Universidad Autnoma de Chihuahua

Facultad de Ciencias Qumicas

Laboratorio de Bacteriologa medica
Practica 3:
Anlisis de cepas de referencia relacionadas a infecciones del tracto
urinario.
Equipo 2:
Luis Andrs Carrillo Quezada 291921

Jesus Manuel Rohan Mancha 272346

Nayely Edith Ortiz Caldera 271837

Resumen:

Se cultivaron 5 diferentes cepas de bacterias que pueden afectar el tracto

urinarios en medios de cultivo con diferente sustrato para poder observar su
morfologa tanto macroscpicamente como microscpicamente y se emplearon
pruebas bioqumicas para confirmar la especie de la cepa.

Introduccin:

La orina normal no contiene bacterias. Algunas veces, sin embargo, las

bacterias del exterior del cuerpo entran al tracto urinario, y causan infeccin e
inflamacin. Esto es una infeccin del tracto urinario. Existen varios tipos de
generos de bacterias que son capaces de infectar el tracto urinario y causar
una patologa, entre ellos estn Escherichia coli, Enterobacter cloacae, Proteus
mirabilis, Pseudomona aeruginosa y Enterococcus faecalis.

Escherichia coli:

Es un bacilo gramnegativo de la familia de las enterobacterias que se

encuentra en el tracto gastrointestinal de humanos, anaerobia facultativa
comensal.

Dentro de las cepas de Escherichia coli que infectan a los seres humanos, se
han descrito dos grupos principales:

Las que causan infecciones intestinales (cepas diarrognicas).

Las que producen infecciones extraintestinales.

Este ltimo grupo incluye a los agentes causales de las infecciones del tracto
urinario, as como los que causan meningitis neonatal y bacteremia. Los
diferentes patotipos de E. coli se caracterizan por compartir el antgenos
somtico u O, que definen los serogrupos, antgeno H o flagelar, cuya
combinacin define los serotipos.

Los serogrupos de E. coli comnmente asociados con infecciones del tracto

urinario son: O1, O2, O4, O6, O7, O8, O16, O18, O22, O25 y O75.

El colon, el introito vaginal y el rea periuretral sirven como reservorios para E.

coli y otros uropatgenos. La bacteria puede diseminarse en el tracto urinario y
establecerse una bacteriuria, que se considera significativa cuando la
concentracin de unidades formadoras de colonias de bacterias por mililitro de
orina supera los 100,000. La presencia de bacterias no necesariamente
conduce a enfermedad, a esto se le conoce como bacteriuria asintomtica, si
hay sintomatologa se conoce como cistitis en vejiga o pielonefritis en rin.

La caracterstica ms importante de las bacterias uropatgenas es la capacidad

para adherirse a las clulas uroepiteliales; para llevar a cabo esta tarea las
cepas de E. coli UPEC (uropatogenas) tienen diferentes apndices adhesivos
en su superficie, el pili P y el pili tipo-1. La adherencia de las bacterias induce
apoptosis y exfoliacin (desprendimiento celular), y en algunos casos las
bacterias pueden internalizarse en las clulas uroepiteliales (invadir) y
replicarse dentro de ellas.

Para aislar E.coli es recomendado utilizar varios medios de cultivo como:

Agar Salmonella Shigella: Se utiliza para aislar bacterias lactosa negativa

como Salmonella y Shigella. Especies de la familia Enterobacteriaceae lactosa
positivas, como Escherichia coli, presentan colonias rosadas en este tipo de
medio.

Agar MacConkey: Al igual que el anterior separa las bacterias fermentadoras

de la lactosa. Escherichia coli produce colonias rosadas.

Agar Eosina Azul de Metileno (EMB): Permite la diferenciacin de especies

fermentadoras de la lactosa. Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli
presentan colonias que varan del prpura a verde metlico.

Enterobacter cloacae:

El Enterobacter cloacae es una bacteria que pertenece al gnero Enterobacter,

de la familia de las Enterobacteriaceae, siendo las especies ms importantes
Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes.

Es un bacilo Gram negativo Oxidasa negativo y Catalasa positivo presente

como microbiota local en el aparato digestivo humano.

Es un tipo de bacteria que puede causar nmero de infecciones, incluyendo

infecciones respiratorias, las infecciones oftlmicas y las infecciones del tracto
urinario. Se considera un patgeno oportunista porque se dirige a las personas
cuyo sistema inmune ya est debilitado. Puede ser cultivado en medios de
cultivo como:

Agar MacConkey: Como ya se dijo anteriormente, sirve para separar las

bacterias fermentadoras de la lactosa, con color rosada, se sabe que fermenta
lactosa.

Agar EMB: Se obtienen colonias rosadas/moradas con centro obscuro y un

brillo semi metalico.

Proteus mirabilis:

Es un bacilo gram negativo, facultativamente anaerbico con motilidad

comnmente encontrado en el tracto intestinal de los humanos. La infeccin del
aparato urinario por Proteus mirabilis es la enfermedad ms frecuente en este
gnero, siendo los otras dos especies que causan infecciones oportunistas
Proteus vulgaris y Proteus penneri.

Tiene la habilidad de producir grandes niveles de ureasa. La ureasa hidroliza

urea a amonaco, causando un aumento en el pH de la orina, esto favorece la
formacin de clculos renales y puede abrir la puerta a nuevas infecciones. No
se tiene un serotipo especifico cuando se trata de identificar cual es el que
causa ms infecciones.

El gnero Proteus es bien conocido por su amplia motilidad, esta se puede

evidenciar en medios nutritivos como agar sangre, agar nutritivo, agar BHI,
entre otros. Se forman una especie de ola alrededor de las colonias
bacterianas y esta se desplaza de forma radial, a este fenmeno se le llama
efecto de swarming. Proteus genera colonias medianas, convexas,
blanquecinas o translucidas, forma circular, bordes redondeados hay precencia
de swarming.

Pseudomona aeruginosa:

Es una especie de bacterias Gram-negativas, aerbicas, no fermentadores con

motilidad unipolar las cuales estn presentes en el suelo y el agua. Son
capaces de utilizar un gran nmero de compuestos orgnicos como fuentes de
carbono y de nitrgeno, y algunas cepas crecen incluso en agua destilada al
degradar los restos de los nutrientes.

Dentro del gnero Pseudomonas se encuentran tambin algunas otras

especies como P. fluorescens, P. putida, P. syringae y P. alcaligenes. P.
aeruginosa se encuentra ampliamente distribuida en la naturaleza, todas las
cepas son potencialmente patgenas para el hombre.

Estas bacterias infectan la sangre, la piel, los huesos, los odos, los ojos, el
sistema urinario, las vlvulas cardacas y los pulmones, as como heridas. El
uso de dispositivos mdicos, como catteres insertados en la vejiga o en una
vena, tubos de respiracin y ventiladores mecnicos, aumenta el riesgo de
infecciones por Pseudomonas aeruginosa. Estas infecciones se adquieren
habitualmente en los hospitales. Suele crecer rpidamente y formar colonias
planas con bordes que se van extendiendo, una pigmentacin verde
relacionada con la sntesis de piocianina azul y fluorescena amarilla, y un olor
dulce caracterstico.

Enterococcus faecalis:

El gnero Enterococcus est constituido al menos por doce especies de cocos

anaerobios facultativos, entre las cuales destacan E. faecalis y E. faecium,
siendo E. faecalis el responsable de alrededor del 90% de las infecciones
causadas por enterococos. Su reservorio natural es el tracto gastrointestinal de
mamferos, aunque puede detectarse en el suelo, agua o alimentos.

Los enterococos causan diferentes tipos de infeccin, tales como las del tracto
urinario, bacteriemias, endocarditis, meningitis, infecciones intra-abdominales
(biliares o peritoneales) y de lceras de decbito o isqumicas.

Es una bacteria Gram-positiva, anaerobia facultativa, inmvil y comensal,

puede causar infecciones comprometidas en humanos, especialmente en
ambientes como hospitales.

Se pueden utilizar medios de cultivo con 6.5% de cloruro de sodio para poder
identificar los enterococos junto la prueba de bilis esculina para confirmar su
presencia.

Materiales y mtodos:

Material:

Portaobjetos
Mechero de Bunsen
Asa de nicromio

Muestra biolgica:

Cepa de Escherichia coli

Cepa de Enterobacter cloacae
Cepa de Proteus mirabilis
Cepa de Pseudomona aeruginosa
Cepa de Enterococcus faecalis

Medios de cultivo:

Agar MacConkey
Agar EMB
 Agar Sangre
Agar Sangre de carnero
Agar Centimide
Bilis esculina
Caldo nutritivo + 6.5% NaCl

Pruebas bioqumicas:

TSI
LIA
Citrato
FeA
Caldo Rojo de metilo
Voges proskauer
Urea
Nitratos
MIO
Catalasa
Oxidasa

Mtodo:

Se descarg cada cepa de referencia con la asa de nicromio en un

extremo de la caja Petri con el agar correspondiente (estriado )
Se incubo los medios de cultivo de manera invertida a 37 grados
centgrados.
Se observ en cada colonia aislada de cada cepa correspondiente y se
anot la morfologa macroscpica, se procedi a realizar las pruebas de
oxidasa (E. coli y Pseudomona) y catalasa (Enterococos).
Se procedi a realizar la tincin de gram y se anotaron sus
caractersticas microscpicas.
Se llevaron a cabo las pruebas bioqumicas y se incubaron a 37 grados
centgrados durante 24 horas y finalmente se procedi a interpretar los
resultados de dichas pruebas bioqumicas.

Resultados:

Escherichia coli

Morfologa macroscpica

Cepa de Escherichia coli

referencia
Medio de MacConkey EMB
cultivo
Borde Regular Regular
 Tamao Medianas Pequeas
Color Rosadas Verde metalico
Elevacin Convexa Convexa
Forma Circular Circular
Luz reflejada No Si
Luz No Si
transmitida
Consistencia Viscosa Semislida
Sustrato Lactosa + Lactosa +

Morfologa microscpica

Forma Bacilos
Arreglo Simple
Afinidad tintorial Gram negativo

Pruebas bioqumicas

Escherichia Resultados Referencias

coli
TSI Fermentacin de glucosa con Lactosa +
gas, fermentacin de lactosa Glucosa con gas +
(sacarosa desconocido) y sin
produccin de H2S.
LIA Desaminacion negativa, Desaminacion negativa,
descarboxilacion positiva sin descarboxilacion positiva sin
H2S H2S
Citrato Negativo Negativo
Rojo de Positivo Positivo
Metilo
Voges Negativo Negativo
proskauer
Urea Negativo Negativo
FeA Negativo Negativo
Nitratos Positivo Positivo
MIO Mov (+) /Ornitina (+) / Indol (+) Indol negativo, H2S positivo
Oxidasa negativa

Proteus mirabilis

Morfologa macroscpica

Cepa de Proteus mirabilis

referencia
Medio de MacConkey EMB Sangre
cultivo (Swarming)
Borde Irregular Regular Irregular
 Tamao Medianas Pequeas Pequeas
Color Transparentes Transparentes Transparentes
Elevacin Convexa Convexa Convexa
Forma Circular Circular Irregular
Luz reflejada Si Opacas Si
Luz Si No No
transmitida
Consistencia Viscosa Semislida Semislida
Sustrato Lactosa - Lactosa / Hemolisis
Sacarosa - gamma

Morfologa microscpica

Forma Bacilos
Arreglo Simple
Afinidad tintorial Gram negativo

Pruebas bioqumicas

Proteus Resultados Referencias

mirabilis
TSI Produccin de H2S y gas a Lactosa -
partir de la glucosa, sin uso de Glucosa con gas y H2S +
lactosa
LIA Desaminacion positiva, Desaminacion positiva,
descarboxilacion negativa descarboxilacion negativa
Citrato Positivo Positivo
Rojo de Positivo Positivo
Metilo
Voges Negativo Negativo / Positivo (50%)
proskauer
Urea Positiva Positiva
FeA Positiva Positiva
Nitratos Positivo Positivo
MIO Mov (+), Indol (-), Ornitina + Mov (+), Indol (-), Ornitina +

Enterobacter cloacae

Morfologa macroscpica

Cepa de Enterobacter cloacae

referencia
Medio de MacConkey EMB Sangre
cultivo
Borde Regular Regular Irregular
Tamao Medianas Mediana Mediana
 Color Rosada Rosa purpura Blanquecinas
Elevacin Convexa Convexa Convexa
Forma Circular Circular Irregular
Luz reflejada Si Si Si
Luz Si Si No
transmitida
Consistencia Cremosa Cremosa Cremosa
Sustrato Lactosa + Lactosa / Hemolisis
Sacarosa + gamma

Morfologa microscpica

Forma Bacilos
Arreglo Simple
Afinidad tintorial Gram negativo

Pruebas bioqumicas

Enterobacter Resultados Referencias

cloacae
TSI Fermentacin de glucosa con Lactosa +
fermentacin de lactosa positiva Glucosa con gas +
LIA Desaminacion negativa Desaminacion negativa,
descarboxilacion negativa descarboxilacion negativa
(Dudosa)
Citrato Positivo Positivo
Rojo de Negativo Negativo
Metilo
Voges Positivo Positivo
proskauer
Urea Negativa Negativo / Positivo (65%)
FeA Negativa Negativa
Nitratos Positivo Positivo
MIO Mov (+), Indol (-), Ornitina + Mov (+), Indol (-), Ornitina +

Pseudomona aeruginosa

Morfologa macroscpica

Cepa de Pseudomona aeruginosa

referencia
Medio de MacConkey EMB Sangre Centrimide
cultivo
Borde Regular Irregular Irregular Regular
Tamao Medianas Pequeas Grandes Grande
Color Verdosas Morado Verdosa Verdosa
(Transparentes verdoso (Transparentes amarillosa
 con pigmento) con pigmento)
Elevacin Abombada Plana Plana Plana
Forma Circular Circular Irregular Irregular
Luz reflejada No Si No No
Luz Si No Si Si
transmitida
Consistencia Viscosa Semislida Semislida Semislida
Sustrato Lactosa - Lactosa / Hemolisis Piocianina,
Sacarosa - gamma pioverdina y
piomelanina
formada

Morfologa microscpica

Forma Bacilos
Arreglo Simple
Afinidad tintorial Gram negativo

Pruebas bioqumicas

Pseudomona Resultados Referencias

aeruginosa
TSI Negativo todo No fermenta azucares
LIA Desaminacion negativa Desaminacion negativa,
descarboxilacion negativa descarboxilacion negativa
(Dudosa)
Citrato Positivo Positivo
Rojo de Negativo Negativo
Metilo
Voges Negativo Negativo
proskauer
Urea Negativa Negativo
FeA Negativa Negativa
Nitratos Negativo Negativo
MIO Mov (-~+), Indol (-), Ornitina + Mov (+~-), Indol (-), Ornitina +
Su movilidad es muy lenta, Oxidasa +.

Enterococcus faecalis

Morfologa macroscpica

Cepa de Enterococcus
referencia faecalis
Medio de Sangre
cultivo (Carnero)
Borde Regular
Tamao Puntiforme
 Color Blanquecinas
Elevacin Convexa
Forma Circular
Luz reflejada Si
Luz No
transmitida
Consistencia Cremosa
Sustrato Hemolisis
gamma

Morfologa microscpica

Forma Cocos
Arreglo Simple
Afinidad tintorial Gram positivo

Pruebas bioqumicas

Enterococcus Resultados Referencias

faecalis
Bilis Esculina Obscurecimiento y crecimiento Crecimiento bueno en bilis
en bilis esculina esculina acompaado de
oscurecimiento
Caldo Turbidez (Positivo) Positivo
nutritivo 6.5%
NaCl
Catalasa Negativo Negativo

Conclusin:

No hubo diferencias entre los resultados y las referencias de pruebas

bioqumicas, se tuvieron que cambiar las cepas inoculadas de calado nutritivo
ya que no hubo turbidez en la primera cepa, siendo que Enterococcus faecalis
tiene la capacidad de crecer en caldos con alto contenido de sal.

Bibliografa:

Micheal, T., John, M. (2009). Biologa de los microorganismos. 12ed.

Viramontes, S., Portillo, M. (2011). Metabolismo microbiano. Universidad
Autnoma de Chihuahua.
Viramontes, S., Portillo, M. (2015). Identificacin de microorganismos.
Universidad Autnoma de Chihuahua; Textos Universitarios.
Murray, R. (2006) Microbiologa Mdica. Mosby Elsevier Science.