LABORATORIO BIOQUMICA 1.

2 PROFESOR: NICOLAS FORRERO

SEPARACIN DE AMINOCIDOS POR CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

Mara Fernanda Acevedo Ortiz
Jeison Contreras Hoyos
Jason Alexander Torres Parra
Qumica industrial, Jornada Noche, Corporacin tecnolgica de Bogot,
Colombia-Bogot D.C.
RESUMEN: Se sembraron diferentes aminocidos (glicina, glutamato, fenilalanina, lisina, Aspartame en agua y Aspartame en
HCl) y un producto comercial (Cola-cola Zero) en una placa de slice, para ser separadas por la fase mvil (Butanol: cido
Actico: Agua. En relacin 12:3:5) para determinar cul de ellas es ms polar en ese solvente.
PALABRAS CLAVE: aminocidos, solvente, polaridad, glicina, glutamato, fenilalanina, lisina, aspartame

ABSTRACT: Different amino acids (glycine, glutamate, phenylalanine, lysine, aspartame in water and aspartame in HCl) and
a commercial product (Cola-cola zero) were seeded on a silica plate, to be separated by the mobile phase (Butanol: Acetic
acid: Water, in relation to 12: 3: 5) to determine which of them is more polar in that solvent.
KEYWORDS: Amino acids, solvent, polarity, glycine, glutamate, phenylalanine, lysine, aspartame

INTRODUCCIN: La cromatografa de capa fina es un PROCEDIMIENTO

procedimiento que se utiliza para separar molculas
relativamente pequeas. Al igual que otras
cromatografas, consiste de una fase estacionaria y una
fase mvil y el principio es el mismo: la sustancia de
inters se adherir a la fase estacionaria o se mover con
la fase mvil, viajando una distancia que es inversamente
proporcional a la afinidad por la fase estacionaria.
La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de
papel, de celulosa o de un gel de silicato (vidrio molido
bien fino) unido a una superficie slida (una placa de
vidrio, aluminio, plstico o papel). Esta superficie slida
puede ser rgida o flexible. El tipo de fase estacionaria que
se utilice en un experimento depender del tipo de
molculas que se quieran separar. Incluso vienen algunas
placas con indicadores fluorescentes. La fase estacionaria
consiste de un solvente que puede ser agua, un solvente
orgnico o una mezcla de ambos.
La ninhidrina a pH entre 4 y 8 es un oxidante muy fuerte y
siempre reacciona con los grupos de a-amino libreando
amonio, el cual se condensa con la ninhidrina reducida y
con otra molcula de ninhidrina formando un compuesto
coloreado que vara de azul a violeta prpura.
Mecanismo de reaccin
Coloque 5 mL de fase mvil (Butanol: cido actico:
agua) en la cmara cromatogrfica y deje saturar por
30 minutos.
Sobre la placa de slice, suavemente con un lpiz,
trace una lnea a 1.0 cm desde la base. Sobre esta
lnea va a sembrar las muestras de aminocidos y de
anlisis.
En un tubo de ensayo tome 50 mg de aspartame y
adicione 5 mL de HCl 3 M. Caliente en mechero por
30 segundos, sin dejar que el contenido se evapore.
Precaucin, desarrollar este paso sujetando el tubo de
ensayos con pinzas y orientar la boca del tubo en
direccin opuesta a cualquier persona.
En un tubo de ensayo tome 50 mg de aspartame y
disulvalos en 5 mL de agua.
En tubos de ensayo, disuelva 20 mg de cada
aminocido en 5 mL de agua.
Con un capilar siembre en la placa cubierta de slice
Placa 1: Lnea 1: Glicina. Lnea 2: Glutamato. Lnea
3: Fenilalanina. Lnea 4: Lisina
Placa 2: Lnea 1: Fenilalanina. Lnea 2: Aspartame en
agua. Lnea 3: Aspartame en HCl. Lnea 4: Coca-
Cola Zero
En cada caso siembre 5 veces con el capilar y use
un solo capilar por cada muestra. En el caso de la
bebida comercial siembre 10 veces, dejando entre
cada sembrada que la muestra se seque, use una
estufa para este caso.
Coloque las placas en la cmara cromatogrfica,
previamente preparada con la fase mvil, y deje que la
fase mvil recorra la placa hasta que llegue a 1 cm del
lmite superior de esta.
LABORATORIO BIOQUMICA 1.2 PROFESOR: NICOLAS FORRERO

Retire la placa de la cmara, deje secar por 5 minutos

en estufa (hasta que ya no perciba el olor a solvente)
Coloque el agente de revelado, solucin de ninhidrina
0,2 %.
Seque en estufa a 70C por 2 minutos.
Tome con cuidado la placa y calcule los Rf para cada
marca.

RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS

Placa 2.

Distancia
Nombre de Color de la
# recorrida Rf
la Muestra mancha
(cm)
Fenilalanin
5 Morado 1 0.333
a
Aspartame
6 Caf 1.5 0.5
en agua
Placa 1. Aspartame
7 Amarillo 2 0.666
en HCl
Distancia Cocacola-
Nombre de Color de la 8 Lila 0 0
# recorrida Rf Zero
la Muestra mancha
(cm) 1
1 Glicina Amarillo 0 0 5. = 3 = 0.333
2 Glutamato Caf Claro 0 0 1.5
6. = 3 = 0.5
3 Fenilalanina Violeta 1 0.333 2
Caf 7. = 3 = 0.666
4 Lisina 0 0
oscuro 0
8. = 3 = 0

= CONCLUSIONES

La Glicina, el glutamato y la lisina plantados en la
0 primera placa no son polares con el solvente
1. = 3 = 0 usado
0
2. = 3 = 0
En la placa dos, se puede evidenciar que el ms
1 polar es el aspartame en HCl, seguido por el
3. = = 0.333
3 aspartame en agua y la fenilalanina, dejando por
0 ltimo, el producto comercial (coca cola Zero)
4. = 3 = 0
que no presenta polaridad
LABORATORIO BIOQUMICA 1.2 PROFESOR: NICOLAS FORRERO