kb).

Ideas para discutir con los estudiantes:


El tamao del genoma est relacionado con la cantidad de informacin que
codifican?

Claves para el docente:


No existe relacin, por que en los genomas grandes existen muchas secuencias que
no codifican informacin (intrones) pero que amplan el tamao del genoma.

15/ El ADN es la molcula de la vida


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Grandes hitos en la historia del material gentico y 1943 Schrorindger postula que el material gentico
su papel en la herencia hereditario es un mensaje qumico codificado.

1866 Mendel publica sus hallazgos sobre la trans- 1944 Se identifica el principio de transformacin de
misin de caracteres hereditarios y propone las Griffith por mtodo enzimtico propuesto por Avery,
leyes de la segregacin que conducirn al concepto Mac Leod y Mac Carty.
del gen.
1948 Boivin y Vendrely afirman que el ADN conteni-
1869 Meiescher asla por primera vez ADN a partir do en los ncleos de las clulas eucariotas constituye
de ncleos de pus y lo define como nuclena. Des- el soporte de los caracteres hereditarios.
cribe su composicin qumica e identifica la pre-
sencia de fsforo, lo que distingue a esta molcula 1952 Hershey y Chase identifican la naturaleza qumi-
de las protenas. ca del material gentico de un bacterifago (virus
que ataca una bacteria).
1900-1920 Se establece la teora cromosmica de
la herencia. 1953 Watson y Criack establecen la estructura
molecular de la doble hlice del ADN. Gamow propo-
1910-1930 Se determina la composicin de las ne el concepto de cdigo gentico y plantea cmo
bases de los cidos nucleicos y la diferencia entre el descifrarlo y estudiar cmo funcionan los genes. Se
ADN y el ARN. inicia la era de la biologa moderna.

1928 Griffith realiza el clsico experimento de 1956 Con los estudios de Fraenkel-Conrat se identifi-
transfeccin in vivo de neumococos no virulentos ca el material gentico del virus del mosaico del
mediante coinfeccin con neumococos virulentos tabaco (TMV).
en ratones.
1961-1966 Se descifra el cdigo gentico y se diluci-
1930-1933 Dawson y Sia realizan la transfeccin dan los mecanismos de expresin en bacterias.
bacteriana empleando extracto celular de
neumococos virulentos muertos. 1975 Nace la Ingeniera Gentica.

ARN
Cmo se expresa la informacin almacenada en el
ADN?... Para ello se requiere un intermediario, EL
CIDO RIBONUCLICO (ARN)

El ARN, molcula conformada por nucletidos como en


el ADN. A diferencia de ste, el azcar desoxirribosa es
reemplazada por la ribosa y la base nitrogenada Timina
por el Uracilo.

Existen tres tipos de ARN:

El ARN mensajero, ARNm, es una molcula de


tamao variable cuya misin es dirigir la informa-
cin codificada en el ADN para la sntesis de pro-
tenas. En eucariotas las secuencias de ARNm
(transcrito a partir del ADN), que no codifican
para protenas son removidas, proceso conocido
como maduracin del ARNm.

El ARN ribosomal, ARNr, se encuentra en los


ribosomas, organelo implicado en la sntesis de
protenas. Los ARNr son extremadamente abundan-
tes y constituyen por lo menos un 80% del ARN que
se encuentran en clulas eucariotas.

16/ El ADN es la molcula de la vida


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

El ARN de transferencia ARNt, cuya funcin es reco-


nocer un aminocido especfico y transferirlo en el
proceso de sntesis las protenas a la cadena proteica
Taller de comprensin de la seccin
naciente, de acuerdo con la informacin especfica
para realizar con los estudiantes
que le proporciona el ARNm.

As, todos y cada uno de los ARN participan en la snte-


sis de protenas, cumpliendo funciones especficas. Metas de comprensin
1. La estructura y organizacin de la molcula de
ADN, es la base para comprender la
PROTENAS
complementariedad entre las dos cadenas, en la
conformacin de la doble hlice y la codificacin de
la informacin gentica.

2. Estructura y organizacin del ARN

Materiales
Cartulina de diferentes colores. Cuatro colores para
representar con cada uno de las bases nitrogenadas del
ADN: A, T, G, C y un quinto color para representar la
base nitrogenada adicional que se encuentra en el ARN,
el uracilo. Tijeras y cinta adhesiva.

Procedimiento
Disear figuras de nucletidos con la cartulina, tal
como se indica en la figura, buscando que cada uno
est representado de diferente color. Cuidar que el
Son molculas de gran tamao, formadas por varias molde de la adenina sea complementario y encaje con
centenas de molculas pequeas llamadas aminocidos el molde de la timina. Igualmente que sean comple-
ligadas entre s, que reciben el nombre de pptidos. De mentarios los moldes de la guanina con la citosina (para
acuerdo con la secuencia de aminocidos, las molculas el ADN) y el uracilo con la adenina (para el ARN).
de protenas tienen caractersticas qumicas especficas y Construir tambin figuras adicionales de desoxirribosa y
cumplen funciones especiales. Por ejemplo algunas cido fosfrico (ADN) y de ribosa de tal manera que
cumplen funciones estructurales y hacen parte de las ensamblen con cualquier figura de las bases
estructuras de las clulas y de los organismos vivos, nitrogenadas.
mientras que otras como las enzimas, regulan las reac-
ciones qumicas del metabolismo de los seres vivos. Fabricar varios moldes repetidos de estas unidades,
para luego ensamblar estas figuras y representar la
Las enzimas, ciertas hormonas y la albmina son pro- estructura lineal del ADN (con la desoxirribosa y el
tenas producidas por las clulas, que regulan la rapidez cido fosfrico hacia fuera y las bases hacia aden-
y especificidad de las miles de reacciones qumicas tro, imitando la forma de una escalera en caracol).
celulares. Estas reacciones son fundamentales para Ensamblar tambin una cadena simple de ARNm,
todos los fenmenos vitales, como la respiracin, creci- siguiendo de forma similar los pasos anteriores.
miento, fotosntesis, digestin, entre otros. Recuerde que para el ARN la timina debe ser reem-
plazada por el uracilo.

Repaso de conceptos claves: El ADN


Molcula de doble hlice, constituida por nucletidos
Forme con las figuras de cartulina una cadena lineal de
ADN con una secuencia de 10 nucletidos. Si un gen es
complementarios de AGCT. un segmento conformado al menos por algunos o
La informacin gentica contenida en los genes es expre- varios nucletidos, represente a travs de diferentes
sada en protenas usando como intermediario el ARN. combinatorias de nucletidos (conformando un voca-
El ADN de las clulas eucariotas est compuesto por
blo), algunos de los genes que podran estar codifican-
exones e intrones.
do para determinada caracterstica.

17/ El ADN es la molcula de la vida


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Del gen a la protena


Conociendo la estructura de cada una de las
macromolculas (ADN, ARN y protenas) entremos a descu-
brir y comprender como ocurre la transferencia de la infor-
macin desde el ADN hasta el ensamble de una protena.

OBJETIVOS
1. Revisar los principales conceptos implicados en el proceso
de replicacin del ADN, transcripcin a ARN y traduccin a
protenas

2. Integrar la maquinaria implicada en la transferencia de la


informacin y la expresin de caractersticas
Del gen a la
3. Comprender los sistemas de control de la expresin
gentica en procariotes y eucariotes protena
SECUENCIA Los procesos implicados en la expresin
Replicacin - Transcripcin - Traduccin gentica son:

1. Replicacin
CONTENIDOS
1. Del gen a la protena 2. Transcripcin
2. Regulacin de la expresin de los genes
3. Traduccin

18/ Del gen a la protena


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

REPLICACIN:
Replicacin

ADN
polimerasa Hebra retardado

ARN Fragmento de Okasaki


5 primasa
enzima que ADN ligasa une
Inicia con la doble hlice
inicia la
3 polimerizacin
3
Helicasa
abre la ADN Hebra lider
Protenas de polimerasa
doble hlice estabilizacin (continua)

Cuando ocurre la divisin celular, el material gentico se Para que las cadenas sean replicadas se requie-
debe duplicar para pasar la informacin a la generacin re de nucletidos y una enzima ADN
celular siguiente. El proceso mediante el cual se duplica el polimerasa en el medio celular que une los
ADN, se denomina replicacin. Se lleva a cabo en condicio- nucletidos. Esta enzima reconoce los
nes naturales de la clula in vivo o bajo condiciones nucletidos y los une de manera complementa-
controladas en el laboratorio in vitro. ria a la cadena molde (G-C y A-T). En el proce-
so de replicacin una cadena es replicada en
El principio de la replicacin exige que las dos cadenas por forma fragmentada dando origen a los frag-
las que est formado el ADN se separen mediante la accin mentos de Okasaki. Las enzimas encargadas de
de una enzima la helicasa, liberando las dos cadenas unir los fragmentos que se estn sintetizando
moldes. de manera fraccionada son las ligasas. En la
otra cadena la replicacin es continua.

TRANSCRIPCIN:
Replicacin

Burbuja de transcripcin
ARN
polimerasa

ADN Sitio de
terminacin
3
Hebramolde
5
3

Sitio de Ribosoma
iniciacin (subunidad grande)
ARNm 5
Direccin de transcripcin

La transcripcin ocurre en forma similar al de la polimerasa se fabrique una cadena de ARN


replicacin. En este proceso el ADN se vuelve a leer, esta a partir de una de ADN.
vez originando una molcula de ARN. As, el ARN se fabrica
a partir de nucletidos que se unen de manera comple- El ADN se transcribe a ARN reemplazndose
mentaria al ADN para que con la ayuda de la enzima ARN la Timina por el Uracilo.

19/ Del gen a la protena


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

TRADUCCIN:
Replicacin

his
ser glu

arg
ser
his gly
cys
Aminocido ser ala
arg leu
gly
Ribosoma phe
met met met arg met arg trp

ARNt U CG
U C
U
A UC U AC U CU AC C
UA C U A C U C AU U
U
A G AAGC C A
U G U A U G G A A GC C U G U A U G A G A A GC C A
U G U A U G G A AG CC AUGA U A
U U GU G G U A U A G terminacin

ARNm

La sntesis de protenas, ms comnmente conocida como Caractersticas de cdigo gentico:


traduccin, es un proceso en el cual la informacin contenida
en los genes (genotipo) es expresada en protenas Tres nucletidos sucesivos (del ARNm),
(fenotipo). Tiene lugar en los ribosomas de manera similar constituyen un codn que codifica para
en eucariotas y procariotes. Las reglas especficas para la un aminocido especfico.
traduccin dependen del cdigo gentico, el lenguaje en el
que se conserva la informacin que viene de los genes y es de Algunos aminocidos pueden estar defini-
carcter universal. dos por ms de un codn. (Ver cdigo
gentico).
Maquinaria empleada en la sntesis de protena
61 de las 64 posibles combi-
naciones de las tres bases
Molcula de
ADN nitrogenadas codifican
Gen 2 aminocidos especficos.
Gen 1 Gen 3

Existen 3 combinaciones que


no codifican para amino-
cidos UAA, UAG, UGA sino
que constituyen seales de
ADN 3 5
terminacin que indican que
A C C A A A C C G A G T
la cadena de protena ha
Transcripcin Correspondencia lineal terminado.

U G G U U U G G C U C A El codn AUG codifica para el


5 3 aminocido metionina y
mARN
adicionalmente funciona
Codn como secuencia de iniciacin.

Traduccin El proceso de traduccin tiene


las siguientes etapas:

1. Iniciacin: proceso de unin


Protena Trp Phe Gly Ser
del ARNm a la unidad ms
Aminocido pequea del ribosoma, la
cual se encuentra libre en el
citoplasma y se une en un

20/ Del gen a la protena


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

A G U C
AAA Lys K AGA Arg R AUA Ile I ACA Thr T A
AAG Lys K AGG Arg R AUG Met M ACG Thr T G
A AAU Asn N AGU Ser S AUU Ile I ACU Thr T U
AAC Asn N AGC Ser S AUC Ile I ACC Thr T C

GAA Glu E GGA Gly G GUA Val V GCA Ala A A


extremo del ARNm
GAG Glu E GGG Gly G GUG Val V GCG Ala A G
exponiendo el codn G GAU Asp D GGU Gly G GUU Val V GCU Ala A U
iniciador, AUG (Adenina,
GAC Asp D GGC Gly G GUC Val V GCC Ala A C
Uracilo y Guanina) a la
secuencia complementa- UAA Stp - UGA Stp - UUA Leu L UCA Ser S A
ria en el ARNt
UAG Stp - UGG Trp W UUG Leu L UCG Ser S G
(anticodn UAC). De U UAU Tyr Y UGU Cys W UUU Phe F UCU Ser S U
este modo, las protenas
UAC Tyr Y UGC Cys W UUC Phe F UCC Ser S C
sintetizadas tendrn
siempre al inicio el CAA Gln Q CGA Arg R CUA Leu L CCA Pro P A
aminocido metionina. A CAG Gln Q CGG Arg R CUG Leu L CCG Pro P G
continuacin se une la C CAU His H CGU Arg R CUU Leu L CCU Pro P U
subunidad grande del
CAC His H CGC Arg R CUC Leu L CCC Pro P C
ribosoma formndose as
el ribosoma completo y Fuente http://www.lab314.com/genmol/code-standard.htm
funcional que tiene dos
sitios claves:

i. Sitio P (peptidil), ocupado por el ARNt-metionina


La expresin o no de las secuencias
ii. Sitio A (aminoacil), libre para recibir un segundo codificantes depender esencialmente de la
ARNt cargado con un nuevo aminocido. disponibilidad de las protenas codificadas en
el entorno. La expresin de las protenas esta
2. Enlongacin: consiste en la unin de los aminocidos regulada por la unin de una protena (pro-
para la elaboracin de la protena. Cada vez que ARNt motor o represor) al promotor o control.
trae un aminocido ocurre un proceso cclico de
enlongacin. En Eucariotas se han definido los siguientes
elementos bsicos de regulacin:
3. Terminacin: fin de la sntesis de protenas. La infor-
macin de terminacin est dada por los siguiente 1. Los promotores: Son regiones en el ADN
codones: UAA, UAG, UGA. Estos codones bloquean la que sealan el inicio de la secuencia
unin del ARNt al ribosoma y hacen que se suelten las codificadora y a las que se unen los facto-
dos unidades del ribosoma y se libere la protena. res de transcripcin y la polimerasa. El
promotor ms importante es la caja TATA,
una corta secuencia de pares de bases T-A
Regulacin de la expresin de los genes y A-T.

Para que toda secuencia que codifica en el ADN (exones) 2. Enhacers: regiones fomentadores de la
se exprese en protenas, es necesario que exista un proce- transcripcin.
so de control conocido como regulacin gentica.
3. Silenciadores: bloquean la sntesis de
En procariotas la regulacin gentica ocurre a travs de protenas cuando existe sobreexpresin, es
operones. Un opern es una asociacin de genes cada una decir cuando los niveles de sntesis para
de las cuales codifica una protena. una protena exceden el nivel normal.

El opern consta de un promotor, una regin de control y La regulacin gentica consiste en encender
una secuencia de genes codificantes. y apagar los genes.

21/ Del gen a la protena


Mdulo 1
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Taller de comprensin de la seccin para realizar con los estudiantes

Objetivo
Comprender y familiarizarse en cmo el proceso secuencial de expresin del genotipo se
traduce en fenotipo.

Materiales
Cartulinas con nucletidos
Hojas de papel con el cdigo gentico
Cartulina con intrones
Exones
Cartulinas con aminocidos: Lisina, Arginina, Arg, Metionina, Met, Alanina, Ala, Serina, Ser,
leusina, Leu, Glutmico, Glu, Valina, Val, Prolina, pro, Fenilalanina, phe, Lle, Treonina, Thr,
triptofano, Trp, cysteina, Cys, Aspartico, Asp
Hojas de papel con los Fenotipos

1. Flor blanca Lys Arg Val

2. Flor azul Ala Ser Gly

3. Mazorcas moradas Lys Gly Ala

4. Mazorcas amarillas Ser Arg Val

Represente, empleando los materiales suministrados el proceso de expresin de las protenas


responsables del fenotipo correspondiente.

1. Seleccione una caracterstica fenotpica

2. Identifique la secuencia de aminocidos correspondiente a la caracterstica fenotpica y


construya la estructura proteica, empleando los aminocidos proporcionados

3. Construya con los nucletidos suministrados, la molcula de ARN a la que corresponde la


secuencia de aminocidos de la caracterstica que le correspondi (fenotipo). Recuerde que
debe usar el cdigo gentico

4. Construya a partir de la molcula de ARN, la molcula de ADN correspondiente usando


los nucletidos suministrados

5. Organice secuencialmente el orden en el que ocurre el proceso genotipo-fenotipo

6. Ubique los intrones y exones en la cadena que corresponda y en el lugar adecuado

Metas de comprensin
El genotipo es la informacin contenida en los genes
El fenotipo es la expresin de la protena
Existe una proceso secuencial para garantizar el paso de genotipo al fenotipo

22/ Del gen a la protena


clula procariota

ribosomas citoplasma
grnulo de alimento nucleoide
(ADN)

plsmido
flagelo (ADN)
(procaritico)

Introduzcmonos al interior de la clula y


familiaricmonos con las estructuras y
procesos importantes para su funcionamiento.
Centremos nuestra atencin en las molculas
responsables de la informacin hereditaria
involucradas en la expresin de las
caractersticas de los seres vivos.

membrana plasmtica
pared celular
cpsula o capa mucilaginosa
pilus o fimbria

clula vegetal

cloroplastos mitocondria
aparato de Golgi

pared celular
envoltura nuclear
cromatina (ADN) ncleo
nucleolo

microtbulos

clula animal membrana plasmtica

cromatina (ADN)
retculo
envoltura nuclear ncleo endoplasmtico
nucleolo liso
ribosomas

vescula
mitocondria

retculo
endoplasmtico rugoso

membrana
plasmtica
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia

ribosomas
vacuola

filamentos intermedios

filamentos intermedios
vescula

microtbulos

Virus Evolucin de los organelos Ribosomas

Cabeza eubacterios ADN del


Cuello husped ncleo
Vaina ancestral
5 3
ARNm
Cola cloroplastos
Fibras de A G G A U G G C G
la cola
U A C

Placa basal Espiculas


cianobacteria P
mitocondrias
Met

aparato de Golgi

retculo
retculo endoplasmtico
endoplasmtico liso
rugoso citoplasma

lisosoma

centrolo
Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola
Cromosoma El ADN es el material gentico responsable
condensado 1.400 nm
de la herencia y de las caractersticas
fsicas y metablicas de un organismo.

Sus unidades bsicas de informacin son


los genes.

Cromatina
condensado
ARN
Careotipo

Puentes de hidrgeno

Enrollamiento P

D
D

C
T T
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia

A G
A

Citosina
Guanina
Timina D D

Adenina
D
P

P D
ADN
Nucleosomas
P
Fosfato P
P
D D
D

A C A
Azcar
A G A
desoxirribosa
ADN Doble hlice G

D D
P
D P
P D
P
D

Cromatina

Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola


ARN primasa ADN polimerasa Hebra retardada
enzima que inicia
la polimerizacin

Replicacin
3

ADN ligasa
5

Inicia con la doble hlice


3

Helicasa
abre la doble hlice

Proteinas de estabilizacin
ADN polimerasa Hebra lider (continua)

Burbuja de transcripcin

Transcripcin ARN polimerasa

Sitio de terminacin

5 3

Hebra molde

3
Ncleo

Sitio de iniciacin Ribosoma


(subunidad grande)

ARN-ADN
ARNm
5
Direccin de transcripcin

his
glu
Traduccin ser
ser
arg
his gly
cys
ser ala
Aminocido leu
arg gly
met met arg trp phe
met Ribosoma met arg

ARNt UCG
U C
U

U
A C U A C U A C U C U AC U C U A C C
U A U U
G A G A A G A G A A G A G A AG A A G C C A U G U G G U A A U A G
U G U A U G CC U G U A U G CC U G U A U CC A U G A G U U
terminacin
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia

ARNm

Citoplasma

Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola


Mdulo 2

Exploracin de la biotecnologa y
sus aplicaciones

Exploremos como los avances en el


conocimiento han sido aplicados para
darle valor agregado a los sistemas
biolgicos y recursos vivos.

Contenido
24 Laevolucin
biotecnologa y su

29 Labiotecnologa
aplicacin de la
en la
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia

agricultura

Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola
23
Mdulo 2
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

La biotecnologa rganos

y su evolucin
OBJETIVO
1. Entender la biotecnologa como una herramienta tecnol-
gica que permite la optimizacin de procesos biolgicos.
2. Conocer cmo y cules han sido los avances de la biotec-
nologa en el transcurso del tiempo
Clula vegetal
3. Identificar las diferentes reas de aplicacin de la bio-
tecnologa.
Sistema vascular
4. Introducir el tema del cultivo in vitro de tejidos vegetales
como herramienta biotecnolgica.
5. Reconocer el aporte del conocimiento y el avance cientfi- Bio: Biologa o
co en el desarrollo de la biotecnologa estudio de los
organismos vivos.

SECUENCIA Pensemos un poco


Biotecnologa: Tradicional - Clsica - Moderna en lo que significa bio

Un organismo completo - sistemas - rganos -


CONTENIDO tejidos - clulas
1. Definicin de la biotecnologa
2. Historia y evolucin de la biotecnologa Tecnologa: Herramienta
3. Aplicaciones de la biotecnologa
Realicemos el mismo ejercicio con tecnologa
Fermentaciones - cultivo de tejidos in vitro -
DEFINICIN: tecnologa de genes.
La biotecnologa es una aplicacin tecnolgica que usa a los
organismos vivos o sus partes para generar productos o servi- DINMICA
cios. No es una ciencia, es una herramienta que integra dife-
rentes disciplinas para generar beneficios en diversos sectores.
Exploracin de preconceptos

Contexto

Qu entiendes por biotecnologa?

Mostrar imgenes o nombrar productos desarro-


llados por procesos biotecnolgicos y no
biotecnolgicos. Usar ejemplos de aplicacin en
industria, salud, agropecuaria, ambiental,
alimentaria y animal. Reconocer cules de ellos
son producto de la biotecnologa.

Fermentaciones Reflexin

La biotecnologa es una herramienta que ha sido


usada ampliamente por el hombre desde pocas
milenarias. Los resultados de su aplicacin van
desde la preparacin del yogurt, quesos y vinos
hasta la obtencin de organismos
Cultivo de tejidos in vitro genticamente modificados.
Tecnologa de genes

24/ La biotecnologa y su evolucin


Mdulo 2
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Historia y evolucin de la biotecnologa


10.000 A.C.,
Domesticacin de
El origen de la biotecnologa se remota a los cultivos
tiempos de la prehistoria, cuando se empeza-
ron a utilizar los microorganismos en los
procesos de fermentacin, para la produccin
del yogurt y quesos a partir de la leche, el
vinagre a partir de melazas, la produccin de 8.000 - 9.000 A.C.,
butanol y acetona utilizando especies de Domesticacin
Clostridium y la produccin de antibiticos de animales
como la penicilina a partir del hongo
Penicillium notatum.

Desde el ao 10.000 A.C., la biotecnologa


cobra valor con las prcticas de domesticacin
de cultivos, llevados a cabo por el hombre 6.000 A.C.,
cuando sus costumbres cambiaron y pas de Procesos
ser nmada a sedentario. Su nueva organiza- de fermentacin
cin le exigi iniciar un proceso de seleccin
de sus alimentos que muestran caractersticas
de inters: plantas ms resistentes, frutos ms
4.000 A.C., Panes y levaduras
grandes y dulces, entre otros.

Con base en simples observaciones, le fue


posible distinguir cultivos ms productivos,
resistentes a plagas y enfermedades lo que
result en ventajas adaptativas para el orga-
nismo. Sin conocer ni disponer de tcnicas de
1.880,
mejoramiento de cultivos y con el objeto de
Produccin de vacunas
mejorar su alimentacin, el hombre empieza
a intervenir en la naturaleza para tener a su
1.898,
alcance mejores materiales vegetales.
Cultivo de tejidos

As, en la medida en que aument el conoci-


miento y comprensin sobre el funciona-
1.940,
miento de los organismos vivos y sus
Produccin de antibiticos
procesos, el hombre tuvo a su alcance nuevas
herramienta que le permitieron desarrollar y
1.960,
mejorar productos. Sin embargo, el auge de
Produccin de variedades de arroz
la biotecnologa solo se alcanza en la dcada
y trigo con alta productividad
de los 70s con el descubrimiento de las
enzimas de restriccin, las cuales permitieron
el desarrollo de la tecnologa de genes, lo
que se consider revolucionario en este siglo.
1.990,
En la ilustracin se resumen los principales Desarrollo de plantas
hitos en la historia, donde la biotecnologa genticamente modificadas
hizo grandes aportes en campos como el
agropecuario, la salud, el industrial y de
alimentos.

25/ La biotecnologa y su evolucin


Mdulo 2
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Ideas para discutir:


A pesar que el uso de esta tecnologa se remonta a pocas Imagnese en su hogar cules productos pueden
milenarias, el trmino biotecnologa fue usado, por primera ser el resultado del uso y aplicacin de la
vez, en 1919 por el ingeniero hngaro Karl Ereky, para biotecnologa y por qu?

referirse a los mtodos de agricultura intensiva. Pero, como


ya vimos, la definicin de biotecnologa ha cambiado con
Claves para el docente:
La biotecnologa se encuentra presente en
el transcurso del tiempo y diferentes organizaciones la muchos lugares, momentos y actividades de
definen como: nuestra vida diaria. En nuestro hogar nos
encontramos con productos como:
Toda aplicacin tecnolgica que utilice sistemas biolgi-
cos y organismos vivos y sus derivados, para la creacin o
modificacin de productos o procesos para usos especfi- Yogurt: uso de
cos. Convenio de Diversidad Biolgica (CDB). microorganismos (bacteria)
para fermentar la leche.

Uso controlado de agentes como microorganismos o


componentes celulares de uso benfico (Fundacin Na-
Pan: uso de levaduras para
cional de Ciencias US).
levantar la masa de trigo,
como resultado de la produc-
Independientemente de la definicin de biotecnologa o de cin de gas.
la poca a la que estemos haciendo referencia, sta siem-
pre se har en el marco del uso de los organismos vivos.
Sin embargo, cuando tenemos en cuenta la poca, la Aditivos, colorantes alimenti-
diferencia radicar en los niveles de conocimiento que el cios, endulzantes y
hombre tiene de los procesos y sistemas biolgicos, de esta preservantes naturales para
jugos.
manera, la biotecnologa se puede dividir en:

Tradicional Vino: uso de microorganismos


Procesos y actividades desarrollas a travs de recetas y para fermentar el jugo de uva.
tradiciones: obtencin y fabricacin de queso, yogurt,
pan y vino.
Detergentes: producidos con
Clsica enzimas obtenidas de organis-
El conocimiento de la totipotencia celular hace posible mos vivos y utilizadas para
eliminar las manchas de los
el cultivo de tejidos vegetales bajo condiciones de
textiles.
laboratorio.

Moderna
Blue jeans: el colorante para
Se han identificado organismos en los procesos teir los jeans se obtiene de
involucrados, los mecanismos de control y bacterias genticamente
adicionalmente la forma de modificarlos. Entran en modificadas.
aplicacin las tecnologas del ADN recombinante.

Ahora exploremos las reas y los alcances de la Medicamentos: la insulina


biotecnologa en los diferentes campos. para el control de la diabetes
se obtiene a partir de bacte-
rias genticamente modifica-
das con el gen humano de la
insulina.

26/ La biotecnologa y su evolucin


Mdulo 2
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Conozcamos como se aplica la biotecnologa en


diferentes reas:

SALUD HUMANA Y ANIMAL:


Sistema de diagnstico de enfermedades
Productos farmacuticos: Antibiticos, vitaminas, insulina
Vacunas: La vacuna de la hepatitis B obtenida a travs de la
modificacin de la levadura.
Terapia gnica: Tratamiento contra enfermedades de origen
gentico mediante el reemplazo y/o modificacin de los
genes que presentan un funcionamiento anmalo.
Identidad molecular: Tcnica que permite la identificacin de
los personas a travs de patrones de secuencias genticas para
prueba de paternidad y gentica forense. En animales se aplica
para estudio de diversidad, evolucin, gentica de poblaciones
y programas de mejoramiento.

INDUSTRIA:
Aditivos: ctricos
Saborizantes
Colorantes: azul indigo
Alcohol carburante: etanol
Productos lcticos (yogurt y quesos) uso de partes o del
organismo completo (enzimas o microorganismos)
Detergentes: obtencin de enzimas que degradan cidos
grasos, lipolasa (Aspergillus), cutinasa (Saccharomyces), de
protenas (Bacillus licheniformis) para eliminar manchas de
sangre, comida, etc.

AMBIENTE:
Biorremediacin: Tratamiento de residuos lquidos contamina-
dos. Un ejemplo de esta aplicacin es la limpieza de derrames
de petrleo empleando bacterias.
Manejo de residuos slidos: Uso de bacterias, hongos para la
degradacin de residuos orgnicos.
Biolixiviacin: Recuperacin de metales mediante su
solubilizacin. Aplicacin de gran inters para la industria
minera.
Diagnstico y deteccin de sustancias: Uso de organismos,
bacterias, plantas etc., que detecten e informen acerca de la
presencia de sustancias especficas actuando como
biosensores.

AGRCOLA:

Repaso de conceptos claves Sistemas de diagnstico de enfermedades.


Agrobiolgicos, uso de organismos vivos o las sustancias
La biotecnologa: producidas por ellos para mejorar la productividad de los
cultivos o para el control de plagas y malezas.
Aplicacin tecnolgica que emplea los organis-
mos vivos o sus parte para generar bienes o
Cultivo de clulas y tejidos in vitro, para produccin de
servicios plantas a gran escala, obtencin de metabolitos secunda-
Tiene diferentes reas de aplicacin: rios y mejoramiento gentico.
agropecuario, salud, ambiente, industria Cultivos genticamente modificados mediante tecnologa
No es una aplicacin nueva de genes.
El conocimiento cientfico ha permitido ampliar y
Conservacin de germoplasma.
mejorar los aportes de la biotecnologa a la sociedad
Estudios de diversidad, evolucin, gentica de poblaciones
y programas de mejoramiento.
27/ La biotecnologa y su evolucin
Mdulo 2
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Taller de comprensin de la seccin para realizar con los estudiantes

Produccin de yogurt

Meta de comprensin
Las tcnicas las biotecnolgicas tradicionales y sus aplicaciones

Materiales
1 Litro de Leche
1 cuchara sopera de yogurt comercial
Estufa
Balletilla o toalla
Termmetro
1 Cuchara
1 olla
1 recipiente con tapa

Procedimiento
1. Caliente la leche hasta que alcance una temperatura de 52C. Retire del fuego.
2. Cambie de recipiente la leche y deje enfriar hasta que alcance la temperatura de 43C. (un poco
ms que tibia).
3. Agregue la cucharada de yogurt comercial a la leche y mezcle.
4. Tape la mezcla y cubra con la toalla.
5. Coloque en lugar clido (puede ser cerca de la estufa).
6. Deje la mezcla en reposo durante 24 horas.
7. Luego de las 24 horas, destape y si as lo desea endulce con azcar o miel y agregue pequeos
pedazos de frutas.
8. Refrigere y disfrtelo!

Preguntas:
Cul es el papel del yogurt comercial en la produccin de yogurt que usted fabric? Por qu es necesario mantener la
temperatura para la elaboracin del yogurt? Qu es la fermentacin lctica?

Claves para el docente:


Los yogures comerciales contienen bacterias cido lcticas que actan como iniciadores del proceso de produccin del yogurt.
Las bacterias, seres vivos, tienen actividad encimtica a partir de la leche.

Actividades complementarias
Visite una panadera, conozca el proceso de elaboracin del pan y comprelo con el de la elaboracin del yogurt.
Elabore un cuadro comparativo (similitudes y diferencias) entre los dos procesos y analice por qu son consideradas
biotecnologas.
Plantee las siguientes preguntas al panadero y tome nota de sus respuestas:
- Utiliza usted organismos vivos para la produccin del pan? Sabe usted qu es biotecnologa?
Qu hace que la masa del pan crezca?
- Si se le ocurren ms preguntas no dude en realizarlas.
Recuerde la curiosidad es el alimento de la investigacin.
Analice sus resultados en clase.

28/ La biotecnologa y su evolucin


Mdulo 2
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

La aplicacin de la biotecnologa
en la agricultura
El rea agrcola es el mundo de exploracin de
Bio-Aventura. Veamos en detalle como la
biotecnologa se ha aplicado en este sector. Exploracin DINMICA
de Preconceptos
Iniciemos con el cultivo in vitro de tejidos vegetales.
Organice los elementos en un
orden lgico

1 proliferacin de 6 separacin de
clulas clulas en medio
de cultivo
lquido

2 planta joven 7 zanahoria

OBJETIVO
1. Comprender el principio de las tcnicas utilizadas en la
propagacin de plantas in vitro. 3 desarrollo de 8 endurecimiento
tallos, hojas y
2. Identificar los criterios para la seleccin de cada una de las enraizamiento
tcnicas.

3. Identificar los principales requerimientos de una planta en


condiciones de campo para un mejor establecimiento in
vitro.
4 embrin joven 9 corte de una
porcin de
zanahoria
SECUENCIA
Explante - Introduccin in vitro - Regeneracin - Endurecimiento

rgano
Tejido Planta
Clula
Respuesta:
CONTENIDO 9-1-4-3
1. Definicin cultivo de tejidos vegetales 8-2-7
2. Historia del cultivo de tejidos
3. Tcnicas de propagacin in vitro

29/ La aplicacin de la biotecnologa en la agricultura


Mdulo 2
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

DINMICA
Con sus palabras describa cules procesos cree usted ocurren en
Exploracin
cada paso de la secuencia
de preconceptos

Podras definir revigorizacin? autotrofa? y


heterotrofa?

Contexto

Una clula vegetal en multiplicacin

Reflexin

La reproduccin asexual de plantas por


cultivo in vitro de tejidos es posible gracias a
que cada una de las clulas de un individuo
vegetal, posee la capacidad necesaria para
permitir el crecimiento y desarrollo de un
nuevo individuo, sin que medie ningn tipo
de fusin de clulas sexuales o gametos. Esta
capacidad se denomina totipotencialidad
celular.

Bsicamente, la reproduccin asexual ocurre


por divisin mittica, mediante el cual, se
cumplen sucesivas etapas de crecimiento y
desarrollo. La mitosis implica una replicacin
de los cromosomas de las clulas hijas, por lo
que las mismas poseen un genotipo idntico
al de la clula madre. As, las clulas vegetales
crecidas en condiciones aspticas sobre
medios de cultivo con suplementos de
reguladores del crecimiento (tambin llama-
dos hormonas vegetales), pueden dividirse
dando dos tipos de respuesta:

1. Una dediferenciacin celular acompaada


de crecimiento celular desorganizado, que
da lugar a una masa de clulas denomina-
da callo, el cual bajo condiciones controla-
das y uso de reguladores de crecimiento
es capaz de generar rganos o embriones
somticos,
2. Una respuesta morfogentica por la cual o
se forman directamente rganos o em-
briones.

El cultivo in vitro consiste en tomar un


explante, una porcin de una planta (pice,
hoja, segmento de tallo, meristemo, embrin,
nudo, semilla, antera, etc.) y colocarlo en un
medio nutritivo estril (usualmente gelificado,
semislido) donde se regenerarn plantas
completas.

30/ La aplicacin de la biotecnologa en la agricultura


Mdulo 2
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

El cultivo de tejidos vegetales forma parte de la biotec-


ptalo
nologa clsica y se define como el conjunto de tecnolo-
semilla anteras gas empleadas en la propagacin y mejoramiento de
una especie. Estas tecnologas se fundamentan en los
procesos naturales de propagacin va vegetativa y
sexual y en la capacidad que tiene la clula vegetal para
regenerar una planta completa, a partir de un explante,
esa potencialidad se define como totipotencia.

Explante: fragmento de tejido diferenciado u rgano


(semilla, meristemo, hoja, raz, tallo, ptalos, anteras,
polen, entre otros).

hoja HISTORIA
Como ya comentamos durante los aos 1800 la teora celular
defini que la clula era la unidad estructural bsica de los seres
vivos. En la segunda parte de esta teora se afirm, que esas unidades
tallo estructurales son distintas y tienen una capacidad particular en las
raz plantas: la Totipotencia.

meristemo La historia del cultivo de tejidos vegetales se remonta a los aos 1800,
cuando Schwann y Schleiden introdujeron el concepto fundamental
de la Totipotencia en el laboratorio.

Los primeros intentos de cultivar in vitro clulas de tejidos vegetales


llevados a cabo por Haberland en 1902 no tuvieron xito, pues pensa-
ba que solamente el medio de cultivo nutritivo era suficiente.

Entre 1898 y 1922 Haberland y sus colaboradores decidieron cultivar clulas de


polen
parenquima empalizada, mdula de parenquima y epidermis de hoja. Sin embargo, estas
crecieron pero no se dividieron.

Desde 1934 hasta 1939, Gautheret, Nobecourt y White, desarrollaron trabajos de investiga-
cin paralelos cultivando puntas de raz de tomate y zanahoria utilizando medios de cultivo
enriquecidos con vitaminas, azcares y extracto de levadura.

En los aos 50s tienen lugar grandes descubrimientos:


Millar & Skoog obtiene brotes a partir de mdula de tabaco. A partir de este trabajo descubren
que la sustancia responsable de este fenmeno era la Kinetina, un regulador de crecimiento.
Steward, cultiva tejido de zanahoria en medio de cultivo con leche de coco y descubre el
proceso de embriognesis.
Muir, report que fragmentos de tejidos desorganizados (callos) de tabaco cultivados en
medio lquido dan origen a clulas en suspensin.

En los aos 60s se generan importantes avances:


Se confirma la regeneracin de una planta completa a partir de un tejido.
Morel & Martin obtienen plantas de dalia libres de virus y formulan la composicin de
vitaminas ms utilizadas hasta el presente, las vitaminas de Morel.
Cocking logr remover la pared de la clula vegetal empleando enzimas para dar origen a
los protoplastos.
En 1962 Murashige & Skoog desarrollan la composicin del medio de cultivo universal-
mente ms utilizado que contiene adems de sales minerales, azcar, carbono como
fuente de energa, vitaminas y los reguladores de crecimiento (hormonas vegetales).

31/ La aplicacin de la biotecnologa en la agricultura


Mdulo 2
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Para un mejor entendimiento de los procesos implicados en el cuenta que el xito del proceso esta determi-
proceso de cultivo de tejidos vegetales es necesario manejar nado por factores como:
los siguientes conceptos:
1. Genotipo de la especie
1. Diferenciacin: Desarrollo de clulas o tejidos con funcio- 2. Edad de la planta
nes especficas y/o regeneracin de rganos o estructuras: 3. Edad y tipo de explante
races, brotes pro-embriones. 4. Condiciones de crecimiento de la planta
madre
2. Dediferenciacin: Reversin del estado diferenciado al no 5. poca del ao
diferenciado.
El crecimiento de las clulas a partir de los
3. Revigoracin: Rejuvenecimiento, reversin del estado diferentes explantes para la regeneracin de
adulto al juvenil. la planta puede ser:
(Fossard, 1977)
4. Variacion somaclonal: Incremento
de la variabilidad gentica en FUENTES DE EXPLANTES 1. Organizados: corres-
plantas superiores. Se presenta ponde al cultivo de
cuando el estado indiferen- estructuras organizadas
ciado, callo, ocupa un semilla de la planta o de
largo perodo y ocurre Embrin rganos, a partir de
una prdida de la me- Meristemo los cuales se pue-
moria gentica. Las de formar directa-
clulas comprometidas mente una nueva
en un programa estructura organi-
Clula CTV Protoplasto
gentico especfico, za. Ejemplo: a
sufren reorientaciones partir de discos de
y pueden formar nue- hoja se regeneran
vos grupos con caracte- races de manera
res genticos diferentes directa.
Callos
al inicial.
rganos 2. No-organizados:
5. Callos: Formacin desorgani- hace referencia al creci-
zada (dediferenciado) de un Yemas miento desorganizado de
grupo de clulas, resultado de una las clulas, cuando stas o los
alta actividad mittica de clulas tejidos, son aislados de partes orga-
diferenciadas en respuesta a un estmulo nizadas, luego dediferenciados y poste-
ej.: heridas, alta produccin de auxinas en seal de cicatri- riormente cultivados. Pueden resultar agre-
zacin. gados de clulas (callos) o se pueden indu-
cir suspensiones celulares. El crecimiento no
6. Endurecimiento: Aclimatizacin de la planta in vitro a las organizado es el resultado, principalmente,
condiciones in vivo. Se presenta un gradual decrecimiento en del uso de altas concentraciones de auxina
la humedad relativa donde crecieron las plantas. o citoquininas (hormonas vegetales) en el
medio. La estabilidad gentica de estos
7. Suspensiones celulares: conjunto de clulas provenientes cultivos es bastante baja.
de callos, que al ser sometidos a digestiones enzimticas o
rupturas mecnicas son separadas en medio de cultivo 3. No-organizados/organizados: Es interme-
lquido. Pueden crecer como agregados o permanecer dio entre los dos anteriores. Un rgano o
dispersas en el medio de cultivo lquido. tejido aislado se diferencia, formando tejidos
o una capa de tejido calloso, por divisin de
8. Protoplastos: clula vegetal desprovista de pared celular y los cuales se pueden regenerar rganos
cultivadas inicialmente en medio lquido. (races o brotes) o an individuos completos
(pro-embriones y embriones). En estos casos
Para el cultivo de tejidos vegetales pueden ser empleados la progenie no es completamente idntica a
diferentes partes de la planta. Sin embargo hay que tener en la planta original.

32/ La aplicacin de la biotecnologa en la agricultura


Mdulo 2
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El cultivo de tejidos vegetales in vitro ofrece diferentes tcnicas:

1. Micropropagacin
2. Organognesis
3. Embriognesis
4. Suspensiones celulares
5. Cultivo de anteras y polen
6. Cultivo de protoplastos

Veamos en detalle cada una de ellas:

MICROPROPAGACIN

Etapa 1 Etapa 3 Etapa 4


Desinfestacin e introduccin del Enraizamiento
explante a condiciones in vitro

Etapa 2
Endurecimiento

Multiplicacin de brotes

La micropropagacin se conoce tambin con el trmino de


propagacin clonal y fue descrita por primera vez por Weber
para plantas cultivadas y producidas vegetativamente. Este
Ideas para discutir:
Qu aspectos deben tenerse en cuenta para
trmino significa que la planta es multiplicada a travs de la seleccin del explante?
brotes, yemas, injertos o estacas. La propagacin clonal Un organismo que se desarrolla bajo condi-
deriva del trmino clon y se refiere a plantas producidas por ciones in vitro es hetertrofo o auttrofo?
reproduccin asexual donde las descendientes son idnticas a De acuerdo con la respuesta anterior, cules
considera debe ser los componentes de un
la planta de origen.
medio de cultivo adecuado para la multipli-
cacin in vitro de clulas vegetales?
La micropropagacin se emplea para la produccin de
plantas a gran escala y es utilizada principalmente en aque- Claves para el docente:
llos materiales vegetales que presentan problemas con la Para la seleccin de explante debe tenerse en
germinacin de la semilla o cuando tienen periodos cuenta el genotipo, la edad fisiolgica, la
vegetativos muy largos como ocurre en frutales y forestales. posicin del explante en la planta, la proce-
dencia del material (zonas geogrficas) y las
condiciones de cultivo (invernadero o
Las ventajas que ofrece este sistema de multiplicacin com- campo).
parado con los mtodos convencionales en el campo son: Los componentes de un medio de cultivo
para la propagacin de plantas incluyen:
Menor tiempo y espacio para obtener un mayor nmero Fuente de carbono
de plantas en sistema asptico in vitro. Reguladores de crecimiento
Vitaminas y aminocidos
Agentes gelificantes , cuando se trata de
Se pueden obtener plantas libres de virus utilizando
un medio slido
meristemos, por lo cual se asegura que son plantas limpias Sales minerales (Macro y micronutrientes)
pero no resistentes a virus. La propagacin in vitro utilizando Agua
meristemo como explantes y tratamientos a altas temperatu-
ras como termoterapia, garantizan la eliminacin de virus.

33/ La aplicacin de la biotecnologa en la agricultura


Mdulo 2
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Las etapas de la micropropagacin son: Etapa 2: Proliferacin o multiplicacin de


brotes a partir de los explantes
Etapa 1: Seleccin del explante
En esta etapa, los reguladores de crecimiento en
Es importante tener en cuenta en esta etapa el particular las citoquininas juegan un papel impor-
genotipo, la edad fisiolgica, la posicin del explante tante. Es necesario que el medio de cultivo utilizado
en la planta, la procedencia del material (zonas geo- en la regeneracin contenga adems un azcar como
grficas), las condiciones de cultivo de la planta madre fuente de carbono, vitaminas y los aminocidos
(invernadero o campo) y la poca del ao. El explante necesarios para su completo desarrollo.
es desinfestado con soluciones de hipoclorito de sodio
y alcohol 70% para eliminar contaminantes superficia- Etapa 3: Enraizamiento
les antes de ser introducido al medio de cultivo estril
bajo condiciones de asepsia. Para inducir el enraizamiento es necesario transferir
el material vegetal a un medio de cultivo que conten-
Medio de cultivo: es uno de los factores ms impor- ga reguladores de crecimiento en especial auxinas.
tantes para la respuesta del explante in vitro y con-
tiene todos los requerimientos nutricionales para Etapa 4. Endurecimiento
que se logre la regeneracin de plantas. Debido a
que las plantas bajo estas condiciones son Consiste en la adaptacin gradual de las plantas
heterotrofas y no autotrofas, se hace necesario adi- producidas in vitro a las condiciones externas donde
cionar al medio de cultivo estos elementos. (Ver la humedad relativa es menor y no requieren de
claves para el docente). fuentes de carbono exgenas.

ORGANOGNESIS

Directa:

Formacin de rganos como races y brotes sin formacin de callo

Seleccin del explante

Formacin de callos Diferenciacin de rganos


Indirecta:

Durante el desarrollo de la planta aparece


una etapa
de formacin de callo
Introduccin in vitro

Es el proceso de diferenciacin en el cual rganos, 1. Organognesis indirecta: Implica la formacin de


races y brotes adventicios y tallos se forman directa o un callo sobre el explante inicial como resultado
indirectamente a partir de otros tejidos. La formacin de la herida producida al remover el explante de
de estas estructuras se logran a partir del desarrollo la planta y por la accin de los reguladores de
de cultivo de estos rganos. Tejidos que usualmente crecimiento ya sean exgenos o endgenos.
no los forman. 2. Organognesis directa: Los brotes adventicios se
forman directamente de los explantes sin forma-
La produccin de plantas por esta va puede llevarse a cin de callos. Este fenmeno pone de manifiesto el
cabo bajo dos modalidades: concepto de totipotencia, propio de los vegetales.

34/ La aplicacin de la biotecnologa en la agricultura


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EMBRIOGNESIS

Etapa 1 Etapa 2 Etapa 3 Etapa 4 Etapa 5 Etapa 6

Transplante

Iniciacin
Proliferacin de
tejidos
Regeneracin de una embrionarios Maduracin de
embriones
planta completa a partir somticos
de un embrin Germinacin
Aclimatacin

Es el proceso mediante el cual se induce la formacin del tejidos embrionarios como el escutelo, en tejidos
embrin. Esta puede ocurrir a partir de embriones jvenes como hipocotilos o en plantas maduras a
zigticos o sexuales inmaduros (embriognesis zigtica) partir de vulos.
o a partir de tejidos somticos de la planta (embrio- b. Embriognesis indirecta ocurre por proliferacin de
gnesis somtica). Durante la embriognesis se puede clulas para formar callos, los cuales a su vez origi-
encontrar embriones adventicios, aquellos que se forman nan los embriones. Estos aparecen comnmente de
de rganos o de embriones y embriones partenognicos clulas del floema secundario.
los cuales se forman a partir de huevos no fertilizados.
La embriognesis somtica in vitro a diferencia de la
La embriognesis somtica difiere de la organognesis propagacin clonal no garantiza la estabilidad gen-
en que los embriones tienen estructura bipolar (dos tica de la progenie debido a la alta probabilidad de
polos para la diferenciacin), un polo que da origen al que aparezcan cambios genticos, en especial si el
sistema radicular y el otro a la parte area de la planta. estado de callo permanece mucho tiempo.

En 1980 Sharp y su grupo de investigacin describie- Adicionalmente presenta las siguientes dificultades:
ron dos rutas para la embriognesis: a. La obtencin de plantas completas en algunas
a. La embriognesis directa, a travs de la cual el especies no siempre resulta en un proceso exitoso.
embrin inicia la formacin de tejido sin formacin b. En algunas plantas la induccin de la embriognesis
de callo. Las clulas de este tejido tienen definido somtica ha resultado imposible.
un programa morfogentico, el cual las comprome- c. El estado de dormancia de la semilla aparece con
te en la formacin de embriones y necesitan nica- alguna frecuencia y por lo general es extremada-
mente ser liberadas. Tales clulas se encuentran en mente difcil de romper.

VENTAJAS Y LIMITACIONES DE LA MICROPROPAGACIN

VENTAJAS LIMITANTES

Se requieren muy pequeas cantidades de plantas para obtener La contaminacin, en particular de origen endgeno interfiere
hasta millones de plantas en un ao con el proceso, deteriorando el explante, caso especial en
forestales.
Es muy til en plantas de difcil propagacin por va sexual (semillas)
Puede ocurrir variabilidad gentica si el estado de callo es muy
prolongado. La fuente de variabilidad puede deberse a aberra-
Es un buen sistema para el intercambio de material gentico, pues ciones durante las divisiones celulares en las masas callosas.
es fcil de transladar
Muchos tejidos se ven afectados por problemas de oxidacin
Es posible producir plantas limpias, libres de virus cuando se utili- debido a la presencia de taninos y fenoles particularmente en
zan meristemos como fuente de explante. Es el caso de papa y de especies leosas. Otros como los ornamentales se ven afectados
ornamentales donde la tcnica es muy empleada por problemas de hiperhidratacin (aspecto vidrioso en las hojas).

35/ La aplicacin de la biotecnologa en la agricultura


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SUSPENSIONES CELULARES

Tcnica
aplicada a la
produccin de
metabolitos
secundarios

callo embriones somticos


embriognico

Cultivo de clulas a partir de callos en medio


lquido en continua agitacin

Corresponde al cultivo de clulas en medio lquido. condiciones controladas del sistema ayudan a superar
Estas clulas pueden estar dispersas o agregadas en el las barreras climticas.
medio. Normalmente se inicia el cultivo a partir de
callos que se disgregan fcilmente (callos friables) y que Un aspecto importante a considerar en esta tcnica
crecen continuamente en agitacin. En la suspensin es la asincrona que tienen las clulas. Su tamao y
hay clulas activas, clulas muertas y restos de los forma variable, el volumen nuclear, el contenido de
rganos (debris), que deben ser con removidos por ADN y los tiempos en la divisin celular, varan por lo
centrifugacin y filtracin para favorecer el crecimiento cual es necesario sincronizar las clulas, es decir,
celular. Este sistema de cultivo es similar al empleado todas las clulas en la suspensin deben estar en un
para cultivos bacterianos y para procesos de fermenta- mismo momento del ciclo celular.
cin (fermentadores y birreactores).
Cmo se sincronizan las clulas en cultivo?
Esta tcnica es aplicada en la produccin de
metabolitos secundarios que se encuentran con fre- a. Sometindolas a choques a bajas temperaturas 4C
cuencia en las plantas medicinales. Debido a que natu- por unos das
ral existen factores ambientales que afectan la b. Privando el cultivo de elementos esenciales, tales
produccin de estos metabolitos, el clima, presencia de como el nitrgeno, fsforo y carbohidratos que
patgenos y cambios de estacin son algunos de ellos. favorecen su actividad mittica
Al inducir la formacin de suspensiones celulares , la c. Adicionando inhibidores como la hidroxiurea, la
cantidad y concentracin del metabolito pueden verse timidita y la colchicina que detienen la divisin
favorecidas, pues el nmero de clulas es mayor y las celular

CULTIVO DE ANTERAS Y POLEN

Tipos de polen

Se desarrollaron para apoyar y


complementar los programas de
mejoramiento gentico convencional,
ya que permiten la obtencin de
haploides.

polen

Obtencin de haploides

El cultivo de anteras y polen es empleado para la rrollaron para apoyar y complementar los avan-
obtencin de haploides y para la de deteccin ces de los programas de mejoramiento gentico
mutaciones en especies. Ambos tcnicas se desa- convencionales.

36/ La aplicacin de la biotecnologa en la agricultura


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Los haploides, organismos donde todos los tejidos unos meses un ao, mientras que empleando
tienen una carga gentica igual a la de una clula sistemas convencionales puede tardarse entre 6-
sexual, fueron de gran importancia en el campo de la 8 aos
gentica y del mejoramiento vegetal, sin embargo su b. Desarrollo de hbridos como resultado de la
aprovechamiento se ha limitado dada la baja frecuen- diploidizacin de un haploide que fija ms fcil-
cia con la que ocurren en la naturaleza. En condiciones mente las caractersticas
naturales, un haploide es el resultado del procesos de c. Deteccin de mutaciones
apomixis o partenognesis (reproduccin sexual sin d. Induccin de la variabilidad gentica, a travs
fertilizacin del vulo). En condiciones artificiales se del cultivo de anteras, no solo fue posible obte-
logra por mtodos de germinacin del polen, trata- ner plantas haploides, sino plantas con diferen-
mientos hormonales y bajas temperaturas. tes niveles de ploidia que son aprovechadas e
incorporadas en los programas de mejoramiento
En 1967 Nitsch obtuvo la primera planta haploide de e. Obtencin exclusiva de plantas masculinas. La
tabaco a partir de clulas de polen. La planta origina- induccin de haploides seguida de la duplicacin
da por este mtodo tiene una carga gentica reduci- de los cromosomas permite obtener nicamente
da a la mitad y mediante tratamiento con colchicina plantas masculinas
se obtiene durante la segunda generacin una carga
gentica diploide. Recientemente se han obtenido plantas haploides a
partir de cultivo de vulos y ovarios lo que se cono-
Importancia del uso de los haploides ce con el nombre de haploides ginognicos. Estas
a. Desarrollo de lneas homocigotas puras para plantas son comparables con las obtenidas a partir
obtener nuevas variedades en menor tiempo, de anteras y polen (haploides andrognicos).

AISLAMIENTO Y CULTIVO DE
PROTOPLASTOS

Los protoplastos se definen como una clula vegetal a la cual


se le ha retirado su pared celular. El trmino fue introducido
por Hanstein en 1880 para definir una clula rodeada nica-
mente por la membrana.

Para la eliminacin de la pared de la clula vegetal se em-


plean mtodos mecnicos o enzimas que degradan la celulo-
sa y las pectinas presentes en sta. Los mtodos enzimticos
aventajan a los mtodos mecnicos debido a que no causan
un mayor dao a las clulas durante el aislamiento.

Esta tcnica se desarroll


con el objeto de producir Esta tcnica se desarroll con el objeto de producir nuevas
nuevas variedades de
plantas, a travs, de la variedades pues era posible unir protoplastos provenientes
unin de protoplastos.
de fuentes de tejido diferentes (ex: de raz con hoja) o de
especies taxonmicamente muy distantes.

Los protoplastos aislados son sembrados en un medio


lquido enriquecido con reguladores de crecimiento, vita-
minas y estabilizadores osmticos que reemplazan la fun-
cin de la pared para que la clula no se desintegre. A las
24-48 horas el protoplasto debe regenerar su pared y el
desarrollo del cultivo se asemeja al de las clulas en suspen-
sin. De aqu en adelante todos los procesos revisados
anteriormente tienen lugar para conducir a la formacin de
una planta completa.

37/ La aplicacin de la biotecnologa en la agricultura


Mdulo 2
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Mtodos de fusin: dad de los equipos y la destreza en los tiempos de


aplicaciones de la corriente.
1. Espontnea: Ocurre durante las primeras etapas 4. Electroporacin: con base en el principio del mtodo
del cultivo, donde los protoplastos tienden a de electrofusin se generan poros en la membrana
fusionarse de manera no controlada conduciendo para permitir el ingreso del material gentico forneo.
a la obtencin de diferentes tipos de fusin, 5. Microinyeccin: con ayuda de una aguja fina, se
aquellos que fusionan solo los citoplasmas y los perfora la membrana y se inyecta el material
que fusionan los dos ncleos. gentico externo
2. Inducida con qumicos: Se usa comnmente el
polietilen glycol (PEG), el calcio, y el nitrato de sodio. Finalmente, muchas de estas tecnologas utilizadas
3. Electrofusin: Los cultivos de protoplastos son some- para la transferencia de material gentico provenien-
tidos a descargas elctricas a travs de electrodos de te de otro organismo han quedado en desuso, princi-
manera que llegan a alinearse y fusionarse. Este mto- palmente debido al difcil control que se puede
do result fcil, rpido y eficiente y no era necesario ejercer durante el proceso y donde no se garantiza de
agregar sustancias qumicas que pudieran ser txicas. manera precisa la produccin de organismos
Sin embargo, no fue muy aceptado por la especiali- genticamente modificados.

Ideas para discutir:


Porqu y para qu considera importante el uso de cultivo in vitro de tejidos vegetales?

Claves para el docente:


El cultivo in vitro de tejidos vegetales es importante para:
Propagacin masiva de plantas, especialmente beneficioso para especies de difcil propagacin por
otros mtodos convencionales o para especies en vas de extincin
Clonacin de individuos elite durante todo el ao
Obtencin de plantas libres de virus
Produccin de semillas sintticas
Conservacin de germoplasma
Obtencin de metabolitos secundarios
Produccin de nuevos hbridos
Mejora gentica de plantas
Germinacin de semillas.
Produccin de haploides.

Ideas para discutir:


Cul es la relacin del cultivo in vitro con la biotecnologa?

Claves para el docente:


La propagacin de plantas in vitro es una tcnica biotecnolgica muy utilizada en cultivos de importancia
econmica. Como se mencion permite cultivar clulas, tejidos, rganos, semillas, embriones y obtener
individuos en forma rpida. Los cultivos son realizados por personal especializado empleando medios
especficos (reguladores de crecimiento, sales minerales, vitaminas, fuente de carbono, agente gelificante,
agua, etc.). Las condiciones ambientales suelen estar controladas (temperatura, humedad y luz). Una vez
ajustados los protocolos para la especie o cultivo de inters es posible escalonar el proceso y llevarlo a escala
industrial. La micropropagacin (propagacin clonal por cultivo in vitro) constituye uno de los mtodos
biotecnolgicos que mayores logros ha aportado al desarrollo de una nueva agricultura, la misma es aplicada
en la produccin masiva de especies hortcolas, aromticas, medicinales, frutcolas, ornamentales y forestales.

Ventajas del Cultivo de tejidos in vitro:


Otorga la posibilidad de incrementar rpidamente nuevos materiales.
Permite estudiar diversos procesos fisiolgicos
Evita el riesgo de que proliferen agentes patgenos mediante el uso de medios estriles y bajo
condiciones de asepcia.
Se puede obtener gran cantidad de individuos en espacios reducidos.
Permite la obtencin de individuos uniformes.
Facilita el transporte del material.

38/ La aplicacin de la biotecnologa en la agricultura


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Taller de comprensin de la seccin para realizar con los estudiantes

Cultivo de tejidos vegetales in vitro

Concepto
El cultivo de tejidos se refiere al cultivo individual de clulas, tejidos o de rganos (explantes), sobre un
medio artificial. A partir de ellos es posible regenerar un organismo completo.

Objetivo
Propagar in vitro plantas de repollo a partir de semillas

Materiales
Semillas de repollo
4 Frascos de compota limpios
Un vaso desechable
Mezclador o cuchara
Agua destilada
Gelatina sin sabor
Algodn
Papel aluminio
Vinipel
Tijeras
Hipoclorito de sodio (Clorox)
Pinzas
Vaso con medida o probeta
Colador de tela
Balanza

Procedimiento
1. Preparacin de la solucin de hipoclorito de sodio
Teniendo en cuenta que el blanqueador comercial viene a una concentracin de 5.6%, tome 200 ml
de agua destilada y coloque 200 ml de hipoclorito de sodio, para as obtener 400 ml de una solu-
cin desinfectante al 2.8%. Emplee para medir una probeta de 500 ml
Frmula: Volumen 1 x concentracin 1 = Volumen 2 x concentracin 2

2. Desinfestacin de la semillas
- Lave las semillas con hipoclorito durante 10 a 15 minutos

vaso desechable
Solucin de
hipoclorito de sodio

semillas

- Retire el lquido. Para evitar la prdida de semillas aydese con el colador. Enjuague con agua
destilada la semillas, repite este procedimiento tres veces.

39/ La aplicacin de la biotecnologa en la agricultura


Mdulo 2
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Taller de comprensin de la seccin para realizar con los estudiantes

3. Preparacin del medio de germinacin:

- Tome uno de los frascos de compota, previamente desinfectado con hipoclorito y en-
juagado con agua destilada. Adicione dos centmetros de agua destilada estril y colo-
que el algodn en la superficie del agua.

4. Germinacin de las semillas:


- Usando unas pinzas estriles tome algunas de las semillas desinfectadas y colquelas enci-
ma del algodn.
- Tape el recipiente con papel vinipel

tapa de papel vinilpel

semillas germinadas

algodn
agua

- Coloque en lugar clido 20 - 25o C y con mucha luz (12 horas) durante cuatro das

Al trmino de los cuatro das la germinacin de las semillas ha tenido lugar, prepare el medio
de cultivo para iniciar el proceso de siembra.

5. Preparacin del medio de cultivo:


- Pese 2.5 gramos de gelatina adicione 250 ml de agua estril. Caliente y agite con el mez-
clador o cuchara, hasta que el polvo se disuelva.

solucin de agua + gelatina

- Antes que la solucin se enfre, vierta la solucin en tres frascos de compota (aproximada-
mente 5 cm). Deje que la solucin se enfre y solidifique.

40/ La aplicacin de la biotecnologa en la agricultura


Mdulo 2
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Taller de comprensin de la seccin para realizar con los estudiantes

6. Introduccin in vitro del material vegetal


- Corte de la parte superior los brotes germinados. Tenga cuidado de cortar justamente
debajo de la yema apical.

yema apical
cotiledones

algodn

- Coloque un explante en cada frasco. Introdzcalo un poco dentro del medio de cultivo.
Tenga cuidado que los cotiledones no queden tocando la superficie.
- Tape los frascos con papel de aluminio y colquelos en un lugar iluminado (borde de
una ventana).
- Observe diariamente y tome informacin cuantitativa y cualitativa del proceso.

Nota: no abra los frascos durante el desarrollo del experimento

Ideas para discutir:


Qu le proporciona la solucin de gelatina al explante?
Por qu es importante tapar los frascos?
Sugiera por que lo explantes utilizados pueden continuar creciendo, cuando ellos han sido
aislados del resto del brote, con pocos nutrientes?
Qu factores fsicos o qumicos introducira al experimento? Explique.

Claves para el docente:


El agar o gelatina proporciona agua y soporte al explante.
Mantener la humedad, prevenir la contaminacin, permitir la luz, etc.
Los cotiledones son rganos fotosintticos que contienen su propia reserva de nutrientes.
Cambios de temperatura, adicin de azcar al medio de cultivo, tipo de luz etc.

41/ La aplicacin de la biotecnologa en la agricultura


Mayores informes:
Calle 90 No. 11A - 34 Oficina 409
Telfono: 610 1029 Fax: 610 1247
E-mail: agrobio@agrobio.org Web: www.agrobio.org
Exploremos como los avances en el conocimiento han sido
aplicados para darle valor agregado a los sistemas
biolgicos y recursos vivos.
LA BIOTECNOLOGA Y SU EVOLUCIN
BIOTECNOLOGA TRADICIONAL Procesos
Procesos yy actividades
actividades desarrolladas
desarrolladas aa travs
travs de
de recetas
recetas yy tradiciones:
tradiciones: Queso,
Queso, yogurt
yogurt yy vino
vino

El origen de la biotecnologa se
remonta a los tiempos de la
prehistoria. - 10.000 AC, Domesticacin de cultivos.

- 8.000 - 9.000 AC, Domesticacin de animales.


Desde el ao 10.000 AC, la
biotecnologa cobra valor con las
prcticas de domesticacin de
cultivos, llevados a cabo por el
hombre cuando sus costumbres
cambiaron y pas de ser nmada a
sedentario. Su nueva organizacin le - 6.000 AC, La levadura es utilizada por sumerios y
exigi iniciar un proceso de babilnicos para elaborar cerveza.
seleccin de sus alimentos que
muestran caractersticas de inters:
plantas ms resistentes, frutos ms
grandes y dulces, entre otros.

Con base en simples observaciones,


le fue posible distinguir cultivos ms
productivos, resistentes a plagas y
enfermedades lo que result en
ventajas adaptativas para el
organismo. Sin conocer ni disponer - 4.000 AC, Los egipcios descubrieron cmo hacer pan usando levaduras.
de tcnicas de mejoramiento de
- 2.500-200 AC, Egipto. Empleo de bacterias y levaduras, fermentacin de
cultivos y con el objeto de mejorar
uvas y cebada, produccin de vino y vinagre
su alimentacin, el hombre empieza
a intervenir en la naturaleza para - 500-100 AC, China. Primer insecticida producido a partir de un hongo
tener a su alcance mejores de crisantemo.
materiales vegetales.
500 AC, Primer antibitico de moho de soya.

- 300 AC, Grecia. Desarrollo de injertos para


mejoramiento en plantas.

BIOTECNOLOGA CLSICA Mayor


Mayor conocimiento
conocimiento de
de los
los organismos
organismos involucrados
involucrados yy la
la forma
forma de
de controlarlos:
controlarlos: Cultivo
Cultivo de
de tejidos
tejidos vegetales
vegetales in
in vitro
vitro
- 1663, Robert Hook descubre la existencia de la clula.
As, en la medida en que aument el
- 1675, Anthony van Leewenhoeek, descubre la clula
conocimiento y comprensin sobre bacteriana.
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia

el funcionamiento de los organismos


- 1700, Identificacin de primeros hbridos.
vivos y sus procesos, el hombre tuvo
a su alcance nuevas herramientas - 1865, Descubrimiento de las leyes de la herencia
que le permitieron desarrollar y
- 1898, Haberland realiz el primer cultivo de clulas de
mejorar productos. parnquima.

- 1880, Produccin de vacunas.

- 1910, Primer hbrido de maz.

El auge de la biotecnologa solo se - 1922, Descubrimiento de la insulina para tratamiento.


alcanza en la dcada de los 70s con el
- 1928, Descubrimiento de la penicilina.
descubrimiento de las enzimas de
restriccin, las cuales permitieron el - 1940, Produccin de antibiticos.
desarrollo de la tecnologa de genes, lo
que se consider revolucionario en - 1944, T. Avery asla ADN puro. se demuestra que el ADN est en el
este siglo. ncleo y es el material gentico.

- 1960, Produccin de variedades de arroz y trigo con alta productividad.

BIOTECNOLOGA MODERNA Se conocen los organismos involucrados, los mecanismos de control y adicionalmente la forma de modificarlos para beneficio del hombre. Entran en aplicacin las tecnologas del ADN recombinante.

- 1990, Lanzado el proyecto de genoma humano.

Actualmente, la diferencia - 1995, Primera planta de papa transgnica resistente al escarabajo


colorado.
fundamental que aportan las
tcnicas actuales es que el hombre - 1996, Primera produccin comercial de canola, maz y soja transgnicas
no slo sabe cmo usar las clulas u en Canad.
organismos de la naturaleza, sino
que ha aprendido a modificarlos y - 1997, Clonacin de la oveja Dolly.
manipularlos en funcin de sus
- 1998, Ubicacin de 30 genes en el genoma humano.
necesidades.
- 2003, Colombia es el pas 58 signatario del Protocolo.
Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola
- 2003, Aprobado el algodn transgnico en Colombia.

afiches final mod2 1 13/01/2005, 03:28 pm


Conozcamos como se aplica la
biotecnologa en diferentes reas:

SALUD HUMANA Y ANIMAL:


Sistema de diagnstico de
enfermedades.
Productos farmacuticos:
Antibiticos, vitaminas, insulina.
Vacunas: la vacuna de la hepatitis B
obtenida a travs de la modificacin
de la levadura.
Terapia gnica: Tratamiento contra
enfermedades de origen gentico
mediante el reemplazo y/o
modificacin de los genes que
presentan un funcionamiento
anmalo.
Identidad molecular: tcnica que
permite la identificacin de los El rea agrcola es el mundo de exploracin de Bio-Aventura. Veamos en detalle como la biotecnologa se ha aplicado en este sector.
personas a travs de patrones de Iniciemos con el cultivo in vitro de tejidos vegetales.
secuencias genticas para prueba
de paternidad y gentica forense. El cultivo de tejidos vegetales forma parte de la biotecnologa clsica y se define como el conjunto de tecnologas empleadas en
En animales se aplica para estudios la propagacin y mejoramiento de una especie. Estas tecnologas se fundamentan en los procesos naturales de propagacin va
vegetativa y sexual y en la capacidad que tiene la clula vegetal para regenerar una planta completa, a partir de un explante, esa
de diversidad, evolucin, gentica
potencialidad se define como totipotencia.
de poblaciones y programas de
mejoramiento. El cultivo in vitro de cultivos vegetales es importante para: preparacin masiva de plantas, obtencin de plantas libres de virus,
produccin de semilla sinttica, observacin de germoplasma, obtencin de metabolitos secundarios, produccin de nuevos
hbridos, mejora gentica de plantas y germinacin de semillas.
INDUSTRIA:
Aditivos: ctricos
Saborizantes
Colorantes: azul indigo
Alcohol carburante: etanol
Productos lcticos (yogurt y
quesos) uso de partes o del
organismo completo (enzimas o
microorganismos)
MICROPROPAGACIN
Detergentes: obtencin de enzimas
que degradan cidos grasos,
lipolasa (Aspergillus), cutinasa
(Saccharomyces), de protenas
(Bacillus licheniformis) para eliminar
manchas de sangre, comida, etc.

AMBIENTE:
Biorremediacin: Tratamiento de
residuos lquidos contaminados. Un
ejemplo de esta aplicacin es la
limpieza de derrames de petrleo
empleando bacterias.
Manejo de residuos slidos: Uso de
bacterias, hongos para la
degradacin de residuos orgnicos. Etapa 11
Etapa Etapa 22
Etapa Etapa
Etapa 33 Etapa 4
Biolixiviacin: Recuperacin de
metales mediante su solubilizacin. Seleccin, desinfestacin e
Aplicacin de gran inters para la
introduccin del explante a Multiplicacin de brotes Enraizamiento Endurecimiento
industria minera.
Diagnstico y deteccin de condiciones in vitro
sustancias: uso de organismos,
bacterias, plantas, etc., que Meristemo
detecten e informen acerca de la
presencia de sustancias especficas
actuando como biosensores.
ORGANOGNESIS Domo
meristemtico
AGRCOLA: Diferenciacin pice
Sistemas de diagnstico de de rganos Brote apical meristemtico
enfermedades.
Agrobiolgicos, uso de organismos Formacin Primordio
vivos o las sustancias producidas Seleccin del de callos foliar
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia

por ellos para mejorar la explante


Yema axilar
productividad de los cultivos o para
el control de plagas y malezas.
Cultivo de clulas y tejidos in vitro,
para produccin de plantas a gran
escala, obtencin de metabolitos
secundarios y mejoramiento
gentico. Directa: Formacin de
Cultivos genticamente mejorados rganos como races y
mediante tecnologa de genes. brotes sin formacin de callo
Conservacin de germoplasma.
Estudios de diversidad, evolucin,
gentica de poblaciones y
programas de mejoramiento. Indirecta: Durante el desarrollo de la planta
Indirecta:
aparece una etapa de formacin Introduccin in vitro
de callo

Desarrollo in
Desarrollo in vitro
vitro

Brotes Formacin de Desarrollo Embriognesis Tuberizacin Callos Plntula Florecimiento


Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola adventicios bulbos ovario

afiches final mod2 2 13/01/2005, 03:29 pm


La reproduccin asexual de plantas por cultivo in vitro

Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia
de tejidos es posible gracias a que cada una de las
clulas de un individuo vegetal, posee la capacidad
necesaria como para permitir el crecimiento y
desarrollo de un nuevo individuo, sin que medie ningn
tipo de fusin de clulas sexuales o gametos.

EMBRIOGNESIS
Esta capacidad se denomina
totipotencialidad celular. Etapa 11
Etapa Etapa 22
Etapa Etapa 33
Etapa Etapa 44
Etapa Etapa 55
Etapa Etapa 66
Etapa
Iniciacin Proliferacin de Maduracin de Germinacin Aclimatacin Transplante
tejidos embriones
Bsicamente la reproduccin embrionarios somticos

asexual ocurre por divisin


mittica, mediante el cual, se
cumplen sucesivas etapas de
crecimiento y desarrollo. La
mitosis implica una replicacin
de los cromosomas de las
clulas hijas, por lo que las
mismas poseen un genotipo
idntico al de la clula madre.
As, las clulas vegetales
crecidas en condiciones
Regeneracin de una
aspticas sobre medios de planta completa a partir
cultivo con suplementos de de un embrin
reguladores del crecimiento
(tambin llamados hormonas
vegetales), pueden dividirse
dando dos tipos de respuesta:

1. Una dediferenciacin
SUSPENSIONES CELULARES
SUSPENSIONES CELULARES
Cultivo de clulas a partir de callos en medio lquido en
continua agitacin AISLAMIENTO
celular acompaada de Y CULTIVO DE
crecimiento celular
desorganizado, que da lugar Tcnica aplicada a
la produccin de
PROTOPLASTOS
a una masa de clulas
metabolitos
denominada callo, el cual secundarios

bajo condiciones
controladas y uso de
reguladores de crecimiento
es capaz de generar rganos
o embriones somticos,
2. Una respuesta embriones
somticos
morfogentica por la cual o
se forman directamente callo Esta tcnica se
rganos o embriones. embriognico desarroll con el objeto
de producir nuevas
variedades de plantas,
El cultivo in vitro consiste en a travs, de la unin de
protoplastos.
tomar un explante, una
porcin de una planta (pice, CULTIVO DE ANTERAS POLEN Y OVARIOS
hoja, segmento de tallo,
meristemo, embrin, nudo,
Tipos de polen
semilla, antera, etc.) y
colocarlo en un medio
nutritivo estril (usualmente
polen
gelificado, semislido) donde
se regenerarn plantas
completas.

Se desarrollaron para apoyar y complementar los


programas de mejoramiento gentico convencional, Obtencin de haploides
ya que permiten la obtencin de haploides.

Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola

afiches final mod2 3 13/01/2005, 03:29 pm


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Mdulo 3

La biotecnologa agrcola
moderna y la bioseguridad
Viajemos al mundo de las plantas
genticamente modificadas y conozcamos
las medidas de seguridad y los beneficios
que resultan de su uso.

Contenido
Plantas genticamente
44 modificadas

62 de los organismos
Seguridad y normatividad

genticamente
modificados
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia

Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola
43/ Plantas genticamente modificadas
Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Plantas genticamente
modificadas
Toda nueva variedad de cultivo ha sufrido cambios genticos usando los mto-
dos de mejoramiento convencional (cruzamiento, mutagnesis y radiacin).
Sin embargo, el trmino plantas genticamente modificadas (GM) se refiere a
aquellas que contienen uno o varios genes provenientes de otras especies u
otros organismos (bacterias, virus, etc.) que han sido introducidos en su
genoma por mtodos artificiales.

La modificacin gentica de plantas fue posible en los aos setentas como


resultado del desarrollo de tcnicas que permitan trabajar a nivel de laboratorio
el ADN e introducirlo nuevamente dentro de la planta. A estos procedimientos o
tcnicas se les denomin tecnologas del ADN recombinante.

OBJETIVOS
1. Comprender los procesos y prcticas tecnolgicas que
permiten la obtencin de plantas y organismos
genticamente modificados

2. Integrar los avances y conocimientos generados en los


ltimos aos en el desarrollo y aplicacin de las herramien-
tas de la biotecnologa agrcola moderna
DINMICA
3. Entender los principios bajo los cuales es posible mejorar
algunas caractersticas de los organismos mediante tcni-
cas de ADN recombinante

SECUENCIA
Exploracin
Biotecnologa moderna - ADN recombinante - Organismos de Preconceptos
genticamente modificados
En una hoja de papel elabore un
mapa conceptual alrededor de las
CONTENIDOS
plantas genticamente modificadas.
1. ADN recombinante y Organismos genticamente
modificados Utilice su imaginacin, los elementos
2. Procesos implicados en la modificacin gentica proporcionados a lo largo de las
3. Mtodos de transformacin diferentes Bio-Aventuras y el conoci-
4. Principios de transformacin de algunos eventos miento que ya tiene sobre los orga-
biotecnolgicos nismos vivos y su funcionamiento.

44/ Plantas genticamente modificadas


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Breve historia del desarrollo


de la tecnologa del
ADN recombinante

La tecnologa del ADN 1953 Watson y Crick descubren la estruc-


recombinante y el tura del ADN
desarrollo de plantas
genticamente modifi- 1955 Arthur Kornberg de la Universidad
cadas forman parte de de Stanford asla la ADN polimerasa,
la Biotecnologa Mo- enzima que sintetiza el ADN.
derna. Esta tecnologa
permite transferir 1966 Bernard Weiss y Charles Richardson
secuencias especficas de la Universidad de Johns Hopkins
del ADN de un orga- University aslan la ADN ligasa, enzima
nismo a otro, particu- que une extremos del ADN.
larmente entre
organismos no relacio- 1970 Hamilton Smith hace la primera
nados: plantas, anima- caracterizacin de las endonucleasas o
les, bacterias, virus y enzimas de restriccin, enzimas que
hongos, superando as tienen la habilidad de reconocer secuen-
la barrera de incompa- cias especficas de pares de bases del
tibilidad entre espe- ADN y cortan la molcula en este punto.
cies lejanas.
1972 Paul Berg report la construccin
El conjunto de tcnicas que permiten llevar a cabo estos de una molcula de ADN a partir de
procesos se conocen como Ingeniera Gentica. secuencias de ADN viral y bacteriana
cortadas con enzimas de restriccin.
As, con el uso de la Ingeniera gentica es posible la elimina-
cin, modificacin o adicin de genes especficos para mejo- 1973 Stanley Cohen y Annie Chang
rar un organismo o un proceso. demostraron que el ADN que ha sido
cortado con enzimas de restriccin,
puede ser recombinado con el ADN de
los plsmidos bacterianos.

1977 Walter Gilbert y Fred Sanger desa-


La biotecnologa incluye conocimientos y herramientas provenientes
de distintas disciplinas: rrollaron mtodos para determinar las
Biologa Biologa Inmunologa y
secuencias de pares de bases en una
Bioqumica Microbiologa
molecular Celular Virologa molcula de ADN.

Biotecnologa A partir de estos desarrollos cientficos los


investigadores y mejoradores contaron con
herramientas que les permiten cortar la
Produccin de Recuperacin
Agricultura Salud
alimentos
rea Ambiental
de metales molcula de ADN en lugares especficos y
Es una herramienta productiva que ha impactado prcticamente en pegarlas nuevamente en diferentes combina-
todas las actividades industriales ciones para conformar una nueva molcula.
Esta habilidad o herramienta se denomin
tecnologa del ADN recombinante.

45/ Plantas genticamente modificadas


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Los organismos vivos a los cuales se les transfieren genes Todo proceso de modificacin gentica a
mediante el uso de la ingeniera gentica, se conocen travs de la biotecnologa moderna implica
como biotecnolgicos, recombinantes, transgnicos o las siguientes etapas:
genticamente modificados.
1. Identificacin y aislamiento de las secuen-
cias de ADN (genes) que controlan carac-
Recordemos que tersticas o procesos de inters

El mejoramiento gentico, data desde hace ms de 10.000 aos. 2. Construccin del transgen

Los procesos de seleccin en el campo realizados por agriculto-


3. Clonacin
res basados en el comportamiento y caractersticas de los
organismos cultivados y cosechados fue y sigue siendo una
estrategia de mejoramiento. 4. Transformacin

Los mtodos de mejoramiento convencional han demostrado ser 5. Seleccin


importante y tiles, sin embargo, dependen en ltima instancia
del azar y la seleccin y no implican la identificacin especfica
6. Regeneracin
de los determinantes genticos (genes).

Los desarrollos cientficos han dotado a los mejoradores de


HIBRIDIZACIN O MEJORAMIENTO CRUZADO
capacidades para intervenir en las caractersticas de un organis-
mo de una manera ms precisa, ofrecindole herramientas que
le permiten trabajar a nivel del genoma vegetal.

El valor de la ingeniera gentica y su aporte a la biotecnologa


moderna y a los procesos de mejoramiento reside en suminis-
trarnos una nueva herramienta que no reemplaza las existentes,
1700 libros de 1000 1700 libros de 1000 libros de 1000
que permite ampliar las posibilidades de mejoramiento median- pginas cada uno pginas cada uno pginas cada uno
te el uso de otros procedimientos. La tecnologa del ADN
recombinante ha facilitado la introduccin de genes entre
especies no relacionadas filogenticamente, es decir, ha permiti-
do superar las barreras biolgicas de la reproduccin sexual, las
cuales en condiciones naturales impiden el intercambio de METODOLOGA DEL ADN RECOMBINANTE
genes de inters agrcola. Estos aspectos que no haban sido
superados a travs de los procesos tradicionales o de la biotec-
nologa tradicional y clsica.

Algunos aportes que han permitido el establecimiento de


programas de mejoramiento orientados, sin la intervencin del
azar y por lo tanto el desarrollo y la aplicacin de las tcnicas de
ADN recombinante han sido: Media Pgina Genes Insertados

El establecimiento de las leyes de la herencia por Gregorio 1700 libros 1.7 millones de pginas 1700 libros 1.7 de pginas

Mendel en el siglo XVII.

El conocimiento que todos los organismos estn constituidos


por ADN, con una misma composicin qumica y que Para discutir en clase:
comparten los mismos procesos de replicacin, transcripcin Por qu es posible realizar la transferencia y
y traduccin. expresin de genes de un organismo a otro?

La comprensin de los mecanismos para la sntesis de


protenas y de divisin celular para la transferencia de la
Claves para el docente:
Todos los organismos estn constituidos por
informacin.
ADN con una misma composicin qumica y
comparten los mismos procesos de replicacin,
El desarrollo de las tcnicas de cultivo de tejidos in vitro, transcripcin y traduccin.
biotecnologa clsica para la regeneracin de plantas trans- Existen enzimas que permiten cortar
formadas. (enzimas de restriccin) y pegar (ligasas) el
ADN.

46/ Plantas genticamente modificadas


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

VEAMOS EN DETALLE CADA ETAPA:


1. IDENTIFICACIN Y AISLAMIENTO DEL GEN DE INTERS

Identificacin del gen de inters Corte con Enzimas de Restriccin Corte con Enzimas de Restriccin
EcoRI
SmaI

Trp Phe Gly Ser 5 G A A T T C 3 5 C C C G G G 3


Protena 3 C T T A A G 5 3 G G G C C C 5

U G G U UU G G C U C A EcoRI SmaI

5 3 Extremos pegajosos
ARNm
Extremos romos
Transcriptasa reversa 5 G AA T T C C
3 5 C C C G G G 3

ADNc 3 5 3 C C T T AA G 5 3 G G G C C C 5
A C U C G G U U U G GU

Gen 1

Para aislar las secuencias de ADN es importante tener pre- Cuando la enzima de restriccin corta la
sente que la molcula de ADN ya sea lineal o circular, es molcula de ADN, mediante la accin de las
continua, debido a la unin de las bases nitrogenadas me- enzimas de restriccin, se pueden producir
diante enlaces fosfodiester. dos tipos de extremos: los romos y los pega-
josos. A estos extremos del ADN es posible
Para romper una cadena sencilla de ADN se requiere la accin unir nuevos fragmentos (genes de inters)
de unas enzimas llamadas enzimas de restriccin que reco- que se unen con los extremos terminales en
nocen de manera especfica secuencias en el ADN y las cor- el ADN que ha sido cortado. Por esta razn es
tan, de ah su nombre de restriccin. posible combinar genes de plantas con plan-
tas, de plantas con microrganismos y anima-
Las enzimas de restriccin son endonucleasas, es decir, cortan les o de animales entre s.
dentro de la cadena del ADN y han sido aisladas de bacterias
de las cuales derivan su nombre.

Enzima Organismo de origen Secuencia de reconocimiento Producto final


de restriccin
BamHI Bacillus amyloliquefaciens -G-G-A-T-C-C- Extremos pegajosos
-C-C-T-A-G-G-

EcoRi Escherichia coli -G-A-A-T-T-C- Extremos pegajosos


-C-T-T-A-A-G-

HindIII Haemophilus influenzae -A-A-G-C-T-T- Extremos pegajosos


-T-T-C-G-A-A-

kpnl Klebsiella pneumonia -G-G-T-A-C-C- Extremos pegajosos


-C-C-A-T-G-G-

pstI Providencia stuartii -C-T-G-C-A-G- Extremos pegajosos


-G-A-C-G-T-C-

SacI Streptomyces achromogenes -G-A-G-C-T-C- Extremos pegajosos


-C-T-C-G-A-G-

SalI Streptomyces albue -G-T-C-G-A-C- Extremos pegajosos


-C-A-G-C-T-G-

SmaI Serratia marcescens -C-C-C-G-G-G- Extremos romos


-G-G-G-C-C-C-

SphI Streptomyces phaeochromogenes -G-C-A-T-G-C- Extremos pegajosos


-C-G-T-A-C-G-

XbaI Xanthomonas badrii -T-C-T-A-G-A- Extremos pegajosos


-A-G-A-T-C-T-

47/ Plantas genticamente modificadas


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Ideas para discutir:


Dada la siguiente secuencia de ADN:

5'...ATGCGAATTCCCGGATCCCAGGTTATGGAATTCATG... 3'
3'...TACGCTTAAGGGCCTAGGGTCCAATACCTTAAGTAC... 5'

Qu fragmentos se originaran si se corta con la restrictasa EcoRI?


Qu fragmentos se originaran si se corta con la restrictasa BamHI?

Taller para realizar con los estudiantes

Cmo trabajan las enzimas?

Propsito

El objetivo de esta actividad es mostrar el funcionamiento de las enzimas.

Contexto

Las enzimas de una pia fresca, al igual que los detergentes, son capaces de romper las
protenas de la gelatina. Las protenas estn hechas de aminocidos las cuales al unirse
forman cadenas. Cuando estas cadenas son cortadas por la accin de las enzimas de la
pia (bromelina), la gelatina pierde su consistencia.

Materiales

Rodajas de pia fresca


Detergente lquido (puedes usar varios si lo deseas)
Gelatina
Recipientes no tan profundos

Procedimiento

Antes de iniciar el experimento prepare la gelatina en varios recipientes de acuerdo con


las instrucciones del empaque. Deje cuajar.
En la superficie de uno de los recipientes con gelatina coloque una rodaja de pia y en
otro varias gotas de detergente.
Ahora espere dos horas, observe que sucede, analize y compare ambos resultados.

Preguntas

Por qu cree que la gelatina se lica?


Por qu los detergentes tienen enzimas?
Con qu aspectos de los vistos en la Bio-Aventura 3 puede relacionar lo visto durante
este experimento?
Preparara Ud. una gelatina con trozos de pia? S o no? Y Por qu?

48/ Plantas genticamente modificadas


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

2. CONSTRUCCIN DEL TRANSGEN

Gen marcador de seleccin Origen


Promotores: inician la
Origen de replicacin
Promotor Secuencia Codificante Terminador Polylinker
transcripcin.
HindIII Regin dentro
Determinan cuando, o Gen de inters Plsmido SphI
PstI
dnde, y en qu medida, SalI de la cual el ADN
ATG Vector de XbaI
se obtiene el producto BamHI
SmaI puede ser
del gen.
Este transgen se introduce en el sitio de clonado clonacin KpnI
SacI insertado
EcoRI
Terminador: marca el
Sitio de clonado
final del gen Gen de seleccin
en bacterias
Gen de seleccin en bacterias Gen marcador de la regin

Los genes tienen secuencias especficas que regulan su El promotor de eucariotas ms usado es el
expresin. Estas secuencias o sistemas de regulacin que 35SCaMV, subunidad 35S del virus del mosai-
indican cuando, donde y en proporciones se expresa un gen co del coliflor.
son diferentes en procariotas y eucariotas (ver Bio-Aventura
I: del gen a la protena). Por lo tanto, es necesario realizar Adicionalmente y dado que los procesos de
ciertas modificaciones cuando los genes proceden de una transformacin no son ciento por ciento
bacteria, de un animal o de otra planta. Por ejemplo, un gen efectivos es necesario introducir una secuen-
de una bacteria introducido directamente en una planta sin cia adicional que nos permita identificar
haberle realizado ninguna modificacin, no ser activo en cules clulas o tejidos han sido efectivamen-
este nuevo organismo y viceversa. Esto significa que la re- te transformados y cuales no.
gin codificadora de un gen que vaya a ser introducida en el
genoma de una planta requiere secuencias regulatorias que Las secuencias o genes marcadores de selec-
sean conocidas y funcionen en plantas. Este tipo de cons- cin ms empleados son:
trucciones (genes ms secuencias regulatorias), son denomi-
nado genes quimricos. El gen LacZ que sintetiza una enzima
llamada B-galactosidasa y el gen gus de la
Recordemos que los genes deben contener una secuencia B-glucoronidasa cuyas reacciones se
promotora, una de expresin y una de terminacin. visualizan por la aparicin de un color azul
que toman los tejidos
G secuencia de interes
A
T

CT El gen luciferasa y el gen GFP provenientes


TC

T
de una medusa que produce una protena
A
A

verde fluorescente
G

G
plsmido AA
CT TT
TA C El gen nptII que codifica para la resistencia
G A ATT
T
CT A A
G
C

al antibitico kanamicina
A
G

plsmido recombinante
El gen ManA que codifica para la enzima
G A ATT fosfomanosa-isomerasa, que permite que
G
TA
C

los tejidos que han incorporado el


CT

G ATTC
C T TA

constructo crezcan en presencia de


carbohidratos no metabolizables
A G

Genes de resistencia a herbicidas

Promotor Secuencia
Terminador Gen Marcador
codificadora

Nota. Para ms informacin Ver Bio-Aventura 2: Del gen a la protena

49/ Plantas genticamente modificadas


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

3. CLONACIN

Clulas que no toman el Plsmido


Plsmido
recombinante Multiplicacin
Vector Insercin mediante de la clula
E. coli
Plsmido enzimas de restriccin
Replicacin del
cromosoma
plsmido

Plsmido
Gen de inters
Recombinante

Clulas que contienen el Plsmido

SELECCIN DE CLULAS QUE HAN INSERTADO EL TRANSGEN


Medio de cultivo para el Una vez se tiene organizado el transgen con la secuen-
crecimiento de las bacterias Transferencia de las
cia promotora y de terminacin que le permitirn su
clulas al filtro de
nitrocelulosa expresin en un organismo eucariota (planta) es necesa-
rio introducirlo dentro de un vector de clonacin.

Qu es un vector?

Es un transportador biolgico que permite introducir y


expresar el ADN en una nueva clula. Existen dos tipos
Clulas con de vectores:
Hibridacin con sonda plsmidos no
radioactiva para recombinantes y
identifica r el gen de recombinantes
Vectores de clonacin
inters presente Vectores transformacin
visualizndolos
mediante rayos X
Inicialmente nos referiremos al vector de clonacin,
pues es un paso previo a la transformacin.
Gen marcador de seleccin
Origen de replicacin
Vector de clonacin:
Un vector de clonacin consta de un origen de
replicacin, un polilinker o lugar en el cual se unen las
enzimas de restriccin, un gen marcador y uno de
seleccin. Se utiliza para obtener mltiples copias del
transgen.
Plsmido
Vector de
clonacin
Etapas de la clonacin:
1. Seleccionar el gen de inters.
2. Introducir el gen dentro de las bacterias.
3. Multiplicacin de bacterias en medios de cultivo
especficos.
4. Seleccionar de acuerdo con las caractersticas del gen
Polilinker marcador insertado las colonias que contengan el
fragmento deseado.
Gen de seleccin en bacterias

50/ Plantas genticamente modificadas


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Biotecnologa Agrcola

4. TRANSFORMACIN

MTODO 1: BIOLSTICA MTODO 2: AGROBACTERIUM

Tubo de
aceleracin Agrobacterium
de gas Este proceso
Macrocarrier natural es
utilizado para ADN-T
Disco de transformar in
ruptura vitro las clulas
Plsmido
de las plantas
Ti
reemplazando
los genes no
Pantalla de deseados por
frenado el de interes
T-ADN
(transgen). Cromosoma bacteriano
integrado
Clulas blanco Para ello se Esta
emplean secuencia es Agrobacterium Agrobacterium
enzimas de Herida en la planta reemplazada tumefaciens rhizogenes
restriccin y por el
Micropartculas ligasas. transgen
cubiertas con ADN
Tipos de Agrobacterium

Para realizar el proceso de transformacin es necesario 2. Agrobacterium


emplear elementos que ayuden a transferir las secuencias
al organismos de inters, para ellos se emplean vectores Mtodo de transformacin indirecto que emplea
de transformacin. como vector biolgico, un plsmido contenido
en la bacteria Agrobacterium, el cual por su
Qu es un vector de transformacin? naturaleza es capaz de transferir secuencias de
ADN de bacterias a plantas. Los miembros del
Es un transportador fsico o biolgico que permite la gnero Agrobacterium son bacterias gram (-) del
transferencia de genes o secuencias de ADN a un organis- suelo pertenecientes a la familia Rhizobium. De
mo. estas las ms conocidas son: A. tumefaciens
Uno de los vectores de transformacin son micropartculas capaz de inducir tumores llamados agallas de
de oro o tungsteno, las cuales en su superficie llevan corona (crown gall); A. rhizogenes causante de
adheridas las secuencias o genes de inters. En cuanto a la formacin de races en cabellera (hairy roots);
los biolgicos se emplean plsmidos, los cules dadas sus A. rubi productora de pequeas agallas y A.
caractersticas biolgicas son capaces de transferir secuen- radiobacter especie no virulenta.
cias de ADN de bacterias a clulas vegetales.
El conocimiento de la capacidad de Agro-
La seleccin del vector de transformacin depender de bacterium para transferir genes se remonta a
las caractersticas de la planta y del mtodo de transfor- 1977 cuando Nester Gordon y Dell Chilton
macin seleccionado. demostraron que los genes de un plsmido de
Agrobacterium tumefaciens, fueron insertados en
MTODOS PARA LA TRANSFERENCIA DE ADN: forma eficiente en el ADN de clulas de una
planta y causaron el crecimiento incontrolado
1. Biolstica: de clulas. El plsmido con estas caractersticas
fue denominado Plsmido Ti o inductor de
Tambin conocido como la pistola de genes. Es un mto- tumores.
do de transformacin directo que utiliza vectores fsicos
para transformar explantes. Consiste en adherir a
micropartculas de oro a tungsteno las secuencias de ADN Un poco de historia
o genes a introducir (transgen), las cuales son luego ace-
leradas o disparadas sobre el tejido, clula de la planta a El primer aparato para la transformacin
transformar. El ADN penetra en la clula y al ncleo por la por biolstica empleado consista en una
accin fsica de la presin. Las clulas transformadas por pistola con carga explosiva y
este mtodo son difciles de regenerar debido al dao micropartculas de tungsteno, de all su
fsico que puede causar el mtodo. nombre, pistola de genes. Posteriormen-
te se reemplazo la carga explosiva por
gas helio presurizado y se empez a usar
micropartculas de oro.

51/ Plantas genticamente modificadas


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Taller para realizar con los estudiantes

Construccin de un plsmido recombinante

Contexto

Imagine que va a transformar una planta de tomate a travs de ingeniera gentica para mejo-
rar su dulzura, insertando un gen de la caa de azcar. Construya un plsmido recombinante
que le sirva como vector de transformacin clonacin.

Materiales

Hojas de papel con la secuencias de ADN de un plsmido


Hoja de papel con la secuencia de ADN de una clula vegetal
Tijeras
Cinta pegante
Acetato con los lugares de corte de las enzimas de restriccin

En la figura anexa la secuencia gris clara representa una seccin del ADN de un plsmido. La
secuencia gris oscura representa una seccin del ADN de una clula vegetal donadora. La
regin correspondiente al gen que codifica para la dulzura se encuentra en negro, al igual que
el sitio de insercin en el plsmido.

Procedimiento:

Recortar el ADN del plsmido y unirlo con cinta adhesiva para formar una estructura circular
que simule el plsmido.
Recortar el ADN celular que contiene el gen eucaritico. Unir las distintas piezas en forma
lineal.
Usando las enzimas de restriccin identificar cual de ellas es la ms adecuada para cortar el
gen de inters y formar una molcula de ADN recombinante. (recuerde que ADN genoma
vegetal y el plsmido se deben cortar con la misma enzima).
Cortar con una tijera ambas secuencias (plsmido y ADN vegetal), simulando el corte de las
enzimas de restriccin.
Elabore su plsmido recombinante. Una los extremos con la cinta pegante.

Preguntas:

Cuntos codones tiene su gen que codifica para la dulzura?


Utilizando la tabla de cdigo gentico establezca la secuencia codificante.
Qu otras secuencias agregara al plsmido y porqu?
Cmo se unen los fragmentos cortados con enzimas de restriccin?
Qu sucede si corta el ADN del organismo donador y el plsmido con diferentes enzimas de
restriccin?

52/ Plantas genticamente modificadas


Mdulo 3
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Taller para realizar con los estudiantes

C G C G G C C G G C A T C G G C A T
A T T A C G T A C G T A T A C G T A
T A C G A T G C T A C G G C T A C G
G C G C A T G C A T G C G C A T G C
G C T A T A T A A T T A T A A T T A
C G C G G C C G G C A T C G G C A T
A T T A C G T A C G T A T A C G T A
A T A T C G A T C G T A A T C G T A
C G G C A T G C G C C G G C G C C G
T A A T G C A T T A A T A T T A A T
A T C G T A G C A T C G G C A T C G
A T C G A T C G A T G C C G A T G C
1 2 3 4 5 6 7 8 9

Genoma vegetal

A T C G A T G C C G C G C G T A C G
C G T A C G
T A T A G C A T T A T A T A C G T A
A T A T G C A T A T A T G C G C A T
A T C G G C T A C G C G G C A T G C
A T G C
G C G C T A C G G C G C Enzima 1 Enzima 2 Enzima 3

C G C G C G C G C G C G T A G C C G
G C G C T A A T G C G C C G G C T A
T A C G T A
A T A T A T T A A T A T A T C G A T
T A T A G C G C T A T A G C A T
T A C G A T G C C G C G A T G C
Enzima 4 Enzima 5 Enzima 6

C G C G T A T A C G C G C G G C A T
G C A T A T A T T A A T T A G C A T
C G G C A T T A G C G C C G G C C G
G C C G G C
C G C G A T A T C G C G A T C G
1 2 3 4 5 6 G C C G
Enzima 7 Enzima 8 Enzima 9

Plsmido

53/ Plantas genticamente modificadas


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Veamos como trabaja en forma natural Agrobacterium


tumefaciens el cual ha sido el ms empleado en los procesos de Agrobacterium
transformacin y es considerado como el ingeniero gentico por
naturaleza.

Transformacin de clulas vegetales en condiciones naturales


Durante el proceso de infeccin de Agrobacterium las clulas
de la plantas liberan compuestos fenlicos que interactan
con algunas protenas codificadas en los genes de virulencia,
VIR, que se encuentran incluidos en el plsmido Ti y que Plsmido Ti

inducen a la bacteria a unirse a la pared de la clula vegetal.


Una vez ocurre esto se activan otros genes VIR que hacen que
una cadena sencilla de ADN del plsmido Ti sea liberada. Este
ADN se conoce como ADN de transferencia, T-ADN, nica
secuencia que es transferida a la clula vegetal adyacente
donde es integrada en el genoma de la planta. El T-ADN
durante su transferencia est protegido por protenas especia-
lizadas. Cromosoma bacteriano

Una vez integrados dentro del ADN de la planta, los genes


presentes en el T-ADN se vuelven activos. Estos genes natural-
mente codifican protenas que perturban el balance hormonal
normal de la clula, las cuales comienzan a crecer y a dividirse
en forma no controlada formando la agalla de la corona. Recuerde que
Todas las clulas presenten en esta agalla o callo contienen Las enzimas de restriccin son usadas para
los genes del T-ADN y estos son heredados establemente cortar segmentos de ADN y las ligasas para
durante los procesos de divisin. unir segmentos.

Este plsmido desarmado es luego transferido


Uso de Agrobacterium tumefaciens en procesos de
a Agrobacterium tumefaciens.
transformacin gentica de plantas
El mecanismo natural de modificacin gentica de Luego se toma el explante, por lo general
Agrobacterium tumefaciens puede ser usado para introducir segmentos de hoja, donde se produce una
cualquier gen dentro de una clula vegetal. Esto es posible herida. Inmediatamente despus el tejido
debido que nicamente una pequea parte del T-DNA es vegetal se pone en contacto con la bacteria
requerido para el proceso de transferencia. Esta parte es un que tiene la nueva construccin gentica
corta regin de aproximadamente 25 pares de bases de los (Agrobacterium tumefaciens) y estas se unen a
extremos del T-DNA. Cualquier secuencia entre estos extre- las clulas vegetales y transfieren T-ADN de
mos ser transferida dentro del ADN de la clula vegetal acuerdo al proceso natural ya descrito. As,
husped. se logra transferir genes de inters al genoma
de la clula vegetal, provocando as la trans-
Estas caractersticas permitieron el desarrollo de plsmidos formacin.
que contienen los extremos derecho e izquierdo del T-DNA,
pero ninguno de los genes entre estos extremos. En reempla-
zo de estos genes se inserta el transgen con las caractersticas
de inters. Adicional-
mente los genes VIR
Ideas para discutir:
son removidos para Por qu cree que es importante para Agrobacterium tumefaciens transferir genes a una planta?
evitar la aparicin de
sntomas indeseables,

Ideas para el docente:
Para alimentarse Agrobacterium tumefaciens necesita ciertos azcares y aminocidos derivados
es decir, que el denominados opinas. Los genes que codifican estas sustancias se encuentran en el T-ADN del
plsmido es desarmado. plsmido Ti. De este modo al transferir estos genes la bacteria logra que las clulas de la agalla
inducidas en la planta produzcan estas sustancias y as, Agrobacterium pueda alimentarse.

54/ Plantas genticamente modificadas


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5. SELECCIN DE LAS CLULAS O TEJIDOS TRANSFORMADOS

Mtodo 1: Deteccin visual por el mtodo Gen GUS Mtodo 2: PCR - Reaccin en cadena de la Polimerasa

La reaccin se visualiza
por la aparicin del color
azul que toman los
tejidos.

1. Denaturacin 2. Anillamiento 3. Extensin


del cebador de la cadena

Ciclo 1 Ciclo 2 Ciclo 3

Independiente del mtodo de transformacin empleado es Molde de ADN o fragmentos.


necesario realizar un proceso de seleccin de las clulas que
han sido eficientemente transformadas. Esto permite ahorrar Mg2 el cual es indispensable para la activi-
tiempo ya que no es necesario regenerar la planta completa dad de la enzima.
para determinar si hubo o no transformacin.
Nucletidos A, T, C y G (dNTP).
El proceso de seleccin se realiza de acuerdo con el gen
marcador de seleccin empleado. Para ello se cultivan las Primer o iniciador que reconoce su secuencia
clulas o tejidos transformados en medios de cultivos que complementaria para que se lleve a cabo el
presente el agente marcador, por ejemplo: el herbicida, el proceso.
azcar no metabolizable o el antibitico.
Taq polimerasa. Es la enzima responsable de
Las clulas capaces de crecer en estos medio son las trans- copiar la cadena, extenderla y trabaja a altas
formadas y sern las seleccionadas para seguir el proceso temperaturas.
de regeneracin. Adicionalmente es posible emplear tcni-
cas moleculares para la deteccin de la transformacin. Agua
Entre ellas:
El proceso ocurre de la siguiente manera:
Southern blot: Es una tcnica que permite detectar el
gen que ha sido insertado. El Southern blot requiere que a. Denaturacin del ADN: Para que las
el ADN sea extrado, cortado con enzimas de restriccin y cadenas sencillas de la doble hlice sean
sometido a electroforesis. Los productos de la copiadas es necesario separarlas. A
electroforesis son transferidos a una membrana de nitro- temperaturas de 90 C la doble hlice se
celulosa e hibridizados con la sonda radioactiva con una separa y cada hebra libre puede ser
secuencia de ADN conocida y marcada con un istopo copiada.
radioactivo como 32P. Las sondas radioactivas que se
hibridizan por complementariedad con la nueva secuencia b. Anillamiento: Es la temperatura a la cual el
insertada, confirman que la secuencia est presente en el primer se une a la cadena molde. Se em-
tejido transformado. plean temperaturas entre 35-60 C condi-
cin que permite que el primer quede unido
La PCR: Reaccin en Cadena de la Polimerasa. Es una tcnica de manera estable a la cadena de ADN
que emplea los principios de la replicacin del ADN en un
sistema in vitro. A partir de una cadena de ADN molde se c. Extensin: Una vez el primer se ha unido al
pueden producir muchas molculas idnticas, lo que se conoce molde, la Taq polimerasa empieza a unir los
como amplificacin. La PCR acta como un proceso de fotoco- dNTP a la cadena de manera continua. As
piado. Para que esto se lleve a cabo, la reaccin exige que ocurre el crecimiento de la cadena para que
estn presentes en la solucin los siguientes elementos: quede sintetizada de manera completa.

55/ Plantas genticamente modificadas


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La reaccin se lleva a cabo durante varios ciclos (entre 35-45 C)


en un equipo llamado termociclador. Los productos de amplifi-
cacin se corren en una electroforesis y por diferencia en peso
molecular con los otros fragmentos se pueden identificar aque-
llos que contienen el gen.

Inmunodeteccin: En este sistema se detecta la protena


que es codificada por el gen de inters. Es una reaccin
antgeno-anticuerpo donde el tejido es macerado y puesto
en contacto con una solucin salina. Se introduce en la
solucin una cinta indicadora que contiene el antgeno y si
la reaccin es positiva muestra la aparicin de dos bandas.
Los tejidos no transformados muestran slo una banda

6. REGENERACIN

Por ltimo, los explantes que han


sido transformados, son llevados a
un programa de regeneracin,
utilizando las tcnicas de cultivo de
tejidos in vitro que garanticen la
expresin contina del gen for-
neo y de los dems genes constitu-
tivos de la planta. El proceso de
regeneracin mediante las tcnicas
de cultivo de tejidos in vitro sigue
el mismo procedimiento presenta-
do en la Bio-Aventura 2.

56/ Plantas genticamente modificadas


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De la aplicacin de las herramientas biotecnolgicas han cido aminociclopropano-1-carboxilico. Esta


resultado productos con diferentes caractersticas, enzima participa en una de las etapas de la
analicemos en que consisten algunos de sus principios de sntesis de etileno.
transformacin:
Otra alternativa empleada es la introduc-
Resistencia a insectos: cin de un gen que codifica para la enzima
ACC deaminasa, la cual interfiere con la
El gen que confiere la resistencia a insectos empleado actual- produccin de etileno. Este gen se deriva de
mente proviene de una bacteria natural del suelo, llamada una bacteria del suelo Pseudomona
Bacillus thuringiensis, que sintetiza una protena denominada chlororaphis.
Cry y de las cuales se conocen cerca de 20 tipos diferentes.

Tolerancia a herbicidas:
Cuando el gen de la bacteria ha sido
transferido a la planta, sta adquie-
re la caracterstica de resistencia Los herbicidas son sustancias
al ataque del insecto. qumicas que tienen la
capacidad de inhibir
Esto se manifiesta as: procesos esenciales en
El insecto que ataca la las plantas como la
planta consume sus hojas fotosntesis o la
y por la accin de la biosntesis de
protena Cry, el intestino aminocidos de cade-
del insecto de destruye nas ramificadas. Con
causndole la muerte. el empleo de estas
Este efecto es especfico, tecnologas es posible
solo ataca ciertas familias desactivar o reemplazar
de insectos. En el hombre la secuencia de suscepti-
no causa este tipo de daos bilidad por otra que
debido a que en su intestino confiera resistencia para
no existen los receptores de que permita la planta o
membrana para esta protena. cultivo resista la aplicacin del
Adicionalmente, la protena Cry solo herbicida.
acta en medios alcalinos como el del intesti-
no del insecto y no en cidos como en el caso del hombre.
Resistencia a condiciones ambientales
Las plantas transformaads con genes Cry de Bacillus
extremas
thuringiensis se conocen como plantas Bt.

La resistencia a condiciones extremas permi-


Maduracin retardada: te obtener cultivos capaces de desarrollarse
en ambientes desrticos, con alta concentra-
La maduracin de la frutas es un proceso fisiolgico y ciones de sal, a bajas o altas temperaturas,
molecular complejo que resulta en el ablandamiento de las entre otros. Veamos cmo ejemplo el desa-
paredes celulares y que afecta el color, sabor y el aroma. rrollo de cultivos resistentes a altas concen-
traciones de sal.
Este proceso es inducido por la produccin de una hormona
vegetal, el etileno. Las plantas contienen compartimentos deno-
minados vacuolas en las cuales el exceso de
La biotecnologa ha ofrecido una alternativa para retrazar la sal es depositado para que no afecte el fun-
maduracin. La modificacin consiste en interferir en la pro- cionamiento del resto de la clula. Para lograr
duccin de etileno, de este modo las frutas podrn permanecer que las clulas depositen la sal en las vacuolas
ms tiempo en la planta hasta lograr el sabor caracterstico y se han insertado genes que codifican para la
no tendrn que ser cosechadas antes de tiempo. El bloqueo de protena vacuolar Na+/H+ antiport la cual
la produccin de etileno se ha logrado mediante la tecnologa tiene la capacidad de bombear la sal de las
antisentido que disminuye la produccin de la enzima sintetasa principales partes de la clula a la vacuola.

57/ Plantas genticamente modificadas


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Resistencia a virus:

Para muchas especies no se han encontrado germoplasmas


disponibles para obtener por cruzamiento plantas resistentes
a virus. Puesto que algunos virus no han sido caracterizados a Repaso de conceptos clave:
Las Plantas genticamente modificadas, se
nivel molecular, se han desarrollado otras alternativas como la obtienen mediante el uso de tecnologa de
proteccin cruzada en la cual la infeccin de una planta con ADN recombinante.
una cepa suave provoca que la planta se vuelva resistente a La ingeniera gentica permite modificar,
una posterior infeccin con una cepa severa. Ejemplos de esta introducir o eliminar genes.
El proceso de transferencia de genes se puede
aplicacin se han reportado para el virus de la tristeza de los
realizar a travs de la biobalstica o de
ctricos, mosaico del pepino, mancha anular de la papaya y
Agrobacterium tumefaciens
del mosaico del tabaco. Los procesos de transformacin gentica
renen una serie de avances cientficos logra-
Para otros virus, se ha encontrado que existen genes que dos a lo largo de la historia del hombre.
codifican para la protena de la cpside, los cuales son inserta-
dos mediante mtodos de ingeniera gentica en las plantas
donde expresan altos niveles de la protena y confieren la
resistencia.

Mejoramiento nutricional

Una de las caractersticas en la cuales se ha venido trabajan-


do es en el aumento del contenido de vitamina A en ciertos
cultivos, como es arroz que en condiciones naturales no la
produce. La deficiencia en Vitamina A causa graves proble-
ma de ceguera en nios, por lo que se busca aumentar su
contenido en el arroz mediante la insercin de unos genes
involucrados en la sntesis de un precursor de dicha vitami-
na, el caroteno. El precursor se expresa en la semilla de la
planta que es finalmente la parte que se consume. Para
lograr este desarrollo se modific la ruta de la sntesis del
caroteno, insertando dos genes procedente del Narcissus
pseudonarcissus y uno de una bacteria, Erwinia uredovora.

Cultivos desarrollados a travs de biotecnologa


moderna

Maz resistente a insectos y herbicidas


Soya resistente a herbicidas
Algodn resistente a insectos
Papaya resistente a virus
Papa resistente a virus
Tomate de ms larga vida poscosecha
Clavel azul
Arroz biofortificado

Ideas para discutir:


Por qu y para qu cree usted que es importante
producir plantas con algunas de las caractersticas
mencionadas? Elabora un mente facto al respecto
y analzalo en clase.

58/ Plantas genticamente modificadas


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Taller para realizar con los estudiantes


Extraccin de ADN vegetal
Objetivos
Acercar a los estudiantes a las tcnicas de biologa molecular sin requerir la infraestructura de un
laboratorio especializado.
Realizar el proceso de extraccin ADN vegetal a partir de diferentes tejidos y emplear este proce-
dimiento como estrategia didctica para estudiar las propiedades qumicas de la molcula.

Introduccin
El ADN es una molcula de carcter cido y la ms larga que se conoce.

El fundamento de la extraccin de ADN se basa en las caractersticas qumicas de la molcula. El ADN


es capaz de estar en solucin en presencia de molculas de sal, lo que permite su separacin y por lo
tanto su extraccin. Para extraer el ADN de una clula es necesario romper las clulas, utilizando para
ello un detergente lquido.

Los fragmentos en solucin que resultan son separados utilizando sales. Finalmente la adicin de
alcohol absoluto permite que la molcula de ADN precipite y se forme un aglomerado de fcil recupe-
racin. De este modo y controlando la concentracin de sal, se puede evitar la dispersin de los frag-
mentos de ADN, aglomerndolos.

La primera parte del procedimiento consiste en romper las clulas y permitirles verter sus contenidos a
una solucin buffer (tampn o amortiguador) en la cual el ADN se puede disolver. Aglomerando las
protenas con detergente y reduciendo la concentracin de sal, podemos separar el ADN, obteniendo
de esta forma la molcula de la herencia.

Los protocolos que aqu se describen para aislar ADN de forma casera han sido creados por varios
investigadores y han sido modificados para las condiciones del laboratorio.

Mtodos
Protocolo No 1. Extraccin de la ADN de la Cebolla
Materiales
1 cebolla mediana
1 cuchillo
1 cuchara
120 ml de agua (mineral o destilada)
1.5 g de sal (NaCl)
5 g de bicarbonato de sodio (o polvo para hornear)
5 ml de detergente lquido o champ
10 ml de alcohol antisptico a 0C
Licuadora
Balanza
Nevera
1 Filtro para caf de tela con soporte
2 Vasos de vidrio
Tubo de ensayo
Varilla fina de vidrio o palo de pincho
2 pipeta de 10 ml o jeringa

59/ Plantas genticamente modificadas


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Taller para realizar con los estudiantes

Procedimiento
1. Preparar la solucin de extraccin de la siguiente manera: 120 ml de agua destilada, 1.5 g
de sal de mesa, 5 g de bicarbonato de sodio y 5 ml de detergente liquido o champ . Man-
tener esta solucin en la nevera o en un recipiente con hielo.

El detergente tiene una doble misin. Rompe las paredes celulares y permite fracturar las
protenas grandes para que no salgan con el ADN.

Adicionalmente, se recomiendan trabajar sobre hielo y utilizar agua destilada, para reducir la
degradacin del ADN. Tambin puede emplearse detergente lquido de lavadora ya que
presentan menos aditivos que los jabones.

2. Cortar la cebolla en cuadritos y triturar con un poco de agua en la licuadora accionando las
cuchillas a impulsos de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y otras quedaran
expuestas a la accin del detergente.

La solucin ahora contiene fragmentos de ADN as como una buena cantidad de otras mol-
culas. Para extraer el ADN de esta solucin se requiere agregar alcohol helado.

3. Mezclar en un vaso 5 ml del triturado celular con 10 ml de la solucin de extraccin (fra) y


agitar vigorosamente durante 2 minutos (por lo menos).

4. Pasar esta solucin a travs de un filtro para caf, para separar los restos vegetales ms gran-
des. Extraer el sobrenadante (la capa acuosa que queda arriba) con una pipeta o jeringa.

5. Transferir 5 ml de esta solucin a un tubo de ensayo y aadir con una pipeta 10 ml de alco-
hol isoamlico a 0C. Dispensar lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente te-
niendo este inclinado. El alcohol quedara flotando sobre la solucin.

6. Introducir la punta de una varilla de vidrio o palo de pincho hasta la lnea de separacin
entre el alcohol y la solucin. Mover la varilla hacia adelante y hacia atrs y poco a poco se
irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasados unos minutos retire la
varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedara adherido a su extremo con
el aspecto de un copo de algodn mojado. Este es el ADN!

Protocolo No 2. Extraccin de ADN de Pimentn o Calabacn

Materiales: Licuadora
1 pimentn Nevera
1 cuchillo Balanza
1 cuchara 1 Filtro para caf de tela con soporte
125 ml de agua (mineral o destilada) 2 Vaso de vidrio
1.5 g de sal (NaCl) 1 Pipeta o jeringa
0.8 g de ablanda carne Palillos o una Varilla fina de vidrio
2 cucharadas de jabn de lavar loza
150 ml de alcohol antisptico (a 0 C)

60/ Plantas genticamente modificadas


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Taller para realizar con los estudiantes

Procedimiento:
1. Corte el tejido en varios trozos y colquelos en el vaso de la licuadora.

2. Adicione 1.5 g de sal (aproximadamente una cucharadita) y 125 ml de agua mineral o destilada.
Lice la mezcla. Como resultado debe obtener una mezcla un poco espesa.

3. Pase la mezcla por el filtro para caf y recoja el jugo en un recipiente transparente.

4. Agregue dos cucharadas de jabn de lavar loza y 0.8 g de ablanda carne (aproximadamente
media cucharadita) Lentamente con una cuchara mezcle todo el contenido del vaso. Espere 10
minutos.

5. Muy lentamente agregue el alcohol antisptico al vaso. Le debe agregar aproximadamente la


misma cantidad de lo que ya se tiene en el vaso. Como resultado se obtendrn dos fases: una
superior de alcohol y una inferior de la solucin de pimentn. Despus de unos minutos unas
burbujitas o filamentos viscosos aparecern... Ese es el DNA!.

6. Refrigere esta solucin por 15 minutos. Luego lentamente introduzca un palillo o una varilla fina
de vidrio y trate de pescar los filamentos

Preguntas:
Qu tipos de elementos se pueden encontrar en la solucin una vez se rompe la clula vegetal?

Cul es la funcin del detergente y el ablanda carne en el proceso de extraccin del ADN?

Por qu el ADN se disuelve en soluciones con iones de sales?

Cree usted que el producto filamentoso obtenido se encuentra puro? Es decir, es solo ADN?

BIBLIOGRAFA
Sambrook, J. & Rusell, D.W. 2001. Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third
Edition. Volume 1. Cold, Spring Harbor, New York.

PAGINAS WEB CONSULTADAS


Proyecto de divulgacin cientfica infantil.

Disponible en: http://www.ciencia-activa.org/experimento2.htm

Actividades de laboratorio del Cuaderno 18 de Por qu Biotecnologa?

Disponible en: http://www.porquebiotecnologia.com.ar/educacin/cuaderno/


ec_18_act.asp

61/ Plantas genticamente modificadas


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Seguridad y normatividad
de los organismos genticamente
modificados
La Bioseguridad, es entendida como el conjunto de medidas y acciones requeridas
para minimizar los potenciales riesgos que puedan ocurrir, cuando se utilizan
Organismos Vivos Modificados (OVM), derivados y productos que los contengan.

La bioseguridad busca resguardar los intereses pblicos y privados, permitiendo


solamente la aplicacin responsable de la biotecnologa, cuidando mantener un
balance entre la proteccin de la salud, el ambiente y la biodiversidad, sin entorpe-
cer el comercio y la transferencia de tecnologas, mediante el establecimiento de
normas.

OBJETIVOS

1. Dar conocer los aspectos relacionados con la seguridad y


evaluacin de riesgo de los organismos genticamente
modificados
2. Reconocer las medidas regulatorias implementadas a nivel
nacional para garantizar el uso seguro de organismos
genticamente modificados
3. Identificar los potenciales riesgos y beneficios del uso de
organismos genticamente modificados DINMICA

SECUENCIA
Exploracin
de Preconceptos
Investigacin - Regulacin - Evaluacin de riesgo - Liberacin
Comercial Elabore un mapa conceptual alrededor de
las plantas genticamente modificadas con
relacin a lo que usted considera que se
CONTENIDOS
debe evaluar y regular. Seale igualmente
1. Bioseguridad cuales beneficios aportara el uso de la
2. Evaluacin de riesgo para la salud
tecnologa.
3. Evaluacin de riesgo para ambiente y la biodiversidad
4. Marco regulatorio
Realice una presentacin de su mapa
5. Potenciales riesgos y beneficios de los OGM conceptual al grupo.
6. Futuro cercano
Materiales:

Los sistemas de introduccin de la variabilidad gentica tanto Papel peridico


convencionales (hibridizacin o mutagnesis), como los de Marcadores

ingeniera gentica pueden ocasionar cambios en el genoma

62/ Seguridad y normatividad de los organismos genticamente modificados


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Un poco de historia

La bioseguridad naci con la ingeniera gentica. Los cientficos que


trabajaban en el desarrollo de productos de la biotecnologa moderna a
principio de la dcada de los 70's comprendieron que, si bien las
nuevas tcnicas ofrecan enormes potencialidades, tambin exista el
temor sobre los eventuales riesgo de su aplicacin. Debido a estos, los
cientficos decidieron convocar a una reunin que tuvo lugar en
Asilomar, California, en 1975. El propsito fue discutir sobre los meca-
nismos necesarios para mantener bajo control el potencial de la inge-
niera gentica.

Dado que no se tena suficiente conocimiento, la comunidad cientfica, vegetal que den como
en un acto de responsabilidad frente a la sociedad, propuso resultado alteraciones no
unilateralmente una moratoria al uso de la ingeniera gentica, mientras intencionales en las carac-
se generaba el conocimiento suficiente para su aplicacin segura. tersticas de los individuos.

Pocos aos ms tarde, en la segunda convencin realizada tambin en Se considera que los procesos de transgnesis
Asilomar, los cientficos, despus de generar ms conocimiento sobre la no presentan nuevas categoras de riesgos
ingeniera gentica acordaron levantar la moratoria y, establecer reglas comparados con los procesos convencionales
claras para continuar la investigacin en este campo. de mejoramiento de los cultivos, sin embargo,
los caracteres especficos introducidos son
Ya no era necesario prohibir la investigacin, pues se tena informacin evaluados cuidadosamente. La principal herra-
suficiente para controlar el riesgo. La bioseguridad haba nacido. mienta para esta evaluacin es la evidencia
cientfica tanto en el laboratorio como en el
De esta manera a principio de la dcada de los 80's se elaboraron las campo que permite evaluar los riesgos poten-
primeras normas para llevar a cabo investigacin con OGM. Las regula- ciales y los beneficios, resultado del uso de los
ciones de entonces se enfocaron principalmente en dos aspectos: OGM en mbitos como el de la salud y el
medio ambiente.
Proteger a los investigadores que trabajaban con este tipo de
materiales. Como consecuencia de esta necesidad surge
La Bioseguridad, entendida como el conjunto
Asegurar que los OGM permanecieran confinados dentro de los de medidas y acciones requeridas para mini-
laboratorios en tanto no se tuviera evidencia suficiente para su mizar los potenciales riesgos que puedan
liberacin segura. ocurrir, cuando se utilizan Organismos Vivos
Modificados (OVM), derivados y productos
As, las primeras reglas establecen los niveles de seguridad que deben que los contengan.
tener los laboratorios para evitar accidentales durante el uso de organis-
mos y material vivo. La bioseguridad busca resguardar los intereses
pblicos y privados, permitiendo solamente la
Actualmente, la necesidad de conocimientos se centra bsicamente en aplicacin responsable de la biotecnologa,
los aspectos de evaluacin de riesgo de los cultivos OGM, para la cuidando mantener un balance entre la pro-
salud, el ambiente y la biodiversidad, en los casos de aplicacin de la teccin de la salud, el ambiente y la
ingeniera gentica a la agricultura. biodiversidad, facilitando el comercio y la
transferencia de tecnologas, mediante el
De acuerdo con los avances en el conocimiento y aplicacin de la inge- establecimiento de normas.
niera gentica el concepto de bioseguridad se ha ampliado. Hoy se
entiende por bioseguridad el conjunto de conocimientos que facilitan la Durante la evaluacin de riesgo a la que se
evaluacin de riesgo, as como la legislacin y regulacin necesarias para someten los OGM se tienen en cuenta los
autorizar el uso seguro de procesos biotecnolgicos y productos GM. riesgos para el ambiente y la salud humana y
animal.

63/ Seguridad y normatividad de los organismos genticamente modificados


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Estudios de Bioseguridad La liberacin de un producto genticamente


modificado solo es permitida cuando se
Para establecer la bioseguridad de cualquier producto GM se demuestra que el producto alimenticio y las
llevan a cabo evaluaciones de riesgo para la salud, para el am- protenas nuevas que contiene no presentan
biente y la biodiversidad. riesgo para la salud (no son txicas, ni
alergnicas) humano o animal.
Estas evaluaciones de riesgo se llevan a cabo teniendo en cuenta
dos criterios esenciales: Evaluacin de riesgo para ambiente y la
biodiversidad
Evaluacin CASO por CASO y PASO por PASO: Teniendo
siempre en cuenta las particularidades de cada regin donde La bioseguridad agrcola se ocupa actualmente
se vaya a utilizar el OGM. del establecimiento de procedimientos estan-
darizados de evaluacin de riesgo y del desarro-
Fundamentos cientficos slidos: Todo producto llo de reglas que garanticen el cultivo seguro de
genticamente modificado, mediante ingeniera gentica, es OGM desde en relacin a su interaccin con el
sometido a numerosos anlisis que permiten determinar su entorno ecolgico. es necesario controlar el
seguridad para el ambiente y para la salud humana y animal. intercambio de material gentico entre el
OGM y otros organismos cercanos en la zona
Evaluacin de riesgo para la salud humana y animal de cultivo. As mismo, se evala el impacto que
los OGM pueden tener sobre especies silvestres
El objetivo consiste en evaluar los alimentos GM y sus derivados o parientes cercanos al intercambiar genes
desde el punto de la toxicidad, alergenicidad, patogenicidad y mediante mecanismos naturales (flujo de genes).
contenido nutricional con el fin de determinar si un alimento
puede ingerirse sin peligro.

Los resultados obtenidos se comparan con los registrados para


alimentos producidos a travs de mtodos convencionales y que
ya se encuentran autorizados para su consumo. Este principio es
conocido como Equivalencia Sustancial. Fue desarrollado por
la Organizacin para la Cooperacin y Desarrollo Econmico
(OCDE) y acogido por diferentes organizaciones internacionales
como la Organizacin para la Alimentacin y la Agricultura de las
Naciones Unidas (FAO), el Codex Alimentarius, organizacin
internacional reconocida para la evaluacin de la inocuidad de los
alimentos y la seguridad alimentaria y la Organizacin Mundial de
la Salud (OMS).

El principio de equivalencia sustancial es el punto de partida


para la evaluacin de riesgo. Para que exista equivalencia sustan-
cial es necesario demostrar que la nica diferencia entre un ali-
mento GM y el convencional es la presencia del producto del gen
que ha sido introducido para mejorar una caracterstica. Como
consecuencia, la determinacin de la Equivalencia Sustancial no
es una evaluacin de seguridad en s misma, sino una aproxima-
cin analtica para la evaluacin.

Los elementos crticos que se identifican son los nutrientes y las


sustancias txicas que pudiera contener el alimento nuevo, anali-
zando los aspectos relacionados con contenidos de nutrientes y
antinutrientes y la presencia de protenas txicas o alergnicas.

64/ Seguridad y normatividad de los organismos genticamente modificados


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Marco regulatorio en Colombia

En relacin con los alimentos obtenidos por biotecnologa de tercera generacin y/o procesos de ingeniera
gentica el decreto 3075 de 1997 expedido por el Ministerio de Salud, hoy de Proteccin Social, en el artculo
54 establece que este tipo de producto deben ser sometidos a registro sanitario previo estudio y concepto
favorable de la Comisin Revisora del INVIMA. el estudio lo
Miembros Consejo Tcnico Nacional de Bioseguridad Agrcola lleva a cabo la Sala Especializada de Alimentos y Bebidas
CTN Alcohlicos del INVIMA, quienes efectan la evaluacin de
MINISTERIO DE riesgos a las solicitudes de productos que proceden de una
PROTECCIN SOCIAL
MINISTERIO DE AGRICULTURA planta GM o contiene materias primas GM.
ANDI MINISTERIO DEL
ACOSEMILLAS
MEDIO AMBIENTE La regulacin para la introduccin, transporte, uso, manejo,
produccin, liberacin y comercializacin de organismos
genticamente modificados de uso agrcola en Colombia
ICA esta a cargo del Instituto Colombiano Agropecuario, ICA.
Esta regulacin se basa en la Resolucin ICA N 03492 cuyo
texto fue consultado con los distintos actores de la sociedad
SAC
involucrados en el tema, gremios, universidades, ONGs,
ANUC UNIVERSIDAD NACIONAL grupos ambientales, consumidores y otros.
DE COLOMBIA

Para la toma de decisiones el ICA recibe asesoramiento y


apoyo del Consejo Tcnico Nacional - CTN, creado median-
te acuerdo 0013 de 1998, cuya expedicin fue subrogada
por el acuerdo 00002 de 2002.

En nuestro pas, el cultivo de una nueva variedad obtenida por transgnesis es analizado independiente de la
modificacin gentica que se ha realizado y de la variedad que incorpora la nueva caracterstica.

La evaluacin de riesgo en materia de impacto al ambiente y la biodiversidad ha sido objeto de una negociacin
internacional, debido a que se reconoci que, tanto por el comercio internacional como por su migracin, existe
un flujo transfronterizo de OGM que requera reglas de bioseguridad especficas. Para ello se estableci El Proto-
colo de Cartagena sobre Bioseguridad, instrumento internacional jurdicamente vinculante, que regula los orga-
nismos vivos modificados, OVM, producto de la biotecnologa moderna. Este acuerdo promueve la seguridad,
estableciendo normas y procedimientos que permitan la transferencia segura, manipulacin y uso de OVM,
enfocado especficamente al movimiento transfronterizo. Su nombre completo es Protocolo de Cartagena sobre
Seguridad de la Biotec-
SOLICITUD OGM: PROCEDIMIENTO nologa del Convenio
ICA autoriza o niega mediante resolucin motivada de Diversidad Biolgica.

CTN recomienda

Ensayos de campo
Estudios de Bioseguridad Caso por caso Productos GM
cultivados en
Consejo Tcnico Nacional de Bioseguridad - CTN Colombia:

Elaboracin Informe Clavel Azul


Evaluacin de riesgos Algodn Bt
S Algodn resistente
Cumple con los requisitos CONCEPTO a herbicidas.
MINISTERIO DE
Solicitud PROTECCIN SOCIAL

Registro

65/ Seguridad y normatividad de los organismos genticamente modificados


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Para la produccin
agrcola
Marco regulatorio internacional
Mayor resistencia a los
Las normas internacionales en las cuales se contemplan aspectos agentes patgenos.
relacionados con los organismos genticamente modificados
incluyen: Incremento indirecto en los niveles de produc-
tividad como consecuencia de un menor
OMC, Derecho de Propiedad Intelectual TRIPS, GATT, UPOV, ataque de plagas.
G3, CONVENIO DE PARS
CDB y relacionados Disminucin en los costos de produccin
CODEX ALIMENTARIUS para el agricultor dado que sus cosechas
ACUERDOS JUNAC (Dec. 345, 391, 486) pueden ser superiores en calidad y volumen.
CDIGOS DE CONDUCTA
Tolerancia a factores abiticos como sequa,
Potenciales riesgos y beneficios de los OGM suelos cidos, salinidad y heladas.

La biotecnologa como cualquier tecnologa tiene el potencial de


incluir posibles riesgos y generar mltiples beneficios. Para el medio ambiente

Las preocupaciones han surgido respecto a los efectos en la El incremento de la pro-


salud, donde cabe la probabilidad que estos alimentos ductividad que se puede
produzcan toxicidad, alergenicidad o patogenicidad al ser alcanzar con la introduccin
consumidos. Hasta el momento no se registra evidencia de OGM, podra ahorrar a los
cientfica que sugiera que los alimentos producidos a partir agricultores el uso de tierras margi-
de cultivos genticamente modificados presenten ms ries- nales y de aquellas que no tienen voca-
gos que los convencionales. Como se explic anteriormente, cin agrcola.
los efectos de los OGM sobre la salud humana y animal son
evaluados antes de ser liberados para su comercializacin. Reduccin de la aplicacin de sustancias
qumicas para proteger los cultivos del
Entre los principales temores que han surgido con la utiliza- ataque de plagas.
cin del los OGM sobre el medio ambiente estn la posible
reduccin de la biodiversidad y la incorporacin de genes Rehabilitacin de tierras con limitantes
forneos en una especie relacionada, as como el potencial de para la produccin agrcola. Extensas
crear plantas que se conviertan en malezas (flujo de genes). superficies del mundo se han salinizado
debido a la utilizacin de prcticas no
El flujo de genes es un fenmeno que ocurre naturalmente y sostenibles. A travs de la modificacin
no solo puede asociarse con los OGM. Una preocupacin de gentica ser posible producir variedades
tipo ambiental asociada con los cultivos GM, es su potencial tolerantes a suelos salinos, al estrs hdrico
para crear nuevas malezas mediante cruzamiento con y las heladas.
parientes silvestres. La probabilidad que esto ocurra es eva-
luada previamente a la introduccin de estos cultivos y es Reduccin en la contaminacin de aguas y
posteriormente vigilada una vez stos han sido sembrados. suelos.
Para evitar que ello ocurra y de acuerdo con las caractersti-
cas del cultivo se aplican medidas de bioseguridad que Disminucin de la presin sobre
permitan reducir y manejar el riesgo potencial. ecosistemas naturales.

Dentro de los principales beneficios que se han identificado Reduccin de residuos de fsforo y nitr-
con el uso de los OGM estn: geno en lagos y corrientes de agua.

66/ Seguridad y normatividad de los organismos genticamente modificados


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Para la salud humana Futuro cercano

Disponibilidad de alimentos con mejor calidad La biotecnologa no se detiene aqu, en el


nutricional o industrial. futuro inmediato la ciencia aprovechar los
desarrollos de la genmica estructural (iden-
Prevencin de enfermedades, es el caso del tificacin y localizacin de genes en el ADN),
arroz con mayores contenidos de vitamina A cuya para entrar en la era de la genmica funcio-
deficiencia produce ceguera. nal y llenar la brecha entre el conocimiento
de las secuencias de un gen y su funcin. De
Disminucin del contenido de grasas e incremento de los este modo se expandir el alcance de la
contenidos de slidos del producto de tal manera que investigacin sobre el estudio de genes
durante el proceso de fritura, se absorben menos grasas. individuales al estudio de todos los genes de
una clula, al mismo tiempo y en un mo-
Eliminacin de protenas alergnicas en alimentos. mento determinado.

Alimentos con menores niveles de cidos insaturados. Paralelamente se estn aprovechando los
avances en la protemica es decir el estudio
As, la biotecnologa agrcola y los productos que desarrolle no de las protenas, su funcin y regulacin
deben ser juzgados exclusivamente por los riesgos o beneficios de dentro de un sistema, as como de la
la tecnologa. Todos los eventos deben ser estudiados caso por metabolmica donde los niveles de com-
caso y paso por paso. El balance entre los riesgos y beneficios que plejidad son mayores, y cuyo objeto es
aporte la tecnologa y sus productos deben ser tenidos en cuenta y intervenir a nivel de rutas metablicas que
ante todo valorar el costo del no uso y aprovechamiento de las conduzcan al desarrollo de procesos ms
nuevas tecnologas de una manera tica y ante todo objetiva. eficientes para la clula.

La biotecnologa es una herramienta tecnolgica dinmica,


guiada por el avance en el conocimiento cientfico.

Taller para realizar con los estudiantes

rea global de cultivos genticamente modificados

Contexto:
La adopcin y uso de plantas genticamente modificadas en el mundo no tiene preceden-
tes en la historia de la agricultura.

Realice una bsqueda va Internet de las reas de cultivo de organismos genticamente


modificados a nivel global, tipos de cultivos sembrados y las caractersticas modificadas.
Analice la informacin y exponga sus conclusiones.

67/ Seguridad y normatividad de los organismos genticamente modificados


Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Glosario
ADN: Abreviacin de cido desoxiribonuclico. Cadena Biotecnologa: Toda aplicacin tecnolgica que utilice
constituida por bases nitrogenas, grupos fosfatos y un azcar sistemas biolgicos, organismos vivos o sus derivados
desoxirribosa y algunos organismos forma una hlice de para producir o modificar productos o procesos de uso
doble cadena. especfico.

Agrobacterium: Gnero de bacterias del suelo que incluye Bioseguridad: Se refiere a las normas y procedimientos
especies patognicas responsables de la aparicin de snto- necesarios con el fin de evitar o manejar el riesgo que
mas tumorales o crecimiento excesivo de races. pudieran ocasionar los OGM a la salud humana y al
medio ambiente.
Alelo: Diferentes formas de un gen. En una clula diploide
hay dos formas para cada gen. Dentro de una poblacin Cariotipo: representacin de los cromosomas de un
puede haber muchos alelos para un gen. Los alelos pueden individuo en metafase. En este aparecen organizados por
ser dominantes o recesivos. En los heterocigotos con alelos tamao y posicin del centrmero.
co-dominantes, ambos se expresan.
CDB: Abreviatura para Convenio de Diversidad Biolgica.
Antera: Parte superior del estambre que contiene los sacos
polnicos con el polen. Son usadas para obtencin de Citoesqueleto: compuesto por estructuras filamentosas
haploidesa partir de micrsporas via andrognesis. llamadas microtbulos, son polmeros de protena de
forma cilndrica que dan soporte a la clula y participan
Anticodon: Tripleta de nucletidos ARNt que correspon- en la divisin celular cuando las clulas hijas se separan.
den a codones complementarios en una molcula de
ARNm durante la traduccin. Citoquininas: Regulador de crecimiento vegetal, responsa-
ble de la induccin de la divisin celular y la diferenciacin
Apomixis: Produccin de un embrin en ausencia de celular. En cultivo de tejidos estn asociadas a la formacin
meiosis. Las plantas apomcticas producen semillas de brotes. Son derivados de adenina.
asexuales derivadas solamente de tejido materno.
Codn: uno de los grupos de tres nucletidos conse-
ARN: Abreviacin de cido ribonuclico. Es un polmero cutivos en el ARNm el cual representa la unidad de
de cidos orgnicos formado por fosfato, un azcar la codificacin gentica y especifica un aminocido en
ribosa y nucletidos Adenina, Guanina, Citosina y Uraci- particular. Cada codn es reconocido por un ARNt
lo. Existen 3 tipos: ARNm, portador de la informacin portador de un aminocido especfico, el cual es incor-
gentica; ARNt, transporta los aminocidos y ARNr, porado en una cadena polipeptdica durante la sntesis
constituye los ribosomas que participan en la traduccin. de protenas.

Auttrofo: Organismo capaz de alimentarse a si mismo Codn de iniciacin: Es aquel que especifica el primer
utilizando CO2 o carbonatos como fuentes de carbono y aminocido de la cadena polipeptdica y en el cual el
obteniendo energa de fuentes exgenas o por oxidacin de ribosoma inicia el proceso de traduccin. En bacterias es
elementos inorgnicos o compuestos como hierro, sulfuros, comn el codn AUG que corresponde a la n-formil-
hidrgeno, amonio o nitritos. metionina o GUG que corresponde al aminocido valina.
En eucariotes la sntesis de protenas siempre se inicia
Auxina: Tipo de regulador de crecimiento en plantas, con el codn AUG traducido como metionina.
estimulador de la divisin celular, elongacin, dominancia
apical, formacin de races, y floracin. Codn de terminacin: Es un set de tres nucletidos para los
cuales no hay un ARNt que corresponda. En este punto se
Biolstica: Tcnica empleada para introducir ADN forneo detiene la sntesis de protenas y la cadena de poliptidos es
mediante el uso de microproyectiles. Ha sido usada para liberada. Los codones de terminacin conocidos son: UAA,
transformar animales, plantas, hongos y hasta mitocondrias. UAG y UGA.

Bioremediacin: Proceso que usa organismos vivos para Codex Alimentarius: Organismo regulatorio miembro de
remover contaminantes o sustancias indeseadas presen- la FAO responsable de la definicin de standares interna-
tes en el agua o en el suelo. cionales de alimentos.

68/ Glosario
Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Clon: Grupo de clulas o individuos genticamente Diploide: clula u organismo que contiene dos juegos
idnticos como resultado de la reproduccin asexual o completos de cromosoma, que en la mayora de los
vegetativa. La clonacin tambin puede referirse a la casos uno proviene del padre y otro de la madre. Los
insercin de un fragmento de ADN en un vector o tejidos somticos de plantas y animales son comnmen-
cromosoma husped. te diploides, mientras que los gametos son haploides.

Crioconservacin: Conservacin de germoplasma en Dormancia: Perodo de vida de un organismo en el cual los


estado dormante por almacenamiento a bajas temperatu- procesos metablicos disminuyen o cesan completamente.
ras, a menudo en nitrgeno lquido. Es usual encontrar altos perodos de latencia en semillas de
cereales y forestales.
Cromosoma: cuerpo ncleo proteico observable al mi-
croscopio durante la divisin celular. Son los portadores Electroporacin: Induccin de poros transitorios a nivel de
de los genes. la membrana plasmtica en bacterias o protoplastos, al
aplicar descargas de electricidad. A travs de estos poros es
Cromatina: Sustancia que compone los cromosomas de posible introducir ADN exgeno a la clula. Es un mtodo
las clulas eucariotas. Es un complejo de ADN, histonas y empelado en la transformacin de bacterias.
pequeas cantidades de ARN.
Embriognesis: Desarrollo de un embrin. Puede ser de
Crown gall: Conocida tambin como agalla de corona, es un origen sexual o a partir de tejido y se denomina embrio-
crecimiento tumoral que aparece en el cuello de la planta, gnesis somtica.
producto de la infeccin de Agrobacterium tumefaciens. La
agalla es producida por la introduccin del Plsmido Ti a la Endonucleasa: Enzima capaz de romper enlaces fosfodiester
clula vegetal. dentro de la cadena de ADN.

Cry: Clase de protena cristalina producida por Bacillus Enhancer: Sustancia o secuencia que incrementa la activi-
thuringensis, ingenierizada e introducida a clulas dad qumica o fisiolgica en un proceso. Las secuencias
vegetales para conferir resistencia al ataque de insec- encontradas en eucariotes o en algunos virus incrementan
tos. Estas protenas son txicas a ciertas clases de la transcripcin de un gen. Se encuentran ubicadas a
insectos, pero han sido reportadas como inocuas para varios pares de bases del gen que se expresa. En algunos
mamferos e insectos no blancos. Sinnimo: delta casos pueden activar la transcripcin de un gen que carece
endotoxinas. de promotor.

Cultivo de tejidos: Cultivo in vitro de clulas, tejidos u Enzimas: Protenas que catalizan procesos metablicos y
rganos que se desarrollan en un medio nutritivo bajo actan a muy bajas concentraciones. Se clasifican de
condiciones estriles. acuerdo con el tipo de reaccin que catalizan: oxidoree-
ductasas, transferasas, hidrolasas, isomerasas, liasas y
De-diferenciacin: Regreso al estado no diferenciado. ligasas.
Este proceso ocurre cuando se produce una herida en la
planta o en cultivo de tejidos, donde clulas de tejidos Enzima de restriccin: Son endonucleasas que cortan el
que cumplen una funcin especfica, se convierten en no ADN en sitios especficos. Existen tres clases I: que tiene
especializados comprometindose en un nuevo programa funcin de restriccin y mutilacin; II: corta dentro o
morfogentico. cerca de una secuencia palindrmica, es la ms usada en
biologa molecular y III: que tiene funciones de restric-
Desinfectacin: Eliminacin de agentes contaminantes, cin y mutilacin y requiere ATP.
no patgenos de la superficie de los tejidos que van a ser
introducidos a in vitro. Eucatiote: Clula cuyo material gentico se encuentra rodea-
do por una membrana y constituye un verdadero ncleo.
Desinfeccin: Eliminacin de agentes infecciosos de la
superficie de los tejidos que van a ser introducidos a in vitro. Exon: Segmento de un gen de eucariotes que es transcrito
a ARNm. Finalmente expresa una protena.
Diferenciacin: Proceso en el cual clulas no especializa-
das dan origen a estructuras y funciones especficas. Esto Explante: Porcin de una planta o tejido vegetal que ha
ocurre durante la etapa de desarrollo y es irreversible en sido removido bajo condiciones aspticas para ser cultiva-
condiciones in vivo en organismos superiores. do en medios nutritivos

69/ Glosario
Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Fenotipo: Apariencia visible de un individuo con respecto obteniendo energa de fuentes exgenas o por oxidacin de
a una o ms caractersticas elementos inorgnicos o compuestos como hierro, sulfuros,
hidrgeno, amonio o nitritos.
Fitoreguladores: Conocidos tambin como hormonas
vegetales o reguladores de crecimiento, son sustancias Histonas: Grupo de protenas solubles ricas en amino-
qumicas que actan en bajas concentraciones, encargadas cidos de carcter bsico, asociadas al ADN de clulas
de promover, inhibir o modificar procesos biolgicos. En animales y vegetales.
plantas las ms conocidas son las auxinas, cito quininas,
giberalinas, etileno y cido abscico. Ingeniera gentica: modificacin del genoma y del
fenotipo mediante transgnesis.
Flujo de genes: Dispersin de genes provenientes de una
especie cultivada a otra, usualmente relacionada, que en Intrn: Segmento de un gen de eucariotes que no codifica
consecuencia puede provocar cambios en la frecuencia allica. para una protena. Los intrones son removidos cuando el
ADN se transcribe a ARNm, en un proceso llamado splicing.
Fragmentos de Okasaki: Fragmentos que aparecen en la
replicacin del ADN en la hebra retardada. Los fragmentos In vitro: Proceso que se lleva a cabo fuera del organismo o
son finalmente unidos por la accin del la ADN ligasa. en un medio artificial. Se aplica al cultivo de diferentes
explantes en recipientes de vidrio o plstico.
Friable: Trmino empleado para definir un callo blando,
que pueden ser cortados fcilmente y dispersados como In situ: Proceso que se lleva a cabo en un medio natural o
aglomerados celulares o clulas en suspensin. en el lugar donde originalmente se encuentra el individuo.

Gen: unidad de la herencia transmitida de generacin en Locus: Sitio que ocupa un gen en un cromosoma.
generacin durante la reproduccin sexual y asexual. Es
una secuencia de nucletidos que codifica para un ARN o Medio de cultivo: Cualquier sistema nutritivo para el
para una protena. cultivo de clulas vegetales, tejidos u rganos que contiene
sales minerales, fuentes de carbono, vitaminas y en algu-
Gen GUS: Gen de E. coli que codifica para la sntesis de la nos casos reguladores de crecimiento.
beta-glucoronidasa. Se utiliza como gen reportero, por el
color azul que aparece en los tejidos transformados. Meristemo: Tejido vegetal indiferenciado pero determina-
do, cuyas clulas son capaces de dividirse y diferenciarse
Genoma: Juego completo de cromosomas heredados en tejidos especializados como races o brotes.
como unidad de cada uno de los parentales. Este juego
comprende genes y secuencias no codificadoras. Microinyeccin: Introduccin de pequeas cantidades de
ADN a clulas o tejidos con la ayuda de una aguja micros-
Genotipo: Constitucin gentica de un organismo. Es la cpica.
constitucin allica a un locus particular ej: Aa o aa. Es la
suma del efecto de todos los loci que contribuyen a la Micropropagacin: Multiplicacin in vitro y/o regenera-
expresin de una caracterstica. cin de plantas completas en condiciones de asepsia. Se
conoce tambin como propagacin clonal.
Germoplasma: Individuo o grupo de individuos o clon que
representan un genotipo, variedad, especie o cultivo y que Nucleosoma: Sub-unidades de cromatina compuestas
es mantenido como una coleccin in vitro o in situ. por un octmero de histonas y sobre los cuales se enro-
lla el ADN.
Giberelina: Regulador de crecimiento que participa en la
elongacin, floracin, forma y tamao de los frutos, Nucletido: nucleosido con uno o ms grupos fosfato
germinacin, vernalizacin y otros procesos fisiolgicos. unidos entre si por enlaces 3-5hidroxilo a un azcar
pentosa. Los nucletidos se unen entre si por enlaces
Haploide: Clula u organismo que contiene uno de cada fosfodiester. Son: Adenina, Guanina, Citosina y Timina.
par de cromosoma homlogo encontrados en una clula
diploide. Las clulas sexuales o gametos son haploides. Opern: Unidad gentica integrada funcionalmente para
el control de la expresin gnica en bacterias. El control de
Hetertrofo: Organismo incapaz de alimentarse a si mismo, la expresin est dado en la regulacin de la transcripcin
utilizando CO2 o carbonatos como fuentes de carbono y de los genes estructurales.

70/ Glosario
Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Opinas: Sustancias secretadas por las clulas de la planta Replicacin: Consiste en la duplicacin de la molcula de
como resultado de la infeccin con Agrobacterium y usadas ADN en presencia de la ADN polimerasa, durante la fase
exclusivamente por la bacteria como fuente de carbono de sntesis (S) del ciclo celular. De As cuando la clula se
para su crecimiento y reproduccin en la planta. divida, las dos hijas contendrn la misma cantidad de ADN
que la clula madre.
Organismo Genticamente Modificado: Conocido tam-
bin como Transgnico, se refiere a un individuo al cual se Ribosomas: estructura subcelular que consta de 2 sub-
le ha insertado un transgen en su genoma. unidades una grande y una pequea. Contiene el sitio
para la traduccin de ARN a protena.
Organognesis: Formacin de rganos de novo a partir de
callos, meristemos o suspensiones celulares. Cuando no Silenciamiento: Prdida de la expresin de un gen ya sea
aparece la etapa de callo la organognesis es considerada debido a una alteracin en la secuencia del ADN o de su
tambin como micropropagacin. regin regulatoria, o por interacciones entre sus transcrip-
tos y otros ARNm presentes en la clula (ARN antisentido).
Palindrmico: Segmento de ADN de cadena doble, en el
cual el orden de las bases en sentido 5-3 en una cadena, Simbiosis: Asociacin estrecha entre dos organismos
es la misma en la cadena complementaria antiparalela, donde hay ventajas para ambos o donde ambos reciben un
tambin leda en sentido 5-3. beneficio como resultado de la asociacin.

Partenognesis: Produccin de un embrin a partir de un Sincronizacin celular: Cultivo en el cual todas las clulas
vulo no fertilizado. son detenidas en una fase dentro del ciclo celular al mismo
tiempo, para luego entrar en la fase de divisin. Esto se
Plsmido: molcula de ADN extracromosmico, circular y logra mediante la adicin de drogas al medio de cultivo.
autoreplicable presente en las bacterias. Puede de ser
transferido de una clula a otra de la misma especie o a Suspensin celular: Tipo de cultivo en el cual clulas o
especies diferentes. Los plsmidos son particularmente agregados de clulas crecen y se multiplican en medio
importantes como vectores en ingeniera gentica. lquido.

Procariote: Dcese de una clula cuyo material gentico Tejido: Grupo de clulas de estructura similar que cumplen
(cromosoma) no se encuentra rodeado por una membra- una funcin especfica.
na, sino ubicado en una regin del citoplasma llamado
nucleoide. Los procariotes no sufren meiosis y no tienen Terapia gnica: Tratamiento utilizado para tratar enferme-
organelos funcionales como mitocondrias o cloroplastos. dades hereditarias por transformacin de un individuo
afectado con una copia del tipo silvestre del gen que
Promotor: Corta secuencia de ADN, ubicado corriente provoca la enfermedad.
arriba de la secuencia codificadora, a la cual se une la ARN
polimerasa para iniciar la transcripcin. Termoterapia: Exposicin de un rgano o tejido a altas
temperaturas. Es una tcnica muy empleada para eliminar
Propagacin vegetativa: reproduccin que no implica virus o micoplasmas.
unin de gametos. Se conoce tambin como propagacin
asexual o somtica. Es comn en plantas a partir de yemas, Ti: Plsmido inductor de tumor presente en Agrobac-
segmentos nodales o tubrculos. terium tumefaciens y responsable de la aparicin de la
agalla de corona. En el plsmido se encuentran unas
Protocolo de Cartagena: Conjunto de reglas internaciona- secuencias llamadas oncogenes que codifican para la
les con el fin de proteger la diversidad biolgica de los sntesis de hormonas vegetales. Estos oncogenes son
riesgos potenciales que podran aparecer por la liberacin removidos cuando el plsmido es usado en procesos de
de OGM. Este establece un procedimiento para asegurar transgnesis.
que los pases disponen de la informacin necesaria para la
toma de decisiones antes de aceptar el ingreso de OGM en Totipotencia: Capacidad de una clula o un tejido para
sus territorios. regenerar un organismo completo.

Protoplastos: Clulas vegetales desprovistas de pared Traduccin: sntesis de polipptidos en el cual una secuen-
celular, la cual puede ser removida por mtodos mecnicos cia de aminocidos es determinada por el ARNm, mediada
(maceracin) o qumicos (enzimas). por el ARNt y transportada por el ARNr.

71/ Glosario
Mdulo 3
Programa de Educacin en
Biotecnologa Agrcola

Transcipcin: sntesis de ARN a partir de ADN en presencia Transgnesis: introduccin de uno o ms genes prove-
de ARN polimerasa. niente de una clula a otra de la misma especie o de
especies diferentes.
Transfeccin: Infeccin de una clula con ADN o ARN viral
aislado, que resulta en la produccin de partculas virales Transposn: es un elemento de ADN que puede moverse
intactas. dentro del mismo cromosoma o a otro cromosoma.

Transformacin: Toma e integracin de un fragmento de Variacin somaclonal: Cambios epigenticos o genticos


ADN en una clula, en la cual el nuevo ADN es el respon- inducidos durante la fase de callo o de clulas vegetales
sable de la adquisicin de una nueva caracterstica. cultivadas in vitro. En algunas ocasiones estos cambios se
reflejan en el fenotipo.
Transgen: Secuencia gentica aislada usada para transfor-
mar un organismo. Los transgenes se transmiten de una Vector: llamado tambin transportador, es una pequea mol-
generacin a otra por procesos de meiosis. Usualmente los cula de ADN (plsmido, virus, bacteriofago) que se emplea
transgenes provienen de especies diferentes a la que la para transferir ADN dentro de una clula. Los vectores poseen
receptora. sitios de clonacin donde se introduce un ADN forneo.

PGINAS ELECTRNICAS

http://www.agrobio.org

http://www.porquebiotecnologa.com.ar

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72/ Glosario
Mdulo 3
Programa de Educacin en
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Conservation and use. CAB International Biotechnology
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Web sites: E-mail: agrobio@agrobio.org

Web: www.agrobio.org
www.icbi.org

www.fao.org

www.isaaa.org

www.agrobio.org

74/ Bibliografa
Se realizaron selecciones por muchas
generaciones y as se modific el contenido
gentico de las plantas, de forma emprica.

Los cultivares elite


Los cultivares elite
modernos se desarrollaron
modernos se desarrollaron
por fitomejoradores para
por fitomejoradores para Induccin de
de
responder a la agricultura Induccin
responder a la agricultura
moderna y al continuo mutaciones
mutaciones
moderna y al continuo
crecimiento demogrfico.
crecimiento demogrfico.

Cruzamiento
Cruzamiento
gentico
gentico

HIBRIDIZACIN O
HIBRIDIZACIN O MEJORAMIENTO
MEJORAMIENTO CRUZADO
CRUZADO TECNOLOGA
TECNOLOGA
DEL ADN
DEL ADN RECOMBINANTE
RECOMBINANTE

Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia

1700 libros de 1000 1700 libros de 1000 1700 libros de 1000


pginas cada uno pginas cada uno pginas cada uno

METODOLOGA DEL ADN RECOMBINANTE

Media Pgina Genes


Insertados

1700 libros 1.7 1700 libros 1.7


millones de pginas millones de pginas
Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola

Afiches final mod3 1 13/01/2005, 03:33 pm


Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia
IDENTIFICACIN DE
IDENTIFICACIN DE LA
LA SECUENCIA
SECUENCIA DEL
DEL GEN
GEN DE
DE INTERS
INTERS

Identificacin del gen de inters Corte con Enzimas de Restriccin Corte con Enzimas de Restriccin

EcoRI SmaI

5 G A A T T C 3 5 C C C G G G 3
Protena Trp Phe Gly Ser 3 C T T A A G 5 3 G G G C C C 5

EcoRI SmaI
U G GU U U GG C U C A
ARNm 5 3
Extremos pegajosos
Codon Extremos romos
Transcriptasa reversa
5 G A A T T C 3 5 C C C G G G 3
3 5
A C U C G GU U U G G U
ADNc 3 C T T A A G 5 3 G G G C C C 5

Gen 1

Gen
CONSTRUCCIN DEL
CONSTRUCCIN DEL TRANSGEN
TRANSGEN marcador Estructura Bsica
Origen
de seleccin de un Plsmido
Secuencia Codificante
Promotor Terminador
o Gen de inters
Origen de HindIII Polylinker
SphI
replicacin PstI
ATG Plsmido SalI
Regin
Promotores: inician la Vector de XbaI dentro de la
BamHI
transcripcin. Determinan clonacin SmaI cual el ADN
cuando, dnde, y en qu medida, KpnI puede ser

pr
se obtiene el producto del gen. Este transgen se introduce en el sitio de clonado SacI
insertado

am
EcoRI

Terminador: marca el final del Gen de seleccin


gen Polilinker Gen de seleccin en bacterias
en bacterias

CLONACIN
CLONACIN
Estrategia de clonacin en plsmidos Clulas que no Seleccin de Fragmentos Clonados
toman el Plsmido Medio de cultivo para el
r
p Plsmido crecimiento de las bacterias
am
recombinante Transferencia
Vector de las clulas
E. coli al filtro de
Plsmido
nitrocelulosa
Insercin
mediante
enzimas de Replicacin Multiplicacin
restriccin del plsmido de la clula

Clulas con
plsmidos no
r Hibridacin con recombinantes y
p
am sonda radioactiva recombinantes
para identificar el
Gen de inters gen de inters
Plsmido
presente
Recombinante cromosoma
Clulas que contienen visualizndolos
el Plsmido mediante rayos X

TRANSFORMACIN
TRANSFORMACIN Mtodo 1: Biolstica Mtodo 2: Agrobacterium
Agrobacterium

Tubo de Este proceso ADN-T


aceleracin
de gas natural es Esta
utilizado para secuencia es
transformar in reemplazada
Disco de Macrocarrier
vitro las clulas Plsmido Ti por el
ruptura
de las plantas transgen
reemplazando
Micropartculas los genes no
cubiertas con ADN deseados por
el de inters T-ADN
Pantalla de Cromosoma integrado
frenado (transgen). Para
ello se emplean bacteriano
enzimas de
Clulas Agrobacterium Agrobacterium rhizogenes
blanco restriccin y
tumefaciens
ligasas.
Herida en la planta
Tipos de Agrobacterium

SELECCIN
SELECCIN
Mtodo 2: PCR - Reaccin en cadena de la Polimerasa
Mtodo 1: Deteccin
visual por el mtodo
Gen GUS

La reaccin se visualiza por


la aparicin del color azul
que toman los tejidos.

1. Denaturacin 2. Anillamiento 3. Extensin de


del cebador la cadena

Ciclo 1 Ciclo 2 Ciclo 3

REGENERACIN
REGENERACIN

Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola

Afiches final mod3 2 13/01/2005, 03:33 pm


De la aplicacin de la Biotecnologa moderna,
como herramienta tecnolgica, han resultado
productos con diferentes caractersticas,
veamos en que consisten .

PRINCIPIOS DE TRANSFORMACIN:
RESISTENCIA A INSECTOS:
El gen ms empleado para conferir esta caracterstica
proviene de una bacteria natural del suelo, llamada Bacillus
thuringensis, que sintetiza una protena denominada Cry. Cultivos desarrollados a travs de
Cuando el gen de la bacteria ha sido transferido a la planta, la biotecnologa moderna
sta adquiere la resistencia al ataque de insectos
especficos.
Maz resistente a insectos y herbicidas
PARA LOGRAR UNA Soya resistente a herbicidas
MADURACIN RETARDADA:
La modificacin consiste en interferir (tecnologa Algodn resistente a insectos
antisentido) la produccin de etileno, de este modo las Papaya resistente a virus
frutas podrn permanecer ms tiempo en la planta hasta
lograr el sabor deseado y no tendrn que ser cosecha antes Papa resistente a virus
de tiempo. Tomate de ms larga vida poscosecha
Clavel azul
RESISTENCIA A HERBICIDAS: Arroz biofortificado
El empleo de estas tecnologas hace posible desactivar o
reemplazar la secuencia de susceptibilidad por otra que
confiera resistencia y que permita a la planta o cultivo
resistir la aplicacin del herbicida.

RESISTENCIA A CONDICIONES AMBIENTALES EXTREMAS:


Permite desarrollar cultivos capaces de progresar en
ambientes desrticos, con altas concentraciones de sal, de
bajas o altas temperaturas, entre otros. Veamos como
ejemplo el desarrollo de cultivos resistentes a altas
concentraciones de sal.

RESISTENCIA A VIRUS:
El proceso consiste en introducir los genes de la protena de
la cpside del virus. Estos genes expresan en la planta altos
niveles de la protena y confieren de este modo la
resistencia. La Bioseguridad, es entendida como el conjunto de medidas y
acciones requeridas para minimizar los potenciales riesgos que
puedan ocurrir, cuando se utilizan Organismos Vivos Modificados
(OVM), derivados y productos que los contengan.
MEJORA NUTRICIONAL:
Se busca aumentar su contenido de vitamina A en el arroz
mediante la insercin de los genes involucrados en la
La bioseguridad busca resguardar los intereses pblicos y privados,
sntesis de un precursor de dicha vitamina, el B caroteno. permitiendo solamente la aplicacin responsable de la biotecnolo-
Este precursor se expresa en la semilla de la planta, parte ga, cuidando mantener un balance entre la proteccin de la salud,
que es la que se consume. el ambiente y la biodiversidad, sin entorpecer el comercio y la trans-
ferencia de tecnologas, mediante el establecimiento de normas.

Durante la evaluacin de riesgo a la que se someten los OGM se


tienen en cuenta los riesgos para el ambiente y la salud humana y
animal.

SEGURIDAD Y NORMATIVIDAD DE LOS


ORGANISMOS GENTICAMENTE MODIFICADOS
Miembros Consejo Tcnico Nacional de Bioseguridad Agrcola MARCO REGULATORIO EN COLOMBIA PROCEDIMIENTO DE INTRODUCCIN DE OGM AL AMBIENTE

CTN La regulacin para la introduccin, transporte,


uso, manejo, produccin, liberacin y
ICA autoriza o niega mediante resolucin motivada

comercializacin de organismos genticamente


MINISTERIO DE MINISTERIO DE CTN recomienda
AGRICULTURA PROTECCIN SOCIAL MINISTERIO DEL modificados de uso agrcola en Colombia est
ANDI MEDIO AMBIENTE a cargo del Instituto Colombiano Ensayos de campo
Agropecuario, ICA. Esta regulacin se basa en
la Resolucin ICA N 03492 cuyo texto fue Estudios de Bioseguridad Caso por caso
ACOSEMILLAS ICA
consultado a los distintos actores de la Consejo Tcnico Nacional de Bioseguridad - CTN
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia

sociedad involucrados en el tema, gremios,


universidades, ONGs, grupos ambientales, Elaboracin Informe
consumidores y otros.
Evaluacin de riesgo ambiental
SAC S CONCEPTO
Para la toma de decisiones el ICA recibe
Cumple con los requisitos MINISTERIO DE
asesoramiento y apoyo del Consejo Tcnico
UNIVERSIDAD NACIONAL PROTECCIN SOCIAL
Nacional creado mediante acuerdo 0013 de Solicitud
ANUC DE COLOMBIA
1998, cuya expedicin fue subrogada por el
acuerdo 00002 de 2002. Registro

En nuestro pas, el cultivo de una nueva


variedad obtenida por transgnesis es
analizado independiente de la modificacin
gentica que se ha realizado y de la variedad
que incorpora la nueva caracterstica.

Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola

Afiches final mod3 3 13/01/2005, 03:33 pm