Universidad Autnoma de Ciudad Jurez

Instituto de Ciencias Biomdicas

Manual de Histologa Laboratorio

Nombre del alumno:______________________________________

Matricula:______________________________________________

Nombre del maestro de teora:_____________________________

Nombre del maestro de laboratorio:_________________________

Fecha de inicio curso de materia:____________________________

Horario de clase:_________________________________________

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 Contenido

# TEMA
1 Microscopio
2 Tcnicas histolgicas
3 Artefactos
4 Clula
5 Tejido epitelial
6 Tejido glandular
7 Tejido Conectivo Ordinario
8 Tejido conectivo especializado
9 Tejido conectivo de sostn
10 Tejido Muscular
11 Tejido Nervioso

INICIO DE MANUAL

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TEMA 1 - EL MICROSCOPIO
1.1 HISTORIA DE LA MICROSCOPIA

Aos atrs el hombre contaba solo con los 5 sentidos propios para observar y
conocer su medio ambiente, conforme al tiempo encontr nuevos mtodos para
extender el alcance de esos sentidos.

Prueba de ello se encuentra en las ruinas de Nnive, donde se encontraron

los primeros vestigios para aumentar la visin estos eran lentes tallados y globos
de vidrio llenos de agua.

A principios del siglo XVI aparece la lupa en Europa. La invencin del

telescopio y del microscopio se atribuye a Zacaras Jansen (1590). Sin embargo
en la historia de la microscopia se le atribuye una mencin especial al holands
Anton Van Leewenhoek (1632-1723) pionero en dejar constancia de sus
observaciones, consignando notas y bosquejos detallados de los primeros
microorganismos que sabemos fueron observados: Los protozoos, encontrados en
aguas negras y en el sarro de los dientes.

Leewenhoek diseo diferentes tipos de microscopio, todos ellos de una

gran calidad ptica. Se estima que monto alrededor de 247 lentes. Aunque la
estructura era rudimentaria, la calidad de los lentes utilizados y su capacidad de
observador dieron como resultado una serie de descripciones que causaron
sensacin entre los naturalistas de su poca. Entre los trabajos que inmortalizaron
su nombre cabe mencionar las primeras descripciones de los protozoarios,
glbulos rojos y algunas bacterias.

El ingls Robert Hooke construyo en 1665 un microscopio vertical. Con

estos aparatos se obtenan imgenes deficientes, debido a la utilizacin de
lmparas de aceite como fuente de luz.

En la subsecuente evolucin del microscopio participaron eminentes

cientficos, quienes los modificaron de diversas maneras. Con el objeto de mejorar
la imagen obtenida se disearon portaobjetos intercambiables, tornillos de ajuste y
se hicieron cambios importantes en el sistema de iluminacin, as como el
portacondensador y espejos, haciendo el manejo del microscopio ms verstil, y la
observacin cientfica ms accesible.

A principios del siglo XX el microscopio comenz a adquirir las

caractersticas que tienen en la actualidad. Los adelantos tcnicos permitieron la
aparicin de los grandes microscopios compuestos, siendo uno de los adelantos el
mejoramiento de los sistemas de iluminacin y la incorporacin de varios objetos,

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cada uno con un aumento diferente, fcilmente intercambiables al estar montados
en un revolver. Igual mencin merece la introduccin de un tubo fijo inclinado y de
varios tornillos de mando situado sobre una platina mvil.

1.2 PARTES DEL MICROSCOPIO PTICO COMPUESTO

1.2.1 PARTE MECNICA.

Dentro de la denominada parte mecnica se distinguen distintos elementos que se
clasifican en dos grandes grupos. Todo ello se expone detalladamente a
continuacin.
SISTEMA DE SOPORTE.
Pie: es la base del microscopio.
Brazo: une el pie con el cabezal.
Cabezal (tubo de observacin en los microscopios antiguos): en sus extremos
estn alojados los oculares y los objetivos.
Platina: es una placa horizontal que sostiene las preparaciones a observar. Sale
del brazo y consta de un orificio central que permite el paso de la luz y una pinza
que sujeta el portaobjetos (dedo de carga).
Revolver: Pieza metlica en forma de disco que gira alrededor de un eje, el que se
fijan los objetivos de distintos aumentos.
SISTEMA DE AJUSTE.
Tornillo de fijacin del cabezal.
Tornillos reguladores de la platina (control del eje X y control del eje Y): sirven
para deslizar el portaobjetos a lo largo y a lo ancho de la platina. Su movimiento
queda registrado en 2 escalas mviles, lo que permite establecer la posicin
exacta de cualquier zona de la preparacin.
Tornillo de elevacin del condensador: se utiliza para elevar el condensador y
aumentar la iluminacin descenderlo y reducir la iluminacin.
Tornillos de centrado del condensador: se usan para centrar el condensador con
respecto al objeto.
Tornillo de seguridad del condensador: permite el desmontaje y la limpieza de la
lente superior del condensador.
Control del diafragma de apertura del condensador.
Tornillo de enfoque: mueven la platina hacia arriba y hacia abajo. Son dos: el
macromtrico o el micromtrico o de avance lento.

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1.2.2 PARTE PTICA.
SISTEMA DE ILUMINACIN.
Fuente de luz: actualmente es una lmpara halgena de intensidad graduable.
Se enciende y se apaga con un interruptor. En su superficie externa hay una
especie de anillo para colocar filtros que facilitan la visualizacin de algunas
preparaciones (soporte del filtro).
Condensador: es un dispositivo que contiene una lente que concentra la luz,
generada en la lmpara, hacia la preparacin. Se encuentra colocado entre la
fuente luminosa y la platina.
Diafragma de apertura: se localiza en el interior del condensador. Sirve para el
control adecuado del cono de iluminacin que atraviesa la muestra y entre en el
objetivo.
LENTES.
Objetivos: generan una imagen real, invertida y aumentada del objeto. Estn
colocados en la parte inferior del cabezal, a nivel de una pieza mecnica que
permite cambiarlos fcilmente y recibe el nombre de revlver.
Los ms frecuentes son los de 4, 10, 40 Y 100 aumentos. Este ltimo se dice que
es de inmersin porque precisa el uso de aceite sobre la preparacin.
Oculares: captan la imagen formada por el objetivo y la amplan. Estn colocados
en la palie superior del cabezal. Se llaman as porque estn muy cercanos alojo.
En los actuales microscopios binoculares son dos, uno para cada ojo, y estn
unidos mediante un mecanismo que consta de una escala graduada y permite
ajustar la distancia interpupilar. La visin binocular se obtiene por medio de un
prisma divisor de rayos y de tres espejos. Este sistema divide la luz en partes
iguales, dirigiendo la mitad alojo derecho y la otra mitad alojo izquierdo.
Cada ocular consta de dos lentes. Las lentes inferiores de los oculares estn
fabricadas con plstico ptico. Los ms usados producen un aumento de 10
veces.

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PRACTICA 1: Partes del microscopio.

Elabore un dibujo y seale sus componentes mecnicos, pticos y de iluminacin:

INICIO FINALIZADA

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PRACTICA 2: Pasos para uso del microscopio.

1 Encienda el microscopio.
2 Coloque la preparacin, siempre con el cubre objetos hacia arriba.
3 Con el objetivo de 10X o seco dbil intente enfocar.
4 Abra los oculares, ocluya el ocular izquierdo y enfoque totalmente con el
derecho valindose de las cremalleras macro y micromtrica.
5 Ocluyendo el ocular derecho, ahora enfoque con el ojo izquierdo valindose
del mecanismo del ocular, sin mover las cremalleras macro y micromtricas.
6 Localice su distancia pupilar, moviendo los oculares hasta observar un solo
crculo perfectamente claro.
7 Coloque convenientemente el objetivo de 4X o lupa, enfoque y haga un
recorrido de todo el tejido, seleccione algn sitio que le llame la atencin,
colquelo en el centro.
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Coloque el objetivo de 10X y haga lo mismo que en el punto nmero (7)
9 Para observar con el objetivo de 40X o seco fuerte, antes de cambiar el
objetivo de 10X, haga descender ligeramente la platina, enseguida coloque el
objetivo de 40X, haga ascender la platina hasta tocar con la laminilla el
objetivo (el cual notara que tiene un ligero fuelle, el cual evita accidentes)
posteriormente, coloque sus ojo en los oculares y observe, haga descender
la platina poco a poco con la cremallera macromtrica hasta obtener una
imagen, posteriormente enfoque totalmente con la cremallera micromtrica
10 Para observar con el objetivo de 100X o seco fuerte, coloque al centro lo que
desee observar a continuacin haga descender la platina ligeramente,
coloque una gota de aceite de inmersin, posteriormente haga ascender la
platina hasta tener contacto con la laminilla (el objetivo de 100X tiene el
mismo mecanismo que el de 40X), observe a travs de los oculares y haga
descender la platina hasta obtener una imagen clara.

NOTA: SI UD. SIGUE LOS PASOS ANTERIORMENTE DESCRITOS NO

TIENE POR QUE SUFRIR DE INCIDENTES O ACCIDENTES.
CUALQUIER DUDA O ACLARACION PREGUNTE A SU PROFESOR.

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 INICIO FINALIZADA

TIPOS DE MICROSCOPIO

1.3 TIPOS DE MICROSCOPIO

Existen diversas clases de microscopios, segn la conformacin, la naturaleza de

los sistemas de luz y otros elementos utilizados para obtener las imgenes.

1. El microscopio simple es aquel que utiliza una sola lente para ampliar las
imgenes de los objetos observados. Es el microscopio ms bsico. (Lupa)
2. El microscopio ptico puede ser monocular, binocular, trinocular (para
microfotografa). En los microscopios binoculares la observacin se hace
con los dos ojos y esto permite una observacin ms cmoda y se percibe
una mayor nitidez de los detalles en la imagen. Se fabrican en diferentes
tamaos incluyendo microscopios pequeos porttiles o de viaje. Dentro de
los tipos de microscopios se describen:
1. Microscopio compuesto o vertical: Es el microscopio convencional,
perfeccionado a partir de los modelos antiguos, que posee la fuente de
luz ubicada en la base, por debajo de la platina. Es el microscopio de
uso ms comn.
2. Microscopio invertido: La estructura del microscopio es invertida en
comparacin al microscopio convencional. La fuente de luz est ubicada
por encima de la platina y el principio de funcionamiento y formacin de
la imagen es el mismo que el del microscopio tradicional. Utilizado

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 principalmente para cultivos celulares (clulas vivas) sin una preparacin
previa y para monitorear actividades.
3. Microscopio estereoscpico: Este tipo de microscopio proporciona una
imagen estereoscpica, en tres dimensiones (3D) del espcimen. Se
fundamenta en la visin binocular convencional, en la que los dos ojos
observan el espcimen con ngulos levemente distintos. El microscopio
estereoscpico debe ser binocular. Se utiliza para observar
especmenes de gran tamao, sin corte o preparacin previa puesto que
emplea luz incidente y no funciona por trans-iluminacin. Es ideal para
realizar microdiseccin.
4. Microscopio quirrgico: Es un microscopio que se emplea en
microciruga. Proporciona un campo muy bien iluminado y un aumento
de las estructuras anatmicas, facilitndole al cirujano una mayor
visibilidad de los tejidos sanos y patolgicos que sern manipulados ms
cuidadosamente y con menores posibilidades de lesin. Algunos
modelos ms sofisticados tienen piezas automatizadas robticas. Se
utiliza principalmente en intervenciones quirrgicas en las que se
amerite una minuciosa diseccin, como por ejemplo del crneo y
cerebro o del globo ocular.
5. Microscopio fotgenicos especiales: Ciertos especmenes,
principalmente las clulas vivas o muestras no coloreadas, al ser
observados en el microscopio comn de campo claro, muestran un muy
pobre contraste de sus estructuras y no aportan datos relevantes, a
pesar del poder de resolucin de los objetivos empleados. Para ello se
han creado microscopios con ciertas particularidades que permiten la
observacin de ese tipo de especmenes con un incremento muy
satisfactorio del contraste. Entre ellos se citan:

a-Microscopio de campo oscuro: De manera similar a un cielo nocturno en el cual

brillan las estrellas o al iluminar un cuarto oscuro y las partculas de polvo flotantes
en el aire se tornan visibles porque reflejan o difractan la luz, los especmenes
observados al microscopio de campo oscuro se ven blancos y brillantes sobre el
fondo oscuro (negro)

La iluminacin del campo oscuro se puede realizar tanto mediante luz transmitida
(trans-iluminacin) como con luz incidente (epi-iluminacin). En el primer caso,
para lograr el efecto se requiere bloquear la parte central del rayo de luz que
normalmente pasa a travs y alrededor del espcimen, de tal manera que slo sea
iluminado por rayos oblicuos. La manera ms fcil y econmica de lograrlo
consiste en colocar un filtro circular opaco (por ejemplo crculos de cartulina negra
o una moneda adherida a un crculo de vidrio o plstico transparente) bajo el

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condensador de un microscopio compuesto ordinario. Esta maniobra funciona bien
con objetivos de 10x-40x; el dimetro del circulo opaco debe ser de
aproximadamente 16-18mm para un objetivo de 10x cuya apertura numrica sea
de 0.25. Para un objetivo de 20x o 40x con una apertura numrica de 0.65, el
dimetro del crculo opaco debe oscilar entre 20-24mm. Para la iluminacin con
luz incidente o iluminacin oblicua se emplea un filtro en forma de luna en cuarto
decreciente (en forma de C), obtenindose una interesante imagen con relieve.

El mtodo ms apropiado consiste en el empleo de un condensador caracterstico

que adems mejora la resolucin. Con este dispositivo se forma un cono hueco de
luz (cuyo centro oscuro) que incide lateralmente sobre la muestra y solo los rayos
que son difractados o reflejados por las estructuras penetran en la lente objetivo y
la clula aparece como un objeto luminoso sobre un fondo oscuro.

Modelos de filtros de fcil realizacin para lograr la tcnica de campo

oscuro (izquierda y centro) e iluminacin oblicua (derecha, en cuarto
creciente). Para campo oscuro el dimetro de la mscara negra
central depender de objetivo que se emplee. Con objetivos de
mayor aumento y apertura numrica, se requiere un disco negro de
mayor dimetro.

Aplicaciones del microscopio de campo oscuro.

Estudio de especmenes de tamao pequeo no coloreados, tales como

microorganismos acuticos, ovocitos, clulas en cultivo (cuyos ndices de
refraccin oscilan en un rango de 1.2 a 1.4 y no hay una diferencia notable
con el ndice de refraccin de 1.3 de la solucin acuosa en la cual se
encuentran).
Observacin de clulas mviles, como el Treponema pallidum, una
espiroqueta causante de la sfilis, la cual con la microscopa ptica ordinaria
es muy difcil de visualizar.
Estudio de procesos fisiolgicos como mitosis y migracin celular.

b-Microscopio de Fluorescencia.

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Este microscopio hace uso de la fluorescencia y se convierte en una herramienta
de inestable valor para la investigacin cientfica, ya que permite alcanzar altos
niveles de sensibilidad y resolucin microscpica, permitiendo una apreciacin
diferente de la informacin que se puede obtener de los especmenes y que
generalmente pasa desapercibida.

La fluorescencia en un fenmeno de luminiscencia es la propiedad que tienen

cierto elementos qumicos denominados fluorforos o fluorocromos de de emitir
luz visible cuando sobre ellos incide una radiacin intensa; en otras palabras,
absorben la luz de una longitud de onda determinada (luz ultravioleta o luz
monocromtica azul) y luego emiten otra luz de mayor longitud de onda (color
verde, rojo o amarillo). Es un fenmeno de vida corta, emitida simultneamente.

Esquema bsico de la iluminacin en el microscopio de fluorescencia. La

luz blanca es filtrada dejando pasar un solo color (ej. azul). El espejo
dicroico refleja la luz de cierta longitud de onda (en este caso azul) y deja
pasar otros colores. Se filtra la luz azul que excita al fluorocromo
(fluorescencia) pero por el contrario deja pasar la luz verde emitida.

Aplicaciones del microscopio de fluorescencia.

Estudios inmunolgicos.
Mineraloga
Molculas en clulas y tejidos para su caracterizacin e identificacin.

c- Microscopio de polarizacin.

Es en el que se interpone un prisma de Nicol (o una hoja de polaroid) en el cambio

de la luz bajo el lente condensador, este polarizador convierte toda la luz que pasa
a travs del microscopio en luz polarizada plana. Un segundo prisma semejante
llamado analizador, se coloca dentro del tubo del microscopio por arriba del
objetivo. Cuando el analizador se hace girar hasta que su eje este perpendicular al
polarizador, la luz no puede pasar por el ocular, lo que produce un efecto de
campo oscuro, el campo permanecer negro si se coloca en la platina un objeto
de refraccin simple (isotpico). En cambio, un objeto de refraccin simple
(isotpico).
En el microscopio de luz polarizada se sita la muestra entre dos polarizadores
cruzados. Los elementos cristalinos presentes en la muestra cambian el estado de
polarizacin de la luz y de hecho "descruzan" los polarizadores. Como
consecuencia de ello, los elementos cristalinos se ven como estructuras luminosas
que resaltan sobre el fondo oscuro generado por los polarizadores cruzados.

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Adems, con este mtodo se obtienen imgenes de colores muy vivos y es
posible percibir caractersticas en la estructura y composicin de los elementos
cristalinos que no son discernibles con una iluminacin convencional.

Esquema simplificando la tcnica de iluminacin con luz polarizada.

El filtro polarizador (1) est localizado por debajo del condensador (2)
y el espcimen (3) es iluminado con luz polarizada lineal. El
analizador (5) rotado en ngulo de 90 en relacin a (1) est
localizado detrs del objetivo (4). Una lente (6) en el tubo forma la
imagen intermedia.

Aplicaciones del microscopio de polarizado.

Identificar sustancias cristalinas o fibrosas intracelulares (como el

citoesqueleto) y extracelulares (sustancia amiloide, asbesto, colgeno,
cristales de uratos y otras de origen exgeno).
Identificar y estimar cuantitativamente los componentes minerales.

d- Microscopio de contraste de fases.

Las investigaciones iniciales de Frits Zernike permiti en 1930 el estudio de

clulas vivas, dicho descubrimiento le vali el premio nobel en fsica en 1953. Con
esta tcnica de iluminacin se aumenta el contraste de manera notoria entre las
partes claras y oscuras de las clulas transparentes.

En la microscopa de contraste de fases se sita un diafragma anular en el plano

focal del condensador. Es un diafragma especial proyecta hacia la muestra un haz
de luz anular. Cuando incide este haz de luz sobre la muestra, y como
consecuencia de su interaccin con los distintos elementos que la componen, se
produce la difraccin de una parte de los rayos luminosos que constituyen este
haz. La luz proyectada hacia la muestra es recogida por el objetivo y proyectada, a
su vez, en el plano focal posterior de ste.
En el plano focal posterior del objetivo se coloca una lmina que contiene un anillo
(anillo de fase) construido de tal forma que produce una anticipacin de un cuarto
de onda a la luz que pasa a travs de l (la no difractada) con respecto a la luz
que no lo atraviesa (la difractada). Tras esto, interfieren ambas porciones del haz
luminoso (la no difractada y la difractada).
Cuando interfieren ondas luminosas que tienen un determinado desfase,
dependiendo de las caractersticas de ste, se produce una interferencia cons-
tructiva o substractiva. Los elementos transparentes que hay en la muestra alte-
ran, con la intervencin de la lmina de fases, las relaciones de fase entre los
rayos de iluminacin y esto se traduce en diferencias de luminosidad, que pueden

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ser percibidas por el ojo humano y hacer visibles elementos que de otra forma no
lo seran.

Aplicaciones del microscopio de contraste de fases

Observacin de clulas y tejidos vivos.

En estudios de diversas disciplinas como por ejemplo fisiologa, parasitologa,

farmacologa (procesos celulares, identificacin y cuantificacin de
microorganismos y parsitos en fluidos y tejidos, efecto de medicamentos y otras
sustancias en las clulas y sus procesos de motilidad, ciclosis, digestin, entre
otros).

Estudio de alimentos y medicinas.

Anlisis de materiales industriales industriales (metales, cristales, fibras

sintticas, plsticos, pigmentos, emulsiones y suspensiones minerales).

Estudios geolgicos (minerales).

PRACTICA 3:

1. 5 sentidos usados por el ser humano para conocer su ambiente

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2. Qu tipo de microscopio manejas en la clase de laboratorio de histologa?
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 INICIO FINALIZADA

TEMA 2 TECNICAS HISTOLOGICAS

2.1 INTRODUCCIN

Como concepto amplio las tcnicas histolgicas comprende la preparacin de

tejidos para su estudio microscpico, lo que nos permite conocer la morfologa macro y

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microscpica del rgano a estudiar. Tales tejidos se puede obtener de dos fuentes: la
primera de ellas directamente de pacientes sometidos a intervencin quirrgica
seleccionado una muestra de tejido de un rgano especfico o una mnima porcin de
ste; a esta ltima muestra de tejido vivo la llamaremos biopsia. La segunda fuente de
obtencin de tejidos es post-mortem; puede ser llamada necropsia, debido a que es
extrada de algn rgano durante necrociruga.

Para la observacin de clulas de organismos vivos.

a. Mtodo de transiluminacin
b. Mtodo de cmara transparente
c. Empleo de cmara anterior del ojo

Para la observacin de clulas que se mantienen vivas luego de ser quitadas del
organismo.

a. Cultivo de clulas
b. Cultivo de tejidos
c. Cultivos de rganos

Para la preparacin e investigacin de tejidos muertos

a. Tcnica de inclusin en parafina

2.2 TECNICA DE INCLUSION EN PARAFINA

Es trascendental dejar claro que el orden de los pasos, porcentajes, sustancias y

sus volmenes citados aqu pueden presentar variaciones en la metodologa de acuerdo a
la experiencia de cada investigador, no significando estas variaciones contradiccin en la
exposicin de la tcnica.

2.2.1 PASOS DE LA TECNICA DE INCLUSION EN PARAFINA

a) Obtencin del tejido: Las muestras de tejido son obtenidas por biopsia o necropsia.
b) Fijacin: El tejido se debe sumergir inmediatamente posterior a la obtencin para
impedir cambios por autolisis o autodigestin propiedad implcita irreversible en las
clulas de todo tejido vivo. El fijador tiene el papel de penetrar en el tejido y
conservar sus componentes y estructura con las caractersticas lo ms
aproximadamente similares a las que tiene en vida. Esta accin se logra debido a
que una de las cualidades del fijador es eliminar las bacterias que pudiendo estar
presentes se multiplicaran en el tejido modificando su estructura al degradar las
clulas que lo componen, dando al tejido en estudio un aspecto diferente, lo que
ocasionara un diagnstico errneo. Algunos fijadores aumentan la afinidad de
componentes del tejido por los colorantes usados en la tincin.
Las soluciones ms utilizadas son: formaldehido o formol al 10%, bicloruro de
mercurio, bicromato de potasio, cido actico, acido pcrico, cido smico y

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 alcohol etlico. El ms comnmente utilizando es el formaldehido o formol al 10%
aunque el porcentaje de dicha dilucin pueda variar.
c) Seccin del tejido: El rgano o segmento recibido se secciona tomando cortes
representativos con el fin de que las sustancias impregnen todas las clulas del
tejido. Para tal efecto las dimensiones del corte representativos ms comnmente
utilizadas son hasta 4 cm. De longitud, hasta 2cm. De ancho y de 0.5 a 0.7 cm. de
espesor.
d) Proceso automatizado: fijacin, deshidratacin, aclaramiento e impregnacin; Los
tejidos seccionados se introducen a unas pequeas capsulas perforadas, y estas
capsulas a su vez a una canasta tambin perforada que ira colocada en un
aparato llamado Autotecnicon o histoquinete cuya funcin es procesar los
tejidos con la tcnica de la parafina en formas automatizada. Este instrumento se
programa para que la canasta que contiene los tejidos sea sumergida en las
diferentes sustancia contenidas en los recipientes del aparato en un lapso de
tiempo variable que generalmente toma doce horas, esto es, una hora por
recipiente, en los que realizan los pasos de:
a. Fijacin: Los dos primeros recipientes contienen formol al 10%
b. Deshidratacin: Todos los tejidos del cuerpo humano son ricos en agua
hasta un 65%. El agua no se mezclara con parafina, y al no hacerlo no se
lograra incluir el tejido en parafina; por lo tanto ser necesario retirar el
agua del tejido. Esto se logra aplicando al tejido substancias miscibles en
agua como en alcohol etlico, agente deshidratante que auxiliara a sustituir
el agua por parafina. El tejido se sumerge en alcohol etlico en grados
porcentuales de concentracin ascendente, iniciando con la concentracin
al 75%, posteriormente al 96% y finalmente al 100%.

Los cuatro recipientes que siguen contienen sucesivamente alcohol al

70%, 80%, 90% y 96% con el fin de deshidratar los tejidos
gradualmente. Dos recipientes ms comunes alcohol absoluto (al
100%) para concluir este proceso.

c. Aclaramiento: Tanto el agua como el alcohol son insolubles en parafina,

pero hay productos qumicos solubles en ambos y se conocen como
agentes aclarantes. Los aclarantes ms usados son: Xilol, Tolueno,
Cloroformo, Benceno y Aceite de Cedro.

La canasta pasa por dos recipientes de xilol para su aclaramiento, fenmeno

que tiende a hacer transparentes a los tejidos.

d. Impregnacin en parafina: Los dos ltimos recipientes son de metal y

mantienen la parafina a una temperatura suficiente para conservarla
liquida. Los espacios inter e intracelulares que naturalmente contienen
agua, temporalmente sustituida por alcohol, despus por el aclarante xilol
sern ocupados por parafina con el fin de conservar la estructura celular
lo ms cercanamente posible a su aspecto natural. En este momento
concluye el proceso automtico de autotecnicon.

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 e) Inclusin en bloques de parafina: los tejidos recientemente procesados se colocan en el
fondo de pequeos moldes cbicos en los cuales se vierte parafina liquida a una
temperatura especfica, de no ser as el tejido en el estudio sufrira alteraciones
estructurales por quemadura, alterando su aspecto a la observacin. Se deja enfriar hasta
que solidifique convenientemente y se extraen lo bloques de los recipientes cbicos.
f) Microcorte de tejidos> los tejidos son incluidos en parafina porque este compuesto
presenta entre otras caractersticas una consistencia especifica la cual permite hacer al
bloque cortes tan finos como 3 a 10 micrmetros o micras.
Para efectuar los cortes existe un instrumento conocido como microtomo con cuchillas
finamente afiladas.
g) Montaje del tejido en el portaobjetos: la cinta de cortes se hace flotar en agua a
temperatura de 50 grados centgrados con el fin de eliminar las arrugas de los
cortes, una vez que se eliminan las arrugas, los cortes se colocan en laminillas
portaobjetos. La superficie de un porta objetos se hace ligeramente adhesiva
frotndola con solucin diluida de albumina de huevo u otro adherente.
h) Desparafinacin: Los cortes montados en la laminilla contienen gran cantidad de
parafina cuyo exceso debe ser eliminado. Esto se logra sometiendo a las laminillas
a temperatura alta de hasta 70 a 80 grados centgrados con el fin de derretir la
parafina y exponer exclusivamente el tejido. El portaobjetos con el tejido embebido
en parafina se sumerge en un agente aclarante para disolver y extraer la parafina.
Despus se introduce en alcohol absoluto para disolver en aclarante en el que
acaba de ser sumergido, enseguida se introduce en soluciones de alcohol
gradualmente menores y finalmente en un recipiente con agua.
i) Tincin: La mayor parte de los colorantes utilizados para teir cortes de tejido se fabrican
con soluciones acuosas o hidrfilas, por lo que la parafina (sustancia hidrfoba) embebida
en las clulas de tejido montado en el portaobjetos debi ser eliminada para lograr que los
colorantes de la tensin pudiesen ser fijados en el tejido. La tincion que mayormente
utilizaremos en el laboratorio de histologa se conoce bajo el nombre de hematoxilina y
eosina, las estructuras de los tejidos que se tien con colorantes bsicos se conocen como
basfilos y son afines a la hematoxilina colorante bsico que tien tono azul o prpura.
Las estructuras de los tejidos que fijan colorantes cidos se conocen como acidofilas, son
afines a la eosina colorante acido que tie rosa o rojo.
j) Montaje de cubreobjetos: Los cortes teidos son colocados en una laminilla cubreobjetos
para su proteccin y conservacin con un adhesivo transparente y resistente que puede
ser resina sinttica o blsamo de canada, sustancias seleccionadas por contar entre sus
caractersticas el tener un ndice de refraccin de la luz similar a la que el vidrio del porta
cubreobjetos la refracta.

PRACTICA 4: Pasos para la creacin de laminilla de frotis de sangre

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PRACTICA 5:

Diferencia entre frotis y la tcnica de parafina:

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En el frotis de sangre, que pasos evitas de la tcnica de parafina y por qu?

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TEMA 3 ARTIFICIOS

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Introduccin
Durante la preparacin de los cortes histolgicos con la tcnica de parafina,
especficamente durante el montaje del tejido sobre el portaobjetos es comn que
se generen ciertas fallas en la preparacin. Debemos aclarar que los artefactos no
son alteraciones que el tejido sufrido en vida, si no posteriores debido a la
manipulacin humana al preparar los cortes imprecisamente. Tenemos entonces
que un artificio es una alteracin no natural del tejido generada artificialmente
durante su preparacin.

PRACTICA 6:

3.1 Pliegues y arrugas:

Se producen por sobre posiciones de tejido, debido a la extrema delgadez del

corte no se puede extender sin lesionarlo. Generalmente ocurre durante el paso 7
de la tcnica de parafina.

3.9 Desgarre:

Cualquier rompimiento del tejido provocado durante su manipulacin.

3.3 Burbujas:

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Se generan al colocar el cubreobjetos sobre el tejido ( paso 10 de la tecnica de
parafina) quedando espacios de aire entre este y el portaobjetos. Al miscroscopio
se observan generalmente como espacios ocupados por aire, circulares,
transparentes, de bordes generalmente regulares en forma de linea negra.

3.4 Retraccin de tejido:

Son porciones de tejido separadas entre artificialmente generando espacios y

cambios en la estructura tisular que in vivo no existen. Las diferentes sustancias
qumicas a las que los tejidos son sometidos, o a la excesiva temperatura de la
parafina fundida (durante los pasos 4 y 5 de la tcnica) son las causantes ms
comunes. Se observan como interrupciones o espacios sinuosos en el tejido, de
bordes irregulares.

3.5 Muescas de cuchilla:

21
Son interrupciones de la continuidad del tejido causado por defectos en el filo de la
cuchilla del micrtomo. Estos ocurren durante el paso 6 de la tcnica cuando la
cuchilla est mal afilada o hay una muesca o melladura en el filo de ella, marcando
una huella recta, de los bordes regulares que va de un lado a otro del corte.

3.6 Cuerpo extrao:

Son partculas ajenas al tejido atrapadas bajo el cubreobjetos durante el proceso

de preparacin de tejido. Se observan al microscopio como puntos negros de
bordes variables, generalmente fuera del plano del tejido en observacin, ya sea
por encima o por debajo de l / esto se puede detectar al modificar finamente el
enfoque de la imagen con el tornillo micromtrico, mostrando la diferencia en la
nitidez de la imagen del tejidop y del cuerpo extrao.

3.7 Precipitado:

22
Es el resultado del fijador que permanece en el tejido en forma de cristales, que
precipitan en los cortes y se tien intensamente. Es secundario a la eliminacin
incompleta del fijador (recordando que este aumenta la afinidad del tejido por la
tincin y se observa al microscopio como formaciones translucidas inusualmente
coloreadas de bordes irregulares y de tamao variable.

3.8 Exceso de tincin:

En el paso 9 de la tcnica de parafina se podra correr el riesgo de que la tincin

se quede atrapada en lugares de la laminilla debido al incorrecto enjuague de la
misma por lo que formara manchas que no permitan la correcta visualizacin de
tejido segn la tincin que sea (azul = hematoxilina, rojo = eosina) .

23
3.2 Pinzamiento:

Durante la manipulacin del tejido puede haber presin excesiva generalmente

provocada con pinzas hemostticas logrando as una mancha oscura en forma
del objeto que los presiono sobre el tejido e incluso segn la fuerza de la presin
podra estar acompaado de pequeos desgarres.

INICIO FINALIZADA

24
PRACTICA 7:

25
INICIO FINALIZADA

26
TEMA 4 CELULA

Introduccin:
Una clula (del latn cellula, diminutivo de cella, hueco) es la
unidad morfolgica y funcional de todo ser vivo. De hecho, la clula es el elemento
de menor tamao que puede considerarse vivo.

PRACTICA 8:

Ncleo:

Forma de ncleo

OVALADO: REDONDO:

27
MUESCA: BILOBULADO:

MULTILOBULADO: OTRAS FORMAS:

28
Ncleos segn su actividad celular:

CARA ABIERTA: PICNOTICOS:

Clula segn nmero de ncleos:

CELULA MULTINUCLEAR:

INICIO FINALIZADA

29
TEMA 5: TEJIDO EPITELIAL

EPITELIOS

Introduccin:
El tejido epitelial se distribuye ampliamente en el organismo, y se encuentra
cubriendo la superficie del cuerpo, por ejemplo: la piel, cavidades (fosas nasales,
cavidad bucal, aparato digestivo y respiratorio) tambin forma pelos, uas y toma
parte en formacin de glndulas.

Est constituido por clulas con caractersticas constantes, independientes

de la funcin que cumple (proteccin o secrecin) y son:

a) Ausencia de sustancias intercelular

b) Presencia de membrana basal
c) Unin entre clulas
d) Polaridad de celula epitelial
e) Ausencia de vasos linfticos y sanguneos
f) Presencia de terminacin nerviosas
CLASIFICACIN:

Para su clasificacin se tomaran en cuenta si las membranas epiteliales de

cubierta o revestimiento estn formadas por un solo estrato o capa o por varios
estratos, adems se tomara en cuenta la forma de las clulas que lo constituyen.

30
PRACTICA 9

OBJETIVO GENERAL:

El alumno observara cortes de tejido epitelial que se estudien al microscopio.

OBJETIVO ESPECIFICO

El alumno identificara y esquematizara los diferentes epitelios:

A) Epitelio plano simple:

B) Epitelio cubico simple:

31
C) Epitelio cilndrico simple

D) Plano estratificado no queratinizado

E) Plano estratificado queratinizado

F) Epitelio cubico estratificado

32
 G) Epitelio de transicin:

H) Epitelio pseudoestratificado ciliado

GLANDULAS
INICIO FINALIZADA

33
 Las glndulas exocrinas, endocrinas y mixtas representan la segunda
subdivisin del tejido epitelial y estn constituidas por un estroma formado por
tejido conectivo que nutre y sostiene a la glndula y un parnquima que
representan la parte funcional de la glndula, formado por clulas epiteliales
especializadas en secretar diversas sustancias y por conductos que conducen
dicha secrecin al exterior y algunas que no presentan conductos como en el caso
de glndulas endocrinas.

Las endocrinas almacenan su secrecin en el citoplasma de las clulas

parenquimatosas; al liberarla de los intersticios pasa al torrente circulatorio y por
este es conducida a los rganos blanco, excepto la glandula tiroides que presenta
folculos de donde se almacena su secrecin.
Las glndulas mixtas que invierten su secrecin hacia la sangre y por medio
de conductos al exterior.

PRACTICA 10:

34
OBJETIVO GENERAL.
El alumno observara los cortes de tejido de diferentes glndulas, identificara
y esquematizara cada una de las glndulas que se presenten en las diferentes
laminillas de tejido glandular.

A) GLANDULAS EXOCRINAS

A.1 Glndula exocrina mucosa multicelular (merocrina)

A.2 Glndula exocrina mucosa unicelular (merocrina)

35
A.3 Glndula exocrina serosa (merocrina)

A.4 Glndula exocrina sero-mucosa (merocrina)

A.5 Glndula exocrina sebcea (holocrina)

36
 B) GLANDULAS ENDOCRINAS

B.1 Disposicin en cordones:

B.2 Disposicin folicular

B.3 Disposicin en acmulos

37
 C) GLANDULAS EXO-ENDOCRINAS

C.1 Pncreas

C.2 Hgado

INICIO FINALIZADA

38
 REPASO

1. ________________________________________________________________

2. ________________________________________________________________

3. ________________________________________________________________

4. ________________________________________________________________

5. ________________________________________________________________

6. ________________________________________________________________

7. ________________________________________________________________

8. ________________________________________________________________

9. ________________________________________________________________

10. ________________________________________________________________

11. ________________________________________________________________

12. ________________________________________________________________

13. ________________________________________________________________

14. ________________________________________________________________

15. ________________________________________________________________

39
TEMA 6: TEJIDO CONECTIVO
El tejido conectivo es el principal constituyente del organismo. Se le considera
como un tejido de sostn puesto que sostiene y cohesiona a otros tejidos dentro
de los rganos, sirve de soporte a estructuras del organismo y proteje y aisla a los
rganos. Adems, todas las sustancias que son absorbidas por los epitelios tienen
que pasar por este tejido, que sirve dems de va de comunicacin entre distintos
tejidos, por lo que generalmente se le considera como el medio interno del
organismo.

Clasificacin:

40
 6.1 TEJIDO CONECTIVO ORDINARIO:

El tejido conectivo laxo se caracteriza por una proporcin relativamente alta de

clulas en una matriz de fibras colgenas finas y escasas.

El tejido conectivo denso se caracteriza por el alto contenido de sustancia

intercelular, escasas clulas particularmente fibrocitos, pocos vasos sanguneos y
abundante fibra de colgena. Las fibras de colgeno tienen muy alta resistencia
tensil, por esta razn y estructuras que tienen muy alto contendi de estas fibras,
constituyendo as el tejido conectivo denso.

La forma habitual en que se clasifica el tejido conectivo denso es en: regular e

irregular, dependiendo de la organizacin espacial de las fibras. Cuando todos lo
haces de fibras de colgenas (y el eje mayor de los fibrocitos) estn dispuestos en
forma paralela, hablamos de tejido conectivo denso en disposicin regular. El
ejemplo clsico de este tipo de tejidos son los tendones y los ligamentos
articulares. El tejido conectivo denso de disposicin irregular carece de ese
paralelaje de los haces fibrosos los cuales se encuentran orientados en
prcticamente cualquier direccin. El ejemplo caracterstico de este tipo de tejido
es la dermis reticular.

El tejido adiposo, por un lado cumple funciones mecnicas: una de ellas es servir
como amortiguador, protegiendo y manteniendo en su lugar los rganos internos
as como a otras estructuras ms externas del cuerpo, y tambin tiene funciones
metablicas.

El tejido adiposo, que carece de sustancia fundamental, se halla dividido por finas
trabculas de tejido fascicular en lbulos.

PRACTICA 11

A. Tejido Conectivo Laxo:

41
B. Tejido Conectivo Denso irregular:

C. Tejido Conectivo Denso regular:

D. Tejido Adiposo.

INICIO FINALIZADA

42
 6.2 TEJIDO CONECTIVO ESPECIALIZADO:

Est formado por clulas hemticas las cuales representan una categora de
clulas libres de tejido conectivo.

Son producidas por los tejidos hematopoyticos y se encuentran en el torrente

sanguneo donde quedan suspendidas en el plasma.

La sangre se divide en sustancia amorfa (plasma) y elementos formes.

Los elementos formes se dividen en 3 grupos:

1. Glbulos rojos o eritrocitos.

2. Glbulos blancos o leucocitos.
3. Plaquetas.

OBJETIVO GENERAL.

El alumno observara frotis de sangre perifrica, identificara, esquematizara cada

una de las laminillas que se le presenten de las diversas estructuras o clulas que
conforman el tejido hemtico.

1. Glbulos rojos o eritrocitos

a. Forma bicncava
b. Clula sin ncleo
c. Color rojizo
d. Son las mas abundantes
2.
a. Neutrfilos
i. Forma redondeada
ii. Ncleo segmentado de 2 a 5 lbulos conectados por finas
fibras de cromatina
iii. Los grnulos citoplasmicos no son afines a colorantes cidos
o bsicos (neutrfilo)
b. Eosinofilo
i. Forma redondeada
ii. Ncleo bilobulado
iii. Los grnulos citoplasmicos son afines a colorantes cidos
(eosinofilos)
c. Basfilo
i. Forma redondeada
ii. Ncleo bilobulado

43
 iii. Los grnulos citoplasmicos son afines a colorantes bsicos
(basfilos)
d. linfocitos se clasifican en dos grupos
i. linfocitos pequeos
1. Forma redondeada
2. Ncleo un lbulo pignotico
3. Escaso citoplasma
ii. linfocitos grandes
1. Forma redondeada
2. Ncleo de lbulo de clula joven
3. Abundante citoplasma
e. monocito
i. Forma redondeada
ii. Ncleo de forma variable (ovoide, arrionado o herradura)
iii. Citoplasma abndate
3. Plaquetas
a. Tiene forma de disco
b. Son muy pequeas
c. Son anucleadas

PRACTICA 12

A. SANGRE PERIFERICA

A.1 Eosinfilo:

A.2 Neutrfilo:

44
A.3 Linfocito:

A.4 Basfilo:

A.5 Monocito:

A.6 Eritrocitos y plaquetas

45
B. TEJIDO HEMATOPOYETICO:

B.1 Medula sea:

B.2 Megacariocito:

INICIO
B.3: TEJIDO LINFATICO FINALIZADA

46
Los rganos linfticos se clasifican en: centrales o primarios o perifricos o
secundarios, los centrales son los sitios de produccin autnoma de nuevos
linfocitos, como medula sea y timo. Los perifricos son sitios en que los linfocitos
responden a los antgeno: como ganglios, bazo, amigadlas y otros tejidos linfoides
propios de las mucosas. Los rganos linfticos tambin se clasifican en:

Encapsulados.- Timo, Ganglio linftico y Bazo.

No encapsulados.- Placas de Peyer, Amgdalas y Apndice.

OBJETICO GENETAL.

El alumno observara los cortes de tejido de los diferentes rganos linfticos,

identificara y esquematizara cada una de las laminillas que se le presenten de las
diversas estructuras que conforman el tejido linftico.

B.3.1 TEJIDO NO ENCAPSULADO

Practica 13 Caractersticas del tejido linfoide

Practica 14

47
B.3.1.1 Amigdala

4x

40x

B.3.1.2 Apndice
4x

10x

48
B.3.2 TEJIDO ENCAPSULADO

B.3.2.1 Timo

10x

40x

B.3.2.2 Bazo
4x

49
40x Medula roja

40x Medula blanca

50
 B.3.2 .3 Ganglio Linftico

4x

6.3 TEJIDOO DE SOSTEN

INICIO FINALIZADA

51
 6.4 TEJIDO CONECTIVO DE SOSTEN

A. TEJIDO CARTILAGINOSO

Se trata de una forma especializada de tejido conectivo denso constituido por

clulas llamadas condrocitos, estos se encuentran en espacios conocidos como
lagunas, cuando se unen ms de un condrocito se denominan nidos celulares.
Adems fibras extracelulares embebidas en una matriz con aspecto gelatinoso, de
reaccin basfila; el cartlago es a vascular y carece de nervios; est envuelto por
un tejido fibroso denso llamado pericondrio.

Se distingue tres tipos de cartlago.

1. Hialino
2. Elstico.
3. Fibroso.

El cartlago hialino es el ms frecuente caracterstico y los otros se consideran

modificaciones de este.

OBJETIVO GENERAL

El alumno observa, cortes de tejido de los diferentes tipos de cartlago y sus

caractersticas.

Practica 14:

A.1 Cartlago hialino

52
A.2 Tejido seo

Tejido seo constituye un tipo especial de tejido conectivo denso de gran dureza y grandes
depsitos de hidroxiapatita, constituye el esqueleto del organismo. Sus caractersticas
particulares, su forma de desarrollo y sus tipos celulares constituyen un tejido importante y
especial que requiere se ha estudiado con gran detalle.

El tejido seo provee al esqueleto de su necesaria fortaleza para funcionar como sitio de insercin
y sostn de peso para los msculos y dar cierta rigidez al organismo para protegerlos de la fuerza
de gravedad, adems tiene funcin de proteccin al rodear con una coraza protectora al cerebro y
la medula espinal, parte de los rganos del trax y del abdomen.

El tejido seo se organiza de dos formas distintas en los huesos. El tejido seo esponjoso est
compuesto por finos listones u hojas, las trabculas que se entrecruzan en distintas direcciones y
forman un reticulado esponjoso cuyos espacios vacos intercomunicantes estn ocupados por la
medula sea. Ejemplo, la epfisis de los hueso largos. El tejido seo compacto est formado por
una masa compacta sin espacios o huecos visibles. Ejemplo la difisis de los huesos largos.

OBJETIVO GENERAL.

El alumno tendr un panorama ms amplio del tema al tener oportunidad de observar en forma
prctica cortes de hueso. Identificara y esquematizara cada una de las laminillas que se le
presenten de los diversos tipos de huesos.

A.2.1 Hueso compacto

53
A.2.1 Hueso esponjoso

A.2.1 Sistema Havers

INICIO FINALIZADA

54
TEMA 7: TEJIDO MUSCULAR

INTRODUCCION

El TEJIDO MUSCULAR es uno de los tejidos fundamentales de cuerpo

humano de la funcin de contractibilidad alcanza su mxima expresin.

El tejido muscular se clasifica en:

1. Musculo liso, involuntario o visceral
2. Musculo estriado o voluntario o esqueltico
3. Musculo estriado involuntario o cardiaco

Objetivo
El alumno observara, cortes reales de tejido muscular y de esta manera
complementara sus conocimientos tericos previamente adquiridos
fibras musculares.

Practica 15
7.1 Musculo Liso

55
7.2 Musculo Estrado esqueltico

7.3 Musculo Cardiaco

TEMA 8: TEJIDO NERVIOSO

56
INTRODUCCION

El tejido nervioso forma un sistema de clulas altamente especializadas que

se encargan de efectuar la comunicacin entre los tejidos bsicos del organismo.
Se desarrolla a partir de la placa neural del ectodermo y da origen a las
diferentes estructuras anatmicas que forma el Sistema Nervioso.
La unidad anatmica y fisiolgica del tejido nervioso es la Neurona

OBJETIVO GENERAL

El alumno complementara los conocimientos tericos con la observacin de

cortes de tejido nervioso.

OBJETIVOS ESPECIFICOS
El alumno identificara y esquematizara los diferentes cortes de tejido
disponibles en el laboratorio.

A. Cerebro

B. Cerebelo

57
C. Medula espinal

INICIO FINALIZADA

58
 REPASO

16. ________________________________________________________________

17. ________________________________________________________________

18. ________________________________________________________________

19. ________________________________________________________________

20. ________________________________________________________________

21. ________________________________________________________________

22. ________________________________________________________________

23. ________________________________________________________________

24. ________________________________________________________________

25. ________________________________________________________________

26. ________________________________________________________________

27. ________________________________________________________________

28. ________________________________________________________________

29. ________________________________________________________________

30. ________________________________________________________________

http://enebro.pntic.mec.es/fmag0006/Prism301.html

59