UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN SIMON

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE GRADUADOS Y EDUCACION CONTINUA
MAESTRIA EN TOXICOLOGA 2 VERSION

ANALISIS TOXICOLOGICO
SISTEMATICO

M.Sc. Doris Sandra Ura H.

BIOQUMICA TOXICLOGA
 MODALIDADES DEL ANLISIS
QUMICO TOXICOLGICO
Son dos:
A) Cuando no se sospecha de ningn txico
concreto, se requiere seguir una sistemtica
analtica toxicolgica general.
B) Cuando se busca un determinado txico,
puede hacerse:
- Separacin del medio.
- Tcnicas de identificacin directa (sin
separacin)
-
 FASES DE UN ANLISIS QUMICO
TOXICOLGICO GENERAL

Deben considerarse las sgtes. fases:

Separacin o extraccin del txico de la

muestra problema
Fraccionamiento del extracto
Purificacin de los extractos obtenidos
Deteccin de la sustancia xenobitico
Identificacin del txico
Determinacin o valoracin cuantitativa
 EXTRACCIN

Operacin fundamental para el

xito en el anlisis toxicolgico.
En esencia la extraccin tiene
una doble finalidad:
El aislamiento y purificacin de
txico as como determinar la
concentracin en el extracto
obtenido.
 EXTRACCIN

Las extracciones se basan en las

relaciones de polaridad entre el
toxico y el disolvente.

Un solvente muy poco polar extrae

a sustancias poco polares.
Solventes muy polares separan de
una solucin a los productos muy
polares.
Extraccin lquido-lquido
PURIFICACIN DEL EXTRACTO

Segn el profesor Repetto

La persecucin de esta seguridad
presenta a veces un dilema:
Los procesos de purificacin pueden
exponer a defectuosos rendimientos
cuantitativos, y hasta la perdida de
algn toxico, aunque esto
normalmente, sea preferible a un
resultado pseudo positivo.
PURIFICACIN DEL EXTRACTO

El qumico tiene
frecuentemente que
establecer en cada caso cual
es el margen entre la
purificacin necesaria y la
suficiente.
FRACCIONAMIENTO DE LOS EXTRACTOS

Extracto cido (ter etlico)

Extracto alcalino (Cloroformo)

En general, para la extraccin de

un analito determinado se debe
siempre consultar la monografa
correspondiente para esa
sustancia qumica.
 IDENTIFICACIN

1. Mtodos cromatogrficos:
(Cromatografa en capa fina,
gaseosa, lquida, alta
resolucin (HPLC)).
2. Electroforesis
3. Mtodos espectrofotomtricos
4. Espectrometra de masas
5. Inmunoanlisis enzimticos
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA Y SU
APLICACIN
EN EL ANLISIS QUMICO FORENSE

M.Sc. Doris Sandra Ura H.

BIOQUMICA TOXICLOGA
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA Y SU APLICACIN
EN EL ANLISIS QUMICO FORENSE

La Cromatografa en capa fina

puede ser definida:
Como un mtodo de anlisis para la
separacin e identificacin de drogas y
otros compuestos
En el cual el flujo de un disolvente
principalmente orgnico o de un gas
favorece la separacin de sustancias
Aplicadas previamente en forma de
puntos
Por migracin diferencial, migran a
diferentes distancias
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

Las sustancias as separadas se hacen visibles

observando la placa cromatogrfica a la luz UV o
rociando sobre su superficie reactivos de
deteccin (Reveladores)

Siendo facilitada la identificacin por

comparacin con las correspondientes
sustancias patrn.

Se ha desarrollado como una

herramienta analtica por tres
razones: rapidez, sensibilidad y
resolucin.
APLICACIN DE MUESTRAS Y SOLUCIONES
PATRONES

La aplicacin debe tener un dimetro

entre 3-8 mm. En caso de sembrar
volmenes mayores, evaporar el
solvente entre cada aplicacin, para no
aumentar el tamao del dimetro de la
misma.

Los analticos deben localizarse como

manchas compactas, redondas y
ovaladas y no zonas con colas, porciones
difusas.
DESARROLLO DE LAS PLACAS
CROMATOGRFICAS

Para el desarrollo, se colocan una o dos

placas en un recipiente de vidrio con tapa
esmerilada, cuyo fondo esta cubierto de
eluyente hasta una altura de 5-7 mm

Para tamaos de placa mas pequeos se

emplean tambin recipientes cilndricos.
DESARROLLO DE LAS PLACAS
CROMATOGRFICAS

En la eleccin del eluyente puede servir de

norma la siguiente SERIE ELUOTROPA
el poder eluyente aumenta con la polaridad
de los disolventes.

Hexano
Tetracloruro de carbono
Benceno
Diclorometano
Cloroformo
ter dietlico
Acetato de etilo Aumento del poder eluyente
Acetato
Isopropanol
Etanol
Metanol
Agua
IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA CAPA FINA
INVESTIGACIN DE
SALICILATOS

M.Sc. Doris Sandra Ura H.

TOXICLOGA FORENSE
MEDOTOX
MEDICINA LABORATORIAL S.A.
INVESTIGACIN DE SALICILATOS

El AAS es un cido dbil con un pKa

3,5
Tras su absorcin, se hidroliza
rpidamente dando cido saliclico,
que en su mayor parte se encuentra
en forma ionizada (99%).
Su volumen de distribucin es bajo,
0,15 l/Kg a 0,6 l/Kg.
 CLNICA

La edad del paciente (Es ms grave en nios

menores de 4 aos que sufren acidosis con mayor
frecuencia)
La dosis (Ambas determinan la gravedad de la
intoxicacin)
Aparecen signos y sntomas txicos tras la
ingestin:
Adulto : 10 g de Aspirina
Nio : 0,15 g/Kg de peso
 CLNICA

El tiempo de latencia de 30 minutos y se

caracteriza:
Sntoma digestivos
Nauseas y vmitos
Sensacin de calor con rubefacin
Hipersudoracin
Hipertermia e Hiperventilacin
Alteraciones Neurosensoriales ( Vrtigo, zumbido
de odo, cefaleas y delirio que puede desembocar en el
coma aunque no es frecuente la perdida de conciencia)
DIAGNSTICO TOXICOLGICO

1. Mtodos cualitativos
a) Reaccin de Trinder: El in Frrico acta
sobre el AAS dando un compuesto coloreado
violeta.
b) Cromatografa en capa fina: Donde se realiza
previamente una extraccin con solventes
orgnicos.
2. Mtodos Cuantitativos
Utilizando el mismo reactivo de Trinder a travs
de una tcnica calorimtrica, usando el
espectrofotmetro.
 TCNICA

b) Extraccin cida
A 10 ml de la muestra aadir cido tartrico
hasta ph 3, aadir sulfato de amonio, calentar
suavemente con el objeto de eliminar
mucosidades.
Extraer dos veces con 30 ml de ter.
Aadir 5 ml de Bicarbonato solucin acuosa
saturada, agitar y separar.
Guardar la fraccin acuosa para examinar la
posible existencia de salicilatos.
Identificacin por cromatografa
de salicilatos

Preparar soluciones de referencia en

concentraciones de 1 mg/ml.
En la cromatoplaca colocar los extractos y
patrones.
En una cmara de arrastre colocar la fase
mvil mas adecuada.
SOLVENTE DE ELUCIN
TE: Cloroformo: Metanol (90:10)
 IDENTIFICACIN POR
CROMATOGRAFA DE SALICILATOS

REVELADO
Solucin de Cloruro Frrico al 2 o 5
% en agua destilada.
Pulverizar con la solucin y secar.
RESULTADO
Manchas de color violeta.
Una pequea cantidad de extracto
cido se deja secar sobre una
cpsula de porcelana y agregar
una gota de reactivo.
MUESTRAS DE ANLISIS POST MORTEN

Orina
Contenido Gstrico
Sangre
Hgado
Humor Vtreo
Rin
 IDENTIFICACIN POR
CROMATOGRAFA DE SALICILATOS
 IDENTIFICACIN POR
CROMATOGRAFA DE SALICILATOS
 IDENTIFICACIN POR
CROMATOGRAFA DE SALICILATOS
 Cromatografa, usando TLC y Derivatizacin Post-
cromatogrfica por la reaccin de Bratton-Marshall.
Fase mvil: cloroformo-acetona 90:10

2-amino-5-nitro-2 clorobenzofenona Benzofenona correspondiente al

Lorazepam
ANCB 30ng