Laboratorio de Hematologc3aca 0151 PDF

UNIVERSIDAD
AUTONOMA DE CHIAPAS
CAMPUS IV
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

MANUAL DE PRACTICAS

* HEMATOLOGIA *

Titular de la Materia: DRA. CONSUELO CHANG RUEDA

NOMBRE DEL ALUMNO:__________________________
CICLO ESCOLAR:___________________________________

UNACH / FAC. C. QUMICAS / CAMPUS IV

* I N D I C E * PAGINAS
PRACTICA No. 1
EXAMEN DE SANGRE Y TOMA DE MUESTRA . . 2
PRACTICA NO. 2
RECUENTO DE RETICULOCITOS . . . . 8
PRACTICA NO. 5
DOSIFICACION DE HEMOGLOBINA . . . . 20
PRACTICA NO. 6
VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR . . 24
PRACTICA NO. 7
HEMATOCRITO . . . . . . . 27
PRACTICA NO. 8
RECUENTO DE ERITROCITOS . . . . . 31
PRACTICA NO. 9
RECUENTO DE LEUCOCITOS . . . . . 34
PRACTICA NO. 10
RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS . . 38
PRACTICA NO. 11
EOSINOFILOS EN MOCO NASAL . . . . 43
RECOMENDACIONES PARA EL LABORATORIO
DE HEMOSTASIA . . . . . . . . 45
PRACTICA NO. 12
TIEMPO DE SANGRADO . . . . . . 46
PRACTICA NO. 13
TIEMPO DE COAGULACION . . . . . 40
PRACTICA NO. 14
RECUENTO DE PLAQUETAS . . . . . . 51
PRACTICA NO. 15
TIEMPO DE PROTROMBINA . . . . . 53
PRACTICA No. 16
TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA . 57
Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 1

PRACTICA no. 1
OBTENCION DE MUESTRAS SANGUINEAS

FUNDAMENTO:
En todo laboratorio clnico, podemos afirmar que la calidad de un exmen empieza
con la calidad de la muestra. El de hematologa no es la excepcin. Por lo que resulta
fundamental conocer la metodologa correcta para la obtencin de las muestras, as como las
ventajas, las desventajas, las indicaciones y los riesgos.
Determinadas exploraciones de los elementos formes de la sangre periferca, sus
precursores y algunos de sus productos, constituyen una rama separada de la ciencia
llamada HEMATOLOGA. Las exploraciones de la sangre tienen valor para el diagnstico de
los pacientes, en cuanto se realacionan estrechamente con la totalidad del cuadro clnico.
La sangre est formada por un lquido de composicin complicada y variable: el
plasma, que contiene leucocitos, eritrocitos y plaquetas en suspencin. Impidiendo la
coagulacin, los elementos formes pueden ser separados del plasma que tiene un color paja
plido. Cuando la sangre se coagula, el lquido que queda despes de separarse el cogulo,
se denomina suero. La diferencia fundamental entre el suero y el plasma consiste en que el
suero pierde el fibringeno protico, que se convierte en filamentos insolubles de fibrina en el
curso de la coagulacin. Las tcnicas hematolgicas tratan sobre todo los componentes
celulares de la sangre, su nmero o concentracin; la distibucin relativa de diversos tipos de
clulas y los transtornos estructurales o bioqmicos que pueden producir una enfermedad.
la sangre para pruebas de laboratorio puede ser capilar o periferica y venosa. Una y
otra tienen sus defensores, ventajas e inconvenientes.
SANGRE CAPILAR O PERIFERICA.
INTRODUCCIN
Se dice que la sangre que llamamos perifrica es ms bien arteriolar que capilar. Para
la mayoria de los exmenes clnicos, incluyendo los recuentos de clulas y las
determinaciones de la concentracin de hemoglobina, es mejor tomar sangre de una vena.
Pero para hacer formulas leucocitarias y tambin para contar los elementos celulares, puede
sacarse del lobulo de una oreja, del pulpejo de un dedo o tratndose de nios del pulpejo del
dedo gordo del pie o del taln. Si se saca de la oreja, la puncin se har en el borde libre del
lbulo, no en la superficie del mismo. Se proceder con decisin y despacio, pues apenas
duele y deber profundizarse hasta unos 3 mm. De una puncin bien hecha puede
prepararse 100 extensiones o recoger varis centmetros cubcos de sangre. Si el paciente
guarda cama, resultar mas cmodo hacrsela en el dedo, por ser ms accesible; por lo
dems, es preferible hacer la puncin en la oreja, por ser sta menos sensible. No deber
hacerse en una parte adematosa o congestionada, ya que es esencial que la sangre pueda
flur libremente para obtener resultados reproducibles que se puedan comparar con los de la
sangre venosa. La piel fra y ciantica es una fuente de errores, pues da cifras altas falsas de
glbulos rojos y blancos; esto se evita dando un masaje a la piel hasta que est rosada y
caliente antes de la puncin. Pero no se debe frotar fuertemente la piel, una vez que la
puncin est hecha, por que se originan errores.

OBJETIVOS:
Al terminar la prctica, el alumno ser capaz de:
1. Justificar la indicacin de los metodos de obtencin de muestras
2. Obtener correctamente muestras capilarews y venosas de calidad

analtica
EQUIPO:
Ninguno
MATERIAL
- Al mohadillas de gasa esteril.
- Una lanceta o una hoja de sacapelo.
Hay varios modelos de lancetas.Se recomienda el uso de lancetas u hojas

desechables. Si se piensa volver autilizar la misma lanceta en varios pacientes, deber
esterilizarse en autoclave antes. Las soluciones desinfectantes sencillas no son suficientes
para destrur el agente etiolgico de la hepatitis.
PROCEDIMIENTO:
La obtencin de las muestras de sangre para efectuar el estudio hematolgico se realiza en
general por puncin venosa de los pacientes en condiciones basales (reposo) y en ayunas. A tal
efecto se evitar la compresin demasiado enrgica del brazo, que contengan anticoagulantes.
Antes de realizar la venopuncin, verifique que cuenta con el siguiente material:
a) Todos los tubos correctamente identificados.

b) Soportes y agujas apropiados.
c) Algodn y/o gasas secas y estriles, torniquetes, vendajes adhesivos.
d) Alcohol isoproplico al 70% y solucin de yodo para muestras estriles.

Rompa el sello de seguridad de la aguja sin quitar el protector de la misma. Colquela en el soporte.
1.1 Inserte el tubo en el soporte asegurndose que la aguja quede en el centro del tapn y que el
tubo no pase la marca horizontal del soporte, ya que perdera el vaco.
2. Aplique el torniquete si es necesario y limpie el sitio seleccionado para la venopuncin con

una solucin antesptica. NO TOQUE EL REA DE LA PUNCION VENOSA DESPUS DE
LIMPIARLA.
2.1 Asegurndose que el brazo del paciente est hacia abajo y el tapn del tubo hacia arriba,
lleve acabo la venopuncin como se muestra en el esquema.
2.2 Perfore el tubo presionndolo mas all de la marca horizontal del soporte.
3. En caso de haber sido utilizado, afloje el torniquete tan pronto comola sangre comience a fluir
dentro del tubo (Ver el esquema).
3.1 Una vez que el primer tubo se ha llenado en su totalidad, retrelo.
3.2 Coloque los siguientes tubos en el soporte perforando los tapones para iniciar el flujo de la
misma manera que con el primero. RETIRE LA AGUJA UNA VEZ QUE HAYA LLENADO
TODOS LOS TUBOS REQUERIDOS.
4. Invierta los tubos con aditivo de 8 a 10 veces. NO LOS AGITE. El mezclar vigorosamente
puede producir hemlisis.
5. Tan pronto el ultimo tubo haya sido llenado retrelo y posteriormente retire la aguja de la vena
y presione el sitio de la venopuncin con una gasa seca. Mantenindola en su lugar.


RECOMENDACIONES
Si la sangre no fluye al interior del tubo o decrece el flujo antes de recolectar una muestra
adecuada, siga las siguientes recomendaciones:
a) Confirme la posicin correcta de la aguja en la vena.
La abertura de la aguja puede estar contra la pared interna de la vena, gire lentamente el
soporte de la aguja y la sangre debe empezar a fluir.
Si la aguja no est completamente en la vena, empuje ligeramente el soporte.
Si la aguja ha pasado a travs de la vena, jale ligeramente el soporte.
b) Solicite al paciente que abra y cierre el puo, esto debe estimular el flujo de sangre.

c) Confirme la posicin correcta del tubo, puede estar insertado de tal manera que la cnula posterior no
atraviesa completamente el diafragma del tapn, retire el tubo y coloque un tubo nuevo en el soporte.

d) Prdida de vaco por perforacin prematura del diafragma interior del tapn. Use un tubo nuevo y respete la
lnea gua en el soporte.

BIBLIOGRAFIA.
Davidsohn, I., J.B. Henrry , Diagnstico Clnico por el laboratorio. 6 Ed. Salvat Barcelona. Espaa .
1978
Houwen, B. Random error in hematology test; a process control approach Clinical Laboratory
Hematology . Vol 18 . 1990
Lynch, M. J. S. Rpale, I. D. Mellor, P. D. Spare, M. J. Inwood Mtodos de laboratorio. 2 Ed.
Interamericana. Mxico, D. F. 1987
Moran Villatorio, Luis E. Obtencin de muestras de Calidad Analtica. Ia. Ed. Manual moderno

PRACTICA No. 2
RECUENTO DE RETICULOCITOS
INTRODUCCION:
El reticulocito es un glbulo rojo joven que se forma cuando el ncleo del normoblasto viejo se
expulsa. Su nombre proviene de que contiene una red de material basfilo que al ser sometido a
mtodos especiales de tincin (coloracin supravital) revelan en su interior la existencia de una
sustancia filamentosa o granulosa.
Generalmente, entre ms joven el reticulocito, ms difuso es el retculo. Al madurar la clula,
este caracter disminuye hasta que finalmente quedan unos cuantos grnulos. Los reticulocitos son un
poco mayor en tamao que los eritrocitos y su abundancia en la circulacin es un ndice de la actividad
hematopoytica.
METODO "HUMEDO" EN TUBO:
FUNDAMENTO:
Los reticulocitos contienen restos de cidos ribonuclecos (RNA) que al ser precipitados y
teidos por una coloracin vital permiten que sean reconocidos como filamentos o granulos. Ya
teidoso se cuentan en un frotis sanguneo y pueden expresarse como por ciento de los eritrocitos o en
forma semicuantitativa relacionando el % de reticulocitos con la cuenta de eritrocitos.
OBJETIVO:
Al terminar la prctica, el alukmno ser capaz de:

1. Identificar la importancia y utilidad clnica de los reticulocitos
2. Realizar correctamente el recuento porcentual de reticulocitos en muestra
sangunea
3. Calcular a partir del recuento porcentual, las cifras absolutas de
reticulocitos por uL de sangre.
EQUIPO:
Bao maria
Microscopio
MATERIAL:

a).Biolgico
Sangre obtenida con EDTA
b) De laboratorio
Tubos de ensayo de 10x75
Pipeta Pasteur
Portaobjetos
Gradilla
Acdeite de Inmersin
REACTIVOS:
Azul de cresil brillante 1.0 g

Citrato de Sodio 0.4 g
Formol al 4 % 0.2 ml
Solucin salina fisiolgica.c.b.p 100 ml
Mezclar, disolver, filtrar y conservar en el refrigerador en frasco mbar.

Filtrar antes de usarse estable por varias semanas.
PROCEDIMIENTO:
1.- En un tubo de 10 x 75 mm. Poner igual volumen de sangre y colorante.
2.- Mezclar suavemente y dejar en reposo por 10 minutos para teir los reticulocitos.
3.- Hacer un frotis delgado con la mezcla, dejar secar al aire.
4.- Con objetivo de inmersin contar el nmero de reticulocitos con la cuenta de eritrocitos.
CALCULOS:
# DE RETICULOCITOS CONTADOS
% DE RETICULCITOS= _______________________________ X 100
# DE ERITROCITOS CONTADOS
% DE RETICULOCITOS
RETICULOCITOS/uL =________________________ X ERITROCITOS/M3
100
CIFRAS NORMALES:

ADULTOS 0.5 - 1.5 %

NIOS 2 - 6 % ( RECIEN NACIDOS ).
EN VALORES ABSOLUTOS:
NIOS (R.N.) 100 000 - 250 000/ mm3

ADULTOS 60 000/mm3.
Terminada la practica se obtuviern los siguientes resulltados:
% DE RETICULCITOS= _______________________________
RETICULOCITOS/uL =_________________________________
BIBLIOGRAFIA
R.A. Rifkind, A. Bank, P.A. MARKS, K. L. KAPLAN.. Hematologia Clnica Ed.
Interamericana.
R.C. Hillman., C.A. finich.. EL ERITROCITO. Ed. El Manual Moderno.
H.J. Wooddliff . R.P. Herrmann HEMATOLOGIA CLINICA Ed. El Manual
Moderno
Shirlyn B. Mckenzie HEMATOLOGIA CLINICA Ed. El manual Moderno
H.J. Woodliff, R.P. Herrmann HEMATOLOGIA CLINICA Ed. El manual
moderno

PRACTICA No. 5
DOSIFICACION DE HEMOGLOBINA.
INTRODUCCION
La hemoglobina es una protena conjugada formada por un grupo prosttico
denominado HEM, Es un pigmento rojo que contiene hierro al estado ferroso y a la que le
corresponde la funcin fisiolgica del transporte de oxgeno y del anhdrido carbnico.
Alrededor del 55 % de la clula roja esta consitudo por hemoglobina que tiene un PM
de 64 468 con 0.34 % de hierro y que es capaz de ligar una molcula de oxgeno gaseoso
por equivalente.
Cuando la hemoglobina se expone a la accin de varios gases o agentes txicos
sobrevienen cambios en su constitucin que resultaran reversibles o irreversibles.
FUNDAMENTO:
Los eritrocitos se hemolizan y la hemoglobina primero se oxida a metahemoglobina
con el ferricianuro, y despues reacciona con el cianuro de potasio para formar la
cianometahemoglobina.
OBJETIVOS:
1. Identificar la importancia y utilidad clnica de la cuantificacin de hemoglobina

2. Cuantificar con precisin y exactitud la hemoglobina en muestras sanguneas
EQUIPO:
Espectrofotmetro
Reloj de laboratorio
MATERIAL:
A). Biolgico
B) De laboratorio
Pipeta de Sal con boqui

Pipeta volumetrica de 5 ml
Tubos de ensayo de 13x100 mm
Celdas para espectofotometro
Gradilla
Papel milimtrico
Pipetas sexolgicas de 1 y 5 ml

C). Reactivos
Diluyente de Drabking
Sol. Patron de hemoglnina de 60 mg/dL
REACTIVO DE DRABKING:
Cianuro de potasio 0.050 gr.

Ferricianuro de potasio 0.200 gr.
Bicarbonato de sodio 1.000 gr.
Agua destilada c.b.p. 1000 ml.
La solucin debe ser transparente y colocada en frasco de vidrio obscuro

resguardada de la luz. Estable por 2 meses
PROCEDIMIENTO DE VALORACION:
En 1964 el subcomit tcnico de hemoglobinometra del Comit Internacional de
Standarizacin en Hematologa recomendo el METODO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA.
CURVA DE CALIBRACION DE HEMOGLOBINA.

La solucin valorada de Cianometahemoglbina (Hycel) y el reactivo de drabkin (que
puede ser tambin comercial), se utilizan para la determinacin cuantitativa de hemoglbina.
Principio qumico: El reactivo de drabkin, en donde se emplea una solucin de

ferrocianuro y cianuro de potasio, el ferrocianuro convierte al hierro ferroso de la
hemoglbina en frrico para formar cianometahemoglobina.
PATRON DE HEMOGLOBINA.- Hay varios tipos comerciales recomendables como

accuglobina, accurate, etc. en los que su equivalencia al contenido de hemoglobina
depender de la dilucin que de ella se haga.
PARA VOLUMEN DE 5 mL:
1.- Marcar 6 tubos de ensaye y pipetear de acuerdo a la siguiente tabla:
Conc. De Hb (g/dL) Blanco 4.0 8.0 12.0 16.0 20.0

Sol. Valoradora de 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
Hycel
Reactivo de Drabkin 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.0
2.- Mezclar bien y Tranferir las soluciones a cubetas o celdas segn sea el caso y medir las
absorbancias de cada dilucn contra el blanco.

3.- Graficar la absorbancia de cada dilucin en las ordenadas contra su concentracin en las
abcisas.
UN FACTOR DE CALIBRACION SE OBTIENE DE LA SIGUIENTE MANERA:
F = Concentracin del estndar

Absorbancia
Una vez obtenido ste, la concentracin de hemoglobina en una mujestra se obtiene de la

siguiente manera:
[Hemoglobina] = Absorbancia x Factor
PROCEDIMIENTO PARA LA DOSIFICACION DE HEMOGLOBINA:

1.- En un tubo de 13x100 mm, medir 5ml de diluyente de Drabking y lavar en ellos 0.02ml de
sangre bien mezclada con pipeta de shali. Mezclar.
2.- Reposar a temperatura ambiente por 15 minutos y leer contra diluyente de Drabking como
blanco a 540 mu.
3.- Leer el % de Hemoglobina en la curva de calibracin.
VALORES DE REFERENCIA NORMALES:

HOMBRES 13.5 a 17.5 gr%
MUJERES 11.5 a 16.5 gr%
NOTA:
Este procedimiento dosifica todas las hemoglobinas, excepto la Sulfohemoglobina.
El tiempo requerido para que la muestra se convierta en cianometahemoglobina

depende de la lisis de los eritrocitos y no de la reaccin qumica que es rapdisima.

RESULTADOS:
Despus de realizar la prctica se pueden hacer las siguientes consideraciones:
a). Curva de calibracin
b).- Muestras sanguneas
BIBLIOGRAFIA
1- RUIZ ARGUELLES, G. I. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGIA. ED. PANAMERICANA

MEXICO D. F. 1991
2- WOODDLIFF H.J., R.P. HERRMANN. HEMATOLOGIA CLINICA. ED. EL MANUAL
MODERNO. 1995
3- MCKENZIE, SHIRLYN B. HEMATOLOGA CLINICA. ED. EL MANUAL MODERNO. 1997
4- GARCIA G. RAFAEL. MANUAL DE LABORATORIO DE HEMATOLOGIA. UNIVERSIDAD
VERACRUZANA. 1997

PRACTICA No. 6
VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR
FUNDAMENTO:
En una sangre dejada en reposo, los eritrocitos se sedimentan separndose de la
mezcla y formando en el fondo del recipiente, un sedimento, ya que el eritrocito es ms
denso que el plasma. La velocidad con que lo hace depende de tres factores:
1) Formacin de grumos (pilas de monedas): Es el factor que ms aumenta la

eritrosedimentacin y resulta de alteraciones fsico-qumicas que abaten la tensin superficial
en la interfase glbulo plasma.
2) La concentracin del fibringeno del plasma: La tasa del fibringeno es

directamente proporcional a la sedimentacin.
3) Concentracin de globulinas alfa y beta: Aumenta su proporcin en el plasma

cuando disminuye la albmina, que es el principal factor de densidad del mismo.
Hay tres etapas en el proceso de la velocidad de sedimentacin:
a).- El perodo inicial, de pocos minutos, con la formacin de pilas de monedas.
b).- Perodo de 1 a 2 hrs. durante las cuales la sedimentacin ocurre a velocidad ms

o menos constante.
c).- Perodo de empaque lento.
Es obvio que el segundo perodo es el importante y por ello las pruebas deben de
montarse dentro de 2 horas.
OBJETIVOS:
1. Determinar la velocidad de sedimientacin globular en una muestra de

sangre.
2. Identificar su utilidad clnica

Equipo:
Gradilla de Wintrobe
Material
A). Biolgico
B). De laboratorio
Gradilla
Cronmetro
Pipeta pasteur de punta larga con bulbo
Tubos de wintrobe
PROCEDIMIENTO:
METODO DE WINTROBE:
1).- Con jeringa y cnula cargar de abajo hacia arriba sin dejar burbujas hasta la marca
100 ( 10) en un tubo de Wintrobe.
2).- Dejar el tubo en posicin perfectamente vertical y a la temperatura ambiente.
3).- Transcurrida una hora leer el "largo" de la columna de plasma sobre las clulas como
valor de la eritrosedimentacin.
4).- Puede corregirse con el nomograma de Wintrobe en caso de anemia.
C I F R A S N O R M A L E S:
HOMBRE: 0 - 7 mm con promedio de 4 mm.

MUJER : 0 15 mm con promedio de 10 mm.
NIOS: 1 15 mm con promedio de 5 a 10 mm.

NOTA:
La prueba de sedimentacin globular deben montarse antes de las 2 hrs. que siguen a
la toma de la sangre.
El hallazgo de una eritrosedimentacin normal no excluye la posibilidad de
enfermedad.
Determine elhematocrito por centrifugacin de acuerdo a la tcnica descrita en la
practica siguiente. Si el hematocrito es inferior a 47 en el hombre inferior a 42 en la mujer,
corrija de acuerdo con la grfica de Wintrobe. En el nio no se acostumbra hacer ninguna
correccin por variar de una ao de edad a otro el valor promedionormal de hematocrito.
RESULTADOS
Terminada la practica, se obtuvieron los siguientes resultados:
VSG SIN CORREGIR:__________
VSG CORREGIDA:_____________
BIBLIOGRAFIA:

Interamericana.
Moderno
moderno
Interamericana.
Moderno
moderno

PRACTICA 7
HEMATOCRITO
FUNDAMENTO:
El hematocrito es el paquete de glbulos rojos, osea el volumen de los eritrocitos
conglomerados en una cantidad dada de sangre (100ml de sangre total) y constituye un
procedimiento util para el diagnstico diferencial de las anemias.
Para esta determinacin se utilizan varios tipos de tubos de los cuales los mas usados
son el de Wintrobe y el capilar.
OBJETIVOS:

1. Identificar la importancia y utilidad clnica de la determinacin del hematocrito
2. Ejecutar correctamente la determinacin de hematocrito usando macro y micrometodo
3. Justificar las ventajas y desventajas de amnbos mtodos
EQUIPO:
Lector de hematocrito
Centrifuga
Microcentrifuga
Material:
A). Biolgico
B). DE laboratorio
Tubos de Wintrobe
Jeringa y canulas de Wintrobe (Se puede utilizar una aguja de raquia).
Capilares de 75 x 1.5 mm heparinizados.
REACTIVOS:
Anticoagulante EDTA al 10 %
PROCEDIMIENTO:
METODO DE WINTROBE:
Consiste en llenar un tubo estrecho de 110 mm de longitud y de un dimetro de 2.5 a
3 mm, con fondo plano. El llenado del tubo se lleva a cabo de la msma forma que en la
practica #3, Se centrifuga el tubo a 2,500r.p.m. durante 30min. para llevara a volumen
constante. Este volumen se reporta como % de volumen globular o hematocrito.
El tubo tiene una doble escala de 0 a 10 cm, divididos en mm por la derecha y de 10 a
0 por la izquierda. Para la lectura del valor hematocrito se lee en la escala de la derecha.
METODO DEL CAPILAR ( MICROHEMATOCRITO ).
1.- Con la muestra de sangre bien mezclada se procede a llenar 3/4 partes del capilar.
2.- Se sella el extremo colorido del capilar con plastilina o calentando.
3.- Centrifugar durante 5 min. a 10.000 r.p.m. 10 min a 7 500r.p.m.
4.- Leer el Por ciento de volumen de los eritrocitos. Esto se simplifica con una plantilla de
lectura. Si no se tiene plantilla, con escala milimetrica medir en mm la longitud de la
columna de los eritrocitos y sangre total, con la que:
CALCULOS
LONGITUD DE LA COLUMA DE G.R.
HEMATOCRITO % =------------------------------------------------------------- X 100
LONGITUD DE LA COLUMNA DE SANGRE
VALORES DE REFERENCIA:
NEONATO 55 - 68 %
1 SEMANA 47 - 65 %
1 MES 37 - 49 %
3 MESES 30 - 36 %
1 AO 29 - 45 %
10 AOS 36 - 40 %
VARON ADULTO 42 - 54 %
MUJER ADULTA 38 - 46 %
NOTAS:

1.- Las normales estan basados en la tcnica macro de Wintrobe, lo que requiere 30 min. de
centrifugacin a 2 500 r.p.m., dejando ms espacios entre las clulas entonces los valores
son un poco ms altos en 1 a 2 %.
2.- El error es de 1 a 2 %, lo que lo hace la mejor prueba para determinar las anemias,
policitemia o hemoconcentracin.
3.- La sangre obtenida por puncin capilar da resultados menos consistentes que la sangre
venosa.
4.- Es muy conveniente observar en la interfase plasma-eritrocitos, la capa blanca cremosa

de los leucocitos. Aproximadamente 1 mm = 10 000 leucocitos.
RESULTADOS:
a). Macromtodo
b).- Micromtodo

BIBLIOGRAFIA:

Interamericana.
Moderno
moderno
Interamericana.
Moderno
moderno

PRACTICA 8
RECUENTO DE ERITROCITOS
FUNDAMENTO:
La sangre se diluye 1:200 veces (Por el gran nmero de eritrocitos) con un disolvente
isotnico que impide la coagulacin y agrupamiento de las clulas. El nmero de ellas, en un
volumen conocido de esta dilucin, se cuenta bajo el microscopio en un hematocmetro
(cmara de Newbauer).
OBJETIVOS:

A). Identificar la importancia y utilidad clnica del recuento de eritrocitos
B). Ejecutar correctamente el recuento de glbulos rojos en muestras de sangre
C). Describir el funcamento del mtodo
EQUIPO:
Agitador electrnico para pipeta de thoma

Microscopio
Contador de clulas
MATERIAL :
A) Biolgico
B) De laboratorio
Pipeta de Thoma para glbulos rojos con boquilla
Camara de Neubauer
C) Reactivos:
Diluyente de Dacie:
Citrato de sodio al 3 % en agua destilada: 990 ml.
Formol al 40 % 10 ml.
Solucin estable, conserva los eritrocitos por varias horas.
Anticoagulante EDTA AL 10 %.

PROCEDIMIENTO:
1.- Homogenizar suavemente la sangre.
2.- Preparar una dilucin 1:200 con la solucin de Dacie usando la pipeta de Thoma para
glbulos rojos:
a) Cargar la sangre bien mezclada hasta la marca 0.5
b) Limpiar perfectamente la pipeta por fuera.
c) Absorber lquido de Dacie hasta 101.
3.- Cargar otra pipeta de igual forma.
4.- Agitar las pipetas 3 minutos para mezclar
5.- Tirar las primeras 3 4 gotas de cada pipeta y cargar cada lado de la cmara con una
pipeta.
6.- Dejar sedimentar por 3 a 5 min.
7.- Con aumento de 400x (seco fuerte), contar los cuadros que se encuentran en la
cuadricula E como se ndica a continuacin: las clulas en los 4 cuadros de las
esquinas y el cuadro central de la retcula central de 400 cuadritos (0.02 mm3). Ver el
esquema de la pagina siguiente, y realizar los calculos como a continuacin se
desdcriben
CALCULO:
N x 200 x 10 x 400
# de G. R. = --------------------------- = N x 10,000
80
Donde:
N = # de eritrocitos contados.
200 = Ttulo de la dilucin
10 = Correccin de la proofundidad de la cmara.
400 = Total de cuadritos de la cmara.
80 = Total de cuadritos contados.
Por lo tanto la cantidad de glbulos rojos leda en los cinco cuadros y adicionada de
cuatro ceros, d la cifra correspondiente al total de eritrocitos en 1 mm3 de sangre.

POSIBLES FUENTES DE ERROR:
a) Inherente (distribucin en el 4.4 %

campo)
b) Personal (buen operador) 3.3 %
c) Aparatos (certificados) 2.3 %
TOTAL 10.0 %
Es decir una cuenta de 5 000 000 puede dar de 4 500 000 - 5 500 000 por mm3.
NOTA:
Se puede realizar la dilucin en tubo usando una pipeta de shali, y se lava en 4 ml de
diluyente de Daci Mezclar 3 min. en tubo bien tapados de 10 x 75 mm. La cmara se carga
con capilar. Se prefiere esta tcnica ya que las pipetas de hemoglobina son ms baratas y
ms faciles de lavar.
CIFRAS DE REFERENCIA:
ADULTOS:
HOMBRE: 4 - 6.2 millones / mm3

MUJER: 4 - 5.5 millones / mm3
NIOS: Promedio de 4.5 millones / mm3.
Terminada la prctica, se obtuvieron los siguientes resultados:
BIBLIOGRAFIA:

Interamericana.
Moderno
moderno
Interamericana.
Moderno
moderno

PRACTICA 9
RECUENTO DE LEUCOCITOS
FUNDAMENTO:
La sangre se diluye en un lquido que lisa los eritrocitos. Las clulas nucleadas que no
se lisan, se cuentan poniendo la dilucin en un hemocitmetro.
OBJETIVOS:

A). Ejecutar correctamente el recuento de leucocitos
B). Identificar la utilidad clnica del recuento de leucocitos
C). Describir el fundamento del mtodo
EQUIPO:
Agitador electrnico para pipeta de thoma

Microscopio
Contador de clulas
MATERIAL
A). Biolgico
B) De laboratorio
Pipeta de Thoma para leucocitos con boquilla
Camara de Neubauer
Gradilla
Tubo de ensayo de 13x 100 mm
C) Reactivos:
Solucin diluyente de Trk

Es una solucin de cido actico al 3% v/v en agua destilada, aadiendo una gota de
azul de metileno hasta color azul plido.

PROCEDIMIENTO:
1.- Preparar una dilucin de sangre con anticoagulante 1:20 en solucin de Trk, usando
pipeta de Thome para glbulos blancos. Para ello:
a) Cargar sangre bien mezclada hasta la marca 0.5
b) Limpiar con gasa el exterior de la pipeta.
c) Cargar diluyente de Trk hasta la marca 11.
2.- Repetir lo anterior con otra pipeta.
3.- Agitar para mezclar las pipetas por 3 minutos.
4.- Descartar las primeras 3 gotas de cada pipeta, y cargar con cada una una cuadrcula del
hematocitmetro.
5.- Dejar sedimentar las clulas por 3 a 5 minutos.
6.- Con seco debil, contar las clulas de los cuatro cuadros de las esquinas de la camara de
Neewbauer es decir los cuadros en cada una de las retcula.indicadas en la figura a
continuacin (A, C, G, I) y realizar el calculo como a continuacin se describe

CALCULO:
promedio de las cuentas de las 2 pipetas x 50=leucocitos/mm3 de sangre
ERROR.-
El error es el mismo de la cuenta de eritrocitos, ms o menos 10 % en ptimas condiciones.
NOTA: Ya que los glbulos rojos nucleados no se lisan, son contados por este mtodo.
Cuando su cantidad es elevada, se hace una cuenta en un frotis sanguneo por 100
leucocitos.

CALCULOS:
Leucocitos contados por mm3 x 100

--------------------------------------------------------------- = Cuenta corregida de leucocitos por mm3
100 + No. eritrocitos nucleados x 100 leucitos
1.- Si el resultado es menor de 5000 o sea 4000 se emplea una dilucin 1:10 se aspira
sangre hasta la marca 1 y diluyendo hasta la marca 11.
1/0.4 = 2.5 x 10 = 25
LEUCOCITOS. VALORES DE REFERENCIA
EDAD SEXO VALORES

(Leucocitos/uL)
f/m 9000 30,000
Recien Nacido
1 2 Aos f/m 6000 - 18,000

f/m 4000 - 13,500
3 - 10 Aos
f/m 5000 - 10,000
11 Aos a ms
Terminada la prctica se obtuvieron los siguientes resultados:

BIBLIOGRAFIA:

Interamericana.
Moderno
moderno
Interamericana.
Moderno
moderno

PRACTICA 10
RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS
INTRODUCCION
Consiste en reconocer y diferenciar las variedades de leucocitos que se encuentran en
la observacin de 100 glbulos blancos que se estudian en frotis teidos de sangre
perifrica, por lo que se conoce tambin como recuento diferencial o porcentual o frmula
leucocitaria.
El colorante empleado es el de Wright el cual es una combinacin de colorantes
cidos (eosina) que se une a los componentes bsicos de las clulas (citoplasma).
Inversamente, los colorantes bsicos (azul de metileno) son atrados por los compuestos
cidos de las clulas y se combinan con ellos (cidos nucleicos y protenas del ncleo, as
como el citoplasma primitivo).
Las tinciones tipo Romanowsky son mezclas de colorante Azur B y eosina Y. La
tincin de wrigth ( es una solucin alcohlica de eosina y ua mezcla compleja de Azl de
,etileno (50-75%), Azur B (10-25%) y otros derivados. Con un amortiguador. Las tinciones
bien realizadas producen el efecto Romanowsky que en parte se logra por la accin
combinada de los colorantes a pH 6.4 a 7.0
FUNDAMENTO:
Las estructuras cidas se tien con los colorantes bsicos y se denominan basfilas; Las
estructuras bsicas se tien con los colorantes cidos y se denominan cidofiloso
eosinfilos; las que captan ambos colorantes son neutrfilos. El efecto Romanowsky consiste
en la aparicin de otros colorantes adems del azl y el rojo naranja y caractersticamente es
el morado del que se tien los ncleos (METACROMASIA).
El frotis se observa al microscopio con objetivo de inmersin y mucha luz, iniciandose

el recuento diferencial hacindose un examen detallado de cada leucocito observado, hasta
contar 100 glbulos blancos clasificandose sus variedades.
As en un frotis se debe tener el habito de verificar los puntos siguientes:
1).-Eritrocitos: Observar tamao, forma y concentracin de Hb. Investigar si existe y en que

grado, anisocitosis, poiquilocitosis, hipocromia, policromatofilia, eritocitos nucleados,
esferocitosis, punteado basfilo, etc.
2).- Glbulos blancos: Verificar si los leucocitos son maduros, inmaduros o tpicos. Debe
hacerse un clculo mental del nmero promedio de lobulos nucleados de los neutrfilos,
as como observar si existen granulaciones txicas, mononucleares vacuoladas, clulas
plasmticas o cualquier otra anormalidad y en tal caso reportar refiriendose el nmero
de leucocitos anormales por 100 globulos estudiados.
3).- Plaquetas: Observar si se encuentra en cantidades aproximadamente normales (de 3 a

8 plaquetas por 100 leucocitos). Verificar que las plaquetas que se encuentran parezcan
normales o si existen formas gigantes o extraas.

OBJETIVOS:
A). Justificar la utilidad clnica del recuento diferencial

B). Realizar el recuento diferencial porcentual de leucocitos
C). Calcular las cifras absolutas por uL de sangre de cada tipo de leucocito
EQUIPO
Microscopio
Contador de clulas
MATERIAL
A). Biolgico
Frotis de sangre perifrica, preparados y teidos en la practica 9
B). De laboratorio
- Portaobjetos de 25x75 mm y 1 mm de grosor ( Nuevos)

- Soportes o rejillas para tincin
- Torundas alcoholadas
C). REACTIVOS:
1.- Amortiguador de fosfatos pH 6.4
KH2PO4 Anhidro ----------------3.31 g

- KH2PO4 J.T.BAKER No. 3246-01
Na2HPO4 Anhidro -------------- 1.28 g

- NaHPO4 J.T. BAKER No. 3828-01
Agua destilada c.b.p. ------- 500 ml
Comprobar el pH con un potencimetro

2.- Colorante de Wrigth Marca Sigma Mxico No. 912
Colorante de Wrigth en polvo...... 0.3 g

Metanol ...................................... 150 ml
Preparacin del colorante:

En un mortero colocar el colorante y agregar metanol en pequeas porciones
triturando el polvo con el metanol; vaciar poco a poco en un recipiente hasta acabar
el metanol. Dejar madurar durante 10 dias, agitandolo diariamente.
PROCEDIMIENTO:
METODO DEL ANGULO:

a).- Antes de 2 horas de realizada la toma de la muestra, se cubre el frotis con un
volmen de colorante sin diluir, utilizando una pipeta Pasteur o una pizeta.
b).- Se agregan dos o tres volmenes de amortiguador cuidadosamente, sin derramar el
colorante y mezclar con gentileza soplando aire con una pipeta.
c).- Se deja de 5 10 minutos. La proporcin en tiempo de colorante-amortiguador
usualmente es 1:3
d).- Se elimina el amortiguador de la laminilla totalmente y se lava con agua corriente.
Se limpia la parte inferior con una torunda para remover el colorante acumulado. Dejar
secar al aire.
e).- Diferenciar y contar cada una de las clulas observadas hasta llegar a contar 100
clulas. Utilizando uno de los mtodos de lctura que a continuacin se ilustran.
Mtodo de lectura: (Como se ilustra)

Direccin del extendido origen
(a) (b)

Causas de error:
a).- Distribucin marginal de las clulas
b).- Homogeinizacin insuficiente ( deben ser dos minutos en rotador mecnico o 60
inversiones manuales mnimo.
c).- Retardo en la realizacin del frotis ( Debe hacerse antes de 2 o 3 hrs)
d).- Proporcin inadecuada de anticoagulante (1-2 mg/ml de sangre; EDTA).
e).- Precipitados: Laminillas sucias, secado durante el perodo de tincin, falla en la
posicin de la laminilla, inclinada, durante el lavado inicial; filtracin inadecuada y
presencia de polvo.
f).- Tincin excesivamente azl: Frotis grueso, tiempo prolongado de tincin, lavado
inadecuado, alcalinidad excesiva.
g).- Tincin muy rosa: Insuficienciente tincin; lavado prolongado, exceso de cidez.
h).- Error de identificacin: El frotis debe marcarse a lpiz con el nombre del paciente.
i).- Lectura en zonas gruesas: Dificultad para distinguir leucocitos en reas donde
aparecen muy pequeos.
J).- La zona de lectura debe ser aquella donde los eritrocitos no deben estar
superpuestos:
Grosor del frotis.
VALORES DE REFERENCIA
Diferencial de leucocitos
Tipo de Leucocito Valores porcentuales Valores absolutos/uL

Linfocito 20 - 40 2000 4000
Monocito 4 - 9 200 - 800
Eosinfilo 1 - 4 40 - 400
Basfilo 0 - 1 0 - 100
Neutrfilo 40 65 2 500 7000
Neutrfilo en banda 0 -7 0 - 700

BIBLIOGRAFIA:

Interamericana.
Moderno
moderno
Interamericana.
Moderno
moderno

PRACTICA 11
EOSINOFILOS EN MOCO NASAL.
En el asma, los esputos y las secresiones bronquiales recogidas durante el ataque

contienen muchos leucocitos eosinfilos. En forma semejante, abundan los eosinfilos en el
moco nasal en la fiebre de heno y la rinitis alergica.
FUNDAMENTO:
En particular, el recuento diferencial de las extensiones de secresin nasal en busca
de eosinfilos es til para diagnosticar la rinitis alergica.
OBJETIVOS:

A). Justificar la utilidad clnica del recuento de eosinfilos en moco nasal
B). Realizar el recuento porcentual de eosinfilos en cada narina
MATERIAL Y REACTIVOS:
Hisopos estriles.
Portaobjetos.
Microscpio.
Colorante de Wright.
Solucin buffer.
PROCEDIMIENTO:
Recoger la secresin nasal por medio de un hisopo y con ella hacer un frotis sobre un
portaobjetos.
Dejar secar y teir con colorante de Wright, como si se tratara de un frotis sanguneo.
Observar al microscpio con objetivo de inmersin y determinar proporcin de
eosinfilos en un grupo de 100 a 200 clulas, reportando el porcentaje en que se encuentran
los eosinfilos.

0 % de eosinfilos.
NOTA: Cuando oscila entre l0 y 35 % , la eosinoflia constituye una indicacin de alergia.

BIBLIOGRAFIA:

Interamericana.
Moderno
moderno
Interamericana.
Moderno
moderno


HEMOSTASIA
RECOMENDACIONES PARA EL LABORATORIO DE HEMOSTASIA.
1.- EXTRACCION DE MUESTRAS.-

Es uno de los pasos bsicos para muchas pruebas de coagulacin. La puncin debe
de ser limpia para evitar la contaminacin con factores hsticos que actuan como material
tromboplastnico y se impedira la extasis venosa.
2.- MATERIAL DE VIDRIO.-

Los elementos utilizados para los estudios de coagulacin deben de estar
quimicamente puros lo ms aconsejable es utilizar el material slo para este tipo de
determinaciones.
El material siliconado se emplear slo si el mtodo lo requiere.
El material plstico provoca resultados que pueden ser comparables con los obtenidos
con el material de vidrio.
3.- TEMPERATURA.-
Todos los reactivos biolgicos y las muestras de sangre deben de mantenerse en

refrigeracin hasta el momento de realizar las pruebas. Estas se efectuan a temperatura de
37C en bao de agua.
4.- INFLUENCIA DEL TIEMPO.-

En general es importante realizar las determinaciones lo ms pronto posible, luego de
haber efectuado la extraccin para evitar cambios en los componentes plsmticos.
5.- CONTROLES NORMALES.-

Para cada jornada de trabajo deben de obtenerse varias muestras de sujetos
normales que se encuentren en las msmas condiciones con la muestra problema. Tambin
pueden obtenerse en el comercio controles normales liofilizados.


PRACTICA 12
TIEMPO DE SANGRADO
FUNDAMENTO:
Se efecta una herida ctanea y se toma el tiempo necesario para que deje de
sangrar. La prueba depende del nmero de capilares cortados, de la presion capilar y venosa
y de la formacin de un tapn de plaquetas; o sea trata de medir realmente la eficiencia de
la fase I de la hemostasia (Factor vascular y Agregacin plaquetaria ).
Para impedir en lo posible, el efecto de la siguiente fase de la hemostasia
(Coagulacin de la sangre), la sangre se retira tan pronto como aparece en la piel.
OBJETIVOS:

A). Identificar la utilidad clnica del tiempo de sangradp
B). Ejecutar correctamente el tiempo de sangrado
EQUIPO:
Cronmetro
Esfingomanmtro
MATERIAL
A) Biolgico
Ninguno
B) De laboratorio
Lancetas deshechables
Tiras de papel filtro
Torundas de algodn con alcohol

PROCEDIMIENTO:
METODO DE DUKE.
1.- Se limpia el lbulo de la oreja o la yema de un dedo con alcohol y se practica una incisin
no mayor de 4mm. con una lanceta (lanceta deshechable).
2.- Se arranca un cronmetro y a intervalos de 15 segundos, suavemente, y usando una
tira de papel filtro se absorbe la sangre, hasta que no sangre ms la herida.
3.- No se necesita seguir la prueba por ms de 15 minutos.
1 a 4 Minutos.
NOTAS:
Cuando el tiempo de sangrado es de 4 a 6 minutos, se recomienda la prueba para
comprobar.
Al leer el punto final.

No comfundir la sangre total con exudado de suero.

BIBLIOGRAFIA:

Interamericana.
Moderno
moderno
Interamericana.
Moderno
moderno

LABORATORIO DE HEMATOLOGA
PRACTICA No. 13 FECHA:___________
TIEMPO DE COAGULACION.
FUNDAMENTO:
El tiempo que tarda la sangre total en coagularse "in vitro" Es medida de la eficacia de
las 3 etapas de la coagulacin, como son:
1.- Formacin del activador de la protrombina.

2.- Conversin de la protrombina en trombina.
3.- Conversin del fibringeno en fbrina.
OBJETIVOS:
A). Identificar la utilidad clnica del tiempo de coagulacin

B). Ejecutar correctamente el tiempo de coagulacin
PROCEDIMIENTO:
TECNICA DE LEE Y WHITE

1.- Obtener limpiamente unos 4ml de sangre venosa. La venipuntura debe ser directa, ya que
la contaminacin con jugo tisular invalida la prueba por factores de coagulacin
extrnseca.
2.- Quitar la aguja y poner 1ml. de sangre a cada uno de los 3 tubos de 10x75 mm. y
pasarlos a B.M. a 37C y poner en marcha el cronmetro cuando la sangre entra en el
tubo #1
3.- Cada 30 seg inclinar el tubo #3 hasta que la sangre este coagulada, hacer lo msmo con
el tubo #2 y por el fn con el #1, cuando se observa coagulacin en este ltimo se
detiene el cronmetro, considerando como valor final el obtenido en el tubo # 1.
0
NOTA:
La prueba hecha a temperatura ambiente pierde estabilidad.
INTERPRETACION:

Es un metodo grosero de evaluacin, influenciada por numerosas variables, como

temperatura, dimetro de los tubos empleados, volumen de la muestra, etc. slo se prolonga
cuando la deficiencia es muy grave, por ejemplo: deficiencia de fibringeno, de protrombina
o factores V, VIII, IX, tambin en presencia de anticoagulantes o hiperheparinemia.
De 6 a 12 minutos.
BIBLIOGRAFIA:

Interamericana.
Moderno
moderno
Interamericana.
Moderno
moderno

PRACTICA No. 14
RECUENTO DE PLAQUETAS
METODO DIRECTO:
FUNDAMENTO:
La sangre se diluye 1:100 con un solvente que lisa los hematies; las plaquetas se
encuentran en un volumen conocido de la dilucin en una camara de Newbauwer empleando
un proceso para contrastar visualmente (colorante, o iluminacin de contraste de fases).
OBJETIVOS:

A). Identificar la utilidad clnica del recuento de plaquetas
B). Ejecutar correctamente el recuento de plaquetas
REACTIVOS:
Citrato de Sodio 3.80 gr.

Formol Neutro al 40% 0.2 ml.
Azul brillante de cresil 0.10 gr.
Agua destilada c.b.p 100 ml.
PROCEDIMIENTO:
1.- Preparar una dilucin de sangre 1:100 con pipeta de eritrocitos. Se carga sangre
hasta la marca 1, limpiar la pipeta por fuera. Absorber diluyente hasta la marca 101.
2.- Mezclar suavemente por 2 minutos Descargar las primeras 6 a 8 gotas y cargar las
2 reticulas de la cmara. Dejar sedimentar por 10 minutos.
3.- Con seco fuerte, contar las plaquetas en los 5 cuadritos de la retcula central (como
para eritrocitos).
4.- Promediar los datos de las 2 cuentas y multiplicar por 5000 para obtener la cifra de
plaquetas por mm3.
170,000 A 300,000 POR mm3.
CAUSAS DE ERROR:
Los msmos que para la cuenta de eritrocitos y glbulos blancos, aadiendo la

fragilidad y adhesividad de las plaquetas, lo que sube a 20 %.
NOTA:
las plaquetas aparecen como esferas doblemente refractiles (enfocando y
desenfocando) de 2 a 4 micras de dimetro.
Las plaquetas son facilmente destruibles, la toma de sangre venosa debe recibirse en
solucin de EDTA, (no usar puncin capilar), mezclar suavemente y contarse antes de 2 hrs.
BIBLIOGRAFIA:

Interamericana.
Moderno
moderno
Interamericana.
Moderno
moderno

PRACTICA No. 15
TIEMPO DE PROTOROMBINA ( T P ).
INTRODUCION:
El reactivo para realizar ste TP es una tromboplastina completa (Factor, fosfolpidos y

protenas). Generalmente ya trae includo el calcio por lo que tambien se le llama
tromboplastina clcica activada. Se activa la coagulacin a travs de la VIA EXTRINSECA.
Por lo tanto decimos que el TP mide en forma indirecta todos los factores involucrados en
esta va.
FUNDAMENTO
El ploasma anticoagulado se le induce la coagulacin reponiendo el calcio que fue

inactivaqdo con el anticoagulante y agregando una tromboplastina completa para activar la
va extrinseca. Se mide el tiempo transcurrido, desde la activacin hasta la formacin del
coguolo , es decir, hasta la formacin de fibrina.
OBJETIVOS:
1. Identificar la utilidad clnica de la medicin del tiempo de protrombina

2. Describir el fundamento del mtodo
3. Ejecutar correctamente la prueba y su calibracin
EQUIPO:
Coagulmetro (optico o mecnico)

Bao maria
Centrfuga
1 Cronmetro
MATERIAL
A). Biolgico
Sangre obtenida con Citrato de sodio 0.1 M
B). De laboratorio
Tubos de ensayo 10x75 mm

Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
2 Pipetas de 0.2 ml
Gradilla
Pipeta pasteur

C). Reactivos
Reactivo de tromboplastina calcica con indice de sensibilidad (ISI)

Solujcin Salina Isotnica
Papel milimtrico
PROCEDIMIENTO:
1 Todas las muestras se deben de realizar siempre por duplicado

2 Antes de transcurridos 30 min de la extraccin, centrifugaqr la sangre a 750m rpm,
durante 5 min
3 Separar el plasma y conservarlo en refrigeracin hasta su proceso
4 Procesar simultneamente un testigo normal del da
5 Poner en cada tubo 0.1 ml de plasma citratado. Incubar 2 min.
6 Agregar 0.1 ml de reactivo de tromboplastina. ( Previamente el reactivo se
empieza a marcar el tiempo de formacin del cogulo
7 Agitar y reposar 8 seg. Observar la formacin del cogulo.
8 Calcular el porcentaje de actividad usando la curva de calibracin realizada
previamente en el msmo laboratorio
9 Convertir el resultado en Indice Normalizado internacional ( internacional
normalizad Ratio, INR) como ms adelante se explica
10 Debido a que se calcular el porcentaje de actividad de protrombina en la muestra
problema, comparada con un normal con actividad 100%, es necesario hacer
previamente una curva de coagulacin
CURVA DE CALIBRACIN
1. Obtener sangre en un tubo con citrato de sodio, de 5 6 personas normales

2. Centrifugar las muestras a 750 rpm, durante 5 min
3. Tomar de 1.5 a 2 ml de cada plasma y mezclarlos en un tubo de ensayo
4. Preparar una serie de tubos de la siguiente manera
Tubo Mezcla de Solucin Salina Porcentaje de

Plasmas (ml) Isotnica Actividad (%)
1 1.0 0.0 100
2 0.9 0.1 90
3 0.8 0.2 80
4 0.7 0.3 70
5 0.6 0.4 60
6 0.5 0.5 50
7 0.4 0.6 40
8 0,3 0.7 30
9 0.2 0.8 20
10 9.1 0.9 10

5. Realizar a cada tubo un tiempo de protrombina por duplicado, la diferencia entre

ambos tubos debe ser inferior a 0.5 seg en caso contrario se deber repetir la prueba
6. Promediar los tiempos obtenidos por cada par de tubos y graficar en papel milimetrico
o logaritmico ( %/tiempo) resultando una recta o una parbola, respectivamente. En
ningun caso es valido calcular el % de actividad obteniendo un factor de calibracin
por regla de tres con el tiempo del testigo normal.
INDICE NORMALIZADO INTERNACIONAL
Considerando que el resultado de la medicin del tiempo de protrombina se expresa en %

de actividad del plasma normal y que el tiempo obtenido para este depende directamente
de la sensibilidad de la tromboplastina utilizada, era muy difcil comparar los resultados
obntenidos en laboratorios distintos o aun en el mismo laboratoriocon lotes diferentes de
reactivos . Esto dificultaba mucho la valoracin de la terapia anticoagulante. Por tal
motivo la Organizacin Mundial de la Salud adopt un sistema de estandarizacin
Internacional del tiempo de protrombina que faciliatar la interpretacin de los tiempos de
protrombina y que reportar resultados comparables en todo el mundo.
Para ello, fue indispensable que los fabricantes de las tromboplastinas estandarizarn la
sensibilidad del reactivo y que en cada lote se identifique sta como Indice de
Sensibilidad Internacional (ISI)
Para calcular el INR es indispensable calcular primero el Indice de protrombina (IP) que
es la relacin que existe entre entre el tiempo de protrombina del paciente y el del plasma
normal o testigo del da
IP = tiempo de protrombina del paciente

tiempo de protrombina del testigo normal
INR = ( Indice de prtotrombina) ISI
Generalmente, para facilitar esta tarea, la mayora de los reactivos comerciales ya incluye
una tabla de conversin para obtener el INR, sin necesidad de hacer los calculos.
VALORES DE REFERENCIA
Normal ( No anticoagulados ) % de Actividad 70 - 100 %

INR = 1 2

Se sugiere reportar de la siguiente manera:
Testigo del da = X Segundos

Plasma problema= X Segundos
% de Actividad = x %
INR = X
VALOR NORMAL: Depende de la tromboplastina empleada.

Se compara siempre con el testigo
BIBLIOGRAFIA:

Interamericana.
Moderno
moderno
Interamericana.
Moderno
moderno

PRACTICA 16
TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADO.
( TTPa )
FUNDAMENTO:
El reactivo para realizar ste TTPa es una tromboplastina parcial (
fosfolpidos) adicionado con un activador de contacto (caoln, celite, stc). Por lo
cual se le llama activado.
Se activa la coagulacin a travs de la VIA INTRINSECA., por lo cual

decimos que el TTPa mide en forma indirecta todos los factores involucrados en
la VIA INTRINSECA.
OBJETIVOS:
1 Identificar la utilidad clnica de la medicin del tiempo de tromboploastina parcial

activada.
2 Describir el fundamento del mtodo
3 Ejecutar correctamente la prueba
EQUIPO:
Coagulmetro (optico o mecnico)

Bao maria
Centrfuga
1 Cronmetro
MATERIAL:
A). Biolgico
Sangre obtenida con Citrato de sodio 0.1 M
B). De laboratorio
Tubos de ensayo 10x75 mm

Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
2 Pipetas de 0.2 ml
Gradilla

Pipeta pasteur
C). Reactivos
Reactivo de tromboplastina parcial lquida activada

Cloruro de calcio 0.02 M
Citrato de sodio 0.1 M
PROCEDIMIENTO:
1 Todas las muestras se deben de realizar siempre por duplicado

2 Antes de transcurridos 30 min de la extraccin, centrifugaqr la sangre a 750m rpm,
durante 5 min
3 Separar el plasma y conservarlo en refrigeracin hasta su proceso
4 Incubar a 37 o C el reativo suficiente de cloruro de calcio y tromboplastna parcial
5 Incubar 0.1 ml de plasma citratado por 1 min
6 Agregar 0.1 ml de reactivo de tromboplastina parcial activado.
7 Agitar. Incubar 2-5 min. Segn el fabricante.
8 Agregar 0.1 ml de CaCl2 0.025 M.
9 En el momento de Agregar el calcio se empieza a marcar el tiempo de formacin
del coagulo.
10 Agitar y reposar 30 seg. Observar hasta la formacin del coagulo.
25 40 Segundos Depende de la tromboplastina empleada.

Se compara siempre contra el testigo.

BIBLIOGRAFIA:

Interamericana.
Moderno
moderno
Interamericana.
Moderno
moderno


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UNIVERSIDAD

Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 1

OBTENCION DE MUESTRAS SANGUINEAS

SANGRE CAPILAR O PERIFERICA.

Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 2

Al terminar la prctica, el alumno ser capaz de:

1. Justificar la indicacin de los metodos de obtencin de muestras

2. Obtener correctamente muestras capilarews y venosas de calidad

Hay varios modelos de lancetas.Se recomienda el uso de lancetas u hojas

Antes de realizar la venopuncin, verifique que cuenta con el siguiente material:

a) Todos los tubos correctamente identificados.

Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 3

2. Aplique el torniquete si es necesario y limpie el sitio seleccionado para la venopuncin con

3.1 Una vez que el primer tubo se ha llenado en su totalidad, retrelo.

Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 4

Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 5

a) Confirme la posicin correcta de la aguja en la vena.

Si la aguja no est completamente en la vena, empuje ligeramente el soporte.

Si la aguja ha pasado a travs de la vena, jale ligeramente el soporte.

Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 6

METODO "HUMEDO" EN TUBO:

Al terminar la prctica, el alukmno ser capaz de:

Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 7

Azul de cresil brillante 1.0 g

Mezclar, disolver, filtrar y conservar en el refrigerador en frasco mbar.

Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 8

ADULTOS 0.5 - 1.5 %

NIOS (R.N.) 100 000 - 250 000/ mm3

Terminada la practica se obtuviern los siguientes resulltados:

Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 9

Al terminar la prctica, el alumno ser capaz de:

1. Identificar la importancia y utilidad clnica de la cuantificacin de hemoglobina

Pipeta de Sal con boqui

Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 10

Cianuro de potasio 0.050 gr.

La solucin debe ser transparente y colocada en frasco de vidrio obscuro

CURVA DE CALIBRACION DE HEMOGLOBINA.

Principio qumico: El reactivo de drabkin, en donde se emplea una solucin de

PATRON DE HEMOGLOBINA.- Hay varios tipos comerciales recomendables como

PARA VOLUMEN DE 5 mL:

1.- Marcar 6 tubos de ensaye y pipetear de acuerdo a la siguiente tabla:

Conc. De Hb (g/dL) Blanco 4.0 8.0 12.0 16.0 20.0

Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 11

UN FACTOR DE CALIBRACION SE OBTIENE DE LA SIGUIENTE MANERA:

F = Concentracin del estndar

Una vez obtenido ste, la concentracin de hemoglobina en una mujestra se obtiene de la

[Hemoglobina] = Absorbancia x Factor

PROCEDIMIENTO PARA LA DOSIFICACION DE HEMOGLOBINA:

VALORES DE REFERENCIA NORMALES:

El tiempo requerido para que la muestra se convierta en cianometahemoglobina

Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 12

Despus de realizar la prctica se pueden hacer las siguientes consideraciones:

a). Curva de calibracin

b).- Muestras sanguneas

1- RUIZ ARGUELLES, G. I. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGIA. ED. PANAMERICANA

Dra en Ciencias Consuelo Chang Rueda 13

VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR

1) Formacin de grumos (pilas de monedas): Es el factor que ms aumenta la

2) La concentracin del fibringeno del plasma: La tasa del fibringeno es

3) Concentracin de globulinas alfa y beta: Aumenta su proporcin en el plasma

Hay tres etapas en el proceso de la velocidad de sedimentacin:

a).- El perodo inicial, de pocos minutos, con la formacin de pilas de monedas.

b).- Perodo de 1 a 2 hrs. durante las cuales la sedimentacin ocurre a velocidad ms