UNIVERSIDAD

NACIONAL UNIVERSIDAD
MAYOR NACIONAL
DE NACIONAL
SAN MARCOS MAYOR DE SAN MARCOS
MAYOR DE SAN
DECANAUniversidad
idad del Per,UniversidadDE MARCOS
AMRICAdel Per, DECANA DE AMRICA
del Per, DECANA DE AMRICA
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA
TAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
Creada delPROFESIONAL
ESCUELA ACADMICO 29 de OctubreDE
de 1943
FARMACIA Y BIOQUMICA
ada del 29 de Octubre de 1943
Estudio fitoqumico de los metabolitos secundarios
presentes en los extractos metanlicos en hojas y
tallos de Apium graveolens var. Rapaceum, DC. de
Tarma, Junn.
INTEGRANTES:
Gutirrez Serrano, David Gustavo.
Haro Calvo, Jorge Andr.
Salvador Villanueva, Magaly Ljubisa.
Tapia Baez, Ysamar Audy.
Terrazos Ramos, Shelby Akira.
 Determinar los metabolitos secundarios
presentes en tallos y hojas de Apium graveolens
var. Rapaceum, DC. de Tarma, Junn.

Preparar la muestra de estudio: tallo y hojas de

Apium graveolens var. Rapaceum, DC.
Obtener el extracto metanlico de tallo y hojas de
Apium graveolens var. Rapaceum, DC.
Detectar, aislar y elucidar la estructura qumica
de los compuestos fenlicos presentes en tallo y
hojas de Apium graveolens var. Rapaceum, DC.
Apium graveolens Antimicrobiana
var. Rapaceum

Antifngico

Familia Apiaceae

Antiinflamatoria

Zonas
Origen templadas del
hemisferio ACTIVIDADES Hepatoprotector
Norte

Anticancergeno

Raz Tronco Hojas

Antihipertensivo
Suculento Blanco Oblongas a
Desarrollado Suave obovadas
Trifoliadas Sedante
 Reactivos y solventes
Materiales Equipos
qumicos
Material biolgico -Estufa Mermet -Metanol
Hojas y tallo de Apium -Campana extractor de -Etanol
graveolens var. Rapaceum, DC gases -Agua destilada
-Alcohol 96
Materiales de -Balanza analtica Sartorius
-Cloroformo
laboratorio TE 1502S -Diclorometano
-Beakers -Revelador de luz UV Cole
-Baguetas -Agua
-Portalminas parmer MO2-0955 -Tolueno
-Viales -Equipo de filtracin al -Acetato de etilo
-Papel Kraft
-Cuchillos vaco Con Autotran -Acetona
-Frascos de vidrio de color oscuro Sformodor (220v) -Ninhidrina
-Mortero y piln
-Gelatina
-Embudos
-Algodn -Tricloruro frrico
-Matraces -Draguendorff
-Probetas
-Mayer
-Platos
-Placas Petri -NaOH Bortranger
-Soporte universal -Lieberman
-Tubos
-Shinoda (Mg + HCl)
-Gradillas
-Esptula -Molish + H2SO4
-Placa de toques -Silicagel
-Cuba cromatogrfica
 LIMPIEZA Y SECADO

RECOLECCIN
DE LA
MUESTRA
Fig 01. Muestra de Apium Fig 02. Hojas de Fig 03. Tallos de
graveolems Apium graveolems Apium graveolems

Lugar: Tarma,
Junn, 230 km al
este de Lima.

Fig 04. Hojas y tallos de Apium Graveolens contenidas en chartulas.

MOLIENDA Y ALMACENAJE

Fig 05. Pesado de hojas Fig 06. Rotulado de hojas Fig 07. Molienda de tallos Fig 08. Pesada de las tallos
trituradas de Apium trituradas de Apium de Apium graveolens secas de Apium graveolens
graveolens graveolens
 ESTUDIO FITOQUMICO
Maceracin
Marcha de solubilidad
220 ml

1 2 3 4 5 6 7 8
700 ml
Fig 10. Maceradas de tallo
Fig 09. Macerado de hojas de
de Apium graveolens
Apium graveolens

Filtracin y preparacin del extractos

Fig 16. Hojas solubilizados en (de izquierda a derecha). 1.
Tolueno. 2. Acetato de etilo. 3. Acetona. 4. Diclorometano.
5. Cloroformo. 6. Metanol. 7. Etanol. 8. Agua

Fig 11. Filtracin del Fig 12. Filtrado de hojas Fig 13. Filtrado hojas
1 2 3 4 5 6 7
de Apium graveolens en de Apium graveolens 8
macerado de hojas de
Apium graveolens la estufa en la placa Petri.

Fig 17. Tallos solubilizados en (de izquierda a derecha). 1.

Tolueno. 2. Acetato de etilo. 3. Acetona. 4. Diclorometano.
Fig 14. Filtrado de races de Fig 15. Extracto races de 5. Cloroformo. 6. Metanol. 7. Etanol. 8. Agua
Apium graveolens en la estufa Apium graveolens en
placa Petri.
 Marcha Fitoqumica

Fig 18. Reactivo de ninhidrina Fig 19. Gelatina en hojas Fig 20. Reactivo de tricloruro frrico
en hojas (der.) y tallos (izq.) (der.) y tallos (izq.) en hojas (der.) y tallos (izq.)

Fig 21. Reactivo Dragendorff Fig 22. Reactivo Mayer en tallos Fig 23. Reactivo de NaOH Bortranger
en hojas (izq.) y tallos (der.) (izq.) y hojas (der.) en hojas (der.) y tallos (izq.)

Fig 24. Reactivo de Shinoda en Fig 25. Reactivo de Molish + H2SO4 Fig 26. Reactivo
hojas (der.) y tallos (izq.) en hojas (der.) y tallos (izq.) Lieberman en tallos.
 ESTUDIO CROMATOGRFICO

Cromatografa en capa fina Cromatografa en columna rpida

Sistema de solvente: Diclorometano- Metanol (3:1)

Fig 29. Sistema utilizado para Fig 30. Agregado de

la cromatografa en columna. la muestra de hojas.

Restitucin de muestras

Fig 27. Lectura en revelador de onda Fig 28. Lectura en el revelador de

corta. Hojas (izq.) y raz (der.). onda larga. Hojas (der.) y raz (izq.).
Fig 32. Subextracto de
Fig 31. Subextracto de hojas (izq.) y races en
races en agua. cloroformo (der.).
 ESTUDIO FITOQUMICO II

Subextracto metanlico Subextracto clorofrmico

1 2 3 4
5 6 7 3 4 5 6
1 2

Fig 33. Marcha fitoqumica de extracto restituido Fig 35. Hojas solubilizados en (de izquierda a
de tallo con metanol (izquierda a derecha).1. derecha). 1. Ninhidrina 2. Gelatina 3. Tricloruro
Gelatina. 2. Ninhidrina. 3. Cloruro frrico (FeCl3). frrico 4. NaOH Bortranger 5.Shinoda
4. Shinoda. 5. Molish. 6. Bortranger. 7. Lieberman. 6.Molish+H2SO4

1 2 4 3
3 5 6 7 2 4 5 6
1

Fig 34. Marcha fitoqumica de extracto restituido de hojas

con metanol (izquierda a derecha).1. Gelatina. 2. Fig 36. Tallos solubilizados en (de izquierda a
Ninhidrina. 3. Cloruro frrico (FeCl3). 4. Shinoda. 5. derecha). 1. Ninhidrina 2. Gelatina 3. Tricloruro
Molish. 6. Bortranger. 7. Lieberman. frrico 4. NaOH Bortranger 5.Shinoda
6.Molish+H2SO4
 ESTUDIO CROMATOGRFICO II
Subextracto acuoso

1 2 3 4 5 6

Fig 37. Marcha fitoqumica de extracto restituido de

hojas con agua (izquierda a derecha).1. Gelatina. 2.
Ninhidrina. 3. Cloruro frrico (FeCl3). 4. Shinoda. 5.
Molish. 6. Lieberman.

5 6
1 2 3 4

Fig 39. Placa Fig 40. Placa

cromatogrfica de extracto cromatogrfica de extracto
Fig 38. Marcha fitoqumica de extracto restituido de de hoja en metanol en onda de tallo en agua en onda
tallos con agua (izquierda a derecha).1. Gelatina. 2. larga larga
Ninhidrina. 3. Cloruro frrico (FeCl3). 4. Shinoda. 5.
Molish. 6. Lieberman.
 Cromatografa en capa fina a escala preparativa

10

13 14
10
9 12
9 11

8 10
8
9
7
8
6 6 7
7

5 6

4 5 5

4
4

3
3
2
3
2
1
2

1 1

Fig 41. Placa cromatogrfica

banda de extracto de tallo en Fig 42. Placa Fig 44. Placa
metanol cromatogrfica en banda cromatogrfica en banda de
Fig 43. Placa cromatogrfica en
de extracto de hoja en extracto de tallo en agua (14
banda de extracto de hoja en
metanol (10 manchas) manchas)
agua (10 manchas)
ELUCIDACIN ESTRUCTURAL EN UV

Fig 45. Preparacin de muestras para el anlisis instrumental

 Marcha de solubilidad

RACES HOJAS

Tolueno + +
Acetato de etilo + +
Acetona + +
Diclorometano + +
Cloroformo + +
Metanol + +++
Etanol + +++
Agua +
 Marcha Fitoqumica

GRUPO QUE REACCION A

REACTIVO HOJAS TALLOS
RECONOCE OBSERVAR

Ms oscuro Ms claro
NINHIDRINA AMINOCIDOS VIOLCEO
+++ +++
GELATINA TANINOS PP. BLANCO +++ +++
TRICLORURO COMPUESTOS AZUL Y VERDE
FRRICO FENLICOS NEGRO
+++ +++

DRAGENDORFF ALCALOIDES PP ROJO LADRILLO +++ +++

MAYER ALCALOIDE PP BLANCO + +++

Na OH
BORTRANGER
QUINONAS ROJO + ++

TERPENOS Y
LIEBERMAN
ESTEROIDES
GRIS +++ +++

SHINODA(Mg COLOR ROJO

+HCl)
FLAVONOIDES
ROSADO
++ ++

MOLISH + Ac. Sulf. GLICSIDOS ANILLO VIOLCEO ++ ++

 Marcha Fitoqumica

Subextracto clorofrmico
Subextracto metanlico
REACTIVO HOJAS TALLOS

GRUPO QUE
REACCION Ninhidrina - -
REACTIVO A TALLOS HOJAS
RECONOCE
OBSERVAR Gelatina ++ +++
GELATINA TANINOS PP. BLANCO +++ ++ Tricloruro frrico +++ ++
- Dragendorff - -
NINHIDRINA AMINOCIDOS VIOLCEO -
Mayer ++ +++
TRICLORURO COMPUESTOS Verde/Marrn
NaOH Bortranger - -
++ +++
FRRICO FENLICOS oscuro/Azul
Shinoda - -
Molish + H2SO4 ++ +++
SHINODA(Mg COLOR ROJO
+HCl)
FLAVONOIDES
ROSADO - +
Subextracto acuoso
MOLISH + Ac. ANILLO REACTIVO TALLOS HOJAS
Sulf.
GLICSIDOS
VIOLCEO + ++
GELATINA +++ +++
Na OH NINHIDRINA + +
BORTRANGER
QUINONAS ROJO - -
TRICLORURO
FRRICO
+++ ++
SHINODA(Mg
LIEBERMAN
TERPENOS Y
ESTEROIDES
GRIS - + +HCl)
- -
MOLISH + Ac. Sulf. +++ ++
DRAGENDORF PP ROJO Na OH
F
ALCALOIDES
LADRILLO - - - -
BORTRANGER

MAYER ALCALOIDES PP BLANCO +++ ++

DRAGENDORFF - -
MAYER ++ -
 ELUCIDACIN ESTRUCTURAL EN UV

Fraccin 2. Lecturas en
el espectro UV-visible:
: 280,360 nm
Fraccin 1. Lecturas en el
espectro UV-visible:
: 275,325 nm

Fig 47. Espectroscopa UV. Visible del segundo analito

Fraccin 3. Lecturas en
el espectro UV-visible:
: 268,330 nm

Fig 46. Espectroscopa UV. Visible del primer

analito

Fig 48. Espectroscopa UV. Visible del tercer analito

 Los compuestos fenlicos encontrados en el subextracto metanlico fueron taninos,
flavonoides, esteroides, glicsidos y alcaloides para este ensayo todas las reacciones fueron
positivas.
Compuestos fenlicos, se agreg gotas de cloruro frrico.
Reconocimiento de flavonoides, se realiz la prueba de Shinoda, que consiste en agregar
Mg metlico y gotas de HCl.
Para el reconocimiento de taninos, se procedi a agrego el reactivo gelatina.
Para reconocer esteroides, se utiliza el reactivo de Lieberman el cual si aparece una
coloracin verde o azul verdosa o gris indica la presencia de un ncleo esteroidal o
triterpenoidal.
Reconocimiento de glicsidos, se utiliz el reactivo de Molish, se utiliza como reactivo una
disolucin de -naftol al 5% en etanol de 96.
En el anlisis de alcaloides, la reaccin de Mayer (yoduro de mercurio y potasio) fue
positiva, observndose un precipitado blanco inmediato. En la prueba con el reactivo de
Dragendorff 8g (Bi (NO3)3). 5H20/ 20ml HNO3 + 27,2 g KI / 50 ml H20) se obtuvo
resultados positivos para alcaloides.
La reaccin con ninhidrina se da para la identificacin de aminocidos aqu la ninhidrina
descarboxila y desamina al aminocido gracias a su fuerte poder oxidante la ninhidrina
reducida formada reacciona con una molcula de ninhidrina no reducida y con el
amoniaco resultante de la desaminacion para formar un compuesto complejo que presenta
coloracin violeta.
En la cromatografa en capa fina puede realizarse utilizando silicagel y sistemas de
solventes como benceno: acetato de etilo: acetona (1:2:2)35 .
 En los ensayos de solubilidad
realizados se observ que el
extracto metanlico tanto de tallos
como el de hojas eran poco solubles
en acetona, por lo cual se decidi 5,6,7-trihidroxi-4-metoxiflavona
realizar ensayos con metanol y con
clorometano para obtener as un
solvente adecuado.
Se procedieron a leer 3 analitos que
pertenecan al subextracto de hojas
en metanol, mediante la tcnica de 5,7,8-trihidroxiflavonol
espectroscopia UV visible:
obtuvieron los respectivos espectros;
que al ser comparadas con los
espectros de Mabry TJ. et al en el libro
The Systematic Identification of
Flavonoids. se propone la estructuras
qumica correspondiente a 5-hidroxiflavona
flavonoides:
La figura A es una flavona.
La figura B es un flavonol.
La estructura C es una flavona.
 Se detect la presencia de los metabolitos
secundarios tipos flavonoides, taninos y
glicsidos en las muestras de tallos y hojas.
Se elucid tres estructuras las cuales fueron
5, 6, 7- trihidroxi-4 - metoxiflavona; 5, 7, 8-
trihidroxiflavonol; 1. 5-hidroxiflavona en el
extracto metanlico de hojas Apium
graveolens var. Rapaceum, DC.
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