Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
Cuantitativos, Cualitativos y
SemiCuantitativos en el Lab. Clnico
Norma NCh2547.Of2008
(ISO 15189)
VALIDAR VERIFICAR
Validacin
LL
LL = L. de linealidad
LC LC = L. de Cuantificacin
LD = L. de Deteccin
LD
Intervalo
lineal
Concentracin
Anlisis Cuantitativo
- LINEALIDAD
Capacidad del mtodo analtico de obtener resultados
linealmente proporcionales entre la concentracin del analito
y su respuesta.
Anlisis estadstico:
*Curva regresin y = a + b x
*Coeficiente de determinacin r2
*Anlisis de varianza (regresin) con
Si p>0,05 es
significativo y por Estimacin falta de ajuste
ende los datos Error residual puro.
tienden a ser lineales.
Etapas De La Regresin
1 Seleccin del modelo: Normalmente una lnea recta
y=a +bx
(donde a es la pendiente de la recta y b la ordenada al origen)
1200
1000
800
LECTURA
600
400
200
0
0 2 4 6 8 10 12
CONCENTRACION mg/dL
Curva Calibracin IgG
INMUNONEFELOMETRA
3.4
3.2
log lectura
3
2.8
2.6
2.4
2.2
2
-0.5 -0.1 0.3 0.7 1.1
log conc.
Precisin
v/s
Exactitud
Precisin v/s Exactitud
Exactitud
Grado de concordancia entre el resultado de
una medicin y el valor de referencia aceptado
o verdadero.
* Nota: El trmino exactitud cuando se
aplica a un conjunto de resultados de
mediciones implica la combinacin de
los componentes aleatorios y de un
error sistemtico comn o de un
componente de sesgo (Norma ISO
5725-1 e ISO 3534-1)
Exactitud
(Norma ISO 3534-1)
Media
Desviacin estndar
Coeficiente de variacin
Anlisis de varianza F (comparacin de la desviacin
estndar)
Muestra Contramuestra
n 6 6
Media 1557.50 1554.67
s 52.129 82.199
CV 3.347 % 5.287 %
PRECISIN
REPRODUCIBILIDAD:
Es la medida de la precisin de los resultados de un
mtodo analtico efectuado sobre el mismo analito, pero
en condiciones diferentes (diferentes equipos utilizados,
el operador, el perodo de tiempo, etc.)
Reproducibilidad
Inmunonefelometra para
Determinacin de IgG
IgG mg/dL
DA 1 DA 2 DA 3
Anlisis de Varianza
--------------------------------------------------------------------------------------
Fuente var. SC gl CM F P
--------------------------------------------------------------------------------------
Entre grupos 1496,78 2 748,389 0,28 0,7626
Intra grupos 40682,8 15 2712,19
--------------------------------------------------------------------------------------
Total (Corr.) 42179,6 17
ANLISIS CUANTITATIVO
VALIDACIN
VERACIDAD:
Grado de concordancia entre el valor medio
obtenido de una serie de resultados y el valor de
referencia aceptado (certificado). Norma ISO 3534
Anlisis estadstico
Media experimental
Desviacin estndar experimental
Prueba de t de Student
VERACIDAD INMUNONEFELOMETRIA
PARA DETERMINACIN DE IgG
n
gl = n - 1 (grado libertad)
nivel = 0,05
U MRC IgG exp. = 7,9 mg/dL
Anlisis Cuantitativo
Validacin
SELECTIVIDAD / ESPECIFICIDAD
Ejemplos:
Fluorescena, EDTA , Azida de
Sodio, Lpidos, Complemento,
Fibringeno, Albmina
Deteccin y Control de
Interferencias
LL
LC
LL = L. de linealidad
LD LC = L. de Cuantificacin
LD = L. de Deteccin
Intervalo
lineal
Concentracin
Anlisis Cuantitativo
Validacin
SENSIBILIDAD
Es la capacidad de un mtodo analtico de
registrar ligeras variaciones de la concentracin.
b
Sensibilidad
b = Pendiente obtenida desde la regresin lineal.
ROBUSTEZ:
5 Procedimiento de validacin
5.1 Los laboratorios de ensayo y los organismos de acreditacin
deben contar con procedimientos y directrices para planificar y
controlar el proceso de validacin de mtodos de ensayo. Sin
embargo, la discusin anterior ha indicado claramente que no
puede desarrollarse un procedimiento nico. En consecuencia,
tiene que desarrollarse una gama de diferentes alternativas de
tcnicas de validacin. Cun detallada deba ser la validacin,
depende de las circunstancias (necesidades, costos, posibilidades,
riesgos, etc.).
DOCUMENTO A, 0/2 de la Soc. Espaola de
Bioq. Cln. y Patologa Molecular
Sistema de Anlisis
tamizaje cuantitativo
SI
(screening)
Presencia del analito
< 2 ng/mL
Menor experimentacin.
NO
Decisin rpida.
De fcil manejo, porttiles, etc.
Sin necesidad de equipos.
Ahorro.
No se
analiza
Sistemas de Medida Cualitativos
Mtodo Semicuantitativo.
Se basan en una reaccin inmunolgica.
La deteccin puede ser sensorial o
instrumental.
Ej. Bacterias: C. difficile, E. coli .
Ej. Virus: Hepatitis, SIDA, Sarampin, etc.
Ej. Parsitos: Chagas
Autoinmunidad: ENA, AAN, DNA, etc.
Validacin Mtodos Cualitativos
Mtodos Cualitativos
Anlisis Cualitativo / screening
SI / NO
Con probabilidad
de error
Tambin tiene dos valores el primero binario y el
segundo es la probabilidad de error asociada a la
decisin tomada.
Se expresan en trminos probabilsticos.
Requisitos de Calidad
Linealidad. Especificidad.
- Homogeneidad. Sensibilidad.
Precisin: Valor predictivo positivo (VPP).
- Repetibilidad. Valor predictivo negativo (VPN).
- Reproducibilidad. Exactitud diagnstica.
- Robustez. Lmite de corte (cut-off).
Veracidad (exactitud). Incertidumbre o regin de error.
Incertidumbre. Lmite de deteccin.
Limite de deteccin. Robustez.
Lmite de cuantificacin.
Rango de cuantificacin
Selectividad e Interferentes.
Especificidad
Analito Analito
presente ausente
Analito Analito
presente ausente
Desviacin negativa.
El mtodo a validar da un resultado negativo y el
mtodo de referencia da positivo.
Probabilidad de que la muestra conocida como
positiva, d como negativa por el mtodo.
Corresponden a muestras que contienen uno o ms
analitos por encima del valor lmite permitido y que en
prueba de screening dan respuesta negativa.
Se concluye con este resultado previo que la muestra
no contiene el analito en los niveles fijados cuando si
lo contiene.
Falsos Positivos (FP)
Desviacin positiva.
Probabilidad de que la muestra clasificada como
negativa, d como positiva por el mtodo.
Corresponden a aquellas muestras que realmente no
contienen el analito en el nivel definido y que por Ej. la
prueba de screening lo detecta.
Se produce cuando el mtodo a validar proporciona
un resultado positivo sin confirmacin y el mtodo de
referencia da un resultado negativo.
Exactitud Diagnstica
Analito Analito
presente ausente
Limite de cuantificacin??
Nmero mnimo de microorganismos dentro de una
variabilidad definida que pueden determinarse bajo
las condiciones experimentales del mtodo
evaluado.
Aplicado a anlisis microbiolgicos cuantitativos.
Relacionado a la sensibilidad, corresponde al nivel
de concentracin donde la sensibilidad es un 95% y
la probabilidad de error tipo es de un 5%.
Lmite de Corte (cut-off)
Resultados mtodos
Definiciones de Requisitos de
Calidad
Valor del Lmite de Corte (cut-off). Valor de corte del mtodo, dado
principalmente por el fabricante, sobre el cut-off resultados positivos y
bajo cut-off, resultados negativos. Se basa en una dicotoma
(presencia/ausencia, si/no, etc.).
C= 2ng/mL
Definiciones de Requisitos de
Calidad
Regin de Incertidumbre. Corresponde a la imprecisin del
mtodo, es un rango donde encontramos error Tipo I o (Falsos
positivos) y Tipo II o (falsos negativos) del mtodo.
C= 2ng/mL
Definiciones de Requisitos de
Calidad
Regin de Incertidumbre (*CLSI: EP12-A2):
C50: Concentracin del analito donde se produce un 50% de resultados
positivos y un 50% de resultados negativos.
Intervalo C5 C95: Rango de concentraciones requeridas del analito
donde a concentraciones < de C5, son resultados concretamente
negativos y > C95 son concretos positivos.
Normal Enfermo
Nr de individuos
+2SD
Valores
Falsos Falsos Mtodo
Negativos Positivos
Definiciones del ejemplo
Verdaderos Positivos
Sin enfermedad
Resultados mtodos
Con enfermedad
Definiciones del ejemplo
Verdaderos
negativos
Resultados mtodos
Sin enfermedad
Con enfermedad
Definiciones del ejemplo
Falsos
negativos
Resultados mtodo
Sin enfermedad
Con enfermedad
Evaluador de los requisitos de
Calidad
Tablas de Contingencia. Diferencian las muestras en dos
categoras, (+)/(-) segn el mtodo, y establecen una tabla de
comparacin respecto del resultado obtenido mediante el
criterio de exactitud diagnstica analtica.
POSITIVOS VP FP VP + FP
NEGATIVOS FN VN FN + VN
*CLSI: EP12-A2
Tablas de Contingencia
* A. Pulido, I. Ruisnchez, R.
Boqu , F.X. Rius
Sensibilidad vs. Especificidad.
100
80
SENSIBILIDAD
80
SENSIBILIDAD
60
60
40
40
20
20
0
0 0 20 40 60 80 100
0 20 40 60 80 100
ESPECIFICIDAD (Fraccin verdaderos 1-ESPECIFICIDAD (Fraccin falsos
negativos) positivos, FFP)
* http://ludwig-sun2.unil.ch/~darlene/module4/
PROTOCOLO DE VALIDACIN DE UN
- Identificacin MTODO ANALTICO
- Titulo
- Protocolo redactado por
- Protocolo aprobado por
- Objetivo
- Alcance
- Factores crticos
- Seleccin y tratamiento muestra y MRC
- Identificacin equipo: certificado calibracin
- Mtodo analtico:
- Variables a determinar : anlisis estadstico
- Personal que desarrollar la validacin
- Criterio de aceptacin para cada parmetro de desempeo
- Conclusiones
- Registros
- Referencias
INFORME DE VALIDACIN DE UN
- Identificacin MTODO ANALTICO
- Titulo
- Informe redactado por
- Informe aprobado por
- Objetivo
- Alcance
- Responsabilidad
- Equipo, materiales, documentos
- Procedimiento
- Clculos y anlisis estadsticos
- Criterio de aceptacin vs Resultados
- Informe de desviaciones
- Informe resultados y conclusiones de validacin del
mtodo
Cundo Verificar y
cundo Validar ???
VALIDAR VERIFICAR
Gracias