INTRODUCCIN

El tubo digestivo se encuentra inervado tanto por el sistema nervioso autnomo tanto en su
divisin simptica, parasimptica y entrica (plexo mioentrico y plexo submucoso), los cuales
se encargan de regular la contraccin del mismo.
El msculo liso de este rgano, lleva a cabo fluctuaciones rtmicas espontneas conocidas como
Ritmo Elctrico Bsico (BER), las cuales estn mediadas por las clulas intersticiales de Cajal
(Barret, 2010).Estas clulas estrelladas del marcapaso mesenquimatoso, se despolarizan y
producen una contraccin que transmiten a las clulas vecinas. El BER, generalmente no
produce contraccin muscular por s mismo pero los potenciales en punta superpuestos de las
ondas BER si aumentan la tensin muscular llevndolo a contraccin.
Sin embargo, no todos los tramos del intestino poseen el mismo ndice de contractilidad, sino
que esta vara de acuerdo a la funcin de cada una de las porciones del mismo, siendo mayor
para el yeyuno (12 ciclos/min). Esta razn de contractilidad del msculo liso puede ser
modificada gracias a que dicho tejido posee entre sus de receptores: a la variante muscarnica y
a la adrenrgica (Snell, 2006).
Es as, que la administracin de frmacos adrenrgicos y colinrgicos produce un cambio en la
contraccin basal de dicho msculo. Para el caso de los agonistas (tanto adrenrgicos como
colinrgicos) la respuesta es observable al colocar el frmaco por s solo, pero para el caso de
los antagonistas es necesario colocar posteriormente un agonista que haga visible esta
respuesta (Jaramillo, 2013).
Dentro de los frmacos adrenrgicos a utilizar en la prctica encontramos la adrenalina, la cual
es el agonista endgeno (adems de la noradrenalina) de los receptores adrenrgicos, por lo
cual puede producir respuestas sobre receptores , aunque tiene mayor afinidad por receptores
a dosis teraputicas (Golan et al., 2016), sin embargo, para este caso la unin con ambos tipos
de receptores provoca una misma respuesta de relajacin.
Para la relajacin del msculo liso en intestino existen 2 fases, la inicial y la sostenida,
representadas en la figura 1. Tanto PKA como PKG fosforilan a los reguladores de la sealizacin
de protenas G (RGS4), promoviendo la desactivacin de Gq e inhibiendo la formacin de IP3.
Solo PKG puede fosforilar los receptores para IP3 y as inhibir la liberacin de Ca++, fosforilar la
SERCA y aumentar la recaptura de Ca++. Estos mecanismos actan en coordinacin para reducir
la [Ca++] e inhibir la contraccin inicial. Adicionalmente, PKA y PKG fosforilan a RhoA,
bloqueando de esta manera la inhibicin de la fosfatasa de la CLM, por las vas de PKC/CPI-17 y
la Rho cinasa/MYPT1. Ambas cinasas tambin fosforilan directamente al MYPT1 y bloquean su
habilidad de inhibir a la fosfatasa de la CLM. Estos mecanismos actan en conjunto para inhibir
la fosforilacin de la MLC20 y la contraccin.
Figura 1. Relajacin del msculo liso intestinal

Por otro lado, tenemos al isoproterenol una catecolamina sinttica de accin directa que
estimula receptores predominantemente, pero que a dosis altas puede estimular receptores
. El isoproterenol tiene entre sus principales efectos: el aumento de la frecuencia y
contractilidad del corazn, as como el gasto cardaco; disminucin de la resistencia perifrica y
broncodilatacin.
El propanolol por su parte, es un antagonista no selectivo, que, por sus efectos sobre el sistema
cardiovascular, la vasoconstriccin, la broncoconstriccin y el metabolismo de la glucosa; puede
ser utilizado para tratar hipertensin, angina de pecho, infarto en miocardio, migraa, e
hipertiroidismo (Whalen, 2016).
En cuanto a la fenilefrina, esta es un adrenrgico sinttico de accin directa que se une
principalmente a los 1 receptores. Es un vasoconstrictor que eleva la presin arterial, no tiene
efecto sobre el corazn, pero induce bradicardia refleja cuando se administra parenteralmente,
se usa para tratar hipotensin y tpicamente como descongestionante nasal.
En lo que refiere a la fisostigmina, esta es un ster nitrgenado del cido carbmico. Constituye
un sustrato para AChE y forma un producto intermedio carbamoilado relativamente estable con
la enzima, que luego se inactiva de modo reversible (Whalen, 2016), dando como resultado la
potenciacin dela actividad colinrgica. Teraputicamente es usada para aumentar la motilidad
intestinal.
La motilidad intestinal esta mediada por el Sistema Nervioso Parasimptico, cuyo
neurotransmisor endgeno es la acetilcolina, cuando se genera un potencial de accin que
despolariza las clulas lo que permite la apertura de los canales de Ca2+ dependientes de voltaje,
la entrada de Ca2+ permite la movilizacin de las vesculas que contienen acetilcolina y la liberan
en las hendiduras sinpticas, de esta manera el neurotransmisor se puede unir a sus receptores
muscarnicos del tipo 3 que estn acoplados a protenas Gq, que activa a los segundos
mensajeros Diacilglicerol (DAG) e Inositol 3 fosfato (IP3), este ltimo se une a sus receptores
presentes en el retculo sarcoplsmico generando la liberacin de Ca2+, la unin de 4 molculas
de Ca2+ con la Calmodulina forma el complejo Ca2+-CaM que se puede unir a la Cinasa de la
Cadena Ligera de la Miosina (CCLM) activndola y permitiendo la posterior fosforilacin de la
Cadena Ligera de la Miosina (P-CLM) que finalmente permite la contraccin en el msculo liso.
Por otro lado, la atropina es una amina terciaria del alcaloide belladona con gran afinidad por
los receptores muscarnicos, a los que se une de forma competitiva e impide que la acetilcolina
se fije con ellos. Entre sus usos teraputicos est el oftlmico: para medir errores de difraccin,
antiespasmdico, para el tratamiento de bradicardia, antisecretor (secreciones del tracto
respiratorio), antdoto para agonistas colinrgicos (intoxicacin por organofosforados,
sobredosis de anticolinesterasas, e intoxicacin por hongos) (Golan et al., 2016).

OBJETIVO GENERAL
Determinar la presencia de receptores adrenrgicos y muscarnicos en una preparacin de
yeyuno aislado de conejo mediante la medida de la respuesta contrctil del mismo posterior a
la administracin de diversos frmacos.

OBJETIVOS ESPECFICOS
Determinar la presencia de receptores adrenrgicos en una preparacin de yeyuno aislado de
conejo mediante la medida de la respuesta contrctil despus de la administracin de agonistas
y antagonistas adrenrgicos.
Determinar la presencia de receptores colinrgicos en una preparacin de yeyuno aislado de
conejo mediante la medida de la respuesta contrctil despus de la administracin de agonistas
y antagonistas colinrgicos.

FUNDAMENTO

El intestino delgado est modulado por ambas secciones del Sistema Nervioso Autnomo,
especficamente se utiliza yeyuno de conejo porque el conejo es un animal de bioterio de fcil
manejo y herbvoro, esto quiere decir que requiere de mayor alimentacin para obtener la
energa que necesita, al requerir mayor cantidad de alimento tambin requiere de un buen
sistema digestivo, por lo cual su actividad contrctil es mayor en comparacin con otros
animales, y se utiliza justamente el yeyuno porque en el intestino delgado hay un promedio de
12 ciclos/min en la porcin proximal al yeyuno, que disminuye a 8 ciclos/min en la porcin distal
del leon, por lo cual permite detectar de mejor manera la actividad contrctil.

Se requiere que el conejo este en ayuno de 18 horas ya que de no ser as el intestino puede estar
distendido y la actividad contrctil se ver modificada. El sacrificio del animal debe ser por
dislocacin y no con pentobarbital ya que el msculo liso del intestino es excitable y sacrificar al
animal con pentobarbital podra afectar la reaccin del msculo.

Estructuralmente el intestino delgado presenta clulas longitudinales y clulas circulares las

cuales actan en la contraccin y relajacin del msculo, razn por la cual la preparacin de
yeyuno se deba atar por los extremos contrarios con la finalidad de poder detectar la
contraccin de ambos tipos de clulas en el sistema BIOPAC, por otro lado esta preparacin se
deba colocar en solucin Tyrode la cual mimetiza las condiciones en las que se encuentra el
tracto gastrointestinal, con la misma finalidad se deba tener a una temperatura constante de
37C que es la temperatura corporal. Una vez montada la preparacin se deba mantener con
aireacin continua debido a que de esta manera se proporcionaba el ATP necesario para los
procesos de relajacin y contraccin.
Una vez montada la preparacin se dejaba estabilizar la preparacin por 20 minutos, esto debido
a que en el yeyuno hay gran cantidad de canales sensibles a estmulos mecnicos por lo cual se
deja reposar hasta que el yeyuno recupere su actividad normal.

Se requiere un registro basal antes de la administracin de los frmacos ya que con ese registro
se compara las modificaciones generadas por los diversos frmacos administrados.

Inicialmente se administra adrenalina con la finalidad de detectar mediante el registro si hay

presencia de receptores adrenrgicos.

Propanolol + adrenalina se administra para determinar si la actividad esta modulada por los
receptores adrenrgicos , ya que propanolol es un antagonista de los receptores del tipo .

Isoproterenol es un agonista de receptores tipo , el cual se administra para ver si la respuesta

simptica tambin se modula mediante dichos receptores.

Propanolol+ Isoproterenol se administra para determinar si el propanolol bloquea los

receptores.

Fenilefrina es un agonista 1, se administra con la finalidad de discernir si la respuesta mediada

por receptores es generada por los del tipo 1.
Propanolol + fenilefrina se administra para saber si la respuesta obtenida con fenilefrina sola se
debe nicamente a su accin en receptores del tipo 1.

Fisostigmina al ser un anticolinestersico aumenta la vida media de la acetilcolina, la cual si se

encuentra de forma endgena en la preparacin permitir saber si en el intestino hay receptores
colinrgicos.

Fisostigmina + atropina se administra ya que este ltimo frmaco es un antagonista colinrgico

de receptores muscarnicos, es decir, nos permite discernir si la actividad contrctil es mediada
por este tipo de receptores.

Acetilcolina es el agonista endgeno del sistema nervioso parasimptico y se adiciona para ver
si tiene efecto sobre los receptores colinrgicos.

Atropina + acetilcolina nos permite confirmar si la actividad contrctil esta mediada por los
receptores muscarnicos (los cuales se vern bloqueados por la atropina) ya que la acetilcolina
acta a nivel de receptores nicotnicos y muscarnicos.

Todos los frmacos se utilizaron a la misma concentracin, a excepcin de la fenilefrina, este

frmaco se encontraba en mayor concentracin ya que a dosis altas puede actuar sobre
receptores del tipo.

RESULTADOS

DISCUSIN
En la figura 2 se muestra un registro basal en el que solamente observamos la actividad normal
del rgano, es decir las contracciones que se generan por los potenciales en punta superpuestos
de las ondas del Ritmo Elctrico Bsico. Una vez administrada la adrenalina se disminuyen
drsticamente las contracciones que podan observarse, incluso se puede decir que
prcticamente fueron eliminadas. Aunque la adrenalina es un agonista adrenrgico que acorde
a su estructura tiene mayor afinidad por los receptores , por la concentracin a la que se utiliz
y la respuesta observada se infiere que est actuando sobre receptores adrenrgicos tanto
como 1 y 2 provocando la relajacin del yeyuno, pero esto solo se puede comprobar si se
bloquean los receptores .

En la figura 3 se observa que al adicionar el propranolol, un antagonista de los receptores , las

contracciones que se generan son de mayor intensidad, esto indica la presencia de algn
agonista endgeno, ya que el efecto de un antagonista solo se puede notar en presencia de un
agonista. En cambio, en cuanto se adiciona la adrenalina las contracciones disminuyen su fuerza
y frecuencia drsticamente, pero en menor medida comparada que al adicionarse la adrenalina
sola, esto se debe a que al tener el propranolol bloqueados los receptores , la adrenalina solo
puede actuar sobre los receptores libres y sobre los receptores . Esto indica que s hay
receptores en el msculo y que la adrenalina est actuando sobre ellos, lo que revela que la
concentracin utilizada de adrenalina fue lo suficientemente alta como para actuar sobre
receptores y .

En la figura 4 se tiene el registro que se present al adicionarse isoproterenol, un agonista no

selectivo, el cual muestra una disminucin en las contracciones aunque de menor intensidad
que la observada en los casos anteriores. Esta situacin nos permite hacer la inferencia que la
concentracin de frmaco utilizado le permite evidenciar su selectividad hacia los receptores
y que est actuando solamente sobre estos, sin embargo, no se puede asegurar dicha
informacin hasta que se bloqueen los receptores y ver si la respuesta es de la misma
intensidad o menor, situacin que se demuestra en la figura 5, donde lo primero que se adiciona
es un antagonista de los receptores , propranolol, para bloquearlos y al adicionarse el
isoproterenol las contracciones se vieron ligeramente disminuidas en fuerza y frecuencia, por lo
que podemos decir que el isoproterenol a la concentracin utilizada solo est actuando sobre
receptores , que en este caso seran solamente los que el propranolol no alcanz a bloquear.

En la figura 6 se presenta el registro de la actividad del yeyuno aislado de conejo cuando se

adicion la fenilefrina, un agonista 1 selectivo, lo que provoc una brusca disminucin en la
fuerza y frecuencia de las contracciones del msculo. Debido a la selectividad de este frmaco,
se esperara que la disminucin de las contracciones fuera muy ligera y no fue as, este suceso
se aclar con el siguiente procedimiento. En la figura 7 se muestra el registro obtenido al
adicionar primero el propranolol que bloque los canales y en cuanto se agreg la fenilefrina
se disminuy la fuerza y frecuencia de las contracciones del msculo pero en menor intensidad
que al adicionar la fenilefrina sola, por lo que se puede decir que la fenilefrina a la concentracin
que se ocup pudo actuar no solo sobre receptores 1, sino tambin sobre receptores , aunque
cabe destacar que s afecta mayoritariamente a los receptores 1.

La figura 8 muestra el registro obtenido al adicionar fisostigmina, un anticolinestersico, que al

inhibir a la AChE provocar el aumento de la vida media de la ACh endgena y as aumenta la
probabilidad de la interaccin de sta con los receptores colinrgicos existentes en el yeyuno,
esto se ve reflejado en un incremento en la fuerza y frecuencia de las contracciones del msculo.
En cambio, en la figura 9 se observa que al agregar primero la fisostigmina se aumentan las
contracciones, pero en cuanto se agrega la atropina hay una drstica disminucin de la fuerza y
frecuencia de las contracciones, prcticamente eliminndolas, esto se debe a que la atropina
antagoniza los receptores muscarnicos y, aunque la ACh tenga una vida media mayor, no le va
a permitir la interaccin con dichos receptores, por lo que se puede afirmar que la accin de la
ACh est mediada por receptores muscarnicos y no nicotnicos.

En la figura 10 se tiene el registro obtenido al adicionar ACh, con el cual se observa un aumento
en la fuerza y frecuencia de las contracciones del msculo, esto se debe a que en el basal las
contracciones se dan por la ACh endgena, pero si se incrementa con concentracin de sta al
adicionrsela como frmaco, entonces tambin aumentar la probabilidad de que esta
interaccione con los receptores muscarnicos, permitiendo as que las contracciones sean de
mayor intensidad y frecuencia.

Finalmente, en la figura 11 se muestra el registro de la actividad de yeyuno aislado de conejo al

adicionar atropina, con la cual se disminuy la intensidad de las contracciones al estar
impidiendo la interaccin de la ACh endgena con los receptores muscarnicos, pero, en cuanto
se agreg la ACh se observ un aumento en la intensidad y frecuencia de las contracciones, por
lo que se demuestra que la atropina es un antagonista competitivo, ya que al aumentar la dosis
de ACh logr desplazar a la atropina, permitindose as la interaccin de la ACh con los
receptores muscarnicos para generar las contracciones.

CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFA

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