CENTRO UNIVERSITRIO UNA

Chayana Rodrigues, Ivana Magalhes, Kssila Thomaz, Letcia Reis,

Patrcia Arajo, Rayssa Souza

Farmcia 7 perodo - manh

RELATRIO DE CONTROLE DE QUALIDADE

MICROBIOLGICA

DETERMINAO DO NMERO DE CONTAMINANTES (Mtodo

Pour Plate)

Belo Horizonte
2017
1 INTRODUO

A anlise microbiolgica uma importante ferramenta quando se trata da avaliao da

qualidade de ambientes e frmacos, na patologia clnica, entre outros. Um dos mtodos
de inoculao de amostras, em meios de cultura mais utilizados, a tcnica de
inoculao em profundidade, o Pour Plate. Nessa tcnica a amostra diluda adicionada
ao fundo da placa estril, posteriormente deposita-se o meio de cultura e em seguida so
feitos movimentos circulares com o intuito de favorecer a homogeneizao da amostra
(SOUZA; KITAHARA; FERNANDES, 2014).

Essa tcnica pode ser feita com o propsito de se ter colnias isoladas (teste qualitativo)
ou fazer a contagem em placas (teste quantitativo). Alm da contagem bacteriana,
usada tambm para anlise de micro-organismos anaerbios, adicionando uma outra
camada de meio fundido aps o endurecimento da primeira camada (PERDONCINI,
2017). Esses mtodos de inoculao, usando placas de petri de tamanho mdio e grande
so bem eficientes, pois garantem um crescimento uniforme das colnias em toda placa
(SOUZA; KITAHARA; FERNANDES, 2014).

O presente estudo se trata da anlise microbiolgica de Shampoo infantil, que um

produto no-estril, o qual admite a presena de carga microbiana de forma limitada,
com base nas caractersticas de sua utilizao. A ateno no controle dos produtos no
estreis uma medida de segurana, para que a carga microbiana presente no aspecto
qualitativo ou quantitativo, no comprometa a qualidade final ou segurana do paciente.
A presena de cepas patognicas proibida, pois representa potencial risco de aquisio
de quadro clnico infeccioso, ou de transferncia de toxinas indesejveis.A Farmacopia
Brasileira estipula em limite de contaminao de at 100UFC/ml para fungos e
300UFC/ml para bactrias. Ao lado da qualidade microbiana adequada para
comercializao, o cosmtico deve ser seguro ao consumidor e para garantir a
manuteno dessa qualidade durante o uso, feito o uso de conservantes eficazes em
concentrao adequada (MEDEIROS et al., 2007).

Esto presentes na composio da amostra do Shampoo infantil: methylisothiazolinone

e o methylchloroisothiazolinone, que so conservantes com propriedades
antibacterianas e antifngicas e so usados em muitos cosmticos para aumentar o
tempo de vida til, preservando a qualidade do produto final. Estes compostos
necessitam de serem neutralizados com 12% p/v sulfitos antes da inoculao da
amostra, pois inibem o crescimento microbiano (ABIHPEC, 2015).

2 OBJETIVOS

Avaliar o nmero total de microrganismos (bactrias mesfilas aerbias e fungos)

presentes em produto tais como os cosmticos e preparaes farmacuticas no estreis.

3 MATERIAIS

Pipeta automtica
Ponteiras para a pipeta automtica
Pipeta volumtrica
Pipetador
Erlenmeyer
Tubos de ensaio
Placas petri estreis
Bquer 50 mL
Papel indicador de pH
Amostra de shampoo
Tween 80 + lecitina
SSPT
Agar casena-soja
Agar sabouraud dextrose
Termmetro

4 METODOLOGIA

Contagem de bactrias mesfilas aerbias

Preparar as diluies do produto em anlise.
Pipetar 1,0 mL de cada diluio (10-1; 10-2; 10-3 e 10-4) para placas de Petri
estreis, em duplicata.
Acrescentar 20 mL do meio de cultura (gar casena-soja) fundido e resfriado a
48-50C.
Homogeneizar fazendo movimentos em forma de S.
Aps solidificao do meio de cultura inverter as placas e incubar por 48-72
horas a 35C.
 Contar s colnias que se desenvolveram, utilizando os critrios descritos para a
expresso dos resultados.
Expressar o resultado como Unidades formadoras de Colnia (UFC) por g ou
por mL do produto.
UFC= nmero de colnias x fator de diluio.

Contagem de bolores e leveduras

Pipetar 1,0 mL de cada diluio para placas estreis, em duplicata.
Acrescentar 20 mL de gar sabouraud dextrose fundido e resfriado a 45C.
Homogeneizar.
Aps solidificao do gar, inverter as placas e incubar entre 20 C e 25 C por 2
a 7 dias.
Contar as colnias de leveduras e bolores que se desenvolverem, utilizando para
expresso dos resultados placas que possurem menos que 50 colnias.
Expressar os resultados considerando o fator de diluio.

5 RESULTADOS

Tabela 1: gar casena soja

Diluio UFC/mL
Controle negativo 1 UFC
10 -1 1 UFC
10 -1 1 UFC
10 -2 Espalhamento
10 -2 1 UFC
10 -3 1 UFC
10 -3 2 UFC
10 -4 0 UFC
10 -4 Espalhamento

Tabela 2: gar Sabouraud dextrose

Diluio UFC/mL
Controle negativo 0 UFC
10 -1 0 UFC
10 -1 0 UFC
10 -2 0 UFC
10 -2 0 UFC
10 -3 0 UFC
10 -3 0 UFC
10 -4 0 UFC
10 -4 0 UFC
6 DISCUSSO

Os resultados das anlises bacterianas indicam possvel contaminao, devido

inconsistncia de resultados, controle negativo com presena de crescimento microbiano
e tcnica inadequada de espalhamento. A contaminao humana pode acontecer durante
a inoculao, ou esterilizao inadequada por tempo ou presso insuficiente na
autoclave.
Outras causas so o tempo de neutralizao e neutralizante utilizado. H um tempo
mnino determinado para que ocorra a neutralizao, o qual no foi seguido,
possibilitando a contradio de resultados. Alm disso, no foi indicado se na
composio da soluo salina peptonada e tamponada havia o neutralizante adequado
para a amostra.

7 CONCLUSES

Para a contagem de bolores e leveduras o produto encontra-se dentro dos padres

estabelecidos, porm com relao s bactrias mesfilas aerbias, o resultado foi
inconclusivo. Como o controle negativo apresentou crescimento de cultura bacteriana,
sugere-se refazer a anlise. O produto encontra-se REPROVADO.
8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ASSOCIAO BRASILEIRA DA INDSTRIA DE HIGIENE PESSOAL,

PERFUMARIA E COSMTICOS. Guia de Microbiologia: Controle Microbiolgico
na Indstria de Higiene Pessoal, Perfumaria e Cosmticos. Programa de
Desenvolvimento Setorial de Higiene Pessoal, Perfumaria e Cosmticos (PDS/HPPS).
Ed. 1, 107 p, 2015. Disponvel em: < http://abihpec.org.br/guia-
microbiologia/files/assets/common/downloads/Guia%20de%20Microbiologia.pdf>.
Acesso em: 12 set. 2017.

MEDEIROS, A. C. D. et al.Anlise de Contaminantes Microbiolgicos em Produtos

Comercializados em Farmcia de Manipulao. Biofar Revista de Biologia e
Farmcia, Paraba, v. 1, n. 1, p. 1-12, 2007. Disponvel em:
<http://sites.uepb.edu.br/biofar/download/v1n1-
2007/pdf_analise_de_contaminates_microbiologicos.pdf>. Acesso em: 12 set. 2017.

PERDONCINI, M. R. F. G. Tcnicas de Semeaduras de Microrganismos. Universidade

Tecnolgica Federal do Paran Campus Campo Mouro. Coordenao de Alimentos.
2017. Disponvel em: <http://paginapessoal.utfpr.edu.br/geraldo/microbiologia-
pratica/9%20e%2010%20-%20tecnicas%20de%20semeadura.pdf/at_download/file >.
Acesso em: 11 set. 2017.

SOUZA, C. M.; KITAHARA, S. E.; FERNANDES, J. C. B. ImprovedMethod for

Inoculationof Microorganisms.Journalof Advanced ScientificResearch. The
Municipal Universityof So Caetano do Sul, So Caetano do Sul, So Paulo, v. 5, n. 2,
p. 31-33, 2014.Disponvel
em:<https://www.researchgate.net/publication/269317916_IMPROVED_METHOD_F
OR_INOCULATION_OF_MICROORGANISMS>. Acesso em: 11 set. 2017.