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1. Preparamos el agar
Las placas las preparamos 3 das antes. Almacenamos 2 das a temperatura
ambiental y luego bajo refrigeracin hasta el momento de su uso. Los dos das
a temperatura ambiente secamos el agar para favorecer la captacin de la
solucin de transformacin. Para preparar el agar, aadimos 500 ml de agua
destilada a un matraz Erlenmeyer de 1 litro. Aadimos el contenido del paquete
de agar LB. Agitamos el matraz para disolver el agar, y calentamos hasta
ebullicin en el microondas. Volvimos a agitar y calentar unas tres veces ms
hasta que el agar se disolvi, teniendo cuidado de dejar enfriar el matraz antes
de agitarlo, para evitar que el medio caliente saltara a la mano. Cuando el agar
se disolvi, dejamos enfriar hasta que el matraz se puedo tocar sin quemarse
(50 C). Mientras se enfriaba el agar, etiquetamos las placas y preparamos la
arabinosa y la ampicilina como se indic a continuacin. Tuvimos cuidado de
que el agar no se enfriara tanto para que no se solidificara.
Lo que observamos fue que f. E. coli produjo colonias de color crema, redondas y
de bordes lisos.
3.
Pusimos los tubos en hielo.
4. Con un asa de siembra estril cogimos una colonia de la placa. Abrimos el tubo
+pGLO e introducimos el asa en la solucin de transformacin. Giramos el asa
entre los dedos ndice y pulgar hasta que la colonia se disperso totalmente en la
solucin de transformacin (sin que quedara fragmentos flotantes).
7. Mientras que los tubos permanecan en el hielo, etiquetamos las placas de agar
en la base de la forma: una placa LB/amp y una LB/amp/ara como +pGLO, y otra
LB/amp y otra LB/amp/ara como pGLO.
10. Agitamos los tubos golpendolos con el dedo. Con una pipeta estril para cada
tubo, pasamos 100 ml de cada tubo a las placas correspondientes.
11. Despus sembramos Usando un asa de siembra estril para cada tubo,
extender el lquido por toda la superficie de la placa, haciendo estras en el agar en
todos las direcciones.
12. por ltimo hicimos una columna con las placas sujetndolas con cinta adhesiva.
Las etiquetamos por la placa inferior, y metimos en la incubadora a temperatura
ambiente en posicin invertida hasta el da siguiente.