Torres Badajoz 2016

1 MARCADORES MOLECULARES: MEJORAMIENTO GENTICO DE LA

2 RESISTENCIA A ENFERMEDADES EN PLANTAS

3 Torres-Badajoz Sandra Guadalupe

4 Universidad de Guanajuato, Campus Celaya-Salvatierra

5 1. Resumen

6 Los avances en tcnicas moleculares en las ltimas dcadas han permitido profundizar en
7 las bases genticas de las resistencias, a la vez que han abierto nuevas preguntas. A travs de
8 estas tcnicas se han obtenido gran cantidad de marcadores moleculares dispersos a lo largo de
9 todo el genoma, se han construido mapas genticos de diversas especies hortcolas, y adems se
10 han ubicado genes de resistencia a enfermedades, plagas, etc. En este trabajo se revisa el
11 panorama de los estudios sobre mapeo gentico de genes de resistencia a enfermedades en
12 plantas. La resistencia a enfermedades asistida por marcadores moleculares es una herramienta
13 muy interesante para los planes de mejoramiento, ya que permite acelerar la seleccin y disminuir
14 los costos en el manejo de grandes poblaciones de plantas. El objetivo de este ensayo es resumir
15 los marcadores utilizados en el anlisis gentico y discutir el alcance de los mismos en el
16 mejoramiento de especies vegetales.

17 Palabras clave: Genes, marcadores moleculares, mejoramiento, plantas, resistencia.

18 1. Abstract

19 Advances in molecular techniques in recent decades have deepened in the genetic basis of
20 resistance, while have opened new questions. Through these techniques have been obtained many
21 scattered throughout the genome molecular markers, genetic maps have been constructed of
22 various vegetable species and also have resistance genes located diseases, pests, etc. In this work,
23 the panorama of studies on genetic mapping of disease resistance genes in plants is reviewed.
24 Disease resistance assisted by molecular markers is a very interesting tool improvement plans,
25 and speeding up the selection and lower costs in managing large populations of plants. The aim
26 of this paper is to summarize the markers used in genetic analysis and discuss their scope in
27 improving plant species.

28 Keywords: Genes, molecular markers, improvement, plant resistance.

1
 Torres Badajoz 2016

29 2. Introduccin

30 A travs de la utilizacin de los principios genticos, en los ltimos aos se han logrado
31 importantes avances en el mejoramiento gentico de diversas especies vegetales. Estos avances se
32 basaron principalmente en la seleccin fenotpica de los mejores genotipos. Muchas de las
33 complicaciones que se tienen en la seleccin de los caracteres fenotpicos, se pueden solucionar a
34 travs de la identificacin directa de los genotipos mediante el uso de marcadores genticos. Los
35 marcadores genticos representan diferencias genticas entre individuos o especies, generalmente
36 actan como seales o marcas ya que se encuentran cerca de los genes de inters, la mayora no
37 afecta el fenotipo de la caracterstica de inters ya que se encuentran cerca o ligados a los genes
38 que controlan la caracterstica (Collard et al., 2005).

39 Gracias a los avances en la biologa molecular se han desarrollado mtodos de

40 identificacin y caracterizacin basados en el uso de marcadores moleculares que superan, en la
41 gran mayora de los casos, las limitaciones de los mtodos tradicionales (Azofeifa-Delgado,
42 2006).

43 2.1 Tipos de marcadores genticos

44 Actualmente, los marcadores genticos se utilizan investigacin vegetal bsica, en

45 mejoramiento, caracterizacin y conservacin; etiquetado de genes; introgresin asistida de alelos
46 favorables y proteccin de variedades comerciales (Henry, 2001).

47 2.1.1 Isoenzimas

48 Las isoenzimas consisten en molculas de protena diferencialmente cargadas, que

49 tambin se pueden separar usando mtodos de electroforesis (Markert, 1959). Los marcadores
50 bioqumicos han sido reemplazados en gran medida por otro tipo de marcadores genticos; sus
51 principales desventajas son: 1) que detectan niveles menores de variacin y 2) que al ser
52 productos de la expresin gnica se ven afectados modificaciones postranscripcionales o
53 postransduccionales (Prez de la Vega 1997).

54 2.2 Tipos de marcadores de ADN

55 2.2.1 RFLP

2
 Torres Badajoz 2016

56 Basados en la longitud de los fragmentos de restriccin polimrficos (Botstein et al.,

57 1980), segn Paterson (1996) el costo, la complejidad tcnica y la gran cantidad de ADN que se
58 requiere pueden ser limitantes para el empleo de los RFLP como tcnica de diagnstico.

59 2.2.2 RAPD

60 DNA polimrfico amplificado al azar (Williams et al., 1990). La eficiencia de los

61 marcadores RAPDs puede estar influenciada por varios factores, entre ellos: El nmero de ciclos
62 de amplificacin, la cantidad de ADN inicial, la longitud del ADN, el iniciador y la temperatura
63 (Phillips et al. 1995).

64 AFLP

65 Fragmento amplificado polimorfismo de longitud (Blears et al., 1998). Valadez y Kahl

66 (2000) mencionan que los AFLPs surgen a partir de: A) Polimorfismos en los sitios de
67 restriccin, en donde una secuencia especfica para el reconocimiento de una endonucleasa de
68 restriccin, est presente o ausente. B) Polimorfismos en la longitud de la secuencia, donde el
69 nmero de las secuencias repetidas arregladas en serie (tandem) tienen sitios variables. C)
70 Cambios en los pares de bases de ADN no asociados con sitios de restriccin.

71 2.2.3 SSR

72 Marcadores de microsatlites (Giarrocco et al., 2007). Estos marcadores son ideales para
73 el estudio de ligamiento gentico en plantas y el mapeo fsico, los estudios poblacionales y la
74 identificacin de variedades (SIDTA 1999).

75 A continuacin se presenta una serie de ejemplos generales del uso de marcadores

76 moleculares en especies vegetales.

Caracterstica Isoenzimas RFLP RAPD AFLP SSR

Nivel de
polimorfismo que Bajo
detecta Medio Medio Medio Alto
Usualmente Codominante/
Dominancia codominante Codiminante Dominante Dominante Codiminante

3
 Torres Badajoz 2016

Nmero de loci Multiloci Multiloci Multiloci Multiloci Multiloci

Abundancia en el
genoma Baja Media Muy alta Alta Media

Nmero de citas 7 18 33 13 21
77 Tomado de Lowe et al. (2004)

78 2.3 Bases genticas de la resistencia a enfermedades

79 Lozano y Schawrts (1981) seala que desde hace algunos aos el desarrollo de variedades
80 resistentes ha sido reconocido como el medio de control de las enfermedades ms usual y
81 econmico. El mejoramiento de la resistencia a las plagas y enfermedades es un aspecto especial
82 del mejoramiento gentico y juega un papel importante en la produccin desde el punto de vista
83 econmico, especialmente en pases tropicales donde las prdidas por estos conceptos son
84 cuantiosas (De Armas, 1985).Van del Plank (1968) seala que la resistencia puede ser
85 monognica (resistencia gobernada por un solo gen) y polignica (resistencia gobernada por ms
86 genes.

87 Segn Van del Plank (1968) los trminos ms usados actualmente para definir la
88 resistencia de las plantas a las enfermedades son: resistencia horizontal (R H) y vertical (RV). La
89 resistencia vertical se refiere al lado vertical del grfico; esta resistencia se prueba mediante un
90 anlisis de varianza en el cual existen interacciones diferenciales entre patotipos y patodemos, su
91 carcter fundamental es que opera contra algunos patotipos verticales, pero no contra todos; La
92 caracterstica epidemiolgica de la resistencia vertical es la reduccin aparente en el inculo
93 inicial, lo cual trae como resultado que la epidemia se retrase. Este mismo autor define la
94 resistencia horizontal como una resistencia de efectos parciales, que a pesar de ser efectiva contra
95 todas las razas del patgeno, manifiesta dicha resistencia a travs de una reduccin cuantitativa
96 de los ndices o porcentajes de infeccin, incubacin y reproduccin; tambin este tipo de
97 resistencia a travs de un anlisis de varianza permite detectar diferencias significativas entre
98 patotipos y patodemos.

99

4
 Torres Badajoz 2016

100 3. Discusin

101 3.1 Mtodos de mejora para la resistencia a enfermedades: Aplicacin de la biologa molecular

102 Diversos mtodos han sido utilizados para los trabajos de mejora gentica para la
103 resistencia en plantas. Las investigaciones que se realizan en el campo de la gentica van
104 dirigidas a la obtencin de una produccin superior, un valor nutritivo ms elevado, una mayor
105 resistencia de las plantas al medio, a los agentes patgenos, conservando al mismo tiempo
106 biodiversidad en las especies y protegiendo los recursos genticos. La contribucin de la gentica
107 vegetal a estas investigaciones es esencial (Sasson, 1985).

108 El uso de marcadores moleculares proporciona varias ventajas respecto a la mejora clsica
109 o seleccin masal, dada la independencia de estos marcadores respecto a las condiciones
110 ambientales y el estado en que se encuentra la planta. Este fenmeno permite una seleccin
111 temprana, disminuyendo los gastos del cultivo. La eficacia de esta estrategia depende de varios
112 factores como el modo de la herencia del carcter de inters, el grado de asociacin entre el
113 marcador empleado y el gen de inters (Francia, et al. 2005).

114 Segn Beckman (1988) un peldao superior en la escala evolutiva corresponde a los
115 marcadores genticos y en especial a las tcnicas de polimorfismo de longitud de fragmentos de
116 restriccin (RFLP) que brindan nuevas perspertivas para identificar y mapear genes tiles que
117 posteriormente pueden ser incorporados en el genoma vegetal. Segn Staub and Thomas (1998)
118 dentro de los marcadores ms efectivos para asistir la seleccin se encuentra el RFLP.

119 Los RAPDs pueden ser empleados con mltiples propsitos, uno de los ms importantes
120 es el estudio de la identidad gentica ente especies estrechamente relacionadas o dentro de una
121 misma especie, as como para el mapeo de genes. Sin duda alguna la mejora para la resistencia es
122 un campo donde siempre se investigar y donde las investigaciones sern cada vez ms profundas
123 siempre que se tengan en cuenta la utilizacin ms generalizada de tecnologas como la
124 ingeniera gentica.

125 Las isoenzimas por su parte tienen limitaciones importantes para su aplicacin en este
126 campo Tanksley (1993) menciona que el uso de las isoenzimas ha estado muy limitado por el
127 escaso nmero de colorantes enzimticos disponibles y por la imposibilidad de contar con
128 suficientes marcadores para cubrir todo un genoma.

5
 Torres Badajoz 2016

129 4. Conclusin

130 El trabajo de mejoramiento gentico es un trabajo continuo y su objetivo fundamental es

131 aportar a la produccin vegetal nuevas herramientas para ampliar el conocimiento y mejorar las
132 investigaciones en las principales enfermedades en plantas. Estos ltimos aos se han logrado
133 importantes avances en tcnicas de Biologa Molecular que han permitido analizar en
134 profundidad el genoma de plantas y desarrollar mapas genticos con gran cantidad de marcadores
135 muchos de estos sumamente tiles para el mejoramiento gentico de la resistencia en especies
136 vegetales. Sin embargo an queda mucho por investigar en este campo, ya que en Mxico son
137 pocas las variedades de las que se ha reportado informacin de marcadores moleculares para la
138 resistencia a enfermedades.

139

140 5. Bibliografa

141 Azofeifa-Delgado, A. 2006. Uso de Marcadores Moleculares en Plantas: Aplicaciones en

142 Frutales del Trpico. Agronoma Mesoamericana 17(2):221-242.

143 Beckman, J. S, Soler, M. 1989 Backcross inbred lines for mapping and cloning of loci of
144 interest In: T. Helentjaris, and Burr (eds). Development and applications of molecular markers to
145 problems in plant genetics. Current comunications in molecular biology. Cold Spring habor
146 laboratory pp: 117-122.

147 Blears, M.J., De Grandis, S.A., Lee, H., Trevors, J.T., 1998. Amplified fragment length
148 polymorphism (AFLP): a review of the procedure and its applications. J. Ind. Microbiol. Biotech.
149 21, 99e114.

150 Botstein, D., White, R.L., Skolnik, M., Davis, R.W., 1980. Construction of genetic linkage
151 map in man using restriction fragment length polymorphisms. Am. J. Hum. Genet. 32, 314e331.

152 Collard, B.C.Y., Jahufer, M.Z.Z., Brouwer, J.B., and Pang, E.C.K. 2005. An introduction to
153 markers, quantitative trait loci (QTL), mapping and markerassisted selection for crop
154 improvement: The basic concepts. Euphytica 142:169196.

155 De Armas, G. 1985 Resistencia gentica y su utilizacin en algunas enfermedades de tomate

156 y pimiento. Boletn de Reseas N0 5: 7-38.

6
 Torres Badajoz 2016

157 Francia E, Tacconi G, Crossati C, Barabaschi D, Vale G. 2005. Marker assisted selection in
158 crop plants. Plant cell tissue and organ culture 82:317-342

159 Giarrocco, L.E., Marassi, M.A., Salerno, G.L., 2007. Assessment of the genetic diversity in
160 Argentine rice cultivars with SSR markers. Crop Sci. 47, 853e860.

161 Henry, R.J. 2001. Plant Genotyping. The DNA Fingerprinting of Plants. CABI
162 Publishing.Wallingford, United Kingdom. 344 p.

163 Lemus, Y., Hernndez, J., C. 2003 Situacin actual del mejoramiento gentico del meln para
164 la resistencia al Mildiu pulverulento de las cucurbitceas. Instituto de Investigaciones Hortcolas
165 "Liliana Dimitrova". La Habana Cuba. Temas de ciencia y tecnologa vol 7, pp 25-36.

166 Lozano, J. C. Y H. F. Schawrtz. 1981 Limitaciones de la resistencia a enfermedades de varios

167 cultivos alimenticios en Amrica Latina. Fitopatologa Colombiana 10(1-2): 33.

168 Lowe, A.; Harris, S.; Ashton, P. 2004. Ecological genetics; design, analysis, and application.
169 Blackwell Science. Victoria, Australia. 326 p.

170 Paterson, A. 1996. Genome mapping in plants. AcademicPress. California, USA. 330 p.

171 Perez de la Vega, M. 1997. El uso de marcadores moleculares en gentica vegetal y mejora.
172 Invest. Agr. Prod. Prot. Veg. Vol. 12 (1, 2 y 3) 31-60.

173 Phillips, W.; Rodrguez, H.; Fritz, P. 1995. Marcadores de ADN: Teora, aplicaciones y
174 protocolos de trabajo con ejemplos de investigaciones en cacao (Theobroma cacao). Serie
175 tcnica. Informe tcnico #252. CATIE. Turrialba, Costa Rica. 183 p.

176 SIDTA. 1999. Los marcadores moleculares en ingeniera gentica y en mejora vegetal.
177 Espaa. Consultado 12 de Marzo del 2016. Disponible en: http://www.jcyl.es/jcyl/

178 Tanksley, S.; Medina-Filho, H.; Rick, C. 1981. The effect of isozyme selection on metric
179 characters in an interspecific backcross of tomato basis of an early screening procedure.
180 Theoretical and Applied Genetics 60:291.

181

7
 Torres Badajoz 2016

182 Williams, J.G.K., Kubelik, A.R., Livak, K.J., Rafalski, J.A., Tingey, S.V., 1990. DNA
183 polymorphism amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucleic Acids Res.
184 18, 6531e6653.

185

186