El mtodo de FISH

A inicios del siglo ha aumentado la necesidad del desarrollo de herramientas de mejor calidad y con
alta sensibilidad y especificidad para realizar diagnsticos ms precisos y ms directos para las
diversas patologas que pueden presentar los pacientes, entre las herramientas creadas con este fin
encontramos la hibridacin fluorescente in situ o FISH por sus siglas en ingls, esta es una tcnica
de la avanzada rama de la citologa, ese mtodo diagnostico marca especficamente a los
cromosomas de la clula, por lo que podemos utilizarlo para visualizar alteraciones en la gentica
de las clulas. (1)

Un protocolo de la tcnica de FISH incluye 4 pasos (Figura 1): fijacin y permeabilizacin de la

muestra, hibridacin, lavado y la deteccin de las clulas marcadas a travs del microscopio de
epifluorescencia o confocal. Antes de la hibridacin, el cultivo, la muestra o tejido que contiene
microorganismos deben ser fijados y permeabilizados para facilitar la penetracin de la sonda
fluorescente dentro de la clula y para proteger al ARN de la degradacin por ribonucleasas
endgenas. La hibridacin es el proceso en el que a la muestra desnaturalizada se le aade la sonda
de inters que se unir a la secuencia escogida del ARNr. Pasado el tiempo de hibridacin, las
lminas son lavadas con agua destilada para remover la sonda que no se uni. Finalmente, se realiza
la visualizacin de la muestra, la cual requiere de un microscopio de epifluorescencia equipado con
diversos filtros para los diversos espectros de color. (2)

Antes de proseguir debemos definir el concepto sonda, una sonda no es ms que un fragmento
de material gentico, ya sea ADN o rara vez tambin ARN que es utilizada para detectar hebras de
ADN o ARN de contenido similar o igual, cabe resaltar que esta sonda en el FISH va a estar marcada
de manera notoria con un compuesto fluorforo para poder observarla en el microscopio para
fluorescencia. (2, 3)

La posibilidad de poder utilizar las tcnicas de FISH sobre clulas que no estn dividindose es
importante en aquellas neoplasias con baja tasa de divisin celular, como en los sndromes
linfoproliferativos crnicos. Para ello utiliza sondas marcadas con fluorocromos. Dependiendo del
tipo de sonda utilizada es posible evaluar la presencia de reordenamientos en los ncleos. Las
sondas son pequeas secuencias de cadena sencilla de ADN, complementarias a la secuencia de
inters del cido nucleico.

Podemos utilizar distintos tipos de sondas:

Centromricas o ADN satlite: estas sondas hibridan con las regiones o satlites u otras
secuencias repetitivas de la regin centromrica del cromosoma. Son de utilidad para detectar
alteraciones cromosmicas numricas. Como hemos dicho anteriormente, esta tcnica puede
aplicarse sobre clulas en divisin o ncleos interfsicos, por tanto podemos detectar anomalas
cromosmicas numricas sin necesidad de tener clulas en metafase.

Las sondas de pintado cromosmico contienen una librera de secuencias genmicas que abarcan
todo un cromosoma o una determinada regin. Con estas sondas podemos detectar alteraciones
estructurales o numricas de los cromosomas, pero slo en clulas en metafase. Es muy til cuando
tenemos cromosomas de mala calidad.

Las sondas de secuencia nica (locus especfico), hibridan con secuencias cromosmicas muy
concretas, correspondiente a una banda cromosmica o a un gen. Con estas sondas podemos
visualizar alteraciones estructurales o numricas tanto en ncleos en interfase como en metafase.
Podemos detectar la presencia de clulas tumorales residuales con una anomala caracterstica de
estirpe o subtipo, como la t (9;22) en la leucemia mieloide crnica, la t (15;17) que afecta al
PML/RAR en la leucemia mieloide aguda. (4)

El mtodo de FISH puede hacerse con la clula en una fase cromtica de metafase o un estado de
ncleo en interfase, en primer lugar para realizar la prueba de FISH, las cadenas de ADN se
desnaturalizan, quiere decir que se va a deshacer la forma de doble hlice bicatenaria que presenta
el ADN en estado normal y en cambio se van a separar en dos hebras, posterior a este proceso se
proceder a integrar la sonda de inters al sitio diana, esto se har mediante un proceso
denominado hibridacin donde el ADN vuelve a recuperar su forma de doble hlice detectando as
si hay presencia del cdigo complementario de la sonda de ADN. (3, 4)

Como se mencion ya hay dos formas de utilizar el FISH, de metafase y de interfase:

El FISH de metafase: puede usarse en clulas en estado de metafase como su nombre lo

indica para detectar la presencia de microdeleciones o para identificar material extra fuera
de lo conocido, generalmente la presencia de estos factores tienen una resolucin ms all
de los tratamientos convencionales, se identifica si la delacin es de origen simple o
 compleja y se pueden identificar tambin reordenamientos especficos para la deteccin de
clulas cancergenas exclusivas. (4)
El FISH de Interfase: Este puede usarse para determinar el nmero de copias de un
cromosoma en especfico, tambin para detectar reorganizaciones genticas en canceres,
una ventaja de este tipo de FISH es que este puede solicitarse de manera rpida debido a
que no requiere de un previo cultivo citolgico. (4)

Algunas utilidades del FISH son Durante el transcurso de los ltimos aos se ha reportado un gran
nmero de aplicaciones de la tcnica FISH, la cual es utilizada en la deteccin de microorganismos
en su propio hbitat sin que requieran de su previo aislamiento y purificacin. La importancia de
FISH radica en la capacidad que tiene la sonda de ADN de detectar una regin especfica del cido
nucleico de la clula microbiana y ser visualizada por microscopa de epifluorescencia. En esta
revisin se describe los diversos usos que tiene FISH, que van desde: Deteccin de alteraciones
numricas y estructurales, deteccin de cromosomas marcadores, seguimiento de trasplante y
cuantificacin de las clulas alteradas hasta la deteccin de patgenos en el diagnstico clnico.
Asimismo, se presentan algunas limitaciones, y los posibles correctivos que se deben tener
encuentra cuando se aplica esta tcnica. (5)

Algunas ventajas de la utilizacin del mtodo FISH son: Puede ser realizado en metafases con
ncleos en interfase, permite el uso de material congelado o material incluido en parafina y material
citolgico, es una tcnica rpida, tiene gran sensibilidad y especificidad. (5)

Las principales limitaciones del mtodo FISH son: Es una tcnica de sreening, es necesario conocer
lo que buscamos, el coste econmico en ocasiones puede ser elevado, no se pueden detectar
muchas alteraciones al mismo tiempo. (5)

1. Rodrguez Martnez, R. and Suescn Otero, G. (2013). Applications and inconvenient of

Fluorescence in situ hybridization technique (FISH) in the identification of microorganism.
[en linea] Scielo.org.co. Disponible en:
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-55522013000200017
accesado 10 Sep. 2017].

2. Lozano M.D. Patologa Molecular Y Citologa. Aplicaciones Del Fish En La Citologia No

Ginecologica. XX Congreso Nacional de la Sociedad Espaola de Anatoma Patolgica.
Navarra. 2005. [En lnea]. Disponible en:
http://www.seapcongresos.com/2005/Cursos/Curso_Largo_Patologia_Molecular/Citologia_
FISH.PDF
3. Biomedel. Hibridacin in situ con fluorescencia. Dynagene Cytogenetics Laboratory,
Seattle. 2014. [En lnea]. Disponible en:
http://biomodel.uah.es/citogene/dynacare/fishinfo.htm
4. Biocancer.com. (2010). Hibridacin ''in situ'' fluorescente (FISH). [en lnea] Disponible en:
http://www.biocancer.com/journal/1379/422-hibridacion-in-situ-fluorescente-fish
Accesado 10 septiembre. 2017.