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UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR DRA. OFELIA CORDOVA PAZ

UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR DRA. OFELIA CORDOVA PAZ SOLDÁN

BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

DRA. OFELIA CORDOVA PAZ SOLDÁN
DRA. OFELIA CORDOVA PAZ SOLDÁN

CIEN 579

Fecha inicio/fin :

03/04/2017 al 27/07/2017

Semana 10

Ácidos Nucleicos:

ADN

Estructura.

Funciones.

ARN.

y

Replicación del ADN. Concepto. Mecanismo molecular. Enzimas participantes. Proceso de replicación en procariotaa. Diferencia entre procariotas y eucariotas.

Miescher en 1871 aisló del núcleo de las células de pus una sustancia ácida rica

Miescher en 1871 aisló del núcleo de las células de pus una sustancia ácida rica en fósforo que llamó "nucleína". Un año más tarde, en 1872, aisló de la cabeza de los espermas del salmón un compuesto que denominó "protamina" y que resultó ser una sustancia ácida y otra básica. El nombre de ácido nucleico procede del de

"nucleína" propuesto por Miescher.

ACIDOS NUCLEICOS

y otra básica. El nombre de ácido nucleico procede del de "nucleína" propuesto por Miescher. ACIDOS

COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS

•

La hidrólisis química

completa de un ácido

nucleico da lugar a una mezcla equimolar de: una base nitrogenada, una pentosa y ortofosfato

Los ác. nucleicos son las moléculas que contienen la información que prescribe la secuencia de aminoácidos en las proteínas

Todos los organismos vivos contienen ácidos nucleicos en forma de ácido dexosirribonucleico (DNA) y ácido ribonucleico (RNA).

Algunos virus sólo contienen DNA, mientras que otros sólo poseen RNA.

EL DNA y el RNA tienen grandes semejanzas químicas. Por sus estructuras primarias ambos son polímeros lineales compuestos por

monómeros denominados nucleótidos

NUCLEÓSIDOS y NUCLEÓTIDOS

NUCLEÓSIDOS y NUCLEÓTIDOS
NUCLEÓSIDOS y NUCLEÓTIDOS
NUCLEÓSIDOS y NUCLEÓTIDOS

ACIDO DESOXIRRIBONULEICO

Modelo de doble hélice Dos fuentes de información: Estudio de composición de bases de Erwin
Modelo de doble hélice
Dos fuentes de información:
Estudio de composición de bases de Erwin Chargaff
• El DNA es una doble cadena que consiste de ~50%
purinas (A,G) y ~50% pirimidinas (C, T)
• La cantidad de A=T y la cantidad de G=C (regla de
Chargaff)
• % GC varía de organismo a organismo.
(James Watson y Francis Crick –
1953)

ESTRUCTURA DEL DNA

Estructura secundaria
Estructura secundaria

Estructura primaria

ESTRUCTURA DEL DNA Estructura secundaria Estructura primaria 5'-ATCCCAGCCCGATTAAAGCC-3' orden de El importante, la

5'-ATCCCAGCCCGATTAAAGCC-3'

orden

de

El

importante, la orientación viene dada en el

la secuencia es muy

sentido 5' 3' ó 3' 5'; el 5' representa el extremo terminal del fosfato y el 3' el extremo final del átomo de carbono de la

desoxirribosa

Estructura Terciaria

Palíndrome: Secuencia de DNA con bases repetidas en secuencia inversa en ambas hebras. Esta secuencia
Palíndrome: Secuencia de DNA con bases repetidas en
secuencia inversa en ambas hebras. Esta secuencia es
autocomplementaria por lo tanto puede formar
estructuras en forma de horquilla o cruz

Repetición especular: La secuencia repetida se encuentra sobre la misma hebra de DNA. No puede formar ninguna de las estructuras anteriores.

1947 - Erwin Chargaff

Las bases de DNA siguen ciertas reglas.

La composición es especie específica A = T, C = G en todas las especies

bases de DNA siguen ciertas reglas. • La composición es especie específica • A = T,
bases de DNA siguen ciertas reglas. • La composición es especie específica • A = T,

ADN DE TIPO

A, B Y Z

El DNA de cadena doble puede asumir distintas conformaciones debido a la

flexibilidad del anillo de

ribosa y al giro del enlace C1- N.

del anillo de ribosa y al giro del enlace C1 ’ - N. Características ADN -

Características

ADN - B

ADN A

ADN - Z

Tipo de hélice

Dextrógira

Dextrógira

Levógira

Diámetro de la hélice (nm)

2,37

2,55

1,84

Distancia entre par de bases (nm)

0,34

0,29

0,37

Distancia por giro completo (nm)

3,4

3,2

4,5

Número de pares de bases por giro

10

11

12

completo

Topología del surco mayor

Ancho, profundo

Angosto, profundo

Plano

Topología del surco menor

Angosto, superficial

Ancho, superficial

Angosto, profundo

PROPIEDADES DEL DNA

El contenido de DNA en las

células coincide con la demanda de la ploídia

El DNA es estable, sus enla- ces covalentes resisten la

temperatura de ebullición y la

exposición a álcalis fuertes.

El DNA tiene gran capacidad

de

de

almacenamiento

información.

La doble cadena de DNA puede autorreplicarse

El DNA puede expresarse.

de de almacenamiento información. • La doble cadena de DNA puede autorreplicarse • El DNA puede

NIVELES DE EMPAQUETAMIENTO DEL ADN

NIVELES DE EMPAQUETAMIENTO DEL ADN

ACIDO RIBONULEICO

ACIDO RIBONULEICO

ESTRUCTURA Y TIPOS DEL RNA

ARN MENSAJERO ARN RIBOSOMICO
ARN MENSAJERO
ARN RIBOSOMICO
ARN TRANSFERENCIA
ARN
TRANSFERENCIA

UBICACIÓN Y FUNCIONES DE LAS DIFERENTES CLASES DE MOLECULAS DE

RNA

Clase de RNA

Tipo celular

Localización de la función en las células eucariotas

 

Función

 

RNA ribosómico

Bacterias y

Citoplasma

Componentes estructurales y

(RNAr)

eucariotas

funcionales del ribosoma

 

RNA mensajero (RNAm)

Bacterias y

Núcleo y citoplasma

Es portador del la información genética para las proteínas

eucariotas

RNA de transferencia (RNAt)

Bacterias y

Citoplasma

Ayuda

a

incorporar

los

eucariotas

aminoácidos

a

la

cadena

 

polipeptídica

 

RNA nuclear pequeño (RNAsn)

Eucariotas

Núcleo

Procesamiento del RNAm

 

RNA nucleolar pequeño (RNAsno)

Eucariotas

Núcleo

Procesamiento del RNAr

 

y

ensamblaje

RNA citoplasmático

Eucariotas

Citoplasma

Variable

pequeño (RNAsc)

Micro RNA (RNAmi)

Eucariotas

Citoplasma

Inhibe la traducción del RNAm

RNA interferente pequeño (RNAsi)

Eucariotas

Citoplasma

Desencadena la degradación de otras moléculas de RNA

Síntesis del ADN: Replicación

DNA Polymerase III

Helicase Single-strand binding proteins Primase https://www.youtube.com/watch?v=DMbjI-uj6G8
Helicase
Single-strand binding proteins
Primase
https://www.youtube.com/watch?v=DMbjI-uj6G8

REPLICACIÓN DEL DNA

CARACTERÍSTICAS

Semiconservativa

Bidireccional

Asimétrica

Semidiscontínua

Asincrónica

Simultánea

Secuencial

Es multifocal en eucariotas

Requiere de cebadores

Ocurre en el período S.

 Simultánea  Secuencial  Es multifocal en eucariotas  Requiere de cebadores  Ocurre en

Bidireccional y Asimétrica

Bidireccional y Asimétrica

Semidiscontínua

Semidiscontínua
Semidiscontínua
Semidiscontínua

Multifocal en Eucariotas

Multifocal en Eucariotas
Multifocal en Eucariotas
4 During mitosis the sister chromatids condense and become visible. Then the sister chromatids are
4
During mitosis the sister chromatids condense
and become visible. Then the sister chromatids
are pulled apart, with one going to each
daughter cell. When mitosis is complete the
single chromosome again takes on the more
dispersed form and is no longer visible.
3
After replication,
the duplicated
chromosomes
consist of sister
chromatids held
together by a
centromere.
MITOTIC
1
PHASE
During G 1 , DNA
M
molecules exist
Centromere
as chromatin
G 2
G 1
material that
cannot be seen
S
Sister
distinctly under
the microscope.
chromatids
INTERPHASE
Single
chromosome
2
During the S phase, the two strands of
the DNA molecule unwind and replicate.
Replication occurs at multiple sites
along the chromosome.

Ocurre en Fase S del ciclo celular.

En eucariotas, ocurre con alta fidelidad dentro de un período de tiempo

determinado en forma precisa

dentro del ciclo celular.

determinado en forma precisa dentro del ciclo celular. Ms. Pablo Chuna Mogollón / pchunam@upao.edu.pe / Mayo

Ms. Pablo Chuna Mogollón / pchunam@upao.edu.pe / Mayo - 2016

ETAPAS DE LA REPLICACION

INICIACION

Reconocimiento de orígenes de replicación Separación de hebra Posicionamiento de maquinaria de replicación

ELONGACION

Crecimiento bidireccional de la horquilla de replicación Replicación semiconservativa, semidoscontinua, coordinada.

TERMINACION

Reconocimiento de señales de terminación

Desensamble de replisomas

semidoscontinua, coordinada . TERMINACION Reconocimiento de señales de terminación Desensamble de replisomas

1. INICIACION

La síntesis se inicia en regiones especiales llamadas orígenes de replicación .

Los orígenes de replicación contienen múltiples secuencias repetidas cortas.

Estos segmentos se reconocen por proteínas multiméricas que se unen al

origen y, a su vez, reclutan hacia éste enzimas de la replicación.

por proteínas multiméricas que se unen al origen y, a su vez, reclutan hacia éste enzimas

2. ALARGAMIENTO DE LAS CADENAS.

2. ALARGAMIENTO DE LAS CADENAS.
Dirección de nueva síntesis Nueva cadena sintetizada DNA polimerasa III RNA primer DNA helicasa DNA
Dirección de
nueva síntesis
Nueva cadena
sintetizada
DNA polimerasa III
RNA primer
DNA helicasa
DNA girasa
Molde de
cadena líder
Tau
DNA parental
RNA primer
DNA polimerasa III
DNA primasa
Nueva cadena
sintetizada
Proteínas de
Molde
unión a cadena
de cadena
simple
retardada
Dirección de
nueva síntesis

© 2012 Pearson Education, Inc.

3. TERMINACIÓN

La horquilla de replicación se encuentra con el lugar de terminación, la región ter (τ ).

La proteína tus se une a la secuencias de terminación. Esta proteína bloquea el

movimiento de la helicasa.

Las moléculas de DNA hijas se separan por la acción de una topoisomerasa IV .

el movimiento de la helicasa. • Las moléculas de DNA hijas se separan por la acción
el movimiento de la helicasa. • Las moléculas de DNA hijas se separan por la acción
INICIO DE REPLICACIÓN EN EUCARIOTAS MCM (minichromosome maintenance proteins), proteínas ORC (origin recognition
INICIO DE REPLICACIÓN EN EUCARIOTAS
MCM (minichromosome maintenance proteins),
proteínas ORC (origin recognition complex )

Iniciacón occurre sólo en los

orígenes que son licenciadis para

replicarse.

Una vez activados,los orígenes no

pueden ser usados otra vez hasta el próximo ciclo celular

para replicarse. • Una vez activados,los orígenes no pueden ser usados otra vez hasta el próximo
para replicarse. • Una vez activados,los orígenes no pueden ser usados otra vez hasta el próximo

REPLISOMA EUCARIOTA

REPLISOMA EUCARIOTA

REMOCIÓN DE CEBADORES

FEN 1/RNAasa H1 remueve RNA primer

DNA Pol δ sintetiza los desoxiribonucleótidos

RNA primer DNA Pol δ sintetiza los desoxiribonucleótidos DNA LIGASA Forma el enlace fosfodiéster entre dos

DNA LIGASA

Forma el enlace fosfodiéster entre

dos fragmentos de Okazaki

DNA Pol δ sintetiza los desoxiribonucleótidos DNA LIGASA Forma el enlace fosfodiéster entre dos fragmentos de

DIFERENCIAS DE

REPLICACIÓN EN

PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

INICIO
INICIO
Procariotas:
Procariotas:
Orígenes fijos Proteínas DnaA DnaB (helicasa)
Orígenes fijos
Proteínas DnaA
DnaB (helicasa)
Eucariotas:
Eucariotas:
Multiples orígenes Complejo proteico ORC Cdc6 y Cdt1 Complejo MCM (helicasa)
Multiples orígenes
Complejo proteico ORC
Cdc6 y Cdt1
Complejo MCM (helicasa)
DnaA DnaB (helicasa) Eucariotas: Multiples orígenes Complejo proteico ORC Cdc6 y Cdt1 Complejo MCM (helicasa)

DIFERENCIAS DE REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

DIFERENCIAS DE REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS http://www.mhhe.com/biosci/bio_animations/04_MH_DNAReplication_

http://www.mhhe.com/biosci/bio_animations/04_MH_DNAReplication_

Web/index.html

Ms. Pablo Chuna Mogollón / Octubre - 2015

http://fd.valenciacollege.edu/file/mlocascio/DNAReplication.mpg

DIFERENCIAS DE REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

DIFERENCIAS DE REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

TELÓMEROS

Telómeros (gr. telos final y meros parte ) los extremos de los cromosomas, regiones

de ADN no codificante y muy

repetitivas.

La Secuencia telomérica,

tiene una repetición en

tándem de oligonucleótido

rico en G.

En humanos: TTAGGG.

Repetidas 150 a 2000 .

Función: estabilidad estruc-

tural de los cromosomas, la

división celular y el tiempo de vida de las estirpes

celulares

celular y el tiempo de vida de las estirpes celulares Células madre y germinales tienen telomerase

Células

madre

y

germinales

tienen

telomerase

que

mantiene

el

tamaño

del

telómero.

Células somáticas contienen

bajos niveles de telomerasa y

tienen telómeros muy cortos.

telómeros

desencadena inestabilidad

Pérdida de

cromosómica o apoptosis.

Células cancerosas contienen telomerasa y tienen largos

telómeros

from Lodish et al., Molecular Cell Biology, 6 th ed. Fig 25-31

Ms. Pablo Chuna Mogollón / pchunam@upao.edu.pe / Mayo - 2016

PROTEÍNAS REQUERIDAS EN LA REPLICACION

 

FUNCIÓN

 

PROCARIOTAS

EUCARIOTAS

Proteína de enganche deslizante (sliding clamp), que une polimerasa al DNA molde

Anillo β, trabaja con DNA Pol

III

PCNA (proliferating cell

nuclear antigen), trabaja con

DNA pol δ o

ε

Proteína

de

enganche

de

carga

(clamp

   

loader)

Complejo τ

RFC

Actividad

exonucleasa

de

lectura

de

 

Parte de subunidad de la DNA

prueba (proof-reading)

 

Subunidad ε de la DNA pol II

pol δ y ε

Remoción de RNA primer

 

RNAasa H, DNA Pol I

RNA asa H1, Fen 1 (flap endonuclease)

Reemplazo de RNA con DNA

 

DNA polimerasa I

DNA polimerasa δ

Unión de fragmentos

 

DNA ligasa

DNA ligasa

PROTEÍNAS REQUERIDAS EN LA REPLICACION

EN PROCARIOTAS

RNA Polimerasas (RNA Pol)

Topoisomerasa I

Pirofosfatasa.

DNA molde

Los 4 ribonucleótidos trifosfato:

(ATP, CTP, GTP, UTP)

Mg ++

Factores de transcripción:

sigma (σ), rho (ρ)

EN EUCARIOTAS

RNA Polimerasas (RNA Pol) I, II y III

Topoisomerasa I

Pirofosfatasa.

DNA molde

Los 4 ribonucleótidos trifosfato: (ATP, CTP, GTP,

UTP)

Mg ++ , Mn ++

Factores de transcripcion específicos.

Activadores y represores

Factores de Transcripción basales: TFIIA, TFIIB, TFIID, TFIIE, TFIIF, TFIIH. TFIIS, TFIIIS (elongina).

Poli A polimerasa.

Espliceosoma

DIFERENCIAS EN REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

 

PROCARIOTAS

 

EUCARIOTAS

No

proteínas unidas al DNA

 

Proteínas histonas unidas al DNA

Un

origen de replicación

 

Varios orígenes de replicación

Cinco polimerasas (I, II, III, I y V)

 

Cinco polimerasas (α, β, δ, ε, y γ)

Función de polimerasas.

 

Función de polimerasas:

I.

involucrada

en

síntesis,

proofreading,

reparación

y

α: una enzima polimerizante

remoción de primers

 

β : es una enzima de reparación

II: es una enzima de reparación

δ: principal enzima polimerizante ε: enzima polimerizante γ: síntesis de DNA mitocondrial

III:

es la principal enzima polimerizante

 

IV

y

V:

son enzimas de reparación bajo

condiciones

inusuales

   

Polimerasas son también exonucleasas

 

No todas tienen actividad exonucleasa

Fragmentos de Okasaki de 1000 a 2000 nucleótidos de

Fragmentos de Okasaki de 150 a 200 nucleótidos de

longitud

 

longitud

La velocidad es de ~1000 pb/seg

 

La velocidad es de ~100 pb/seg

El tiempo de replicación es ~42 min.

 

El tiempo de replicación es ~8 horas.

COMPARACION ENTRE ADN Y ARN

COMPARACION ENTRE ADN Y ARN

AISLAMIENTO DE ACIDOS NUCLEICOS :

AISLAMIENTO DE ACIDOS NUCLEICOS : 3. Electroforesis

3. Electroforesis

AISLAMIENTO DE ACIDOS NUCLEICOS : 3. Electroforesis
AISLAMIENTO DE ACIDOS NUCLEICOS : 3. Electroforesis