Dendrimeros No Cancro

Universidade do Algarve
Faculdade de Cincias e Tecnologia

Departamento de Qumica e Farmcia
Mestrado Integrado em Cincias Farmacuticas
A aplicao dos
dendrmeros na terapia
anticancergena
Ana Rita Guerreiro Borralho
Trabalho efetuado sob a orientao da:
Professora Doutora Ana Margarida Grenha
Faro, Setembro de 2014

Universidade do Algarve
Faculdade de Cincias e Tecnologia
Departamento de Qumica e Farmcia
Mestrado Integrado em Cincias Farmacuticas
A aplicao dos
dendrmeros na terapia
anticancergena
Orientando:
Ana Rita Guerreiro Borralho
Orientadora:
Professora Doutora Ana Margarida Grenha
Faro, Setembro de 2014

A aplicao dos dendrmeros na
terapia anticancergena
Declarao de autoria de trabalho
Declaro ser a autora deste trabalho, que original e indito. Autores e trabalhos
consultados esto devidamente citados no texto e constam da listagem de referncias
includa.
Copyright Ana Rita Borralho.
A Universidade do Algarve tem o direito, perptuo e sem limites geogrficos, de

arquivar e publicitar este trabalho atravs de exemplares impressos reproduzidos em
papel ou de forma digital, ou por qualquer outro meio conhecido ou que venha a ser
inventado, de o divulgar atravs de repositrios cientficos e de admitir a sua cpia e
distribuio com objetivos educacionais ou de investigao, no comerciais, desde que
seja dado crdito ao autor e editor.
i
Agradecimentos
minha orientadora, a Professora Dr. Ana Margarida Grenha, por desde logo se ter
mostrado disponvel para me orientar na elaborao desta monografia e por me ter
sempre apoiado a diversos nveis nos meses que se seguiram, desde do esclarecimento
de dvidas at estruturao do trabalho.
Professora Isabel Ramalhinho pelo trabalho incansvel em coordenar os nossos

estgios, por todas as sesses de esclarecimento que nos deu, a fim de minimizarmos os
erros nas nossas monografias, e por sempre insistir connosco para no adiarmos o incio
da elaborao da mesma.
A todos os docentes da Universidade do Algarve que contriburam para a minha

aprendizagem e para me tornar uma profissional melhor ao longo dos cinco anos do
curso.
s minhas orientadoras de estgio, Joana Cravo e Ana Paula Carrondo, que me

auxiliaram a aplicar na prtica o conhecimento terico transmitido pelos docentes.
Aos meus pais, ao meu namorado e aos meus amigos mais prximos por me terem
acompanhado e ajudado a ultrapassar os desafios que surgiram nestes cincos anos de
aprendizagem e experincias memorveis.
ii
ndice
ndice de figuras ............................................................................................................... v

ndice de quadros ............................................................................................................. vi
ndice de grficos............................................................................................................. vi
Lista de siglas e abreviaturas .......................................................................................... vii
Resumo ............................................................................................................................ ix
Abstract ............................................................................................................................. x
1. Introduo.................................................................................................................. 1
2. Metodologia .............................................................................................................. 2
3. Fisiopatologia oncolgica ......................................................................................... 3
3.1 Etiologia tumoral ............................................................................................... 4
3.1.1 Fatores ambientais ...................................................................................... 4
3.1.2 Fatores geogrficos ..................................................................................... 6
3.1.3 Fatores alimentares ..................................................................................... 6
3.1.4 Fatores genticos ........................................................................................ 7
3.2 Carcinognese .................................................................................................... 7
3.3 Crescimento tumoral .......................................................................................... 8
3.4 Metastizao ...................................................................................................... 9
4. Defesas corporais contra o cancro ........................................................................... 10
5. Preveno e tratamento dos tumores ....................................................................... 11
5.1 Preveno ......................................................................................................... 11
5.2 Teraputica anticancergena convencional ...................................................... 12
5.2.1 Cirurgia ..................................................................................................... 13
5.2.2 Radioterapia .............................................................................................. 13
5.2.3 Quimioterapia ........................................................................................... 13
5.2.4 Hormonoterapia ........................................................................................ 15
6. A nanotecnologia no mbito da terapia antineoplsica ........................................... 15
7. Sntese dos dendrmeros e as suas propriedades ..................................................... 17
7.1 Sntese divergente ............................................................................................ 20
7.2 Sntese convergente ......................................................................................... 21
7.3 Outros mtodos de sntese ............................................................................... 22
8. Aplicaes gerais dos dendrmeros na rea farmacolgica e mdica ..................... 22
8.1 Dendrmeros como transportadores de frmacos ............................................. 22
iii
8.1.1 Encapsulamento do frmaco ..................................................................... 23
8.1.2 Conjugao dendrmero-frmaco ............................................................. 24
9. Biodistribuio dos dendrmeros ............................................................................. 25
10. Toxicidade associada aos dendrmeros................................................................ 26
10.1 Efeitos txicos no sistema biolgico ............................................................... 26
10.1.1 Toxicidade hemoltica .............................................................................. 28
10.1.2 Imunogenicidade ...................................................................................... 29
10.1.3 Rutura da membrana celular ..................................................................... 29
10.1.4 Libertao de citocinas e quimiocinas ...................................................... 31
10.2 Solues para minimizar a toxicidade ............................................................. 32
10.2.1 Utilizao de dendrmeros biocompatveis............................................... 33
10.2.2 Alterao da superfcie dos dendrmeros.................................................. 36
10.2.3 Alterao do nmero de geraes ............................................................. 42
11. Libertao do frmaco no local-alvo ................................................................... 42
11.1 Vetorizao passiva ......................................................................................... 43
11.2 Vetorizao ativa ............................................................................................. 45
11.2.1 Vetorizao s molculas reguladoras da angiognese ............................ 47
11.2.2 Vetorizao ao recetor epidrmico humano (HER) ................................. 50
11.2.3 Vetorizao aos recetores da transferrina ................................................. 51
11.2.4 Vetorizao aos recetores do folato .......................................................... 52
11.2.5 Vetorizao ao antignio de membrana especfico da prstata ................ 54
11.2.6 Vetorizao s lectinas ............................................................................. 55
12. Dendrmeros como transportadores de frmacos quimioterpicos...................... 56
12.1 Metotrexato .................................................................................................. 56
12.2 Doxorrubicina............................................................................................... 57
12.3 Camptotecinas .............................................................................................. 58
12.4 5-Fluorouracilo ............................................................................................. 58
12.5 Paclitaxel ...................................................................................................... 59
12.6 Cisplatina...................................................................................................... 59
13. Concluso ............................................................................................................ 60
14. Bibliografia .......................................................................................................... 62
15. Anexos ................................................................................................................. 68
iv
ndice de figuras
Figura 3.1 Desenvolvimento inicial da massa tumoral...................................................9
Figura 6.1 Escala demonstrativa do tamanho das nanoestruturas comparativamente ao

de outros objetos vulgarmente conhecidos......................................................................16
Figura 6.2 Ilustraes representativas dos nanossistemas utilizados na terapia

anticancergena. A) nanopartculas polimricas; B) micelas polimricas; C)
dendrmeros; D) lipossomas; E) nanopartculas virais; F) nanotubos de carbono..........17
Figura 7.1 - Estrutura geral dos dendrmeros..................................................................18
Figura 7.2 Ilustrao representativa da evoluo de um dendrmero a partir do ncleo

central at gerao 4.0G, bem como do aumento linear do seu dimetro....................19
Figura 7.3 - Sntese divergente de dendrmeros PAMAM..............................................20
Figura 7.4 - Sntese convergente de dendrmeros poli(arileter)......................................21
Figura 10.1 - Esquema relativo ao processo de rutura da membrana celular..................30
Figura 10.2 Visualizao por Microscopia de fora atmica da bicamada lipdica, aps
a interao com os dendrmeros......................................................................................31
Figura 10.3 - Estratgias para minimizar a toxicidade associada aos dendrmeros........32
Figura 10.4 - Dendrmero conjugado ao PEG e ao frmaco...........................................37
Figura 11.1- Libertao do frmaco controlada..............................................................43
Figura 11.2 Imagem representativa de um dendrmero sensvel ao pH e do respetivo

mecanismo de libertao do frmaco..............................................................................45
Figura 11.3 Imagiologia fluorescente representando ratos 4T1 portadores de tumor

tratados com dendrmeros funcionalizados com VEGF comparativamente ao respetivo
grupo controlo..................................................................................................................49
Figura 11.4 Imagens representativas das seces de tumores de ratinhos injetados com
dendrmeros funcionalizados com anti-HER2 e com uma soluo salina.......................51
Figura 11.5 Anlise por microscopia confocal e citometria de fluxo de amostras de

ratinhos injetados com dendrmeros vetorizados aos recetores do cido flico
comparativamente ao respetivo grupo controlo...................................................53
Figura 11.6 - Vetorizao do frmaco ao local-alvo tirando partido da interao lectina-

hidrato de carbono...........................................................................................................55
v
Figura 12.1 Representao da atividade antitumoral das formulaes de doxorrubicina
comparativamente ao grupo controlo, bem como da cardiotoxicidade de ambas as
formulaes comparativamente ao frmaco na forma livre............................................58
ndice de quadros
Quadro 10.1 Padres generalizados representando a toxicidade in vitro, a toxicidade in

vivo e a imunogenicidade dos dendrmeros em funo da funcionalidade sua
superfcie.........................................................................................................................27
ndice de grficos
Grfico 5.1 Evoluo do nmero de clulas tumorais ao longo de ciclos sucessivos de

quimioterapia, conforme o conceito de eliminao logartmica, o qual parece seguir uma
cintica gompertziana......................................................................................................14
Grfico 10.1 Hemlise induzida pela incubao dos glbulos vermelhos com os
dendrmeros PPI 2.0G, PPI 2.0G acoplado maltose, PPI 4.0G e PPI 4.0G acoplado
maltose a concentraes de 3 mg/mL e 6 mg/mL...........................................................38
Grfico 10.2 Avaliao da viabilidade celular das clulas Caco-2, expondo-as a

diferentes concentraes de dendrmeros PAMAM catinicos (G2, G3 e G4), aninicos
(G2.5 e G3.5) e ao controlo.............................................................................................39
Grfico 11.1 Interao dose-dependente dos dendrmeros G5-FI3-GLA6 e dos

respetivos dendrmeros no funcionalizados G5-FI3 para o antignio tumoral PSMA
presente superfcie das clulas LNCaP. No grfico tambm possvel observar a
interao entre os dendrmeros G5-FI3-GLA6 e as clulas LNCaP na presena de CLA
na forma livre, verificando-se uma diminuio da fluorescncia devido competio
entre os dendrmeros funcionalizados e o ligando natural...............................................54
Grfico 12.1 Evoluo do volume tumoral relativo ao longo dos dias aps a
administrao intraperitoneal do PBS (), da cisplatina na forma livre (), dos
dendrmeros 6.5G conjugados cisplatina ( ,6 mg/kg) e dos dendrmeros 6.5G
conjugados cisplatina (, 8 mg/kg) em ratinhos xenotransplantados com clulas
tumorais A2780 do ovrio humano.................................................................................60
vi
Lista de siglas e abreviaturas
5-ASA cido 5-amino-saliclico
5-FU 5-fluorouracilo
6-TAMRA 6-carboxi-tetrametilrodamina
ADN cido desoxirribonucleico
ALT Alanina transaminase
C.m.c Concentrao micelar crtica
DHFR Dihidrofolato reductase
DOX Doxorrubicina
EBV Vrus Epstein-Barr
EGFR Fator de crescimento epidrmico
FACS Separao de clulas ativadas por fluorescncia
FPS Fator de proteo solar
GLA Ureia-glutamato
HBV Vrus da hepatite B
HER2 Recetor epidrmico humano do tipo 2
HPV Papilomavrus humano
INEB Instituto Nacional de Engenharia Biomdica
LDH Lactato desidrogenase
MEC Matriz extracelular
MTX Metotrexato
PAMAM Poliamidoamina
PBS Soluo salina
PEG Polietilenoglicol
PEO xido de polietileno
PLL Poli(L-Lisina)
PPI Polipropilenoimina
vii
PSMA Antignio de membrana especfico da prstata
RFC Transportador de folato reduzido
RGD Pptido arginina-glicina-aspartato
VEGF Fator de crescimento endotelial vascular
VIH Vrus da imunodeficincia humana
viii
Resumo
As doenas oncolgicas afetam milhes de pessoas em todo o mundo e

caraterizam-se por serem doenas cujos nmeros respeitantes s taxas de mortalidade
so deveras desanimadores. Estes fatores associados a todo o sofrimento psicolgico e
fsico que os doentes oncolgicos enfrentam fazem com que este grupo de doenas seja
um dos mais temidos pela populao mundial. De forma a aumentar as taxas de cura e
minimizar os graves efeitos adversos induzidos pelos tratamentos anticancergenos
convencionais, vrios investigadores tm estudado tratamentos alternativos, mais
seletivos, que permitem colmatar as limitaes dos utilizados atualmente. Uma rea que
tem ganho muito destaque nos ltimos anos a nanotecnologia, onde se englobam
diversos sistemas nanoparticulados, como os dendrmeros, que apresentam um grande
potencial como transportadores de frmacos, nomeadamente dos frmacos
anticancergenos.
Os dendrmeros so sistemas nanoparticulados com uma estrutura muito
ramificada, semelhante a uma rvore. A sua arquitetura particular permite transportar os
frmacos, tanto atravs do encapsulamento como da conjugao dos mesmos. A
aplicao destes nanossistemas na terapia anticancergena apresenta como vantagens a
possibilidade de: 1) aumentar o tempo de semivida do frmaco em circulao; 2) dirigir
o frmaco para as clulas tumorais por vetorizao passiva; 3) aumentar a seletividade
dos frmacos atravs da conjugao a anticorpos monoclonais ou a antignios tumorais;
4) ultrapassar o mecanismo de resistncia induzido pela glicoprotena-P. Alm destas
vantagens, os dendrmeros apresentam algumas caratersticas favorveis relativamente a
outros nanossistemas, como os formados por polmeros lineares, devido ao facto de
apresentarem uma multivalncia controlada, que permite a ligao a frmacos, grupos
de vetorizao ou grupos solubilizantes, proporcionando assim um comportamento
farmacocintico reprodutvel.
Desta forma, esta monografia pretende elaborar uma reviso, dando a conhecer
as mais-valias e limitaes da introduo dos dendrmeros na prtica clnica do
tratamento anticancergeno, a fim de avaliar a potencialidade da utilizao desta
promissora tecnologia na rea da oncologia.
Palavras-chave: nanotecnologia; dendrmeros; tratamento anticancergeno; vetorizao;

seletividade.
ix
Abstract
The oncological diseases affect millions of people worldwide and are

characterized by being disease whose numbers relating to rates of mortality are not yet
encouraging. These factors associated with all psychological and physical suffering that
cancer patients face, make with that this group of diseases is one of the most feared by
the world population. In order to increase cure rates and minimize the serious adverse
effects induced by conventional anticancer treatments, several researchers have studied
alternative treatments, more selective, that allow bridging the limitations of used
currently. One area that has gained much prominence in recent years is nanotechnology,
where they are encompassed various nanoparticulate systems such as dendrimers, which
have a great potential as drug carriers, including anticancer drugs.
The dendrimers are nanoparticulate systems with a highly branched structure,
similar to a tree. Yours particular architecture allows carrying anticancer drugs, both
through the encapsulation as the conjugation of the same. The application these
nanosystems in anticancer therapy have advantages such as the ability to 1) increase the
half-life of circulating drug; 2) direct the drug to the tumor cells by passive vectoring; 3)
increase the selectivity of drugs through conjugation to monoclonal antibodies or tumor
antigens; 4) overcoming the resistance mechanism induced by P-glycoprotein. Besides
these advantages, the dendrimers, still have others favorable characteristics over others
nanosystems, such as linear polymers, because they present a controlled multivalency,
which allows binding to drugs, groups of solubilizing or groups of vectoring,
providing thus a reproducible pharmacokinetic behavior.
Thus, this monograph aims to elaborate a revision, making known the gains and
limitations of the introduction of dendrimers in clinical practice of anticancer treatment,
in order to evaluate the potential use of this promising technology in oncology.
Keywords: nanotechnology; dendrimers; anticancer therapy; vectorization; selectivity.
x
A aplicao dos dendrmeros na terapia anticancergena
1. Introduo
O cancro uma doena que afeta milhes de pessoas em todo o mundo,

estimando-se que, em Portugal, morram cerca de 42 mil pessoas por ano devido a
doenas oncolgicas.1 Estes nmeros aliados ao facto de ainda no existir um
tratamento realmente eficaz para a maioria dos tumores metastticos inoperveis, fazem
com que o cancro seja uma das doenas mais temidas em todo o mundo.2
O cancro, tambm designado por neoplasia ou tumor maligno, um termo
utilizado para retratar a proliferao rpida e descontrolada das clulas, cujo
crescimento no adequadamente controlado pelos mecanismos reguladores existentes
nos tecidos saudveis. As neoplasias so, ainda, caraterizadas pela capacidade de
propagao das clulas anormais para tecidos adjacentes, levando formao de
metstases.3,4
Na atualidade, a terapia anticancergena envolve essencialmente processos de
administrao invasivos, tais como a aplicao de cateteres para a administrao da
quimioterapia. Para alm da quimioterapia, tambm usual recorrer cirurgia e
radioterapia a fim de tratar o cancro. O objetivo da quimioterapia e radioterapia a
eliminao das clulas neoplsicas, recorrendo a frmacos citotxicos ou radiao
ionizante, respetivamente, que iro atuar principalmente nas clulas que se multiplicam
mais rapidamente, j que esta uma caraterstica das clulas tumorais em relao s
clulas saudveis. A heterogeneidade tumoral a principal barreira para um diagnstico
e teraputica eficazes. A eficcia do tratamento est diretamente relacionada com a
capacidade do frmaco destruir as clulas cancergenas sem afetar as clulas saudveis,
e esta seletividade que ir influenciar a qualidade e a esperana de vida do doente. No
entanto, os frmacos utilizados em quimioterapia so ainda pouco seletivos, sendo este
um dos grandes problemas associado teraputica, pelo que a sua administrao
sistmica leva frequentemente a efeitos adversos noutros tecidos, tais como
neurotoxicidade, cardiomiopatia ou mielossupresso, por vezes to intensos que o
doente tem que interromper o tratamento antes da erradicao do tumor.57 Alm do
mais, em virtude da reduzida biodisponibilidade e especificidade dos frmacos
citotxicos, habitual utilizarem-se elevadas concentraes destes frmacos de forma a
garantir que alcancem a massa tumoral, o que contribui para o surgimento de efeitos
adversos.8
1
Um aumento da especificidade dos frmacos citotxicos para o tumor permitiria

melhorar a eficcia da teraputica e minimizar os efeitos secundrios graves que os
doentes oncolgicos frequentemente enfrentam. A nanotecnologia tem potencial para
colmatar essa falta de especificidade, recorrendo a sistemas transportadores de
frmacos, onde se incluem particularmente os lipossomas, as nanopartculas polimricas
e os dendrmeros, entre outros sistemas. Em Portugal, a nanotecnologia encontra-se em
expanso, tendo sido j realizados pelo menos cinco pedidos de patente relativos a
sistemas nanoparticulados, incluindo na Universidade de Coimbra, Universidade de
Lisboa e Universidade do Algarve. Alm disso, o Instituto Nacional de Engenharia
Biomdica (INEB) encontra-se a desenvolver estruturas dendrticas para aplicao na
terapia gnica em rgos do sistema nervoso. Contudo, a aplicao destes sistemas pode
ser extrapolada para outras reas, como a oncologia. Esta monografia centra-se nos
dendrmeros, visto que estes se distinguem pelas suas caratersticas singulares, entre as
quais a estrutura bem definida, a multivalncia controlada e a alta funcionalidade,
permitindo-lhes assim o transporte simultneo de diversos frmacos.68 Este sistema
nanoparticulado pode acoplar anticorpos monoclonais que permitem um direcionamento
para o local-alvo, para o que necessrio cumprir critrios bsicos: 1) o antignio
tumoral deve ter um papel importante na progresso da doena; 2) deve ser estvel na
superfcie das clulas cancergenas; 3) deve ser expresso em grande percentagem nas
clulas tumorais e 4) deve, preferencialmente, ser expresso numa grande diversidade de
tumores.5,6
Deste modo, esta monografia tem como principais objetivos proporcionar uma
viso geral e introdutria sobre o cancro, centrando-se depois na abordagem dos aspetos
relacionados com a introduo dos dendrmeros na prtica clnica do tratamento
anticancergeno, incluindo o que se refere toxicidade destes materiais e s estratgias
para minimizar a existncia da mesma. Alm disso, sero tambm exploradas as
diferentes abordagens j descritas na literatura para uma vetorizao seletiva dos
frmacos, tendo por base os dendrmeros como sistemas transportadores dos mesmos.
2. Metodologia
No sentido de desenvolver a monografia com base nos objetivos delineados,

foram utilizadas diversas fontes bibliogrficas. Primeiramente, a recolha de informao
iniciou-se atravs da pesquisa em diversas bases de dados, tais como o PubMed, a B-
2
On e a Web of Knowledge, utilizando os termos dendrimer and cancer therapy,

dendrimer and drug delivery, application of nanotechnology in cancer therapy e
nanoparticles in cancer treatment. A partir desta primeira recolha foi possvel aceder a
diversos artigos cientficos quer de reviso, quer originais, bem como a algumas
monografias. Tambm foram utilizados websites para a recolha de informao, tais
como o da World Health Organization e o da Liga Portuguesa Contra o Cancro. Por fim,
tambm se realizou pesquisa em livros, a qual teve lugar na Biblioteca Central de
Gambelas, na Biblioteca Municipal de Lagoa, na Biblioteca da Faculdade de Farmcia
da Universidade de Lisboa e no Servio de Gesto Tcnico-Farmacutica do Hospital de
Santa Maria.
3. Fisiopatologia oncolgica
O cancro carateriza-se por uma multiplicao descontrolada de um nmero

exagerado de clulas, bem como por uma reduo da eliminao das mesmas atravs do
processo de morte programada, designado por apoptose. As clulas constituintes de um
tecido saudvel apresentam uma proliferao controlada por diferentes mecanismos
reguladores caratersticos das prprias clulas. Contudo, as clulas neoplsicas
conseguem escapar aos diversos mecanismos de controlo, tornando-se portanto clulas
autnomas e imortais. Estas clulas podem desenvolver-se a partir de qualquer tecido
em qualquer rgo do organismo. Outra caraterstica prpria das clulas tumorais a
sua capacidade de se disseminar pelo organismo, induzindo novos tumores secundrios,
conhecidos por metstases.4,9
As neoplasias surgem, geralmente, aps os 55 anos de idade, sendo a principal
causa de morte em mulheres entre os 40 e os 79 anos e em homens entre os 60 e os 79
anos de idade. Estima-se que o risco de desenvolver uma dada neoplasia duplica a cada
5 anos aps os 25 anos de idade e que, aos 85 anos de idade, a incidncia se aproxime
dos 2500 casos por 100000 pessoas, o que pode ser explicado por uma exposio mais
prolongada a diversos carcinognios e a um sistema imunitrio mais debilitado. No
entanto, alguns tumores so particularmente mais comuns em crianas com idade
inferior a 15 anos, como o tumor de Wilms, o retinoblastoma e o neuroblastoma.2,9,10
3
3.1 Etiologia tumoral
O cancro uma doena com uma componente multifatorial, o que significa que
diversos fatores podem conferir uma maior suscetibilidade para um determinado
indivduo ou para a populao desenvolver a patologia.10
3.1.1 Fatores ambientais
Os fatores ambientais influenciam significativamente o desenvolvimento de

certos tumores atravs de duas formas distintas, nomeadamente por induo de
mutaes nos genes responsveis pela regulao do ciclo celular ou pela criao de
condies favorveis ao crescimento das clulas tumorais.4,10
3.1.1.1 Substncias qumicas carcinognias
A exposio a uma determinada substncia qumica carcinognia tem,

usualmente, de ocorrer por um perodo prolongado para permitir o desenvolvimento do
tumor, e, por isso, as neoplasias apenas costumam surgir em indivduos com uma idade
mais avanada.4
Os carcinognios qumicos indutores de mutaes no material gentico, tambm
designados por genotxicos, tm uma elevada reatividade qumica ou ento do origem
a metabolitos reativos, podendo provocar graves leses macrogenticas. As aflotoxinas,
as mustardas, as aminas aromticas, o amianto e os hidrocarbonetos policclicos
(presentes no fumo do tabaco) so alguns exemplos de carcinognios qumicos. Por
outro lado, existem alguns qumicos que no atuam diretamente a nvel do material
gentico, como o caso dos herbicidas e dos pesticidas, cujo mecanismo de ao
aparenta estar relacionado com a morte celular txica associada a hiperplasia
regenerativa.4,10
3.1.1.2 Agentes fsicos
A ao de alguns agentes fsicos, como as radiaes ionizantes, as radiaes

ultravioleta ou o asbesco, podem provocar danos diretos no cido desoxirribonucleico
(ADN) ou suprimir as defesas antitumorais do organismo, induzindo o aparecimento de
determinadas neoplasias. A toxicidade associada aos agentes fsicos parece estar
relacionada com a produo de radicais livres de oxignio.4
4
A radiao ultravioleta, particularmente a UVB, proveniente da luz solar pode

provocar cancro da pele. A suscetibilidade para desenvolver cancro da pele depende de
muitos fatores, entre os quais a capacidade de bronzear sem queimar, a idade do
indivduo na altura da exposio, a etnia, a cor da pele, o estilo de vida e a
suscetibilidade gentica individual. Neste contexto, este risco mais acentuado em
indivduos de pele clara que residem em locais cuja intensidade das radiaes
ultravioleta elevada, como acontece na Austrlia e na Nova Zelndia. O principal
mecanismo pelo qual as radiaes ultravioleta induzem a carcinognese atravs da
leso no ADN por formao de dmeros de pirimidina.2,10
As radiaes ionizantes, como as radiaes eletromagnticas e as particuladas,
tm a capacidade de causar neoplasias atravs da induo de mutaes no material
gentico resultantes do efeito direto da energia radiante ou do efeito indireto mediado
pela formao de radicais livres da gua ou do oxignio. As radiaes particuladas,
como as partculas , apresentam uma maior capacidade indutora da carcinognese
comparativamente s radiaes eletromagnticas, como os raios X e .10 A exposio s
radiaes ionizantes pode advir do recurso excessivo a radiografias ou, no caso de
trabalhadores das centrais nucleares, do contacto com reatores nucleares, o que
contribuiu para o surgimento de uma variedade de tumores, particularmente sarcomas,
leucemia, cancro da mama e cancro da tiride.9
3.1.1.3 Agentes biolgicos
Os vrus so responsveis por um em cada setes tumores. Os genomas dos vrus

de ADN oncognicos integram-se no genoma do hospedeiro e os genes virais que so
transcritos precocemente no ciclo de vida do vrus tm um papel importante na
transformao celular. Os vrus mais perigosos associados induo da carcinognese
so o papilomavrus humano (HPV) e o vrus da hepatite B (HBV), que so
responsveis por 80% dos cancros causados por vrus.4,10 O vrus Epstein-Barr (EBV)
tambm parece estar correlacionado com um risco aumentado para desenvolver cancro
da nasofaringe e linfoma de Burkitt.2
Atualmente, j foram identificados cerca de 70 tipos de HPV distintos. Alguns
desses tipos, como o HPV 7, so responsveis pelo surgimento de papilomas escamosos
benignos, comumente designados por verrugas, contudo existem outros, como o HPV
16 e 18, que do origem ao cancro do colo do tero. A carcinognese ocorre quando,
durante a integrao, o ADN viral interrompido, levando sobrexpresso das
5
protenas E6 e E7, que vo atuar a nvel dos produtos do gene supressor de tumor, o Rb
e p53, inibindo-os, contribuindo assim para a ativao da replicao do ADN celular.
Relativamente ao HBV, verifica-se que existe uma associao entre a infeo por este
vrus e a incidncia de cancro heptico em diversas regies do mundo.10 Evidentemente,
os programas de vacinao contra estas infees virais podem ter um impacto
significativo na reduo da incidncia dessas formas de cancro.2
As bactrias tambm podem ser responsveis pela induo de tumores, como o
caso da Helicobacter pylori. Embora a H. pylori no cause repercusses clnicas graves
na maioria dos doentes infetados, em 20% a 30% dos indivduos, a infeo evolui para
lceras gstricas, linfomas gstricos ou para o carcinoma.10 Em vista disso, existe a
necessidade de controlar eficazmente a infeo por H. pylori, de forma a diminuir o
risco de desenvolver cancro.2
3.1.2 Fatores geogrficos
O risco de desenvolver cancro varia consoante o local de residncia de cada

indivduo, tendo-se verificado uma diferente distribuio geogrfica na frequncia de
determinados tumores em pases distintos. Por exemplo, estudos indicam que, no Japo,
a taxa de mortalidade por cancro gstrico setes vezes superior mesma taxa nos
Estados Unidos. Pelo contrrio, a taxa de mortalidade por cancro do clon mais
reduzida no Japo. Alm do mais, ao analisar as taxas de mortalidade de imigrantes
japoneses nos Estados Unidos por cancro gstrico e do clon observam-se valores
intermdios entre os nativos do Japo e dos Estados Unidos. Esta variao geogrfica
depende de um conjunto de diversos fatores, tais como a predisposio gentica, a
alimentao e o meio ambiente.9,10
3.1.3 Fatores alimentares
As substncias obtidas a partir da alimentao vo condicionar o risco de

desenvolvimento de cancro. Por exemplo, uma dieta rica em gorduras saturadas confere
uma maior suscetibilidade para desenvolver cancro do clon, da mama e da prstata.9 O
consumo excessivo de lcool tambm confere um risco superior para o aparecimento de
diversos cancros, entre os quais o do fgado, esfago, faringe, cavidade oral, laringe,
mama e colo-retal. Pelo menos nos pases em desenvolvimento, cerca de 75% dos
cancros do esfago, faringe, cavidade oral e laringe so atribuveis ao consumo de
lcool e ao tabagismo, verificando-se um aumento acentuado do risco em indivduos
6
alcolicos com hbitos tabgicos, indiciando a existncia de um possvel efeito

multiplicativo. O consumo regular de carnes vermelhas tambm tem sido associado a
um maior risco de desenvolver cancro do colo-retal.11
3.1.4 Fatores genticos
Apesar da predisposio gentica desempenhar um papel importante no

desenvolvimento do cancro, os doentes oncolgicos que contm mutaes hereditrias
predisponentes ao cancro no seu genoma representam uma poro inferior a 10%.10 Os
indivduos que contenham, no seu genoma, um cromossoma extra ou alguma anomalia
gentica apresentam uma maior suscetibilidade para o desenvolvimento de cancros. Por
exemplo, a sndrome de Down uma doena gentica caraterizada pela presena de
uma cpia extra do cromossoma 21 e os sujeitos afetados pela doena apresentam um
risco de desenvolvimento de leucemia aguda 12 a 20 vezes superior.9 Porm,
importante salientar que a seleo natural faz com que este tipo de mutaes seja raro
em virtude da maioria dos portadores morrer antes de procriar, evitando assim a
transmisso das mesmas aos descendentes.4
3.2 Carcinognese
A carcinognese deriva da acumulao de mutaes ocorridas em genes

responsveis pela regulao do ciclo celular ao longo de um perodo mdio em adultos
de aproximadamente vinte anos, conferindo s clulas neoplsicas a capacidade de
seguirem o seu prprio programa de replicao. Deste modo, a disfuno do ciclo
celular resultante das muitas mutaes adquiridas a base molecular da oncognese.2,4
As mutaes responsveis pelo surgimento da neoplasia ocorrem em diversos
genes reguladores, particularmente nos proto-oncogenes, nos genes supressores
tumorais, nos genes reguladores da apoptose e nos genes reparadores do ADN. Os
proto-oncogenes so genes indutores da diviso celular e, quando mutados, tornam-se
constitutivamente ativos, dando origem aos chamados oncogenes. Os oncogenes so
considerados geneticamente dominantes, o que significa que geralmente uma nica
cpia mutada suficiente para produzir protenas normais promotoras do crescimento
celular em quantidades exageradas, dando origem carcinognese. Ao contrrio dos
proto-oncogenes, a funo normal dos genes supressores tumorais consiste na inibio
da diviso celular. Porm, as mutaes ocorridas nestes genes vo levar perda dessa
funo e, por conseguinte, a uma reduo das protenas com atividade reguladora
7
inibitria, facilitando assim a multiplicao celular. Os genes reguladores da apoptose

tambm podem sofrer mutaes, que iro contribuir para a induo da carcinognese. O
gene bcl-2 um exemplo de gene anti-apoptose que sobrexpresso em certas
neoplasias, como acontece no caso dos linfomas. Por ltimo, os genes reparadores de
ADN so responsveis por corrigir os erros decorridos durante a replicao normal do
ADN. Se estes erros no forem corrigidos adequadamente por protenas reparadoras,
podem levar a uma transformao neoplsica. Portanto, os indivduos portadores de
mutaes nestes genes apresentam um risco superior de desenvolver cancro.4
3.3 Crescimento tumoral
Um tumor desenvolve-se a partir de uma nica clula cancergena rodeada por

tecido saudvel (Figura 3.1). Esta clula tumoral ir multiplicar-se a uma velocidade
superior das restantes clulas, formando-se uma pequena massa tumoral, que ir
competir com as clulas normais pelos nutrientes provenientes da corrente sangunea.
Contudo, embora o tumor se desenvolva a partir de uma clula, nem todas as clulas do
tumor se comportam da mesma forma, existindo clulas que so quiescentes (no se
dividem) e clulas que morrem espontaneamente por apoptose. Por outro lado, algumas
clulas saudveis acabam por morrer porque no tm capacidade de competir com as
clulas cancergenas e, nesse caso, ocorre a destruio dos tecidos normais adjacentes,
comprometendo a funo do rgo.5 Nos tumores slidos num estadio inicial (1-2
mm3), o oxignio e os nutrientes alcanam o centro da massa tumoral atravs de difuso
simples.12 Quando o tumor atinge cerca de 2 mm3, a suplementao de nutrientes fica
comprometida para as clulas que se encontram no interior da massa tumoral, podendo
levar necrose das mesmas. Para o tumor se desenvolver para alm desse tamanho,
necessrio este induzir a formao de vasos sanguneos, um processo designado por
angiognese, de modo a que todas as clulas sejam nutridas. Por outro lado, se a massa
tumoral no tiver acesso circulao, o tumor poder permanecer desse tamanho
durante vrios anos. Aps a formao de novos vasos sanguneos, as clulas tumorais
podem-se disseminar para a corrente sangunea e permanecer em circulao at
encontrarem um ambiente propcio para se instalarem, e a essas clulas originam um
foco metasttico do tumor primrio.2,5,9
8
Tecido saudvel
Uma clula adquire mutaes

suficientes para se tornar
cancergena
As clulas cancergenas
multiplicam-se rapidamente e
substituem tecido saudvel
Algumas clulas normais so

eliminadas e a funo do
rgo fica comprometida
As clulas cancergenas dividem-se

e outras morrem, permanecendo
com o mesmo tamanho de massa
tumoral at formao de vasos
sanguneos
Figura 3.1 - Desenvolvimento inicial da massa tumoral. Adaptado de [5].
3.4 Metastizao
O processo de metastizao inicia-se quando as clulas tumorais se separam do

tumor primrio, movem-se atravs da matriz extracelular (MEC) e atingem a corrente
sangunea ou o sistema linftico, disseminando-se assim por todo o organismo e dando
origem a diversos tumores secundrios, designados por metstases.2,4
Embora este processo parea ser relativamente fcil, existem diversas limitaes
para a progresso para metastizao. Quando as clulas neoplsicas alcanam a
circulao sangunea, submetem-se a um percurso sinuoso, j que apenas uma em cada
dez mil clulas consegue sobreviver a este trajeto. Estas clulas podem ser facilmente
destrudas na corrente sangunea devido a diversos fatores, tais como por destruio
mecnica, ao citotxica e apopttica do xido ntrico produzido pelas clulas
endoteliais e macrfagos e o contacto com as clulas do sistema imunitrio, como os
leuccitos. Portanto, as clulas neoplsicas, enquanto circulam na corrente sangunea,
tm de evitar a sua deteo pelo sistema imunitrio. Por outro lado, as clulas tumorais
libertam substncias qumicas com o objetivo de desencadearem a agregao plaquetar
e a formao de fibrina, de modo a criarem um mecanismo de defesa ao circularem sob
a forma de agregados de clulas neoplsicas, tendo assim mais hipteses de
sobreviver.2,4
Quando a disseminao das clulas tumorais ocorre por meio do sistema
linftico, o processo de metastizao sucede de forma mais facilitada, devido
possibilidade destas clulas se multiplicarem nos gnglios, tornando-se assim uma fonte
9
de novos agregados celulares. Os gnglios linfticos, quando invadidos, aumentam de

tamanho e tornam-se palpveis, sendo designados por adenopatias. Alm da
disseminao sangunea e linftica, a formao de metstases tambm pode ocorrer por
via iatrognica devido realizao de certas intervenes mdicas, como o caso de
uma bipsia por puno com agulha de um tumor, que pode levar disseminao de
clulas anormais em todo o trajeto da agulha.4
Sempre que as clulas sobreviventes encontram um ambiente propcio, estas
afastam as clulas endoteliais e alojam-se noutro tecido, um processo designado por
homing. O que se tem verificado que a fixao das clulas nos tecidos secundrios
muito especfica dependendo do tipo de cancro, o que significa que muitas das
neoplasias apresentam um padro metasttico preferencial para certos rgos. Um dos
possveis exemplos o caso das clulas do cancro do clon que metastizam
preferencialmente para o fgado. Os pulmes, tambm, so um local frequente de
instalao de metstases, visto que os seus capilares so os primeiros a receber o sangue
venoso proveniente de outros rgos que possam estar afetados pelo cancro.4
4. Defesas corporais contra o cancro
Quando uma clula saudvel se converte numa clula cancergena, o sistema

imunitrio tem a capacidade de a reconhecer como anormal e, por isso, existe um maior
risco de desenvolver cancro em indivduos cujo sistema imune esteja deprimido, como
o caso de doentes com SIDA, pessoas que consumam frmacos imunossupressores,
idosos ou indivduos com doenas auto-imunes.9
Todas as clulas normais apresentam, sua superfcie, substncias reconhecidas
e marcadas pelo sistema imunitrio, designadas por antignios. Em circunstncias
normais, o sistema imunitrio no reage contra as suas prprias clulas, no entanto,
sempre que uma clula normal se converte numa clula tumoral, surgem novos
antignios, denominados antignios tumorais, na sua superfcie, que so desconhecidos
para as clulas do sistema imune. Portanto, o sistema imunitrio vai reconhecer as
clulas tumorais como estranhas, podendo ser capaz de as travar ou destruir antes que se
estabeleam. Contudo, mesmo um sistema imunitrio em bom funcionamento, pode no
conseguir eliminar estas clulas e, quando formada a massa tumoral, j pouco
provvel que o sistema imunitrio tenha capacidade de a destruir.9
10
Certos antignios tumorais, tambm denominados marcadores tumorais, podem

ser detetados atravs de anlises sanguneas. A sua quantificao pode indiciar a
necessidade de exames mais sensveis para a deteo de um dado cancro em pessoas
que no apresentem quaisquer sintomas da doena, para o controlo da eficcia do
tratamento ou para a deteo de uma eventual reincidncia. Contudo, importante
salientar que, por vezes, os marcadores tumorais podem estar presentes no sangue de
pessoas que no sofrem de cancro. No anexo I, encontra-se um quadro com os
principais marcadores tumorais, bem como a respetiva descrio dos mesmos.9
5. Preveno e tratamento dos tumores
5.1 Preveno
A preveno oncolgica pode evitar cerca de 60% das mortes por cancro e
exequvel atravs de diversas medidas profilticas, entre as quais a prtica regular de
exerccio fsico, o controlo do ndice de massa corporal e uma alimentao rica em
frutas e legumes verdes.4 A prtica de atividade fsica regular leva a uma reduo dos
nveis de insulina, glicose e triglicridos e aumenta o colesterol HDL, conferindo um
efeito protetor contra a proliferao de leses do cancro da mama e colo-retal. Os frutos
e vegetais so importantes na preveno do cancro, pois so ricos em potenciais
substncias anticancergenas, visto que contm diversos antioxidantes e minerais e so
boas fontes de fibra, potssio, licopeno, carotenides, vitamina C, cido flico e outras
vitaminas.2,4,11 O tabagismo um fator de risco que predispe para numerosos cancros,
como por exemplo o cancro do pulmo, bexiga, esfago, laringe e lbio. Estima-se que,
pelo menos, 16% dos cancros nos pases em desenvolvimento, onde o uso do tabaco
comeou nos ltimos 30 anos, estejam diretamente relacionados com hbitos tabgicos
e, por isso, fundamental a cessao tabgica. A utilizao do preservativo durante as
relaes sexuais bem como a vacinao podem tambm prevenir algumas infees
associadas a certos cancros, como as provocadas pelo papilomavrus, vrus da
imunodeficincia humana (VIH) ou vrus da hepatite. De modo a reduzir o risco de
desenvolver melanoma, aconselhvel a utilizao de protetor solar com um fator de
proteo solar (FPS) elevado e evitar a exposio ao sol, particularmente entre as 11 e
as 16 horas.2,4,9
Alm do mais, a deteo precoce do tumor, mesmo antes do aparecimento dos
primeiros sinais ou sintomas, permite tratar o cancro numa fase inicial, quando este
11
ainda facilmente curvel. O diagnstico precoce, nalgumas circunstncias, pode ser

facilmente determinado a partir de exames de rotina, como o caso do cancro do colo
do tero, que facilmente diagnosticado atravs de um esfregao citolgico. Ainda, a
quimiopreveno tem sido uma estratgia com um papel cada vez mais importante na
preveno oncolgica e consiste na utilizao de compostos naturais, como as vitaminas
A, C, E ou outras substncias com propriedades antioxidantes e ativadoras das enzimas
hepticas de destoxificao, ou sintticos, como o caso do tamoxifeno na preveno
do cancro da mama ou a finasterida na preveno do cancro da prstata, a fim de
bloquear, reverter ou prevenir o desenvolvimento do cancro invasivo.4,11
Por ltimo, desde que se tornou evidente que a componente hereditria
importante para a predisposio para o cancro, tm sido formuladas intervenes
clnicas para os portadores de mutaes pertencentes a famlias afetadas. A cirurgia
profiltica representa uma abordagem primria preveno do cancro para os
portadores de mutaes em genes associados a uma elevada predisposio para a
patologia, sendo este um processo complexo, que requer uma avaliao do beneficio-
risco, uma vez que este um procedimento efetuado num indivduo saudvel no dado
momento. Um dos exemplos mais conhecidos a mutao nos genes BRCA1 e BRCA2,
que confere uma probabilidade de desenvolvimento de cancro da mama entre 60 a
80%.11
Sendo assim, teoricamente, uma boa parte dos cancros diagnosticados poderia
ser evitvel, contudo existem limitaes pois nem todas as causas evitveis foram,
ainda, identificadas com clareza.2
5.2 Teraputica anticancergena convencional
A teraputica antitumoral tem como principal objetivo a eliminao das clulas

neoplsicas, evitando lesar as clulas saudveis do organismo. Contudo, a falta de
seletividade e especificidade do tratamento para as clulas tumorais tem sido o principal
inconveniente da teraputica, levando a uma elevada incidncia de efeitos adversos.
Alm disso, as hipteses de recidiva so elevadas a no ser que se destrua a totalidade
das clulas tumorais existentes no organismo humano, estando geralmente estas
recidivas associadas a tumores mais agressivos e resistentes teraputica
anticancergena. As decises do tratamento dependem de diversos fatores, entre os quais
a probabilidade de cura ou de prolongamento da vida com qualidade de vida quando a
recuperao j no possvel, o efeito do tratamento sobre os sintomas, os efeitos
12
adversos do tratamento e a opinio do doente acerca de todos esses aspetos. Na

atualidade, o tratamento antitumoral envolve diferentes metodologias, particularmente a
cirurgia, a radioterapia, a quimioterapia e a hormonoterapia.4,8,9
5.2.1 Cirurgia
A cirurgia permite a remoo do tumor de forma rpida e eficaz e, por isso,

considerada a teraputica mais utilizada, sendo o nico mtodo que permite o estudo
antomo-patolgico do tumor. Contudo, a remoo cirrgica fora remoo de muito
tecido saudvel, conduzindo a uma alterao do funcionamento normal do rgo, e no
assegura a eliminao de micrometstases. Portanto, quando o tumor se encontra numa
fase avanada e disseminada, a cirurgia j no a opo mais indicada. Alm do mais,
alguns tumores encontram-se em locais inacessveis, como o caso de tumores
localizados em reas profundas do crebro ou prximos de estruturas vitais, como o
tronco cerebral, e, nesta situao, mesmo que o tumor esteja confinado a um nico local,
no possvel a realizao da cirurgia.4,9,13
5.2.2 Radioterapia
A radioterapia consiste na erradicao do tumor atravs da irradiao por raios X

ou raios Y emitidos a partir de uma fonte de radiao externa (radioterapia externa) ou a
partir de implantes intraorgnicos (radioterapia interna ou braquiterapia) e utilizada,
principalmente, em casos de tumores localmente avanados, quando a cirurgia j no
indicada. Contudo, tal como na cirurgia, a radioterapia no adequada em caso de
metastizao. A radiao ionizante induz uma diminuio da massa tumoral pois conduz
eliminao das clulas tumorais por ao direta ou atravs da induo da apoptose. No
entanto, difcil impedir que a radiao atinja os tecidos circundantes sos e, por isso,
os tecidos com rpida proliferao celular, como os epitlios cutneo e digestivo, so os
mais afetados. Esta terapia utilizada em certos cancros, tais como o cancro da prstata,
da mama, do colo do tero ou da laringe.4
5.2.3 Quimioterapia
A quimioterapia compreende a utilizao de frmacos citotxicos, normalmente

administrados por via sistmica, que atuam a nvel da replicao do ADN, de forma a
impedir a diviso celular. Habitualmente, a quimioterapia empregue em conjunto com
outras metodologias como a cirurgia e/ou a radioterapia, e no de utilizao isolada,
13
sendo a sua principal aplicao a neoplasia metasttica. O principal inconveniente da

quimioterapia reside no facto dos frmacos citotxicos no s atuarem nas clulas
tumorais, mas tambm nas clulas normais, particularmente nas clulas com tempo de
reproduo mais curto, como as clulas hematopoticas, as clulas do epitlio
gastrointestinal ou as clulas dos folculos pilosos, provocando efeitos adversos
graves.4,9
O tipo de cancro ir condicionar quais os frmacos a utilizar na abordagem
quimioterpica, bem como as suas respetivas doses. Alm do mais, ao longo do tempo
as clulas tumorais sofrem mutaes, que as tornam resistentes a determinados frmacos
anticancergenos e, por isso, nem todos os cancros respondem adequadamente
quimioterapia. No caso dos tumores slidos, a hipoxia uma caraterstica tpica,
conduzindo tambm a uma maior resistncia radioterapia e a alguns frmacos
citotxicos.4,9,14 Geralmente, na terapia anticancergena so administrados, em
simultneo, frmacos com diferentes mecanismos de ao, de forma a prevenir o
desenvolvimento de clulas neoplsicas resistentes.15
Ao contrrio da habitual utilizao dos frmacos, em que se administra a dose
mnima eficaz, na quimioterapia recorre-se dose mxima tolervel em intervalos de
tempo sucessivos, de modo a que uma frao constante de clulas tumorais seja
eliminada em cada ciclo at se obter a cura (Grfico 5.1). As doses elevadas so
tambm requeridas devido a diversas clulas tumorais desenvolverem mecanismos de
evaso, como as bombas de efluxo.9,15 Por vezes, como as doses administradas so
muito intensas, frequente a realizao concomitante de um transplante autlogo da
medula ssea de forma a evitar os danos irreversveis que podem ser causados na
mesma.9 No anexo II, encontra-se um quadro enumerando as diversas classes de
frmacos antineoplsicos, bem com os respetivos mecanismos de ao e efeitos
adversos.
Administrao do frmaco A
Clulas tumorais sensveis ao frmaco A
Clulas tumorais resistentes ao frmaco A
Grfico 5.1 Evoluo do nmero de clulas tumorais ao longo de ciclos sucessivos de quimioterapia,
conforme o conceito de eliminao logartmica, o qual parece seguir uma cintica gompertziana.
Adaptado de [16].
14
5.2.4 Hormonoterapia
A hormonoterapia consiste na privao de certos tumores, como o cancro da

mama e da prstata (cancros hormonodependentes), da influncia das respetivas
hormonas, levando assim a uma reduo da massa tumoral. A privao hormonal apenas
controla o tumor temporariamente, pois acabam por surgir clulas hormono-
independentes, que permitem o recomeo da proliferao tumoral. No caso do cancro da
prstata, a hormonoterapia recorre a frmacos antiandrognios, estrognios e
antagonistas LH-RH, ao passo que, no cancro da mama, recorre a antiestrognios.
Sendo assim, a hormonoterapia utilizada como tratamento adjuvante da cirurgia ou
radioterapia.4
6. A nanotecnologia no mbito da terapia antineoplsica
Nos ltimos tempos, a mortalidade associada a doenas cancergenas tem

diminudo devido uma melhor compreenso da etiologia e da fisiopatologia destas
doenas. Apesar dos meios de diagnstico e do tratamento anticancergeno se terem
tornado melhores e mais eficazes ao longo das ltimas quatro dcadas, o cancro
continua a ser considerado a doena mais letal em todo o mundo.2,7 Tendo em conta a
severidade da doena e a toxicidade associada aos frmacos anticancergenos, o grande
desafio, de momento, selecionar os transportadores de frmacos corretos e conjug-los
a ligandos especficos, de forma a dirigir o agente anticancergeno para o local-alvo.7
A nanotecnologia a rea que estuda a criao e a aplicao dos materiais
escala nanomtrica (Figura 6.1). Esta emergente vertente cientfica est a ser
introduzida nas mais diversas reas, como a engenharia de materiais ou eletrnica e
computao. No entanto, as maiores expectativas esto na sua aplicao no mbito da
sade. A nanotecnologia associada medicina fez surgir a nanomedicina, que se baseia
no desenvolvimento de novas terapias e no aperfeioamento das terapias j existentes.
Com a sua utilizao tornou-se possvel reaproveitar alguns frmacos anticancergenos
que, devido sua elevada toxicidade entraram em desuso, mas que conjugados com
sistemas transportadores como as nanopartculas podem voltar a ser utilizveis. Para
alm disso, a nanomedicina tambm inclui o progresso nos mtodos de diagnstico, de
forma a permitir a deteo das doenas mais precocemente.8,17,18
Para este efeito, os sistemas nanoparticulados e particularmente as nanopartculas
tm sido usados para ultrapassar alguns inconvenientes da teraputica convencional,
15
entre os quais a biodistribuio e a vetorizao inespecficas, a baixa hidrossolubilidade,

a baixa biodisponibilidade oral, a estreita margem teraputica, a baixa concentrao que
alcana o alvo teraputico, a elevada afinidade para as protenas plasmticas, o
desenvolvimento de resistncia a mltiplos frmacos e a rpida eliminao do frmaco
da circulao sangunea. Sendo assim, os nanossistemas podem melhorar o ndice
teraputico atravs 1) da otimizao das caratersticas estruturais do frmaco,
aumentando o seu tempo de circulao e os seus perfis farmacocintico e
farmacodinmico, 2) da libertao seletiva do frmaco nas clulas tumorais por
vetorizao passiva atravs do aumento do efeito de reteno e permeabilidade, 3) da
vetorizao ativa do frmaco aumentando a sua seletividade atravs da conjugao a
anticorpos ou antignios tumorais e, ainda, 4) da superao da resistncia aos
medicamentos induzida pela glicoprotena-P.7,19,20 Embora esta nova tecnologia seja
promissora comparativamente quimioterapia convencional, a libertao do frmaco
por dissociao do complexo inicial ainda permanece como uma das principais
limitaes.19 A baixa biodisponibilidade oral, a instabilidade na corrente sangunea e a
possibilidade de gerarem toxicidade so outras das restries ainda associadas s
nanopartculas.21
Figura 6.1 Escala demonstrativa do tamanho das nanoestruturas comparativamente ao de outros objetos
vulgarmente conhecidos. Adaptado de [17].
Os tipos de nanossistemas mais comuns a serem estudados com aplicao na

terapia antitumoral so os dendrmeros, os lipossomas, as nanopartculas polimricas, as
micelas, as nanopartculas proteicas, as nanopartculas cermicas, as nanopartculas
virais, as nanopartculas metlicas e, por fim, os nanotubos de carbono (Figura 6.2).
Apesar de existir muita investigao nesta rea, apenas alguns nanossistemas foram
aprovados pelas autoridades regulamentares at agora, nomeadamente um sistema de
16
doxorrubicina lipossomal (Myocet), um de doxorrubixina lipossomal conjugado com

polietilenoglicol (PEG) (Doxil), um de daunorrubicina lipossomal conjugado com
PEG (DaunoXome) e, por ltimo, o mais recentemente aprovado sistema de paclitaxel
conjugado a nanopartculas de albumina (Abraxane).6,19,20
Os dendrmeros, por apresentarem algumas propriedades singulares como a sua
multivalncia controlada e a sua monodispersidade, so um dos nanossistemas mais
estudados atualmente e sero o foco desta monografia.
Figura 6.2 Ilustraes representativas dos nanossistemas utilizados na terapia anticancergena. A)

nanopartculas polimricas; B) micelas polimricas; C) dendrmeros; D) lipossomas; E) nanopartculas
virais; F) nanotubos de carbono. Adaptado de [21].
7. Sntese dos dendrmeros e as suas propriedades
Os dendrmeros, tambm designados por molculas em cascata, so

macromolculas polimricas com uma estrutura semelhante a uma rvore, evidenciando
um arranjo altamente ramificado e bem definido, que assume um tamanho
nanoescala.2224 Os dendrmeros foram propostos pela primeira vez no final da dcada
de 70, contudo, apenas no incio dos anos 90, comearam a surgir publicaes na
literatura em nmero significativo. Esta demora para o aparecimento de publicaes
pode ser explicada pelo tempo necessrio para o desenvolvimento de mtodos de sntese
eficientes, pelo elevado custo da sua produo e, tambm, devido impossibilidade de
adquirir os dendrmeros por meio comercial.25 Em 1978, Vgtle e os seus colaboradores
publicaram uma metodologia inovadora em cascata que permitia a sntese da
arquitetura dendrtica e, a partir desse momento, foi possvel sintetizar estas
nanomolculas com maior eficincia, bem como estud-las para futuras aplicaes.26
O termo dendrmero tem origem grega a partir da palavra dendron, que
significa rvore/ramificao devido sua semelhana a uma rvore, e da palavra
17
meros, que significa parte. A estrutura geral do dendrmero possui trs

componentes fundamentais, nomeadamente o ncleo central com dois ou mais grupos
reativos, a camada interior composta por unidades repetidas (geraes), que divergem
radialmente a partir do ncleo central, e, por ltimo, a regio exterior, que se encontra
ligada ao interior da gerao mais externa (funcionalidade terminal).22 Os monmeros
que se ligam ao ncleo central (0.0G) so denominados por monmeros de primeira
gerao (1.0G) e os monmeros de segunda gerao so os que se ligam a cada um dos
monmeros de primeira gerao (Figura 7.1).27 Tanto o nmero de geraes do
dendrmero, como a composio qumica dos seus componentes estruturais so fatores
que iro influenciar o tamanho, a forma e a reatividade dos mesmos. Devido ao facto de
ser possvel controlar esses mesmos fatores durante a sntese dos dendrmeros, estes so
considerados como uma das formas nanoparticuladas mais versteis e personalizveis.17
Figura 7.1 - Estrutura geral dos dendrmeros. Adaptado de [22].
O tamanho do dendrmero relevante na forma trimensional verificando-se que,

geralmente, os dendrmeros de baixa gerao apresentam uma estrutura mais aberta,
enquanto os que apresentam uma alta gerao tornam-se mais densos e com uma
estrutura mais globular.25 medida que a dimenso do dendrmero aumenta uma
gerao, o seu peso molecular duplica em tamanho (Figura 7.2).28 Alm disso, o
tamanho dos dendrmeros muito semelhante ao das estruturas biolgicas existentes no
ser humano, permitindo assim uma interao nica com os sistemas biolgicos a um
nvel molecular.29 Por exemplo, os dendrmeros de poliamidoamina (PAMAM) 5.0G
apresentam um tamanho e forma aproximadamente equivalente ao da hemoglobina,
cerca de 5.5 nm de dimetro.25
18
Figura 7.2 Ilustrao representativa da evoluo de um dendrmero a partir do ncleo central at

gerao 4.0G, bem como do aumento linear do seu dimetro. Adaptado de [30].
Relativamente s suas propriedades, os dendrmeros apresentam uma arquitetura

tridimensional que os torna convenientes para a libertao de frmacos num local-alvo
especfico devido s suas caratersticas nicas, tais como a sua elevada capacidade de
funcionalizao e baixa polidispersidade. O facto de possurem uma superfcie
facilmente modificvel tambm uma propriedade relevante destes, tornando-os
polivalentes e permitindo assim a conjugao do dendrmero tanto com ligandos como
com os frmacos.8
Comparando as caratersticas dos dendrmeros com as dos polmeros lineares,
verifica-se que os primeiros apresentam algumas vantagens relativamente aos ltimos,
tais como a multivalncia controlada dos dendrmeros, que permite a ligao a
frmacos, grupos de vetorizao do frmaco ou grupos solubilizantes, proporcionando
assim um comportamento farmacocintico reprodutvel.31 Por outro lado, os polmeros
tradicionais apresentam uma elevada polidispersidade, que lhes confere diversas
limitaes a nvel farmacocintico.32
Alm disso, estes sistemas permitem aumentar a solubilidade e a
biodisponibilidade de frmacos pouco hidrossolveis, devido sua estrutura ter a
capacidade de possuir um ncleo central hidrofbico e uma superfcie hidroflica. A
solubilidade conferida pelo dendrmero afetada por diversos fatores, como o nmero
de geraes, o pH, o ncleo, a temperatura, arquitetura polimrica e os grupos
funcionais. Os frmacos podem permanecer na cavidade intramolecular vazia ou serem
conjugados aos grupos superficiais do dendrmero para posterior libertao
controlada.2224
Quanto ao processo de sntese, vrias classes de dendrmeros tm sido
sintetizadas, havendo alteraes significativas entre elas quanto aos materiais que
integram o ncleo, s unidades de ramificao e aos grupos superficiais.25 Geralmente, a
19
sntese dos dendrmeros implica a repetio de uma sequncia de reaes compostas por
dois passos, que correspondem ao passo de crescimento da gerao e ao passo de
ativao. Estas reaes devem ser completas e com elevados rendimentos, de modo a
obter dendrmeros sem defeitos estruturais. Estas nanomolculas podem ser sintetizadas
atravs de duas estratgias distintas, nomeadamente por sntese divergente,
desenvolvida por Tomalia et al. e Newkome et al., ou sntese convergente, desenvolvida
por Hawker e Frchet.31 A principal diferena de ambas estratgias restringe-se
direo em que ocorre o processo de sntese.27
7.1 Sntese divergente
A sntese divergente baseia-se na adio sucessiva de monmeros repetidos que

prosseguem radialmente para o exterior, iniciando-se a partir do ncleo central, sendo
este que ir determinar o nmero de pontos de ramificao (Figura 7.3).31 medida que
so adicionados mais monmeros, h um aumento do peso molecular e dos grupos
funcionais presentes superfcie do dendrmero.23
Figura 7.3 - Sntese divergente de dendrmeros PAMAM. Adaptado de [31].
20
7.2 Sntese convergente
Ao contrrio da sntese divergente, os dendrmeros tambm podem ser

sintetizados iniciando-se a partir da superfcie de acordo com uma abordagem
convergente. Neste caso, o crescimento da nanomolcula inicia-se a partir das
extremidades da cadeia, sintetizando-se primeiramente os diversos pontos de
ramificao que iro constituir os dendrmeros e, por ltimo, essas ramificaes so
unidas a um ncleo central (Figura 7.4).23,31
Comparando ambos os mtodos, verifica-se que a abordagem convergente

permite um maior controlo da arquitetura dendrtica final.31 Esta estratgia de sntese
apresenta um menor risco de defeitos na estrutura final, tal como por exemplo a
existncia de uma ramificao incompleta, um defeito que frequentemente ocorre
durante a sntese divergente.23 Em contrapartida, verificou-se que a abordagem
divergente mais adequada para a produo de dendrmeros em larga escala. Contudo,
ambas as abordagens de sntese envolvem processos graduais que so fastidiosos e
demorados. Alm do tempo consumido na produo, estes modelos de sntese so muito
dispendiosos. Todavia, as mais-valias conferidas pelas caratersticas estruturais e pelas
propriedades invulgares prprias dos dendrmeros justificam o elevado custo da sua
produo.31
Figura 7.4 - Sntese convergente de dendrmeros poli(arileter). Adaptado de [31].
21
7.3 Outros mtodos de sntese
Como consequncia, tm sido explorados outros mtodos mais rpidos para

sintetizar os dendrmeros. Um dos mtodos de sntese que tem sido investigado a
abordagem convergente de dupla fase, em que primeiramente preparado um
hiperncleo composto por um grande nmero de grupos funcionais reativos
superfcie, seguido pela ligao s ramificaes dendrticas convergentes. Esta tcnica
permite produzir os dendrmeros maiores em menor tempo e com maior facilidade. Um
outro mtodo de sntese, a estratgia de acoplamento ortogonal, baseia-se na utilizao
de dois monmeros distintos para eliminar os passos de proteo ou ativao. Graas a
esta tcnica, o nmero de passos de sntese encurtado para metade.31
8. Aplicaes gerais dos dendrmeros na rea farmacolgica e

mdica
A aplicao dos dendrmeros na rea mdico-farmacutica tornou-se

rapidamente numa das utilizaes mais atrativas destas nanopartculas.31
8.1 Dendrmeros como transportadores de frmacos
A estrutura bem definida, a forma globular compacta, o tamanho anlogo ao dos

constituintes biolgicos e a elevada capacidade de funcionalizao caraterstica dos
dendrmeros faz com que sejam considerados o nico grupo de nanopartculas altamente
adaptado para aplicao como transportadores de frmacos.18,27,28 Neste momento, j
consensual que os transportadores de frmacos apresentam algumas vantagens sobre os
frmacos administrados na forma livre, entre os quais o aumento do tempo de semivida,
a diminuio da resistncia e o controlo da libertao dos frmacos.33 Alm do mais,
possvel o transporte de mltiplos frmacos numa mesma nanomolcula, permitindo
assim estratgias de tratamento sinrgicas. Uma das reas em que esta estratgia mais se
tem aproveitado a da teraputica anticancergena.18,27,28 Para alm da sua aplicao na
rea da oncologia, os dendrmeros podem ser utilizados noutras reas da medicina,
como o caso do microbicida baseado num dendrmero de poli(L-Lisina) (PLL),
designado por VivaGel, que aplicado topicamente para a preveno do VIH e herpes
genital. Esta formulao ainda no foi aprovada para comercializao, contudo j se
encontra em ensaios clnicos em humanos.34,35 Os dendrmeros podem ser utilizados na
libertao controlada de frmacos atravs de duas formas distintas, dependendo do seu
22
mtodo de preparao, nomeadamente o frmaco ser aprisionado no interior da

arquitetura dendrtica (encapsulado) ou o frmaco pode ser ligado covalentemente
superfcie do dendrmero (conjugado).8,31
8.1.1 Encapsulamento do frmaco
A possibilidade de encapsular molculas hospedeiras no interior da estrutura

dendrtica proporciona o potencial destes nanossistemas interagirem com frmacos
lbeis ou com baixa hidrossolubilidade. Portanto, o encapsulamento pode facultar uma
forma de controlar a libertao do frmaco, bem como permitir o aumento da sua
solubilidade.25 Duncan e Malik encapsularam a cisplatina no interior de uma estrutura
dendrtica e observaram um aumento da atividade antitumoral e nveis inferiores de
toxicidade.15
Uma das estratgias para encapsular o frmaco no interior dos dendrmeros o
encapsulamento fsico. Meijer et al. verificaram que, durante o processo de sntese, as
molculas hospedeiras podem ser fisicamente retidas na cavidade interna das caixas
dendrticas de maiores geraes quando um derivado de aminocido utilizado para
revestir cada grupo terminal do dendrmero. O derivado de aminocido utilizado
corresponde a uma molcula volumosa sujeita a pontes de hidrognio e, por isso, as
molculas aprisionadas no conseguem difundir para fora do invlucro em direo
soluo circundante. Em seguida, a libertao da molcula pode ser alcanada por meio
da eliminao do revestimento, submetendo o dendrmero a condies hidrolticas
adequadas.25,31
A segunda estratgia existente para encapsular a molcula hospedeira no interior
do dendrmero baseia-se na interao atravs de ligaes no covalentes, tais como as
pontes de hidrognio, entre a arquitetura dendrtica e o frmaco.31
Por ltimo, a terceira estratgia a mais fcil de executar e consiste na utilizao
de interaes hidrofbicas entre a estrutura dendrtica e a molcula hospedeira.
Newkome et al. prepararam nanossistemas dendrticos com um interior hidrofbico e
uma superfcie hidroflica, cujo comportamento era semelhante a micelas
unimoleculares com a capacidade de solubilizar frmacos hidrofbicos em meios
aquosos, sendo por isso designados por micelas dendrticas.31
Quanto ao mtodo de encapsulamento fsico, este no parece ser muito vivel
devido sua capacidade muito limitada e s condies extremamente rigorosas
necessrias para remover o revestimento e libertar o seu contedo. Pelo contrrio, as
23
estratgias que envolvem interaes no covalentes, como pontes de hidrognio ou

interaes eletrostticas, para o encapsulamento do frmaco parecem ser mtodos mais
facilmente praticveis e mais simples. As micelas dendrticas apresentam algumas
vantagens comparativamente s micelas unimoleculares convencionais. Estas ltimas
apresentam problemas de estabilidade pois so agregados de blocos anfiflicos em
solventes acima da concentrao micelar crtica (c.m.c). Contudo, quando a
concentrao desce abaixo da c.m.c., a micela torna-se termodinamicamente instvel.
Este processo rapidamente aconteceria no organismo humano, destruindo a estrutura da
micela e libertando o frmaco em locais inapropriados. Por outro lado, as micelas
dendrticas so constitudas por segmentos hidrofbicos e hidroflicos que se encontram
covalentemente ligados e, por isso, so independentes da concentrao e apresentam
uma estrutura mais esttica e estvel.25,31 O PEG tem sido utilizado na formao de
micelas dendrticas, pois quando conjugado com a superfcie de um dendrmero fornece
um invlucro hidroflico em torno de um ncleo hidrofbico. Alm do mais, a utilizao
do PEG extremamente atrativa devido a conferir diversas mais-valias tais como o
aumento da solubilidade e biocompatibilidade.25
8.1.2 Conjugao dendrmero-frmaco
A conjugao entre o dendrmero e o frmaco, por meio de ligaes covalentes,

possvel graas elevada capacidade de funcionalizao presente superfcie da
estrutura dendrtica, permitindo assim um maior controlo sobre a libertao do frmaco
comparativamente ao que se observa em interaes eletrostticas. Este sistema
nanoparticulado tem a capacidade de transportar diversas molculas de frmaco,
dependendo do nmero de geraes, das condies de acoplamento e da natureza das
ligaes envolvidas.25,31,36 Deste modo, o nmero de molculas incorporadas
superfcie dependente da arquitetura dendrtica, correspondendo o aumento da gerao
do dendrmero, a uma duplicao do nmero de grupos superficiais disponveis para
interagir com os frmacos. Contudo, de salientar que nem todos os grupos superficiais
podem estar disponveis para sofrer interaes, como ocorre em caso de impedimento
estrico.25
24
9. Biodistribuio dos dendrmeros
Alguns estudos in vivo tm sido realizados para avaliar a biodistribuio dos

dendrmeros administrados por via parentrica. Nestes ensaios administra-se um
dendrmero marcado com um composto radioativo e analisa-se a distribuio do
complexo. Kukowska-Latallo et al. analisaram in vivo a biodistribuio e eliminao de
dendrmeros 5.0G acoplados ao cido flico e ao marcador radioativo de trtio [3H] (G5-
3
H-FA). Os dendrmeros foram testados em ratinhos xenotransplantados com o tumor
KB humano, cujas clulas tumorais expressam elevadas quantidades do recetor do cido
flico. De forma a minimizar os nveis de cido flico na corrente sangunea, os
ratinhos foram alimentados com uma dieta desprovida de cido flico. Foram, ento,
sintetizados dois dendrmeros distintos marcados radioativamente: um acoplado ao
cido flico e outro no vetorizado (controlo). Aps a administrao dos dendrmeros,
os ratinhos foram examinados periodicamente (5 minutos a 7 dias). Os resultados
indicaram que, nos primeiros quatro dias, a clearance dos dendrmeros G5-3H-FA foi
menor comparativamente ao dendrmeros no vetorizados, o que pode significar que os
dendrmeros G5-3H-FA foram internalizados pelos tecidos que expressavam o recetor
do cido flico. O rim, para alm de ser o principal rgo responsvel pela eliminao
destes dendrmeros, tambm expressa elevadas quantidades do recetor do folato. Os
nveis dos dendrmeros no vetorizados (G5-3H) no rim diminuram rapidamente e
mantiveram-se em nveis moderados nos dias seguintes. Pelo contrrio, os nveis dos
dendrmeros G5-3H-FA aumentaram ligeiramente nas primeiras 24 horas,
presumivelmente devido presena dos recetores do cido flico nos tbulos renais.
Nos dias que se seguiram, observaram uma diminuio dos nveis, semelhana de
outros compostos que so eliminados por via renal.37
A biodistribuio foi, ainda, avaliada por outros estudos, cujas concluses
indicaram que os dendrmeros de gerao mais pequena (3.0G-4.0G) so rapidamente
eliminados por via renal, os de 5.0G so excretados por ambas as vias renal e biliar e os
dendrmeros com um nmero de geraes superior (6.0G-9.0G) so eliminados apenas
atravs do fgado e, portanto possvel ajustar o modo de excreo de um dendrmero
em funo do nmero de geraes que o constitui.34,38 Os rins filtram partculas com
dimenses inferiores a 10 nm, enquanto o fgado responsvel por capturar partculas
com um tamanho superior a 100 nm, o que aponta para que o tamanho ideal das
nanopartculas seja entre 10 e 100 nm, confirmando assim que o tamanho do
25
dendrmero influencia de forma acentuada a excreo renal e biliar do mesmo.22,28 Uma

abordagem alternativa para diminuir a excreo renal, seria conjugar a nanopartcula ao
xido de polietileno (PEO), conferindo assim um maior peso molecular ao conjugado.
Os dendrmeros com grupos superficiais com carga (aninicos e catinicos) e os
dendrmeros hidrofbicos so rapidamente removidos da circulao sangunea,
sobretudo atravs de via biliar. Por outro lado, os dendrmeros com superfcie
hidroflica e os dendrmeros com um nmero de geraes superior permanecem em
circulao durante perodos mais prolongados.6,23,24
Um outro estudo realizado em ratos Wistar analisou a biodistribuio in vivo de
dendrmeros PAMAM marcados com I125, indicando que os dendrmeros aninicos
permanecem em circulao durante mais tempo do que os catinicos e que a velocidade
de eliminao do dendrmero est dependente da sua gerao.39
Deve-se ter em ateno que um perodo de circulao curto pode diminuir a
eficincia de libertao do frmaco no local-alvo e, portanto, existe a possibilidade de
contornar a situao adicionando um polmero hidroflico superfcie do dendrmero,
tal como o PEG. Contudo, importante salientar que a modificao da superfcie do
dendrmero utilizando um ligando radioativo ou um frmaco pode alterar
significativamente a distribuio do transportador.6,23
Sendo assim, a biodistribuio um fator importante a ter em conta, devendo os
conjugados dendrticos permanecer em circulao sangunea o perodo de tempo
suficiente para alcanar a eficcia teraputica e permitir a acumulao nos locais-alvo.
Por outro lado, as nanopartculas devem ser facilmente eliminadas do organismo
humano, de modo a evitar os efeitos txicos associados a uma acumulao
prolongada.31
10. Toxicidade associada aos dendrmeros
10.1 Efeitos txicos no sistema biolgico
Embora exista um elevado otimismo quanto utilizao destes sistemas muito

importante avaliar a toxicidade associada aos dendrmeros de modo a determinar a sua
viabilidade relativamente sua administrao no organismo humano. Os dendrmeros,
como j foi referido anteriormente, apresentam uma dimenso nanomtrica (1-100 nm)
e, portanto, tm a capacidade de interagir com alguns elementos celulares, tais como a
membrana plasmtica, os organelos celulares, como por exemplo o ncleo e as
26
protenas, j que estes constituintes celulares tambm se encontram na escala

nanomtrica. Os dendrmeros tambm podem complexar com alguns ies metlicos,
como os ies ferro e zinco, podendo levar a repercusses ao nvel da bioatividade da
hemoglobina e da catlase renal, respetivamente. Contudo, o principal fator
determinante para a induo da citotoxicidade induzida por dendrmeros a sua carga
superficial. De acordo com alguns estudos in vitro, tem se verificado que os
dendrmeros que tm sua superfcie grupos catinicos so mais citotxicos
comparativamente aos dendrmeros aninicos ou aos dendrmeros que contenham PEG,
pois os primeiros so responsveis por causar a destabilizao da membrana celular, o
que, por conseguinte, leva lise celular (Quadro 10.1). As cadeias de PEG so
biocompatveis, permitindo assim melhorar no s a hidrossolubilidade, como tambm
diminuir a toxicidade.22,31,32 Alm do mais, os dendrmeros com um menor nmero de
geraes apresentam uma maior biocompatibilidade em comparao aos de geraes
superiores. Por exemplo, no caso dos dendrmeros PAMAM, verifica-se um maior nvel
de biocompatibilidade para os dendrmeros 1.0G a 5.0G.38
Dendrmero conjugado
Dendrmero aninico Dendrmero catinico
ao PEG
Toxicidade in vitro: - Toxicidade in vitro: - Toxicidade in vitro: +

Toxicidade in vivo: - Toxicidade in vivo: - Toxicidade in vivo: +
Imunogenicidade: - Imunogenicidade: - Imunogenicidade: +/-
Quadro 10.1 Padres generalizados representando a toxicidade in vitro, a toxicidade in vivo e a
imunogenicidade dos dendrmeros em funo da funcionalidade sua superfcie. Os dendrmeros
com carga aninica ou neutra superfcie exibem uma menor toxicidade e uma maior
biocompatibilidade, onde (-) significa que o dendrmero apresenta em menor evidncia uma dada
caraterstica. Por outro lado, os dendrmeros catinicos apresentam uma maior toxicidade e
imunogenicidade, sendo essas caratersticas representadas por (+). Adaptado de [38].
Muitos dos estudos para avaliar a toxicidade dos dendrmeros so realizados in

vitro, no entanto importante salientar que os estudos in vivo so indispensveis para
comprovar a segurana na utilizao dos dendrmeros para o transporte de frmacos.
27
Relativamente aos testes in vivo, at ao presente momento, os autores verificaram que

os dendrmeros no exibem propriedades que os impeam de serem utilizados para fins
teraputicos. No entanto, h necessidade de estudos adicionais para avaliar mais
detalhadamente o seu comportamento, que ir depender dos seus constituintes
estruturais, particularmente o ncleo central, as geraes interiores e os grupos
superficiais. Para alm das caratersticas do dendrmero, a toxicidade in vivo de um
polmero extremamente influenciada pela farmacocintica e pela biodistribuio e, por
isso, so to importantes os testes de biodistribuio, de modo a identificar
oportunidades ou entraves vetorizao seletiva do frmaco e, tambm, para analisar
quais os tecidos ou rgos com maior capacidade de armazenamento do frmaco e que,
portanto, so potenciais alvos de toxicidade.22,23 Abaixo sero mencionados alguns
efeitos txicos mais detalhadamente.
10.1.1 Toxicidade hemoltica
Os dendrmeros que exibem na sua superfcie grupos catinicos terminais

interagem com os glbulos vermelhos, levando sua hemlise. Estes factos so
corroborados por um estudo efetuado em ratos albinos do sexo masculino, onde se
analisou o potencial dos dendrmeros catinicos de polipropilenoimina (PPI) libertarem
fosfato de primaquina diretamente nas clulas hepticas, quando estes eram revestidos
perifericamente com galactose. Este estudo in vivo indiciou que a principal limitao
dos dendrmeros catinicos era a toxicidade hemoltica, no caso dos grupos amina
superficiais se encontrarem na forma livre, tendo-se obtido uma percentagem de
hemlise igual a 35,7% e 49,2% para dendrmeros de 4.0G e 5.0G, respetivamente. Por
outro lado, quando os dendrmeros de PPI so revestidos perifericamente com galactose,
existe uma reduo significativa na percentagem de hemlise para valores de 10% e
7,1% nos dendrmeros 4.0G e 5.0G, respetivamente.40
Pelo contrrio, estudos efetuados em dendrmeros aninicos mostram ausncia
de atividade hemoltica. Alguns autores sugerem que quanto maior for a gerao do
dendrmero catinico, maior ser a hemlise observada, atribuindo-se esta
proporcionalidade direta ao facto destes dendrmeros apresentarem uma carga catinica
global mais elevada.22,23
Foram tambm efetuados estudos, administrando dendrmeros catinicos PPI
5.0G a ratos albinos do sexo masculino, de modo a avaliar diversos parmetros
hematolgicos, entre os quais a contagem de glbulos brancos e de glbulos vermelhos
28
bem como a medio da hemoglobina, hematcrito e hemoglobina corpuscular mdia.

Foi, assim, possvel determinar que os dendrmeros catinicos podem influenciar de
forma significativa os parmetros hematolgicos, verificando-se um aumento na
contagem de glbulos brancos e uma diminuio na contagem de glbulos vermelhos,
na hemoglobina, no hematcrito e na hemoglobina corpuscular mdia. Por outro lado,
quando os mesmos dendrmeros foram revestidos superfcie com grupos protetores,
como os aminocidos glicina ou fenilalanina, o valor dos parmetros hematolgicos no
diferiu de modo estatisticamente significativo em relao ao controlo, indicando assim
que a funcionalizao melhora a biocompatibilidade dos dendrmeros PPI.41
10.1.2 Imunogenicidade
Tem sido avaliada a possibilidade dos dendrmeros provocarem uma resposta

imune exagerada quando administrados em organismos vivos, no entanto o que se tem
observado que os dendrmeros no exibem nenhuma ou apenas exibem uma fraca
imunogenicidade. Isto significa que estes nanossistemas no so reconhecidos pelo
sistema imunitrio do hospedeiro como partculas estranhas, sendo este um fator
importante quando se pretende utiliz-los no transporte de frmacos.22
10.1.3 Rutura da membrana celular
Alguns investigadores tm demonstrado que a citotoxicidade est extremamente

correlacionada com os grupos terminais presentes superfcie dos dendrmeros.36 Os
dendrmeros catinicos interagem com as cargas negativas dos grupos fosfatos da
bicamada lipdica atravs de interaes eletrostticas, levando formao de pequenos
poros e contribuindo assim para uma menor estabilidade e para um aumento da
permeabilidade da membrana celular. Como consequncia dessa interao, advm a
perda de protenas citoslicas, como a lactato desidrogenase (LDH). Na figura abaixo
encontra-se um esquema relativo ao processo de destabilizao da membrana
biolgica.22
29
Figura 10.1 - Esquema relativo ao processo de rutura da membrana celular. Adaptado de [22].
Lee e Larson compararam a formao de nanoporos na bicamada lipdica,

quando esta contacta com dendrmeros PAMAM e com polmeros lineares de PLL e
verificaram que, ao contrrio dos dendrmeros, os polmeros PLL, no levavam ao
surgimento de poros na membrana. Isto deve-se necessidade dos dendrmeros
formarem interaes eletrostticas com as cabeas polares dos fosfolpidos da bicamada
que esto em contacto com o meio intracelular, de modo a penetrarem no interior da
clula. Alm disso, concluram que a rutura da membrana plasmtica mais acentuada
quanto maior for a concentrao e o peso molecular do dendrmero em estudo, pois
estes so aspetos que contribuem para o surgimento de poros na membrana. Sendo
assim, os resultados indicam que a forma esferoidal dos dendrmeros parece ser mais
eficiente no transporte de frmacos em relao a polmeros lineares, devido ao aumento
da permeabilidade da membrana, contudo, este aumento da permeabilidade, em
contrapartida, tambm pode levar a efeitos nefastos se conduzir efetivamente lise
celular.42
Em 2006, Hong et al. demonstraram que o nmero de geraes do dendrmero
est intimamente relacionado com a capacidade destes nanossistemas formarem
nanoporos. Recorrendo tcnica de microscopia de fora atmica, foi possvel
estudarem as interaes que ocorriam entre os dendrmeros e a bicamada lipdica. Estes
investigadores verificaram que os dendrmeros PAMAM 7.0G induziam a formao de
nanoporos de dimetro entre 15 a 40 nm (Figura 10.2), enquanto os dendrmeros
30
PAMAM 5.0G apenas aumentavam o tamanho de defeitos pr-existentes na bicamada.

Por outro lado, ainda apuraram que os dendrmeros, cuja neutralizao das cargas
positivas era alcanada atravs da utilizao de grupos acetamida, no originavam a
formao de novos poros na bicamada lipdica, nem o aumento de defeitos pr-
existentes.43
importante salientar que o aumento da permeabilidade induzida pelos
dendrmeros no definitivo e que, aps a remoo dos dendrmeros, as protenas
citoplasmticas retornam aos valores normais.22
Figura 10.2 Visualizao por Microscopia de fora atmica da bicamada lipdica, aps a interao com os
dendrmeros. As linhas brancas salientam algumas reas onde a bicamada foi afetada. No possvel observar os
dendrmeros nestas imagens. a) Dendrmeros PAMAM 7.0G carregados positivamente levam formao de
nanoporos na bicamada previamente intacta. b) Dendrmeros PAMAM 5.0G carregados positivamente originam
o aumento de defeitos pr-existentes na bicamada lipdica, representados pelas reas escuras destacadas pelas
setas brancas. c) Dendrmeros PAMAM neutralizados pelos grupos acetamida no originam a formao de
nanoporos. Em vez disso, os dendrmeros aderem-se s bordas dos defeitos existentes na membrana. Adaptado de
[43].
10.1.4 Libertao de citocinas e quimiocinas
Os dendrmeros podem modular a libertao de citocinas e quimiocinas,

podendo este efeito ser uma ferramenta teraputica til ou levar a efeitos txicos
significativos. Vannucci et al. administraram dendrmeros PAMAM acoplados com N-
acetilglicosamina a ratinhos C57BL/6 com melanoma e avaliaram a capacidade destes
glicodendrmeros modularem uma resposta imunolgica por meio do reconhecimento
dos hidratos de carbono, j que a N-acetilglicosamina apresenta uma elevada afinidade
in vitro para o recetor dos linfcitos recombinantes NKR-P1A. Os resultados no
indicaram uma regresso da massa tumoral, no entanto houve uma diminuio do
crescimento do tumor e um aumento da sobrevivncia. Para alm nisso, ainda
observaram um aumento das clulas CD69+ no tecido tumoral e no bao e nveis de
31
citocinas aumentados, tais como a IL-1, o (INF)-, o (TNF)- e a IL-2. Ainda, foram
efetuados ensaios de citotoxicidade ex vivo, que revelaram um aumento da
citotoxicidade proporcional percentagem de clulas Natural-Killer ativadas. Assim
sendo, os resultados obtidos pelos investigadores sugerem que os glicodendrmeros tm
a capacidade de estimular uma resposta imunolgica antitumoral, tanto a nvel da
imunidade inata como da imunidade adquirida, sendo esta competncia conferida pelo
revestimento de N-acetilglicosamina, que interage com os recetores presentes
superfcie de algumas clulas do sistema imunolgico.44
10.2 Solues para minimizar a toxicidade
Aps o reconhecimento de que alguns dendrmeros poderiam induzir

citotoxicidade e toxicidade hemoltica, os investigadores aperceberam-se da necessidade
de desenvolver mtodos que contornassem os efeitos adversos associados ao uso dos
dendrmeros como transportadores seletivos de frmacos. Na figura 10.3, encontram-se
esquematizadas as diversas estratgias que podem ser utilizadas para minimizar a
toxicidade associada aos dendrmeros.22
Dendrmeros Dendrmeros
politerimina Dendrmeros
fosfato
poli(melamina)
Dendrmeros
politer
Dendrmeros
de cido ctrico
Dendrmeros
polister
Dendrmeros Dendrmeros biocompatveis ou Dendrmeros

peptdicos biodegradveis triaznicos
Dendrmeros carregados
Dendrmeros conjugados
Dendrmeros negativamente ou de
com o frmaco
meia gerao
Dendrmeros conjugados Alterao da superfcie dos Dendrmeros conjugados

tuftsina dendrmeros a aminocidos
Dendrmeros Dendrmeros conjugados

conjugados ao folato a anticorpos
Dendrmeros conjugados
Dendrmeros Dendrmeros conjugados a hidratos de carbono
acetilados ao PEG
Figura 10.3 - Estratgias para minimizar a toxicidade associada aos dendrmeros. Adaptado de [22].
32
10.2.1 Utilizao de dendrmeros biocompatveis
A primeira abordagem para minimizar a toxicidade dos dendrmeros baseia-se

no desenvolvimento de ncleos centrais ou ramificaes que sejam biocompatveis. A
sntese destes dendrmeros assenta no pressuposto de que a utilizao de monmeros
anlogos a produtos metablicos de diversos processos biolgicos, leva ao surgimento
de nanopartculas biodegradveis.22 Neste contexto, a utilizao destes dendrmeros
permite o desempenho das suas funes sem efeitos txicos nem imunolgicos para as
biomolculas ou clulas normais, devendo para isso serem degradados em compostos
no-txicos e, posteriormente, eliminados da circulao sistmica.32 Entre os diversos
dendrmeros biocompatveis, pode-se destacar os dendrmeros peptdicos, os
dendrmeros polister, os dendrmeros triaznicos, os dendrmeros fosfato, os
dendrmeros politer, dendrmeros de cido ctrico, dendrmeros poli(melamina) e os
dendrmeros politerimina.22
10.2.1.1 Dendrmeros peptdicos
Os dendrmeros podem exibir na sua constituio diversos aminocidos, tais

como a lisina ou a arginina, que lhes conferem propriedades que parecem ser
promissoras para a sua utilizao como transportadores de frmacos.22
Em 2007, Agrawal et al. sintetizaram dendrmeros de PLL 4.0G, utilizando o
PEG 1000 como ncleo central e o aminocido L-Lisina como unidade de ramificao.
De seguida, os dendrmeros PLL foram conjugados perifericamente com galactose, de
modo a revesti-los superfcie. Estes investigadores verificaram que a sntese de
dendrmeros biocompatveis, como o caso dos PLL, reduz significativamente a
hemlise dos glbulos vermelhos comparativamente a outros dendrmeros. De acordo
com o estudo, os valores de hemlise foram 2,53 vezes inferiores para dendrmeros PLL
no revestidos com galactose e 5,3 vezes inferiores para dendrmeros PLL revestidos
com galactose, quando comparados com os valores obtidos para dendrmeros PPI.
Sendo assim, os investigadores concluram que o revestimento dos dendrmeros
peptdicos com galactose uma abordagem vantajosa, permitindo utiliz-los como
sistemas de libertao controlada seguros e eficazes.45
33
10.2.1.2 Dendrmeros polister
Tm sido efetuados diversos estudos in vitro, a fim de avaliar a citotoxicidade

associada aos dendrmeros polister, tais como os PEO. Gillies et al. incubaram
dendrmeros PEO com clulas cancergenas MDA-MB-231 durante um perodo de 48
horas e, posteriormente, avaliaram a viabilidade celular pela tcnica do MTT. Com base
nos resultados, determinaram que os dendrmeros no apresentavam toxicidade
significativa a nenhuma das concentraes de polmero estudadas e que a viabilidade
celular excedeu os 85% comparativamente aos respetivos controlos.46
10.2.1.3 Dendrmeros triaznicos
Os dendrmeros triaznicos tm mostrado ser sistemas adequados para o

transporte de frmacos e bons agentes de solubilizao de molculas hidrofbicas.
Relativamente toxicidade, aparentam no conferir efeitos txicos nos animais modelos
estudados. Zhang et al. averiguaram se os dendrmeros triaznicos possuam toxicidade
inerente, que os pudesse impossibilitar de serem utilizados no organismo humano. Por
via intraperitoneal, administraram a ratinhos C3H do sexo masculino diferentes
dosagens de dendrmeros, nomeadamente 1 mg/kg, 2,5 mg/kg e 10 mg/kg, usando
quatro ratinhos por grupo. Aps 48 horas da injeo, os ratinhos foram sacrificados e a
autpsia efetuada aos animais no revelou quaisquer anomalias a nvel dos rgos.
Alm do mais, no verificaram um aumento dos indicadores de disfuno heptica,
como a alanina aminotransferase e a transaminase glutamato-piruvato, nem dos
indicadores de disfuno renal, como a ureia srica.47
10.2.1.4 Dendrmeros fosfato
Domanski et al. realizaram estudos a fim de averiguarem a hematotoxicidade e a

citotoxicidade associada aos dendrmeros de tiofosfato 5.0G. A partir dos resultados
obtidos, verificaram que, temperatura fisiolgica, nenhuma das concentraes de
dendrmeros estudadas apresentaram valores de hemlise estatisticamente significativos.
A libertao de hemoglobina considerada estatisticamente significativa apenas foi
observada na amostra contendo uma concentrao de 10 M, a concentrao em estudo
mais elevada, e quando esta foi submetida a 42 e 46C. Verificaram, ainda, que embora
a interao entre os dendrmeros e as protenas presentes superfcie das hemcias
desencadeasse equinocitose, tambm levavam a um aumento da estabilidade da
34
membrana do eritrcito e da sua durabilidade trmica. Sendo assim, os investigadores

concluram que os dendrmeros de tiofosfato 5.0G no so nem hematotxicos, nem
citotxicos dentro de uma gama de concentraes entre 100 pM e 10 M e, portanto,
devido sua biocompatibilidade, so bons candidatos para serem utilizados como
transportadores de frmacos.48
10.2.1.5 Dendrmeros politer
Malik et al. sintetizaram dendrmeros politer por via convergente e avaliaram

as suas propriedades hemolticas. Os investigadores demonstraram que os dendrmeros
contendo malonato ou carboxilato sua superfcie, no causavam hemlise dos
eritrcitos uma hora aps a sua administrao. Pelo contrrio, aps vinte e quatro horas
de incubao, estes dendrmeros j se mostraram lticos.39
10.2.1.6 Dendrmeros politerimina
Krishna et al. avaliaram a citotoxicidade dos dendrmeros de politerimina

atravs da tcnica MTT, incubando-os em duas linhagens celulares distintas, mais
especificamente em clulas do cancro da mama humanas T47D e em clulas renais de
macaco-verde africano CV-1. Os resultados obtidos revelaram que mais de 98% das
clulas mostraram viabilidade celular at uma concentrao de dendrmeros igual a 100
mg/mL para ambas as linhagens celulares. Tendo em conta este ensaio in vitro,
confirma-se que estes dendrmeros no so txicos, tendo um enorme potencial em
diversas aplicaes, tais como o transporte de frmacos.49
10.2.1.7 Dendrmeros de cido ctrico
Namazi e Adeli selecionaram dendrmeros de cido ctrico e PEG, em virtude

das suas propriedades singulares, entre as quais a sua adequada hidrossolubilidade,
baixa toxicidade e biocompatibilidade. Aps a sntese dos dendrmeros, diversas
molculas hospedeiras foram aprisionadas no interior destas nanoestruturas, tais como o
cido 5-amino-saliclico (5-ASA), a piridina, o cido mefenmico e o diclofenac. De
seguida, os complexos dendrmero-frmaco foram mantidos temperatura ambiente por
um perodo de 10 meses e, aps esse tempo findo, observaram que os complexos
permaneceram estveis e que no tinha ocorrido a libertao dos frmacos. Alm disso,
ainda estudaram o processo de libertao controlada dos frmacos a partir dos
nanossistemas. Os dendrmeros foram submetidos a meios com pH distintos e
35
verificaram que a um pH de 7.4 a taxa de libertao dos frmacos era mais lenta
comparativamente mesma taxa em pH igual a 1 ou 10. Posteriormente, ainda
apuraram a existncia de uma relao de proporcionalidade direta entre a dimenso do
dendrmero e a velocidade de libertao dos frmacos.50
10.2.1.8 Dendrmeros poli(melamina)
Em 2004, Neerman et al. administraram dois frmacos anticancergenos, o

metotrexato (MTX) e o 6-mercaptopurina, em ratinhos C3H, na forma livre e
encapsulados nos dendrmeros de melamina. Estes frmacos so conhecidos pela sua
elevada hepatotoxicidade e, portanto, o estudo tinha como principal objetivo avaliar se a
utilizao dos dendrmeros de melamina poderia ser uma estratgia para minimizar a
toxicidade. Quarenta e oito horas aps a administrao dos frmacos, os ratinhos foram
sacrificados, a fim de recolher o seu soro para quantificar os nveis de alanina
transaminase (ALT), um indicador de disfuno heptica. Com base no estudo,
verificou-se que, quando os frmacos so encapsulados no interior dos dendrmeros,
havia uma diminuio significativa nos nveis de ALT, obtendo-se uma reduo dos
valores da transaminase em cerca de 27%, no caso do MTX, e 36%, no caso da 6-
mercaptopurina, comparativamente aos resultados obtidos para os animais
administrados com o frmaco na forma livre. Sendo assim, os investigadores
concluram que as interaes no covalentes entre o dendrmero e o frmaco so
responsveis por impedir que todo o frmaco se difunda rapidamente para fora do
veculo, diminuindo assim a toxicidade sistmica.51
10.2.2 Alterao da superfcie dos dendrmeros
Outra estratgia para diminuir a toxicidade dos dendrmeros baseia-se na

alterao dos grupos de superfcie, de modo a proteger os grupos catinicos, como os
grupos amina, com unidades neutras ou aninicas, diminuindo assim a citotoxicidade
inerente a estes, atravs do impedimento de interaes eletrostticas entre os
dendrmeros e a membrana celular. Para alm de diminuir a toxicidade, esta abordagem
tambm permite melhorar a biodistribuio e a farmacocintica do transportador,
aumentar a solubilidade, libertar o frmaco de forma mais controlada e conduzir a uma
maior estabilidade.22,24 Abaixo sero apresentadas vrias estratgias para modificar os
grupos de superfcie.
36
10.2.2.1 Conjugao dos dendrmeros com PEG
A conjugao dos dendrmeros com o PEG tem como principal finalidade a

diminuio da toxicidade atravs da proteo dos grupos catinicos dos dendrmeros
(Figura 10.4). Alm do mais, o PEG permite aumentar a hidrossolubilidade, prolongar o
tempo do dendrmero em circulao e evitar a acumulao do mesmo em diferentes
rgos.12,27,36 Bhadra et al., em 2003, realizaram um estudo, cujo principal objetivo era
explorar a aplicao dos dendrmeros PAMAM conjugados com PEG como
transportadores do frmaco 5-fluorouracilo (5-FU). Quanto aos estudos de toxicidade
hemoltica, os investigadores verificaram que a conjugao com PEG levava a uma
reduo significativa na hemlise para valores abaixo dos 5%, devido inibio da
interao eletrosttica entre os glbulos vermelhos e o io amnio quaternrio carregado
positivamente presente nos dendrmeros PAMAM no conjugados. Relativamente aos
parmetros hematolgicos obtidos a partir de ratos albinos, observaram que a contagem
de glbulos vermelhos encontrava-se abaixo dos valores de referncia, no caso dos
dendrmeros PAMAM no conjugados, comparativamente aos dendrmeros conjugados.
Alm disso, tambm verificaram que apenas os ratos administrados com os dendrmeros
no conjugados com PEG apresentavam um aumento estatisticamente significativo na
contagem de glbulos brancos. Portanto, os dendrmeros conjugados com PEG
mostraram ser adequados para o transporte do frmaco e revelaram minimizar a
toxicidade hemoltica e hematolgica induzida pelo 5-FU.52
Figura 10.4 - Dendrmero conjugado ao PEG e ao frmaco. Adaptado de [22].
37
10.2.2.2 Conjugao dos dendrmeros com hidratos de carbono
Os dendrmeros que incorporam na sua arquitetura hidratos de carbono, tais

como a galactose ou a maltose, so tambm designados por glicodendrmeros. Klajnert
et al. realizaram um estudo utilizando dendrmeros PPI revestidos por unidades de
maltose. Os investigadores efetuaram o teste de hemlise em dendrmeros PPI 2.0G e
4.0G e em dendrmeros similares conjugados com a maltose. Aps um perodo de duas
horas de incubao, verificaram que ambos os dendrmeros no conjugados induziam
hemlise a uma concentrao de 3 e 6 mg/mL, como se pode observar no Grfico 10.1.
Pelo contrrio, os dendrmeros conjugados com maltose mostravam uma perda quase
total da atividade hemoltica, o que indica que o acoplamento maltose permite reduzir
a toxicidade inerente aos dendrmeros.53
Grfico 10.1 Hemlise induzida pela incubao dos glbulos vermelhos com os dendrmeros PPI 2.0G,
PPI 2.0G acoplado maltose, PPI 4.0G e PPI 4.0G acoplado maltose a concentraes de 3 mg/mL (a
cinzento claro) e 6 mg/mL (a cinzento escuro). Adaptado de [53].
10.2.2.3 Acetilao dos dendrmeros
Segundo Kolhatkar et al., os dendrmeros PAMAM so candidatos promissores

para o transporte dos frmacos at ao seu local de ao, contudo o seu elevado potencial
para induzir citotoxicidade tem dificultado a sua aplicao in vivo. Tendo por base este
conhecimento, os grupos amina superficiais dos dendrmeros PAMAM foram acoplados
com grupos acetilo. Em seguida, foi avaliada a viabilidade celular in vitro utilizando
diversas concentraes de dendrmeros. Os resultados obtidos mostraram que os
dendrmeros PAMAM acetilados apresentavam uma viabilidade celular superior a 90%,
enquanto, no caso dos dendrmeros no acetilados, medida que a concentrao
38
aumentava, observava-se uma reduo cada vez mais acentuada da viabilidade das
clulas. Os investigadores demonstraram ainda a existncia de uma relao linear entre
o nmero de grupos amina presentes superfcie dos dendrmeros e a citotoxicidade
celular e que, por consequncia, a viabilidade celular era dependente da gerao do
dendrmero PAMAM.54
10.2.2.4 Dendrmeros de meia gerao
Alguns dendrmeros, como os PAMAM, apresentam grupos superficiais

carregados positivamente, contudo os dendrmeros de meia gerao correspondentes
apresentam, sua superfcie, grupos carboxlicos, tornando-os assim carregados
negativamente.22 Jevprasesphant et al. modificaram a superfcie de dendrmeros
PAMAM, tornando-os dendrmeros de meia gerao aninicos, e avaliaram a sua
citotoxicidade em clulas de adenocarcinoma humano Caco-2. Como se observa no
grfico 10.2, os dendrmeros de meia gerao 2.5G e 3.5G no induziram citotoxicidade
at uma concentrao igual a 1mM. Pelo contrrio, os dendrmeros PAMAM 2.0G
apresentaram uma reduo da viabilidade celular a concentraes acima de 700 M e os
dendrmeros 3.0G e 4.0G mostraram citotoxicidade a todas as concentraes analisadas.
Portanto, os investigadores concluram que, embora os dendrmeros PAMAM exibissem
citotoxicidade, a modificao da sua superfcie pode contribuir para uma reduo
significativa da toxicidade.55
Grfico 10.2 Avaliao da viabilidade celular das clulas Caco-2, expondo-as a diferentes
concentraes de dendrmeros PAMAM catinicos (G2, G3 e G4), aninicos (G2.5 e G3.5) e ao controlo.
Adaptado de [55].
39
10.2.2.5 Conjugao dos dendrmeros com pptidos
Em 2007, Yang e Kao sintetizaram dendrmeros PAMAM 3.5G e 4.0G, os quais

foram, posteriormente, conjugados com o pptido arginina-glicina-aspartato (RGD). A
citotoxicidade destes dendrmeros foi avaliada in vitro, expondo os fibroblastos a
diversas concentraes, 0.2, 2, ou 20 M, de dendrmeros PAMAM 3.5G e 4.0G bem
como a dendrmeros similares acoplados ao tripptido. De acordo com os resultados,
tanto os dendrmeros 3.5G modificados como os no modificados no induziram
toxicidade nos fibroblastos a nenhuma das concentraes analisadas. Pelo contrrio, os
dendrmeros PAMAM 4.0G levavam a uma reduo significativa da viabilidade celular,
medida que a concentrao aumentava. Contudo, quando analisaram os dendrmeros
4.0G acoplados ao RGD, verificaram uma diminuio significativa da toxicidade
inerente a estes, indicando assim que a conjugao de tripptidos pode ser uma
estratgia para minimizar a citotoxicidade dos dendrmeros PAMAM 4.0G catinicos.56
10.2.2.6 Dendrmeros conjugados ao frmaco
Asthana et al. avaliaram o potencial dos dendrmeros PAMAM 4.0G como

transportadores de um frmaco anti-inflamatrio acdico, o flurbiprofeno.
Adicionalmente, foram efetuados estudos in vitro, de forma a estimar a toxicidade
hemoltica intrnseca aos dendrmeros. O estudo revelou que a natureza policatinica
dos dendrmeros PAMAM no conjugados ao frmaco interagia com os eritrcitos,
resultando na hemlise. Quando o estudo foi realizado nos dendrmeros conjugados ao
frmaco anti-inflamatrio, verificaram que havia uma reduo significativa na
toxicidade hemoltica.57
10.2.2.7 Conjugao do dendrmero com um anticorpo
A ligao do dendrmero a um determinado anticorpo, para alm de diminuir a

toxicidade inerente aos frmacos anticancergenos, tambm vai auxiliar na vetorizao
do frmaco para o tumor.22 A principal desvantagem da terapia anticancergena a
elevada toxicidade intrnseca aos frmacos anticancergenos, o que conduz a graves
efeitos secundrios. Quando se recorre aos anticorpos monoclonais, o frmaco
distribudo especificamente nas clulas tumorais, permitindo reduzir ou eliminar os
efeitos colaterais. Em alguns tumores, ocorre uma elevada expresso do antignio
40
tumoral HER2, permitindo que o anticorpo anti-HER2 direcione o frmaco para as

clulas que expressam este antignio tumoral. Em 2006, Shukla et al. conjugaram
dendrmeros PAMAM 5.0G com um anticorpo monoclonal anti-HER2. Atravs de
citometria de fluxo e microscopia confocal, os investigadores avaliaram a interao e a
internalizao do dendrmero conjugado ao anti-HER2 com as clulas que expressam
HER2 e confirmaram que o dendrmero conjugado ao anticorpo foi predominantemente
internalizado nas clulas que expressam o antignio tumoral, sua superfcie. Ainda,
foram efetuados estudos in vivo atravs do desenvolvimento de tumores em ratinhos
SCID, que, por sua vez, foram injetados com uma soluo de dendrmeros conjugados
ao anticorpo monoclonal. Os ensaios revelaram que estes conjugados podem direcionar
agentes de imagiologia e agentes anticancergenos a tumores dependentes de HER2.58
10.2.2.8 Conjugao do dendrmero tuftsina
Dutta et al. exploraram, in vitro, o potencial dos dendrmeros PPI 5.0G

conjugados tuftsina para transportar um frmaco anti-retroviral, o efavirenz. A tuftsina
um tetrapptido (Thr-Lys-Pro-Arg) ativador de macrfagos, moncitos e leuccitos
polimorfonucleares, que faz parte do domnio Fc da imunoglobulina G, e libertada
fisiologicamente aps clivagem enzimtica. De forma a avaliar a citotoxicidade, os
investigadores utilizaram clulas mononucleares humanas e sujeitaram-nas tcnica
MTT. Poder-se-ia julgar que a toxicidade dos dendrmeros conjugados seria superior,
devido ao facto da interao formar uma ligao amida entre os grupos amina do
dendrmero PPI e os grupos carboxilo da tuftsina, expondo um maior nmero de grupos
amina na superfcie dos conjugados. Contudo, o estudo demonstrou uma reduo
significativa na citotoxicidade quando os dendrmeros PPI conjugados foram
analisados, o que pode ser explicado pelo impedimento estrico conferido pelo
tetrapptido volumoso, permitindo mascarar a funcionalidade citotxica superfcie.
Alm disso, ainda verificaram que a tuftsina estimulava a atividade fagoctica,
auxiliando o frmaco no combate ao VIH. Portanto, os dendrmeros conjugados
tuftsina podem ser utilizados para melhorar a segurana e eficcia dos frmacos,
permitindo reduzir a sua dose e os efeitos adversos associados a estes.59
41
10.2.2.9 Conjugao dos dendrmeros ao cido flico
Singh et al. conjugaram dendrmeros PAMAM 4.0G ao cido flico ou ao cido

flico-PEG. Os dendrmeros conjugados foram utilizados como transportadores do
frmaco 5-FU e foi avaliada in vitro a toxicidade hemoltica dos dendrmeros PAMAM
4.0G, dos dendrmeros PAMAM 4.0G conjugados ao cido flico e dos dendrmeros
PAMAM 4.0G conjugados ao cido flico-PEG, tendo-se obtido, respetivamente, os
seguintes valores de hemlise: 18.67 0.92%, 15.47 0.71% e 5.74 0.28%. Os
dendrmeros conjugados ao cido flico-PEG mostraram uma reduo significativa nos
valores hemolticos, devido ao aumento da biocompatibilidade conferido pelo PEG. O
ligando cido flico auxilia na vetorizao do frmaco ao local-alvo e, por isso, tambm
contribuiu para a diminuio dos efeitos adversos associados ao 5-FU. Sendo assim, a
combinao de ambas as abordagens parece ser promissora para minimizar a toxicidade
e melhorar a eficcia da teraputica.60
10.2.3 Alterao do nmero de geraes
Por fim, importante salientar que os dendrmeros com um nmero baixo de

geraes tm os grupos superficiais mais acessveis bem como o ncleo central,
enquanto em geraes superiores, estes constituintes se tornam de mais difcil acesso do
ponto de vista estrico. Esta abordagem pode ser til para minimizar a toxicidade de um
dendrmero em que o ncleo central seja potencialmente txico.23
11. Libertao do frmaco no local-alvo
De modo a tornar o tratamento o mais efetivo possvel, os frmacos devem ser

capazes de alcanar os tecidos tumorais atravs da penetrao das barreiras fisiolgicas
do organismo. Para alm disso, o frmaco deve ser dirigido, permitindo aumentar a
concentrao dos frmacos citotxicos nas clulas tumorais e minimizar a toxicidade
nas clulas normais o que, por conseguinte, leva a uma taxa de sobrevivncia superior e
a uma melhor qualidade de vida para o doente. Deste modo, a efetividade de doses
inferiores pode aumentar devido maior percentagem de frmaco que alcana as clulas
tumorais e, por outro lado, torna-se mais segura a administrao de doses mais elevadas
em virtude da distribuio ser especfica. Abaixo encontram-se descritas mais
detalhadamente duas estratgias distintas que permitem que os frmacos alcancem o
tecido tumoral de forma mais direcionada, a vetorizao passiva e a vetorizao ativa
42
(Figura 11.1).19,21,34 A utilizao em simultneo de ambas as estratgias de vetorizao

permite tirar partido da mxima eficcia do tratamento.18
Figura 11.1- Libertao do frmaco controlada. A figura A corresponde vetorizao passiva,

observando-se uma acumulao das nanopartculas no tecido tumoral devido ao efeito de reteno e
permeabilidade aumentado. A figura B corresponde vetorizao ativa, verificando-se uma acumulao
do frmaco atravs da utilizao de nanopartculas, levando formao de conjugados que interagem com
as clulas cancergenas. Adaptado de [20].
11.1 Vetorizao passiva
A vetorizao passiva diz respeito acumulao dos nanossistemas na massa

tumoral devido a fatores fsico-qumicos e farmacolgicos.19 Os dendrmeros tiram
proveito do seu tamanho nanomtrico e das caratersticas especficas do tumor de modo
a desenvolver mecanismos que conduzem a este tipo de vetorizao. A vasculatura do
tumor muito diferente da observada nos tecidos normais. Os vasos sanguneos
presentes nos tecidos tumorais, formados a partir do processo de angiognese,
apresentam uma arquitetura deformada, contendo algumas fendas com uma dimenso
entre 100 nm e 2 m, criada devido ao desequilbrio resultante dos reguladores
angiognicos, como os fatores de crescimento e as metaloproteinases da matriz, e ao
rpido fluxo sanguneo necessrio para aportar os nutrientes, de modo a fornec-los s
clulas de crescimento acelerado. Esta vasculatura danificada, juntamente com um
sistema linftico anmalo, resultam numa escassa drenagem linftica no local e, por
isso, numa reteno de fludos no interior do tumor, o que faz com que haja um efeito
de reteno e permeabilidade aumentado. Este efeito permite que os dendrmeros
extravasem atravs das fendas formadas entre as clulas endoteliais e se acumulem no
interior do tecido tumoral. Por outro lado, como a vasculatura dos tecidos normais
permanece intacta, os dendrmeros no se acumulam nesses tecidos, aumentando assim
a seletividade dos frmacos.6,24,34 Regra geral, observa-se uma relao inversamente
43
proporcional entre a dimenso do nanossistema e a sua capacidade de extravasamento,

indicando que partculas com tamanho inferior a 200 nm acumulam-se no interior dos
microvasos tumorais de forma mais eficaz.20
Um estudo revelou que a vetorizao passiva permite uma acumulao da
cisplatina, um frmaco anticancergeno associado a elevada nefrotoxicidade, na massa
tumoral cinco vezes superior, quando esta se encontra encapsulada no interior de um
dendrmero PAMAM em comparao sua administrao na forma livre.38 Contudo,
existem algumas caratersticas que tornam este tipo de vetorizao inconveniente em
determinados tumores. Geralmente, observa-se uma menor acumulao dos
dendrmeros em tumores em fase inicial, cujo sistema vascular ainda no se encontre
desenvolvido, ou em tumores j muito desenvolvidos que se encontrem numa fase
necrtica.34 Alm disso, existem alguns tumores, como o cancro da prstata e do
pncreas, cuja vascularizao muito reduzida e, por isso, tambm no sofrem um
efeito de reteno e permeabilidade aumentado significativo.12
Outro fator que contribui para a vetorizao passiva o microambiente nico
que rodeia as clulas tumorais, que distinto do que circunda as clulas saudveis. As
clulas em rpida proliferao apresentam uma elevada taxa metablica e necessitam de
nveis mais elevados de oxignio bem como uma maior quantidade de nutrientes, de
modo a garantir a subsistncia destas clulas. No entanto, normalmente estas
necessidades no so suficientes e, por isso, as clulas cancergenas recorrem gliclise
a fim de obter energia extra, resultando num meio acdico devido libertao de cido
ltico e cido carbnico. Tirando partido desta caraterstica, existem dendrmeros, como
os dendrmeros PAMAM que podem ser conjugados a grupos acetal hidrofbicos,
neutralizando a carga positiva dos grupos amina e tornando-os sensveis ao pH. Estes
nanossistemas so desenhados de forma a permanecerem estveis ao pH fisiolgico de
7.4, mas a degradarem-se na presena de meios mais acdicos a fim de libertar o
frmaco, como acontece com os tecidos tumorais que apresentam valores de pH mdios
volta de 6.8.19,61,62 Assim sendo, o dendrmero, quando entra em contacto com um
meio ligeiramente acdico, sofre hidrlise dos grupos acetal, o que leva desintegrao
da estrutura ramificada, resultando ento na libertao do frmaco (Figura 11.2).24
44
Figura 11.2 Imagem representativa de um dendrmero sensvel ao pH e do respetivo mecanismo de

libertao do frmaco. Adaptado de [62].
11.2 Vetorizao ativa
Como j foi referido anteriormente, as clulas tumorais expressam diversas

molculas na sua superfcie com atividade antignica, designadas por antignios
tumorais. Estes antignios podem ser classificados em antignios especficos do tumor,
quando esto presentes apenas nas clulas neoplsicas e no nas clulas saudveis, ou
em antignios associados ao tumor, no caso de serem comuns aos das clulas do tecido
saudvel de onde surgiu a neoplasia.4,10
Um complexo dendrmero-frmaco, cuja biodistribuio apenas depende de um
mecanismo de vetorizao passiva ir decerto enfrentar limitaes a nvel da
especificidade.21 Alm disso, o efeito de reteno e permeabilidade aumentado pode,
por um lado, auxiliar no extravasamento do frmaco para o interstcio tumoral, contudo
por outro lado, tambm induz o efluxo do mesmo a partir das clulas devido a um
aumento da presso osmtica no interior do interstcio. A presso osmtica tende a ser
superior no centro da massa tumoral comparativamente periferia, resultando numa
redistribuio do frmaco para fora da regio central do tumor.12,29 Na vetorizao ativa,
o frmaco conjugado com um ligando, como um anticorpo, um pptido ou um
aptmero, o qual tem a capacidade de interagir com um recetor ou um antignio prprio
do tumor, de forma semelhante s interaes naturais que ocorrem no organismo
humano como as interaes lectina-hidrato de carbono, ligando-recetor e antignio-
anticorpo, permitindo assim libertar o frmaco nos locais patolgicos ou atravessar as
barreiras fisiolgicas com base em processos de reconhecimento molecular. Portanto, o
complexo ir atuar como um profrmaco, e o frmaco apenas se torna ativo quando
entra em contacto com o tecido tumoral.18
A escolha do ligando adequado um importante desafio no desenho dos
complexos vetorizados. Existem ligandos ditos naturais, como o cido flico e fatores
de crescimento, que apresentam algumas vantagens em comparao aos anticorpos
45
monoclonais, como um reduzido peso molecular e uma menor imunogenicidade. No

entanto, alguns ligandos, como o cido flico obtido a partir da alimentao, podem
competir com o dendrmero conjugado ao ligando pela ligao ao recetor, visto este
ligando se encontrar naturalmente em elevada concentrao no organismo humano,
levando assim a uma diminuio da concentrao intracelular do frmaco. Apesar das
vantagens apresentadas pelos ligandos ditos naturais, os ligandos mais utilizados so os
anticorpos monoclonais ou fragmentos de anticorpos. Embora os anticorpos
monoclonais apresentem uma elevada avidez de ligao ao respetivo antignio tumoral,
o domnio Fc do anticorpo pode induzir uma resposta imunolgica e ser rapidamente
eliminado da corrente sangunea, resultando numa diminuio da acumulao dos
complexos no interior do tumor. Ao recorrer aos fragmentos de anticorpos, possvel
reduzir a imunogenicidade e melhorar o perfil farmacocintico do complexo
nanoparticulado.29 Alm do mais, para existir uma vetorizao especfica importante
que os antignios tumorais ou os recetores apenas se encontrem na superfcie das
clulas tumorais e no na superfcie das clulas saudveis. Para alm disso, tambm
essencial que sejam homogeneamente expressos em todas as clulas cancergenas e que
no sejam libertados para a circulao sangunea.1921
Quando o ligando interage com a clula-alvo, existe uma internalizao, que
geralmente ocorre via endocitose mediada por recetor. Por exemplo, quando um
conjugado de folato se liga ao respetivo recetor na superfcie celular, as invaginaes da
membrana plasmtica rodeiam o complexo recetor-ligando, de modo a formar um
endossoma, a fim de transportar o complexo at aos organelos. medida que o valor do
pH no interior do endossoma se torna cada vez mais acdico e os lisossomas so
ativados, o frmaco libertado do conjugado e entra no citoplasma, no caso deste
possuir as propriedades fsico-qumicas apropriadas para atravessar a membrana
endossomal. De seguida, o frmaco ir atuar no organelo-alvo, enquanto o recetor de
folato libertado e retorna para a membrana celular para iniciar um segundo ciclo de
transporte atravs da interao com novos conjugados de folato.19,21 O facto do processo
de internalizao do complexo ocorrer, normalmente, via endocitose mediada por
recetor permite escapar ao reconhecimento pela glicoprotena-P, evitando assim um dos
principais mecanismos de resistncia aos frmacos citotxicos e conduzindo a elevadas
concentraes intracelulares dos mesmos.21 No caso do ligando no suscitar o processo
de internalizao, o frmaco pode entrar no interior das clulas atravs de difuso
simples ou de um sistema de transporte aps ter sido libertado do complexo vetorizado
46
na superfcie da clula ou na proximidade da mesma. Contudo, importante salientar

que a libertao do frmaco no exterior da clula pode levar sua disperso ou
redistribuio para os tecidos saudveis envolventes. Isto corroborado por estudos in
vitro e in vivo que demonstram que a concentrao intracelular do frmaco muito
superior quando o frmaco libertado do complexo no citoplasma atravs do processo
de internalizao.29
A principal desvantagem dos conjugados obtidos a possibilidade do
profrmaco, quando entra em contacto com o tumor, no se libertar eficazmente do
complexo e dessa forma no surtir a ao teraputica pretendida. Para alm deste,
existem outros inconvenientes, incluindo a diminuio da especificidade para a
protena-alvo, a penetrao no tumor insuficiente e, como j referido anteriormente, a
competio existente entre o dendrmero vetorizado e os ligandos que se encontram
naturalmente em elevadas concentraes no interior do organismo, como o caso do
cido flico obtido a partir da alimentao, o que ir contribuir para uma diminuio da
concentrao intracelular do frmaco.5,6,24
Devido ao facto de muitos tipos de tumores serem nicos, a seleo do recetor
ou antignio tumoral apropriado essencial para o desenvolvimento de nanossistemas
vetorizados, de forma a determinar qual o agente de vetorizao mais efetivo para cada
uma das linhagens celulares.29,34 De seguida, sero abordados os principais alvos de
vetorizao estudados at ao presente momento.
11.2.1 Vetorizao s molculas reguladoras da angiognese
A angiognese um processo fundamental para a massa tumoral continuar em

expanso e para a formao de metstases, e, por isso, os investigadores tm analisado a
possibilidade de dirigir os frmacos a molculas reguladoras, mediadoras e
estimuladoras da angiognese, de forma a inibir a proliferao, a migrao e a
diferenciao das clulas endoteliais, abrandando assim a evoluo do carcinoma. O
equilbrio que normalmente existe entre molculas estimuladoras e inibidoras da
angiognese pensa-se que comprometido durante a neovascularizao iniciada pelas
clulas tumorais, pois estas clulas tm capacidade de secretar molculas estimuladoras,
de modo a iniciar o processo de angiognese. Entre algumas destas molculas
estimuladoras, encontram-se o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), o fator
de crescimento de fibroblasto bsico, o fator de crescimento derivado de plaquetas e
certas metaloproteinases da matriz.5,6,33 Esta abordagem anti-angiognica apresenta
47
algumas vantagens comparativamente a outras terapias convencionais, tais como a

superao da barreira fisiolgica que impede que os dendrmeros entrem em contacto
com o tumor; a destruio da vasculatura, diminuindo assim a capacidade da massa
tumoral se expandir e metastizar; a diminuio de fenmenos de resistncia aos
citotxicos pois as clulas endoteliais apresentam uma menor variabilidade fenotpica; e
a no existncia de uma especificidade da vasculatura do tumor para um cancro em
particular.5,6,12
11.2.1.1 Recetor VEGF
O recetor do VEGF considerado o indutor da angiognese mais importante. O

VEGF expresso em concentraes elevadas nas clulas de alguns tumores slidos,
entre os quais o cancro do pulmo, do rim, da mama, do ovrio e do trato
gastrointestinal, levando a um aumento da quantidade do VEGF recetor-1 (VEGFR-1) e
do VEGF recetor-2 (VEGFR-2) nas clulas endoteliais, sendo este ltimo o recetor mais
relevante. O VEGFR-2 est associado uma interao com o VEGF, dando incio a uma
cascata de sinalizao que resulta na formao de vasos sanguneos. Por consequncia,
tanto o VEGF como o VEGFR-2 tm sido estudados, a fim de desenvolver estratgias
que direcionem os dendrmeros a estes alvos, de modo a evitar que os tumores gerem
mecanismos prprios de aporte sanguneo e impedir que os tumores evoluem ainda
mais. Uma estratgia possvel seria a conjugao do dendrmero com um anlogo do
VEGF ou com um anticorpo anti-VEGF. Atualmente, j existe no mercado um
anticorpo anti-VEGF, designado por Bevacizumab (Avastin), indicado para o
tratamento do cancro do pulmo, colo-retal e mama. O mecanismo de ao do
Bevacizumab baseia-se na ligao ao VEGF, de forma a inibir a interao entre o VEGF
e os respetivos recetores, presentes superfcie das clulas endoteliais.5,6,63
Backer et al. conjugaram dendrmeros PAMAM 5.0G boronados com VEGF
recombinante humano, a fim de dirigi-los aos recetores VEGFR, que so expressos em
elevada quantidade na vascularizao tumoral. De forma a avaliar a absoro e
biodistribuio dos dendrmeros in vivo atravs de imagiologia, estes foram marcados
com o corante Cy5 e administrados em ratos 4T1 portadores de tumor. Os resultados
indicaram uma acumulao seletiva dos dendrmeros vetorizados nas reas de maior
crescimento tumoral. Poder-se-ia julgar que a maior concentrao dos dendrmeros
nestas reas devia-se a um mecanismo no especfico de aumento da reteno e
permeabilidade, contudo os ensaios de imagiologia (Figura 11.3) indicam o contrrio
48
por duas razes: os mesmos dendrmeros no conjugados ao VEGF no se acumularam

no tecido tumoral e, quando foi a adicionada a toxina de fuso SLT-VEGF (toxina
responsvel pela eliminao seletiva de clulas que expressam o VEGFR em elevadas
quantidades), verificaram uma elevada reduo na acumulao dos dendrmeros
conjugados ao VEGF no tumor. Portanto, a utilizao do ligando VEGF pode auxiliar
na eliminao das clulas endoteliais da neovascularizao do tumor e, assim, induzir
ocluso vascular e necrose isqumica tumoral.64
Figura 11.3 Imagiologia fluorescente representando ratos 4T1 portadores de tumor, aps a injeo de
dendrmeros boronados conjugados ao VEGF (A e C), de dendrmeros boronados no conjugados (B) e
de dendrmeros boronados conjugados ao VEGF em ratos pr-tratados com a toxina SLT-VEGF (D).
Adaptado de [64].
11.2.1.2 Integrina v3
A integrina v3 um recetor presente nas clulas endoteliais que interage com

protenas da matriz extracelular que contm a sequncia RGD, entre os quais o fator de
Willenbrand, fibrinognio, vitronectina e fibronectina. Este recetor est relacionado com
algumas alteraes celulares que ocorrem durante a angiognese, nomeadamente o
aumento na proliferao, o aumento da deslocao e a interao das clulas endoteliais
com a matriz extracelular. Esta integrina um dos marcadores mais especficos,
encontrando-se apenas superfcie das clulas endoteliais durante o processo de
angiognese. Para alm disso, a integrina v3 est indiretamente relacionada com a
sinalizao VEGFR-2. Verificou-se que, quando esta integrina bloqueada, h uma
reduo da sinalizao VEGFR-2 e, portanto, ao conjugar-se o dendrmero com um
anlogo que mimique a sequncia tripeptdica (Arginina-Glicina-cido Asprtico),
possvel aumentar a eficincia dos tratamentos anti-angiognicos.6,33
49
Em 2007, Lesniak e os seus colaboradores conjugaram pptidos RGD cclicos a

dendrmeros PAMAM 5.0G, de modo a se ligarem seletivamente integrina v3. Alm
disso, utilizaram a biotina como marcador do dendrmero, j que esta pode ser
seletivamente detetada por anticorpos anti-biotina. Os investigadores avaliaram in vitro
a capacidade de ligao dos dendrmeros funcionalizados com RGD s clulas
endoteliais microvasculares drmicas humanas, clulas que expressam a integrina v3
sua superfcie. Os resultados demonstraram a existncia de uma interao especfica
superior no caso dos dendrmeros funcionalizados relativamente ao controlo
(dendrmeros no funcionalizados com o RGD). Mesmo quando foi adicionado um
excesso de RGD cclico na forma livre 400 vezes superior, o ligando no foi capaz de
deslocar mais do que 25% dos dendrmeros vetorizados ligados integrina, o que
significa que os dendrmeros vetorizados tm a capacidade de interagir de forma
especfica com a integrina v3 e que aparentemente se ligam mais fortemente do que o
pptido em si.65
11.2.2 Vetorizao ao recetor epidrmico humano (HER)
O recetor do fator de crescimento epidrmico (EGFR) e o recetor epidrmico

humano do tipo 2 (HER2) so recetores de tirosina cinases, que intervm na via de
sinalizao, resultando no crescimento e na multiplicao celular. O EGFR expresso
em cerca de um tero dos tumores slidos e, normalmente, est associado a um pior
prognstico para o doente. Este recetor encontra-se na superfcie das clulas de diversos
cancros, entre os quais o cancro da mama, pulmo, colo-retal e cerebral. Neste caso,
pode-se utilizar o anticorpo monoclonal Cetuximab em conjugao com o dendrmero
para dirigir o frmaco anticancergeno ao EGFR e libert-lo. O Cetuximab foi indicado
no cancro do colo-retal em estado avanado. O HER2 tambm est presente em diversos
tumores malignos, tais como no cancro da mama, pulmo e ovrios. Neste caso, pode-se
utilizar uma abordagem semelhante mencionada para o EGFR, j existindo um
anticorpo monoclonal dirigido para este antignio de interesse, com indicao no cancro
da mama metasttico, designado por Trastuzumab (Herceptina).6
Shukla et al. conjugaram um anticorpo monoclonal anti-HER2 a dendrmeros
PAMAM 5.0G e, de seguida, esses dendrmeros funcionalizados foram marcados com
uma sonda fluorescente, o alexaFluor 488. De modo a avaliar a capacidade de ligao e
internalizao dos dendrmeros vetorizados ao antignio tumoral HER2, os dendrmeros
vetorizados foram administrados em ratinhos SCID do sexo feminino
50
xenotransplantados com clulas MCA 207, que expressam o HER2 sua superfcie.
Noutros dois grupos de ratinhos, foi-lhes administrado dendrmeros no funcionalizados
ou uma soluo salina, o PBS. Quando os tumores alcanaram um dimetro de 0,7 cm,
estes foram isolados e analisados por citometria de fluxo. Os resultados indicaram que
os dendrmeros conjugados ao anti-HER2 interagiam preferencialmente com tumor em
comparao aos dendrmeros no vetorizados e ao PBS. Posteriormente, recorrendo
microscopia confocal, foi possvel observar nitidamente que os dendrmeros vetorizados
foram internalizados nas clulas tumorais, ao contrrio do que se observou no caso dos
dendrmeros no vetorizados nem do PBS, cuja emisso de fluorescncia no foi visvel
(Figura 11.4). Alm disso, tambm no se observou emisso de fluorescncia quando
foi analisado um tumor, cujas clulas tumorais no expressavam o HER2 sua
superfcie, o que significa que este antignio tumoral essencial para permitir a
internalizao dos dendrmeros.58
Figura 11.4 Imagens representativas das seces dos tumores. Na figura A observa-se clulas tumorais,
que sobrexpressam HER2 superfcie, enquanto na figura B esto representadas clulas tumorais, que
no expressam HER2. Ambas estas figuras correspondem a tumores de ratinhos injetados com os
dendrmeros funcionalizados com anti-HER2. Nas figuras C e D observa-se as clulas tumorais, que
sobrexpressam HER2, cujos animais foram injetados com PBS (C) ou soluo salina (D). Adaptado de
[58].
11.2.3 Vetorizao aos recetores da transferrina
A transferrina uma glicoprotena srica responsvel pelo transporte de ferro,

que pode ser utilizada como alvo teraputico, devido expresso aumentada dos
recetores da transferrina nas clulas tumorais comparativamente s clulas saudveis. A
expresso elevada destes recetores, que pode ser at cem vezes superior
51
comparativamente s clulas saudveis, resulta do aumento das necessidades de ferro na

clula tumoral, j que o ferro um elemento essencial para a clula se replicar. A
glicoprotena aps interagir com o seu recetor na superfcie da clula, sofre endocitose
para o interior de compartimentos acdicos, onde o ferro se dissocia. Sendo assim,
possvel a realizao de estudos em que o dendrmero se encontra conjugado
tranferrina ou a um anlogo.6,12
Em 2010, Han et al. encapsularam o frmaco doxorrubicina (DOX) no interior
de dendrmeros PAMAM e posteriormente funcionalizaram-nos recorrendo ao pptido
HAIYPRH (T7), um ligando com potencial para dirigir o complexo nanoparticulado
para o recetor da transferrina. Seguidamente, os dendrmeros funcionalizados
(PAMAM-T7/DOX) foram administrados em ratinhos BALB/c xenotransplantados com
clulas Bel-7402 indutoras de carcinoma hepatocelular, a fim de averiguar o efeito
antitumoral in vivo. Os resultados demonstraram que os dendrmeros PAMAM-T7/DOX
conduziam a uma reduo superior da massa tumoral comparativamente ao frmaco na
forma livre, aos respetivos dendrmeros no vetorizados (PAMAM/DOX) e soluo
salina em cerca de 33,0%, 51,1% e 71,45%, respetivamente. Com base no estudo, os
autores puderam concluir que existem evidncias significativas que o T7 um ligando
promissor com potencial para dirigir os frmacos anticancergenos aos recetores da
transferrina sobrexpressos em diversos tumores.66
11.2.4 Vetorizao aos recetores do folato
Na atualidade, um dos alvos teraputicos mais estudados para dirigir os

conjugados frmaco-dendrmero ao tecido tumoral o recetor do folato. O cido flico
uma vitamina indispensvel para a sntese das purinas e pirimidinas, sendo portanto
fundamental para a funo da clula. O recetor do folato expresso em maior
quantidade nas clulas malignas em comparao s clulas ditas normais, especialmente
nos tumores da mama, pulmo, crebro, rim e ovrio. Estas ltimas apenas transportam
o folato para o interior das clulas, contudo no transportam conjugados de folato. Por
outro lado, as clulas tumorais internalizam estes conjugados atravs do reconhecimento
ligando-recetor.6,24 Existem diversas vantagens na utilizao do cido flico como
agente de vetorizao, entre os quais o baixo custo, o aumento da solubilidade, a
reduo da imunogenicidade e a facilidade do processo de conjugao ao dendrmero.34
Em 2005, Kukowska-Latallo et al. conjugaram o cido flico a dendrmeros
PAMAM acetilados. Em seguida, os conjugados foram injetados por via i.v. em
52
ratinhos imunodeficientes portadores do tumor humano KB. Tanto as clulas tumorais

KB, como as clulas hepticas expressam nveis elevados do recetor do cido flico, o
que foi comprovado por um aumento da acumulao dos dendrmeros conjugados ao
cido flico no fgado e no tumor, ao longo dos quatro dias aps a injeo. Pelo
contrrio, a concentrao dos dendrmeros no funcionalizados diminuiu rapidamente
devido eliminao dos dendrmeros circulantes na corrente sangunea. De modo a
estudar a internalizao dos dendrmeros conjugados, estes foram acoplados ao corante
6-carboxi-tetrametilrodamina (6-TAMRA). Atravs de microscopia confocal, foi
possvel observar um nmero significativo de clulas fluorescentes no tecido tumoral
com os dendrmeros conjugados ao cido flico em comparao aos dendrmeros no
funcionalizados. Alm do mais, os autores verificaram que, aos quatro dias, os
conjugados encontravam-se presentes no tecido tumoral e eram internalizados por
muitas das clulas tumorais (Figura 11.5). Por ltimo, o estudo tambm mostrou que o
acoplamento de MTX no interior dos dendrmeros vetorizados permitia aumentar a
atividade antitumoral e diminuir drasticamente a toxicidade inerente ao frmaco
comparativamente administrao do frmaco na forma livre.37
Figura 11.5 Anlise por microscopia confocal de amostras de ratinhos injetados com 10 nmol de
dendrmeros no funcionalizados G5-6TAMRA (A) e de dendrmeros conjugados ao cido flico G5-FA-
6TAMRA quinze horas (B) ou quatro dias (D), aps a administrao dos dendrmeros. A anlise por
citometria de fluxo (C) confirma a internalizao celular dos dendrmeros conjugados (G5-FA-6T) em
comparao aos dendrmeros no vetorizados (G5-6T). As setas salientam o citoplasma nitidamente
visvel ao redor do ncleo. Adaptado de [37].
53
11.2.5 Vetorizao ao antignio de membrana especfico da prstata
O antignio de membrana especfico da prstata (PSMA) uma glicoprotena

transmembranar expressa em elevadas concentraes no tumor da prstata e, por isso,
tem sido estudada a possibilidade de dirigir um determinado citotxico utilizando o
PSMA como alvo teraputico. Esta glicoprotena interage com o cido flico e,
portanto, pode ser til a utilizao de conjugados de folato.6
Num estudo recente, Huang et al. sintetizaram dendrmeros PAMAM 5.0G e
conjugaram-nos a um frmaco anticancergeno, o MTX, e ao ligando ureia-glutamato
(GLA), um anlogo do N-acetil-L-aspartil-L-Glutamato com afinidade para interagir
com o PSMA. Posteriormente, recorrendo sonda fluorescente FITC foi possvel
avaliar in vitro a internalizao dos dendrmeros vetorizados (G5-FI3-GLA6) nas clulas
LNCaP, que expressam o PSMA sua superfcie. Atravs da tcnica de citometria de
fluxo, os investigadores apuraram que os dendrmeros G5-FI3-GLA6 ligavam-se s
clulas LNCaP, enquanto os dendrmeros no vetorizados no mostraram nenhuma
interao significativa com estas clulas. Alm disso, quando foi adicionado excesso do
ligando GLA na forma livre, observou-se um bloqueio da ligao dos dendrmeros G5-
FI3-GLA6 s clulas tumorais (Grfico 11.1). Em concordncia com a anlise efetuada
pela citometria de fluxo, a anlise realizada por microscopia confocal tambm
demonstrou a internalizao dos dendrmeros vetorizados nas clulas tumorais
LNCaP.67
Grfico 11.1 Interao dose-dependente dos dendrmeros G5-FI3-GLA6 (a azul) e dos respetivos
dendrmeros no funcionalizados G5-FI3 (a vermelho) para o antignio tumoral PSMA presente
superfcie das clulas LNCaP. No grfico tambm possvel observar a interao entre os dendrmeros
G5-FI3-GLA6 e as clulas LNCaP na presena de CLA na forma livre, verificando-se uma diminuio da
fluorescncia devido competio entre os dendrmeros funcionalizados e o ligando natural. Adaptado de
[67].
54
11.2.6 Vetorizao s lectinas
As lectinas so protenas que reconhecem e interagem com hidratos de carbono

constituintes de glicoprotenas presentes na face extracelular da membrana plasmtica.
No organismo humano, as lectinas podem tambm encontrar-se na forma livre.34 Estas
protenas podem ser utilizadas na vetorizao ativa da terapia antitumoral devido ao
facto das clulas neoplsicas expressarem diferentes glicoprotenas comparativamente
s clulas normais. O desenvolvimento de nanopartculas tendo por base as lectinas
pode enquadrar-se na incorporao das mesmas nos sistemas de transporte a fim de
dirigir o frmaco ao local-alvo (vetorizao direta s lectinas).21 Por outro lado, algumas
lectinas tambm so expressas superfcie das clulas e, por isso, tambm podem ser
utilizadas como alvo de vetorizao (vetorizao reversa s lectinas). Por exemplo, as
galectinas-1 e as galectinas-3 so sobrexpressas superfcie das clulas cancergenas do
colo-retal.68 Na figura 11.6 possvel observar a vetorizao s lectinas, bem como a
vetorizao aos hidratos de carbono.
Figura 11.6 - Vetorizao do frmaco ao local-alvo tirando partido da interao lectina-hidrato de

carbono. Adaptado de [68].
Johansson e os seus colaboradores conjugaram um galactosdeo a

dendrmeros baseados em glicopptidos e, posteriormente, encapsularam a colchicina,
um frmaco atualmente utilizado no tratamento da gota mas cujo potencial para ser
utilizado na terapia anticancergena encontra-se em investigao. De seguida, foi
avaliada a capacidade destes dendrmeros interagirem com recetores especficos da
galactose, como as galectinas. Para isso, foi realizado um ensaio in vitro recorrendo a
55
clulas Jurkat, clulas conhecidas por expressar galectinas sua superfcie. Atravs da
tcnica de separao de clulas ativadas por fluorescncia (FACS), foi possvel
demonstrar que a presena do resduo de galactose era essencial para a ligao dos
dendrmeros s clulas Jurkat.69
12. Dendrmeros como transportadores de frmacos

quimioterpicos
Como j foi referido anteriormente, os objetivos dos dendrmeros como

transportadores de frmacos quimioterpicos so, principalmente, contornar algumas
limitaes tpicas da quimioterapia convencional e melhorar o perfil farmacocintico
dos mesmos.34 Abaixo sero apresentados alguns exemplos de frmacos citotxicos,
cuja aplicabilidade dos dendrmeros j foi demonstrada em diversos estudos.
12.1 Metotrexato
O MTX um frmaco quimioterpico que atua atravs da inibio da enzima

dihidrofolato reductase (DHFR), uma enzima fundamental para o processo mittico. A
incorporao deste frmaco em arquiteturas dendrticas j foi estudada tanto atravs do
encapsulamento do frmaco, como atravs da conjugao do mesmo, e as concluses
que os investigadores tm chegado que a conjugao do frmaco ao dendrmero
parece ser o mtodo preferencial para o controlo da sua libertao. A vantagem de
conjugar o MTX a um dendrmero no se deve ao aumento da potncia do frmaco, mas
possibilidade de administrar elevadas doses do mesmo sem que induza efeitos
adversos graves.34
Em 2011, Zhang e os seus colaboradores conjugaram o MTX a dendrmeros
PAMAM 3.0G revestidos com um sacardeo superfcie. De modo a avaliar in vitro a
citotoxicidade induzida nas clulas KB, uma linhagem celular que sobrexpressa
recetores do cido flico sua superfcie, os investigadores recorreram tcnica XTT e
utilizaram para o estudo 1) dendrmeros 3.0G (G3-OH), 2) MTX na forma livre e 3)
dendrmeros 3.0G conjugados ao MTX (G3-MTX) a diferentes concentraes. Os
resultados indicaram que o controlo G3-OH no mostrou citotoxicidade significativa.
Por outro lado, o MTX na forma livre e o G3-MTX apresentaram uma citotoxicidade
dependente da dose, verificando-se que, em doses mais baixas, o MTX induziu uma
citotoxicidade superior comparativamente aos dendrmeros conjugados, contudo, em
doses mais elevadas, ambos induziram uma citotoxicidade semelhante. Este resultado,
56
em doses mais baixas, pode ter sido obtido devido ao facto do MTX na forma livre ser
internalizado nas clulas KB atravs do transportador de folato reduzido (RFC)
enquanto os conjugados entram no interior das mesmas apenas atravs do recetor do
folato, pois os complexos dendrticos so demasiado volumosos para utilizar o
transportador. Sendo assim, a internalizao mais seletiva dos conjugados sugere uma
ausncia de toxicidade no especfica, mostrando a existncia de um mecanismo
diferente quando comparado com o MTX livre. 70
12.2 Doxorrubicina
A DOX um dos frmacos anticancergenos mais potentes que atua atravs da

inibio da sntese dos cidos nucleicos no interior das clulas tumorais. Este frmaco
apresenta alguns efeitos secundrios indesejveis, tais como a cardiotoxicidade e a
mielossupresso, que leva a um ndice teraputico muito estreito. Os dendrmeros
funcionalizados com a DOX tm demonstrado ser promissores para o tratamento
anticancergeno.5,34
Em 2012, Kaminskas et al. sintetizaram dendrmeros PLL 5.0G e conjugaram-
nos ao PEG1100 e ao frmaco doxorrubicina numa proporo 50/50 (D-DOX), de
forma a comparar a atividade e a toxicidade deste complexo nanoparticulado com a
formulao de doxorrubixina lipossomal conjugado com PEG (L-DOX). Para isso,
foram utilizados ratos portadores do tumor Walker 256 e ratinhos xenotransplantados
com o tumor MDA-MB231 humano. Nos primeiros animais modelo foi avaliada a
atividade de diversas formulaes de doxorrubicina: 1) DOX na forma livre; 2) L-DOX
e; 3) D-DOX e os resultados indicaram que todas as formulaes de DOX apresentavam
uma regresso do crescimento tumoral superior a 75% comparativamente ao PBS.
Apesar de todas as formulaes serem igualmente capazes de suprimir os tumores,
foram observadas diferenas significativas na toxicidade sistmica induzida por cada
uma das formulaes de DOX. Os investigadores verificaram que a administrao de
DOX na forma livre e de L-DOX resultou numa desacelerao da taxa de crescimento
dos ratinhos, o que no se observou nos ratinhos injetados com D-DOX ou PBS. Nos
ratinhos xenotransplantados, foi possvel determinar que a formulao D-DOX
conduzia a uma reduzida incidncia de cardiotoxicidade comparativamente s restantes
formulaes (Figura 12.1). Sendo assim, o estudo sugere que os dendrmeros
conjugados DOX podem oferecer vantagens sobre a formulao lipossomal e a
soluo de DOX na forma livre devido reduzida toxicidade sistmica.71
57
Figura 12.1 Representao da atividade antitumoral das formulaes de DOX comparativamente ao

grupo controlo, bem como da cardiotoxicidade de ambas as formulaes de DOX comparativamente ao
frmaco na forma livre. Adaptado de [71].
12.3 Camptotecinas
As camptotecinas so uma famlia de frmacos quimioterpicos muito potente,

que atua atravs da inibio da topoisomerase I e apresenta a particularidade de serem
frmacos muito hidrofbicos. Os principais exemplos deste grupo de frmacos so o
irinotecano e o topotecano.5,9,34 Alguns investigadores determinaram que a encapsulao
das camptotecinas no interior de dendrmeros baseados em polister conduzia a um
aumento da atividade anticancergena duas a sete vezes superior em diferentes linhagens
celulares, sendo essa atividade aumentada atribuda a um incremento da internalizao
celular e reteno dos frmacos nas clulas cancergenas.32
12.4 5-Fluorouracilo
O 5-fluorouracilo um frmaco anlogo do uracilo, um constituinte do cido

ribonucleico, que atua como antimetabolito, interferindo na sntese do ADN.72 Lee et al.
sintetizaram dendrmeros 1.0G e 2.0G conjugados ao frmaco 5-FU, de modo a avaliar
a atividade antitumoral in vivo. Para isso, ratinhos portadores do sarcoma 180 foram
tratados com trs dosagens diferentes da soluo dos dendrmeros conjugados,
nomeadamente 0,8; 80; e 800 mg/kg. Com base no estudo, verificou-se que os
dendrmeros conjugados ao frmaco apresentaram uma atividade antitumoral superior
comparativamente ao frmaco na forma livre, sendo este resultado explicado pelo efeito
de reteno e permeabilidade aumentado. Alm disso, foi possvel determinar que os
dendrmeros 2.0G conjugados apresentavam uma atividade antitumoral maior do que os
dendrmeros 1.0G nas dosagens de 80 e 0,8 mg/kg. Os dendrmeros com um maior
58
nmero de geraes mostraram melhores resultados devido, principalmente, menor

taxa de hidrlise e maior quantidade de frmaco libertado.73
12.5 Paclitaxel
O paclitaxel um frmaco estabilizador dos microtbulos responsvel por

promover a polimerizao da tubulina, impedindo assim a diviso descontrolada das
clulas e induzindo a morte celular.5 Lim et al. avaliaram a potencialidade de
dendrmeros triaznicos conjugados ao paclitaxel para inibir o crescimento tumoral de
ratinhos SCID portadores de tumores da prstata. A dose administrada aos ratinhos
variou desde 50 mg de paclitaxel/kg at 200 mg de paclitaxel/kg em regimes de
dosagem simples, duplos ou triplos espaados entre si uma semana. Os resultados
obtidos mostraram evidncias que todos os regimes teraputicos conduziam a uma
regresso tumoral durante as dez semanas de tratamento, destacando-se que todos os
ratinhos injetados, trs vezes, com 50 mg de paclitaxel/kg sobreviveram e exibiram uma
supresso da massa tumoral mais acentuada. Alm disso, todos os ratinhos apresentaram
um comportamento normal durante todo o estudo. Quanto toxicidade, foram
analisados alguns parmetros hematolgicos, como a contagem dos glbulos vermelhos
e das plaquetas, cujos valores permaneceram dentro do intervalo de referncia. Contudo,
uma diminuio persistente dos glbulos brancos nos ratinhos injetados com a soluo
de dendrmeros comparativamente ao grupo controlo pode indicar alguma
mielossupresso. Foi, ainda, observada uma ligeira toxicidade heptica e renal
determinada atravs da medio da ALT, mas que retornou para os valores de
referncias na oitava semana.74
12.6 Cisplatina
A cisplatina um frmaco anticancergeno, cujo mecanismo de ao se baseia na

inibio da sntese do ADN atravs da formao de ligaes cruzadas a todas as bases
de ADN, com especial preferncia pela posio N-7 da guanina e adenosina.72 Em 2011,
Kirkpatrick et al. recorreram a dendrmeros PAMAM de meia gerao incorporados
com a cisplatina, de forma a avaliar a sua atividade in vivo. Para isso, ratinhos
xenotransplantados com clulas tumorais A2780 do ovrio humano foram injetados
com diferentes regimes teraputicos: 1) PBS; 2) cisplatina na forma livre; 3)
dendrmeros 6.5G conjugados cisplatina; ou 4) exclusivamente dendrmeros 6.5G.
Tanto o frmaco na forma livre, como os dendrmeros conjugados ao frmaco
59
demonstraram uma eficcia semelhante e estatisticamente significativa na capacidade

para suprimir o crescimento tumoral. Pelo contrrio, o PBS e os dendrmeros 6.5G no
conduziram a qualquer efeito inibitrio da massa tumoral. Quando os investigadores
administraram aos ratinhos uma dose superior do complexo dendrmero-cisplatina,
observou-se uma toxicidade sistmica semelhante, contudo a capacidade para retardar a
evoluo tumoral foi significativamente superior, cerca de 45%, comparativamente
cisplatina na forma livre (Grfico 12.1).75
Grfico 12.1 Evoluo do volume tumoral relativo ao longo dos dias aps a administrao
intraperitoneal do PBS (), da cisplatina na forma livre (), dos dendrmeros 6.5G conjugados
cisplatina ( ,6 mg/kg) e dos dendrmeros 6.5G conjugados cisplatina (, 8 mg/kg) em ratinhos
xenotransplantados com clulas tumorais A2780 do ovrio humano. Adaptado de [75].
13. Concluso
Nos ltimos quarenta anos, tem havido uma melhoria dos meios de diagnstico e
do tratamento anticancergeno, o que tem contribudo, por um lado, para uma deteo
mais precoce da doena, possibilitando assim o incio do tratamento antes que esta
avance para um estadio mais avanado, e, por outro lado, para um aumento da eficcia
dos frmacos. No entanto, dado que a terapia anticancergena est associada a frmacos
com uma elevada toxicidade e que a letalidade associada s doenas oncolgicas ainda
muito elevada, continua a ser essencial a investigao de frmacos mais eficazes e que
induzem um menor nmero de efeitos adversos.
Os dendrmeros, devido s suas caratersticas estruturais e s suas dimenses
similares s biomolculas do organismo humano, tm sido estudados como
transportadores de frmacos anticancergenos. A introduo destes nanossistemas na
terapia anticancergena permite ajustar algumas propriedades dos frmacos, como a
60
hidrossolubilidade e o tempo de semivida, e dirigi-los diretamente ao local-alvo. Para

alm destas, existem outras vantagens, tais como a possibilidade de ultrapassar o
mecanismo de resistncia aos frmacos anticancergenos induzido pela glicoprotena-P.
Contudo, os complexos dendrticos tambm podem apresentar algumas limitaes, entre
as quais a toxicidade que lhes est inerente e a possibilidade do complexo no se
dissociar e, por conseguinte, o frmaco no surtir o efeito desejado na massa tumoral.
Quanto toxicidade associada utilizao destes nanossistemas, tem-se verificado que
os dendrmeros podem induzir alguns efeitos toxicolgicos, como hemlise e rutura das
membranas celulares. Contudo, existem j variadssimas estratgias para contornar estes
efeitos txicos, seja atravs da modificao da arquitetura do dendrmero de maneira a
existir a libertao de monmeros anlogos a produtos metablicos ou da neutralizao
dos grupos reativos presentes superfcie dos complexos nanoparticulados.
Os estudos efetuados at agora revelaram que os dendrmeros permitem dirigir o
frmaco ao local-alvo por dois mecanismos diferentes: vetorizao passiva e ativa. A
vetorizao passiva baseia-se, essencialmente, na acumulao do frmaco devido a um
efeito de reteno e permeabilidade aumentado e ao microambiente atpico que rodeia a
massa tumoral. Por outro lado, a vetorizao ativa baseia-se na conjugao do complexo
dendrmero-frmaco a anticorpos monoclonais ou outro ligando, de forma a dirigir o
complexo a um antignio tumoral presente superfcie das clulas tumorais e, assim,
aumentar a seletividade dos frmacos anticancergenos e melhorar a qualidade de vida
dos doentes.
Relativamente vetorizao ativa, importante averiguar quais os recetores ou
antignios tumorais presentes superfcie de cada linhagem celular, de maneira a
efetuar a seleo apropriada do agente de vetorizao e, assim, garantir a seletividade do
tratamento.
Os resultados obtidos em diversos estudos que envolvem a utilizao de
dendrmeros na terapia anticancergena tm-se mostrado animadores, revelando um
aumento da atividade antitumoral, nalguns casos, ou pelo menos uma diminuio da
toxicidade comparativamente utilizao do frmaco na sua forma livre. Os muitos
estudos j elaborados demonstram evidncias de que os dendrmeros so nanossistemas
promissores como transportadores de frmacos, que permitem melhorar a efetividade e
a segurana da terapia anticancergena. Contudo, de salientar que os estudos
efetuados, at ao momento, foram realizados em modelos experimentais in vitro ou em
animais modelo e, por isso, ainda no possvel extrapolar estes resultados para os
61
organismos humanos. Assim sendo, a efetividade e segurana da utilizao dos

dendrmeros deve ser, cautelosamente, confirmada nos seres humanos, pois s assim
possvel avaliar o verdadeiro potencial destes nanossistemas.
Por ltimo, importante referir, ainda, que apesar desta nova tecnologia se
mostrar muito promissora, necessrio realizar mais estudos in vivo, de forma a
compreender com alguma exatido a biocompatibilidade e a toxicidade associada aos
dendrmeros, a fim de dar incio aos estudos em organismos humanos e avaliar o
impacto toxicolgico a mdio-longo prazo nos mesmos.
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67
15. Anexos
Anexo I Quadro enumerando os principais marcadores tumorais bem como as

respetivas descries. Adaptado de [9].
MARCADOR TUMORAL DESCRIO

Os nveis deste marcador aumentam na corrente
sangunea de indivduos com cancro do clon, da mama,
do pncreas, da bexiga, dos ovrios e do colo do tero.
Antignio carcinoembrionrio (CEA)
Os valores tambm podem aumentar nos grandes
fumadores e nos que sofrem de cirrose heptica ou colite
ulcerosa.
Geralmente, a alfa-fetoprotena encontra-se no sangue
das pessoas com cancro heptico e produzida por
clulas do fgado no feto. Este marcador tambm se
Alfa-fetoprotena (AFP)
encontra em pessoas com cancro do ovrio ou dos
testculos e em crianas ou adultos jovens com tumores
da glndula pineal.
Esta hormona produzida durante a gravidez, mas
Gonadotrofina corinica humana frao tambm surge em mulheres com cancro originado na
beta (-HCG) placenta e em homens com vrios tipos de cancro
testicular.
Os nveis aumentam nos homens com hiperplasia
benigna da prstata e, de forma considervel, nos
Antignio especfico da prstata (PSA) homens com cancro da prstata. Os indivduos com
valores elevados de PSA devem ser examinados mais
minuciosamente por um mdico.
Os nveis encontram-se elevados nas mulheres com

Antignio 125 do cancro (CA-125)
doenas distintas dos ovrios, incluindo o cancro.
Os nveis encontram-se elevados em mulheres com
cancro da mama. Este marcador no recomendado para
Antignio 15-3 do cancro (CA 15-3)
a deteo do cancro, mas til para supervisionar o
tratamento.
Os nveis encontram-se elevados em pessoas com cancro
do aparelho digestivo, particularmente o cancro do
Antignio hidrocarbonato 19-9 (CA 19-9) pncreas. Este marcador no recomendado para a
deteo do cancro, mas til para supervisionar o
tratamento.
Os nveis encontram-se elevados nas pessoas com
mieloma mltiplo, leucemia linfoctica crnica e muitas
Beta2 (2)-microglobulina formas de linfoma. Este marcador no recomendado
para a deteo do cancro, mas til para supervisionar o
tratamento.
Os nveis podem aumentar por diversas razes. Este
Lactato desidrogenase marcador no recomendado para a deteo do cancro,
mas til para supervisionar o tratamento.
68
Anexo II Quadro enumerando as diversas classes de antineoplsicos, bem como os

respetivos exemplos de frmacos, mecanismos de ao e reaes adversas. Adaptado de
[9].
MECANISMO DE REAES
CLASSE EXEMPLOS
AO ADVERSAS
Formam ligaes Suprimem a medula
qumicas com o ssea, danificam a
Ciclofosfamida
Agentes ADN, causando mucosa gstrica,
Clorambucilo
alquilantes ruturas no ADN e causam queda de
Melfalano
erros na sua cabelo; podem diminuir
duplicao. a fertilidade.
Metotrexato
Citarabina Reaes adversas
Bloqueiam a sntese
Antimetabolitos Fludarabina semelhantes s dos
de ADN.
6-Mercaptopurina agentes alquilantes.
5-Fluorouracilo
Reaes adversas
semelhantes s dos
Vincristina Bloqueiam a diviso
agentes alquilantes;
Antimitticos Paclitaxel das clulas
tambm podem
Vinorrelbina neoplsicas.
provocar leses
nervosas.
Evitam a sntese e a Reaes adversas
reparao de ADN semelhantes s dos
Inibidores da Doxorrubicina
pelo bloqueio de agentes alquilantes; a
topoisomerase Irinotecano
enzimas intituladas doxorrubicina pode
topoisomerases. causar leso cardaca.
Reaes adversas
semelhantes s dos
Formam ligaes com
Derivados da Cisplatina agentes alquilantes;
o ADN, provocando
platina Carboplatina tambm podem causar
ruturas.
leses nos nervos, nos
rins e perda de audio.
Pode provocar cancro
Bloqueiam a ao dos
do endomtrio,
Tamoxifeno estrognios (utilizado
cogulos sanguneos,
no cancro da mama).
Terapias dispneia.
hormonais Bloqueiam a ao dos
andrognios Pode provocar
Flutamida
(utilizado no cancro disfuno ertil.
da prstata).
Bloqueia o sinal de Pode levar a resultados
Inibidores de diviso celular na anmalos nos exames
Imatinib
sinal leucemia mielide da funo heptica e
crnica. reteno hdrica.
69
CLASSE MECANISMO DE REAES

EXEMPLOS
(continuao) AO ADVERSAS
Induz morte celular
por meio da ligao
ao recetor de
Pode provocar
Rituximab superfcie celular
reaes alrgicas.
em tumores
Anticorpos derivados de
monoclonais linfcitos.
Bloqueia o recetor
do fator de
Pode provocar
Trastuzumab crescimento de
reaes alrgicas.
clulas do cancro
da mama.
Pode provocar
Modificadores da febre, arrepios,
Interfero alfa Desconhecido
resposta biolgica supresso da
medula ssea.
70

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Universidade do Algarve

Faculdade de Cincias e Tecnologia

Ana Rita Guerreiro Borralho

Trabalho efetuado sob a orientao da:

Professora Doutora Ana Margarida Grenha

Faro, Setembro de 2014

Ana Rita Guerreiro Borralho

Professora Doutora Ana Margarida Grenha

Faro, Setembro de 2014

Declarao de autoria de trabalho

Copyright Ana Rita Borralho.

A Universidade do Algarve tem o direito, perptuo e sem limites geogrficos, de

Professora Isabel Ramalhinho pelo trabalho incansvel em coordenar os nossos

A todos os docentes da Universidade do Algarve que contriburam para a minha

s minhas orientadoras de estgio, Joana Cravo e Ana Paula Carrondo, que me

ndice de figuras ............................................................................................................... v

Figura 3.1 Desenvolvimento inicial da massa tumoral...................................................9

Figura 6.1 Escala demonstrativa do tamanho das nanoestruturas comparativamente ao

Figura 6.2 Ilustraes representativas dos nanossistemas utilizados na terapia

Figura 7.1 - Estrutura geral dos dendrmeros..................................................................18

Figura 7.2 Ilustrao representativa da evoluo de um dendrmero a partir do ncleo

Figura 7.3 - Sntese divergente de dendrmeros PAMAM..............................................20

Figura 7.4 - Sntese convergente de dendrmeros poli(arileter)......................................21

Figura 10.1 - Esquema relativo ao processo de rutura da membrana celular..................30

Figura 10.3 - Estratgias para minimizar a toxicidade associada aos dendrmeros........32

Figura 10.4 - Dendrmero conjugado ao PEG e ao frmaco...........................................37

Figura 11.1- Libertao do frmaco controlada..............................................................43

Figura 11.2 Imagem representativa de um dendrmero sensvel ao pH e do respetivo

Figura 11.3 Imagiologia fluorescente representando ratos 4T1 portadores de tumor

Figura 11.5 Anlise por microscopia confocal e citometria de fluxo de amostras de

Figura 11.6 - Vetorizao do frmaco ao local-alvo tirando partido da interao lectina-

Quadro 10.1 Padres generalizados representando a toxicidade in vitro, a toxicidade in

Grfico 5.1 Evoluo do nmero de clulas tumorais ao longo de ciclos sucessivos de

Grfico 10.2 Avaliao da viabilidade celular das clulas Caco-2, expondo-as a

Grfico 11.1 Interao dose-dependente dos dendrmeros G5-FI3-GLA6 e dos

5-ASA cido 5-amino-saliclico

ADN cido desoxirribonucleico

ALT Alanina transaminase

C.m.c Concentrao micelar crtica

DHFR Dihidrofolato reductase

EBV Vrus Epstein-Barr

EGFR Fator de crescimento epidrmico

FACS Separao de clulas ativadas por fluorescncia

FPS Fator de proteo solar

HBV Vrus da hepatite B

HER2 Recetor epidrmico humano do tipo 2

HPV Papilomavrus humano

INEB Instituto Nacional de Engenharia Biomdica

LDH Lactato desidrogenase

MEC Matriz extracelular

PBS Soluo salina

PEO xido de polietileno

RFC Transportador de folato reduzido

RGD Pptido arginina-glicina-aspartato

VEGF Fator de crescimento endotelial vascular

VIH Vrus da imunodeficincia humana

As doenas oncolgicas afetam milhes de pessoas em todo o mundo e

Palavras-chave: nanotecnologia; dendrmeros; tratamento anticancergeno; vetorizao;

The oncological diseases affect millions of people worldwide and are

Keywords: nanotechnology; dendrimers; anticancer therapy; vectorization; selectivity.

O cancro uma doena que afeta milhes de pessoas em todo o mundo,

Um aumento da especificidade dos frmacos citotxicos para o tumor permitiria

No sentido de desenvolver a monografia com base nos objetivos delineados,

On e a Web of Knowledge, utilizando os termos dendrimer and cancer therapy,