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PARTE - 2
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ITENS A SEREM ABORDADOS
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METABOLISMO E CRESCIMENTO
MICROBIANO (BACTRIAS,
FUNGOS E ARQUEIAS)
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SERES VIVOS
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Carl Richard Woese (1928-2012)
Microbiologista norte-americano que definiu o
dominio Archaea (um novo domnio dentro dos
seres vivos) em 1977, pela anlise filogentica
do RNAr (16S), por PCR.
Woese, C.R., O. Kandler, & M.L. Wheelis
(1990). "Towards a natural system
of organisms: Proposal for the domains
Archaea, Bacteria, and Eucarya.
Proc.Natl. Aca. Sci. USA 87:4576-4579.
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Sistema dos Trs Domnios
Carl Woese (1990)
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Carl Woese (1990) 8
ARQUEAS
Membrana celular - lpidos associao de glicerol-ter
glicerol-ster (bactrias e eucariotas)
Parede celular - no formada por peptidoglicanos
bactrias que os possuem. As arqueas possuem
polissacardeos e outras apresentam apenas protenas
Flagelo na composio e desenvolvimento em relao ao
flagelo das bactrias.
Ausncia de ncelo celular = bactrias
Processos de transcrio e sntese proteica so = idnticos
aos dos eucariotas.
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ESTRUTURAS CELULARES
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ARQUEAS
As arqueas so pouco conhecidas devido s dificuldades de acesso aos seus
hbitats e de coleta de material, alm da grande diversidade de seus processos
bioqumicos.
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ARQUEAS - HALFITAS
As halfilas exigem concentraes de sal muito altas.
Halobacterium formato de
basto.
Halobacterium salinarum
As halfilas em grandes concentraes de sal.
ARQUEAS TERMFILAS
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CARACTERISTICAS
GERAIS DOS FUNGOS
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CANDIDASE
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CANDIDASE
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CANDIDASE
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CANDIDASE
21
CANDIDASE
22
CANDIDASE
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CANDIDASE
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DOMINIO BACTRIA
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CRESCIMENTO MICROBIANO
Aumento do nmero de microrganismos.
PRECURSSORES METABLICOS
MACROMOLCULAS
MO MO
DIVISO CELULAR
MO MO 26
CRESCIMENTO
SISTEMA FECHADO (TUBO, FRASCO OU BIORREATOR) O CRESCIMENTO EXPONENCIAL NO PODE OCORRER
INDEFINIDAMENTE.
FALTA DE NUTRIENTES
ACMULO DE SUBPRODUTOS TXICOS
EQUILBRIO MULTIPLICAO E MORTE
ATIVAO DE ENZIMAS QUE
NMERO DE BACTRIAS (LOG)
ADAPTAO FASE 4
2 Estacionria
FASE Lag
TEMPO 27
CRESCIMENTO
Bactrias, algas unicelulares e
leveduras que se multiplicam por diviso
binria, temos: 21 > 22 > 23> 24
Nmero de bactrias
Log do nmero de
bactrias
Nmero de
MO
Nmero de
geraes
Valor
exponencial
Tempo
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Fase lag - Perodo de adaptao da cultura
adaptao das bactrias as condies do meio.
preparao dos complexos enzimticos
reparao das clulas com danos.
processo de diviso pouco ou ausente
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CRESCIMENTO
INFLUNCIA DOS FATORES FSICOS
o Temperatura
o pH
o Presso osmtica
INFLUNCIA DOS FATORES QUMICOS
Carbono
Nitrognio, enxofre, fsforo
Oxignio
INFLUNCIA DOS FATORES NUTRICIONAIS
Carbono
Nitrognio, enxofre, fsforo
Oxignio
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INFLUNCIA DOS FATORES
FSICOS
TEMPERATURA
Temperatura de crescimento
Mnima - menor temperatura onde capaz de crescer.
tima - onde apresenta melhor crescimento.
Mxima - mais alta temperatura para crescer.
Classificao primria:
Psicrfilos temperaturas baixas (-10 a 20C )
Psicotrficos - temperatura de refrigerao (0 a 30C)
Mesfilos temperaturas moderadas (10 50C)
Termfilos temperaturas altas (40 70C)
Termfilos extremos ou hipertermfilos (tima em >
80C)
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CLASSIFICAO MICROBIANA
TEMPERATURA
Termfilos
Hipertermfilos
Mesfilos
Psicrotrficos
Psicrfilos
Taxa de crescimento
Temperatura (C) 34
INFLUNCIA DOS FATORES
FSICOS
pH
Fungos
filamentosos e
leveduras
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INFLUNCIA DOS FATORES
FSICOS
A plasmlise a retrao do volume das clulas por perda de gua. Este
fenmeno se d quando a clula colocada em meio hipertnico, ou seja,
quando o meio exterior mais concentrado que o citoplasma e a clula
perde gua por osmose.
Soluo
isotnica
O MO vivem em altas quantidades
de sal so chamados de halfilos
Soluo
Hipotnica
O MO vivem em altas quantidades
Soluo de acar so chamados de
Hipertnica sacarfilos.
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INFLUNCIA DOS FATORES
QUIMICOS
Corresponde base de todas as molculas orgnicas:
Aminocidos
cidos orgnicos
Carboidratos
Bases nitrogenadas, etc.).
Peso seco bacteriano
(50% Carbono, 14% Nitrognio e 4% Enxofre e Potssio)
Obteno do nitrognio:
Decomposio matria orgnica proteica
ons amnia (NH4)
Nitratos
Fixao do nitrognio - alguns microrganismos so capazes de
absorver nitrognio atmosfrico
Ex.: Rhizobium e Bradyrhizobium
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INFLUNCIA DOS FATORES
QUIMICOS
Necessrios em grande quantidade. MACRONUTRIENTES
Papel importante na estrutura e metabolismo.
P Sntese de cidos nuclicos, ATP
S Estabilidade de aminocidos, componente de vitaminas
K Estabilidade dos cidos nuclicos, bomba de Na/K
Mg Estabilidade dos ribossomos
Ca Estabilidade da parede celular e termoestabilidade de endsporos
Na Requerido em maior quantidade por microrganismos marinhos.
Bactrias haloflicas extremas no crescem com menos de 15 % de sal.
Fe Papel-chave na respirao, componente dos citocromos e das
protenas envolvidas no transporte de eltrons.
MICRONUTRIENTES
Necessrios em quantidades mnimas (Zn, Cu, Mn, Co, Mo e B).
Funes enzimticas e estruturais das biomolculas
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COMPONENTES NECESSRIOS
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1)Aerbicos estritos
2)Anaerbicos estritos
3)Anaerbico facultativo
4)Microaerfilo
5)Anaerbicos aerotolerantes
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METABOLISMO
Catabolismo reaes qumicas que liberam energia a partir da degradao de
substncia orgnicas.
Energia
CATABOLISMO ANABOLISMO
CRESCIMENTO
E
MULTIPLICAO 43
FONTE DE ENERGIA
LUMINOSA
COMPOSTOS ORGNICOS
FOTOSSINTETIZANTES (GLICOSE)
LITOTRFICOS
ATP
BIOSSNTES DE DIVISO CELULAR
MACROMOLCULAS
MONTAGEM DE ESTRUTURAS
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ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS:
MTODOS DE ISOLAMENTO E COLORAO
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MEIOS DE CULTURA
No existe um meio de cultura universal, entretanto existem vrios tipos meios para
diversas finalidades.
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QUANTO A COMPOSIO
Composio dos meios simples Composio dos meios ricos
Fonte de CHO carboidratos Composio do simples + adio de
suplementos:
Fonte de CHO e N peptonas
AS- sangue de carneiro;
Fonte de N e S - nitratos e sulfatos;
ACHOCO: sangue, suplementos V e
Agar-agar; X, vitaminas, ferro...;
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COMPOSIO DOS MEIOS
DIFERENCIAIS
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MEIO PARA FUNGOS
Todos os fungos so heterotrficos
Geralmente so utilizados meios ricos contendo grande variedade de compostos
orgnicos providos pela peptona e extratos de carne ou soja.
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CLASSIFICAO DOS MEIOS DE
CULTURA
De acordo com a finalidade bacteriolgica ou micolgica os meios especiais podem
ser classificados em:
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Seletivos - os que contm substncias que inibem o desenvolvimento
de determinados grupos de MO permitindo o crescimento de outros.
Meios com telurito de potssio (para isolamento de Corynebacterium
diphtheriae)
gar Salmonella-Shigella (SS)
gar MacConkey
Meios com sais biliares e verde brilhante para isolamento seletivo de
Salmonella
Meios com 7,5% de cloreto de sdio
Meio Baird-Parker, para isolamento de Staphylococcus aureus
Meios com antibiticos para isolamento de diversos MO (TSC, SFP,
meio de Blaser, meio de Skirrow, etc.).
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Meios de triagem - meios que avaliam determinadas atividades
metablicas permitindo caracterizao e identificao presuntiva de muitos
microrganismos.
gar trplice acar e ferro
Meio Instituto Adolfo Lutz
Meio de uria, etc.);
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2. GAR
CHOCOLATE
63
3. GAR THAYER-MARTIN
64
4. GAR
MacConkey
65
5. CLED
66
6. GAR EOSINA
METILENO BLUE (EMB)
67
6. GAR EOSINA
METILENO BLUE (EMB)
68
7. gar Salmonella-Shigella (SS)
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um meio no seletivo
onde crescem diversas
bactrias.1 O meio
rico em triptona e
peptona, fonte de
70
71
GAR
MYCOSEL
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GAR
SABOURAUD Meio para cultivo,
isolamento e identificao
de fungos patognicos e
leveduras. O timo
crescimento dos fungos se
deve s altas
concentraes de
carboidratos.
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MEIO LwensteinJensen
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Microplacas com diferentes meios de
cultura para identificao de
enterobactrias.
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Meio de Rugai & Arajo modificado por Pessoa & Silva ou
meio IAL (Meio Instituto Adolfo Lutz)
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TIPOS DE COLORAES
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MTODO DE GRAM DIFERENCIAO ENTRE
GRAM POSITIVO E NEGATIVO
TCNICA DE GRAM
Confeccionar o esfregao;
Corar com violeta de cristal por 60seg FIXAO
Lavar com esguicho de gua
destilada;
CRISTAL VIOLETA
Cobrir com Iodo ou Lugol por 60seg
Lavar com esguicho de gua
destilada; IODO OU LUGOL
Descorar com lcool a 95%, ou
acetona, 10-20 seg; DESCOLORAO
Lavar com esguicho de gua
destilada;
Corar com safranina por 60 seg COLORAO
DIFERENCIAL COM
Lavar com gua destilada, secar e
SAFRANINA
observar ao microscpio. 81
GRAM NEGATIVA
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MTODO DE ZIEHL- NEELSEN COLORAO
PARA BAAR
COLORAO ZIELHL-NEELSEN
Confeccionar o esfregao
Cobrir a lmina com fucsina fenicada
Aquecer a lmina at emisso de vapores
Aguardar 5 a 8 min
Lavar com gua corrente;
BAAR - vermelho. Cobrir a lmina com lcool-cido 3% at
NO BAAR - azul. descorar totalmente o esfregao;
Lavar com gua corrente;
Cobrir a lmina com azul de metileno por 1 min
Lavar com gua corrente;
Secar;
Observar.
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BCTERIAS ALCOOL
CIDO RESISTENTE
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Mycobacterium tuberculosis corado com a tcnica de Ziehl-Neelsen
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FONTANA-TRIBONDEAU PARA
COLORAO DE ESPIROQUETAS
Esfregao fino,
seco ao ar.
Reagentes:
Soluo A Fixador
Soluo B Mordente
Soluyo C Impregnadora
Tcnica:
1 Cobrir o esfregao com o fixador (soluo A) durante 1 minuto.
2 Lavar cuidadosamente com gua corrente.
3 Cobrir o esfregao com o mordente (soluo B) e aquecer a lmina at a
emisso de vapores. Esfriar.
4 Lavar com gua corrente, e aps, com gua destilada.
5 Cobrir o esfregao com a soluo impregnadora (soluo C) e aquecer at a
emisso de vapores.Deixar 30 segundos.
6 Lavar com gua corrente e secar ao ar.
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GOOD LUCK!
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