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ISSN 0719-4250
http://jppres.com/jppres
Abstract Resumen
Context: Mandarins are a complex taxonomic group including different Contexto: Las mandarinas son un grupo taxonmico complejo en el que
species, cultivars and hybrids growing around the world being fruits existen diferentes especies, cultivares e hbridos que se cultivan alrededor
greatly appreciated by the consumers. Citrus deliciosa Tenore var. Ca del mundo con gran aceptacin por parte de los consumidores. La
originates from Rio Grande do Sul State (Brazil) and the fruit is variedad Ca de Citrus deliciosa Tenore es originaria del estado de Rio
characterised by its pleasant properties, especially its aroma. Grande do Sul (Brasil) donde se produce fruta con caractersticas
Aims: To evaluate the C. deliciosa cold-pressed essential oils, classified as agradables, especialmente su aroma.
"green", "yellow" and "red" according to fruit maturity, and the one Objetivos: Evaluar por cromatografa gaseosa-espectrometra de masa
produced by distillation by gas chromatography-mass spectrometry (GC- (GC-MS) y cromatografa gaseosa-olfatometra (GC-O) el aceite esencial
MS) and gas chromatography-olfactometry (GC-O). exprimido (AEE) clasificado como verde (fruta inmadura), amarillo
Methods: The essential oils aromatic quality was evaluated by GC-O (fruta madura) y rojo (fruta sobremadurada) segn la madurez de la
through a panel of trained judges. The identification of the volatile fruta, y el obtenido por destilacin (AED) de cscaras de C. deliciosa
compounds was performed by GC-MS and their quantification by GC- Tenore var. Ca.
FID. Mtodos: La calidad aromtica fue evaluada por GC-O mediante un panel
Results: The chemical composition of the three types of cold-pressed de jueces entrenados. La identificacin de los compuestos voltiles de los
essential oils was very similar. However, the distilled oil presented a aceites se realiz por GC-MS y la cuantificacin de los mismos por GC-
higher concentration of oxygenated monoterpenes (mainly -terpineol, 4- FID.
terpineol and sabinene hydrates). Herbaceous and floral aromatic notes Resultados: La composicin qumica de los tres AEEs fue muy similar
were able to describe the "green" oil, while for the distilled oil wood and cualitativa y cuantitativamente, pero en el AED se determin una mayor
unpleasant notes were perceived. concentracin de monoterpenos oxigenados (principalmente -terpineol,
Conclusions: The cold-pressed oils did not show nor chemical, or 4-terpineol e hidratos de sabineno). El AE verde present notas
aromatic differences, by the fruit maturity. The distilled oil was aromticas herbceas y florales, mientras que en el AED se percibieron
characterized by aromatic nuances making the oil less appreciated notas de madera y desagradables.
(inferior quality) than the cold-pressed oil. Probably as consequence of Conclusiones: El aroma del AED es de inferior calidad a los AEEs, lo que
artifacts formation during the distillation process. puede deberse a la posible formacin de artefactos durante el proceso de
destilacin.
Keywords: Citrus deliciosa var. Ca; commercial essential oils; gas Palabras Clave: aceites esenciales comerciales; Citrus deliciosa var. Ca;
chromatography flame ionization detector; gas chromatography mass cromatografa gaseosa detector de ionizacin de llama; cromatografa
spectrometry; gas chromatography olfactometry. gaseosa espectrometra de masa; cromatografa gaseosa olfatometra.
ARTICLE INFO
Received | Recibido: May 9, 2017.
Received in revised form | Recibido en forma corregida: July 31, 2017.
Accepted | Aceptado: August 16, 2017.
Available Online | Publicado en Lnea: August 29, 2017.
Declaration of interests | Declaracin de Intereses: The authors declare no conflict of interest.
Funding | Financiacin: This work was supported by Agencia Nacional de Investigacin e Innovacin (ANII, POS_NAC_2013_1_11316),
Comisin Sectorial de Investigacin Cientfica (CSIC-UdelaR, CSIC-Programa de Iniciacin a la Investigacin-Modalidad 1. rea Tecnolgica.
Proyecto n 1004), Uruguay.
Academic Editor | Editor Acadmico: Gabino Garrido.
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Minteguiaga et al. Perfil aromtico de Citrus deliciosa por cromatografa gaseosa-olfatometra
ral) y GC-O (cromatografa gaseosa acoplada a olfa- AE destilado de la fruta madura. Antes de su anli-
tometra) (Tranchida et al., 2011; Chin y Marriott, 2015). En sis qumico y olfatomtrico las muestras fueron re-
un cromatgrafo gaseoso-olfatmetro, lo que ocu- frigeradas en su envase original a -18C. La compo-
rre es bsicamente la separacin de una mezcla sicin original de dicha variedad fue reportada pre-
compleja en sus componentes y la transferencia pa- viamente por Frizzo et al. (2004) para la fruta madu-
ralela y simultnea a un detector instrumental (por ra, en la que se encontr que los hidrocarburos mo-
ejemplo, un detector de ionizacin de llama) y a un noterpnicos representaron el 99% de la composi-
puerto olfatomtrico en donde se realiza la evalua- cin del aceite esencial. En particular, los principa-
cin sensorial de stos por un panel de jueces en- les componentes de esta fraccin fueron el limo-
trenados (Grosch, 2007; Acea Muoz, 2011; Chin y Marriott, neno, -terpineno, -mirceno, - y -pineno. Entre
2015). los compuestos monoterpnicos oxigenados se des-
La aplicacin de GC-O a los AEs ctricos es am- taca la presencia de 4-terpineol, linalol y -
plia, demostrando su gran aplicabilidad tanto para terpineol. Los hidrocarburos sesquiterpnicos in-
el anlisis descriptivo-deconstructivo (determina- cluyeron -cariofileno y (E,E)--farneseno como
cin de las notas aromticas clave o de impacto en compuestos principales. El compuesto relevante en
cada tipo de muestra) como para el constructivo la composicin del aceite esencial fue el N-
(imitacin de las caractersticas aromticas de un metilantranilato de metilo.
producto a travs de mezclas sintticas con los
compuestos de impacto aromtico, tambin llama- Anlisis por GC-FID y GC-MS
dos compuestos aromticamente activos) (Dharma- Para el anlisis por cromatografa gaseosa aco-
wan et al., 2009; Tranchida et al., 2011; Chin y Marriott, 2015).
plada a espectrometra de masa (GC-MS) y croma-
Dicha aplicacin de GC-O ha sido empleada tanto tografa gaseosa convencional (GC-FID) se sigui el
para evaluar aceites ctricos comerciales (Hgnadttir procedimiento detallado en Frizzo et al. (2004). Para
y Rousseff, 2003; Xiao et al., 2016) como diferentes tipos
ello se utiliz un cromatgrafo de gases Shimadzu
de variedades, por ejemplo C. nobilis var. microcar- GC-14B (Tokyo, Japn) equipado con detector de
pa (Dharmawan et al., 2009), C. sinensis (Qiao et al., 2008), ionizacin de llama (FID) y un software de proce-
C. reticulata (Sawamura et al., 2004), C. reticulata var . samiento de datos (EZ-Chrom, Shimadzu Corp.), y
Clementine (Chisholm et al., 2003) y C. auriantum L. un GC-MS QP 5050A (Shimadzu Europe). La identi-
var. cyathifera (Song et al., 2000), entre otros. ficacin qumica de los componentes se realiz por
El objetivo de este trabajo fue aplicar GC-O a la comparacin de espectros de masa con bibliotecas
diferenciacin original de los AEs comerciales de C. comerciales y por el clculo de ndices de retencin
deliciosa var. Ca obtenidos por expresin en fro y lineales (IRL) en dos columnas capilares de diferen-
por destilacin, determinando paralelamente su te polaridad: poco polar (SE-52, Mega, Legnano,
composicin qumica por GC-MS y GC-FID para Italia) y polar (CW-20M, Mega, Legnano, Italia). La
confirmar resultados previamente obtenidos por cuantificacin de cada componente se realiz de
nuestro grupo de investigacin sobre dicho cultivar acuerdo con Frizzo et al. (2004) empleando n-
(Frizzo et al., 2004).
tetradecano (Sigma Aldrich, USA) como estndar
interno. La repetibilidad del sistema de medida
MATERIALES Y MTODOS mostr una variacin menor al 5% para todos los
componentes reportados en la Tabla 1.
Aceites esenciales
Muestras comerciales de AEs de C. deliciosa var. Anlisis por GC-O
Ca se obtuvieron de la empresa Bio-Citrus (Monte- Para ello se emple un cromatgrafo Shimadzu
negro-RS, Brasil). Las muestras fueron extradas por GC-14B (Tokyo, Japn) acoplado a un puerto olfa-
expresin en fro en la etapa correspondiente de tomtrico ODO-1 (SGE, Ringwood, Australia). La
madurez de la fruta: no madura (AEV), madura interfase fue mantenida a 250C durante todos los
(AEA y sobremadurada (AER). Para propsitos experimentos, empleando nitrgeno como gas auxi-
comparativos tambin se obtuvieron muestras de liar (make-up) (5 mL/min). El detector olfatomtri-
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Minteguiaga et al. Perfil aromtico de Citrus deliciosa por cromatografa gaseosa-olfatometra
pio aceite y el estado de madurez de la fruta que le del N-metilantranilato de metilo, un compuesto
dio origen (Dugo et al., 2010). Todos estos aspectos han nitrogenado presente en muchas variedades de
sido bien definidos en este estudio de manera de mandarina que se ha reportado como compuesto de
generar una fuente de informacin confiable para impacto aromtico en mandarina junto al timol y al
posibles aplicaciones y/o ulteriores investigaciones. -sinensal (Naef y Velluz, 2001; Schipilliti et al., 2010). Los
En la Tabla 1 se muestra la composicin voltil componentes mayoritarios en todos los casos fue-
de los cuatro AEs analizados, mostrando las notas ron los hidrocarburos monoterpnicos (en orden
aromticas que se percibieron en el anlisis por GC- decreciente de concentracin) limoneno, -
O (cuando stas pudieron ser asignadas a un com- terpineno, -pineno, -pineno y -mirceno, lo que
puesto determinado). Se identificaron un total de es comn a muchos cultivares y especies de manda-
40 compuestos, entre los cuales figuran monoter- rina (Verzera et al., 2000; Bonaccorsi et al., 2009; Dugo et al,
penos, sesquiterpenos y compuestos alifticos 2010; Tranchida et al., 2013).
(principalmente aldehdos), adems de la presencia
A B
5 1.0
octanal ?-terpineno
(E)-hidrato de sabineno
linalol
4
decanal
(E)--ocimeno -mirceno (Z)-hidrato de sabineno
AEV AED
3 -citronelal
d-cadineno
neral
(Z)-iso-ascaridol
(Z)-ascaridol a-terpinoleno
carvacrol
a-terpineol
0.5 (E)--cariofileno limoneno 4-terpineol
2 undecanal
-selineno a-terpineno
1 Factor 2 : 30.11%
acetato de geranilo -citronelol
Factor 2: 30.11%
0
perilla aldehdo
1-borneol
0.0 -pineno
N-metilantranilato de metilo (E)-xido de limoneno
-1
nonanal
p-ment-2-en-1-ol timol
-2
AER (E,E)-a-farneseno
a-sinensal
-3 AEA canfeno
-0.5
a-pineno
-4 alcanfor
sabineno
-5 1-octanol
a-tuyeno
-6
-10 -8 -6 -4 -2 0 2 4 6 8 10
-1.0
Figura 1. Representacin de los aceites esenciales de C. deliciosa var. Ca para los diferentes estados de maduracin de la fruta y
el aceite destilado en el sistema de coordenadas formado por los primeros dos componentes principales.
AEV: aceite esencial verde extrado de frutas no maduras; AED: aceite destilado; AER: rojo obtenido de frutas sobremaduradas; AEA: amarillo ex-
trado de frutas maduras.
95 FM (%)
(Z)-hidrato de sabineno neral
limoneno
90
NI
-pineno
decanal
85
-cadineno
NI
p-ment-2-en-1-ol
80
timol
Verde
75
Destilado
70
NI
65
60 IRL CW-20M
900 1100 1300 1500 1700 1900 2100 2300 2500
Figura 2. Aromograma comparativo obtenido por GC-O (FM > 60%) de los aceites esenciales comerciales exprimidos
(Verde) y destilados de C. deliciosa var. Ca.
FM: Frecuencia Modificada; IRLCW20M: ndice de Retencin Lineal calculados en Carbowax 20M como fase estacionaria; NI: no identifi-
cado. Se hicieron 3 repeticiones (n = 3) para cada uno de los integrantes del panel de cinco jueces sensoriales.
Tabla 1. Composicin de los aceites esenciales de C. deliciosa var. Ca para los estados de maduracin de la fruta y descriptores aromticos asocia-
dos a cada uno de los compuestos obtenidos por GC-O.
Tabla 1. Continuacin
Los resultados de composicin del AE industrial ficado dichos compuestos (Lota et al., 2001; Naef y Velluz
de C. deliciosa var. Ca analizado en este trabajo son 2001; Frizzo et al., 2004; Bonaccorsi et al., 2009; Dugo et al.,
muy similares en lo que refiere al nmero de com- 2011). El ascaridol es una sustancia txica a nivel de
ponentes identificados, pro con diferencias en con- la cadena respiratoria (Monzote et al. 2009), siendo el
tenidos con los previamente reportado para los cul- constituyente mayoritario del AE del paico Che-
tivares Ca y Montenegrina (Frizzo et al. 2004), as nopodium ambrosioides (Torres et al., 2003; Monzote et
como para Avana y Tardivo di Ciaculli (Lota et al., al., 2009), pero su ocurrencia en AEs ctricos es limi-
2001; Naef y Velluz 2001; Bonaccorsi et al., 2009; Dugo et al., tada. De hecho, Tranchida et al. (2013) reportaron la
2010), Avana Apireno, de Chios y Willow-leaf presencia al ascaridol y su ismero por primera vez
(Lota et al., 2001). Sin embargo, otros cultivares de la mediante anlisis detallado del AE de naranja dulce
misma especie pueden tener una composicin qu- (C. sinensis) y bergamota (C. bergamia), mientras
mica diferente (Lota et al., 2001), como consecuencia que Delort et al. (2015) hicieron lo propio para el AE
de identificaciones incorrectas o a una mayor in- de la lima dedo C. australasica.
fluencia de las variables ambientales sobre el meta- Tranchida et al. (2011) reportan que los AE ctricos
bolismo secundario de las plantas (Gobbo-Neto y Lo- destilados tienen un perfil aromtico diferencial
pes, 2007). respecto a los AE extrados por expresin, teniendo
El contenido de 4-terpineol, -terpineol e hidra- ms notas aromticas a pino y siendo menos fra-
tos de sabineno es mayor en el AE destilado que en gantes. Dichas afirmaciones fueron corroboradas en
cualquiera de los AEs obtenidos por expresin, he- este estudio como se puede ver en la Tabla 1 y en la
cho que podra deberse a la interconversin de li- Fig. 2, en que se muestra el aromograma para el AE
moneno en esos componentes en las condiciones de fruta inmadura (aceite verde) y destilado (AED).
hmedas y de temperatura que se dan durante la Para el AE de fruta inmadura de expresin fueron
destilacin (Di Giacomo y Di Giacomo, 2002). Debido a determinadas 36 notas aromticas (valores de fre-
ello habra formacin de dichos alcoholes monoter- cuencia modificada de deteccin superior al 40%),
pnicos como artefactos de destilacin, lo que se de las cuales slo 18 pudieron ser asignadas a un
sumara al aporte original de la fuente vegetal y po- componente especfico. En el caso del aceite esen-
dran alterar las caractersticas aromticas (Tranchida cial destilado, se detectaron 33 notas aromticas
et al., 2011). nicamente en el caso del AE Verde se tpicas de las que slo se pudieron identificar 16 con
detectaron los compuestos hidroperxidos (Z)- su compuesto responsable. Lo anterior demuestra la
ascaridol y (Z)-isoascaridol, lo que es muy intere- utilidad de la tcnica GC-O para detectar compues-
sante ya que en los reportes previos de composicin tos aromticos que los detectores instrumentales no
de AE de C. deliciosa no se han detectado ni cuanti- lo hacen por estar a muy bajas concentraciones,
siendo por lo tanto de gran utilidad para el control 2008; Dharmawan et al., 2009; Xiao et al., 2016).
Sin embar-
de calidad y evaluacin de adulteraciones (Tranchida go, en cada uno de los estudios se observan com-
et al. 2011). puestos de impacto aromtico que daran el carc-
En la Tabla 1 se puede observar que mucho de los ter tpico a la variedad ctrica que se est analizan-
compuestos determinados presentaron notas aro- do. Lo anterior realza la importancia de la aplica-
mticas diferenciales respecto a cul haya sido el cin de la olfatometra como herramienta de eva-
mtodo de extraccin empleado para el AE, lo que luacin de calidad y genuinidad de aceites esencia-
se debe a diferencias de concentracin y a las carac- les ctricos.
tersticas propias del mtodo (Tranchida et al. 2011). Sin
embargo, en ambos casos proliferan las notas ctri- CONCLUSIONES
cas, y en el AE Verde como sera de esperar, se
La composicin de los diferentes AEs industria-
aprecian mayor cantidad de notas aromticas vege-
les de C. deliciosa var. Ca es dependiente de las
tales y florales. El AE destilado por su parte, presen-
condiciones de extraccin, as como de la poca de
ta notas de madera y algunas desagradables como
recoleccin de la fruta para su procesamiento. Esta
quemado, goma, plstico y transpiracin.
composicin qumica es cualitativamente muy simi-
Adems, como se puede apreciar en la Fig. 2, los
lar, con slo mnimas diferencias perceptibles a ni-
atributos aromticos en el AE Verde fueron ms
vel cuantitativo. Los AEs destilados, en general,
intensos (mayores valores de frecuencia modificada
aumentan su proporcin en monoterpenos oxige-
de deteccin). Todo lo anterior demuestra sin lugar
nados (-terpineol, 4-terpineol e hidratos de sabi-
a dudas que el AE obtenido por expresin es de me-
neno) que se podran originar como consecuencia
jor cualidad aromtica que el destilado, aspecto que
del proceso (artefactos), mientras que en los AE ex-
lo hace de preferencia para la industria de aromas y
trados se pueden apreciar compuestos que no se
fragancias (Dugo et al. 2011).
encuentran en el AE destilado como es el caso del
En la Fig. 2 se observa que el aromograma obte-
(Z)-ascaridol y (Z)-isoascaridol. Los anlisis de
nido es ampliamente discriminatorio entre los AE
composicin que se presentan en este trabajo son
Verde y destilado. En la comparacin de los perfi-
altamente consistentes con los reportes previamen-
les de aroma de los dos AEs se puede observar que
te publicados para diferentes cultivares de C. deli-
hay compuestos como el -pineno, p-ment-2-en-1-
ciosa en diferentes regiones. Sin embargo, a pesar
ol, decanal y timol que se destacan fuertemente en
de la similitud qumica entre los AEs, grandes dife-
uno de los AEs y no en el otro. Compuestos como el
rencias aromticas fueron encontradas en el estudio
limoneno, neral y (Z)-hidrato de sabineno podran
de olfatometra, lo que demuestra la importancia de
aportar mucho al carcter ctrico-floral del AE de
este tipo de anlisis en productos de consumo hu-
mandarina independientemente del perodo de co-
mano. El AE obtenido por expresin es de mejor
lecta o el mtodo de extraccin empleado. Es de
calidad olfativa (notas aromticas vegetales y flora-
destacar que en este estudio no se percibieron aro-
les, y ausencia de notas desagradables) y ms repre-
mticamente el N-metilantranilato de metilo ni el
sentativo del aroma de la fruta que el AE destilado.
-sinensal a pesar de ser ampliamente asociados
con el tpico aroma a mandarina (Naef y Velluz, 2001).
En el anlisis comparativo con otros estudios de CONFLICTO DE INTERS
aceites esenciales ctricos por GC-O presentes en la Los autores declaran que no existen conflictos de intereses.
literatura, se puede concluir que se percibieron ol-
fativamente los mismos compuestos: hidrocarburos AGRADECIMIENTOS
monoterpenos (-pinene, -pineno, mirceno, limo- Los autores agradecen a la Agencia Nacional de Investiga-
neno), monoterpenos oxigenados (linalool, citrone- cin e Innovacin (ANII, POS_NAC_2013_1_11316), Comisin
lal) y aldehdos alifticos (hexanal, octanal, no- Sectorial de Investigacin Cientfica (CSIC-UdelaR, CSIC-
Programa de Iniciacin a la Investigacin-Modalidad 1. rea
nanal, decanal y dodecanal), los que imprimiran el Tecnolgica. Proyecto n 1004), Uruguay.
carcter ctrico (Hgnadttir y Rousseff, 2003; Qiao et al.,
Author contribution:
Contribution Minteguiaga MA Frizzo CD Dellacassa ES
Concepts or ideas X X X
Design X X X
Literature search X X
Experimental studies X X
Data acquisition X X
Data analysis X X
Statistical analysis X
Manuscript preparation X X X
Manuscript editing X X
Manuscript review X X
Citation Format: Minteguiaga MA, Frizzo CD, Dellacassa ES (2017) Compuestos aromticamente activos del aceite esencial de Citrus deliciosa
Tenore var. Ca detectados por cromatografa gaseosa-espectrometra de masa y cromatografa gaseosa-olfatometra. [Odour-active compounds of
Citrus deliciosa Tenore var. Ca essential oils detected by gas chromatography-mass spectrometry and gas chromatography-olfactometry]. J Pharm
Pharmacogn Res 5(6): 335344.