BIOLOGA CELULAR

USO DEL MICROSCOPIO OPTICO EN BIOLOGIA

CELULAR
Yorcellys Lpez1, Cindy Lpez1, Roberto Prez1.
1 estudiantes de biologa, facultad de ciencias bsicas, universidad del Atlntico Km 7 antigua va puerto Colombia

RESUMEN

La idea principal de esta prctica es recordar el uso adecuado del microscopio compuesto,
herramienta principal para todas nuestras prcticas, a partir de esto se realiz un
experimento, donde utilizamos materiales como el almidn para tener un buen conteo en la
cmara de Neubauer.

PALABRAS CLAVES: microscopio compuesto, cmara de Neubauer, clula, ncleo,

unidades de medida.

OBEJTIVOS:

Asegurar que cada estudiante pueda no solamente ver algo con el microscopio
compuesto sino lograr tambin una imagen ms ntida y detallada que este pueda
brindar.
Conocer el uso correcto del microscopio y sus diferentes aplicaciones en el campo
de la biologa celular.
Determinar el dimetro del campo visual de un microscopio y el clculo del
volumen celular.
Realizar un ptimo conteo de clulas por medio de la cmara de Neubauer

INTRODUCCIN:

El microscopio compuesto, es un sistema ampliado con dos juegos de lentes, cuyo aumento
total es el producto de los factores de aumento de los lentes individuales; ampla su
aumento ciento de veces su tamao real con una buena relacin1. Esta conformado por dos
partes principales; un sistema mecnico, que est constituido por una serie de piezas en las
que van instaladas las lentes, que permiten el movimiento para el enfoque. Y un sistema
ptico que comprende un conjunto de lentes, dispuestas de tal manera que producen el
aumento de las imgenes que se observan a travs de ellas2.

Cmara de Neubauer, instrumento utilizado para realizar conteo de esporas y clulas

presentes en un medio lquido, est adaptado para un microscopio de campo claro o de
contraste de fase; se trata de un portaobjeto el cual est dividido en cuadrantes que a su vez
siguen subdividindose, permite hacer medidas en mm y mm2 , este cuenta con un mtodo
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para realizar un conteo exacto de clulas, para luego sacar un promedio de la concentracin
de estas en la muestra liquida aplicada3 .

METODOLOGIA:

PARTE 1: uso correcto del microscopio

Se realiz un montaje seco con hilos de diferentes colores (rojo, morado, verde), se
llev al microscopio, y se observ en los aumentos de 4x, 10x, y 40x.
Se realiz un montaje hmedo con la letra a y se observ en los diferentes
aumentos.

PARTE 2: determinacin del dimetro del campo visual

Se recort con precisin un cuadrito correspondiente a un 1cm de hoja milimetrada, se

coloc en montaje hmedo y se enfoc levando de sus bordes a un extremo del campo focal
y se cont cuantos cuadritos se logr observar, se hizo en los diferentes aumentos (4x, 10x,
40x, 100x). al objetivo de 100x, se le coloco aceite de inmersin en el cubre objeto.

PARTE 3: clculo de reas y volmenes

se realiz un montaje hmedo de catafilo de cebolla y se tinto con lugol, se llev al

microscopio, y con base a las medidas tomadas con el papel milimetrado (parte 2)
se procedi a ser medidas aproximadas del dimetro del contorno celular y el
dimetro de los ncleos, de 10 clulas.
Se realiz un montaje hmedo de epitelio bucal y se tinto con azul de metileno y se
procedi a realizar las medidas aproximadas de 10 clulas, con relacin a las
medidas tomadas con el papel milimetrado.

PARTE 4: conteo celular

Se realiz una solucin de un gramo de levadura seca en 100 mililitros de agua destilada y
se agito hasta que se viese homognea, se aplicaron 100 microlitros de la solucin en una e
de las muescas de la cmara de Neubauer evitando la formacin de burbujas, se llev al
microscopio y se enfoc en el objetivo de 40x y se realiz el conteo de las levaduras en una
de las cuadriculas.

Materiales

Microscopio
Cmara de Neubauer
Micropipeta
Frasco gotero
Bistur
Papel de arroz
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Porta y cubreobjetos
Papel milimetrado
Papel toalla
Tijeras
Hilos de diferentes colores
Bajalenguas
Cebolla
Levadura
Azul de metileno
Lugol
Agua destilada

RESULTADOS Y DISCUSIN:

PARTE 1: uso correcto del microscopio

Montaje de hilos: en el aumento de 4x se observaron detalles en las tres hebras de

hilo, en el objetivo de 10x se observ que al enfocar una de las hebras de hilo de un
color especifico, las otras presentaban cierto grado de desenfoque, en 40x se
observ con mayor detalle el desenfoque que se presentaba en las dems hebras al
enfocar una de ellas. Por esto se asumira una aparente tridimensionalidad
observable con el microscopio ptico compuesto.
Montaje de la letra a: se observ que se presenta una imagen invertida de la
letra adems se pudo notar que al mover la platina en las direcciones x, y, se
observaba un recorrido inverso del objeto por los oculares, en el aumento de 4x, 10x
y 40x.

PARTE 2: determinacin del campo visual

Al realizarse el conteo aproximado de cuadriculas en el campo visual se observ:

Objetivo Observador 1 Observador 2 Observador 3 Aproximado

4x 4.5 4.7 4.6 4.6

10x 1.8 1.9 2.0 1.9
40x 0.4 0.6 0.5 0.5
100x 0.3 0.3 0.3 0.3
Tabla 1. Medidas tomadas de los diferentes objetivos para la medicin del campo visual

PARTE 3: clculo de rea y volumen celular

Al calcular el rea y el volumen de diez clulas de catafilo de cebolla, tinturadas con lugol,
obtuvimos sus medidas promediando:
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Clulas Aprox. Ncleo Aprox.

Observador Observador Observador Observador Observador Observador
1 2 3 1 2 3
1 0.2 m 0.8 m 0.5 m 0.5 m 0.02m 0.02m 0.075m 0.036m
2 0.1 m 0.32 m 0.24 m 0.22m 0.01m 0.03m 0.062m 0.034m
3 0.25 m 0.27 m 0.25 m 0.25m 0.025m 0.01m 0.07m 0.035m
4 0.27 m 0.16 m 0.20 m 0.21m 0.027m 0.018m 0.047m 0.030m
5 0.18 m 0.10 m 0.15 m 0.14m 0.018m 0.02m 0.056m 0.031m
6 0.23 m 0.2 m 0.21 m 0.21m 0.023m 0.015m 0.057m 0.017m
7 0.3 m 0.22 m 0.1 m 0.20m 0.03m 0.013m 0.01m 0.017m
8 0.19 m 0.19 m 0.19 m 0.19m 0.019m 0.011m 0.01m 0.013m
9 0.23 m 0.24 m 0.25 m 0.24m 0.022m 0.024m 0.023m 0.023m
10 0.2 m 0.2 m 0.2 m 0.2 m 0.02m 0.02m 0.02m 0.02m
Tabla 2. Calculo tomados de 10 diferentes tipos de clulas de ellas y su ncleo.

PARTE 4: CONTEO DE CELULAS

Cuando se observ en el microscopio la cmara de Neubauer en un solo cuadrante (por

falta de tiempo) se contaron las clulas presentes de levadura por mililitros

Nmero de cuadricula Cantidad de clulas

1 10
2 8
3 8
4 14
5 15
6 15
7 9
8 16
9 15
10 7
11 21
12 21
13 18
14 12
15 6
16 14
Tabla 3. Conteo de las clulas de levadura en la cmara de Neubauer.
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CONCLUSIN:

Existen diferentes maneras de realizar un conteo celular y nuclear, una forma de poder
realizarlo es con la cmara de Neubauer que permite un conteo ms exacto, pero muy a
pesar de existir estas herramientas se puede contar manualmente por medio de la
determinacin del dimetro del campo visual. No olvidando el manejo adecuado del
microscopio.

PREGUNTAS:

1. Cul es la diferencia entre un microscopio simple y uno compuesto?

R// la diferencia entre estos dos es que el microscopio simple cuenta con un solo
lente a diferencia del M. compuesto el cual est constituido por la combinacin de
dos sistemas de lentes convergentes.
2. Qu importancia tiene el uso del microscopio en biologa celular?
R// su importancia es que nos permite ver micro organismos y poder estudiarlos
para obtener ms informacin acerca de ellos.
3. Por qu es necesario utilizar aceite de inmersin, al utilizar el objetivo del mismo
nombre?
R// porque al intercalar, entre el objetivo y el cubreobjeto una gota de aceite de
cedro, de ndice de refraccin casi igual al vidrio, los rayos emergentes ya no se
apartan de la normal, sino que continan su camino sin desviacin, consiguiendo as
que una mayor cantidad de luz llegue al objetivo, mejorando notablemente la visin.
Se puede encontrar un esquema muy claro en la pg.755 del libro "Fsica General".
Joaqun Catal de Alemany. Valencia 1961.
4. Qu significa resolucin, poder de resolucin, y amplificacin, asimismo de que
factores depende cada uno de ellos? presenta tu respuesta a manera de tabla.
R//
Concepto Factores
Resolucin Poder distinguir dos puntos Longitud de onda de la luz
separados para una usada y apertura de la lente
determinada distancia. del microscopio.
Poder de resolucin Posibilidad de distinguir La longitud de onda de luz
dos puntos muy prximos utilizada.
Amplificacin Capacidad d aumentar una Los objetivos y los
imagen varias veces su oculares.
tamao natural.
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5. Realiza una tabla comparativa con todos los tipos de microscopio

incluyendo: fuente de iluminacin, condensador, longitud de onda, tipo de tincin,
resolucin, amplificacin, tipo de lentes, etc.
R//
M. campo claro M. campo oscuro M. contraste de fase M. fluorescencia
Produce una imagen Produce una imagen Realza el contraste Expone la muestra a
oscura en un fondo brillante en un entre estructuras luz ultravioleta, este
brillante, tiene fondo oscuro y este intracelulares que es usualmente
varios lentes y es usado para tienen diferentes teido con
objetivos. observar ndices de flurocromos,
organismos vivos y refraccin. muestra una imagen
preparaciones no Excelente para brillante del objeto
teidas. observar clulas que resulta de la luz
vivas. nen emitida por el
espcimen.

BIBLIOGRAFIA:

Biologa celular, Chaolotte J. Avers, Rutger University, editorial iberoamericana,

mexico D.F pag 21.
Microscopio ptico compuesto. [en lnea].
http://www.monografias.com/trabajos82/microscopio-optico-
compuesto/microscopio-optico-compuesto.shtml . [consulta 10 abr. 2016]2.
Cmara de Neubaber. [en lnea]
https://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A1mara_de_Neubauer . [consulta 10 abr.
2016]3.