UNIVERSIDAD DE CRDOBA

FACULTAD DE INGENIERAS
INGENIERA DE ALIMENTOS
BIOQUIMICA
LABORATORIO N 1

TITULACIN POTENCIOMTRICA DE AMINOCIDOS

Amada Abad 1., Amarilis Acosta 1., Bernardo Argumedo 1., Maura Castao1., Luis F.
Logreira 1

RESUMEN

Con esta prctica de laboratorio se determin el punto isoelctrico de varios aminocidos, para
ello fue necesario medir el pH inicial del aminocido estudiado. Despus de esto se hizo la
titulacin con HCl , a medida que se iba titulando se media el pH de la solucin y se registraban los
datos. Este procedimiento se realiza igualmente con los dems aminocidos y se procede tambin
a hacer la titulacin utilizando NaOH.

Palabras claves: Titulacin, Aminocido, pH, Punto Isoelctrico.

ABSTRACT

With this lab it was determined the isoelectric point of several amino acids, for this it was
necessary measuring the initial pH of the studied amino acid. After all this it was made a titration
with HCl, as would be half titrating the pH of the solution and recording the data. This procedure is
made similarly with the another amino acids and the titration is made with NaOH.

Word keys: Titration, Amino acid, pH, isoelectric point.

1
Estudiantes de Ingeniera de Alimentos, IV Semestre, Universidad de Crdoba, Facultad de Ingenieras,
Programa de Ingeniera de Alimentos, Berasategui- Crdoba 2013
 INTRODUCCIN

Las protenas son macromolculas compuestas por unidades ms pequeas conocidas como
aminocidos. En las protenas se encuentra bsicamente veinte aminocidos diferentes, los cuales
contienen un grupo carboxilo y un grupo amino unidos al mismo tomo de carbono (carbono )
estos aminocidos difieren unos de otros solo por la naturaleza de sus cadenas laterales, o grupos
R que varan tanto en estructura, como en tamao y carga elctrica e influyen en la solubilidad
en agua.

Los grupos carboxilo y amino de los aminocidos funcionan como cidos y bases dbiles,
respectivamente, y como tales, se ionizan cuando estn en solucin. Los aminocidos tienen al
menos dos pK, por lo que tienen mayor capacidad amortiguadora, ya que presentan de tres a
cuatro formas inicas diferentes. Cuando la forma inica tiene una carga neta de cero se dice que
se encuentra en su punto isoelctrico o pI. Al variar de pH, cambia la proporcin de la
formas inicas y es posible ver la capacidad amortiguadora de los aminocidos. Cada aminocido
tiene sus propio pK, puesto que presenta diferentes sustituyentes en sus cadenas laterales.
Mediante una titulacin, se puede determinar el pK de un aminocido. (1)

Titulacin: Es la adicin de sucesivas cantidades de una base o de un cido fuertes, a una solucin
de cido o de base a titular, con la medicin simultnea de su pH, hasta el punto de equivalencia
en el cual los equivalentes de cido y de base se igualan.(2)

La curva de titulacin ser bifsica. Habr dos porciones separada o inflexiones en la curva de
titulacin. El punto medio de la primera inflexin (B) es donde el aminocido est mitad en forma
cida y mitad en forma zwitterion. EL punto de inflexin C ocurre cuando todo el aminocido
original ya est en forma de zwitterion. El pH al cual esto ocurre se denomina el pH isoelctrico
(punto isolelctrico) y se le da el smbolo pI (asumiendo que el grupo R no tiene carga). En la
titulacin de pH de un aminocido con un grupo no ionizable R, el punto de equivalencia ocurre
en el pI del aminocido. En el punto medio de la segunda inflexin (D), la mitad del aminocido
est en forma de zwitterion y la otra mitad est en forma bsica. (3)

las curvas de titulacin proporcionan la siguiente informacin

 Medida del pK de los grupos ionizables: se localizan en el punto medio de la zona tampn.
Regiones de capacidad tampn: mesetas donde se localizan los pKs; dichas regiones se
encuentran en el intervalo pK 1 unidad de pH.

pI: se localiza en el intervalo de viraje.

Formas ionizables del aminocido en cada rango de pH.

Carga elctrica del aminocido en cada rango del pH

Solubilidad relativa del aminocido en cada rango de pH. (4)

OBJETIVOS

Construir con datos experimentales la curva de titulacin del aminocido Lisina.

Establecer grficamente el punto isoelctrico de la lisina.

Interpretar correctamente la curva de titulacin de la Lisina.

PROCEDIMIENTO

Con el potencimetro se mide el pH inicial del aminocido estudiado, se procede a hacer las
debidas titulaciones con HCl para cada aminocido, a medida que se titula se mide el pH a la
solucin, seguir titulando hasta llegar a agotar 10 ml de HCl por ltimo se reportan los datos
obtenidos y se desecha el titulado. Repetir este procedimiento utilizando ahora como agente
titulador el NaOH. Los aminocidos a utilizar son alanina, arginina, acido asprtico y glicina. En el
caso de nuestro grupo se tomo el aminocido Lisina.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

Lisina
 Titulacin con NaOH Titulacin con HCl
pH inicial= 5.74 pH inicial= 6.48
Volumen pH Volumen pH
(ml) (ml)
2 7.78 2 3.35
4 8.80 4 2.78
6 8.20 6 2.72
8 8.42 8 2.49
10 8.57 10 2.40
Tabla # 1 resultado de la Lisina

Alanina

Titulacin con NaOH Titulacin con HCl

pH inicial= 6.23 pH inicial= 6.23
Volumen (ml) pH Volumen pH
2 8.00 2 3.40
4 8.40 4 3.15
6 8.65 6 3.00
8 8.86 8 2.86
10 9.00 10 2.71
Tabla # 2 resultados de la Alanina

Glicina

Titulacin con NaOH Titulacin con HCl

pH inicial= 6.48 pH inicial= 6.48
Volumen pH Volumen pH
(ml) (ml)
2 8.12 2 3.42
4 8.41 4 3.18
6 8.54 6 3.08
8 8.74 8 2.93
10 8.95 10 2.89
Tabla # 3 resultado de la Glicina

Acido aspartico.

Titulacin con NaOH Titulacin con HCl

pH inicial= 3.00 pH inicial= 3.00
Volumen pH Volumen pH
(ml)
2 3.23 2 2.77
4 3.42 4 2.65
6 3.55 6 2.51
8 3.71 8 2.31
10 3.83 10 2.10
12 4.07 12
14 4.20 14
16 4.42 16
18 4.80 18
20 5.45 20
Tabla # 4 resultados del A. asprtico

Arginina

Titulacion con NaOH Titulacin con Hcl

pH inicial= 10.16 pH inicial=10.16
Volumen (ml) PH Volumen PH
2 10.47 2 9.85
4 11.46 4 9.68
6 11.66 6 9.40
8 11.83 8 9.28
10 11.99 10 9.20
Tabla # 5 resultados de la Arginina

PARA LA ALANINA

El aminocido valorado se comenz con un pH diferente a 0 en este caso la alanina se titulo con
pHi= 6.23 al valorar con NaOH, y de igual forma con el HCL.

Hablando del punto isoelctrico, como sabemos este se define como el pH en el cual el nmero de
cargas positivas se iguala al nmero de cargas negativas que aportan los grupos ionizables de una
molcula. En el punto isoelctrico la carga neta de la molcula es cero (0), para el caso de la
alanina que solo tiene solo dos grupos de disociacin tenemos:

(CN= Carga neta.)

El primer pk1(R-COOH) es 3.15 y el segundo pk 2(R-NH3+) es 8.40. As que el punto isoelctrico (pI)
de la alanina es:


PARA LA GLICINA

A pH cido la Gly se encuentra como un cido diprtico, ya que tanto el grupo amino como el
carboxilo se encuentran protonados, es decir, a pH = 1, el 100% de las molculas de aminocido se
encuentran en forma de catin

Al ser ste un amino cido neutro, posee un grupo amino y un grupo carboxilo es el aminocido
mas sencillo, es decir su grupo R es un hidrogeno.

El punto isoelctrico estipulado para este aminocido (Glicina) debe ser 5,97. Y el obtenido
experimentalmente fue : 5.77.

PARA EL ACIDO ASPARTICO

El ph inicial de la solucin de acido aspartico antes de valorar con HCL 0,1M y el NaOH fue de 3.0
ml, en el acido aspartico el valor del punto isoelctrico se tomo del ph medio entre los valores de
pk, este pI esta dado de la siguiente manera:
 PARA LA ARGININA

Para la valoracin de la solucin del aminocido con HCl arginina el phi= 10.16, as mismo se tomo
un igual para la titulacin con NaOH

Para este caso de la arginina que es un aminocido con cadena lateral bsica.

PARA LA LISINA
Para este aminocido, al igual q los otros, se comenz con un pH diferente a 0 en este caso la lisina,
su PH inicial fue: pHi= 5.74 al valorar con NaOH y HCL.

El punto isoelctrico de la Lisina es de 9.74 pero en este caso el punto isoelctrico que obtuvimos
experimentalmente no fue el mismo que se marca tericamente. Esto pudo ocurrir por el error
que se tuvo al momento de hacer las respectivas mediciones, puesto que, no tomamos unos datos
completos con respecto al Ph.

ANLISIS DE RESULTADO:

La representacin grfica de la variacin del pH de una solucin por la adicin de equivalentes de

cido o de base se denomina curva de titulacin. En el caso de los aminocidos, las curvas de
titulacin proporcionan la siguiente informacin

-Medida del pK de los grupos ionizables: se localizan en el punto medio de la zona tampn.

- Formas ionizables del aminocido en cada rango de pH.

- Carga elctrica del aminocido en cada rango del pH

INVESTIGACIN

A) Registrar en una tabla los resultados obtenidos:

(ESTAN CONTENIDOS EN LOS RESULTADOS Tabla # 1, 2, 4 y 5).

B) Determinar el pI del aminocido.

Tabla # 6 Pl de los amioacidos estudiados en laboratorio

Aminocidos pK1 pK2 pI

Alanina 3.15 8.40 5.77

Glisina 3.42 8.12 5.70
Aspartico 2.77 3.23 3.00
Arginina 9.85 10.47 10.16
Lisina 3.35 7.78 5.66

C) Determinar el pI de los aminocidos Gly- A-Glu-His-Tyr-Lys-Asp:

Tabla # 7 pI Gly-A-Glu-His-Tyr-Lys-Asp

Aminocidos pK1 pK1 pI

Glicina 2,4 9,7 6,05

Alanina 2,3 9,9 6,1
Glutamico 2,2 4,3 3,25
Histidina 1,8 6,0 3,9
Treonina 2,6 10,4 6,5
Lisina 2,2 9,2 5,7
Asprtico 1,9 3,6 2,75

D) Determinar el pI de los siguientes aminocidos:

Tabla # 8 pi de v, trp, met

Aminocidos pK1 pK1 pI

Valina 2,32 9,62 5,96

Triptfano 2,83 9,39 5,89
Metionina 2,28 9,21 5,7

Conclusin
Esta prctica, aunque su desarrollo fue sencillo, nos deja conocimientos amplios, sobre todo las curvas de
titulacin, que son herramientas muy poderosas, ya que a travs de stas pudimos determinar, por ejemplo,
el pKa, el pKb, y por medio de stos, el punto isoelctrico de un aminocido, en este caso la Lisina, aunque
no nos hayan dado los resultados esperados.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

(1) http://docencia.izt.uam.mx/sgpe/files/users/uami/jaislocr/BIOQUIMICA_I/PRACTICA_3.pdf
(2) http://uninga.net/verpost/Apuntes/3847/Titulaci--n--Bioqu--mica--Medicina.html
(3) http://agu.inter.edu/halices/TITULACION_AMINOACIDOS.pdf
(4) http://212.128.130.23/eduCommons/ciencias-biosanitarias/bioquimica-ph-equilibrios-
acido-2013-base/contenidos/4.%20Curvas%20de%20titulacion%20de%20aminoacidos.pdf