INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE

SAN MARTN TEXMELUCAN

MATERIA: ANLISIS INSTRUMENTAL

CATEDRTICO: SILVIA ROMERO GARCA

INTEGRANTES DEL EQUIPO:

SILVI MADAI AGUILAR PREZ
BUSTAMANTE NAVARRO JAIME
CINDY AMAIRANI JIMNEZ SIERRA
ABRAHAM ROJAS FLORES
JHONAThAN JAVIER SOLIS LIMN

PRCTICA: ESPECTROSCOPIA DE UV

INGENIERA AMBIENTAL
4 SEMESTRE
 Divisin de Carrera de: Ingeniera Ambiental
Docente: I.Q. Silvia Romero Garca Subtema:
Materia: Anlisis Instrumental No. Prctica: 4
Ttulo de la Prctica: Espectrofotometra

INTRODUCCIN

Espectrofotometra

La Espectrofotometra es una de las tcnicas experimentales ms utilizadas para la deteccin

especfica de molculas. Se caracteriza por su precisin, sensibilidad y su aplicabilidad a
molculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomolculas, etc) y estado de agregacin
(slido, lquido, gas). Los fundamentos fsico-qumicos de la espectrofotometra son relativamente
sencillos.
Las molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla en forma de energa interna. Esto
permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosntesis en
plantas y bacterias. La Mecnica Cuntica nos dice que la luz est compuesta de fotones cada uno
de los cules tiene una energa:
Efotn = hxv= hc/
Donde c es la velocidad de la luz, v es su frecuencia, su longitud de onda y h= 6.6 10-34 Js es la
constante de Planck. Cuando decimos que una sustancia qumica absorbe luz de longitud de onda
l, esto significa que las molculas de esa sustancia absorben fotones de esa longitud de onda.
Cada molcula tiene una serie de estados excitados discretos (o bandas) que dependen de su
estructura electrnica y que la distinguen del resto de molculas. Como consecuencia, el espectro
de absorcin, es decir, la luz absorbida en funcin de la longitud de onda, constituye una
verdadera sea de identidad de cada sustancia o molcula.
En una ampliacin a esta prctica, se puede detectar una mezcla de dos colorantes alimentarios, el
rojo E-124 y un colorante verde midiendo su espectro de ultravioleta/visible. Cuando dos o ms
sustancias aparecen mezcladas en una misma muestra sus espectros de absorcin aparecen
superpuestos.
Los espectros de absorcin se miden mediante un instrumento denominado espectrmetro. Los
instrumentos que vamos a usar en esta prctica constan de una fuente de luz blanca
caracterizada por un espectro de emisin continuo en un intervalo amplio de longitudes de onda
(en nuestro caso 325 nm-900 nm) y de un monocromador que acta como filtro ptico
transmitiendo un haz de luz de longitud de onda fija l e intensidad I0. Este haz de luz penetra en la
cubeta de anlisis donde se encuentra la muestra. Un detector sensible a la luz mide la intensidad
del haz a la salida.

OBJETIVOS
En esta prctica el alumno comprender la absorcin de luz en el ultravioleta cercano (l325-420
nm) y en el visible (l420-900 nm). Cuando una molcula absorbe un fotn en este intervalo
espectral, se excita pasando un electrn de un orbital del estado fundamental a un orbital
excitado de energa superior.
MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS

Cromatografa de capa fina (elaborada con anterioridad)

Acetona
Agua destilada
Piceta
Papel higinico o Klinex
5 Vasos de precipitado de 10 ml
Celdas para espectrmetro de luz UV
Espectrmetro de luz UV
Regla
Tijeras
Lapicero

METODOLOGA:

Encender el espectrmetro de luz UV y esperar 30 min.

- Preparacin de la muestra:
Recortar cuadrados pequeos de 1 cm de la cromatografa, uno por cada tono que se
observa en ella. Se va a cortar un cuadrado de cada uno de los colores que se
encuentran en la cromatografa. (En este caso son 3; verde fuerte, verde claro y uno
ligeramente amarillo.
Colocar los cuadrados en un vaso de precipitado de 10 ml y agregar acetona para que se
extraiga el color de ellos. Cada cuadrado en un vaso diferente.
 Enjuagar y secar cuidadosamente las celdas del espectrmetro antes de su uso.
Tomar dos celdas y agregar acetona para tenerlas como "blanco"
Tomas otras 2 celdas y colocar las muestras con el color extrado de los cuadrados de
papel.
Realizar las lecturas de absorbancia de cada muestra.
Graficar e interpretar resultados.

NOTA IMPORTANTE: Antes de manipular las celdas del espectrmetro, lavar y secar bien las
manos.
Resultados obtenidos:
Absorbancia en muestra color Verde fuerte Absorbancia en muestra color Verde claro
Absorbancia Absorbancia
340 0.037 340 0.040
350 0.043 350 0.041
360 0.052 360 0.044
370 0.061 370 0.050
380 0.070 380 0.055
390 0.087 390 0.065
400 0.097 400 0.075
410 0.115 410 0.088
420 0.112 420 0.089
430 0.108 430 0.091
440 0.112 440 0.093
450 0.102 450 0.086
460 0.083 460 0.072
470 0.089 470 0.075
480 0.065 480 0.054
490 0.032 490 0.029
500 0.019 500 0.016

Absorbancia en muestra color Amarillento

Absorbancia
340 0.045
350 0.041
360 0.036
370 0.033
380 0.027
390 0.027
400 0.026
410 0.026
420 0.025
430 0.025
440 0.023
450 0.023
460 0.020
470 0.019
480 0.017
490 0.016
500 0.014
 GRFICA DE LONGITUD DE ONDA

0.25

A
b 0.2
s
o
0.15
r
b Amarillento
a 0.1 Verde claro
n
c Verde fuerte
i 0.05
a

0
340350360370380390400410420430440450460470480490500
Longitud de onda (nm)

CONLUSIONES:
Durante la realizacin de esta prctica, se observ la absorbancia de una cromatografa de capa
fina realizada con anterioridad por los compaeros del grupo. Se observaron las curvas de
absorbancia de las muestras puestas en el espectrmetro de luz UV visible, trabajando con
rangos de 340-500 nm, aunque la clorofila se trabaja en rangos de 400-500 nm. Se aprendi el
uso y manejo del espectrmetro de luz UV visible con el que contamos en laboratorio.

REFERENCIAS:
https://es.khanacademy.org/science/biology/photosynthesis-in-plants/the-light-dependent-
reactions-of-photosynthesis/a/light-and-photosynthetic-pigments

http://www.espectrometria.com