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AREA: BIOQUIMICA
TUTOR DE AREA:
Lic. Katherine Gutirrez Maravi
ROTACIN: 20 DE AGOSTO
19 DE OCTUBRE
En los dos meses de rotacin mis objetivos son saber el porqu de cada
reactivo que se usa en el equipo de qumica seca, y como acta tales
reactivos con el suero del paciente. Tambin nos dar un indicativo de que
es lo que est fallando en el organismo del paciente y que enzima est
elevada de lo normal.
DESARROLLO DEL TEMA
BIOQUIMICA
1. CONTROL DE CALIDAD EN QUIMICA SECA Y LIQUIDA
1.1. FASE PRE-ANALTICA:
a) Correcta complementacin de la peticin analtica: legible, datos
mnimos imprescindibles (edad, sexo, raza, fecha de la solicitud) y datos
complementarios (juicio clnico, semanas de embarazo, da del ciclo en
caso de hormonas sexuales en mujeres, medicacin, etc.
b) Preparacin del paciente:
Ayuno: se aconseja de forma generalizada. Se puede beber agua.
Alcohol: altera la concentracin de lactato, cido rico, enzimas
hepticas.
Tabaco: contraindicado si se piden catecolaminas, cortisol, cidos
grasos.
Ejercicio fsico
Estrs: puede alterar los resultados de los anlisis.
c) Obtencin de la muestra:
Extraccin de sangre: en posicin sentado o tumbado.
Recogida de orina de 24 horas o la primera del da
Niveles de frmacos: hay que tener en cuenta la hora de la administracin.
Se suelen tomar las muestras 3-4 horas antes de la siguiente dosis. Hay
casos particulares.
a) Tcnicas Analticas:
Son los diferentes procedimientos de anlisis basados en el comportamiento de
la materia ante la Energa:
b) Espectrofotometra Autoanalizadores - Electroforesis
Cromatografa - Electroqumica
Qumica seca- Inmunoensayos
c) Mtodos Analticos:
Son aplicaciones de las tcnicas, en casos determinados, con parmetros
y protocolos concretos. Su nombre hace referencia a:
Alguna caracterstica analtica: mtodo del punto final, mtodos cinticos,
mtodos colorimtricos, mtodos enzimticos, mtodos de curva de
calibracin, etc.
Alguno de los reactivos usados: mtodo de la glucosa-oxidasa, mtodo
del verde bromocresol, etc.
A la persona que optimiz el mtodo: mtodo de Biuret, mtodo de Jaff,
etc.
2. QUIMICA SECA
2.1. PRINCIPIO BASICO DE QUIMICA SECA:
Se basa en la estabilizacin de los componentes de la reaccin necesaria para
el anlisis (indicadores, enzimas y reactivos auxiliares), por pretratamiento y
secado de las respectivas soluciones, en papel filtro, fijado a su vez sobre una
tira de material sinttico.
b) Tipos de Slide
b) Verstil y Productivo
Hasta 350 resultados por hora
Capacidad a bordo para todos los ensayos
Men de pruebas completo (45 pruebas) siempre disponible.
Muestreo desde tubo primario
Procesamiento de Diluciones automticas a bordo
Opcin de identificacin de pacientes por cdigos de barras
c) Fcil de Usar
El analizador VITROS 350 no requiere operadores altamente
entrenados debido a la simplicidad de los procedimientos y los mens
de ayuda disponibles en todas las pantallas en espaol
4.1. VENTAJAS:
El usuario solo necesita aplicar la muestra al reactivo en fase slida
para iniciar el anlisis, que tiene lugar en unos minutos
No se precisa preparacin previa de los reactivos. Son nicos para
cada parmetro y desechables.
Tienen larga estabilidad
Son fciles de almacenar.
4.2. DESVENTAJAS:
Su costo es ms elevado que el de la qumica convencional
No es prctico para laboratorios con gran carga de trabajo, ya que por
cada tira solo se puede realizar la determinacin de un analito.
6.1. ALBUMINA
a) Significado clnico:
Las protenas son compuestos orgnicos macromoleculares, ampliamente
distribuidos en el organismo. La albmina es el principal contribuyente de las
protenas totales plasmticas. Entre sus mltiples funciones se pueden
mencionar:
Transporte de una amplia variedad de sustancias como hormonas
esteroides, cidos grasos, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre
son insolubles en medio acuoso;
Mantenimiento de la presin coloide osmtica, que estara relacionado
con su bajo peso molecular y su gran carga neta.
Los aumentos anormales de albmina son ocasionales y se relacionan casi
siempre con la deshidratacin que provoca la reduccin en el contenido del agua
plasmtica.
La hipoalbuminemia ocurre en condiciones patolgicas tales como prdida
excesiva de protenas en el sndrome nefrtico, desnutricin, infecciones
prolongadas, quemaduras severas. Otras causas son disminucin en la sntesis
por una dieta deficiente, enfermedad heptica o mala absorcin.
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales: 3.5 5.0 (g/dl)
6.2. FOSFATASA ALCALINA (ALKP)
a) Significado clnico:
La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el organismo.
Hidroliza los mono steres del cido ortofosfrico en medio alcalino.
En el adulto proviene en parte del hgado (fraccin termoestable) y en parte del
hueso, sistema reticuloendotelial y vascular (fraccin termolbil), dando lugar a
distintas isoenzimas.
La actividad srica de fosfatasa alcalina sea, en condiciones normales, alcanza
su mayor actividad en los nios en edad de crecimiento (llegando a triplicar los
niveles del adulto) debido a que esta isoenzima se localiza en los osteoblastos
(relacionados con la calcificacin y formacin de estructuras seas). Tambin es
fisiolgico el aumento que se produce al final del primer trimestre del embarazo,
a expensas de la isoenzima placentaria que en este perodo alcanza niveles
mximos (aproximadamente el doble de los valores normales).
b) Fundamento del mtodo:
La fosfatasa alcalina desdobla al fenilfosfato de sodio en medio alcalino
tamponado con aminometil propanol (AMP). El fenol liberado se determina por
reaccin con 4-amino-antipirina y ferricianuro como agente oxidante. El color
desarrollado es directamente proporcional a la actividad enzimtica y se mide a
520 nm.
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales y SI: 38 126 (U/L)
6.3. ALANINA AMINOTRANSFERASA (ALT)
a) Significado clnico:
La alanina aminotransferasa (ALT o GPT) es una enzima uni celular
(citoplasmtica) cuya mayor actividad se localiza en el tejido heptico. La
destruccin o cambio de permeabilidad de las membranas celulares provoca la
liberacin de ALT a la circulacin sangunea. Los mayores aumentos de actividad
ALT en suero, se producen como consecuencia de alteraciones hepticas. En el
caso de hepatitis virales, el aumento de ALT precede a la aparicin de ictericia,
alcanzando un mximo luego de la observacin de dicho sntoma. Si los valores
permanecen elevados luego de 6 semanas, debe pensarse en la posibilidad de
una hepatitis activa o en el comienzo de una hepatitis crnica, por lo que es de
utilidad las determinaciones seriadas de la enzima. La determinacin de ALT
adquiere importancia diagnstica cuando sus valores se comparan con los de
otras enzimas de similar origen tisular, permitiendo as completar el perfil
enzimtico de rganos como el hgado.
d) Fundamento del mtodo:
La capa difusora contiene los sustratos de la ALT, L-alanina y a-cetoglutarato
sdico. La alanina aminotransferasa cataliza la transferencia del grupo amino
de la L-alanina al a-acetoglutarato para producir piruvato y glutamato. El lactato
deshidrogenasa (LDH) cataliza la conversin de piruvato y NADH en lactato y
NAD+. La frecuencia de oxidacin del NADH se monitoriza por
espectrofotmetro de reflectancia. La frecuencia de cambio en la densidad de
reflectancia es proporcional a la actividad enzimtica.
e) Valores esperados:
Unidades Convencionales y SI:
Adultos: 13 69 (U/L)
Mujeres: 9 52 (U/L)
Varones: 21 72 (U/L)
a) Significado Clnico:
La aspartato aminotransferasa es una enzima bilocular (citoplasmtica y
mitocondrial) ampliamente difundida. Se encuentra en mayor concentracin en
hgado y corazn. Cualquier alteracin de estos tejidos produce un aumento en
los niveles de AST circulante. En el infarto agudo de miocardio, se observa un
aumento moderado de la enzima a las 6 u 8 horas de ocurrido el episodio,
alcanza niveles mximos alrededor de las 48 horas y retorna a la normalidad
entre el 4 y el 6 da. En pacientes con afecciones hepticas se observan las
mayores elevaciones de AST, sobre todo en los casos de hepatitis con necrosis.
La determinacin de AST adquiere importancia diagnstica cuando sus valores
se comparan con los de otras enzimas de similar origen tisular, es decir que
permite completar el perfil enzimtico de rganos tales como corazn e hgado.
b) Fundamento del mtodo:
En el ensayo de la aspartato aminotransferasa, el grupo amino de L-aspartato
se transfiere al a-cetoglutarato en presencia de piridoxal-5-fosfato (P-5-P) para
producir glutamato y oxalacetato. El oxalacetato formado en la desaminacion del
L-aspartato es convertido a piruvato y dixido de carbono por la oxalacelato
descarboxilasa. La piruvato oxidasa oxida al piruvato en acetilfosfato y perxido
de hidrogeno. El paso final de la reaccin implica la oxidacin del leucoderivado
se monitoriza por espectrofotometra de reflectancia. La frecuencia de cambio en
la densidad de reflectancia es proporcional a la actividad enzimtica en la
muestra. El filtro de corte de la longitud de onda corta presente en la montura del
slide minimiza los efectos de frecuencia del blanco de la luz incidente durante el
desarrollo del colorante.
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales y SI:
Adultos: 15 46 (U/L)
Mujeres: 14 36 (U/L)
Varones: 17 59 (U/L)
6.5. AMILASA(AMYL)
a) Significado clnico:
La amilasa, producida principalmente en el pncreas exocrino y en las glndulas
salivales, escinde los enlaces -1-4 glucosdicos de los polisacridos (almidn y
glucgeno). Se encuentra elevada en el suero de pacientes con pancreatitis
aguda alcanzando los valores ms elevados entre las 24 y 30 horas posteriores
al ataque, declinando luego para volver a los niveles normales entre las 24 y 48
horas siguientes.
a) Significado clnico:
La bilirrubina, compuesto de degradacin de la hemoglobina, es captada por el
hgado para su conjugacin y excrecin en la bilis. Las alteraciones
hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar hiperbilirrubinemias.
La eritroblastosis fetal o anemia hemoltica del recin nacido es una patologa
provocada por incompatibilidad materno fetal en la que se produce una
destruccin excesiva de glbulos rojos. Esto resulta en un severo aumento de la
bilirrubina srica con el consecuente riesgo de difusin del pigmento al sistema
nervioso central, por lo que la determinacin de la bilirrubina en estos nios
recin nacidos resulta sumamente importante.
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales y SI:
Adultos:
Bu: 0.0 1.1 (mg/dL)
Bc: 0.0 0.3 (mg/dL)
Neonatos:
Bu: 0.6 10.5 (mg/dL)
Bc: 0.0 0.6 (mg/dL)
a) Significado clnico:
La urea constituye la fraccin de nitrgeno no proteico ms importante en la
mayora de los lquidos biolgicos. En el hombre es el principal producto final del
metabolismo proteico. Se produce en el hgado y es excretada por la orina a
travs de los riones.
Una elevacin de la concentracin srica de urea, se interpreta generalmente
como una posible disfuncin renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el
hecho de que los valores sricos de urea se encuentran ntimamente
relacionados con la dieta y el metabolismo proteico, por lo que cualquier
alteracin en estas variables se traducir en un cambio de la concentracin de
urea en suero.
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales (mg/dL N ureico):
Suero:
Varones: 9 20 (mg/dL)
Mujeres: 7 - 17 (mg/dL)
Orina:
24 horas: 12 20 g/dia*
*Concentracin de nitrgeno ureico (mg/dL) x volumen de 24 horas
(dL)=mg/da. Para convertir mg/da a g/da, dividir por 1000.
6.8. CALCIO
a) Significado clnico:
El calcio es esencial en la mayora de las reacciones de la coagulacin
sangunea y en la regulacin de la excitabilidad de las fibras musculares.
Su concentracin en suero y orina est regulada por la accin de factores tales
como niveles de parathormona, vitamina D y fsforo, observndose
fluctuaciones fisiolgicas debidas a edad, sexo, embarazo, actividad fsica,
cambios estacionales (por accin de la luz solar).
La hipercalcemia est relacionada con distintas patologas: hiperparatiroidismo,
neoplasias seas, intoxicaciones con vitamina D.
La hipocalcemia se asocia con desrdenes tales como hipoparatiroidismo,
deficiencia de vitamina D, malabsorcin.
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales:
Suero: 8,4 10,2 mg/dL
Orina Consumo de Ca en la dieta:
Sin Ca: 5 40 mg/dia*
Bajo a promedio: 50 150 mg/dia*
Promedio: 100 300 mg/dia*
*Concentracin de calcio (mg/dL) x volumen de 24 horas (dL)=mg/da
6.9. COLESTEROL (CHOL)
a) Significado clnico:
El colesterol est presente en los tejidos, en el suero y ene el plasma bien como
colesterol o bien como esteres de colesterol unidos a protenas. El colesterol es
componentes estructurales esenciales de las membranas celulares y de la capa
externa de las lipoprotenas plasmticas y es el precursor de todas las hormonas
esteroides, incluidas las hormonas sexuales y suprarrenales, los cidos biliares
y la vitamina D.
b) Fundamento del mtodo:
El tensioactivo Triton X-100(TX100) contenido en la capa difusora ayuda a
disociar el colesterol y los esteres de colesterol de los complejos de lipoprotenas
presentes en la muestra. La hidrolisis de los esteres de colesterol a colesterol es
catalizada por el ester de colesterol hidrolasa. Despues, el colesterol libre es
oxidado en presencia de colesterol oxidasa para formar colestenona y perxido
de hidrogeno. Por ltimo, el perxido de hidrogeno se oxida a un leucoderivado
en presencia de peroxidasa para producir un colorante.
La densidad del colorante formado es proporcional a la concentracin del
colesterol presente en la muestra y se mide mediante espectrofotometra de
reflectancia.
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales:
Deseable: <200
Limite alto: 200 239
Alto: 240
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales:
Mujeres: 30 135 (U/L)
Varones: 55 170 (U/L)
c) Valores esperados:
Masa: 0,0 - 5,5 ng/mL (0,0 - 5,5 g/L)
Fraccin de actividad total (por electroforesis): 0 - 4,0 % (0 - 0,04)
6.12. CREATININA
a) Significado clnico:
La excrecin de creatinina srica y de creatinina urinaria es una funcin de la
masa corporal magra en persona normal que muestra poca o ninguna respuesta
a los cambios en la dieta. La concentracin de creatinina srica es ms elevada
en los varones que en las mujeres. Como la creatinina urinaria se excreta
principalmente por filtracin glomerular, apareciendo solo pequeas cantidades
debidas a la secrecin tubular, la excrecin de creatinina srica y de creatinina
en orina de 24 horas puede utilizarse para calcular la tasa de filtracin
glomerular.
La creatinina srica aparece aumentada en la insuficiencia renal aguda y
crnica, la obstruccin de las vas urinarias, los casos de reduccin del flujo
sanguneo renal, shock, deshidratacin y rabdomiolisis.
b) Fundamento del mtodo:
La creatinina se difunde a la capa reactiva, donde es hidrolizada a creatina en el
paso determinante dela frecuencia. La creatina amidinohidrolasa convierte la
creatina en sarcosina y urea. En presencia de sarcosina oxidasa, lasarcosina es
oxidada a glicina, formaldehido y perxido de hidrogeno. La reaccin final
implica la oxidacin catalizada por peroxidasa de un leucoderivado para producir
un producto coloreado. Durante la fase inicial de la reaccin, la creatina
endgena presente en la muestra es oxidada.
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales:
Suero:
Varones: 0.66 1.25 mg/dL
Mujeres: 0.52 1.04 mg/dL
Orina:
Varones: 1000 2000 mg/dia*
Mujeres: 800 1800 mg/dia
*Concentracin de creatinina (mg/dL) x volumen de 24 horas (dL)= mg/da
6.13. PROTEINA C REACTIVA (CRP)
a) Significado clnico:
La protena C reactiva se sintetiza en el hgado y es una de las protenas de fase
aguda. En la respuesta de fase aguda se observa un aumento en las
concentraciones de varias protenas plasmticas, entre ellas la CRP.
Las determinaciones de la concentracin de CRP resultan tiles en la deteccin
y evaluacin de los trastornos inflamatorios, las lesiones tisulares y las
infecciones.
b) Fundamento del mtodo:
La protena C reactiva reacciona con el anticuerpo especfico formando
inmunocomplejos insolubles. La turbidez provocada por estos inmunocomplejos
es proporcional a la concentracin de PCR en la muestra y puede medirse
espectrofotomtricamente.
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales:
0 - 5 mg/l
6.14. CLORURO ( )
a) Significado clnico:
El cloruro es el principal anin del espacio acuoso extracelular, su importancia
fisiolgica estriba en el mantenimiento de la correcta distribucin del agua, la
presin osmtica y el equilibrio anion-cation normal en el compartimiento de
lquido extracelular. El cloruro aumenta en las situaciones de deshidratacin,
acidosis de los tbulos renales (acidosis metablica por hipercloremia) e infusin
excesiva de soluciones salinas isotnicas.
b) Fundamento del mtodo:
Unidades Convencionales:
Adultos: 98 107 (mmol/L)
Unidades Convencionales:
Suero:
Adultos en ayunas: 74 106 (mg/dL)
Orina:
Aleatorio: < 30
24 horas: < 500 mg/dia
LCR:
40 70 (mg/dL)
6.18. POTASIO
a) Significado clnico:
El potasio es el catin ms importante del lquido intracelular. La determinacin
del potasio srico se utiliza en la evaluacin del desequilibrio electroltico, las
arritmias cardiacas, la debilidad muscular, la encefalopata heptica y la
insuficiencia renal as como en la vigilancia de la cetoacidosis en la diabetes
mellitus y el tratamiento de reposicin hdrica por va intravenosa.
Ms del 90% de los pacientes hipertensos con aldosteronismo tienen cifras bajas
de + ; una baja cifra de + tambin es comn en los casos de vomitos, diarrea,
alcoholismo y deficiencia de cido flico. Los valores elevados de + se
producen cuando se efectua una infusin rpida de + , en la nefropata terminal,
en los casos de hemolisis, traumatismo, enfermedad de Adisson, acidosis
metabolica, inanicin aguda y en las urgencias mdicas agudas.
Normalmente, el + es fcilmente filtrado por el glomrulo, pero teinde a ser
conservado si el valor de + serico es bajo. El potasio urinario puede elevarse
al aumentar el cosnumo en la dieta, en el hiperaldosteronismo, la acidosis tubular
renal y en el comienzo de la alcalosis.
b) Fundamento del mtodo:
El slide VITROS + es un elemento analtico multicapa incorporado a un soporte
de polister que utiliza la potencimetria directa para la determinacin del potasio
inico. El slide consta de dos electrodos selectivos de iones, cada uno de ellos
con valinomicina (un ionoforo de potasio), una capa de referencia, y una capa de
plata y otra de cloruro de plata incorporada sobre un soporte de polister.
Una gota de la muestra de paciente y una gota del lquido de referencia VITROS
en mitades separadas del slide resulta en la migracin de ambos lquidos hacia
el centro del puente del papel. Conectando el electrodo de referencia al electrodo
indicador de la muestra se forma una unin liquida estable. Cada electrodo
produce un potencial elctrico en respuesta a la actividad del potasio que se le
aplica. La diferencia de potencial que se produce entre los dos electrodos es
proporcional a la concentracin de potasio en la muestra.
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales y SI:
Suero: 3,5 5,1 mmol/L
Plasma: 0,1 0,7 mmol/L inferior que el intervalo en suero
Orina (24 horas): 25,0 125,0 mmol/dia (dependiendo de la dieta)
a) Significado clnico:
El lactato deshidrogenasa es una enzima que se encuentra presente en el citosol
de todas las clulas humanas; cataliza la reduccin reversible de piruvato en
lactato usando NADH. Entre las causas de una LDH elevada figuran estados
neoplsicos, enfermedades cardiorrespiratorias hipoxias, infarto de miocardio,
anemia hemoltica, anemia megaloblastica, cirrosis heptica, infarto renal,
traumatismo, dao muscular, distrofia muscular, shock e hipotensin. En los
casos de infarto de miocardio, la LDH comienza a aumentar aproximadamente
12 horas despus de producirse el infarto y habitualmente vuelve a los niveles
normales al cabo de dos a cinco das.
b) Fundamento del mtodo:
En el slide se deposita una gota de muestra del paciente, que se distribuye
uniformemente desde la capa difusora a las capas subyacentes. La lactato
deshidrogenasa cataliza la conversin de piruvato y NADH en lactato y + .
La oxidacin del NADH, que se monitoriza por espectrofotometra de
reflectancia, se usa para medir la actividad del lactato deshidrogenasa.
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales y SI
313 618 (U/L)
6.20. LIPASA
a) Significado clnico:
Es una enzima digestiva producida principalmente por las clulas arcinares del
pncreas exocrino. Su funcin fisiolgica es hidrolizar los triglicridos de cadena
larga en el intestino delgado. La lipasa srica aumente rpidamente en pacientes
con pancreatitis aguda y recurrente, abscesos pancreticos o pseudoquistes,
traumatismo pancretico, cncer de pncreas, obstruccin de los conductos
biliares comunes e ingestin de frmacos txicos para el pncreas.
b) Fundamento del mtodo:
El mtodo incorpora colipasa, la cual facilita la adsorcin de la lipasa en las
micelas del sustrato en presencia de sales biliares. La lipasa cataliza la hidrolisis
de los esteres de triglicerol no solubles en agua. EL mtodo utiliza la enzima
diacetinasa para convertir el sustrato 2.3-diacetilglicerol a glicerol. La
glicerolcinasa convierte el glicerol a L- glicerofosfato. La L- glicerofosfato
oxidasa cataliza la oxidacin de L- glicerofosfato para generar perxido de
hidrogeno. La peroxidasa oxida un leucoderivado para producir un pigmento. El
cambio resultante en la densidad de reflexin se mide en 2 momentos diferente.
La diferencia de la densidad de reflexin es proporcional a la actividad de lipasa
presente en la muestra.
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales y SI:
23 300 (U/L)
6.21. SODIO (+ )
a) Significado clnico:
El sodio es el catin ms importante de los fluidos extracelulares. El rin regula
el contenido de sodio del organismo. Los niveles bajos de sodio pueden estar
causados por una perdida excesiva de orina, diarrea, enfermedad de Assison y
enfermedad de los tbulos renales. Pueden producirse niveles elevados de sodio
en la deshidratacin aguda, algunos tipos de lesin cerebral, coma diabtico e
ingestin excesiva de sales de sodio.
b) Fundamento del mtodo:
El slide consta de dos electrodos selectivos de iones, cada uno de ellos con
metilmonensina (un ionoforo del calcio), una capa de referencia, y una capa de
plata y otra de cloruro de plata incorporada sobre un soporte de polister.
Una gota de la muestra de paciente y una gota del lquido de referencia en
mitades separadas del slide resultan en la migracin de ambos lquidos hacia el
centro del puente de papel. Se forma una unin liquida estable que conecta el
electrodo de referencia al electrodo indicador de la muestra.
Cada electrodo produce un potencial electroqumico en respuesta a la actividad
del sodio. La diferencia de potencial entre los dos electrodos es proporcional a
la concentracin de sodio en la muestra.
c) Valores esperados:
Unidades Convencionales y SI:
Suero y plasma: 137 145 mmol/ L
Orina
Aleatorio: 30 90 mmol/ L
24 horas: 40 220 mmol/da
c) Valores de referencia:
LCR: 15-45 mg/dl en personas sanas. En personas de ms de 60 aos,
este rango se extiende hasta 60 mg/dl.
a) Significado clnico:
Los triglicridos son lpidos absorbidos en la dieta y tambin producidos en forma
endgena a partir de los carbohidratos. Su medicin es importante en el
diagnstico y manejo de las hiperlipidemias. Estas enfermedades pueden tener
origen gentico o ser secundarias a otras tales como nefrosis, diabetes mellitus
y disfunciones endcrinas. El aumento de triglicridos se ha identificado como
un factor de riesgo en enfermedades aterosclerticas.
b) Fundamento del mtodo:
triglicridos glicerol + acidos grasos
glicerol + ATP glicerol-1-P + ADP
glicerol -1-fosfato + 2 2 2 + dihidroxiacetonafosfato
2 2 2 + 4-AF + clorofenol quinonimina roja
c) Valores de referencia:
6.24. MAGNESIO
a) Significado clnico:
El magnesio (Mg) es uno de los iones ms abundantes del organismo. El 60%
del Mg del organismo se encuentra en los huesos y el resto est repartido entre
msculos y otros tejidos blandos. El Mg cumple un rol muy importante en la
fisiologa humana. Participa en el metabolismo energtico a travs de la
activacin del ATP, en la transferencia de fosfatos de alta energa y es el ion
activador de muchas enzimas involucradas en el metabolismo de lpidos,
carbohidratos y protenas. El Mg es un mediador en mecanismos de conduccin
y transporte a travs de membranas. Es esencial en la preservacin de
estructuras macromoleculares de DNA, RNA y ribosomas y en la formacin del
hueso y el mantenimiento de la presin osmtica. La hipomagnesemia est muy
asociada a la deficiencia de otros iones como el P, K y Ca. Las causas de
hipomagnesemia son mltiples: diarreas crnicas y agudas, sndromes de mala
absorcin, succin nasogstrica prolongada y vmitos, fstulas intestinales y
biliares, deterioro de la conservacin renal, diabetes mellitus, hipertiroidismo,
hiperaldosteronismo primario, alcoholismo crnico.
b) Fundamento del mtodo:
El magnesio presente en la muestra se une al clorofosfonazo III (CPZ III)
produciendo un incremento de absorbancia a 660 nm. El agregado de EDTA
sustrae el Mg del complejo Mg-CPZ III, libera el CPZ III y permite la lectura del
blanco. La diferencia de absorbancia entre Mg-CPZ III y CPZ III equivale a la
absorbancia debida slo al Mg. La presencia de EGTA evita que el calcio
interfiera en la reaccin.
c) Valores de referencia:
Suero o plasma: 1,7 a 2,5 mg/dl (0,70 a 1,05 mmol/l)
Orina: 60 a 210 mg/24hs 2,5 a 8,5 mmol/24 hs 4,10 a 13,80 mg/dl*
*Considerando un volumen de orina de 1,5 L/24 hs
6.25. FOSFORO
a) Significado clnico
El fsforo se encuentra en el organismo formando parte de compuestos
orgnicos (protenas, lpidos, carbohidratos, cidos nucleicos, etc.) o como
fosfatos inorgnicos, cumpliendo diversas funciones (transporte de energa,
estructura de los tejidos, mantenimiento del pH de los lquidos corporales). Los
tejidos seo y muscular lo contienen como constituyente esencial y es notable
su participacin en la composicin del tejido nervioso. Su concentracin en
circulacin est regulada entre otros factores por los niveles de vitamina D y las
glndulas end-crinas, observndose variaciones fisiolgicas de acuerdo a la
edad, ingesta, actividad fsica, embarazo, etc.
Fundamento del mtodo:
El fsforo inorgnico (Pi) reacciona en medio cido con el molibdato para dar un
complejo fosfomolbdico que se mide espectrofotomtricamente a 340 nm.
b) Valores de referencia:
Suero Adultos: 2,50 a 4,50 mg/dl
Nios: 4,00 a 6,50 mg/dl Orina 0,34 a 1,00 g/24 horas
6.26. BILIRRUBINA TOTAL (TB)
a) Significado clnico:
La bilirrubina, compuesto de degradacin de la hemoglobina, es captada por el
hgado para su conjugacin y excrecin en la bilis. Las alteraciones
hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar hiperbilirrubinemias.
La eritroblastosis fetal o anemia hemoltica del recin nacido es una patologa
provocada por incompatibilidad materno fetal en la que se produce una
destruccin excesiva de glbulos rojos. Esto resulta en un severo aumento de la
bilirrubina srica con el consecuente riesgo de difusin del pigmento al sistema
nervioso central produciendo toxicidad, por lo que la determinacin de la
bilirrubina en estos nios recin nacidos resulta sumamente importante.
b) Fundamento del mtodo:
La bilirrubina indirecta, unida a la albmina, es liberada por un tensioactivo. La
bilirrubina total reacciona con la sal de diclorofenildiazonio (DPD) formando un
azo compuesto de color rojo en solucin cida.
c) Valores de referencia:
Bilirrubina total en suero o plasma:
- Adultos: hasta 10 mg/l
- Recin nacidos:
NACIDOS A TERMINOS PREMATUROS
SANGRE DE CORDON < 20mg/l < 20 mg/l
Hasta las 24 hrs 14 87 mg/l < 80mg/l
Hasta las 48 hrs 34 115 mg/l < 120 mg/l
Del 3 al 5 dia 15 120 mg/l <160 mg/l
Los valores comienzan luego a disminuir para alcanzar el nivel promedio del
adulto al mes del nacimiento. En los prematuros, los niveles tardan ms en
alcanzar la normalidad, dependiendo del grado de inmadurez heptica
7. QUIMICA LIQUIDA
7.1. ESPECTROFOTOMETRIA
Se le denomina Espectrofotometra a la parte de la fsica que estudia a la luz y
su descomposicin espectral, en cada uno de sus componentes y su interaccin
con las substancias (analitos, substratos, enzimas, etc.) para poder cuantificar a
estas a partir de la absorcin de luz por las partculas y contrastando las con
patrones de concentracin conocida, esto gracias a la aportacin de los fsicos
alemanes Bunsen y Kirchoff, que en el ao 1853 desarrollaron el primer aparato
de este gnero llamado espectroscopio.
Se define por luz aquel tipo de energa electromagntica cuya velocidad es una
constante en el universo y que se desplaza a todas direcciones en forma de
partculas llamadas fotones a una velocidad de 299,792.458 km/seg. Y de la cual
hay dos fuentes principales:
I. Energa de alta radiacin: Generada por las estrellas, sper novas,
qusar, el sol, etc.
II. Energa de Baja radiacin: Generada por la energa Alterna o Directa.
Dependiendo de su generacin puede ser:
a. Energa Elctrica, Corriente alterna: Generacin de alta tensin:
220voltios, 110 v.
b. Energa Corriente Directa: utilizada por instrumentos electrnicos a 6v,
10v, 12v o 24 v.
La espectrofotometra, se basa en la luz y su refraccin a travs de un prisma o
filtro intersticial para descomponerla en sus distintas partes o para poder medir
y cuantificar reacciones qumicas en substancias, llmese a estas: Analitos,
Substratos o Enzimas. A esta refraccin para descomponer en sus distintas
partes a la luz se le llama Longitud de onda y se mide en nano metros (nm). O
mil millonsima parte de un metro. Para poder cuantificar una sustancia se
necesita que dos fenmenos ocurran:
TRAMITANCIA: Es el fenmeno de transmisin de la luz en un 100% en
un rango determinado.
ABSORBANCIA: Es la absorcin de la luz por las substancias presentes
en la cubeta previo a una calibracin a cero con agua destilada.
7.2. CARACTERISTICAS DEL EQUIPO DE QUIMICA LIQUIDA
El espectrofotmetro se usa en el laboratorio con el fin de determinar la
concentracin de una sustancia en una solucin, permitiendo as la realizacin
de anlisis cuantitativos.
El espectrofotmetro, construido mediante procesos avanzados de fabricacin,
es uno de los principales instrumentos diagnsticos y de investigacin
desarrollados por el ser humano. Utiliza las propiedades de la luz y su interaccin
con otras sustancias, para determinar la naturaleza de las mismas. En general,
la luz de una lmpara de caractersticas especiales es guiada a travs de un
dispositivo que selecciona y separa luz de una determinada longitud de onda y
la hace pasar por una muestra. La intensidad de la luz que sale de la muestra es
captada y comparada con la intensidad de la luz que incidi en la muestra y a
partir de esto se calcula la tramitancia de la muestra, que depende de factores
como la concentracin de la sustancia.
7.3. PARTES DEL ESPECTROFOTMETRO
1. Chasis
2. Porta cubeta
3. Selector de filtro
4. Selector de modo
5. .Ajuste grueso
6. Selector de longitud de onda
7. Indicador de longitud de onda
8. Pantalla
Fuente de luz: ilumina la muestra, generalmente son lmparas de
tungsteno o de xenn.
Monocromador: asla las radiaciones de longitud de onda deseada. Se
usa para obtener luz monocromtica.
Foto detectores: percibe la seal de mltiples longitudes de onda (hasta
16) simultneamente.
7.4. CUIDADOS
a) Coloque el instrumento en un lugar en donde no est sujeto a vibraciones,
calor excesivo, humedad o luz directa.
b) Proteja el instrumento del polvo. Nunca toque las superficies pticas tales
como lentes y filtros. Siga las instrucciones que da el fabricante para la
limpieza de tales componentes.
c) Permita que el instrumento se caliente antes de hacer
algn procedimiento.
d) Se debe hacer un chequeo peridico (cada semana) de la calibracin de
la longitud de onda, cuando se sospeche que ha variado, con el Tubo de
Didimium.
e) Verifique el 0 y el 100% T cada vez que se vaya a hacer lecturas y cuando
vare la longitud de onda.
f) Asegrese de que las cubetas estn limpias y libres de ralladuras y
huellas digitales. Esto debe hacerse cada vez que va a usarse.
8.1 GLUCOSA
a) Fundamento fisiolgico:
Cuando la concentracin de la glucosa es baja en la sangre, el pncreas produce
glucagn que estimula el desdoblamiento del glucgeno y la salida de glucosa
en el hgado. Cuando la concentracin de la glucosa sube, el pncreas secreta
insulina que estimula la absorcin de glucosa por las clulas y la conversin a
glucgeno en el hgado. Tambin es posible que frente a una situacin de estrs
se estimule la produccin de ACTH que acta sobre la corteza suprarrenal para
producir cortisol y otros compuestos. Estas hormonas aceleran la degradacin
de protenas y su conversin a glucosa en el hgado. La estimulacin de la
mdula suprarrenal, por fibras del sistema nervioso autnomo simptico,
produce adrenalina y noradrenalina que tambin aumenta la concentracin de
glucosa en la sangre.
a) Fundamento del mtodo:
La glucosa es oxidada a D-gluconato por la glucosa oxidasa (GOD), con
formacin de perxido de hidrgeno. En presencia de peroxidasa (POD), el fenol
y la 4- aminoantipirina (4-AA) se condensan por accin del perxido de
hidrgeno, formando una quinonaimina roja proporcional a la concentracin de
glucosa en la muestra.
-D-Glucosa + 2 O + 2 D-Gluconato + 2 2
2 2
4-AA + Fenol Quinonaimina + 2 O
b) Procedimiento:
En tres tubos marcados B (Blanco) S (Standard) y D (Desconocido) colocar:
B S D
Standard 10 ul
Muestra 10ul
Reactivo A 1 ml 1 ml 1 ml
c) Procedimiento:
Atemperar el Reactivo a temperatura ambiente.
BLANCO PATRON MUESTRA
PATRON TRIGLICERIDO (S) 10ul
MUESTRA 10ul
REACTIVO (A) 1,0 ul 1,0 ul 1,0 ul
c) Valores:
Valores clnicos actualizados de triglicridos empleados para clasificar los
grupos de riesgo.
TRIGLICERIDOS CLASIFICACION
< 150 mg/dL (< 1,70 mmol/L) Normal
150-199 mg/dL (1,70-2,25 mmol/L) Medio/Alto
200-499 mg/dL (2,26-5,63 mmol/L) Alto
500 mg/dL ( 5,65 mmol/L) Muy alto
8.3. COLESTEROL
a) Fundamento fisiolgico:
El colesterol es un lpido antiptico, que se encuentra en los tejidos y en las
lipoprotenas plasmticas como colesterol libre o ster de colesterilo. Es
sintetizado por numerosos tejidos a partir de acetil-CoA; es un elemento
indispensable en la produccin de esteroides, sntesis de hormonas (estrgenos)
principal componente de bilis, catalizador activo de intercambios celulares,
intervienen activamente en la sntesis e los andrgenos e indispensable en la
formacin de membranas celulares. El colesterol es un lpido antiptico, que se
encuentra en los tejidos y en las lipoprotenas plasmticas como colesterol libre
o ster de colesterilo.
b) Fundamento del mtodo:
El presente mtodo es un ensayo homogneo sin precipitacin, en dos pasos.
En el primero, se agrega un tensioactivo (Reactivo A) que solubiliza las partculas
lipoproteicas no LDL. El colesterol liberado es consumido por el colesterol
esterasa y el colesterol oxidasa en una reaccin sin desarrollo de color. Un
segundo tensioactivo (Reactivo B) solubiliza las partculas de LDL formndose,
por la presencia de enzimas y un Reactivo cromognico, un color proporcional a
la cantidad de LDL colesterol presente en la muestra.
c) Procedimiento
TUBOS BLANCO MUESTRA PATRON
Monoreactivo 1.0 ml 1,0 ml 1,0 ml
Muestra 10 ul
Patrn 10 ul
d) Valores:
COLESTEROL TOTAL CLASIFICACION
< 200 mg/dL (< 5,18 mmol/L) Deseable
200-239 mg/dL (5,18-6,2 mmol/L) Normal alto
> 240 mg/dL (> 6,2 mmol/L) Alto
8.4. CREATININA
a) Fundamento fisiolgico:
Creatina funciona al proporcionar un grupo de fosfato para el proceso de
creacin de energa. Durante la contraccin muscular, energa en forma de ATP
(adenosn Tri-fosfato) se utiliza para satisfacer las necesidades de alto uso
mediante la formacin de peso pesado. ATP rompe perder un grupo fosfato (es
decir, una p de ATP) y convertirse en ADP. Como los niveles de ATP agotando
en el msculo, un grupo fosfato se toma de Fosfocreatina para producir ATP de
la ADP. En efecto, la reaccin se recrea mediante el uso de fosfatos de
Fosfocreatina para reabastecer el msculo con almacenes de energa.
Con este mtodo de creacin de la ATP, los msculos pueden ser revigorizados
doble de rpido que el mtodo tradicional que es la gluclisis. Azcares y
carbohidratos se dividen para hacer ATP en esta instancia. Ya Fosfocreatina es
consumido rpidamente en los trabajos de alta intensidad de un fisicoculturista,
es por ello que la creatina se utiliza normalmente como parte de muchos
programas de levantamiento de peso que piden los entrenamientos cortos y de
alta intensidad. No sera ideal para ya las actividades que requieren resistencia
deportivas.
b) Fundamento del mtodo:
En medio alcalino regulado, la creatinina forma con el picrato un compuesto
coloreado anaranjado amarillento (Reaccin de Jaff). La cantidad de
cromgeno que se forma en la unidad de tiempo en un medio de pH y
temperatura preestablecidos y controlados, es directamente proporcional a la
concentracin de creatinina de la muestra.
c) Procedimiento:
I. Tcnica para suero o plasma
Equilibrar el Reactivo de Trabajo a la temperatura de reaccin (25o C). Antes de
agregar la muestra, llevar el aparato a cero con agua destilada. En dos cubetas
espectrofotom- tricas marcadas S (Standard) y D (Desconocido), colocar:
S D
REACTIVO DE TRABAJO 1,2 ml 1,2 ml
STANDARD 0,2 ml
MUESTRA 0,2 ml
Mezclar inmediatamente, iniciando al mismo tiempo el cronmetro y proseguir la
incubacin. A los 30 segundos exactos medir la absorbancia (S1 y D1) y
continuar la incubacin. Medir nuevamente la absorbancia (S2 y D2) a los 5
minutos (4 minutos 30 segundos despus de la primera lectura).
II. Valores:
Suero o plasma:
Hombre: 7 - 13 mg/l
Mujer: 6 - 11 mg/l
Orina:
Hombre: 14 - 26 mg/Kg/24 hs
Mujer: 11 - 20 mg/Kg/24 hs
8.5. BILIRRUBINAS
a) Fundamento fisiolgico:
La transformacin de los anillos pirrlicos del grupo hemo en bilirrubina implica
una serie de transformaciones bioqumicas absolutamente esenciales para su
excrecin. Aproximadamente el 80% de la bilirrubina proviene de la destruccin
diaria de los glbulos rojos, el otro 20% proviene de una eritropoyesis inefectiva
de la medula sea y en el hgado de las enzimas microsmicas P-450 y
citocromo B-5. Una vez sintetizada, la bilirrubina debe ser excretada, proceso
que involucra varios pasos.
Transporte de la bilirrubina. La bilirrubina, denominada tambin bilirrubina no
conjugada o indirecta, circula en el plasma unido a la albmina.
Normalmente en estas condiciones no atraviesa la barrera hematoenceflica.
Puede aparecer bilirrubina no conjugada libre (no unida a la albmina) en
condiciones en que la cantidad de bilirrubina supera la capacidad de unin de
la albmina. Esto puede ocurrir porque hay cifras muy altas de bilirrubina,
hipoalbuminemia o presencia de sustancias y factores que desplazan o
debilitan la unin de la bilirrubina con la albmina. La presencia de bilirrubina
no conjugada libre es siempre anormal y lleva al pasaje al SNC y eventual
dao del cerebro.
b) Fundamento del mtodo:
El cido sulfanlico diazotado transforma la bilirrubina en azobilirrubina coloreada
que se determina fotomtricamente. De las dos fracciones de bilirrubina
presentes en suero, glucuronato de bilirrubina y bilirrubina libre asociada a
albmina, slo reacciona directamente la primera, mientras que la bilirrubina libre
precisa ser disociada de la protena por un acelerador para que reaccione. La
bilirrubina indirecta se calcula por diferencia entre la bilirrubina total (con
acelerador) y la directa (sin acelerador). Los conceptos directa e indirecta
se refieren exclusivamente a las caractersticas de reaccin en presencia o
ausencia de aceleradores o solubilizantes y equivalen slo de forma aproximada
a las dos fracciones de bilirrubina citadas.1,2
c) Procedimiento:
BLANCO DIRECTA TOTAL
MX 200 ul 200 ul 200 ul
2 2.5 ml 2.5 ml -
Ruo A - - 2.5 ml
Ruo B 200 ul - -
Diazo - 200 ul 200 ul
Encubar a 5 minutos y realizar la lectura en el espectrofotmetro.
d) Valores
Bilirrubina total en suero o plasma:
- Adultos: hasta 10 mg/l
- Recin nacidos:
NACIDOS A TERMINOS PREMATUROS
SANGRE DE CORDON < 20mg/l < 20 mg/l
Hasta las 24 hrs 14 87 mg/l < 80mg/l
Hasta las 48 hrs 34 115 mg/l < 120 mg/l
Del 3 al 5 dia 15 120 mg/l <160 mg/l
Los valores comienzan luego a disminuir para alcanzar el nivel promedio del
adulto al mes del nacimiento. En los prematuros, los niveles tardan ms en
alcanzar la normalidad, dependiendo del grado de inmadurez heptica
9. FORMULAS DE BIOQUIMICA
a) BILIRRUBINAS:
1. TB BU (BI) = BD (BC + B delta)
b) VLDL
a. = VLDL
5
c) LDL
1. VLDL + HDL = X
2. X COL = LDL
3. VLDL + HDL COL = LDL
d) LIPIDOS TOTALES
i. LDL + HDL COL + Tg + COL = LT
e) GLOBULINA:
TP ALB = Globulina
CONCLUSIONES
En estos dos meses de rotacin mis conclusiones realizadas y objetivos
plasmados fueron cumpliendo poco a poco.
En la diferencia que tiene estos dos equipos, y que no se igualar los resultados
de estos dos equipos, cada equipo tiene diferentes calibradores y rangos de
valores.
A determinar cules son las funciones que cumple cada analito en nuestro
organismo y que funcin cumple.
ANEXOS
CARTUCHO
(ESTUCHE) CON SU PIPETAS PARA PUNTAS
CAJAS DE CARTUCHOS
RESPECTIVO AMARILLAS Y AZULES
CON LOS DIFERENTES
ANALITOS REFRIGERADOS ANALITO Y CODIGO
DE 2 8 C