Resumen

Durante la realizacin de la prctica de extraccin de clorofila se determin las

diferentes longitudes de onda a travs del espectrofotmetro, se utiliz espinaca
como muestra ya que esta presenta entre 300 y 600 miligramos por onza de
clorofila, se trat a la muestra con una solucin amortiguadora de metanol al 80%.

Objetivos
Que el alumno se familiarice con los procesos de extraccin de pigmentos
naturales y discuta sobre el efecto del pH y del tratamiento trmico en la
estabilidad de estos pigmentos en comparacin con pigmentos artificiales.

Desarrollo de la prctica

Marco terico
La clorofila es un pigmento que se encuentra presente en las plantas. Este
pigmento les proporciona a las plantas su caracterstico color verde. La clorofila
absorbe la luz necesaria para la fotosntesis, proceso fundamental para fabricar
materia orgnica. La clorofila absorbe principalmente luz violeta roja y azul y
refleja luz verde. La abundancia de clorofila en hojas y su ocasional presencia en
otros tejidos vegetales como los tallos, es la causa de que esas partes de las
plantas aparezcan verdes, aunque a veces en las hojas de algunas plantas la
clorofila es enmascarada por otros pigmentos. La extraccin y reconocimiento de
estos pigmentos es interesante para su estudio y conocimiento de sus
propiedades.

Qu son los pigmentos?

Si es posible encontrar en el reino vegetal todos los matices y combinaciones de
colores del espectro, existe un predominio general de los colores primarios: verde,
amarillo, rojo y azul. Estos colores son conferidos a los vegetales por
determinados compuestos qumicos denominados pigmentos. El color particular
que presenta un determinado rgano vegetal
Depende generalmente del predominio de uno u otro o la combinacin de ellos. Se
debe tener claro que cuando un vegetal presenta un color blanco, es debido a la
falta de pigmentos. La luz solar que incide sobre ellas no es absorbida
selectivamente como ocurre en las partes coloreadas, sino que es transmitida o
reflejada prcticamente sin sufrir modificacin.
Dnde estn los pigmentos?
Estos pigmentos se encuentran en el interior de las clulas vegetales
especficamente en una organelo llamada cloroplasto. Los cloroplastos son
simplemente plstidos que contienen pigmentos cloroflicos. Los compuestos
cloroflicos estn ligados qumicamente con las estructuras internas del cloroplasto
(membrana tilacoides) y se hallan retenidos en estado coloidal. Asociados con las
clorofilas, existen tambin en los cloroplastos dos clases de pigmentos amarillos y
amarillo-anaranjados que son las xantofilas y carotenides.
Las Clorofilas. El color verde tan uniformemente presente en los vegetales es
debido a la presencia de dos pigmentos estrechamente emparentados llamados
clorofila "A" y clorofila "B". Se encuentran prcticamente en todas las plantas con
semilla, helechos, musgos y algas. Pueden formarse en las races, tallos, hojas y
frutos a condicin de que estos rganos estn situados por encima del suelo y
queden expuestos a la luz. Tambin aunque aparentemente falten en algunas
hojas de color rojo o amarillo, cuando se extraen las otras sustancias colorantes
de estas, puede comprobarse incluso all la presencia de las clorofilas, que
estaban enmascaradas por los dems pigmentos.

Materiales y mtodos
Reactivos - Cuchillo
- Espinacas, flores de Jamaica - Esptula
- Metanol al 80% v/v - Gradilla para tubos
- Buffers de referencia pH 4 y 7
- Papel Whatman No. 4 y No. 1
- Agua destilada
- Piseta
Material de vidrio - Tabla para picar
- 1 Embudo de vidrio - Varilla de vidrio
- 2 Pipetas de 5mL Equipo
- Balanza
- 2 Probetas graduadas de 100 mL
- Centrfuga
- 3 Tubos de centrfuga de 30-50 mL
- Espectrofotmetro
- 3 Celdas para espectrofotmetro
- Potencimetro
- Vaso de precipitado de 100 mL
Procedimiento
Extraccin de clorofila

1. Picar finamente 50g de hojas de espinaca.

2. Adicionar 100 mL de solucin amortiguadora de metanol al 80%,

mezclar con una varilla de vidrio durante 10 minutos.

3. Filtrar a travs de gasa para retirar las partculas de mayor

tamao, centrifugar por 10 minutos a 3000 rpm y recuperar el
sobrenadante.

4. Reportar el contenido de pigmentos en relacin al contenido de clorofilas a, b y

total, midiendo la absorbancia a 664 y 647 nm.
6. Conservar el extracto.
Resultados
Despus de poder obtener el mismo peso de los tubos de centrifuga para
proceder a la centrifugacin y lograr de esta manera la
separacin completa del extracto con los residuos que
este pudiere contener, se continuo a colocar en la
cubeta del espectro y medir la absorbancia.

Y los resultados obtenidos por el espectrofotmetro

para poder cuantificar la clorofila A y B fueron los
siguientes;

664 nm = .158

647 nm = .116

Lo cual se sustituy en la frmula para poder

conseguir el total de clorofila A y B en
unidades de mm/g y as mismo obtener el
total de clorofila que exista en el extracto.

Clorofila a (mg/g ) = [(12.7 x .158 ) (2.69 x .116)]/ (10 x 15.13g) =0.112 mg/g
Clorofila b (mg/g) = (22.9 x .116 4.68 x .158)/ (10 x 15.13g) = 0.012669927 mg/g
Clorofila total (mg/g)=(20.2 x .116 8.02 x .158)]/ (10 x 15.33g) = 0.007019178
mg/g

Conclusin
Los pigmentos naturales como lo es en el caso de la clorofila, es el que da el color
a las hojas de espinaca (en el caso de que fue lo que se utiliz) o cualquier otro
tipo de vegetal, y se encarga principalmente de absorber la luz necesaria para el
proceso de la fotosntesis.

Y su manera de obtencin puedes ser muy practica con ayuda de un solvente

orgnico como puede ser el caso de los ms comercializados entre los que se
encuentra el hexano, tolueno, cloruro de metileno, cloroformo, ter, acetato de
etilo, acetona, propanol, etanol, metanol, y cido actico. En este caso en el
proceso de extraccin se utiliz el metanol al 80%, para poder as obtener la
clorofila a y b, as como la clorofila total.

La absorbancia se midi a diferentes longitudes de onda que fue de 664 y 647

para poder as sustituir en la formula y as saber cul es el contenido de clorofila
en el extracto.

Bibliografa

http://200.35.84.131/portal/bases/marc/texto/2101-08-02527.pdf
https://www.quiminet.com/articulos/las-principales-fuentes-naturales-de-clorofila-
3423480.htm

http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0004-
06222004000200011

Cuestionario

1. Dibuje la estructura general e investigue las caractersticas

fisicoqumicas de los pigmentos extrados.

Caractersticas; La clorofila es el pigmento fotorreceptor responsable de la

primera etapa en la transformacin de la energa de la luz solar en energa
qumica.
2. Explique cmo influye el pH y la temperatura en las caractersticas e
intensidad del color en los pigmentos evaluados en la prctica?
Se debe principalmente a que al aumentar la temperatura a la clorofila, este acta
como acelerador de la reaccin de degradacin. Adems de que se reduce el
valor nutritivo e induce a una decoloracin, en este caso el grado de decoloracin
depender fundamentalmente de la presencia de agentes oxidantes en el medio
3. Investigue cmo influye el grado de madurez en el perfil de
pigmentos y los mecanismos asociados a la sntesis de clorofilas,
carotenoides y antocianinas?
Grado de madurez
Al avanzar la maduracin el contenido en pigmentos decrece, desapareciendo la
fraccin cloroflica ms rpidamente que la carotenoide. As mismo, durante el
proceso de extraccin se ha detectado una sensible prdida de pigmentos que
afecta mayoritariamente a componentes cloroflicos

Sntesis de clorofila

La clorofila es sintetizada en el CLOROPLASTO. En la primera fase, el

aminocido cido glutmico es convertido a cido delta-aminolevulnico. A partir
de ah, varias fases metablicas son requeridas para la formacin de los cuatro
anillos que forman los tetrapirroles. En esta ruta metablica, la presencia de luz es
necesaria durante la reaccin que produce la protoporfirina IX.
Esta es una ruta metablica importante debido a que, adems de la clorofila, se
producen tambin los tetrapirroles,. En ambos casos la ruta es similar hasta el
punto donde se sintetiza la protoporfirina IX, la cual es producida en los
cloroplastos. Otras enzimas de los cloroplastos pueden luego insertar en el centro
del tetrapirrol ya sea Mg2+ para iniciar la sntesis de clorofila, o bien Fe2+ para
iniciar la sntesis de grupos hemo. La protoporfirina IX puede tambin ser
exportada del cloroplasto hacia la mitocondria, donde es utilizada para producir
grandes cantidades de citocromos. Esta ruta biosinttica es tambin importante
porque los grupos hemo sirven de substrato para la sntesis del fitocromo, una
molcula fotosensible esencial para la fotomorfognesis normal de la planta. Por lo
tanto, los productos de los tetrapirroles estn involucrados tanto en la fotosntesis
(clorofilas y citocromos en los cloroplastos), como en la respiracin (citocromos en
las mitocondrias) y el desarrollo de la planta (fitocromo).

4. Cules son las ventajas y desventajas del uso de pigmentos naturales?

 Los pigmentos naturales pueden poseer ventajas y desventajas, podemos decir
que las nicas desventajas de los pigmentos naturales es la intensidad al
momento de dar color. Y ventaja seria su facilidad de obtencin.