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UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRES

FACULTAD DE INGENIERIA
INGENIERIA QUIMICA
MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

PRODUCCION DE
BIOFERTILIZANTES A
PARTIR DE RHIZOBIUM
INTEGRANTES:

-ARANO AQUIZE ALENKA

-ESPEJO LIMACHI JHUDIT

-PACARI RUIZ MARIBEL

-RAMOS RICARDO RUBEN

-VALENCIA ROMERO SILVIA


ADRIANA

DOCENTE:

ING. LUIS CHAVEZ

FECHA:

27/09/2017

LA PAZ BOLIVIA

2017
CONTENIDO

1. Objetivos
1.1. Objetivo general
1.2. Objetivo especfico
2. Introduccin

3. Marco Terico

3.1 Importancia de la fijacin biolgica de nitrgeno (FBN) en leguminosas

3.2 Simbiosis Rhizobium-leguminosas

3.3. Proceso de nodulacin

3.4. Vehculos utilizados para la inmovilizacin de microorganismos

3.5 Formulaciones de inoculantes rizobianos

3.6. Ciclo del Nitrogeno

3.7.Biofertilizante

3.8.Ventaja de los Biofertilizantes

3.9.Principales aplicaciones.

4. Proceso de elaboracin del biofertilizante a partir del Rhizobium

4.1.Diagrama de flujo

5.Conclusiones

6.Bibliografa

7. Anexos

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PRODUCCION DE BIOFERTILIZANTES A PARTIR DE RHIZOBIUM

1. OBJETIVOS
1.1. OBJETIVO GENERAL.
Dar a conocer el proceso de produccin de biofertilizantes a partir de
la bacteria del genero Rhizobium.

1.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS


- Conocer el proceso de nitrificacin de las plantas
- Dar a conocer las ventajas que se obtienen al usar biofertilizantes
en lugar de los fertilizantes qumicos.
- Estudiar las caracteristicas de las bateras del genero Rhizobium

2. INTRODUCCIN
El desarrollo de nuevas formulaciones de rizobios con materiales polimricos
mediante la aplicacin de tcnicas de recubrimiento, brinda grandes ventajas
como la de controlar la liberacin del ingrediente activo, ofrecer proteccin
frente a las condiciones ambientales; adems de permitir mantener viables las
clulas microbianas sin la prdida de las capacidades metablicas y
fisiolgicas.

La fijacin de nitrgeno es uno de los procesos ms importantes para


mantener la vida en el planeta, pues proporciona alrededor del 70% de todo el
nitrgeno requerido en los ecosistemas naturales y en los agroecosistemas.

La inoculacin con bacterias formadoras de ndulos es utilizada en diversos


pases a fin de evitar la dependencia de fertilizantes minerales.

Qu son los fertilizantes?, Son productos a base de microorganismos


benficos (bacterias y hongos) que ayudan en el proceso natural de nutricin
de la planta. No contaminan ni degradan la capacidad productiva del suelo.
Asimismo, protegen las races de la planta contra patgenos. La nutricin
biolgica de la planta es una forma ms eficiente y econmica de fertilizacin
(el 10% del costo de la qumica).

Adems, estos biofertilizantes son compatibles con los fertilizantes qumicos,


se pueden combinar para logra un uso ms racional del qumico, disminuyendo
los niveles de desperdicio y de contaminacin.

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3. MARCO TERICO
3.1. Importancia de la fijacin biolgica de nitrgeno (FBN) en
leguminosas.

-La FBN es el proceso que transforma el nitrgeno de la atmosfera, que es inerte,


a una forma biolgicamente til, siendo este la principal entrada al ecosistema
desrtico. Qumicamente, es parecido al proceso de Haber Bosch(N2 + 2H2
2NH3, 500C y 350 atm),el cual es un mtodo comercial de produccin de
amoniaco para fertilizantes nitrogenados, consumiendo una gran cantidad de
energa, estimndose que se necesitan 1,5 Kg. de combustible por cada Kg. de
nitrgeno fijado. Lo anterior implica un alto costo econmico y as mismo, en la
agricultura afecta considerablemente el suelo hacindose insostenible por su
continuo uso reflejndose en bajos rendimientos en los cultivos.

El proceso de FBN es utilizado en la naturaleza por diferentes gneros


bacterianos. Las plantas se benefician de este proceso cuando las bacterias
mueren y liberan el nitrgeno al suelo cuando las bacterias viven en estrecha
asociacin con las plantas. Resaltando esta asociacin simbitica, la cual se
presenta en los cultivos de leguminosas. Estos microorganismos, denominados
rizobios, viven en los ndulos de las plantas fijando el nitrgeno en forma de
amonio, que es absorbido por las plantas. Si bien existe una amplia gama de
organismos y asociaciones vegetales que son capaces de fijar N2 de la atmsfera,
pero la relacin simbitica entre rizobios y leguminosas es responsable de
contribuir con la mayor cantidad de nitrgeno fijado en especies agrcolas. Las
leguminosas de grano contribuyen con ms de 20 millones de toneladas de N2
fijado a la agricultura de cada ao. Por lo tanto, la importancia de la FBN como el
principal mecanismo para el reciclaje de nitrgeno de la atmsfera a formas
disponibles en la biosfera no puede ser exagerada. La fijacin de nitrgeno en la
biosfera se estima en unos 275 millones de Tm. anuales, de los cuales 30
corresponden a causas naturales, 70 a fijacin industrial y 175 al proceso de
fijacin biolgica, haciendo parte de esta microorganismos diazotrficos de vida
libre, asimbiticos y simbiticos. Las entradas en los ecosistemas terrestres de
FBN a partir de la relacin simbitica entre leguminosas y sus rizobios es de
70.000.000 toneladas de N2/ha/ao. Esta cantidad puede aumentarse en la
medida que la poblacin mundial se incremente y las fuentes naturales que suplen
los fertilizantes nitrogenados disminuyan.

El empleo elevado de fertilizantes nitrogenados representa una carga


medioambiental, que incluye la contaminacin del aire, la lluvia cida,
contaminacin del agua por nitrato, as como eutrofizacin y reduccin de la

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biodiversidad. Las grandes aplicaciones de fertilizantes nitrogenados para
maximizar la produccin en los pases desarrollados slo exacerbarn estos
problemas, mientras que en los pases subdesarrollados el alto costo y los
problemas de distribucin continuarn siendo las limitantes. Esto indica que la
fijacin biolgica del nitrgeno por microorganismos, especialmente los de tipo
simbiticos, proporcionan una alternativa econmica, viable y ecolgicamente
sana que pudiera contribuir a mitigar esta problemtica de forma sustentable

Aproximadamente el 80% del nitrgeno fijado biolgicamente en la agricultura,


proviene de la simbiosis entre las leguminosas y las especies de Rhizobium,
Bradyrhizobium, Sinorhizobium, Azorhizobium, Mesorhizobium y Allorhizobium .
De esta unin se forma, a nivel radicular, un rgano llamado ndulo dentro del
cual se transforma el nitrgeno (N2) del aire en amonio (NH4+), gracias a la accin
de la enzima nitrogenasa, que es una forma asimilable por las plantas.
Para el ao 2025 se espera que la poblacin mundial haya crecido hasta un 40% .
Teniendo en cuenta que aproximadamente 11g de nitrgeno se consumen por
persona cada da y que las leguminosas aportan hasta el 80% de las necesidades
dietticas ( en la mayor parte de los trpicos y subtrpicos, se necesitara para
entonces un incremento desmesurado en la produccin agrcola mundial con el fin
de disminuir la brecha entre poblacin humana y abastecimiento de protena .

3.1.1. Frjol cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp]

La familia leguminosae son una de las plantas ms cosmopolitas, debido a que


alimenta la mayora de la poblacin mundial . El frjol cowpea es una leguminosa
originaria de frica, es un importante cultivo anual en las regiones tropicales y
subtropicales , que contiene un abastecimiento significativo de protenas
importante en la dieta alimenticia para la poblacin de pases en va de desarrollo .
Es uno de los cultivos ms extensamente adaptados, verstiles y nutritivos. Y se
cultiva en cerca de 7 millones de hectreas en regiones clidas del mundo .

Es ampliamente cultivada en diferentes climas y regiones geogrficas de frica,


Asia y Amrica y juega un papel importante en la economa local y la agricultura
sostenible. Presenta un amplio rango de hospederos de especies de rizobios
comparada con otras especies vegetales.
El cultivo es tolerante a la baja fertilidad, presentando altas tasas de fijacin de
nitrgeno.

Segn la FAO (2001), el 64% de la produccin mundial de frijol en frica


occidental se produce en aproximadamente 10 millones de hectreas, donde es
esencial para restaurar la fertilidad del suelo en los sistemas de cultivo
tradicionales. Sin embargo, la produccin de frijol en las zonas de sabana, y el
Sahel de frica Occidental, en particular, es insuficiente para la seguridad

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alimentaria. Estos bajos rendimientos se comparan con los registrados en Amrica
del Norte, en gran parte debido al dficit hdrico y baja disponibilidad de fsforo.

Hoy en da, se hace ms sostenible y abarca mayor preferencia, realizar


combinaciones entre leguminosas y gramneas, debido a que la base constitutiva
se enfoca en mantener la fertilidad del suelo y la produccin de carne de
rumiantes. Para mejorar la calidad y el rendimiento del frjol cowpea, la inoculacin
de rizobios seleccionados de la comunidad nativa con una alta capacidad de
nodulacin y fijacin de nitrgeno, se convierte en una importante herramienta
biotecnolgica.

La especie de leguminosa tiene un alto potencial como abono verde. Puede ser
incorporado en el suelo de 8-10 semanas despus de la siembra, y puede
proporcionar el equivalente de 80 kg/ha de N2 para un cultivo posterior. Las
estimaciones de nitrgeno fijado de frjol a menudo van de 50 a ms de 100 kg/ha.
As mismo, se puede obtener excelente heno y ensilado en particular, para la
utilizacin en cultivos mixtos de sorgo, frijol y forraje mijo.

Se adapta a una amplia gama de suelos de arenas a suelos arcillosos pesados,


bien drenados, con una preferencia por suelos ms ligeros que permiten un buen
enraizamiento. Crece as tambin en suelos de textura pesada fuertemente
alcalinos. No tolera las inundaciones extendidas o la salinidad. Crece desde el
nivel del mar hasta los 1500 msnm, dependiendo de la latitud.

3.2. Simbiosis rhizobium-leguminosas

3.2.1. Establecimiento de la simbiosis

El establecimiento de una simbiosis efectiva entre las leguminosas y los rizobios


es un proceso complejo que implica mecanismos de sealizacin y
reconocimiento por parte de ambos simbiontes. Las races de las leguminosas
liberan flavonoides e isoflavonoides, compuestos fenlicos que inducen la
expresin de los genes de nodulacin en el microsimbionte. Como resultado, los
rizobios producen los factores de nodulacin, denominados factores nod. Estos
factores nod inducen una serie de respuestas en la planta, que incluyen la
deformacin de los pelos radicales, la divisin de las clulas corticales y la
formacin del ndulo. La unin de los rizobios a los pelos radicales, la
penetracin a travs de la epidermis y la invasin del tejido cortical a travs del
cordn de infeccin son sucesos que estn acompaados del comienzo de
actividad meristemtica en las clulas del crtex y el periciclo radicales y la
supresin de las respuestas de defensa de la planta.
La liberacin de rizobios del cordn de infeccin a clulas individuales del crtex
se consigue mediante endocitosis, por lo que los rizobios se encuentran
encerrados en una membrana de origen vegetal denominada membrana
peribacteroidea o simbiosomal, que les asla del citoplasma de la clula husped.

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Los rizobios se dividen activamente en las clulas infectadas y, quedan
rodeados, individualmente o en grupos, por la membrana peribacteroidea. Antes
de que se pueda llevar a cabo la FBN, es necesario un ambiente micro-aerbico
en el interior de los ndulos, que permite la diferenciacin de los rizobios a
bacteroides con capacidad para fijar nitrgeno.
El tipo de flavonoides liberado por cada especie de leguminosa es especfico
para activar los genes de nodulacin de una especie determinada de rizobio. La
activacin de estos genes de nodulacin en las distintas especies de rizobios
determina la sntesis especfica de factores nod (lipo-quitin-oligosacaridos). De
esta forma, estos factores nod activan de forma especfica la respuesta
simbitica en la leguminosa correspondiente. En la tabla siguiente se muestran
algunos ejemplos de especificidad rizobio-leguminosa.

3.2.2. Fijacin del nitrgeno atmosfrico

Entre las caractersticas ms destacables de las leguminosas est su capacidad


para fijar nitrgeno atmosfrico formando simbiosis con bacterias de la
familia Rhizobiaceae. Este aspecto tan particular de las leguminosas se trata en
los siguientes puntos:

- Ciclo del Nitrogeno


- Organismos fijadores de nitrogeno
- Establecimiento de simbiosis
- Patrones de desarrollo nodular
- Compuestos nitrogenados exportados desde los nodules

3.3. Proceso de nodulacin

Este proceso se caracteriza por la atraccin y reconocimiento entre la leguminosa


y la bacteria. El Rhizobium entra a la planta a travs de los pelos radiculares,
formando una estructura llamada hilo de infeccin, e infecta intracelularmente a las

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clulas corticales de la raz. Una vez dentro de la clula, las bacterias se
diferencian en bacteroides y comienza el proceso de la fijacin de nitrgeno.
Durante los eventos iniciales de la interaccin, se expresan los genes de las
nodulinas tempranas de la planta, que participan principalmente en el desarrollo o
formacin del ndulo. Cuando se da la unin de los rizobios a los pelos radicales,
se induce un cambio en la direccin de crecimiento apical, generndose una
deformacin y curvatura de los pelos radicales o curling donde quedan atrapadas
las bacterias. Se forma un canal de infeccin por donde entran los rizobios al
citoplasma de las clulas vegetales por un mecanismo similar a la endocitosis .
La simbiosis Rhizobium-leguminosa se inicia por los exudados de las races de
plantas que soportan el crecimiento de rizobios y expresin de los genes de
nodulacin. Entre estos elementos los flavonoides (por ejemplo: luteolina,
narigenina y genistena) que especficamente interactan con protenas bacteriana
NodD activando la expresin de los genes (nod), dando lugar a la formacin y
secrecin de los factores de nodulacin.

Los factores Nod estn constituidos por una estructura bsica que consiste en
oligmeros de N-acetilglucosamida, unidos por un enlace 1-4, con diversas
sustituciones; al interactuar con la planta, los factores Nod estimulan la divisin de
las clulas vegetales induciendo el enroscamiento de los pelos radiculares, dando
lugar a las estructuras conocidas como ndulos . Casi todos los rizobios tienen los
genes nodABC en comn. NodC sintetiza los quitooligosacridos; NodB y NodA, la
estructura base de deacetilato y N-acilato, respectivamente. Las modificaciones de
la estructura de los factores nod depender de los genes de nodulacin de la cepa
especfica que codifican las enzimas que sintetizan los precursores utilizados por
transferasas (por ejemplo: nodH, nodPQ y nodL). Los genes nodIJ son los
responsables de la secrecin de los factores nod. Las diferencias en la estructura
de los factores nod juegan un papel importante en la especificidad del hospedador
de cepas de rizobios.

3.4. Vehculos utilizados para la inmovilizacin de microorganismos

El portador ms comn de inoculantes para leguminosas rizobios utilizados en


todo el mundo es la turba. Este soporte presenta cualidades apropiadas, tales
como una buena proteccin para las clulas bacterianas contra la desecacin y la
toxicidad de la semilla y en el suelo. Sin embargo, presenta algunas desventajas
como son: la composicin, variables fsicas y qumicas, que pueden influir en la
uniformidad y la calidad de los productos, gastos de preparacin, que consiste en
la excavacin, el secado, la molienda, la neutralizacin, empaque y esterilizacin.

Siendo, el proceso de esterilizacin por rayos gama () muy perjudicial, debido a


que estos rayos chocan con los tomos de los materiales biolgicos, tales como
protenas, lpidos, carbohidratos y cidos nucleicos, provocando que estos tomos

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se ionicen y reciban daos directos. Entre estos materiales biolgicos, el cido
nucleico es el material ms sensible a la radiacin ionizante a pesar de presentar
el 1% en los componentes celulares. Otra desventaja, es el rechazo por parte del
agricultor a gran escala, debido principalmente a una mayor complejidad en la
inoculacin y la abrasividad de la maquinaria de siembra.

En algunos pases debido a polticas para la preservacin de las zonas de


humedales, la explotacin de la turba es controlada prohibida. El pH de la turba
es otro factor importante en el crecimiento y mantenimiento celular. Las fuentes de
turba utilizada para la produccin de inoculantes rizobianos son muy cidas, lo que
hace que sea necesario para corregir el pH, emplear el carbonato de calcio o de
magnesio. Garantizar el mantenimiento de la humedad entre 40 y 50% es esencial
para la viabilidad celular y la proliferacin rizobianas y cuando la turba es
previamente desecada a 100 C, la supervivencia de los rizobios se ve
comprometida debido al secado del material. El autoclave la esterilizacin con
radiacin gamma puede causar la produccin de sustancias txicas para las
clulas rizobianas, la reduccin de la supervivencia celular, por lo tanto, la
ineficacia de los inoculantes. Para evitar estos problemas se requiere medidas
adicionales en la produccin de inoculantes, lo que eleva el costo del producto
final.

Varios materiales alternativos han sido objeto de evaluacin para este fin como
son: los minerales, residuos industriales, sustratos orgnicos, polmeros naturales
y sintticos e inoculantes lquidos. Para la cosecha de leguminosas los inoculantes
lquidos se convierten en una de las opciones ms favorables para su aplicacin
en grandes plantaciones con el fin de facilitar la siembra mecanizada.

3.4.1. Exploracin de polmeros como alternativa a la formulacin


de biofertilizantes de nueva generacin

Las prcticas biotecnolgicas ofrecen una posible solucin, de manera


responsable, para mejorar la produccin agrcola, atendiendo a las nuevas
tendencias ambientales, impulsando el estudio de nuevas tecnologas, que
permitan aumentar la produccin agrcola en el marco de una agricultura
sostenible. Una alternativa interesante lo es entonces la implementacin de
polmeros como nueva estrategia para la inmovilizacin de microorganismos con
potencial biofertilizante.

Desde el siglo pasado, el estudio de mezclas de polmeros ha recibido suficiente


nfasis en el rea de ciencia de tecnologa de los polmeros; estas mezclas tienen
numerosas aplicaciones en medicina, farmacia, industria del plstico, caucho,
entre otros. El desarrollo de mezclas de polmeros como materiales utilizables en

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muchas reas se vuelve una gran posibilidad para cumplir en un slo componente,
diversas aplicaciones a un costo bajo. Se destacan la posibilidad de utilizar
mezclas de polmeros, como una herramienta en el desarrollo de la ingeniera de
materiales, desde la sntesis de nuevas molculas con propiedades de inters.

Algunos polmeros como el alginato de sodio han sido probados como vehculos
para la inoculacin de cepas de bacterias que promueven el crecimiento de las
plantas, tales como Azospirillum, pocos estudios han evaluado el uso de la matriz
del polmero como un vehculo para la inmovilizacin de clulas rizobianas.

Entre las mezclas de polmeros utilizados en las diversas reas de la industria, los
polmeros biodegradables se destacan como materiales no contaminantes sobre el
medio ambiente. Mezclas a base de carboximetilcelulosa (CMC) y el almidn,
obteniendo muy buenos resultados.

La mayora de las mezclas de polmeros se encuentra parcial o totalmente


inmiscibles, debido a su alto peso molecular, formando en su mayora mezclas
heterogneas, mezclas en las que las caractersticas de los polmeros utilizados
no siempre se cumplen.

Como la mayora de las mezclas de polmeros son inmiscibles, la compatibilidad


de la mezcla de polmero es de suma importancia para lograr la sinergia de las
propiedades. Para lograr la compatibilidad de las mezclas de polmeros, se utilizan
agentes compatibilizantes. Estos agentes son molculas que actan en la
interfase de la mezcla, lo que permite una mayor interaccin, debido a su alta
actividad con estos. Los agentes de compatibilizacin pueden ser polmeros
molculas orgnicas de bajo peso molecular con un montn de grupos reactivos,
por ejemplo, carboxilo e hidroxilo.

La demanda de una alternativa a la turba resulta en un considerable trabajo


experimental y hasta la produccin comercial de otros tipos de vehculos, tales
como lquidos, granulados y varios tipos de gomas. Sin embargo, los resultados en
campo han sido pobres en muchos casos, debido a la baja supervivencia durante
el almacenamiento en la semilla cuando se siembra en condiciones de estrs en
el suelo.

Varios polmeros naturales (agar, agarosa, alginato y quitosan) y polmeros


sintticos (poliacrilamida, poliuretano y polietilenglicol) han utilizado con xito para
la inmovilizacin de clulas. Sin embargo, cada polmero tiene sus inconvenientes,
tales como la escasa resistencia mecnica y durabilidad, toxicidad para los
microorganismos, de alto costo. El polmero sinttico alcohol polivinlico-PVA, no
presenta toxicidad en microorganismos y es un material econmico. Adems, tiene

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alta durabilidad en agua, lo que indica que el polmero es prometedor como un
material de inmovilizacin de clulas, en este caso para el tratamiento biolgico de
aguas residuales.

3.5. Formulaciones de inoculantes rizobianos

La formulacin de inoculantes a partir


de cepas de Rhizobium sp., es una
tecnologa que puede lograr una alta
productividad con la reduccin o la
exclusin total de fertilizantes
nitrogenados. Varios estudios han
demostrado que la inoculacin de
cepas seleccionadas de rizobios puede dar lugar a rendimientos iguales o
superiores cuando se compara con la adicin de fertilizantes nitrogenados.
demostraron, que la inoculacin del frijol comn , con cinco cepas de Rhizobium
tropici, mostr la productividad y el contenido de nitrgeno en las hojas y granos
similares a los presentados por los tratamientos que recibieron fertilizante
nitrogenado a la siembra y cobertura.

En la actualidad, la gama de productos de inoculantes con diferentes modos de


aplicacin estn disponibles. Los inoculantes comerciales de Rhizobium sp.,
deben tener un nmero adecuado de clulas activas, con frecuencia determinada
por las regulaciones de cada pas.

3.5.1. Formulaciones lquidas

Una formulacin lquida es ideal, por la facilidad en su preparacin y manejo,


adems su pureza puede confirmarse fcilmente. Las antiguas formulaciones de
inoculante lquido se venan comercializando de manera espordica, debido a las
dificultades que surgen en el mantenimiento de cultivos biolgicos de control
despus de su preparacin y la obtencin de la licencia del fabricacin. Los
fabricantes se propusieron superar el problema del deterioro de la concentracin
del inculo, empleando la centrifugacin, colocndolo en recipientes de plstico
para su congelacin y posterior transporte a los usuarios. Sin embargo, la corta
vida til y la necesidad de almacenar a bajas temperaturas es una limitante para
su uso.

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Brockwell y Bottomley (1995) han reportado que los inoculantes lquidos
envasados en botellas de dispensador, pueden ser usados como inoculantes de
semillas para la entrega directa en la siembra de stas. Esta forma de inoculante
lquido tiene ventajas para su almacenamiento, aferrndose fuertemente a la
cubierta de la semilla sin necesidad de adhesivos, dando lugar a una buena
nodulacin y fijacin de N2 comparables a lo que se podra obtener con
inoculantes a base de turba. Por otra parte, varios compuestos han sido
estudiados para la proteccin del inoculante, los cuales son adicionados con el fin
de prolongar la supervivencia de los rizobios despus de la inoculacin. Por
ejemplo, el polmero polivinilpirrolidona (PVP) que puede liberar compuestos
txicos presentes en la cubierta de la semilla. Adems, tiene la capacidad de
facilitar la unin de agua; sin embargo, su secado es lento despus de la
aplicacin del inoculante en la semilla. El complejo FeEDTA y el glicerol son
aadidos para complementar la fuente de hierro y carbono a los rizobios. Tambin,
el glicerol puede proteger a las clulas sobre los efectos de la desecacin.

Las formulaciones lquidas son enriquecidas con el uso de aditivos tales como: el
glicerol, goma arbiga polivinilpirrolidona. Estos aditivos pueden mejorar la
calidad de los inoculantes en varios aspectos como: una mayor adherencia del
mismo a la semilla, el producto se estabiliza e inactiva las toxinas solubles sobre la
cubierta de la semilla y as mismo, aumenta la supervivencia de Rhizobium,
despus de la exposicin a las condiciones ambientales. Las formulaciones
lquidas son fciles de aplicar a las semillas, porque ellas pasan a travs de la
maquinaria de siembra, mostrando mejores rendimiento en campo, accesibles
para los pequeos productores, debido a que se emplean materiales de bajo costo

3.5.2. Formulaciones slidas

Liofilizados

Los rizobios liofilizados, han demostrado ser capaces de mantener un alto nmero
de clulas viables (por ejemplo 1 x 1012 UFC/g) hasta 24 meses (Herridge, 2008).
Sin embargo, son productos ms costosos y el procedimiento de liofilizacin
puede causar serios problemas, como la desnaturalizacin de las protenas
sensibles y la muerte celular de algunos microorganismos. Existen varios tipos de
aditivos, tales como azcares, que se han utilizado para tratar de proteger los
daos causados por el proceso de secado mediante congelacin (Pereira et al.,
2002).

La liofilizacin es ampliamente usada para la conservacin de los


microorganismos. El primer inoculante liofilizado fue producido por una empresa
australiana por un corto perodo en el ao 1958, encontraron que los cultivos

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liofilizados podran proporcionar buena nodulacin en el campo, pero era probable
que se limitara a las condiciones ambientales y la supervivencia de los rizobios
liofilizados en las semillas.

Microencapsulacin

La encapsulacin de clulas vivas en un gel polimrico es una tecnologa bien


establecida con grandes aplicaciones. La matriz del gel permite que las clulas
permanezcan viables durante un largo tiempo. Varios estudios han utilizado
alginato como material de encapsulacin que permite formar microesferas de
forma instantnea en presencia de cationes polivalentes que se unen a las
unidades de cido gulurnico en un slo paso con una adecuada resistencia
mecnica. Por otra parte, las perlas de alginato formadas son capaces de atrapar
un nmero suficiente de bacterias. El uso de clulas encapsuladas para aplicacin
sobre el medio ambiente tiene varias ventajas sobre las formulaciones en donde
las clulas se encuentra libres, presentando una mejor proteccin contra el estrs
bitico y abitico. Estas ventajas son: el efecto inhibidor de los compuestos txicos
, mejor supervivencia y mayor actividad fisiolgica de la bacteria suministro de
aditivos nutricionales encapsulados aumento de la densidad celular y el
crecimiento celular en diferentes zonas aerbica y anaerbica de la encapsulacin
con el gel. Las nuevas tecnologas de encapsulacin presentan mejores
posibilidades frente a la disyuntiva de otras formulaciones, como son: la
estabilidad, la liberacin controlada, efectos sobre el medio ambiente,
biodegradacin y rentabilidad.

La encapsulacin de los rizobios en microesferas de Ca-alginato se ha propuesto


como un procedimiento para aumentar la resistencia al calor ya la desecacin de
las bacterias atrapadas.En este sentido, las clulas microbianas se ha demostrado
que se mantienen fisiolgicamente activas despus de ser atrapado en los
espacios intersticiales de este tipo de geles. Esta matriz de gel permite que las
clulas viables permanezcan y mantengan su actividad cataltica durante perodos
ms prolongados.

Recubrimiento mediante lecho fluidizado

Este proceso hace parte de los mtodos fsicos empleados en la tcnica de


microencapsulacin. El slido soporte utilizado en forma de pellets, es
suspendido en una corriente de aire y posteriormente se atomiza una solucin del
material de recubrimiento.

Existen dos mtodos generales para preparar los pellets, uno de ellos consiste en
el recubrimiento de grnulos que contienen el principio activo. Los ncleos pueden

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obtenerse, a partir del principio activo, reducindolo al tamao de partcula
apropiado, slo o en mezcla con auxiliares y efectuando una granulacin, por los
mtodos convencionales empleados. Una vez obtenidos los ncleos, se recubren
con pelculas que controlan la liberacin del principio activo

El otro mtodo para la obtencin de los pellets es partiendo de la generacin de


los ncleos. Para este caso, se utilizan como materiales de partida pequeos
grnulos (semillas) de azcar o de otras sustancias inertes y se recubren con
preparaciones adhesivas que contienen el principio activo disuelto o disperso. Con
el fin de controlar la liberacin del principio activo, los pellets son recubiertos con
capas del material polimrico y dicho recubrimiento se puede efectuar tanto en
bombos de recubrimiento como en equipos de lecho fluidizado.

Para realizar un recubrimiento mediante lecho fluidizado, se utiliza un proceso


conocido como secado por aspersin (spray-drying), que tiene una alta tasa de
produccin y bajo costo de operacin; es una tecnologa muy conocida en la
industria alimentaria y farmacutica. Es uno de los mtodos ms comunes para
preparar complementos alimenticios estables y que ocupan pequeos volmenes
(Potter, 1980). Adems, el secado por aspersin se utiliza para la preservacin y
la concentracin 33 de microorganismos.

3.6. CICLOS DEL NITROGENO

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Que es el nitrogeno?
El nitrgeno (N) es un elemento qumico. La atmsfera est compuesta por
nitrgeno en un 78 por ciento, lo que lo hace el elemento ms abundante en ella.
Su importancia es crucial para la vida, pues los seres vivos lo necesitan para
realizar algunos de sus procesos biolgicos importantes.
El ciclo del nitrgeno es un ciclo biogeoqumico que se caracteriza por el paso del
nitrgeno por distintos cambios qumicos y biolgicos en la Tierra, a partir de los
cuales se mantiene constante. El ciclo se repite una y otra vez, del aire pasa al
suelo y de este de nuevo al aire.

En qu consiste?
Este es un ciclo complejo, pero, al igual que en el ciclo del carbono, el elemento
pasa por los distintos organismos hasta regresar a la atmsfera. El nitrgeno en la
atmsfera no est combinado con otros elementos, y se forma por procesos
qumicos y biolgicos en la biosfera.

-Fijacin del nitrgeno.


Las plantas no pueden aprovechar el nitrgeno directamente del aire. En vez de
ello, lo obtienen del suelo en forma de nitratos. Para que el N pase del aire al
suelo, unas bacterias y cianobacterias convierten el gas en nitratos, que luego las
plantas absorben del suelo por sus races y lo usan en sus procesos para
sintetizar protenas.
Las bacterias y cianobacterias fijadoras del nitrgeno viven cerca de las races de
las plantas o bien, en ndulos de las races de las leguminosas. A cambio,
obtienen carbohidratos de las plantas para obtener energa, y cuando mueren, el
nitrgeno de su cuerpo vuelve al suelo en forma de amonio, que tambin puede
ser absorbido.
Los relmpagos tambin pueden convertir el en nitrgeno gaseoso nitratos.

-Amonificacin.
El suelo contiene bacterias que, gracias a unas enzimas, convierten el nitrgeno
gaseoso en iones de amonio, los cuales se unen a las partculas del suelo.

-Nitrificacin.
Bacterias nitrificantes pueden liberar el amonio que est en el suelo. Cmo?
nicamente convierten los iones de amonio en iones de nitritos. Estos pueden ser
convertidos en iones de nitratos por las bacterias nitrificantes. Como se mencion,
en esta ltima forma, las plantas toman el nitrgeno, aunque tambin pueden
absorber iones de amonio.
Nitrificacin: iones de amonio iones de nitritos iones de nitratos.

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Asimilacin.
Esta etapa consiste simplemente en el consumo del nitrgeno por los seres vivos.
Los animales se alimentan de las plantas, y de esta manera el N pasa a su
cuerpo. Ellos digieren las protenas vegetales gracias a ciertas enzimas.

-desnitrificacin.
En algunos suelos, generalmente anegados, bacterias convierten los nitratos del
suelo en nitrgeno gaseoso, que se eleva y vuelve a la atmsfera. Puede volver a
la tierra disuelto en la lluvia.

-descomposicin y amonificacin.
-Una parte del nitrgeno vuelve al suelo a travs de los excrementos de los
animales y sus dems residuos orgnicos. Los organismos descomponedores,
como algunas bacterias y hongos, descomponen el cuerpo de animales y plantas
muertos y los productos de desecho, que contienen nitrgeno, para liberar
energa. De la urea y los excrementos se genera amoniaco, y entonces los
descomponedores convierten el amoniaco de los restos en iones de amonio, que
luego pueden ser convertidos en nitritos.
Los residuos orgnicos devuelven al suelo una parte del nitrgeno, dando lugar a
nitritos y nitratos que las plantas pueden utilizar como abono. Las bacterias
nitrificantes devuelven tambin una parte del nitrgeno a la atmsfera, lo mismo
que hacen las bacterias transformadoras de la materia orgnica en nitritos. Los
procesos geolgicos naturales incorporan nuevo nitrgeno al aire.

Importancia
Todos los seres vivos necesitan el nitrgeno para la formacin de aminocidos en
las protenas, y en general, las sntesis de estas. Forma parte esencial de los
cidos nucleicos, la clorofila y varias molculas orgnicas importantes. Por su
parte, las plantas requieren nitrgeno para crecer y producir semillas. En todos
ellos, el nitrgeno es imprescindible para que clulas animales y vegetales
funcionen correctamente.
Debido a que las plantas y los seres vivos no pueden asimilar el nitrgeno
directamente, este ciclo adquiere importancia vital.

3.7. BIOFERTILIZANTE
Los biofertilizantes son productos elaborados en base de microorganismos como
bacterias y hongos.
Su funcin es ayudar al proceso de la nutricin bilgica de las plantas, permitiendo
asi un buen aprovechamiento del nitrgeno atmosfrico desarrollando un sistema
radicular, ayudando a una mayor solubilidad y conductividad de nutrientes.

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Los microorganismos tienen la capacidad de transformar el nitrgeno proveniente
de:
- Residuos de cosecha
- Desechos de animales
- Nitrgeno atmosfrico

Y convertirlos en amonio y subministrarlo a los cultivos mediante diferentes


procesos.

CLASIFICACION DE LOS BIOFERTILIZANTES

ACCION DIRECTA
Agrupan microoganismos que habitan en algn componente de los tejidos
vegetales, y por ello la accin benfica se realiza en la planta y no en su medio
circundante, es el caso de la Fijacion biolgica de nitrgeno (FBN) y las
micorrizas.

ACCION INDIRECTA
La biofertilizacion es aprovechada primero por el suelo y lo transmite hacia los
cultivos, pertenecen a este grupo los mecanismos de accin que trabajan en la
solubilizacion de nutrientes como el fosforo.

INOCULANTES MICROBIANOS
Son sustancias que contienen poblaciones microbianas variadas, su alto contenido en
nutrientes le permite reaccionar con la materia organica del suelo y asi producir
sustancias que son benficas para las plantas.
- Reduce la compactacin del suelo
- Mejora la disponibilidad de nutrientes en el suelo
- Suprime o controla las poblaciones de microorganismos patgenos
- Incrementa la biodiversidad microbiana

RHIZOBIUM
Rhizobium es una bacteria cuyo hbitat se encuentra en el suelo , que puede ser
capaz de colonizar las races de leguminosas y fija el nitrgeno atmosfrico
mediante simbiosis.
La morfologa y la fisiologa de Rhizobium varan de un estado de vida libre a la
bacterode de ndulos . Ellos son el biofertilizante ms eficiente por la cantidadde
nitrgeno que fijan.

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AZOTOBACTER
De las varias especies de Azotobacter , A. chroococcum pasa a ser el habitante
dominante en los suelos herbceos capaces de fijar N2 ( N2 2-15 mg fija/g de
fuente de carbono ) en medios de cultivo .
La bacteria produce abundante limo que ayuda en la agregacin del suelo.

AZOSPIRILLUM

Azospirillum brasilense y A. lipoferum,son los habitantes principales del suelo, la


rizosfera y espacios intercelulares de la corteza de la raz de las plantas
gramneas. Llevan a cabo la relacin simbitica asociativa con las plantas
gramneas.
Las bacterias del gnero Azospirillum son organismos de fijacin de N2 aislados
de la raz y las partes areas, de una variedad de plantas de cultivo.
La inoculacin con azospirillum proporciona resistencia a
enfermedades y tolerancia a la sequia.

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3.8. VENTAJAS DE LOS BIOFERTILIZANTES

Ventajas
Aumento aprovechamiento de suelo
Favorece la captacin de agua nutrientes y minerales
Proteccin contra patgenos
Mejora la estructura del suelo

Beneficios
Disminucin de costos de produccin
Aumento de produccin agrcola
Disminucin de costos en la aplicacin de fungicidas y
proteccin al agricultor
No degradacin de suelos y contribucin a la reparacin de estos.

Por qu utilizar Biofertilizantes?


El proceso actual de produccin de fertilizante se conoce como Haber Bosch y se
caracteriza por requerir altas cantidades de energa para lograr fijar en materiales
inertes el nitrgeno y de esta forma ser utilizado por los productores. La energa
utilizada deriva de fuentes no renovables,como petrleo, gas o carbn. Dbereiner
(1977) consigna que la energa requerida para producir una tonelada de
fertilizantes nitrogenado es la equivalente a 7 barriles de petrleo

Los microorganismos realizan el mismo proceso; en el caso del Nitrgeno y /o


mediante el transporte de P y K con los hongos micorrizicos, pero en ambos casos
la energa utilizada deriva del proceso fotosinttico de las plantas.

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3.9. PRINCIPALES APLICACIONES

Los Biofertilizantes se desarrollaron como una alternativa al uso de fertilizantes


qumicos con el enfoque de generar tecnologas ms amigables con el medio
ambiente, aunque actualmente los altos costos de fertilizantes qumicos han
obligado a los productores a reducir su uso y buscar otras alternativas de nutricin
para sus cultivos.

Para su aplicacin existen muchas maneras, pueden ser desde la


composta hasta suelo molido, medios de agar, caldos nutritivos, liofilizados en
medios de aceite.

Las formas de aplicacin son:

- Suelo
- Material vegetativo
- Semilla

La simbiosis se expresa despus de 20 -30 das despus de la biofertilizacin y en


viveros despus de 3 meses, como en el caso del cacao y caf.
La mejor manera de aplicar un biofertilizante es a travs de la adhesin a la
semilla,

En caso del material vegetativo se roca el adherente y sobre l, el biofertilizante,


las cantidades depende del sitio que se vaya a sembrar.

Con referencia a los suelos, en condiciones especiales como los suelos cidos
del trpico, se recomienda agregarle un mejorador de suelo que el carbonato de
calcio que protege a los microorganismos en sus primeras etapas de colonizacin.
La mayor aplicacin se ha realizado en el frijol en diversos trabajos de
investigacin y validacin de tecnologa con los microorganismos Glomus
intraradices, Azospirullum brasilense y Rhizobium etli, en varias regiones de
Mxico, abarcando aspectos fisiolgicos, morfolgicos y nutrimentales.

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4. BIOFERTILIZANTE A PARTIR DE LA BACTERIA RHIZOBIUM

4.1. PROCESO DE ELABORACIN DEL BIOFERTILIZANTE A PARTIR


DEL RHIZOBIUM

Para la elaboracin del biofertilizante se presenta el siguiente cuadro para obtener un


producto de 100 l de biofertilizante.
Insumos:

- 200 gr de RAICES DE LEGUMINOSAS Y GRAMINEAS


- 2 botellas de LECHE O SUERO
- 1 litro de MELAZA DE CAA
- 2 libras de MAIZ MOLIDO O SALVADO DE MAIZ
- Agua
- 1 recipiente con la capacidad requerida.
- 1 vara para agitacin.
- 1 bomba de pecera

PASO 1: RECOLECCION DE RAICES

Estas pueden ser races de leguminosas ( como garbanzos, lentejas, frijol, arveja, alfalfa,
y gramneas, soya, haba, cacahuate) o de gramneas ( como trigo, maz, avena, mijo,
centeno, cebada, arroz, pastos)
Lavar muy bien las races.

Paso2: MEZCLADO

Este proceso se inicia colocando agua en el recipiente, luego se colocan las races
recin lavadas, posteriormente se aade las 2 botellas de leche o un galon de
suero, luego se agrega el litro de melaza y las 2 libras de maz molido.

Agitar con la vara para obtener una mezcla homognea, la mezcla debe tener un color
caf oscuro y no debe ser viscosa.

Paso 3: AIREACION

Despus de realizar la mezcla, se utiliza la bomba de pecera par airear la mezcla, ya que
las bacterias rhizobium se reproducen en presencia de oxigeno. La aireacin se realiza
durante 16 hrs.

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Paso 4: APLICACIN AL CULTIVO

Despus de las 16 hrs de aireacin , se aplica la mezcla al pie de cada cultivo, a las
races de las de las plantas, las bacterias se albergaran en los ndulos de races para fijar
el nitrogeno del aire.

Aplicar el biofertilizante cada 8 dias, deben ser 8 sesiones para obtener un buen
resultado.

Este mtodo es para aplicar a cualquier planta en cualquier etapa, el mtodo que se
describi es para una planta en desarrollo. Tambin se puede usar con semillas antes de
sembrarlas, cuando pasan las 16 hrs de aireacin se coloca en un pequeo reciepiente un
poco de biofertilizante y se remojan las semillas en ella. Dejar reposar toda la noche para
que las semillas estn nutridas.

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5. DIAGRAMA DE FLUJO

INICIO

RECOLECCION DE RAICES DE

LEGUMINOSAS O GRAMINEAS

LAVADO DE LAS RAICES

agua
raices
RECIPIENTE DE MEZCLADO leche
melaza
maiz molido

AGITAR BIEN LA mezcla final


MEZCLA color caf oscuro

AIREACION CON BOMBA por 16 hrs


DE PECERA T=T(ambiente)

APLICACIN AL CULTIVO al pie del cultivo


CADA 8 DIAS (8 SESIONES)

FIN

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6. Conclusiones
- Se pudo conocer el proceso de produccin de biofertilizantes a base la bacteria rhizobium,
notando que son muy benficas para el crecimiento de las plantas, contribuyendo a gran
escala al medio ambiente, y siendo un mtodo sencillo para reemplazar los fertilizantes de
origen qumico por los biofertilizantes.
- Se conoci un poco mas acerca del ciclo del nitrgeno y la importancia que tiene para la
planta.
- Se estudio a las bacterias rhizobium, si comportamiento con la planta, la simbiosis que
crea con la planta y los beneficios que trae.
-

7. Bibliografia

-biofertilizantes orgnicos, http://coopcoffees.com/for


producers/documentation/agriculture/biofertilizantes.pdf
-TNAU Agritech portal Organic farming (s.f.) Biofertilizers de,
http://agritech.tnau.ac.in/org_farm/orgfarm_biofertilizertechnology.html
-Bio fbrica siglo XXI (s.f.) Biofertilizantes. Recuperado el 12 de noviembre
del 2014 de, http://www.biofabrica.com.mx
- Fertilizantes (s.f.) Recuperado el 12 de noviembre del 2014 de,
http://fertijmhp.blogspot.mx/p/desventajas-de-los-fertilizantes.html

8. Anexos

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CICLO DEL NITROGENO

EJEMPLOS DE ESPECIFICIDAD RIZOBIO-LEGUMINOSA

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ESTIBALIZ LARRAINZAR RUBEN LADRERA

PROCESO DE ELABORACIN DEL BIOFERTILIZANTE A PARTIR DEL RHIZOBIUM

1. RECOLECCION DE RAICES

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2. MEZCLADO

3. AIREACION

4. APLICACIN AL CULTIVO

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