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PRCTICA: ESPECTROSCOPIA DE UV
INGENIERA AMBIENTAL
4 SEMESTRE
Divisin de Carrera de: Ingeniera Ambiental
Docente: I.Q. Silvia Romero Garca Subtema:
Materia: Anlisis Instrumental No. Prctica: 4
Ttulo de la Prctica: Espectrofotometra
INTRODUCCIN
Espectrofotometra
OBJETIVOS
En esta prctica el alumno comprender la absorcin de luz en el ultravioleta cercano (l325-420
nm) y en el visible (l420-900 nm). Cuando una molcula absorbe un fotn en este intervalo
espectral, se excita pasando un electrn de un orbital del estado fundamental a un orbital
excitado de energa superior.
MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS
METODOLOGA:
- Preparacin de la muestra:
Recortar cuadrados pequeos de 1 cm de la cromatografa, uno por cada tono que se
observa en ella. Se va a cortar un cuadrado de cada uno de los colores que se
encuentran en la cromatografa. (En este caso son 3; verde fuerte, verde claro y uno
ligeramente amarillo.
Colocar los cuadrados en un vaso de precipitado de 10 ml y agregar acetona para que se
extraiga el color de ellos. Cada cuadrado en un vaso diferente.
Enjuagar y secar cuidadosamente las celdas del espectrmetro antes de su uso.
Tomar dos celdas y agregar acetona para tenerlas como "blanco"
Tomas otras 2 celdas y colocar las muestras con el color extrado de los cuadrados de
papel.
Realizar las lecturas de absorbancia de cada muestra.
Graficar e interpretar resultados.
NOTA IMPORTANTE: Antes de manipular las celdas del espectrmetro, lavar y secar bien las
manos.
Resultados obtenidos:
Absorbancia en muestra color Verde fuerte Absorbancia en muestra color Verde claro
Absorbancia Absorbancia
340 0.037 340 0.040
350 0.043 350 0.041
360 0.052 360 0.044
370 0.061 370 0.050
380 0.070 380 0.055
390 0.087 390 0.065
400 0.097 400 0.075
410 0.115 410 0.088
420 0.112 420 0.089
430 0.108 430 0.091
440 0.112 440 0.093
450 0.102 450 0.086
460 0.083 460 0.072
470 0.089 470 0.075
480 0.065 480 0.054
490 0.032 490 0.029
500 0.019 500 0.016
0.25
A
b 0.2
s
o
0.15
r
b Amarillento
a 0.1 Verde claro
n
c Verde fuerte
i 0.05
a
0
340350360370380390400410420430440450460470480490500
Longitud de onda (nm)
CONLUSIONES:
Durante la realizacin de esta prctica, se observ la absorbancia de una cromatografa de capa
fina realizada con anterioridad por los compaeros del grupo. Se observaron las curvas de
absorbancia de las muestras puestas en el espectrmetro de luz UV visible, trabajando con
rangos de 340-500 nm, aunque la clorofila se trabaja en rangos de 400-500 nm. Se aprendi el
uso y manejo del espectrmetro de luz UV visible con el que contamos en laboratorio.
REFERENCIAS:
https://es.khanacademy.org/science/biology/photosynthesis-in-plants/the-light-dependent-
reactions-of-photosynthesis/a/light-and-photosynthetic-pigments
http://www.espectrometria.com