Abordagem molecular no desenvolvimento
de frmacos anti-tumorais
ANDRESSA BERNARDI1
MARIA CAROLINE JACQUES-SILVA2
GUIDO LENZ 3
1. Graduanda do Curso de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS),
bolsista de Iniciao Cientfica.
2. Farmacutica-bioqumica e doutoranda em Cincias Biolgicas Bioqumica/ UFRGS.
3. Professor Adjunto do Departamento de Biofsica.
Departamento de Bioqumica, Rua Ramiro Barcelos, 2600, Anexo, Laboratrio 37, ICBS, UFRGS.
90035-003, Porto Alegre, RS. e-mail: andressabernardi@yahoo.com.br
INTRODUO
As principais caractersticas das clulas neoplsicas que
as distinguem das clulas normais so a proliferao descontrola-
da, indiferenciao e perda da funo, poder de invaso e de gerar
metstases. Uma das principais dificuldades no uso da
quimioterapia no cncer que o tumor geralmente se encontra bem
avanado por ocasio do diagnstico (Rang et al, 2001). Os agen-
tes antineoplsicos atualmente utilizados, em particular os que
so citotxicos, afetam, em sua maioria, apenas uma das caracte-
rsticas das clulas cancerosas, o processo de diviso celular, sen-
do, portanto, apenas antiproliferativos. Esses frmacos no exer-
cem nenhum efeito inibitrio especfico sobre o poder invasivo, a
perda da diferenciao ou o poder metasttico. Alm disso, como
seu efeito principal exercido sobre a diviso celular, eles iro
afetar todos os tecidos normais que se dividem rapidamente, pro-
duzindo ento, em maior ou menor grau, os conhecidos efeitos
colaterais de uma quimioterapia. Ressalta-se ainda que os prpri-
os agentes antineoplsicos podem tambm, em certas circunstn-
cias, serem carcinognicos.
Considerando a necessidade de novas abordagens para o
tratamento do cncer, estudos bioqumicos dos mecanismos de
transduo de sinal celular possibilitaram um melhor entendimen-
to da biologia da clula neoplsica. Dessa forma, novos mecanis-
mos de ao esto sendo explorados no desenvolvimento de no-
vos medicamentos no combate ao cncer. O presente trabalho pro-
pe-se a apresentar uma reviso da abordagem molecular no de-
senvolvimento desses novos frmacos.
BIOLOGIA DAS CLULAS CANCEROSAS:
ASPECTOS GERAIS
O desenvolvimento do cncer um processo complexo em
estgios mltiplos, envolvendo geralmente mais de uma alterao
gentica e, tambm, muitos outros fatores que, ocorrendo ou no
de forma simultnea, podem resultar numa neoplasia.
Importantes processos celulares, como crescimento, dife-
renciao, motilidade e apoptose (morte celular programada) so
regulados por sinais provenientes de outras clulas e da matriz
extracelular ou por fatores de crescimento e citocinas (Dirks &
Rutka, 1997). As clulas podem se dividir em resposta a fatores de
crescimento que atuam sobre RTKs (receptores de superfcie
tirosino-quinases), que, por sua vez, deflagram eventos intracelulares
que resultam na produo dos transdutores do ciclo celular, que
levam sntese de DNA e, conseqentemente, diviso celular.
Um defeito em qualquer uma dessas etapas (por ativao
de oncogenes ou inativao de genes supressores tumorais) pode
resultar em proliferao descontrolada, j que a progresso, atra-
vs do ciclo celular, depende do equilbrio entre vrias foras regu-
ladoras positivas e negativas (Karp & Broder, 1995). As foras
positivas envolvem fatores de crescimento, que estimulam a clula
a entrar no ciclo, alm de uma srie de ciclinas e de quinases ciclina-
dependentes (cdks).
As ciclinas se ligam s cdks, ativando-as, e essas promo-
vem ativao de substratos que desencadearo a liberao de fato-
res de transcrio e conseqente ativao de genes e sntese protica.
A ao das ciclinas/cdks modulada pelas foras reguladoras nega-
tivas, que so protenas que se ligam s cdks e inibem sua ao.
Essas protenas so induzidas por vrios genes, como, por exem-
plo, o gene p53 e o gene do retinoblastoma (Rb). Se houver algum
tipo de leso no DNA, esses genes funcionam como inibidores,
que interrompem o ciclo celular nos pontos de controle que ele
possui, permitindo, ento, o reparo do DNA. Se o reparo falhar,
inicia-se o processo de apoptose. Nas clulas cancerosas, pode
ocorrer perda do controle do ciclo celular em conseqncia de:
Anormalidade na funo dos fatores de crescimento e/ou
Funo anormal da ciclina/cdk e/ou
Sntese anormal de DNA em decorrncia da atividade
de oncogenes e/ou
Diminuio anormal das foras reguladoras negativas,
devido ocorrncia de mutaes dos genes supressores
tumorais.
PRINCIPAIS ALVOS MOLECULARES E MECANISMOS
DE AO DOS NOVOS MEDICAMENTOS
Diversas abordagens moleculares esto em fase de investi-
gao. H atualmente 209 novas drogas sendo investigadas, inclu-
sive em Fase de estudo III. A maioria delas, baseadas nos progres-
sos realizados no conhecimento da biologia da clula cancerosa, se
refere ao uso de alvos seletivos para atuao dos agentes anti-
tumorais. Subdividem-se em oito grandes grupos, de acordo com o
mecanismo de ao proposto. Na seqncia e na tabela I tm-se
esses grupos com alguns de seus representantes.
==> Drogas que visam alterao da expresso
gnica / Terapia Gnica:
A utilizao de oligonucleotdeos anti-sentido (ONs,
antisense oligonucleotides) permite o bloqueio da expresso de
um oncogene. Os ONs so pequenos segmentos sintticos de DNA
de filamento nico, que so complementares a uma poro do
mRNA e que podem ligar-se sua seqncia correspondente no
mRNA. A conseqente poro de filamento duplo (um hbrido de
mRNA e ON DNA ) impede a traduo do mRNA e, assim,
bloqueia a expresso do oncogene particular. ONs, que tm por
alvos o gene Bcl-2 (um tipo de gene antiapopttico ), tm sido
objetos de estudos clnicos.
Infarma, v.15, n 9-10, (Set/Out 2003) 61
 A tecnologia mais recente e promissora, em termos de
supresso gnica, o RNAi (RNA interference). RNA dupla fita
so processados por enzimas intracelulares, produzindo fragmen-
tos de 21 a 23 pares de base, com 19 bases pareadas. Estes peque-
nos fragmentos de RNA levam a degradao do RNA mensageiro
que possui a seqncia correspondente s 19 bases. Este mecanis-
mo especfico ao nvel de apenas um nucleotdeo.
Desta forma, possvel bloquear a expresso de um
oncogene que sofreu mutao, sem, contudo, atingir a expresso
do proto-oncogene, como foi mostrado para o oncogene Ras
(Brummelkamp et al., 2003), abrindo a possibilidade para um tra-
tamento totalmente ausente de efeitos colaterais. importante
mencionar, no entanto, que este tipo de tratamento exigiria um
conhecimento bastante especfico das alteraes genticas de cada
paciente acometido de cncer, mas a simplificao dos mtodos de
seqenciamento est abrindo esta possibilidade para um futuro
no muito distante.
H, tambm, estudos clnicos (Fase III) em cncer de cabe-
a e pescoo, envolvendo a injeo, no tumor, de vetores adenovirais
recombinantes contendo o gene p53 humano, bem como estudos
clnicos de glioblastomas (tumores cerebrais de elevada malignida-
de) envolvendo vetores de herpes-vrus para que esses transpor-
tem um gene para ativar uma pr-droga.
Abordagens promissoras da terapia gnica para o cncer
restaurar mecanismos protetores como p53;
inativar a expresso de oncogenes;
fornecer um gene para clulas malignas, tornando-as
sensveis s drogas;
fornecer um gene s clulas hospedeiras sadias para
proteg-las da quimioterapia;
marcar clulas cancerosas com genes para torn-las imu-
nognicas.
Tabela II: Terapia Gnica e Cncer / Fonte: Rang et al, 2001
==> Inibidores da Transduo de Sinal:
Incluem-se, nesta categoria, os inibidores da ligao dos
fatores de crescimento ao receptor. Quando fatores de crescimen-
to, como por exemplo EGF (fator de crescimento epidermal), se
ligam s protenas de membrana chamadas de Her-2, essas se
dimerizam e enviam ao ncleo sinais pr-mitticos. Esse mecanis-
mo ocorre em clulas normais, mas uma diferena das clulas nor-
mais para as clulas malignas que, na superfcie das clulas
tumorais, a protena est presente em quantidades to grandes,
que as molculas, mesmo sem fatores de crescimento, se unem em
dmeros, de modo que a mitose ocorre constantemente.
O ZD 1839 uma nova molcula em estudo que tem por
mecanismo de ao impedir que as clulas formem dmeros. Dessa
forma, as clulas tumorais se dividem menos (Tzahar et al, 1998).
Est sendo empregada, em casos de cncer de mama metasttico
(Fase Clnica III). Baseado nesse mesmo raciocnio, h outros
inibidores de RTKs, sendo testados com a finalidade de interferir
nos mecanismos de transduo de sinal envolvidos na proliferao
celular (Nygren et al, 2003).
A leucemia mielide crnica (LMC) uma doena em que
a principal caracterstica das clulas possuir uma translocao
recproca t(9;22) que gera um novo gene, fruto da fuso de dois
genes: BCR-ABL no cromossomo derivado 22q- (cromossomo
Philadelphia) e ABL-BCR no cromossomo 9q+. O produto do
gene abl uma protena tirosina-quinase, que capaz de se auto-
ativar, quando dimerizada.
A protena fusionada BCR-ABL leva a auto-ativao da
ABL, que desregula as vias normais de transduo de sinal
62 Infarma, v.15, n 9-10, (Set/Out 2003)
intracelular, causando alterao no ciclo celular, inibio da apoptose
e aumento da proliferao celular. Uma vez identificada a principal
mutao responsvel pela enfermidade, as pesquisas levaram ao
desenvolvimento da droga mesilato de imatinib (STI 571), que
atua diretamente na protena mutada BCR-ABL e previne a
fosforilao de substratos envolvidos na regulao do ciclo celular.
O imatinib agora considerado padro ouro para o tratamento de
paciente com LMC que no possuem um doador compatvel de
medula ou que no so candidatos a transplante (Peggs e
Mackinnon, 2003).
A este grupo pertencem, tambm, os inibidores de Ras
(protena de ligao de guanina-nucleotdios com atividade de
GTPase) e vias por ela ativada. Esses inibidores bloqueiam a capa-
cidade que tem os genes ras mutantes de se tornarem clulas malig-
nas. Nas clulas normais, a protena Ras, uma vez sintetizada,
migra para a membrana celular, qual se fixa por uma espcie de
gancho molecular (um grupo farnesil). Este grupo adicionado
protena pela enzima farnesiltrasferase. Recentemente, foram pro-
duzidos compostos que inibem esta enzima, como o RI 15777. Foi
demonstrado, por testes in vitro e in vivo ( Fase Clnica III), que
esse composto reverte a transformao maligna em clulas cance-
rosas que contm o oncogene ras, restaurando os padres normais
de crescimento, sem interferir na diviso celular das clulas nor-
mais ( Nygren et al, 2003 ).
==> Inibidores da invaso do tumor e metstases:
Recentemente, muita ateno tem sido direcionada pos-
sibilidade de se impedir que a clula tumoral seja capaz de induzir
degradao da matriz extracelular e invadir o estroma, ocasionando
metstases. O uso de mecanismos de inibio de disseminao
dessas clulas tem sido bem-sucedido. As enzimas chamadas
metaloproteinases, que so uma famlia de endopeptidases, esto
envolvidas, tanto na invaso, quanto nas metstases dos cnceres,
por terem a capacidade de degradar os componentes da matriz
extracelular. Agentes que inibem essas enzimas, como, por exem-
plo, o marimastat, j se encontram em estudos clnicos de Fase III.
==> Inibidores de Angiognese:
A angiognese (crescimento de vasos sanguneos para a
irrigao do tumor) necessria para nutrio e conseqente pro-
gresso do tumor. H vrios reguladores endgenos (positivos e
negativos) que controlam a angiognese, como a angiogenina e o
fator de crescimento endotelial vascular. Os inibidores da
angiognese atuam nesses reguladores endgenos, a fim de impedir
a irrigao do tumor, mas os mecanismos exatos so ainda contro-
versos. Inclui-se, nesta categoria, a talidomida, medicamento usa-
do, no passado, para enjos, durante a gravidez (uso abolido devi-
do a teratognese causada), mas que, por mostrar atividade
antiangiognica, tem sido usada em estudos clnicos, nos Estados
Unidos e Europa, no tratamento de diferentes tipos de tumores,
em combinao com outros agentes (Raje & Anderson, 2002).
==> Agentes Diferenciadores:
Sabe-se que um dos processos que resultam na malignida-
de das clulas a perda do processo de diferenciao. Estudos com
o objetivo de induzir a diferenciao e tornar as clulas normais
utilizam anlogos da vitamina D3 e agonistas do receptor do cido
retinico, mas as vias pelas quais esses compostos induzem a
diferenciao ainda no esto bem descritas.
==> Inibidores Imunognicos:
Anticorpos monoclonais (Mabs) so molculas versteis
com potencial teraputico e aplicaes em vrias enfermidades
humanas, incluindo o cncer (Carter et al, 2001). Esto sendo
utilizados Mabs para fatores de crescimento, citocinas e outras
molculas ou receptores que controlam o crescimento e outras
funes da clula tumoral e, tambm, Mabs anti-idiotpicos como
vacinas para gerar uma resposta imune. Ressalta-se que algumas
vacinas geraram resultados negativos, mas que sua eficincia tem
sido observada, principalmente quando administrada como
adjuvante, observado em cncer colo-retal em estudo de Fase Cl-
nica III (Nygren et al, 2003).
==> Reversores de resistncia induzida por drogas:
Desde o surgimento do emprego da quimioterapia para o
cncer (1940), foram identificados muitos de caminhos pelos quais
as clulas cancerosas escapam do agente qumico. No momento
em que as clulas desenvolvem resistncia a uma droga, elas po-
dem tambm desenvolver resistncia cruzada a outras drogas,
quimica e mecanicisticamente no relacionadas, em um fenmeno
conhecido como resistncia multi-droga (MDR).
Muitas formas de MDR resultam da expresso de bombas
de fluxo ATP-dependente com ao sobre diferentes substratos
(Nygren et al , 2003). Muitos estudos mostram o envolvimento da
PgP, uma P-glicoprotena, nessa resistncia. A estratgia a utili-
zao de drogas que inibem essa protena transportadora, como
verapamil e ciclosporina A .
==> Novas drogas citotxicas e indutores de apoptose:
Muitas drogas citotxicas exercem seu efeito por induo
de apoptose, porm muitas clulas adquirem resistncia a essas
drogas por modificaes em elementos chaves da sinalizao
apopttica.
Tabela I: Tabela Geral com alguns representantes de
cada grupo dos novos frmacos anti-tumorais.
A conjugao de drogas citotxicas a anticorpos
(imunoconjugados) uma alternativa muito promissora na terapia
do cncer. Outra alternativa o acoplamento de um anticorpo a
uma enzima capaz de converter uma droga no-txica em um
metablito de elevada toxicidade. Os anticorpos so direcionados
a antgenos especficos do tumor, de modo que a droga conduzida
e concentra-se, no tumor, no afetando os tecidos normais das
proximidades.
CONSIDERAES FINAIS
Embora a terapia atual para o cncer dependa principal-
mente do uso de cirurgia, irradiao e quimioterapia, a evoluo na
compreenso da biologia da transformao maligna e das diferen-
as no controle da proliferao da clula normal e cancerosa pro-
porcionaram a descoberta de novos alvos possveis para o trata-
mento do cncer. improvvel que novas terapias venham a subs-
tituir totalmente as drogas existentes, uma vez que estas drogas
tornaram-se mais eficazes e suas toxicidades, mais tratveis e pre-
visveis, nos ltimos anos. No entanto, uma combinao de drogas
existentes, novas abordagens e a obteno de um perfil molecular/
gentico de cada tumor faria com que todo o paciente tivesse um
tratamento individualizado e especfico para o seu caso, aumen-
tando a eficcia do tratamento e diminuindo a incidncia de efeitos
colaterais.
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