Qu es el autoclave?

El autoclave es un instrumento habitual en los laboratorios de cultivo in vitro. En esencia,

un autoclave (figura 1) es un recipiente en el que se consigue exponer el material a
esterilizar a temperaturas superiores a la de ebullicin del agua, gracias a aumentar la
presin.

El funcionamiento del autoclave

El proceso completo de esterilizacin en un autoclave se compone de diferentes fases:

Fase de purgado: A medida que la resistencia calienta el agua del fondo del
caldern, se va produciendo vapor que desplaza el aire, hacindolo salir por la
vlvula de purgado que est abierta. Esta fase termina cuando se alcanza la
temperatura de esterilizacin.
Fase de esterilizacin: Una vez cerrada la vlvula de purgado y alcanzada la
temperatura de esterilizacin previamente seleccionada se inicia el proceso de
esterilizacin.
Fase de descarga: Terminado el proceso de esterilizacin, deja de funcionar la
resistencia calefactora, con lo que deja de producirse vapor y la presin y
temperatura del caldern empieza a bajar poco a poco.

https://www.quiminet.com/articulos/como-funciona-el-autoclave-22563.htm
 ESTERILIZACIN CON
AGENTES FSICOS
Autoclave de vapor: Trabaja a presin superior a la atmosfrica. El agua
a presin atmosfrica hierve a 100C. A presiones
superiores, la temperatura de ebullicin aumenta
por lo que se pueden calentar soluciones acuosas
(como los medios de cultivo-) a temperaturas
superiores a 100C. El autoclave permite elevar la
presin de una a dos atmsferas sobre la presin
atmosfrica. .
El dispositivo trabaja aislado del exterior. En un
sistema aislado del exterior, cada elevacin de
temperatura provoca un aumento de presin. La
relacin entre temperatura y presin depende de la
composicin de la atmsfera incluida en el sistema
Presin Temperatura Cuando en el autoclave el aire es
(atm) (C) reemplazado por vapor de agua purgado
en el del autoclave), La relacin entre
interior temperatura y presin en atmsfera
0.5 112 saturada de agua es la indicada en lka
1 121 tabla de la izquierda.
2 133
Si quedan restos de aire son necesarias
temperaturas mayores para provocar la misma
presin en el interior
Empleo del autoclave: El autoclave de vapor es el aparato ms utilizado
para la esterilizacin de medios de
cultivo, soluciones, ropa de laboratorio, y
emulsiones que no se desnaturalicen a
temperaturas superiores a 100C.. En general la
esterilizacin de estos materiales se realiza a (112-
121C) durante 30-20 minutos. Estas condiciones
pueden variar en funcin del tipo de material, carga
microbiana y volmenes a esterilizar.
Ventajas del autoclave Rpido calentamiento y penetracin del calor,
destruccin de bacterias y endosporas en corto
tiempo, no deja residuos txicos, poco deterioro del
material expuesto, es econmico.
Inconvenientes Corrosivo sobre ciertos materiales metlicos, no til
para material termosensible.
Flameado e Se aplica directamente la llama de un
incineracin mechero. Se utiliza para la esterilizacin
de asas e hilos de siembra, pinzas as
como las bocas de tubos y matraces
antes y despus de utilizarlos. La
incineracin se emplea para destruir
materiales de desecho contaminados.
RADIACIONES. Radiacin con longitudes de onda entre 100 y 400
nm. Las de mayor actividad microbicida son las
Radiacin comprendidas entre 260-270 nm. Son absorbidas
ultravioleta por lo cidos nuclicos y aminocidos aromticos.
Afectan a los cidos nucleicos provocando errores
 en la duplicacin y prdida de viabilidad. Tienen
bajo poder de penetracin: solo se utilizan para la
esterilizacin de superficies, (quirfanos, salas de
envasado de medicamentos). Producen daos en
ojos y piel.

Formaldehdo:
Se utilizan las pastillas de paraformaldehido, las cuales pueden disponerse en el fondo de
una caja envueltas en gasa o algodn, que despus pueden ser expuesta al calor para un
rpida esterilizacin (accin del gas formaldehdo). Tambin pueden ser usadas en Estufas
de Formol, que son cajas de doble fondo, en donde se colocan las pastillas y se calienta
hasta los 60 C y pueden esterilizar materiales de ltex, goma, plsticos, etc.
Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs.
Manitol Salado Agar.
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir de muestras clnicas, alimentos, productos
cosmticos y otros materiales de importancia sanitaria.
Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas de Vibrio, si no se dispone de medios
apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.

Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. Los estafilococos coagulasa positiva
hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los
estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas,
se repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y
minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin)
es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que
se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona
del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color
o prpura.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

 Extracto de carne 1.0
Pluripeptona 10.0 Suspender 111 g de polvo por litro de agua
destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a
d-Manitol 10.0
ebullicin durante 1 o 2 minutos. Distribuir y
Cloruro de sodio 75.0 esterilizar en autoclave a 118-121C durante 15
Agar 15.0 minutos.
Rojo de fenol 0.025
pH final: 7.4 0.2

Siembra
Sembrar en superficie un inculo denso de la muestra.

Incubacin
De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin durante 3 das a 32 C, en aerobiosis.

Resultados

Microorganismos Crecimiento Caractersticas de las colonias

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Excelente Amarilla
Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Bueno Roja
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Inhibido Inhibido

Caractersticas del medio

Medio preparado: rojo

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-118-05 x 500g :Cdigo: B02-118-06

http://www.britanialab.com/productos/B02118%20REV%2001
-MANITOL%20SALADO%20AGAR.pdf