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I~Investigacin
H. V. M A L L I N G
Biolog3' Divisin, Oak Ridge National Laboralor), Roble l?idge, Tenn. ( U . S . d . )
(Recibido j u n e 2ist, I000)
Resumen
UCTION INTROI)
Abbrevi~ciones: AT, adenina timina . I,;MS, ethvl mcthanesulfonatc . GC, guanina citosina. Ja, la hidroxilamina . HMC,
hy~troxymethylcytos{ne. Fic-f7s, m e t h o x y 6-cloro - (3 - 0 - 2 - chlorethyl etlico] - aminopropylamino)acridina
dihidrocloruro. NA, cido nitroso. SP, s p o n t a n e o s frecuencia de reversin de la u e n t r a t e d serie.
Menos mutgenos especficos a nivel molecular b y los medios de pruebas para determinadas
revertibility. Las pruebas para la induccin de retorno en m u t a n t e s resultante de gentica
conocida altera-ciones es un mtodo mucho ms sencillo para caracterizar los efectos genticos
de mutgenos que una mutacin conocida y avance - tcnica en Neurospora 6,19. La
caracterizacin es limitada b y la matriz de alteraciones genticas en cada m u t a n t e integrado
por un probador. Sin embargo, b y seleccionar m u t a n t e s volver b y alteraciones genticas
ms comunes, es posible obtener una primera aproximacin del espectro de alteraciones
genticas producidas b y un mutgeno .
Materiales y Mtodos
(A) cepas
El m u t a n t e s con el prefijo 2-17 fueron inducidos b y cido nitroso
en Neurospora cepa wild-type 74 A (DE SERRES, BROCKMAN, Barnett y KOLMARK, en prepa-
cin). Mutante n 5-4-1 es de origen espontneo (BROCKMAN, indito). La mu - tant s han
sido aislados b y el mtodo directo 3.
(D) N Trealmenls
T h e c o n i d i a fueron de s u s p e n d e d a 0,05 m o d i s u m a c e t a t e intermedias en p h 4-
5. Uno v o l u m e de freshl y p r e p a r e d o.o2 m o d i s m u n i t r a t e sol n fue un d a d e d a 3 v o l u
m e s de conidias . Final t e c o n c e n t r a t i o n fue de 0.oo 5 M NaNO,,, a n d e l t r a t e m e n t fue q u
e n c h e d a d e s c r i b e d a b a s e a 4V o mi n a f e r t a e s t a r t t h e t r e t a m i e n t o .
(E) E M S TreaOnent
C o n i d i a fueron de s u s p e n d e d
T h e en un 0.067 M P h o s p h a t e a t buffer p H 7.0. E l
Tretamen Un d a d i n g e n s u g B r i n g t h final e c o n c e n t r a t i o n e s u p
t Fue s t a r t e d B y h EMS A a
La lluvia
O . I M ; t h e T r e t a m e n t Fue Q u e n c h e d 30o ms tarde .
(G) H UN Treatmenl
Antes t h e h a t r e t a m e n t , t h e c o n i d i a fueron de s u s p e n d e d a 3 M de NaCl a n d t h
e n f u r t h e r d i l u t e d 5 t i m e s t h e h a r e a c c i o n e s m i x t u r e de Strack, FREESE Y FREESE 17, g
i v i n g una ltima H A c o n c e n t r a t i s N de i m . 5 mi n antes del t h e t r e a t m e n t fue saciada , t
h e c o n i d i a c fueron e n t r i f u g e d a n d a d e c a n t e d a n d a t h e q u e n c h i n g t i m e (es
decir, 3oo lluvia un f t e r t h e s t a r t t h e t r e a t m e n t ) t h e c o n i d i a se r e s U s p e n d e d a 3 M
de NaCl. Thi s w a s h i n g p r o c e d u r e se r e p e a t e d dos veces a n d t h e n t e c o n i d i a fueron de
s u s p e n d e d a t e s t h sal o l u c i o n e s de f r i e s ' m i n i m a l m e d i u m t a d j u s t e d a p H 8.
NA, EMS, o FIC-I7O tratamiento, los conidios fueron sembradas a una densidad de OIE conidios
por ml y 2 10 5 conidios por ml, cada enfermo un volumen total de IOO ml. Para la calificacin de
la revertants despus del tratamiento ha, la densidad de las conidias fue 2 5 baja por ml en un
volumen total de 500 ml.
Resultados y Discusin
Supresores (a)
Identificacin de las alteraciones genticas en mutantes individuales determinando la
especificidad en la induccin de retorno despus del tratamiento con diferentes agentes estar
distorsionada por la ocurrencia de mutaciones supresor junto con reversa muta- ciones. A partir del
20 de diferentes Revertants mutantes inducidas en los loci ad-3 (refs. 5, I I , y Barnett, inditos) han
sido analizados para la ocurrencia de supresores extragnica, y ninguno fue encontrado. Nosotros m
a y, por lo tanto, asumir que los supresores de que ocurran fuera de la ad-3A o AD-3B locus son
raros o que no se produzcan.
Fic-ito es una acridina monofunctional gas mostaza; adelante mutaciones inducidas por ICR-
I7O en Neurospora crassa parecen ser principalmente a base de inserciones o eliminaciones de
par 4. Por lo tanto, es probable suponer que los mutantes que vuelve despus del tratamiento con
ICR-
Res. de mutacin, 3 (I966) 470-476
474 H . V . MALLING
T A B L E Yo
T H E S U R V I V A LP E R C E N T A G EA N D T H E R E V E R S I O N E S FREQUENCIES OF THE TESTE
R SET AFTER TRI~T-
El MENT CON I C I - I 7 0
, NA,EMSyH
El porcentaje de
Mutant supervivencia Retorno por ~ o s supervivientes
N H
No. UN E M S1CR - I7O H UN SP N UN E M SICR-zTO UN
2 - 17 - 8 75 77 86 54 Yo Oa Oh 5 Oh
2 - 7 - 2 de 3 8o 95 61 62 O. 3 Oh Oh Oh Oh
5-4-1 88 77 68 5 0.2 Oh 5 1938 Oh
2 - 17 - 7 5 69 7 90 4 Oh 5 749 Oh
2 - 17 - 61 8o 68 62 60 5 183 198 Oh 45
2 - 17 - 155 93 99 72 62 Yo 79 377 8 20
21-7-1-8 61 71 61 64 3 182 IO 91 Oh
2-1-7126 82 95 9 68 4 136 77 146 8
Un Omentasthereversionesfrequencynotsignificantelydifferentfromt hespont
a n e o s m u t a c i o n e s f r e q u e n c y t t h e 5 % c o n f i d e n c level .
100 -
80 -
Yo 60 - ~ o
~ 40-
\
>
N~
~ 20 -
-----R
~ 10 ~
0 2 4 6
Horas de tratamiento Horas de tratamiento
Pliegue de t h
Fig . I. T h e I n c r e a s e en eN U m b e r r e v e r s i o n e s ( M ) R e s c o d A f t e r H a t e a r t m e n t o v e r t h e
NUmbe Mutacion
r De S p o n t a n e o s e s (Mo) P l o t e d A G a i n s t T h e T i m e de H UN T r e t a m i e n t o .
Fig . 2. T h e S u r v i v a l p e r c e n t a g e P l o t e d A G a i n s t T h e t i m e De H A t r e t a m i e n t o .
Res. de mutacin, 3 (1966) 470476
En la Mutagnesis qumica ]~ . C r a n s a 475
60-
/
50-
Oh
40-
0").
M 30-
_O 20-
/
]0-
15 35 4~ ~"
Tratamiento HOURSOF SQUAREOF(t)
Fig . 3. K i n e t i c a s t h e i n d u c c i o n e s t a r e v e r s i o n e s b y H a i n t h e b a s e - p i r s u b s t i t u c i o n e s m u t a
n t 2- x 7-15.5. T h e f r e q u e n c y t h e r e v e r s i o n e s p e r lO 8 s u r v i v e r s t p l o t e d a g a i n s t t h e s p u r e t h e t
imehatretamiento.
D i c i o n e s d e s c r i b e d h e r e g v e 600 m u t a n t e s P e r io ~ s u r v i v i n g e n c i d i a . M u t a c i o n e s s o b
tened
En t h i s t e s t S y s t e m Renow En t h e P r o c e s s a b
einganalyzedwith Regard Togentospe
(nica o r m u l t i c u l o s m u t a c i o n e s ) , Allica c o m p l e m e n t a c i n
(Percentagecomplement -
I n g M u t a n t e s Como Bien Como T h e Types Complementac
i n P a r t e n s ) , una especfica n d r e v e r t i -
Bility After Tretament With NA, EMS, ICI-I7o O
Other A g e n t o s A n d Se b e Reported
Elsewhere.
Acuse de recibo
I W h i s t o c k n o w e l d e g r a t e f u l l y D R . F. J. DE SERRES' v a l u a b l e s u g e s t i o n e s s a n d
c o o p e r a c i o n e s , t h e a i d a d r . MARVIN I{ASTENBAUM en t h e s t a d s t i c a l a n a l s i s , a n d
DR. H .J . CREECH un n d C o -w o r k e r s t h e Institute Forcancer
research,Philadelphia,
F o r t h e r i g i f t De ICI-I7o. This Researchwas
Sponsoredijontlyby The National Insti-
Tutes De h e a l t h A n d B y t h e U . S . Atomic Energy Comisi
onesunder Contract With The
Uniones C a r b i d e Corporaciones.
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