NH3

indica los analizadores en los que pueden emplearse los estuches

Espaol

Amonaco
704 717 747 902 904 911 914 917 MODULAR
Cat. no. Bottle Contents 912 P D

11877984 1 Substrato tamponado, 2 x 15 ml

2 NADPH para 2 x 4,65 ml
2a Substrato tamponado, 2 x 20 ml
2b GLDH para 2 x 0,5 ml

No todos los analizadores y kits estn disponibles en cada pas. Para otras metdicas especficas, dirjase al representante de Roche Diagnostics en su pas.
Funcin Conservacin y estabilidad
Para la determinacin cuantitativa de amonaco (NH3 ) en plasma con Componentes no abiertos del estuche: hasta la fecha de caducidad, a
analizadores automticos de qumica clnica. 28C
GLDH reconstituida: 42 das, a 2-8C, hermticamente cerrada.
Generalidades R1: 28 das abierto y refrigerado en el analizador, protegido contra la
En 1859, Berthelot1 describi una reaccin entre amonaco y una contaminacin
solucin alcalina de hipoclorito de fenol, apropiada para la R2: 14 das abierto y refrigerado en el analizador, protegido contra la
determinacin de amonaco. Sin embargo, el ensayo se vio afectado contaminacin.
por la aparicin de interferencias, por lo que se han propuesto varias
alternativas para eliminar los problemas inherentes a este mtodo. Obtencin y preparacin de las muestras
En 1963, Kirsten et al introdujeron un mtodo enzimtico para le Plasma EDTA, no hemolizada. Extraer la muestra de una vena sin
determinacin de amonaco que se basaba en la accin de la glutamato estasis y centrifugarla lo antes posible en un tubo tapado.
deshidrogenasa.2 Si bien este mtodo enzimtico mostr ser altamente Estabilidad: Colocar la muestra sobre hielo y proceder inmediatamente
especfico y utilizaba la evaluacin directa basada en la absorcin molar al ensayo.6
de NADH, surgieron varios problemas, entre ellos la dificultad de Plasma separado: 3 horas a 4C en un envase tapado 7
estabilizar la reaccin final. Centrifugar las muestras que contengan precipitado antes de realizar
El mtodo aqu presentado se basa en la modificacin de Da Fonseca- el ensayo.
Wollheim de la reccin de Kirsten. 3 El mtodo enzimtico original fue
mejorado por la adicin de ADP a la mezcla reactiva, el uso de NADPH Procedimiento del test
en lugar de NADH para eliminar las interferencias de la reaccin de Material suministrado
LDH endgena con piruvato endgeno, y la sustitucin de plasma por Soluciones listas para el uso anteriormente descritas
sobrenadante desproteinizado. Material adicional requerido
Las determinaciones de amonaco se utilizan en el diagnstico y el Calibradores y controles segn se indica ms adelante
tratamiento de hepatopatas graves tales como cirrosis, hepatitis y NaCl al 0,9%
sndrome de Reye. Equipo de laboratorio usual

Principio del test Realizacin del test

Ensayo enzimtico cintico NOTA: No deje los recipientes de muestra, calibrador y control de calidad
En la reaccin catalizada por la glutamato deshidrogenasa (GLDH), el abiertos durante ms de 15 minutes, ya que los resultados podran verse
amonaco reacciona con a-cetoglutarato y NADPH para formar afectados. Debido a la evaporacin del amonaco, los ensayos de
glutamato y NADP +. repeticin deben efectuarse con recipientes recin llenados.
Muestra y adicin de R1 (substrato tamponado)
Adicin de R2 (NADPH/GLDH/substrato tamponado) e inicio de Consultar el manual correspondiente del operador y/o el apartado de
la reaccin: programacin del analizador de la presente metdica en cuanto a las
GLDH instrucciones especficas del analizador.
a-cetoglutarate + NH4+ + NADPH > L-glutamato + No se garantiza la funcin de aplicaciones no validadas por Roche
NADP + + H20 Diagnostics; stas debern ser definidas por el usuario.

La inclusin de ADP en la mezcla reactiva produce una aceleracin de Calibracin

la tasa de conversin y estabiliza la GLDH dentro del margen de pH
indicado.
La cantidad de NADPH oxidada durante la reaccin equivale a la
cantidad de amonaco presente en la muestra, pudiendo medirsela
fotomtricamente mediante la disminucin resultante de la
absorbancia. 4,5
Concentraciones de las soluciones listas para el uso
R1 Substrato tamponado
Tampn de trietanolamina: 151 mmol/l, pH 8,6; a-cetoglutarato :
16,6 mmol/l; ADP: >1,2 mmol/l; conservantes
R2 NADPH/GLDH/substrato tamponado
NADPH: >458 mol/l; GLDH:>24,3 U/ml (EC 1.4.1.3; hgado bovino;
25C); Tampn de trietanolamina: 151 mmol/l, pH 8,6;
a-cetoglutarato: 16,6 mmol/l; ADP: > 1,2 mmol/l; conservantes
Medidas de precaucin y advertencias
Slo para diagnstico in vitro.
Observe las medidas de precaucin usuales para la manipulacin de
reactivos.
Eliminar los residuos segn las normas locales vigentes.
Preparacin de los reactivos
R1: Listo para el uso
R2: Etapa 1: Reconstituir un frasco 2b (GLDH) con 0,5 ml del frasco
2a (substrato tamponado). Dejarlo reposar durante 10 minutos a
temperatura ambiente, agitando de vez en cuando cuidadosamente.
Etapa 2: Reconstituir un frasco 2 (NADPH) con 4,5 ml del frasco 2a
(substrato tamponado). Mezclar mediante inversin suave.
Etapa 3: Adicionar 150 l del frasco reconstituido 2b (GLDH) al frasco
2 de la etapa 2. Mezclar mediante inversin suave. Utilizar el
adaptador para trasvasar al frasco vaco R2 adjunto. Antes del uso,
eliminar todas las burbujas de la superficie de la solucin lista para
el uso.
Estandarizacin: El mtodo fue estandarizado frente a un estndar
gravimtrico .
S1: NaCl al 0.9%
S2: Precical Calibrador Alcohol Etlico/Amonaco/Lactato
Ref. 11775804, USA #1775804
Intervalo de calibraciones
Se recomienda la calibracin de 2 puntos:
cada 24 horas
despus del cambio del frasco de reactivo
despus del cambio del lote de reactivo
segn lo especificado por los procedimientos de control de calidad
No se requiere la verificacin de la calibracin.
Control de calidad
Emplear Precitrol Alcohol Etlico/Amonaco/Lactato controles bajos y altos,
Precitrol Alcohol Etlico/Amonaco medianos, u otro material de control
apropiado. NOTA: La mayora de los sueros de control que contienen
protena muestran valores de amonaco inestables; por consiguiente,
debido a la falta de validez de los valores resultantes, se desaconseja
utilizarlos para el control en este ensayo.
Los intervalos y lmites de control han de adaptarse a los requisitos
individuales del laboratorio.
Los valores obtenidos deben hallarse dentro de los lmites establecidos.
Cada laboratorio debera detallar sus propias medidas de correccin en
caso de obtener valores situados fuera del lmite.
Clculo
Los analizadores Roche/Hitachi calculan automticamente la
concentracin de amonaco de cada meustra.
Factor de conversin : g/dl x 0,587 = mol/l 6
Lmites del anlisis - interferencias 8
Criterio: recuperacin dentro de 10% del valor inicial
Ictericia: Sin interferencia hasta un ndice I de 60 (concentracin
aproximada de bilirrubina conjugada y no conjugada: 60 mg/dl).
Hemlisis:
Sin interferencia hasta un ndice H de 50 (concentracin aproximada
de hemoglobina : 50 mg/dl).
Lipemia (Intralipid): Sin interferencia hasta un ndice L de 250
(concentracin aproximada de triglicridos: 500 mg/dl). No existe una
concordancia satisfactoria entre el ndice L (que corresponde a la turbidez)
y la concentracin de triglicridos. Tambin pueden observarse errores
de extincin a causa de un incremento de la extincin.
Intervalo de medicin
Plasma: 10-1000 g/dl (5,87-587 mol/l)
Bibliografa
1 Berthelot MPE. Repert Chem Appl. 1859:282.
2 Kirsten E, et al Biochem Z. 1963;337:312.
3 Da Fonseca-Wollheim F. Z Klin Chem Klin Biochem.
1973;11:421,426.
4 Siegel JM, Montgomery GA. Arch Biochem/Biophys.
1956;82:288.
5 Hohorst HJ. Biochem Z. 1956;328:507.
6 Tietz NW. Clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd ed. Philadelphia,
PA: W.B. Saunders Co; 1995:44.
7 Kaplan LA, Pesce AJ. Clinical Chemistry Theory, Analysis and
Correlation. St. Louis, Mo: CV Mosby Co; 1984:1231.
8 Datos archivados por Roche Diagnostics.
9 Prellwitz W, et al Med Welt. 1976;27:1277.
10 Passing H, Bablok W. A New Biometrical Procedure for Testing
the Equality of Measurements from Two Different Analytical
Methods. J Clin Chem Clin Biochem 1983; 21:709720.
11 Bablok W et al A General Regression Procedure for Method
Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988; 26:783790.

Dilucion de la muestra
Diluir manualmente aquellas muestras que indiquen concentraciones
superiores al intervalo de medicin con agua recin destilada o
desionizada exenta de amonaco (p.ej.,. 1 + 1). Multipicar el resultado
por el factor de dilucin correspondiente (p.ej., 2). NOTA: No utilice
resultados procedentes del rerun automtico si no se ha introducido
una nueva muestra.

Intervalo de referencia 9
Varones: 25-94 g/dl (14,7- 55,3 mol/l)
Mujeres: 19-82 g/dl (11,2-48,2 mol/l)

Cada laboratorio debera comprobar si los intervalos de referencia

pueden aplicarse a su colectivo de pacientes y, en caso necesario,
establecer su propio intervalo de referencia.
Para el diagnstico, los resultados del ensayo de amonaco deberan
ser valorados siempre teniendo en cuenta la historia clnica del
paciente, los exmenes clnicos y otros hallazgos.

Caractersticas del test

A continuacin, se indican los datos obtenidos con un analizador Roche/
Hitachi. Los resultados obtenidos por los distintos laboratorios pueden
diferir de estos valores.

Imprecisin 8
La reproducibilidad se determin empleando controles y muestras
humanas en un protocolo interno: n = 21. Se obtuvieron los siguientes
resultados.

Intraserie dia a dia

Muestra Media DE %CV Media DE %CV
g/dl g/dl g/dl g/dl

Plasma humano 574,8 7,33 1,3 610,9 12,65 2,10

Precitrol E/A/L* Low 67,5 2,64 3,9 72,5 5,37 7,40

Precitrol E/A/L* Mid 496,8 3,65 0,7 504,5 10,47 2,10

Precitrol E/A/L* = Precitrol Ethyl Alcohol/Ammonia/Lacate

Sensibilidad analtica (lmite de deteccin inferior)8

Lmite de deteccin: 10 g/dl (5,87 mol/l)
El lmite de deteccin inferior indica la concentracin mnima medible
de la sustancia que puede distinguirse de cero. Este lmite se calcula
como tres desviaciones estndar de 21 repeticiones del estndar ms
bajo.

Comparacin de mtodos 8
La comparacin de la determinacin de amonaco en el Roche/Hitachi 911
por el mtodo de Roche Diagnostics (570/340 nm) (y) con otra Roche
Diagnostics determinacin de amonaco (415/340 nm) (x) proporcion la
siguiente correlacin (g/dl):
Passing/Bablok 10,11 Regresin lineal
y = 0,620 + 0,996 x y = -0,598 + 0,995 x
r = 0,999 r = 0,999
DE (md 95) = 12,66 Sy.x = 8,86
Nmero de muestras determinadas: 44
Las concentraciones de las muestras se situaron entre 7 y 958 g/dl.
Programaciones de los analizadores
Para los EEUU: Para informaciones adicionales sobre la programacin
del analizador, consultar la hoja de aplicacin y/o el boletn del cliente.
Roche/Hitachi 914:
La programacin del analizador est indicada en las instruccciones
especficas del analizador.
Roche/Hitachi 902/911/912/917/MODULAR:
La programacin del analizador est incluida en el diskette de aplicacin
o el cdigo de barras correspondientes.

Roche/Hitachi 717
Temperatura: 37C

PROGRAMA 2 PARAMETROS QUIMICOS

TEST [NH3]
METODO ANALISIS [2(2 PUNTOS)] [28] [36]
VOLUMEN MUESTRA [20] [10]
VOLUMEN R1 [200] [100] [NO]
VOLUMEN R2 [50] [20] [NO]
LONGITUDES DE ONDA [570] [340]
CALIBRACION [LINEAL] [0] [0]
STD. (1) CONC.-POS. [ ---- ] [ ---- ]
STD. (2) CONC.-POS. [ ---- ] [ ---- ]
STD. (3) CONC.-POS. [0] [0]
STD. (4) CONC.-POS. [0] [0]
STD. (5) CONC.-POS. [0] [0]
STD. (6) CONC.-POS. [0] [0]
LIMITE SD [0.1]
LIMITE DUPLICADO [20]
LIMITE SENSIBIL. [0]
LIMITE ABS. (IN/DE) [0] [DECRECIENTE]
LIMITE PROZONA [-32 000] [INFERIOR]
VALORES REFERENCIA [ ---- ] [ ---- ]
VALORES DE ALARMA [ ---- ] [ ---- ]
FACTOR ANALIZADOR [1.00]

---- a introducir por el operador

Roche/Hitachi 902

No <Test>
1 Nombre Test NH3
2 Tipo Ensayo (Mtodo) 2 Punto Kin.
3 Twin 0
4 Tiempo Reaccin 10
5 Punto Ensayo 1 21
6 Punto Ensayo 2 26
7 Punto Ensayo 3 0
8 Punto Ensayo 4 0
9 Long. Onda (SEC) 570
10 Long. Onda (PRAL) 340
11 Volumen Muestra 20
12 Volumen R 1 200
13 Pos. R 1 .....
14 Tamao Frasco R 1 Grande
15 Volumen R 2 0
16 Pos. R 2 .....
17 Tamao Frasco R 2 Pequeo
18 Volumen R 3 50
19 Pos. R 3 .....
20 Tamao Frasco R 3 Pequeo
21 Tipo Calib. (Tipo) Lineal
22 Tipo Calib. (Peso) 0
23 Conc. Calib. 1 0
24 Pos. Calib. 1 .....
25 Conc. Calib. 2 .....
26 Pos. Calib. 2 .....
27 Conc. Calib. 3 0
28 Pos. Calib. 3 0
29 Conc. Calib. 4 0
30 Pos. Calib. 4 0
31 Conc. Calib. 5 0
32 Pos. Calib. 5 0
33 Conc. Calib. 6 0
34 Pos. Calib. 6 0
35 S1 ABS 0
36 Factor K 10000
37 Factor K 2 10000
38 Factor K 3 10000
39 Factor K 4 10000
40 Factor K 5 10000
41 Factor A 0
42 Factor B 0
43 Factor C 0
44 Lmite SD 0.1
45 Lmite Duplicado 11
46 Lmite Sens. 0
47 Lmite ABS S1 (B) -32000
48 Lmite ABS S1 (A) 32000
49 Lmite ABS 5000
50 Lmite ABS (D/C) Decreciente
51 Lmite Prz. 0
52 Lmite Prz. (I/S) Inferior
53 Prz. (Punto Final) 35
54 Valores Ref. (B) .....
55 Valores Ref. (A) .....
56 Factor Instr. (a) 1.0
57 Factor Instr. (b) 0.0
58 Asign. Tecla ..... Para ms detalles, vanse el manual del usuario del analizador Roche/Hitachi
correspondiente, las hojas de aplicacin especficas del analizador y las metdicas
de los calibradores y de los sueros de control.
.... a introducir por el operador
= Cambios o suplementos significativos

2001 Roche Diagnostics.

054505903
2001-12

Roche Diagnostics GmbH

D-68298 Mannheim