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BIOQUMICA
GUA DE PRCTICAS
SEGUNDO AO
2017-II
1
INTRODUCCIN
El alumno debe cumplir con los objetivos planteados al final de cada prctica.
As mismo debe presentar su gua de prctica terminada la misma.
PROGRAMACIN DE CONTENIDO
2
SEMANA N 1
INTRODUCCION
NORMAS PERSONALES
1. Lea con atencin, antes de cada prctica, las indicaciones de su gua. Siga
todas las instrucciones a menos que el profesor realice alguna
modificacin.
2. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su
material. Se trabajar con cuidado y de manera organizada. As mismo se
mantendr cada mesa de trabajo limpia, seca y ordenada.
3. Es obligatorio la utilizacin de mandil que le cubra brazos, piernas, torso y
pies. Estn prohibidos el uso de sandalias, pantalones cortos, faldas, polos
cortos, etc. en el laboratorio. La persona inapropiadamente vestida para
trabajar en el laboratorio le ser negado el ingreso.
4. No deben llevarse las manos a la boca ni a la cara pues pueden estar
contaminadas.
5. Si tienes el pelo largo, es conveniente que lo lleves recogido.
6. Est terminantemente prohibido fumar, tomar bebidas ni comidas.
7. En caso de derrame, accidente o dao avise inmediatamente al profesor.
8. Al trmino de cada prctica limpiar el rea de trabajo y lavar los materiales
utilizados con agua de cao. Lavarse las manos meticulosamente con agua
3
y jabn. Finalmente cerciorares que las llaves de gas y agua estn
cerradas.
REACTIVOS QUIMICOS
MATERIAL DE VIDRIO
4
2 El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio fro. Para evitar
quemaduras use guantes o trapos.
3 Si tienes que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo,
observa cuidadosamente estas dos normas:
-Ten sumo cuidado y ten en cuenta que la boca del tubo de ensayo no
apunte a ningn compaero. Puede hervir el lquido y salir disparado, por lo
que podras ocasionar un accidente.
-Calienta por el lateral del tubo de ensayo, nunca por el fondo; agita
suavemente (mira la figura).
EQUIPOS ELCTRICOS
1 Manipule cualquier equipo elctrico con las manos secas y asegrese que el
rea de trabajo tambin este seca.
2 Ningn cordn electrifico debe colgar fuera de la mesa de trabajo.
3 Cuando desconecte algn equipo de tomacorriente, jlelo por el enchufe
y no por el cordn.
UTILIZACION DE BALANZAS
MANIPULACIN DE ESPECMENES
1 Manipule los microorganismos crecidos en una placa petri o tubo de cultivo
con extremo cuidado. Siempre utilice tcnicas de esterilidad (a la llama del
mechero, guantes, palillos estriles, etc.).
2 Nunca llevar a la boca plantas o partes de ellas como semillas, frutos y
hojas.
5
Agentes patgenos que pueden provocar enfermedades humanas o animales
pero que tienen pocas probabilidades de entraar un riesgo grave para el
personal de laboratorio, la poblacin, el ganado o el medio ambiente. La
exposicin en el laboratorio puede provocar una infeccin grave, pero existen
medidas preventivas y teraputicas eficaces y el riesgo de propagacin es
limitado.
BARRERAS DE CONTENCION
Los laboratorios presentan diversas barreras de contencin que previenen el
escape y dispersin de agentes biolgicos de riesgo.
6
Barrera qumica: Son dispositivos o sistemas que protegen al operador del
contacto con substancias irritantes, nocivas, txicas, corrosivas, lquidos
inflamables, sustancias productoras de fuego, agentes oxidantes y sustancias
explosivas. En este caso se recomiendan una cabina de seguridad qumica.
NIVELES DE BIOSEGURIDAD
7
Nivel de Bioseguridad IV: Es aquel que corresponde a las actividades
desarrolladas en el laboratorio de contencin mxima. Este nivel es el que se
utiliza para trabajar con agentes biolgicos clasificados en el grupo de riesgo IV
por representar un alto riesgo individual de contagio y que adems son un
riesgo para la vida. Los agentes nuevos que presentan caractersticas
antignicas, patognicas u otras similares a agentes de nivel III y IV son
confinados a nivel IV hasta que exista suficiente informacin cientfica para
establecer a cual grupo de riesgo pertenecen.
El personal que trabaja en los laboratorios de nivel IV tiene entrenamiento
especfico y extensivo en el manejo de agentes infecciosos, y cuenta con
entrenamiento para trabajar en el ambiente estril y controlado. El laboratorio
cuenta con un diseo y caractersticas especiales tendientes a proteger al
operador y al ambiente. Todos los materiales son manipulados utilizando
vestimenta y equipo de proteccin de caractersticas superiores a las exigidas
para el trabajo en un laboratorio de nivel III. Los trajes estn diseados para
cubrir la totalidad del cuerpo, presentan un sistema de respiracin individual
asociado y una leve sobrepresin interna para evitar as la entrada accidental
de partculas infecciosas. Los laboratorios se mantienen con una presin de
aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los agentes nocivos escapen al
ambiente.
TIPOS DE LABORATORIOS
En relacin con el grado de riesgo los laboratorios combinan las caractersticas
de diseo, construccin, medios de contencin, equipo, prcticas y
procedimientos de operacin necesarios para trabajar con agentes patgenos
de los distintos grupos de riesgo. De esta manera los laboratorios se clasifican
en 3 categoras:
Laboratorio bsico: Dividido en dos grupos, el de nivel de bioseguridad 1;y el
de nivel de bioseguridad 2;
Laboratorio de contencin: con nivel de bioseguridad 3, y
Laboratorio de contencin mxima: con nivel de bioseguridad 4.
PRCTICA GUIADA N 1
8
1.- complete el recuadro :
9
PRACTICA N I.2 SEMANA N 3
INSTRUMENTACIN: CENTRIFUGACION
P
rocedimiento por el cual se aplica la FUERZA CENTRFUGA para
separar partculas que se encuentran en suspensin en un medio
lquido. El incremento de la fuerza centrifuga condicionar que las
partculas migren alejndose del eje de rotacin de la centrifuga. El
proceso migratorio de las partculas se denomina sedimentacin y la velocidad
con que sedimentan es proporcional a la fuerza centrifuga expresada como
incrementos de la gravedad (G).
La constante gravitatoria es proporcional a la velocidad de giro del rotor
soporte del medio que se centrifuga y del radio del mismo. El radio del rotor
de la centrifuga depende si sta es del tipo ngulo fijo o flotante. En el primer
caso es un promedio entre el radio mnimo y el mximo, y en el segundo es la
distancia entre fondo del tubo y el eje.
10
Para evaluar con certeza la capacidad de una centrfuga para separar los
componentes celulares debemos manejar gravedades en lugar de revoluciones
por minuto, por lo que frecuentemente usamos el nomograma de Dole y Cotziar
que presentamos a continuacin.
Suspender el tejido al 10%
Homogenizar en Potter E.
Centrifugar a 600g x 10
Centrifugar el sobrenadante
a 4000g x 15
Sedimento:
mitocondrias
Centrifugar el sobrenadante
a 16 500g x 15
Sedimento:
lisosomas
Centrifugar el sobrenadante
a 100 000g x 40
Sedimento:
microsomas
Sobrenadante: citosol
TIPOS DE CENTRIFUGACIN
11
La gradientes pueden ser discontinuas preparadas mediante la colocacin de
soluciones de diversa densidad una sobre otra- y continuas preparada
mediante un equipo de mezcla de soluciones, que va incrementando la
densidad progresivamente.
12
PORTATUBOS
Son de plstico o de metal y poco resistente a cidos y bases fuertes. Deben
ser conservados muy limpios.
INSTRUMENTACIN: COLORIMETRIA
Es el anlisis de la concentracin de una muestra por el color que presenta.
Todos hemos tenido la experiencia de valorar la concentracin de sustancias
coloreadas en solucin, por observacin directa, una taza de caf o t, un vaso
de refresco, son apreciados de esa manera. El examen se funda en la mayor o
menor absorcin de luz de acuerdo al mayor nmero de molculas y tonalidad
depender de la capacidad de absorber una u otra longitud de onda de luz,
especficamente. La fotocolorimetra manipula las variables de este fenmeno
controlando la luz incidente proveniente de un foco luminoso y su pureza, de
modo tal que slo incida aquella luz que es especficamente absorbida por la
partcula que medimos. 450nm
Rayos X 540nm Microondas:
1nm a 1pm 640nm 25um a 1mm
13
distinto nivel de energa, y para excitar los electrones de cada partcula
necesitamos un particular nivel de energa.
Si consideramos que cada molcula absorbe luz de acuerdo a la concentracin
en que se encuentre dentro de la solucin, a mayor absorcin de luz y menor
luz trasmitida. Estos factores estn considerados en la ley de Lambert y Beer.
FOTOCOLORIMETRIA ESPECTROFOTOMETRIA
14
Luz Incidente Io Luz trasmitida It
Monocromador Celda
15
1. Factor de Calibracin
2. Curvas de calibracin
DOP= eP lP cP
DOst CS
=
DOp CP
PARTE EXPERIMENTAL
16
Construir dos curvas de calibracin, una en papel milimetrado y otra en papel
semilogartmico.
Tubo N
Contenido 1 2 3 4 5
mL Azul metileno al (5 mg/mL) 2 4 6 8 10
mL Agua destilada 8 6 4 2 0
Desconocido 1
Desconocido 2
1.40
1.20
Abs (540 nm)
1.00
0.80
0.60
0.40
0.20
0.00
0 1 2 3 4 5 6 7
Concentracin (mg/mL)
COMENTARIO
...
Usando los valores obtenidos en % de trasmitancia, grafique usando el papel
semilogartmico de esta pgina.
17
100
80
% T (540 nm)
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5 6 7
Concentracin (mg/mL)
COMENTARIO
INSTRUMENTACIN: POTENCIOMETRIA
La potenciometra es el procedimiento de eleccin para la medida del pH. El pH
en una expresin numrica que corresponde al logaritmo de la inversa de la
concentracin de iones H+. La potenciometra se basa en la diferencia de
potencial (voltaje) entre dos electrodos, el de medida y el de referencia, ambos
sumergidos en la solucin y bajo condiciones de equilibrio.
El instrumento consta de un ELECTRODO DE REFERENCIA que se mantiene
constante durante la medida, un ELECTRODO DE MEDIDA que varia de
acuerdo a la concentracin de hidrgeno de la solucin y un dispositivo o
potencimetro que mide la diferencia de potencial. El electrodo de referencia
puede ser de dos clase: de calomel, mercurio metlico y cloruro mercurioso y
18
de plata plata y cloruro de plata. El potencial de ese electrodo depende de la
solucin de cloruro de potasio en que est sumergido internamente.
El electrodo de medida, es tambin llamado electrodo de vidrio, est constituido
por un tubo de vidrio cuyo extremo es particularmente selectivo al paso de
iones hidrgeno. En su interior hay cido clorhdrico HCl 0,1 M y un alambre de
plata, cloruro de plata,
Batera
0V 1V
PARTE EXPERIMENTAL
19
Se trata de determinar el pH de un grupo de tubos con varios niveles de
titulacin de cido actico con hidrxido de sodio. Cuando se titula un cido
dbil con una base fuerte se produce un aumento de pH inicialmente rpido
para luego hacerse lento, dentro de ciertos mrgenes y al final se alcaliniza
rpidamente. La identificacin del cambio de pH en cierto perodo de la
titulacin, se debe a la formacin transitoria de una combinacin de cido dbil
y la sal correspondiente. En el caso del experimento ser la combinacin de
cido actico y acetato de sodio y son los componentes ordinarios de una
solucin amortiguadora o solucin buffer.
Para la experiencia preparar 11 tubos de acuerdo al siguiente esquema:
14
13
12
11
10
9
8
pH
7
6
5
4
3
2
1
0
4 5 6 7 8 9 10 11 12
Volumen (mL)
20
COMENTARIO
CINETICA ENZIMATICA
Las enzimas son protenas que aceleran las reacciones qumicas hasta su
punto de equilibrio.
E + S ES E+P
C C
Desaparicin de sustrato
Formacin de producto
Modificacin de cofactor
pH
Temperatura
Concentracin de sustrato
Concentracin de enzima
Tiempo de incubacin
21
En nuestra prctica observamos el efecto de la pepsina sobre la albmina del
huevo. La actividad enzimtica se apreciar por la prdida de la turbidez
proteica. La actividad enzimtica reportar en funcin del % de formacin de
producto par ello hacer uso de la siguiente ecuacin:
% Formacin de producto (FC) = 100 (Abs tubos/Abs albmina)*100
Donde: Abs tubo = Absorbancia de los tubos despus del incubado.
Abs albmina = Absorbancia de la albmina (Abs = 0.995)
El pH acta sobre los grupos ionizados que pertenecen a los centros activos
de las enzimas. Los grupos que pierden la ionizacin pierden la capacidad de
interaccionar con el sustrato. Cada enzima tiene un pH ptimo de trabajo.
TUBO N 1 2 3 4 5
pH 1,0 1,5 6,0 9,5 11
mL albmina 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0
mL HCL 1N 2,0 0,5 0,0 0,0 0,0
mL CO3Na2 0,0 0,0 0,0 0,5 2,0
mL agua destilada 0,0 1,5 2,0 1,5 0,0
TUBO N 1 2 3 4 5
mL albmina 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0
mL HCL 1N 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
mL agua destilada 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5
TUBO N 6 7 8 9 10
mL pepsina 1% 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
22
Incubar por 5 minutos de acuerdo al siguiente esquema de temperatura:
Agregar los respectivos tubo N 6 al N 10 a los que hay que incubar a las
temperaturas a que se pre-incuban los tubos 1 5.
TUBO N 1 2 3 4 5
mL albmina 5,0 5,0 5.0 5,0 5,0
mL HCL 1N 0,5 0,5 0.5 0,5 0,5
mL agua destilada 1,5 2,5 3.5 4,0 4,5
mL pepsina 0,0 0,0 0.0 0,0 0,0
TUBO N 1 2 3 4 5
mL pepsina incubada 3,0 2,0 1,0 0.5 0,1
TUBO N 1 2 3 4 5 6
mL albmina 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0
mL HCL 1N 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
mL agua destilada 7,0 6,0 5,0 4,0 3,0 2,0
23
mL pepsina 1% 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
Leer a 420 nm (filtro azul). Anotar los resultados: incubar a 37C. Colocar 0,5
mL que pepsina pre-dirigida. Incubar por otros 5 minutos a 37C. Leer al
fotocolormetro a 420 nm (filtro azul). Restar la segunda lectura de la primera.
Graficar y comentar los resultados.
% Formacin producto
80
80
60
60
40
40
20
20
0 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0 20 40 60 80 100
pH Temperatura (C)
Comentario: Comentario:
100 100
80 80
60 60
40 40
20 20
0 0
0 2 4 6 8 10 12 0 1 2 3 4 5 6
Concentracin enzima (mg/mL) Concentracin de sustrato
Comentario: Comentario:
24
Firma del alumno Firma del profesor
DIGESTION DE CARBOHIDRATOS
El carbohidrato ms importante en la alimentacin es la glucosa, la cual
ingerimos bajo la forma de disacridos (maltosa, sacarosa y lactosa) o de
almidn, polisacridos formado por muchas molculas de glucosa. El almidn
es el constituyente esencial de cereales, leguminosa, tubrculos y races. La
digestin del almidn se produce en el intestino delgado gracias a la presencia
de enzimas digestivas producidas por las glndulas salivares, el pncreas y la
pared intestinal. Estas enzimas son:
La alfa amilasa salivar
La alfa amilasa pancretica
La amilo 1,6 glucosidasa de la pared intestinal
Las alfa amilasas son enzimas que actan a pH neutro y en presencia de iones
cloro. Rompen los enlaces amilo 1,4 dando como resultado oligosacridos y
glucosa.
Existe dos formas de evaluar la actividad enzimtica de la amilasa:
Por desaparicin de sustrato: forma como desaparece el almidn el que
se aprecia por la reaccin del lugol.
Por formacin de producto: forma como aparecen carbohidratos
reductores (glucosa) en el medio, los que se aprecian por reduccin del
cobre.
TUBO 1 2 3 4
25
ml almidn 1% 2 2 2 2
ml Buffer fosfato pH 6,6 1 1 1 0
ml HCL 0,3N 0 0 0 3,4
ml Suero fisiolgico 3 2,4 0 0
ml Agua destilada 0 0 2,4 0
Colocar en bao de Mara a 37C por 5 minutos. Agregar:
ml solucin de saliva 0 0,6 0,6 0,6
Colocar en bao de mara a 37C por 20 minutos
Pasado este tiempo tomar 0,5ml de cada tubo y preparar cuatro tubos
ms de acuerdo al esquema
TUBO
1 2 3 4
ml digestin tubo 1 0, 5 0 0 0
ml digestin tubo 2 0 0,5 0 0
ml digestin tubo 3 0 0 0,5 0
ml digestin tubo 4 0 0 0 0,5
ml HCL 0,05N 5 5 5 5
ml Solucin yodada 0,5 0,5 0,5 0,5
Dejar en reposo por 15 minutos. Leer al fotocolormetro con filtro rojo
(660nm)
Nombre:
Grupo : Fecha:
0.90
0.75
0.60
Abs
0.45
0.30
0.15
0.00
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5
26
COMENTARIO:
SEMANA N 8
SEMANA DE EVALUACIONES
SEMANA N 9
SEMANA DE LA MEDICINA
27
PRACTICA N II.2 SEMANA N 10
ABSORCION DE CARBOHIDRATOS
Despus de la digestin de los carbohidratos por efecto de amilasas salivar y
pancretica, amilo 1,6 glucosidasa, y disacarasas tenemos como resultado
monosacridos: glucosa, fructosa, galactosa, que debern ser absorbidos por
la mucosa intestinal para su ingreso a la circulacin sangunea. Los
carbohidratos se absorben en el yeyuno mediante dos mecanismos, la simple
difusin favorecida por la gradiente de concentracin y el transporte activo, an
contra la gradiente. El orden de facilidad en la absorcin es de galactosa
glucosa: ribosa.
El borde en cepillo de las clulas intestinales tiene varios sistemas
trasportadores. Un transportador de glucosa dependiente del sodio (SLGT1) se
enlaza tanto a la glucosa como al sodio en sitios separados aumentando el
tenor de sodio intracelular.
La energa necesaria para este transporte se obtiene de la hidrlisis del ATP
vinculado a una bomba de sodio que intercambia sodio con potasio.
28
1. Se usan ratas con 24 a 36 horas de ayuno. Se les anestesia con eter
bajo una campana de vidrio. Abrirles el abdomen y se retira una porcin
de 5 cm de intestino, de modo que no quede mesenterio adherido.
2. Se lava la luz intestinal varias veces mediante una jeringa con solucin
Ringer Fosfato pH 7,4 Mediante el uso de una baqueta de vidrio se
empuja un extremo del intestino dentro del mismo buscando evertir la
porcin mucosa hacia fuera. Mantener el intestino en solucin Ringer
Fosfato pH 7,4 a temperatura ambiente.
3. Cerrar un extremo del intestino con hilo y dejar otra ligadura suelta en el
otro extremo del intestino.
6. Diluir 1:10 con agua destilada, tanto el contenido del saquito, como el del
tubo que lo recibi durante la incubacin. Luego proceder a preparar 4
tubos de acuerdo al siguiente esquema.
TUBO 1 2 3 4
ml reactivo para glucosa 2 2 2 2
l agua destilada 50 0 0 0
l patrn 20 mg/dL 0 50 0 0
l solucin diluida intra saco 0 0 50 0
l solucin diluida extra saco 0 0 0 50
Incubar a 37C por 10 minutos. Enfriar y leer en el fotocolormetro a
520nm. Usando el tubo 1 como blanco
COMENTARIO:
29
PRACTICA N II.3 SEMANA N 11
GLICOLISIS
La va metablica ms importante para la glucosa es la va glicoltica o de
Embden Meyehof. Esta presente, naturalmente, en todos los tejidos y es
responsable del aprovechamiento energtico de la glucosa y an de otros
carbohidratos. Tiene dos formas de manifestarse: la forma anaerbica cuando
la concentracin de oxgeno es baja, produce cido pirvico y cido lctico, y
genera escasamente dos molculas de ATP, tal como se aprecia en la
siguiente frmula global.
30
1. EXPERIMENTO.- Gliclisis.
TUBO
1 2 3 4
ml solucin de Potter pH 7,4 2,5 2,5 2,5 2,5
ml Glucosa 0,1 m 0,5 0,5 0,5 0,5
ml NAD 10m g/ml 0,2 0,0 0,2 0,2
ml ATP 5m g/ml 0,2 0,2 0 0,2
ml Nicotinamida 0,4m 0,1 0,1 0,1 0,1
ml Yodoacetato 0,1m 0 0 0 0,1
ml Agua destilada 0,1 0,3 0,3 0
Colocar en bao de mara 37C por 5 minutos
Gotas de rojo de fenol Ii Ii ii Ii
ml homogenizado de hgado 0,5 0,5 0,5 0,5
31
Tapar e incubar 1 hora a 37C
Titular cada tubo con NaOH 0,01N hasta el color original
COMENTARIO:
RESPIRACIN TISULAR
FRASCO N 1
32
ml Solucin de Potter pH 7,4 3
ml Succinato de potasio 0,5m 0,3
ml Agua destilada 0,7
ml Homogenizado 0,5
Cerrar bien los frascos. Incubar a temperatura ambiente. Medir cada 2 minutos
la modificacin del nivel del manmetro. Prepara un grfico de consumo de
oxgeno vs tiempo.
0.5
Volumen O2 consumido
0.4
0.3
(cm3)
0.2
0.1
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
Comentario: Tiempo (Minutos)
33
COLESTEROL DE FRACCIONES LIPOPROTEICAS
Las protenas son lpidos complejos resultado de unir la grasa con protenas.
Los lpidos sanguneos se encuentran bajo esta forma y divididos en cuatro
tipos de lipoprotena:
34
Agitar y dejar en reposo por minutos al ambiente Centrifugar a 3 000 por 10
minutos separar el sobrenadante.
TUBO N 1 2 3 4
ml Suero lmpido
0,02 0 0 0
ml Sobrenadente anterior
0 0,02 0 0
ml Patrn de colesterol
0 0 0,02 0
ml Agua destilada
0 0 0 0,02
ml Reactivo de color
2 2 2 2
TUBO N 1 2 3
ml Suero
0 0,02 0
ml Patrn de triglicridos
0 0 0,02
ml Reactivo de color
2 2 2
Conc. patrn
35
INFORME DE LA PRCTICA : RIESGO CORONARIO
Nombre:
...............................................................................................................................
...............................................................................................................................
...............................................................................................................................
....................................
Patrn:
Lectura:
Concentracin:
Factor de Calibracin:
Colesterol total:
36
ELECTROFORESIS EN ACETATO DE CELULOSA
MATERIAL Y REACTIVOS
Material
- Tiras de acetato de celulosa (Cellogel)
- Papel de filtro para secar las tiras de acetato
- Cubeta de electroforesis
- Aplicador
- Fuente de electroforesis
Reactivos
-Tampn Tris-HCl 10 mM y EDTA 1 mM pH=8,6
-Solucin de tincin: 0.1% (p/v) ponceau S stain en cido actico 1%
-Solucin de lavado: cido actico 1%
-Suero
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Electroforesis:
- Humedecer en tampn las tiras de acetato de celulosa 10 minutos antes de su
uso, para su equilibrado.
- Extender las tiras sobre el puente de la cubeta de modo que la superficie
- penetrable quede hacia la parte superior. El lado penetrable es el que se ve
cuando la tira se coloca en vertical delante de nosotros con el corte en la
esquina inferior derecha
- Depositar la muestra de suero en la tira de acetato de celulosa, en el extremo
prximo al ctodo.
- Conectar la corriente, aplicando una diferencia de potencial de 100 voltios
durante 60 minutos.
Revelado:
- Finalizada la separacin, depositar las tiras en una cubeta con solucin de
tincin, de modo que queden cubiertas por el lquido, durante 10 minutos.
- Lavar las tiras en solucin de destincin hasta que se observen bien las
bandas de protena (rojo) sobre un fondo blanco.
37
de aplicacin de la muestra. Identificar las protenas que corresponden a cada
banda y justificar el orden.
Comentario:
TRANSAMINASAS
Una de las reacciones generales de los aminocidos es la transaminacin o
trasporte de un grupo amino de un aminocido a un cetocido, trasformado al
primero en cetocido y al segundo en aminocido.
Esta transformacin posibilita la formacin de carbohidratos a partir de
aminocidos, esto es el fenmeno de la neoglucognesis.
LA ecuacin general de estas reacciones es:
Nh2 O O NH2
38
PROCEDIMIENTO CROMATOGRFICOS
TUBO N 1 2 3 4
ml cetoglutarato 0,2 M
0,3 0,3 0 0
ml alanina 0,2M
0,3 0,3 0 0
ml piruvato 0,2M
0 0 0,3 0,3
ml glutamato 0,2M
0 0 0.,3 0,3
ml arsenito 0,1M
0,4 0,4 0,4 0,4
ml Enzima activa
0 1 0 1
ml Enzima inactiva
1 0 1 0
39
a
RF =-----------------
b
b a
a
Incubar todos los tubos por 45 minutos a 37C. Retirar los tubos del bao de
Mara y agregar 6ml de alcohol etlico a cada tubo. Agitar y esperar por dos
minutos. Centrifugar y usar los sobrenadantes para la cromatografa.
Cromatografa
Marcar a 3 cm del borde una lnea suave con un lpiz, tratando de no daar la
slica gel. Marcar en esa lnea seis puntos separados por 2 cm cada uno.
Colocar en cada punto cinco gotas del respectivo sobrenadante y en las dos
ltimas 5 gotas de alanina y cinco de glutamato respectivamente. Dejar secar
Colocar la cromatoplaca en una cmara de cromatografa con una mezcla de
propanol: agua en la proporcin de 8: Dejar correr hasta que el nivel lquido le
falte 1 cm para llegar al extremo de la placa. Marcar el nivel al que alcanz el
lquido con un lpiz y dejar secar.
Comentario:
40
PRACTICA N III.1 SEMANA N 14
EVALUACION NUTRICIONAL
Experimento 1.- Manejo de Tablas de Composicin de Alimentos
41
Jamn Ingls 25,8 20,5 0,0
Leche fresca 2,9 3,3 7,0
Lenguado 19.0 0,5 0,0
Merluza 19,3 0,8 0,0
Pejerrey 18,7 1,2 0,0
Queso Fresco 16,0 10,3 3,7
Queso mantecoso 25,8 20,2 7,4
Tocino 9,1 65,0 1,6
Trucha 18,2 1,0 0,0
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Lechuga 1,4 0,2 3,3
Nabo 0,8 0,2 5,2
Pepina 0,5 0,1 2,7
Rabanitos 0,8 0,0 3,1
Tomate 0,8 0,2 4,0
Zanahoria 0,6 0,4 9,5
Zapallo 0,7 0,2 6,4
* Se usan al 3-4g%
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SEMANA N 15
EVALUACION CONTINUA
SEMANA N 16
SEMANA DE EVALUACIONES
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