FACULTAD DE INGENIERA DE

PROCESOS

ESCUELA PROFESIONAL DE
INGENIERA QUMICA

TRABAJO DE ANLISIS
INSTRUMENTAL 2
TURNO: JUEVES DE 5 A 7 PM

ESPECTROFOTOMETRA

INTEGRANTES:
JUAN CONDORI ALVARADO

JUAN CARLOS PEREYRA ALI

 TABLA DE CONTENIDO

1 Introduccin ............................................................................................................................... 1

2 Marco conceptual ....................................................................................................................... 1

2.1 Espectrofotometra ............................................................................................................. 2

2.2 Ley de Lambert. : ............................................................................................................... 3

2.3 Ley de Beer : ...................................................................................................................... 4

2.4 Transmitancia (T) : ............................................................................................................. 5

2.5 Absorbancia(A) .................................................................................................................. 5

2.5.1 Mediciones de transmitancia y absorbancia. .............................................................. 6

2.6 Dispositivos y mecanismos ................................................................................................ 6

2.7 Espectrofotmetro .............................................................................................................. 8

2.7.1 Redes de difraccion .................................................................................................... 9

2.8 Tipos de espectrofotometras. .......................................................................................... 10

2.9 Espectrofotometra de absorcin y de emisin atmica. .................................................. 11

2.10 Equipos de espectrofotometra ......................................................................................... 12

2.11 Diseo de equipos ............................................................................................................ 14

2.11.1 Espectrofotmetro de haz simple ............................................................................. 14

2.11.2 Espectrofotmetro de doble haz ............................................................................... 14

2.12 Cmo aprovechar el potencial de estos equipos ............................................................... 15

2.12.1 Buena ubicacin ....................................................................................................... 15

2.12.2 Preparacin de la muestra......................................................................................... 15

2.12.3 Manejo adecuado de las cubetas .............................................................................. 16

3 Discusin .................................................................................................................................. 16

4 Bibliografa .............................................................................................................................. 17
 NDICE DE FIGURAS

Figura 1: Ondas de radiacin electromagntica ................................................................................. 1

Figura 2: el espectro electromagntico............................................................................................... 2

Figura 3: espectro de absorcin de dos compuestos........................................................................... 3

Figura 4: Ley de Lambert ................................................................................................................... 4

Figura 5: Ley de Beer ......................................................................................................................... 4

Figura 6: Estructura bsica de un espectrofotmetro ......................................................................... 6

Figura 7: espectrofotmetro ............................................................................................................... 7

Figura 8: absorbancia de 2 diferentes componentes ........................................................................... 8

Figura 9: partes del espectrofotmetro ............................................................................................... 8

Figura 10: clasificacin de espectrofotometras ............................................................................... 10

Figura 11: espectrofotometra de absorcin atmica ....................................................................... 12

Figura 12: espectrofotmetro de haz simple .................................................................................... 14

Figura 13: espectrofotmetro de haz doble ...................................................................................... 15

Anlisis Instrumental 2 Turno: B

ESPECTROFOTOMETRA

1 INTRODUCCIN

2 MARCO CONCEPTUAL

Las ondas de radiacin electromagntica se componen de crestas y valles, convencionalmente

representadas las primeras hacia arriba y las segundas hacia abajo. La distancia entre dos
crestas o valles se denomina longitud de onda (). La frecuencia de la onda esta determinada
por las veces que ella corta la lnea base en la unidad de tiempo (casi siempre medida en
segundos), esta frecuencia es tan importante que las propiedades de la radiacin dependen de
ella y est dada en Hertz. La amplitud de onda est definida por la distancia que separa el pico
de la cresta o valle de la lnea de base, la energa que transporta la onda es proporcional al
cuadrado de la amplitud. La unidad de medida para expresar estas distancias tan pequeas
entre las crestas es el nanmetro (Figura 1)

Figura 1: Ondas de radiacin electromagntica

Los diferentes tipos de radiacin electromagntica forman en conjunto, el espectro

electromagntico. Estas radiaciones presentan diferentes longitudes de onda que van desde las
de menor longitud de onda, como son los rayos csmicos, los rayos gamma (10 -5 -10 -4 nm))
y los rayos X (10 -4 -10 -1 nm), pasando por la luz ultravioleta (10 -1 -10 2 nm), la luz visible
(desde el rojo 350 nm hasta el violeta 780 nm) y los rayos infrarrojos(10 3 -10 5 nm), hasta las
ondas electromagnticas de mayor longitud de onda, como son las microondas y las ondas de
radio cuyas longitudes de onda estn por encima de 10 5 nm

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

Figura 2: el espectro electromagntico

El principio que rige la espectrofotometra se basa en el empleo de las interacciones entre

la radiacin electromagntica y la materia. La espectrofotometra es uno de los mtodos
analticos de mayor importancia y utilidad en bioqumica ya que permite medir la
cantidad relativa de luz absorbida o transmitida por la materia (ej. molculas biolgicas
en disolucin acuosa: protenas, aminocidos, metabolitos, etc.) medida como
absorbancia (Abs) o transmitancia (%T), respectivamente. (Universidad de Zulia-
Laboratorio de Bioquimica)

Las molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla en forma de energa

interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de
la fotosntesis en plantas y bacterias. La Mecnica Cuntica nos dice que la luz est
compuesta de fotones cada uno de los cules tiene una energa:

= =

Donde c es la velocidad de la luz, V es su frecuencia, es su longitud de onda y h= 6.6 1-

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J.s es la constante de Planck.

Cuando decimos que una sustancia qumica absorbe luz de longitud de onda, esto
significa que las molculas de esa sustancia absorben fotones de esa longitud de onda.

2.1 ESPECTROFOTOMETRA

Espectrofotometra es un mtodo para medir la cantidad de una sustancia qumica absorbe la

luz mediante la medicin de la intensidad de la luz como un rayo de luz pasa a travs de la
solucin de muestra. El principio bsico es que cada compuesto absorbe o transmite la luz a
travs de un cierto rango de longitud de onda. Esta medicin tambin se puede utilizar para
medir la cantidad de una sustancia qumica conocida. Espectrofotometra es uno de los

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

mtodos ms tiles para el anlisis cuantitativo en diversos campos como la qumica, la

fsica, la bioqumica, materiales e ingeniera qumica y sus aplicaciones clnicas. (Vo, 2015)

Otro concepto de espectrofotometra nos dice lo siguiente:

La espectrofotometra es uno de los mtodos de anlisis ms usados, y se basa en la

relacin que existe entre la absorcin de luz por parte de un compuesto y su concentracin.
Cuando se hace incidir luz monocromtica (de una sola longitud de onda) sobre un medio
homogneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y otra transmitida,
como consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea atenuada desde Po a P, siendo Po la
intensidad de la luz incidente y P la intensidad del rayo de luz transmitido. Dependiendo
del compuesto y el tipo de absorcin a medir, la muestra puede estar en fase lquida, slida
o gaseosa. En las regiones visibles y ultravioleta del espectro electromagntico, la muestra
es generalmente disuelta para formar una solucin. Cada sustancia tiene su propio espectro
de absorcin, el cual es una curva que muestra la cantidad de energa radiante absorbida,
Absorbancia, por la sustancia en cada longitud de onda del espectro electromagntico, es
decir, a una determinada longitud de onda de la energa radiante, cada sustancia absorbe
una cantidad de radiacin que es distinta a la que absorbe otro compuesto (Fig. 3) (UNAD)

Figura 3: espectro de absorcin de dos compuestos

El mtodo espectrofotomtrico se rige por dos leyes fundamentales: Ley de Lambert y Ley
de Beer.

2.2 LEY DE LAMBERT. :

Esta ley establece que cuando pasa luz monocromtica por un medio homogneo, la
disminucin de la intensidad del haz de luz incidente es proporcional al espesor del medio,
lo que equivale a decir que la intensidad de la luz transmitida diminuye exponencialmente al
aumentar aritmticamente el espesor del medio absorbente (Fig. 4):

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

Figura 4: Ley de Lambert

La siguiente relacin matemtica da cuenta de esta ley: P / P0 = e kb

Po : Intensidad de la luz incidente

P : Intensidad de la luz transmitida

b : Espesor del medio absorbente

k : Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de onda de la

luz incidente, del espesor del medio absorbente y de la naturaleza del medio.

2.3 LEY DE BEER :

La intensidad de un haz de luz monocromtica disminuye exponencialmente al aumentar

aritmticamente la concentracin de la sustancia absorbente, cuando este haz pasa a travs de
un medio homogneo (Fig. 3).

Figura 5: Ley de Beer

La relacin matemtica que da cuenta de esta ley se muestra a continuacin:

P / P0 = e -kc

Dnde:

Po : Intensidad de la luz incidente

P : Intensidad de la luz transmitida c : Concentracin de la solucin
k : Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de onda de la
luz incidente, de la concentracin de la solucin, y frecuentemente, de la naturaleza del
medio.

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

Ambas leyes se combinan en una sola, generando la Ley de Lambert-Beer

log P0 / P = a b c A=abc

A = log P0 / P = - log T

Dnde:

a : Absortividad
b : Longitud o espesor del medio (longitud de la cubeta)
c : Concentracin de la solucin
P/Po= T : Transmitancia

Los trminos absorbancia y transmitancia son definidos a continuacin

2.4 TRANSMITANCIA (T) :

Es la razn entre la luz monocromtica transmitida (P) por una muestra y la energa o luz
incidente (Po) sobre ella. Tanto la energa radiante incidente como la transmitida deben ser
medidas a la misma longitud de onda.

T = P / P0 = 10-abc %T = 100 P / P0

Se acostumbra a considerar la transmitida como la razn de la luz transmitida por la

muestra y la luz transmitida por un estndar arbitrario. Este estndar puede ser el lquido
(solvente) en que esta disuelta la muestra, aire, blanco analtico (solucin que contiene
todos los componentes de la solucin problema menos la sustancia problema) u otra
sustancia elegida arbitrariamente.

Debido a que la transmitancia de este estndar no es necesariamente 100%, es necesario

especificar el estndar con el cual la muestra es comparada.

2.5 ABSORBANCIA(A)

Se define como la cantidad de energa radiante absorbida por una sustancia pura o en
solucin. Matemticamente, corresponde al logaritmo negativo de la transmitancia.T,
transmitancia expresada como fraccin decimal %T, transmitancia expresada como
porcentaje.

A = - log T = 2 log %T

Pero.

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

T = P / P0 = 10-abc

Luego : A = - log ( P / P0 ) = - log 10-abc

A=abc

Esta ecuacin indica que la absorbancia es una funcin lineal de la concentracin, donde a
es una constante de proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud de a depende de
las unidades de b y c. Si la concentracin c est expresada en moles por litro y la longitud
de la cubeta b en centmetros, la constante a recibe el nombre de absortividad molar ( ) .
Luego:

A=bc

2.5.1 Mediciones de transmitancia y absorbancia.

Las mediciones de absorbancia o transmitancia se hacen por comparacin entre la muestra

problema y un estndar arbitrario o referencia. Como la referencia debe poseer un
porcentaje de transmitancia de 100%, esta es llamada referencia de 100%., o una
absorbancia de cero.

2.6 DISPOSITIVOS Y MECANISMOS

La Figura 1 ilustra la estructura bsica de espectrofotmetros. Se compone de una fuente de

luz, un colimador, un monocromador, un selector de longitud de onda, una cubeta de
solucin de muestra, un detector fotoelctrico, y una pantalla digital o un metro. mecanismo
detallado se describe a continuacin. La Figura 6 muestra un espectrofotmetro de muestra
(modelo: Spectronic 20D).

Figura 6: Estructura bsica de un espectrofotmetro

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

Un espectrofotmetro, en general, consta de dos dispositivos; un espectrmetro y un

fotmetro. Un espectrmetro es un dispositivo que produce, por lo general se dispersa y la
luz medidas. Un fotmetro indica el detector fotoelctrico que mide la intensidad de la luz.

Espectrmetro: Se produce un intervalo deseado de longitud de onda de la luz. En primer

lugar un colimador (lente) transmite una viga recta de luz (fotones) que pasa a travs de un
monocromador (prisma) para dividirlo en varias longitudes de onda componentes
(espectro). A continuacin, un selector de longitud de onda (hendidura) transmite slo las
longitudes de onda deseadas, como se muestra en la Figura 1.

Fotmetro: Despus de que el intervalo deseado de longitud de onda de la luz pasa a travs
de la solucin de una muestra en la cubeta, el fotmetro detecta la cantidad de fotones que
es absorbida y luego enva una seal a un galvanmetro o una pantalla digital, tal como se
ilustra en la Figura 7.

Figura 7: espectrofotmetro

Es necesario un espectrmetro para producir una variedad de longitudes de onda debido a

que diferentes compuestos absorben mejor a diferentes longitudes de onda. Por ejemplo, p-
nitrofenol (forma cida) tiene la absorbancia mxima a aproximadamente 320 nm y p-
nitrofenolato (forma bsica) absorben mejor a 400 nm, como se muestra en la Figura 3.

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

Figura 8: absorbancia de 2 diferentes componentes

2.7 ESPECTROFOTMETRO

El espectrofotmetro. Es el nombre genrico de todos los aparatos basados en esta tcnica. A

este trminos se le aaden los adjetivos adecuados a la subtecnica adecuada, ej.
Espectrofotmetro de absorcin atmica. El espectrofotmetro tiene un generador de
radiacin lumnica (policromca), un separador para obtener la radiacin adecuada y luego
mide la potencia radiante obtenida. Los componentes fundamentales que tienen todos los
espectrmetros son:

Figura 9: partes del espectrofotmetro

Fuente: es el dispositivo emisor de radiacin electromagntica. Generalmente emite una

banda muy amplia de radiaciones continuas alrededor de la l deseada. Segn la zona del
espectro que emite hay tres tipos: Visible: Lmparas de filamento de Tungsteno
incandescente o de Wolframio (halgeno). Son similares a las bombillas comunes.

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

Ultravioleta: Tubo de hidrgeno o de descarga de deuterio. A veces estn refrigerados con

agua para disipar el elevado calor que producen.

Infrarojos: Fuentes especiales de xidos de tierras raras (disprosio, holmio, erbio) o

carburos (de silicio). Estos emiten radiacin en IR (1,5 a 2,0 mm) a elevadas temperaturas
(1000-2000C). Monocromador o selector de l: tiene como objetivo controlar la pureza de
la radiacin emitida consiguiendo el menor ancho de banda de longitud de onda posible.
Consta de un conjunto de lentes, espejos y rendijas para dispersar y separar, enfocar y
restringir la radiacin no deseada. Los componentes de los monocromadores son:
PRISMAS: producen la refraccin de la luz, siendo el ngulo de refraccin mayor cuanto
menor es la l de la radiacin.

Despus del prisma hay una rendija por donde se hace pasar la radiacin deseada. Segn el
tipo de radiaciones se usan prismas de vidrio (VIS), cuarzo o slice (UV) y cristales de
NaCl para IR.

2.7.1 REDES DE DIFRACCION

Es una lmina metlica (Al) altamente pulida sobre la que se han hecho una gran cantidad
de estras (lneas paralelas). Estas estras actan como centros de dispersin de todas las
radiaciones incidentes. Hay una dispersin lineal de las l de una determinada banda
cromtica, por lo tanto se puede usar en todas las regiones del espectro. Funciona mejor
que el prisma en el IR. Celdas para la muestra: recipientes donde se coloca la muestra a
analizar. Varan mucho segn la tcnica a utilizar, pero como caracterstica comn deben
ser transparentes en la regin del que se va a medir. VIS y UV en cubetas cuadradas de
vidrio, cuarzo de 1 cm de lado. IR cubetas de NaCl, AgCl. Detector (transductor):
Produce una seal elctrica cuando recibe un fotn. Esta seal elctrica luego es convertida
en unidades de potencia radiante transmitida o absorbida. Los detectores tambin dependen
de la regin de l en la que se trabaja:

FOTOTUBO. Para la zona del VIS y UV. Con el mismo principio de funcionamiento que
la clula fotoelctrica. Al golpear un fotn en el ctodo, este emite un electrn hacia el
nodo, lo cual provoca un flujo de corriente elctrica que es medida por un voltmetro. La
respuesta del material foto emisivo depende de la l, por tanto se usan diferentes tipos de
fototubos segn la l en la que se trabaja. Cuando se utilizan radiaciones de baja intensidad
la seal elctrica es muy dbil y sujeta a un gran error.

En este caso se utiliza el tubo FOTOMULTIPLICADOR, que incluye varios fototubos en

serie. En este caso, el choque de un fotn forma una cascada de electrones que dan una
seal ms intensa.

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

FOTODIODO ARRAY: Sobre un semiconductor se fabrican diodos en serie paralelos, de

manera que al incidir sobre l una radiacin difractada, se puede tener una seal
instantnea para un amplio rango del. INFRAROJO. Los detectores de infrarrojos se basan
en la propiedad trmica de estas radiaciones y traducen el calor asociado a la radiacin
transmitida en una seal elctrica. Los ms utilizados son los TERMOPARES y
BOLOMETROS, formados por metales cuya resistencia elctrica cambia con la
temperatura. Registrador: En los instrumentos ms antiguos la seal se mostraba en un
medidor de aguja que tena una escala en unidades de transmitancia y de absorbancia. Los
instrumentos ms modernos tienen un display digital, en el que aparece el valor numrico
de absorbancia o el valor de concentracin cuando puede realizar automticamente los
clculos de calibracin. En el caso de obtener el espectro de absorcin (en un intervalo de
l) de una sustancia, el registrador nos muestra un grfico con el valor de l en abscisas y la
absorbancia en ordenadas.

2.8 TIPOS DE ESPECTROFOTOMETRAS.

En la tabla siguiente se muestra una clasificacin de los principales tipos de

espectrofotometras agrupados segn el tipo de interaccin luz-molcula (absorcin o
emisin) y segn la zona del espectro en la que se trabaja. Y a continuacin se describen las
caractersticas principales de cada tipo, los instrumentos utilizados y las aplicaciones
analticas ms importantes. (De La Torre)

Figura 10: clasificacin de espectrofotometras

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

2.9 ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN Y DE EMISIN ATMICA.

Permite la determinacin (cuantificacin) de unos 70 elementos qumicos en

concentraciones que oscilan entre ppb a ppm. La medida de los elementos qumicos se hace
en estado atmico mediante una atomizacin de la muestra en estado gaseoso. Estos tomos
experimentan absorcin, emisin o fluorescencia de radiaciones VIS, UV o rayos X, debidas
a transiciones electrnicas entre orbitales atmicos. Esta tcnica no da informacin sobre
enlaces moleculares en absoluto y nos da informacin especfica sobre un elemento qumico.
La principal diferencia con las otras espectrometras es la atomizacin, proceso por el cual la
muestra se introduce en un mechero, junto con el combustible, y se quema a elevada
temperatura. Las molculas del analto se rompen totalmente liberando los elementos
qumicos en estado atmico, y estos pueden experimentar fenmenos de absorcin, emisin
o fluorescencia. En la figura siguiente se muestra un esquema de estas posibilidades. Segn
el sistema de atomizacin, y la temperatura a la que se produce, se tienen los siguientes
mtodos de espectrofotometra atmica: llama, electro trmico, plasma, arco voltaico y
chispa elctrica. Espectrofotometra de absorcin atmica con llama. Es el mtodo ms
utilizado de la espectrofotometra atmica. Muy adecuado para la determinacin de ppm de
Fe, Cd, Au, Pb, Zn, Cu, Mn en disoluciones acuosas de aguas, fertilizantes, suelos, extractos
vegetales, etc. Los tomos en la llama absorben radiacin de determinadas l (VIS y UV)
segn su naturaleza, por lo que es una tcnica muy especfica para cada elemento. La
absorcin en la llama sigue la ley de Beer, pero en la prctica es necesario hacer un calibrado
con disoluciones patrn de las que se obtienen valores de absorbancia y que permiten
calcular la recta de calibrado. El instrumento se denomina Espectrofotmetro de Absorcin
Atmica (EAA). En ingls: Flame Atomic Absorption Spectrophotometer (F)AAS.

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

Figura 11: espectrofotometra de absorcin atmica

2.10 EQUIPOS DE ESPECTROFOTOMETRA

SEGN ISO 3632

Capaces de medir la absorbancia entre 200 y 700 nm (3632 2 1431) ISO/TS 3632-2, 14.3.1)

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

Nos permite:

Dar informacin sobre la naturaleza de la muestra.

Espectro tpico de un extracto acuoso azafrn

Sustancias extraas

Indicar indirectamente la cantidad de la sustancia que nos interesa que est presente en la
muestra. Por ejemplo, crocinas.

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

Cubeta de slice de 1 cm (ISO/TS 3632-2, 14.3.2)

2.11 DISEO DE EQUIPOS

2.11.1 Espectrofotmetro de haz simple

Necesita una fuente estabilizadora de voltaje para evitar errores que resultaran de
variaciones en la intensidad del haz entre la medida del blanco y la de la muestra

Figura 12: espectrofotmetro de haz simple

2.11.2 Espectrofotmetro de doble haz

Compensan todas las fluctuaciones de la radiacin de la fuente, as como la deriva del

detector y del procesador
Compensan las variaciones de las distintas longitudes de onda procedentes de la fuente
El diseo se adapta bien a un registro continuo de los espectros de transmitancia o de
absorbancia

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

Figura 13: espectrofotmetro de haz doble

2.12 CMO APROVECHAR EL POTENCIAL DE ESTOS EQUIPOS

2.12.1 Buena ubicacin

Sobre una base firme y sin vibraciones

En un ambiente libre de polvo y de agentes corrosivos
Sin recibir directamente la luz del sol
Con temperatura constante (15-35 C)

2.12.2 Preparacin de la muestra

Sin partculas en suspensin

Filtrada

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

2.12.3 Manejo adecuado de las cubetas

Son dispositivos pticos, forman parte del sistema ptico del equipo con el que se usan
La calidad de los datos depende de su manejo y conservacin
Cogerlas por las superficies esmeriladas
Protegerlas de araazos
Evitar agentes de limpieza abrasivos Asegurarse de que no quedan burbujas
Calibrar y medir con cubetas del mismo tipo y colocarlas con la misma orientacin

Existen muchos aparatos de espectrofotmetra, cada uno presentara alguna caracterstica

especial, luego siempre que utilicemos por primera vez un aparato demos consultar el libro
de instrucciones.

De forma general, los pasos a seguir son los siguientes:

Conectar el aparato a red.

Encender la lmpara.
Seleccionar la longitud de onda deseada.
Ajustar el cero.
Realizar el blanco.
Medir la absorbancia de estndares y muestras.
Desconectar el aparato.

3 DISCUSIN

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Anlisis Instrumental 2 Turno: B

4 BIBLIOGRAFA

Caprette, D. (12 de Junio de 2015). RICE - Unconventional Wisdom. Recuperado el 2 de

Noviembre de 2016, de
http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/methods/protein/spectrophotometer.html
De La Torre, F. (s.f.). Recuperado el 3 de Noviembre de 2016, de
http://www.bioquimica.ucv.cl/paginas/central/bioquimica%20clinica/apuntes%20de%20es
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UNAD. (s.f.). Recuperado el 29 de Octubre de 2016, de
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/358005/Fundamentos_de_espectrofotometria.pdf
Universidad de Zulia- Laboratorio de Bioquimica. (s.f.). Recuperado el 1 de Noviembre de
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http://www.fcv.luz.edu.ve/images/stories/catedras/bioquimica/04_introducci%C3%B3n_es
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Vo, K. (22 de Julio de 2015). Chemistry LibreTexts. Recuperado el 4 de Noviembre de
2016, de
http://chem.libretexts.org/Core/Physical_and_Theoretical_Chemistry/Kinetics/Reaction_R
ates/Experimental_Determination_of_Kinetcs/Spectrophotometry

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