Tincin tricrmica de Masson

Las tinciones tricrmica son usadas frecuentemente para diferenciar entre colgeno y musculo liso
en tumores e identificar incrementos en tejidos colagenosos en enfermedades como cirrosis
heptica.
Tincin tricrmica ms simple ya que ocupa solo dos colorantes aninicos despus de la tincin
nucleica con hematoxilina frrica. Se pueden hacer variacin utilizando distintos colorantes o
soluciones con distintos heteropolicidos.

Fundamentos

El rol jugado por el cido fosfomolbdico en la tincin selectiva de fibras del tejido conectivo, fue
investigado probando la hiptesis: el cido se une al tejido y de este modo conserva la capacidad
de unir colorantes, por la formacin de enlaces salinos con sus grupos bsicos (del cido).
La reaccin del azul de molibdeno demuestra que el cido fosfomolbdico se une a muchas
estructuras las cuales son teidas selectivamente por mtodos tricromicos o por la combinacin
de tincin acido-base del cido fosfomolbdico, particularmente tejido conectivo.

As las propiedades adquiridas de la tincin por las fibras del tejido conectivo, despus del
tratamiento con cido fosfomolbdico estn probablemente debido a la presencia de este acido
sobre las fibras. El cido fosfomolbdico no fue desplazado por el colorante, como sugiri Zeiger,
desde una reaccin de azul de molibdeno de intensidad regular podra ser aun obtenida despus
de la tincin con verde claro.
A cualquier velocidad el cido fosfomolbdico es intercambiado, probablemente por un anin.
Esto, obviamente, no ocurre desde un colorante aninico puro que no tie fibra del tejido
conectivo despus del cido fosfomolbdico.
Se concluye que el cido fosfomolbdico es retenido por el tejido y por enlaces moleculares de
colorantes. Hay varias evidencias de que el enlace entre el cido fosfomolbdico y el colorante es
de naturaleza salina:

1-. La presencia de grupos cationicos en el colorante era indispensable para teir despus del
cido fosfomolbdico.
2-. Grupos bsicos fuertes producen tincin mas intensa
3-. Con colorantes dbilmente bsicos bajando el pH, y por lo tanto aumentando la disociacin de
grupos bsicos, tambin aumenta la intensidad de colorantes.
4-. Otros enlaces tales como valencias residuales o puentes de hidrogeno no juegan,
probablemente, un rol esencial ya que un numero de colorantes muestra distribucin asimtrica
de cargas elctricas y H (labiles) no fueron, o slo escasamente, establecidos despus del
tratamiento con cido fosfomolbdico. Se concluy que el colorante y el acido fosfomolbdico
forman una sal en la cual el colorante es el cation.
El hecho de que las fibras de tejido conectivo se unen a sustancias con propiedades acidas (cido
fosfomolbdico o colorantes con grupo cido) sugiere que estas fibras contienen grupos bsicos,
los que forman sales con el cido fosfomolbdico. As el cido fosfomolbdico polivalente aparece
para formar un puente entre los grupos bsicos del sustrato y los grupos bsicos del colorante. En
otras palabras la adicin del cido fosfomolbdico en tejido conectivo cambia su acidofilia por
basofilia.

El cido fosfomolbdico no solamente produce una tincin intensa de las fibras de tejido conectivo
por colorantes de grupos bsicos (colorantes bsicos o anfotricos), pero tambin reduce la
tincin del citoplasma, as produce una tincin especfica de fibras del tejido conectivo.
La explicacin de este segundo efecto se encuentra en el hecho de que en el citoplasma, el cual es
conocido por teirse con colorantes de grupos cidos (colorante acido o anfotrico), se producen
algunos enlaces de cido fosfomolbdico, aunque menos que en el tejido conectivo.
Las cantidades pequeas de cido fosfomolbdico en el citoplasma previene la salida del colorante
acido, y ocurre para tinciones escasas obtenidas con colorantes anfoteritos y para tinciones
moderadas obtenidas con colorantes cidos.

Los procedimientos tricrmicos son nombrados as porque se usan tres tipos de tinciones, que
pueden incluir o no la tincin nuclear.
Las secciones se tien primero con un colorante cido como el escarlata biebrich, todos los
elementos acidofilicos del tejido como citoplasma, msculo y colgeno se unirn a los colorantes
cidos.
Las secciones despus son tratadas con acido fosfotngstico y/o cido fosfomolbdico.
Dado que el citoplasma es mucho menos permeable que el colgeno, el cido fosfotngstico y
cido fosfomolbdico, causan que el colorante escarlata biebrich difunda hacia fuera del colgeno
pero no del citoplasma.
Acido fosfotngstico y/o cido fosfomolbdico tienen numerosos grupos acdicos que muy
probablemente actuaran como un enlace entre el colgeno descolorado y el azul de anilina, el
colorante de colgeno.
Probablemente el pH de la solucin cida fosfotngstico/cido fosfomolbdico tambin
incremente la coloracin selectiva del colgeno y contribuye a la difusin o remocin del escarlata
de biebrich.

Reactivos
*Hematoxilina frrica de Weigert
- Solucin A: Hematoxilina + Alcohol 95%
- Solucin B: Cloruro frrico + Agua destilada + Acido clorhdrico
*Solucin de Escarlata de Biebrich/Fucsina cida
- Escarlata de Biebrich + Fucsina cida + Acido actico
*Solucin Acido Fosfotngstico/Fosfomolbdico
- Acido fosfotngstico + Acido fosfomolbdico + Agua destilada
*Solucin Azul de anilina o Azul de toluidina
- Azul de anilina + Agua destilada

Fijador: Lquido de Bouin

Reaccin
a) Hematoxilina frrica de Weigert (I)
*Colorante aninico
*Acta como mordiente
- Aplicacin de alcohol acido para la diferenciacin de la tincin nuclear.

b) Solucin de Biebrich scarlett-Fucsina cida (II)

*Colorante aninico

c) Solucin cido fosfomolbdico-fosfotngstico (PMA-PTA)

*Acta como mordiente y diferenciador
*Solucin muy aninica y de molculas grandes
*Saca el exceso de colorante y se queda unido al tejido conectivo favoreciendo que el azul de
anilina se una por medio del cido.

d) Azul de anilina o azul de metileno (III)

*Colorante catinico

e) Solucin de cido actico

Resultados
*Ncleos = Negros
*Citoplasma, queratina y fibras musculares = Rosa, rojas y caf
*Fibras colgenas = Azules-Verdes