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UNIVERSIDADE TECNOLGICA FEDERAL DO PARAN

COORDENAO DE ENGENHARIA QUMICA (COENQ)


DISCIPLINA DE INTRODUO BIOQUMICA

ANNA GABRIELA DRUMMOND XAVIER TELES

KELVIN GRAEFF DE OLIVEIRA

LUANA ROBERTA RABELLO

CARACTERIZAO DE AMINOCIDOS E PROTENAS

RELATRIO DA AULA PRTICA DE LABORATRIO

Prof. Dra. Elisabete Hiromi Hashimoto

FRANCISCO BELTRO
2017
ANNA GABRIELA DRUMMOND XAVIER TELES

KELVIN GRAEFF DE OLIVEIRA

LUANA ROBERTA RABELLO

CARACTERIZAO DE AMINOCIDOS E PROTENAS

Relatrio de aula prtica experimental e laboratrio


da disciplina de Introduo Bioqumica,
apresentado no curso bacharelado de Engenharia
Qumica, da Universidade Tecnolgica Federal do
Paran, campus Francisco Beltro.

Prof. Dra. Elisabete Hiromi Hashimoto

FRANCISCO BELTRO
2017
SUMRIO

1 INTRODUO .................................................................................................................................. 4
2 OBJETIVOS....................................................................................................................................... 6
3 MATERIAIS E MTODOS .............................................................................................................. 6
3.1 Materiais e Equipamentos ..................................................................................................... 6
3.2 Mtodos...................................................................................................................................... 6
4 RESULTADOS E DISCUSSES ................................................................................................... 7
4.1 Glicina ........................................................................................... Error! Bookmark not defined.
4.2 Lisina............................................................................................. Error! Bookmark not defined.
4.3 Glutamato .................................................................................... Error! Bookmark not defined.
5 CONCLUSO .................................................................................................................................... 9
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1 INTRODUO
As protenas so as macromolculas mais abundantes nas clulas vivas. Elas
ocorrem em todas as clulas e em todas as partes destas. As protenas tambm
ocorrem em grande variedade; milhares de diferentes tipos, desde peptdeos de
tamanho relativamente pequeno at enormes polmeros com pesos moleculares na
faixa de milhes, podem ser encontrados em uma nica clula. (LEHNINGER, 2002)

As protenas possuem uma estrutura tridimensional bem definida que est


relacionada com suas propriedades fsicas e biolgicas. A modificao na estrutura
tridimensional nativa de uma protena, com a consequente alterao de suas
propriedades conhecida como desnaturao. A desnaturao envolve alteraes
nas estruturas quaternria, terciria e secundria de protenas, mas no da primria.
A desnaturao, usualmente decresce a solubilidade das protenas, a diminuio da
solubilidade pode ser explicada pela exposio de radicais hidrofbicos e outros que
prejudiquem a interao protena-gua e favoream a interao protena-protena. A
floculao e a coagulao, que muitas vezes so confundidos com desnaturao de
protenas, so manifestaes visveis das alteraes estruturais causadas pelos
agentes desnaturantes.

O resultado combinado das interaes eletrostticas envolvidas no salting in


so ainda discutveis, mas no discutvel que nele aumenta muito a interao
soluto/solvente. No salting out, o excesso de sais domina as cargas de solvente.
Ento o soluto tem pouco onde se agarrar e, dessa forma, aumenta a interao
soluto/soluto e diminui a interao soluto/solvente, podendo acontecer a precipitao
das protenas. Esse princpio, alm de interesse fisiolgico, tambm extremamente
til como processo de separao das protenas presentes em um determinado meio.
Jamais duas protenas diferentes tm o mesmo coeficiente de solubilidade a uma
mesma concentrao de sais.

A reao do biureto devida s ligaes peptdicas, dando positiva para


protenas e peptdeos com trs ou mais resduos de aminocidos. A reao tambm
positiva para as substncias que contm dois grupos carbamnicos (-CO-NH2) ligados
diretamente ou atravs de um nico tomo de carbono ou nitrognio. Este o caso
do biureto que d reao positiva e de onde provm o nome da mesma. As protenas
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ou peptdeos, quando tratados por uma soluo de sulfato de cobre, em meio alcalino,
do uma colorao violeta caracterstica.

A Ninhidrina um produto qumico utilizado para a deteco de aminas


primrias, particularmente de aminocidos. Ao reagir com essas aminas livres, uma
cor azul escura ou roxa produzida. A Ninhidrina comumente usada para detectar
impresses digitais, j que, graas a sua reao com os amino grupos terminais das
molculas de lisina incorporadas nas protenas ou peptdeos, suficientemente
sensvel para revelar resduos de pele.
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2 OBJETIVOS

Caracterizar a presena de protenas em material biolgico, demonstrar as


reaes de colorao para protenas e verificar experimentalmente a precipitao de
protenas com e sem desnaturao.

3 MATERIAIS E MTODOS

3.1 Materiais e Equipamentos

Soluo de protena (ovoalbumina);


Soluo de Glicina 1%;
Soluo de Ninhidrina;
Cloreto de Sdio 1M;
Sulfato de amnio;
cido actico concentrado;
NaOH 2,5N;
CuSO4 1%;
Bquer;
Tubos de ensaio;
Basto de vidro;
Pipeta.

3.2 Mtodos

3.2.1 Preparo da soluo de protena (ovoalbumina)


Quebre a casca de ovo, separando a clara da gema. Descarte a gema, coloque a
clara em um bquer de 500mL, adicione 400mL de gua destilada e misture
vagarosamente (sem formar espumas) com um basto de vidro at formar uma
soluo homognea.
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3.2.2 Reao de Biureto


Identifique trs tubos de ensaio como 1A, 1B e 1C.
No tubo 1A, adicione 1mL de soluo de protena. No tubo 1B, adicione 1mL de
gua destilada. No tubo 1C, adicione 1mL de soluo de glicina 1%.
Em seguida, adicione 5 gotas de NaOH 2,5N e 5 gotas de CuSO4 1% em cada
tubo. Agite e observe a cor dos tubos.

3.2.3 Reao de Ninhidrina


Foram identificados trs tubos de ensaio como 2A, 2B e 2C. Em seguida, foram
adicionados 2 mL de soluo de Nihidrina em cada tubo.
No tubo 2A, foi adicionado 0,5 mL de soluo de protena (clara de ovo diluda).
No tubo 2B, foi adicionado 1 mL de gua destilada.
No tubo 2C, foi adicionado 1 mL de soluo de glicina 1%.
Os tubos foram agitados e colocados em banho maria a 100 C.

3.2.4 Salting in/Saltin out/Desnaturao cida


Foi adicionado em um tubo de ensaio 6 mL da soluo de protena da clara de ovo.
Foi adicionada, gota a gota, a soluo de cloreto de sdio 1M, agitando-se at a
soluo se tornar homognea.

4 RESULTADOS E DISCUSSES

4.1 Reao de Biureto

Observou-se que no tubo 1A, o qual contm 1mL de soluo de protena, ao


adicionar as gotas de NaOH 2,5N e CuSO4 1%, obteve a colorao violeta. O tubo 1B
(1mL de gua destilada) apresentou a colorao azul esverdeado e o tubo 1C, que
composto de 1mL de soluo de glicina 1%, azul escuro.

4.2 Reao de Ninhidrina

4.3 Salting in/Salting out/Desnaturao cida


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5 CONCLUSO

A partir dos resultados observados, conclui-se que possvel determinar a


presena de protenas em soluo com o auxlio de algumas reaes qumicas
conhecidas, bem como a natureza de alguns aminocidos presentes nestas protenas.
possvel identificar as protenas como molculas carregadas e reconhecer os fatores
ligados a solubilidade das protenas em gua.
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REFERNCIAS

BERG, J. M.; TYMOCZKO, J.L.; STRYER, L. Bioqumica. 6 ed. Rio de Janeiro:


Guanabara Koogan, 2008.

LEHNINGER, Albert Lester. Bioqumica - 4 ed. So Paulo, SP. Edgard Blcher,


1976.

CHAMPE, Pamela C.; HARVEY, Richard A.; FERRIER, Denis R. Bioqumica


ilustrada - 4 ed. Porto Alegre, RS. Artmed, 2009.

VOET, D.; VOET, J. Bioqumica. 3ed. Porto Alegre: Artmed, 2006.