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Revista Brasileira de Cincias Farmacuticas

Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences


vol. 40, n. 3, jul./set., 2004

Reduo, refinamento e substituio do uso de animais em estudos


toxicolgicos: uma abordagem atual

Karen Cristine Ceroni Cazarin1,3*, Cristiana Leslie Corra1,2, Flvio Ailton Duque Zambrone1,3

PLANITOX Planejamento, Assessoria e Informao em Toxicologia, 2Faculdade de Cincias Farmacuticas,


1

Centro de Cincias da Vida, Pontifcia Universidade Catlica de Campinas, 3Departamento de Medicina Preventiva
e Social, Faculdade de Cincias Mdicas, Universidade Estadual de Campinas

Unitermos:
A avaliao da toxicidade de uma substncia realizada com o Programa 3Rs
objetivo de predizer os efeitos nocivos que a mesma poder Animais de
desencadear quando da exposio humana pelas diversas vias. experimentao
Para cumprir este propsito, o modelo animal o mais utilizado Toxicologia - estudos

nos estudos toxicolgicos e requerido nos processos investigativos.


Entretanto, a utilizao de animais na pesquisa tem sido razo de
diversas discusses em funo do grande nmero necessrio e do
sofrimento causado, principalmente em relao aos estudos de
toxicidade aguda. Existe uma tendncia mundial para reavaliar a
utilizao de animais nos experimentos, concretizada a partir de
um programa denominado de 3Rs (Reduction, Refinement,
Replacement), que objetiva alm de diminuir o nmero de animais,
minimizar a dor e o desconforto e buscar alternativas para a
substituio dos testes in vivo. Diversas metodologias alternativas
j foram implantadas, sendo este um processo complexo que
abrange desde o seu desenvolvimento at sua aceitao regulatria
e adoo por diversas organizaes. Sendo assim, o presente
trabalho apresenta abordagem atualizada do Programa 3Rs, com
*Correspondncia: nfase na sua evoluo histrica e nos processos de implantao e
K. C. C. Cazarin
validao de mtodos alternativos, principalmente aplicados no
Faculdade de Cincias Mdicas -
UNICAMP contexto da avaliao da toxicidade, enfatizando sua importncia
Depto. de Medicina Preventiva e utilidade frente tendncia global de harmonizao.
Rua Jos Inicncio de Campos, 153, 3
andar, Cambu
13024-230 - Campinas - SP, Brasil
E-mail: karen.cazarin@planitox.com.br.

INTRODUO (Koeter, 1993; Stokes, 2002; Meyer, 2003). Por esta razo,
tais estudos so sempre requeridos nos processos
Os estudos toxicolgicos apresentam como principal investigativos, desde o desenvolvimento de produtos at
objetivo a predio dos possveis efeitos adversos, que seu registro e comercializao, sendo os modelos animais
podem se manifestar quando da exposio humana de- os mais utilizados para este propsito (Ecobichon, 1997;
terminada substncia qumica, seja ela um medicamento, Stokes, 2002; Meyer, 2003).
um praguicida, um agente qumico industrial ou outros Em geral, o uso de animais em procedimentos cien-
290 K. C. C. Cazarin, C. L. Corra, F. A. D. Zambrone

tficos voltado para o diagnstico (<5%), para a educa- Sendo assim, o propsito do presente artigo foi rea-
o, principalmente nas Universidades, incluindo a disse- lizar abordagem atualizada sobre o Programa 3Rs, com
cao animal (25%), para o desenvolvimento e para os nfase na sua evoluo histrica e nos processos de im-
testes de toxicidade de medicamentos e de produtos bio- plantao e validao de mtodos alternativos, principal-
lgicos (30 a 40%) e de novos produtos (10%) (Humane..., mente aplicados no contexto da avaliao da toxicidade.
2003). Investigao realizada pela Research Defence
Society (RDS) demonstrou que no ano de 2002 mais de 2 PROGRAMA 3Rs: CONCEITOS E OBJETIVOS
milhes de animais foram utilizados em procedimentos
cientficos na Gr Bretanha, sendo os roedores as espcies O programa 3Rs assim denominado em funo das
de maior relevncia (Tabela I) (Matfield, 2003). Vale res- iniciais, em ingls, de seus principais objetivos: 1) reduo
saltar que a estimativa do nmero de animais utilizados em (Reduction), 2) refinamento (Refinement) e 3) substitui-
pesquisas anualmente altamente especulativa. A ltima o (Replacement), que de forma resumida significam a
estimativa oficial dos Estados Unidos, realizada h mais de reduo do nmero de animais utilizados na pesquisa, a
15 anos, revelou a utilizao de cerca de 17 a 22 milhes melhora na conduo dos estudos, no sentido de reduzir o
de animais (Stephens et al., 2001). sofrimento ao mnimo possvel, e a busca de mtodos al-
ternativos que, por fim, substituam os testes in vivo. Os
TABELA I - Porcentagem de animais utilizados na Gr- dois primeiros representam os objetivos a curto-prazo e o
Bretanha, em procedimentos cientficos, no ano de 2002 ltimo, a meta mxima a ser alcanada (Dipasquale;
Hayes, 2001; Three..., 2000).
Espcies % No sentido de concretizar tais objetivos, diversas
Ratos e camundongos 84 aes e metas so propostas, algumas das quais descritas
Peixes, anfbios, rpteis e pssaros 12 na tabela II, e que muito tm contribudo para a aceitao
Ovelhas, vacas, porcos e outros animais 2,3 e a evoluo desta filosofia na rea experimental.
de grande porte Vale ressaltar que mtodos alternativos in vitro
Pequenos mamferos e outros roedores 1,5 validados, genunos e aceitos com propsito regulatrio
(coelho e furo) para repor testes conduzidos com animais, ainda so con-
Ces e gatos (espcies de laboratrio) 0,3 siderados muito mais uma meta do que realidade, embora
Macacos 0,15 tais conceitos j sejam amplamente incorporados por pes-
quisadores, por organizaes no governamentais e por
Fonte: Research Defence Society (RDS) algumas agncias regulamentadoras.
Desta forma, o propsito principal do programa 3Rs
Entretanto, o uso disseminado de animais na pesquisa servir como um conceito unificador, um desafio e uma
tem sido motivo de diversas discusses, principalmente de oportunidade para a obteno de benefcios cientficos,
carter tico, em funo do grande nmero de animais econmicos e humanitrios (Balls, 2000).
requerido e do sofrimento causado durante alguns tipos de
experimento (White, 2001; Meyer, 2003). Por esta razo, EVOLUO HISTRICA
a reavaliao da utilizao de animais nos experimentos
tendncia mundial, concretizada a partir da fundao de O desenvolvimento e a utilizao de metodologias
diversas Instituies, que objetivam desenvolver e validar alternativas aos estudos realizados com animais de labo-
novos mtodos, e da implementao regulatria de testes ratrio meta de longa data dentro da comunidade cien-
alternativos em diversos pases, a fim de legalizar e harmo- tfica. Data de 1876, na Gr-Bretanha, a primeira legisla-
nizar o uso dos mesmos (Schechtman, 2002; Russel; o criada especificamente para regulamentar a utilizao
Burch, 1992; Balls, 1994). de animais em experimentos (Stephens et al., 2001).
Todas essas aes tiveram incio a partir do Porm, o marco inicial do programa de reduo,
surgimento de um programa internacionalmente reconhe- refinamento e substituio (3Rs) foi em 1954, num proje-
cido denominado de 3Rs (Reduction, Refinement, to iniciado pela Federao das Universidades para o Bem-
Replacement), que objetiva, alm de diminuir o nmero de estar Animal (The Universities Federation for Animal
animais utilizados na pesquisa, minimizar a dor e o descon- Welfare UFAWs), que resultou na publicao dos Prin-
forto e buscar alternativas para a substituio dos testes cpios das Tcnicas Experimentais Humanas (The
in vivo (Schechtman, 2002; Russel; Burch, 1992; Balls, principles of Humane Experimental Technique) em
1994; Flecknell,1994). 1959, por Willian Russell e Rex Burch, considerados os
Reduo, refinamento e substituio do uso de animais em estudos toxicolgicos 291

TABELA II -Aes e metas fundamentais para o cumprimento dos objetivos do Programa 3 Rs

REDUO REFINAMENTO SUBSTITUIO


desenvolver novos protocolos utilizar novas metodologias a desenvolver mtodos alternativos
com a utilizao de menor nmero partir do avano tcnico e cientfico experimentao animal, tais como
de animais por experimento; e da investigao direcionada para os ensaios in vitro, inclusive com
endpoints humanos (efeitos de utilizao de clulas humanas.
evitar a replicao dos estudos maior relevncia). Por esta razo,
conduzidos in vivo; elementos qualitativos devem ser
empregados, alm da preocupao
evitar a conduo de estudos com a qualidade de vida do animal
utilizando modelos animais que durante os procedimentos e a
tm demonstrado irrelevncia na necessidade de reduzir o risco e o grau
extrapolao dos efeitos para a de sofrimento dos mesmos.
espcie humana;

desenvolver metodologias ex vivo


e in vitro, com o intuito de utiliz-las
como triagem (screening) para a
identificao do efeito de relevncia
e para posterior investigao;

aperfeioar a qualidade tcnica


dos ensaios;

obter o maior nmero possvel de


informaes relevantes em um
pequeno nmero de animais.
Fonte: Balls, 1994; Flecknell, 1994; Festing, 1994; Three..., 2000; Schlede et al. [entre 1998 e 2003].

iniciadores desta filosofia (Russel; Burch, 1992; Os principais acontecimentos histricos envolvendo
Executive..., 2000; Stephens et al., 2001; Zurlo, 2002; o programa 3Rs e a introduo de mtodos alternativos
Spielmann, 2002). podem ser observados na Tabela III (Russel; Burch, 1992;
Pouca ateno foi dispensada concepo dos 3Rs Executive, 2000; Stephens et al., 2001; Zurlo, 2002;
na dcada de 60. Alguns acontecimentos nesta rea ocor- Alternative, [entre 1997 e 2003]).
reram nos anos 70, porm, somente a partir de 1980 foi
observada a introduo de leis e convenes nacionais e ESTUDOS TOXICOLGICOS FRENTE AO
internacionais baseadas no programa 3Rs. No final da PROGRAMA 3Rs
dcada de 1980, novas leis e protocolos foram criados e
adotados em diversos pases, no somente reconhecendo A avaliao da toxicidade visa caracterizar os efei-
a concepo de Russell e Burch, mas tambm identifican- tos adversos inerentes a determinado agente qumico
do as obrigaes legais e morais envolvidas na busca de (Corra et al., 2003). Sendo assim, os testes toxicolgicos
reduzir, refinar e substituir, sempre que possvel, os proce- normalmente requeridos com propsito regulatrio inclu-
dimentos envolvendo os animais de experimentao em: toxicidade aguda, toxicidade sub-crnica, toxicidade
(Executive..., 2000). crnica, mutagnese, carcinognese, reproduo e
Todo este movimento em prol do programa 3Rs re- teratognese, toxicocintica, efeitos locais sobre a pele e
sultou na fundao de diversas instituies, no oferecimen- olhos, sensibilizao cutnea e ecotoxicidade (Barros,
to de encontros/seminrios e no crescente estmulo de Davino, 2003; Spielmann, 2002).
publicaes cientficas, a fim de promover o desenvolvi- Um dos ensaios toxicolgicos mais duramente criti-
mento, a validao e a discusso de alternativas para a cado e discutido frente ao programa 3Rs, em virtude do
substituio das tcnicas usuais. grande nmero de animais requerido e do sofrimento cau-
292 K. C. C. Cazarin, C. L. Corra, F. A. D. Zambrone

TABELA III - Descrio de alguns dos principais acontecimentos histricos relacionados ao programa 3Rs e introduo
de mtodos alternativos

DATA ACONTECIMENTO
1954 A Federao das Universidades para o Bem-estar Animal (The Universities Federation for Animal Welfare-UFAW)
constituiu um comit para estudar as tcnicas humanas utilizadas nos experimentos com animais de laboratrio.
1959 O estudo de Russell e Burch publicado, contendo uma discusso detalhada do proposto programa 3Rs.
1963 A primeira edio do The Guide for the Care and the Use of Laboratory Animals, escrito pela Academia Nacional de
Cincias, publicada pelo Instituto Nacional de Sade.
1969 O fundo de substituio de animais em experimentos mdicos (The Fund of the Replacement of Animals in Medical
Experiments FRAME) formado no Reino Unido para promover, junto comunidade cientfica, a idia de mtodos
alternativos.
1970 O FRAME publicou um documento esboando algumas metodologias de substituio, tais como modelos
computadorizados, estudos em culturas de clulas e uso de organismos inferiores.
1971 Bruce Ames, da Universidade da Califrnia em Berkeley, introduziu um teste in vitro para mutagnese usando a
Salmonella typhimurium.
1975 A Academia Nacional de Cincias dos EUA (The U.S. National Academy of Sciences) presidiu o maior encontro
cientfico sobre os testes alternativos nos Estados Unidos.
1979 Foi oficializado o primeiro fundo governamental para os testes alternativos: o governo da Sucia distribuiu $90.000
para investimento.
1980 Surge primeira campanha contra os testes de irritao ocular conduzidos em coelhos.
1983 O FDA dos Estados Unidos (The Food and Drug Administration) anunciou formalmente que no iria mais requerer
o teste clssico de toxicidade aguda (DL50).
1986 Nova legislao sobre animais (procedimentos cientficos) do Reino Unido (UKs Animals Act) substituiu a lei do ano
de 1876. Conselho de Ministros da Comunidade Europia legaliza a diretiva EC 86/609, requerendo que os pases
membros desenvolvam legislao que promova os 3Rs. A OECD* anunciou mudanas nos protocolos de toxicidade
aguda oral e drmica e iniciou discusso sobre os mtodos alternativos.
1991 A OECD adotou o teste de doses fixadas (Fixed Dose Method) como uma alternativa ao teste de DL50 clssico;Foi
fundado o Centro Europeu de Validao de Mtodos Alternativos (European Center for the Validation of
Alternative Methods ECVAM).
1993 1o Congresso Mundial sobre os Testes Alternativos e o Uso de Animais nas Cincias da Vida: Educao, Pesquisa
e Testes (The first World Congress on Alternatives and Animal Use in the Life Sciences: Education, Research and
Testing), em Baltimore, EUA.
1996 2o Congresso Mundial sobre os Testes Alternativos e o Uso de Animais nas Cincias da Vida: Educao, Pesquisa
e Testes (The first World Congress on Alternatives and Animal Use in the Life Sciences: Education, Research and
Testing), em Utrecht, Holanda.
1997 O governo federal dos EUA funda o Comit de Coordenao Interagncias para Validao de Mtodos Alternativos
- ICCVAM (Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods) , com participao do
NIEHS* e EPA*.
1998 O ECVAM aprova os seguintes mtodos alternativos: teste 3T3 NRU PT - como alternativa na avaliao de
fototoxicidade. Episkin e o TER (transepithelial electrical resistance) - na avaliao de corroso drmica. O Centro
Interagncias do Programa Nacional de Toxicologia para Avaliao de Mtodos Toxicolgicos Alternativos
(NICEATM) foi fundado para dar suporte ao ICCVAM.
1999 3o Congresso Mundial sobre os Testes Alternativos e o Uso de Animais nas Cincias da Vida: Educao, Pesquisa
e Testes (The first World Congress on Alternatives and Animal Use in the Life Sciences: Education, Research and
Testing), em Bologna, Itlia.
2000 A OECD anuncia oficialmente os planos de extinguir o teste de DL50 (Test Guideline 401) de seus protocolos, em
favor dos trs mtodos alternativos existentes.
2002 Cancelamento do Guideline 401 pela OECD.
*OECD Organization for Economic Co-operation and Development; NIEHS National Institute of Environmental Health Sciences; EPA
Environmental Protection Agency dos Estados Unidos
Reduo, refinamento e substituio do uso de animais em estudos toxicolgicos 293

sado, o ensaio de toxicidade aguda oral (guideline Olden..., 2004). No caso dos estudos de irritabilidade/
OECD 401), o qual foi primeiramente adotado em 1981, corrosividade aguda drmica, alguns mtodos in vitro,
com o objetivo de determinar a dose nica, derivada de aceitos por autoridades regulamentadoras, incluem: teste
clculos estatsticos, que pode causar a morte de 50% de de resistncia eltrica transcutnea (Transcutaneous
uma dada populao, em condies experimentais defini- Electrical Resistance Test (TER) - OECD- 430); teste
das (DL50) (Botham, 2002). Em 1986, a Organization for com modelo de epiderme humana (Human skin model
Economic Co-operation and Development (OECD) test-EpiDermTM - OECD-431); teste de fototoxicidade in
anunciou alteraes nos guidelines de toxicidade aguda vitro em clulas 3T3 NRU (In vitro 3T3 NRU
oral e drmica, iniciando as discusses a respeito dos tes- phototoxicity test - OECD- 432); CORROSITEX TM
tes alternativos (Humane..., 2003). (ICCVAM); Episkin TM (ICCVAM) e teste de integrida-
Em 1983, o Food and Drug Administration dos de drmica (Skin integrity function test SIFT) (Stokes,
Estados Unidos (FDA) j havia anunciado que no mais 2002; Stitzel, 2002). Dentre os mtodos alternativos para
requereria o teste clssico de toxicidade aguda (DL50) nos avaliar a irritabilidade/corrosividade aguda ocular, o teste
processos regulatrios e, em 1986, emitiu um relatrio em membrana corioalantica de ovos de galinha (HET-
demonstrando reduo de 96% do uso do mtodo clssi- CAM: Hen Egg Test Chorioallantoic Membrane Test)
co de toxicidade aguda (DL50) referente ao ano de 1985, um dos mais estudados.
quando comparado ao perodo de 1975 a 1979 (Humane..., Considera-se que, no apenas para a determinao
2003). do potencial de irritao, mas para a avaliao geral da
Os primeiros guidelines de mtodos alternativos toxicidade de uma determinada substncia, a avaliao por
validados e adotados pela OECD foram relacionados com etapas (tier approach) representa ferramenta de grande
a determinao da toxicidade aguda oral, sendo eles: o utilidade para se alcanar os objetivos do programa 3Rs,
teste de doses fixadas (Fixed Dose Method - OECD alm de aperfeioar o processo de identificao do peri-
420), adotado em 1992, o mtodo de classe txica aguda go e de reduzir o tempo e os custos empregados nesta
(Acute Toxic Class Method - OECD 423), adotado em avaliao (Botham, 2001; Stitzel, 2002). Entretanto, deve-
1996, e o teste Up-and-down (Up-and-down procedure se ressaltar a necessidade de avaliadores qualificados, j
- OECD 425), adotado em 1998 (Botham, 2002; que cabe a eles o julgamento da conduo do teste conse-
Organization..., 1987, 1992, 1996, 2000, 2002a, b, c). Es- cutivo a cada etapa (Koeter, [2003?]).
tes testes tm demonstrado que informaes adequadas de Os novos mtodos, assim como os revisados
toxicidade aguda e letalidade podem ser obtidas utilizando (updated), fornecem avaliao mais acurada a respeito
nmero menor de animais do que o teste clssico de DL50. dos efeitos potenciais de determinadas substncias qumi-
Embora o endpoint principal ainda seja a letalidade, estes cas sobre a sade humana e sobre o meio ambiente. Isto
testes cumprem a meta de reduzir o nmero e o sofrimento inclui o desenvolvimento de mtodos que identificam no-
dos animais e em alguns casos fornecem informao ade- vos endpoints toxicolgicos, a clarificao de mecanismos
quada para a classificao toxicolgica das substncias de toxicidade, o aperfeioamento da metodologia de en-
estudadas (Dipasquale; Hayes, 2001). Em 2001, estes saio (ex: reduo do tempo e custo), alm de atender o
protocolos foram atualizados, sendo estabelecido perodo objetivo de reduo, refinamento e substituio dos estu-
de 1 ano para a interrupo de uso (phaseout) do dos conduzidos em animais (Interagency..., 2003).
guideline 401 referente toxicidade aguda oral, o qual foi
cancelado pela OECD em dezembro de 2002 (Botham, PROCESSOS DE VALIDAO E DE
2002). No Reino Unido, o ensaio de toxicidade aguda oral IMPLEMENTAO REGULATRIA DOS
(OECD 401) foi banido em outubro de 1999 (Matfield, MTODOS ALTERNATIVOS
2003; Koeter, [2003?]).
Da mesma forma, a avaliao do potencial irritante A fim de contemplar os objetivos do programa 3Rs,
drmico e ocular, no contexto dos mtodos alternativos, diversas metodologias tm sido desenvolvidas e apresen-
passou a ser discutida, sendo posteriormente sugerida a tadas internacionalmente. Entretanto, para que as mesmas
realizao de testes preliminares e a conduo de testes sejam utilizadas necessria a elaborao de protocolos
seqenciais, ou seja, dos testes mais simplificados para os de estudo (guidelines), os quais so publicados apenas
mais sofisticados (Stitzel, 2002). Anteriormente condu- quando a nova proposta de ensaio j fora avaliada, validada
o dos estudos em animais de experimentao, as propri- e aprovada pelos rgos competentes. O segundo passo
edades fsico-qumicas e os dados de ensaios in vitro consiste no reconhecimento e na utilizao de tal
validados devem ser considerados (Koeter, [2003?]; metodologia dentro da proposta regulatria de cada pas.
294 K. C. C. Cazarin, C. L. Corra, F. A. D. Zambrone

Diversos pases, tais como os Estados Unidos e Portanto, os esforos de ambas as Agncias so
membros da comunidade europia (ex: Reino Unido, Ale- direcionados ao aperfeioamento da avaliao da
manha e a maior parte dos pases membros) j aprovaram toxicidade, reduo dos custos e do tempo despendidos
a utilizao de mtodos alternativos no processo de regis- na conduo dos estudos, e reduo, ao refinamento e
tro de novas substncias, assim como a substituio de substituio do uso de animais (Interagency..., 1997, 2001,
alguns mtodos clssicos por outros que se enquadrem na 2003).
proposta dos 3Rs, como por exemplo, a substituio do Na Europa, o rgo responsvel pelo processo de
estudo clssico de toxicidade aguda oral, a partir da deter- validao o European Centre for the Validation of
minao da DL50 (Organization..., 1987). Alternative Methods (ECVAM), que foi criado em outu-
Portanto, para que um novo mtodo seja aceito, este bro de 1991, pela Comisso para o Conselho e Parlamen-
deve passar por avaliao a fim de estabelecer sua rele- to (Communication from the Commission to the Council
vncia para implementao e sua confiabilidade (Stokes, and the Parliament), em resposta Diretiva Europia 86/
2002). Para que isso seja possvel, faz-se necessria a 609/EEC, relativa proteo dos animais utilizados na
harmonizao dos processos de validao, por intermdio experimentao e em outros procedimentos cientficos,
de Comits Internacionais (Schechtman, 2002). onde foi solicitado o apoio da Comisso e dos Estados
Nos Estados Unidos, o Comit Organizador Inter- Membros, nos processos de desenvolvimento, validao e
Agncias para Validao de Mtodos Alternativos, o aceitao de novos mtodos com o objetivo de reduzir,
ICCVAM (Interagency Coordinating Committee on the refinar e substituir o uso dos animais de laboratrio
Validation of Alternative Methods), foi estabelecido em (European ..., [200-?]).
1997 pela Diretoria do Instituto Nacional de Cincias para Assim, os objetivos especficos do ECVAM so: 1)
a Sade Ambiental (NIEHS). Esta deciso foi tomada com coordenar o processo de validao de mtodos alternati-
base na Lei Pblica 103-43, que proveu o desenvolvimento vos na Unio Europia, 2) proceder troca de informa-
e o estabelecimento de critrios para a validao e acei- es no desenvolvimento de mtodos alternativos, 3) es-
tao regulatria de novos ensaios toxicolgicos, sob res- tabelecer, manter e administrar um banco de dados dos
ponsabilidade do NIEHS (Interagency..., 1997, 2001, procedimentos alternativos, 4) promover o dilogo entre
2003). legisladores, indstrias, cientistas, consumidores e grupos
O ICCVAM composto por 15 Agncias voltados para a proteo animal (ECVAM..., [200-?]);
regulatrias e de pesquisa, dentre as quais incluem-se a Worth, Balls, 2002; Schechtman, 2002).
Environmental Protection Agency dos Estados Unidos O trabalho do Centro Europeu focado no desenvol-
(EPA), a Food and Drug Administration dos Estados vimento e na avaliao de mtodos in vitro (exemplo:
Unidos (FDA) e o Agency for Toxic Substances and culturas de clulas e tecidos), no uso de modelos
Disease Registry (ATSDR), sendo que estas fornecem ou computadorizados com base na relao estrutura-atividade
utilizam informaes dos testes toxicolgicos para o pro- (REA) e nos modelos fisiolgicos e cinticos. Embora o
cesso de avaliao do risco. O Comit coordena, atravs ECVAM desempenhe papel ativo no programa de pesqui-
das Agncias, a discusso relativa ao desenvolvimento, sa, seu principal objetivo a validao de mtodos alter-
validao, aceitao e harmonizao nacional e internaci- nativos, direcionado s atividades pr-normativas. Isso
onal dos ensaios toxicolgicos, por intermdio do governo possvel, atravs de seu Comit Cientfico Consultivo
federal dos Estados Unidos (Interagency..., 1999, 2001, (Scientific Advisory Committee/ESAC), que compos-
2003). to por representantes de todos os Estados Membros (us-
Em 1998, o Centro Inter-Agncias para a Avaliao tria, Blgica, Dinamarca, Finlndia, Frana, Alemanha,
de Mtodos Toxicolgicos Alternativos (NICEATM) foi Grcia, Irlanda, Itlia, Luxemburgo, Pases Baixos, Portu-
estabelecido pelo National Toxicology Program (NTP), gal, Espanha, Sucia e Reino Unido), de associaes das
com o objetivo de fornecer suporte operacional ao indstrias, da Academia, de associaes para o bem-estar
ICCVAM, e para executar as atividades relacionadas ao animal (Eurogroup), de departamentos da Comisso Euro-
Comit, tais como peer views e workshops de mtodos pia e de espectadores de outras comisses de interesse
alternativos de interesse para as Agncias Federais (NICEATM e ICCVAM) (European..., [200-?]).
(Schechtman, 2002; Interagency..., 2001, 2003). Depois de finalizada a fase de validao, o mtodo
Assim, o ICCVAM e o NICEATM promovem a proposto passa por uma avaliao independente, ou seja,
validao, a regulamentao e aceitao de mtodos alter- por instituies que no estiveram envolvidas durante todo
nativos que melhor predizem os efeitos ecolgicos e para o processo de pesquisa, de desenvolvimento e da valida-
a sade humana, em comparao aos mtodos usuais. o do mtodo, para emisso de um parecer. Quando este
Reduo, refinamento e substituio do uso de animais em estudos toxicolgicos 295

favorvel, o mtodo proposto publicado e enviado para entre a etapa de pr-validao e a etapa de aceitao
os rgos competentes para implementao regulatria. regulatria compreende cerca de 6 anos. Algumas diferen-
Em linhas gerais, o processo anteriormente descri- as so observadas entre o processo europeu e o norte-
to demonstra as etapas pelas quais a nova metodologia americano, os quais esto representados nas Figuras 1 e
deve enfrentar antes de ser aceita, sendo que o perodo 2, respectivamente.

FIGURA 1 - Processo de implementao regulatria nos Estados Unidos.

FIGURA 2 - Processo de implementao regulatria na Unio Europia.


296 K. C. C. Cazarin, C. L. Corra, F. A. D. Zambrone

Ressalta-se que durante todo o processo (desenvol- tao de mtodos alternativos necessitam do envolvimento
vimento, pr-validao, validao, reviso, aceitao de diversas agncias, assim como das reas cientfica,
regulatria e implementao) deve ser mantido econmica e poltica, como ocorre nos Estados Unidos e
envolvimento consistente e comunicao apropriada entre na Comunidade Europia, por se tratar de processo extre-
todos os interessados (pesquisadores, usurios, regulado- mamente complexo, visando posterior aceitao interna-
res e pblico), a fim de facilitar a validao e a aceitao cional do mtodo validado.
dos novos mtodos propostos. Da mesma forma, a acei- Diversas modificaes nos setores cientfico e
tao regulatria de um novo mtodo deve ser amplamente regulatrio esto previstas, como j ocorreu com o proces-
divulgada aos cientistas e s diversas organizaes naci- so de classificao toxicolgica, que resultou na elabora-
onais e internacionais por intermdio de artigos publicados o do Global Harmonization System of Classification
em jornais e revistas, realizao de workshops e outros and Labelling of Chemicals (GHS), que um sistema
meios (Olden..., 2004; Stokes, 2002). harmonizado de classificao do perigo de substncias e
A comunicao atualizada e correta dos aconteci- de misturas de acordo com os efeitos para a sade e para
mentos um passo de extrema importncia para tornar o ambiente, alm de apresentar elementos harmonizados
vlida as determinaes adotadas e para facilitar a para comunicao do perigo, que devem estar presentes
harmonizao dos novos mtodos desenvolvidos, sendo nos rtulos e na ficha de informaes de segurana de
que esta tambm impulsionada pela publicao de pro- produtos qumicos (FISPQ) ou Material Safety Data
tocolos por organizaes internacionais, tais como a Sheet (MSDS).
OECD, sendo indispensvel a interao entre as Agnci- Entretanto, a discusso sobre a utilizao de animais
as de diferentes nacionalidades, sempre com o objetivo de na pesquisa, a inteno de reduo do seu uso e o desenvol-
encorajar o processo de harmonizao internacional vimento de novas metodologias ainda tm sido timidamen-
(Richmond, 2002; Olden..., 2004). te introduzidos na realidade brasileira. Por esta razo, tor-
na-se de importncia significativa a maior discusso e a par-
DISCUSSO E PERSPECTIVAS FUTURAS ticipao por parte da Academia, da Indstria e dos rgos
Regulamentadores, visto que estas alteraes mundiais
Observa-se imenso avano, cientfico, tecnolgico e afetaro diretamente todos aqueles envolvidos com a pes-
tico quanto ao tema e inclusive intensa discusso em vista quisa, o registro e a aprovao de novas substncias.
das futuras mudanas na conduo da avaliao da
toxicidade de determinada substncia. Assim, a utilizao ABSTRACT
de diversos outros parmetros deve ser considerada nes-
te processo como ferramenta para avaliao preliminar, Reduction, refinement and replacement of animal
tais como, propriedades fsico-qumicas, relao estrutu- use in toxicity testing: an overview
ra-atividade, utilizao de modelos computadorizados e
conduo de mtodos in vitro e ex vivo. Neste contexto, Toxicity assessment is the process of predicting the
a avaliao por etapas (tier approach) tem-se mostrado adverse effects that may be caused to an organism by
como tendncia de extrema relevncia frente aos novos exposuring it to a given chemical and, for regulation
avanos e ao anseio global de reduo do uso de animais, purposes, the most used model in toxicity testing is the
visto que muitos dos experimentos in vivo ainda so animal. However, in todays society the use of animals
insubstituveis. has become a subject of much public health due to the
Atualmente, j existe consenso de que os estudos large number of animals used as well as the pain and
com animais devem ser conduzidos somente quando: 1) o distress caused, mainly related to acute toxicity testing.
objetivo de importncia justificvel; 2) no existem The concept of the Three Rs reduction, refinement,
mtodos alternativos vlidos; 3) todas as estratgias rele- and replacement of animal use - emerged as a mean of
vantes de reduo e refinamento j foram identificadas e removing inhumanity from animal experimentation and
implementadas; 4) o desenho e a conduo do estudo aiming to lower the number of animals used, in order
minimizem o prejuzo causado ao bem estar animal, no to decrease the incidence or severity of inhumane
somente com relao ao nmero de animais utilizados, procedures and to find alternative procedures to
mas tambm em relao dor e ao sofrimento causado e replace in vivo testing. Many alternative toxicological
5) exista benefcio cientfico mximo (Richmond, 2002). tests have already been implemented, even knowing
Com base neste conceito e na tendncia de that this process is very complex and need to be
harmonizao internacional, a validao e a implemen- extensively validated and accepted by regulatory
Reduo, refinamento e substituio do uso de animais em estudos toxicolgicos 297

bodies. This paper presents an overview on several ECOBICHON, D. J., ed. The basis of toxicity testing. 2. ed.
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