UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGA MDICA

ESPECIALIDAD LABORATORIO CLNICO Y ANATOMA

PATOLGICA

INSTRUMENTACIN
Y EQUIPOS DE
LABORATORIO CLNICO

III CICLO
 NDICE

Prctica Tema Pgina

N 1 Bioseguridad en el Laboratorio. Toma de Muestra sangunea 4

N 2 Sistema Internacional de Unidades 11

N 3 Uso de Materiales de Vidrio 18

N 4 Uso de Balanza, Centrifuga y Micropipetas 22

N 5 Preparacin de soluciones. Ejercicios de concentraciones. 28

Uso del Microscopio ptico: Campo claro, Campo oscuro y Luz

N 6 31
polarizada

Uso de potencimetro : pH metro

N 7 38
Uso del Autoclave y Estufa

Uso del Espectrofotmetro. Desarrollo de graficas y curvas de

N 8 43
calibracin

N 9 Cromatografa en papel 45

N 10 Electroforesis en Agar 51

N 11 Purificacin del agua para su uso e laboratorio (Mesa redonda) 58

Este documento no es una publicacin oficial; sin embargo, todos sus derechos estn reservados. Este
documento puede ser citado o utilizado para reproduccin, parcialmente o en su totalidad; no obstante, no
puede ser usado para la venta ni con propsitos comerciales. Las opiniones expresadas en este documento
son responsabilidad exclusiva del autor.

2
 Andrea Rivera Santilln
Licenciada Tecnlogo Medico en Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica

Manfred Ramrez Agama

Licenciado Tecnlogo Medico en Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica

3
 PRACTICA N 1
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO Y TOMA DE MUESTRA SANGUINEA

OBJETIVOS
Conocer los aspectos generales de la Bioseguridad en el laboratorio
Hacer uso de las medidas de bioseguridad dentro del laboratorio
Hacer una correcta toma de muestra empleando los principios bsicos de
bioseguridad

INTRODUCCIN

1. Bioseguridad

a) Conceptos bsicos
Normas de Laboratorio:
Disposiciones a cumplirse para el buen desempeo y desarrollo de los
experimentos
Tnicas de laboratorio:
Procedimientos establecidos para la ejecucin de un determinado
experimento
Bioseguridad:
Es el conjunto de medidas preventivas que tienen como objetivo proteger la
salud y seguridad personal de los profesionales de salud y pacientes frente
a los diferentes riesgos producidos por agentes biolgicos, fsicos, qumicos
y mecnicos.

b) Normas a seguir en las practicas de instrumentacin

1. Ingresar puntualmente al laboratorio
2. Utilizar mandil blanco, limpio y abotonado. Usar el uniforme completo,
calzado blanco y cabello sujeto

4
3. El alumno no debe: comer, fumar, tirar basura al piso, sentarse en la mesa
de trabajo, usar audfonos y telfono celular dentro del laboratorio.
4. Traer su material de trabajo: Apuntes, Gua de prcticas, etc.
5. El alumno asistir a clase habiendo ledo la gua de prctica y buscando
informacin adicional referente al tema a tratar.
6. En cada prctica el alumno deber seguir las indicaciones del profesor
adems de prestar atencin a las recomendaciones.
7. Mantener limpias y ordenadas las mesas de trabajo, cuidar el mobiliario,
material, instrumentos y equipos a utilizar. Si tiene dudas del manejo
consultara al profesor.
8. Al finalizar la practica limpiara el rea de trabajo y dejara ordenado y cada
cosa en su lugar respectivo.
9. Anotar toda observacin acontecida durante la practica
10. Informar al profesor cualquier accidente o incidente suscitado dentro del
laboratorio

c) Smbolo de riesgo de los reactivos

5
 2. Extraccin Venosa
La sangre es uno de los sistemas biolgicos ms estudiados. Es una suspensin
de eritrocitos, leucocitos y plaquetas en una solucin de protenas, electrolitos y
diversas sustancias orgnicas e inorgnicas. El volumen de sangre de un adulto
es de aproximadamente 5 o 6 litros.
Los principales factores biolgicos que alteran la composicin de la sangre son:
edad y sexo, grupo tnico, alimentacin, ambiente, estrs, actividad fsica y
entrenamiento, masa corporal, ingestin reciente de alimentos, ingestin de
xenobiticos, etc.

a) Obtencin de espcimen de sangre

Los especmenes de sangre se pueden obtener mediante 3 procedimientos
diferentes que se utilizan dependiendo de las magnitudes que se deban medir:
Puncin arterial, puncin venosa y puncin capilar o de la piel.

b) Puncin Venosa:

Primero debe seleccionarse la

zona en que se realizara la
puncin venosa. Las zonas de
eleccin son las cenas del
pliegue del codo, sin embargo
las venas de la mueca, del
dorso de la mano y del tobillo
son tambin apropiadas para la puncin venosa.
Puede usarse una aguja y una jeringa estriles una aguja acoplada a un tubo en
que se ha hecho al vacio previamente. Habitualmente se aplica un torniquete
varios centmetros por encima de la zona de puncin para producir distensin
venosa y facilitar la localizacin de las venas.
El torniquete nunca debe aplicarse durante ms de un minuto antes de la
extraccin de la sangre venosa, ya que se producir hemoconcentracion con la

6
consiguiente alteracin de los resultados y debe liberarse tan pronto como se vea
fluir la sangre. L zona que se punciona debe limpiarse con una solucin antisptica
adecuada que no interfiera en las mediciones a realizar, luego debe esperarse que
el antisptico se seque espontneamente antes de realizar la puncin venosa, lo
cual reducir el riesgo de hemolisis en el espcimen y evitar la sensacin de
escozor que puede experimentar el paciente.
Debe seleccionarse una aguja del calibre apropiado, la piel debe puncionarse con
el bisel de la aguja hacia arriba e introducirse a travs de los tejidos rpida y
suavemente en el lumen de la vena.
La aguja debe retirarse en una accin continua con el codo del paciente extendido,
es esta posicin de ha de alzar el brazo del paciente y aplicar presin firme sobre
el sitio de la puncin con un algodn hasta que cese la hemorragia.
Uno de los problemas que se observa con mayor frecuencia en los especmenes
es la hemolisis, que se puede producir por contaminacin con agentes
antispticos, por una agitacin vigorosa del tubo o porque se ha esperado mucho
tiempo antes de separar las clulas o efectuar las mediciones. Si la hemolisis es
visible los resultados deben interpretarse con cautela y en algunos casos deber
desecharse el espcimen.

c) Plasma y Suero
El medio liquido en que estn suspendidas las clulas sanguneas es el PLASMA.
Si un espcimen de sangre se trata de manera que no se coagule luego se
centrifuga o se deja reposar, se logra separar las clulas del plasma. Si se permite
que la sangre coagule, el componente liquido se llama SUERO, as el suero se
diferencia del plasma en que no contiene las protenas de la coagulacin.

d) Riesgos asociados con los especmenes de sangre

Todos los especmenes son potencialmente infecciosos y es necesario que el
personal del laboratorio conozca todas las consecuencias de las infecciones que
pueden transmitirse por la sangre y sus productos. Hay tres vas importantes de
transmisin de infecciones mediante los especmenes de sangre:

7
 Transmisin percutnea con aguja u otros objetos puntiagudos
Transmisin percutnea por contaminacin de cortes, rasguos,
abrasiones, quemaduras, etc.
Contaminacin de la mucosa de la boca, nariz u ojos.

La transmisin directa es posible si se producen salpicaduras. La transmisin de

mano a mano o de mano a ojo despus de un contacto directo con una superficie
contaminada es posible pero menos probable.
Las enfermedades que pueden transmitirse por vida percutnea y que generan
mayor preocupacin en los laboratorios que procesan especmenes de sangre son
la hepatitis vricas y el VIH.

Orden de los tubos en la extraccin de sangre

El orden adecuado para la extraccin de sangre es el que recomienda CLSI

(Clinical Laboratory Standards Institute)

8
PROCEDIMIENTO
Toma de Muestra sangunea

Materiales:
Algodn o Gasa
Solucin antisptica: Alcohol al 70%
Ligadura o torniquete
Agujas estriles descartables
Tubos al vacio
Sistema al vacio

Tcnica de puncin venosa

Seleccione una vena adecuada. Se prefiere la cubital media o la ceflica. Si
un brazo tiene una va endovenosa, sacar del otro.
Limpiar con etanol al 70%. Empezar en la zona de puntura y seguir con
movimiento circular. Esperar que se seque. No volver a tocar.
Aplicar el torniquete. No dejar el torniquete puesto ms de 1 minuto.
Punzar. Penetrar la piel en ngulo de 15 grados con el brazo, con el bisel
hacia arriba. Seguir la geografa de la vena con la aguja.
Liberar el torniquete cuando la sangre comience a fluir. Nunca saque la
aguja con el torniquete puesto.
Espere a que los tubos al vacio extraigan la cantidad de sangre
estandarizada para cada uno.
Permita que el paciente se relaje.
Coloque el algodn sobre la puncin. Descarte la aguja, luego presione
sobre el sitio.
Colocar los tubos en la gradilla

9
BIBLIOGRAFA
Gua de Bioseguridad para laboratorio clnico. Instituto de salud pblica de
Chiehttp://www.ispch.cl/sites/default/files/Manual%20Bioseguridad%20ISPC
H.pdf
Gua GP41 : Collection of diagnostics venous blood specimens. 7 edicion
CLSI
Mendo Rubio Manuel. Instrumentacin de Laboratorio. Primera edicin.
2002.

10
 PRCTICA N 02
SISTEMA INTERNACIONAL DE UNIDADES

OBJETIVOS:

Conocer y aplicar en el trabajo de laboratorio el sistema internacional de

unidades, sus magnitudes fundamentales y derivadas, as como sus
unidades bsicas y los mltiplos y submltiplos de estas unidades.
Realizar conversiones de unidades en problemas aplicados al trabajo
rutinario del laboratorio clnico.
Conocer y aplicar en ejercicios la notacin cientfica y aproximacin de
unidades.

INTRODUCCIN:

El Sistema Internacional de Unidades (SI) estandariza las mediciones de

diversas magnitudes que nos permite comparar propiedades fsico-qumicas de
diferentes cuerpos en diversos estados de la materia.
Se instauraron en la Conferencia General de Pesas y Medidas,
determinando as siete magnitudes fundamentales: longitud (L), masa (M), tiempo
(T), corriente elctrica (I), temperatura (), intensidad luminosa (Iv) y cantidad de
materia. As mismo, se les confirieron a esas magnitudes sus respectivas
unidades, siendo: metro (m), kilogramo (kg), segundo (s), amperio (A), kelvin (K),
candela (cd) y mol (mol).
Existen tambin, magnitudes derivadas a partir de las fundamentales; su
uso es comn en laboratorio cuando se habla de velocidad, fuerza, presin,
volumen, resistencia elctrica, entre otras.
Todos los mltiplos y submltiplos de unidades fundamentales y derivadas
se operan como potencias de base 10, por lo que se hace necesario el
conocimiento de las propiedades matemticas de las potencias as como la

11
notacin cientfica. De la misma manera, la aproximacin de cantidades resulta
conveniente para facilitar los clculos, de acuerdo a la precisin requerida.
En el trabajo de rutina de laboratorio, tenemos que interpretar los resultados
obtenidos en base a las cantidades y sus respectivas unidades, comparndolos
con valores referenciales para lo cual puede ser necesario la conversin de
unidades. Adems, se preparan diversos materiales de trabajo como calibradores,
controles, reactivos, alcuotas, etc. que requieren de un conocimiento slido
acerca de las unidades, mltiplos y sub-mltiplos del SI, y el clculo para la
conversin de unidades.
En la presente prctica, se explicar la aproximacin de cantidades, se
resolvern ejemplos de conversin de unidades, se plantearn y resolvern
ejercicios aplicados al trabajo laboratorial que nos ayuden a entender la
importancia de conocer y convertir unidades de concentracin.

PROCEDIMIENTO:

1. Conceptos preliminares para conversin de unidades: Reglas de la potencia

10.
a. Los nmero mayores que 1 se pueden expresar como nmeros
pequeos multiplicado por una potencia de 10 con exponente igual al
nmero de veces que se traslade el punto decimal a la izquierda.

i. Ej.: 3000 .30*102 = 3*103 = 300*101

ii. Ej.: 100 Km.100*103 m = 100 000 = 1*105

b. Los nmeros menores que 1 se pueden expresar como un nmero

mayor multiplicado por una potencia de 10 con exponente negativo igual
al nmero de veces que se traslade el punto decimal a la derecha.

i. Ej.: 0.365 = 365*10-3

ii. Ej.: 0.000 000 001 = 1*10-9

12
c. Para convertir un nmero expresado como potencia positiva en nmero
decimal, se requiere trasladar el punto a la derecha tantas veces como
sea el valor del exponente.

i. Ej.: 0.615*103 = 615

ii. Ej.: 0.049*103 = 4.9

d. Para convertir un nmero expresado como potencia negativa en nmero

decimal, trasladar el punto a la izquierda tantas veces como sea el valor
del exponente.

i. Ej.: 70*10-3 = 0.070

ii. Ej.: 82.4*10-2 = 0.824

e. Para multiplicar dos o ms nmeros expresados como potencia de 10,

multiplquese los coeficientes y smese los exponentes para obtener el
producto expresado como potencia de 10.

i. Ej.: 103*104 = 1*103+4 = 107

ii. Ej.: (3*10-4)(6*106) = 18*10-4+6 = 18*102 = 1800

f. Para dividir dos o ms nmeros expresados como potencia de 10,

divdase los coeficientes y rstese los exponentes para obtener el
cociente expresado como potencia de 10.

i. Ej.: 4*105 / 2*103 = 2*10(5)-(3) = 2*102

ii. Ej.: 9*10-2 / 3*10-3 = 3*10(-2)-(-3) = 3*101

13
 g. Cuando un nmero expresado como potencia de 10 es elevado a cierto
exponente, se obtiene un nmero expresado como potencia de 10
elevado al producto de los coeficientes expresados.

i. Ej.: (9*10-4)-5 = 9*1020

ii. Ej.: (0.21*103)-2 = 0.21*10-6

h. Todo nmero expresado como potencia de 10 con coeficiente 0 (cero),

es igual a la unidad.

i. Ej.: 105 / 105 = 100 = 1

2. Conceptos preliminares para conversin de unidades: Redondeo de

cantidades.

a. Si el primer dgito que sigue a los dgitos que se van a conservar es

menor que cinco, los dgitos que van a conservarse no sufren alteracin.

i. Ej.: 123.4532 aproximado en milsimas es 123.453

b. Si el primer dgito que sigue a los dgitos que se van a conservar es

mayor que cinco, el ltimo de los dgitos que van a conservarse se
incrementa en uno.

i. Ej.: 145.76 aproximado en dcimas es 145.8

c. Si el primer dgito que sigue a los dgitos que se van a conservar es

cinco, el ltimo dgito que se conserva se incrementa en uno si es impar,
y sigue siendo el mismo si es par o cero.

i. Ej.: 2.1245 aproximado en milsimas es 2.124

14
 ii. Ej.: 0.0255 aproximado en milsimas es 0.026

3. Conceptos preliminares para conversin de unidades: Notacin cientfica.

a. La notacin cientfica consiste en llevar cualquier nmero a un entero,

punto decimal y decimales, todo multiplicado por una potencia de 10
elevado a algn exponente.
b. Los mltiplos de 10 se representan como diez elevado a un exponente
positivo.

i. Ej.: 100 000 = 10*10*10*10*10 = 105

c. Los submltiplos de 10 se representan como diez elevado a un

exponente negativo.

i. Ej.: 1/1000 = 10-3

d. Cuando se suman o se restan diferentes nmeros con decimales, el

resultado llevar el nmero de decimales que lleva el nmero que tenga
el menor nmero de decimales, por lo que se aplica redondeo de
cantidades de ser necesario.

i. Ej.: 325.12 + 14.25 + 1422.385 = 1761.755 = 1761.76

e. Cuando se multiplican o dividen dos nmeros, se aplicar el criterio

anterior con la variante de que los nmeros se llevan a notacin
cientfica.

i. Ej.: 345*2873 = (3.45*102)*(2.873*103) = (3.45*2.783)*(102*103) =

9.601*105 = 9.60*105

15
4. Conceptos preliminares para conversin de unidades: Conversin de unidades.

a. Es la transformacin del valor numrico de una magnitud fsica,

expresado en una cierta unidad de medida, en otro valor numrico
equivalente y expresado en otra unidad de medida de la misma
naturaleza.

i. Ej.: Convertir 38.5 mg en Kg

ii. Multiplicamos al nmero indicado por un valor que sea igual a 1,
luego de dividir dos unidades equivalentes, siendo una de ellas la
unidad base que se ubicar en la misma posicin en que se
encuentre la unidad del nmero multiplicado 38.5 mg (1 g / 103
mg) = 38.5*10-3 g
iii. Ahora, multiplicamos el nmero obtenido por un valor que sea
igual a 1, luego de dividir dos unidades equivalentes, siendo una
de ellas la unidad solicitada que se ubicar en la misma posicin
en que se encuentre la unidad del nmero multiplicado
38.5*10-3 g (10-3 Kg/1 g)
iv. Resultado: 38.5*10-6 Kg

5. Planteamiento de problemas a resolver en clase.

a. Convertir 0.26 mg de un antibitico a ng, para poder hallar la

sensibilidad de una bacteria.
b. Se tiene una colecta de orina de 24 horas de 2.850 L, para plantearlo en
la frmula de depuracin de creatinina, se debe pasar a mL. Indicar
cuntos mL hay.
c. Una muestra arroj 0.35 mg/L de albmina al ser medida en un
colormetro. Llevar a g/dL para reportar el resultado.
d. Sabiendo que 1 litro equivale a 1 decmetro cbico, determinar en
metros cbicos 6 mL

16
 e. Se midi troponina I con un kit que arroj 0.025 pg/dL, pero al reportar
debemos de pasarlo a las unidades referenciales (ng/mL), indicar cul
es el nuevo valor con estas unidades.

6. Planteamiento de problemas a resolver para el informe

a. Se prepar 13 L de formol para preparacin de tejidos histolgicos,

siendo usados hasta el da de hoy 9550 mL. Cuntos dL quedarn?
b. Un alumno tiene 35 minutos para completar el examen sustitutorio. El
examen empieza a las 12.15 pm y tiene otro sustitutorio a las 3:45 pm,
previo almuerzo en el intermedio. Cunto tiempo, expresado en horas,
tiene para almorzar?
c. El tiempo de coagulacin y sangra de un paciente de UCI Cardiologa
result en 1530 y 945 respectivamente, pero debe ser reportado en
minutos segn valores referenciales. Indique el valor modificado de
ambas pruebas.
d. Segn inventario, se tiene 14590 g de glucosa anhidra en stock.
Logstica mandar 45 frascos de 250 mg cada uno. Indicar el nuevo
stock en Kg.
e. Se mide la hemoglobina por espectrofotometra y se obtiene 15.2 g/dL.
Luego se repite la prueba pero en un equipo hematolgico con resultado
de 149 g/L. Expresar la diferencia de ambos resultados en mg/mL

REFERENCIA BIBLIOGRFICA

Centro Espaol de Metrologa: www.cem.es/sites/default/files

Instituto Nacional de Calidad: www.inacal.gob.pe/cid

17
 PRCTICA N 03
USO DE MATERIALES DE LABORATORIO DE VIDRIO

OBJETIVOS
Conocer, describir y manipular el material de laboratorio hecho de vidrio, as
como su modo de uso y funcionalidad.
Realizar procedimientos bsicos con el material de laboratorio de vidrio.
Describir las diferencias y similitudes entre los diferentes materiales de
laboratorio hechos de vidrio.

INTRODUCCIN
El vidrio es un material orgnico duro, frgil, transparente y amorfo que se halla en
la naturaleza, siendo el hombre capaz de sintetizarlo en la actualidad. Se obtiene a
partir de arena de slice (SiO2), carbonato de sodio (Na2CO3) y caliza (CaCO3), a
1500 C.
El material de vidrio es uno de los elementos fundamentales del laboratorio. Este
tipo de material tiene muchas ventajas debido a sus propiedades fsico-qumicas
que lo hacen sobresalir por encima de otros materiales, siendo su mayor
inconveniente su fragilidad.

Entre los materiales de vidrio a utilizar, pasaremos a repasar los siguientes:

Bureta: recipiente alargado, graduado, tubular, de dimetro interno

uniforme. Su principal uso es el volumtrico por tener alta precisin. Tiene
una llave de vidrio esmerilado o de goma.
Matraz aforado: de cuello alto y estrecho, que aumenta su exactitud. Es un
tipo de matraz de uso volumtrico. Empleado para medir un volumen exacto
de lquido ya que no tiene graduacin pero s aforo.
Probeta: es un cilindro graduado, con base de apoyo y pico para verter en
la parte superior. Es til para contener lquidos y medir volmenes de forma
aproximada.

18
 Matraz de Erlenmeyer: de forma troncocnica, es til para realizar mezclas
por agitacin y para la evaporacin controlada de lquidos. Tiene
graduacin, pero no tiene mucha exactitud.
Tubos de ensayo: de forma cilndrica con un extremo abierto y el otro
cerrado y redondeado.
Vaso de precipitado: llamado beaker, es de forma cilndrica con fondo
plano, suelen estar graduados (con poca exactitud). No se recomienda para
medir volmenes.
Baln: de cuello largo y cuerpo esfrico, til para calentar sustancias. Su
forma permite remover su contenido sin derramar. Sin graduacin ni aforo.
Refrigerante: consta de dos tubos cilndricos concntricos, por el tubo
interior circulan los vapores a condensar, por el exterior circula el lquido de
refrigeracin.
Matraz de Kitasato: tiene un tubo de desprendimiento lateral que lo
diferencia de un matraz de Erlenmeyer. til para experimentos de
destilacin, recoleccin de gases, etc.

PROCEDIMIENTO
1. Tomar una muestra de sangre venosa con el sistema de extraccin al vaco
en un tubo de tapa amarilla.
2. Evaluar la coagulacin de la muestra midiendo el tiempo trascurrido.
3. Centrifugar la muestra para obtener el suero, a 4500 RPM durante 5
minutos.
4. Pipetear el suero obtenido a un tubo de ensayo y rotular como 10x
5. Medir 9 ml de agua destilada en una probeta, vaciar 4.5 ml a un vaso de
precipitado.
6. Pipetear 1 ml de suero y vaciarlo al vaso de precipitado donde se encuentra
el agua destilada y homogenizar. Vaciar a una fiola esta mezcla.
7. Completar hasta enrasar con agua destilada de la probeta, de esta manera
se obtendr una dilucin 1/10. Verificar que la mezcla llegue hasta el aforo.

19
 8. Agregar una parte de la dilucin a un tubo de ensayo y rotular este tubo
como 1X.
9. Preparar una dilucin seriada al doble de 3 tubos: en los 3 tubos, colocar
0.2 ml de suero puro y en el primer tubo adicionar 0.2 ml de azul de
metileno. Mezclar bien y transferir 0.2 ml del primer tubo al segundo tubo.
Mezclar bien y de esta mezcla, transferir 0.2 ml al tercer tubo. Mezclar bien
y tomar 0.2 ml del tercer tubo y descartar.
10. Repetir el procedimiento usando la solucin del tubo 10x
11. Graficar los resultados obtenidos de las diluciones seriadas.

Grafique en los cuadros vacos el material de vidrio correspondiente:

Bureta Matraz Probeta

Matraz Erlenmeyer Vaso de precipitado Baln

Refrigerante Matraz de Kitasato Tubos de ensayo

20
BIBLIOGRAFA REFERENCIAL
AMV Ediciones; Libros tcnicos sobre cristalera y vidrio;
www.amvediciones.com/vidrios.htm
Mendo Rubio Manuel. Instrumentacin de Laboratorio. Primera edicin.
2002.

21
 PRCTICA N 04
USO DE LA BALANZA, CENTRFUGA Y MICROPIPETAS

OBJETIVOS
Conocer el fundamento y propsito de uso de la balanza, la centrfuga y
micropipetas.
Conocer y hacer uso adecuado de la balanza, la centrfuga y micropipetas.
Indentificar los factores que afectan la operativa de los equipos
mencionados en la prctica.

INTRODUCCIN
En el trabajo de laboratorio se usan equipos que nos permiten alcanzar exactitud
y precisin adecuada en los procedimientos, de modo tal que su uso es
indispensable y para ello debemos de entender su fundamento y manejo.
En la presente prctica, se conocer el fundamento de la balanza, la centrfuga y
la micropipeta, as como se llevar a cabo procedimientos laboratoriales donde se
tenga la oportunidad de ganar destreza en el uso de los equipos mencionados.

La balanza

Es un instrumento que mide la masa de un cuerpo o sustancia, tambin el peso de

los mismos dado que existe una relacin establecida entre masa y peso. Este
instrumento es usado en el laboratorio para ejercer procedimientos de calibracin
de pipetas, pesaje de reactivos, colorantes o cualquier sustancia, as como para
determinar densidades o pesos especficos.
Se diferencian entre s por el diseo, los principios utilizados y el criterio de
metrologa. Actualmente, se puede decir que existen dos grandes grupos:
mecnicas y electrnicas
Las balanzas mecnicas ms comunes son las de resorte, de plato superior, de
peso deslizante y analtica. Las balanzas electrnicas involucran tres elementos
bsicos: el objeto a pesar, el transductor de medida y un circuito elctrico.

22
La centrfuga
Es un equipo que pone en rotacin una muestra para acelerar la sedimentacin de
sus componentes o fases, mediante fuerza centrfuga. Esta separacin de sus
componentes se hace en base a su densidad. El centrifugado es una
sedimentacin acelerada que reemplaza a la aceleracin gravitacional. Se calcula
la aceleracin elevando al cuadrado la velocidad angular de giro de la centrfuga y
el resultado se multiplica por el radio de la circunferencia que se genera al girar el
equipo. Con esto, se logra alcanzar velocidades muchos mayores que la intrnseca
de la gravedad.
A la centrifugacin lo rige la Ley de Strokes, segn la cual las partculas
sedimentan ms fcilmente cuanto mayor sea su dimetro y su peso especfico
comparado con el del fluido. Tambin sedimentan ms fcilmente en cuanto
menor sea viscosidad. Cabe mencionar que la viscosidad del fluido es esencial, ya
que sin sta, todas las partculas se precipitaran a la vez.
Existen dos grandes grupos de centrfugas: analticas y preparativas. Con las
primeras, se puede obtener la masa molecular, coeficiente de sedimentacin, etc.
son equipos escasos y caros. Con las segundas, podemos observar 4 subgrupos:
de mesa, de alta capacidad, de alta velocidad y ultracentrfugas.

23
La micropipeta
Es un instrumento que mide el volumen de un lquido, con el objetivo de
transferirlo de un contenedor a otro. Requiere de un mantenimiento adecuado, ya
que su precisin y exactitud se garantizan con calibraciones peridicas tal como
requiere la norma DINI 12650, mediante test gravimtrico usando agua destilada a
25 C. El funcionamiento de las micropipetas se basa en el principio de
desplazamiento del aire usando puntas desechables. La forma de usar este
instrumento es mediante dispensacin sencilla o pipeteo sencillo, y su variante
llamada pipeteo reverso.

24
Pipeteo reverso, esquema:

PROCEDIMIENTO:
A. Uso y manejo de la micropipeta

Rotular 5 tubos de 12x75 en orden numrico

Dispensar 0.500 ml de agua destilada a los tubos mediante la tcnica de
pipeteo estndar.

25
 Agregar al tubo 01, 0.500 ml de azul de metileno y mezclar
Transferir 0.500 ml de la dilucin del primer tubo al siguiente tubo (N
02) y mezclar.
Hacer transferencia de 0.500 ml de la solucin de la misma manera a
los dems tubos.
En el tubo 05, luego de transferirle la dilucin previa, descartar 0.500 ml
de la dilucin obtenida.
Rotula 5 tubos nuevamente y repetir todo el procedimiento, pero esta
vez usando la tcnica de pipeteo reverso.

B. Uso y manejo de la balanza

Pesar en la balanza analtica un vaso de precipitado y anotar el valor.

Pesar otro vaso de precipitado de dimensiones iguales al primer vaso,
anotar el resultado.
Colocar en los vasos de precipitado, los dos grupos de tubos con las
diluciones preparadas en el ejercicio anterior (grupo pipeteo estndar y
grupo pipeteo reverso)
Pesar nuevamente cada vaso de precipitado y anotar los pesos.

C. Uso y manejo de la centrfuga

Colocar los 5 tubos del primer grupo de diluciones en el portatubos de

la centrfuga, contrapesndolos.
Programa la centrfuga a 5000 RPM por 5 minutos
Retirar los tubos de la centrfuga, teniendo cuidado de no agitarlos.
Mantenerlos en reserva en una gradilla.
Colocar los 5 tubos del segundo grupo de diluciones en el portatubos de
la centrfuga, contrapesndolos.
Programar la centrfuga a 2500 RPM por 5 minutos.

26
 Retirar los tubos de la centrfuga sin agitarlos. Observar y comparar los
dos grupos de tubos centrifugados. Discutir sobre estos resultados y el
efecto de la velocidad sobre la separacin de los componentes.
Mezclar por inversin los dos grupos de tubos y repetir la operacin de
centrifugacin: el primer grupo se programar a 3500 RPM por 10
minutos y el segundo grupo se programar a 3500 RPM por 5 minutos.
Anotar los resultados y discutir el efecto del tiempo de centrifugacin
sobre la separacin de los componentes.

BIBLIOGRAFA

Mendo Rubio Manuel. Instrumentacin de Laboratorio. Primera edicin.

2002.
Snchez de Romero. Instrumentacin en Bioqumica- Fundamentos
bsicos. Primera edicion. 2000. Concytec. Lima Peru

27
 PRCTICA N 05
PREPARACIN DE SOLUCIONES

OBJETIVOS
Preparar soluciones y diluciones de concentracin determinada.
Observar y describir la solubilidad de los reactivos a utilizar en solucin
acuosa.
Calcular cantidades y concentraciones de reactivos necesarios para
preparar diferentes soluciones en el laboratorio.

INTRODUCCIN
El manejo de reactivos disueltos preparados a partir de los mismos pero con
diferente concentracin, es parte rutinaria del trabajo de laboratorio. Se denomina
solucin a una mezcla homognea de dos o ms sustancias, cuya composicin
puede variar como se desee. Se reconocen dos tipos de componentes: el soluto y
el solvente. Lo primero que se debe observar es la solubilidad, la dispersin del
soluto en el solvente y los cambios energticos cuando el soluto se solvata
(hidroliza, siempre que el solvente a usar sea agua).
Estas reacciones de hidratacin pueden producir varios cambios en la solucin:
formacin de precipitados, cambios de pH, entre otros. Los cambios fsicos y
qumicos alteran las propiedades de la solucin, y esto es debido a las
caractersticas fsico-qumicas de los solutos. La solucin adquiere propiedades
como el color, el aspecto, la consistencia, la viscosidad, la densidad, etc.
caractersticos del soluto y el solvente le confiere su estado como materia.
La cantidad del soluto contenido en una cantidad de solvente o solucin se llama
concentracin. Los criterios para expresar cuantitativamente una concentracin
son, principalmente, masa, volumen y cantidad de materia.
Como unidades de concentracin usadas en el anlisis qumico, son de resaltar
dos: molaridad (M) y normalidad (N). Otras unidades de concentracin conocidas
son las porcentuales: % masa/masa, % masa/volumen y % volumen/volumen.

28
PROCEDIMIENTO
Pesar 0.85 g de cloruro de sodio y colocarlo en un vaso de precipitado
Medir 80 ml de agua destilada en una probeta y verterla en el vaso de
precipitado con cloruro de sodio. Disolver la sal con la ayuda de una
bagueta.
Trasvasar el contenido del beaker a una fiola con aforo de 100 ml y enrasar
con agua destilada.
Trasvasar la solucin de la fiola a un envase de vidrio limpio. Rotular
adecuadamente indicando el nombre de la solucin, la fecha de
preparacin y el grupo que lo prepar, as como la concentracin en
%masa/volumen
Calcular la concentracin en otras unidades, tales como mg/dl y molaridad.

EJERCICIOS:

1. Detalle cmo se debe preparar 100 ml de una solucin de cido clorhdrico

0.15 M, si se tiene cido clorhdrico 0.5 M.
2. Una solucin se prepara disolviendo 250 g de KOH en suficiente agua para
preparar 3 L de solucin. Indique la molaridad de la solucin.
3. Cuntos gramos de AgNO3 se necesitan para preparar 400 g de una
solucin al 5%?
4. Si se disuelven 4 g de H2SO4 en suficiente agua para 300 ml de solucin,
Cul ser la normalidad de la solucin?
5. Determinar la concentracin porcentual v/v si se mezclan 90 ml de soluto
con 125 ml de disolvente.
6. Para preparar una solucin 1 N de cido fosfrico Cuntos gramos de ste
se requieren?
7. Cul es el porcentaje de una solucin que contiene 400 g de cloruro de
amonio en 10 kg de solucin.

29
 8. Qu volumen de solucin 0.5 M de CuSO4 se puede preparar con 90.5 g
de ese soluto?
9. cuntos gramos de hidrxido de magnesio se necesitan para preparar 85
ml de una solucin que contenga 0.45 g/L
10. Cmo se debe preparar 1 L de Dextrosa al 0.50% p/v?

BIBLIOGRAFA

Mendo Rubio Manuel. Instrumentacin de Laboratorio. Primera edicin.

2002.
Snchez de Romero. Instrumentacin en Bioqumica- Fundamentos
bsicos. Primera edicion. 2000. Concytec. Lima Peru

30
 PRACTICA N 6
USO DE MICROSCOPIO

OBJETIVOS
Reconocer los principales componentes mecnicos del microscopio ptico
Describir correctamente el funcionamiento de cada una de las partes del
microscopio ptico
Hacer uso correcto de microscopio
Iluminar y enfocar correctamente el campo del microscopio para el anlisis
de muestra
Trabajar correctamente con muestras liquidas bajo visin directa del
microscopio
Efectuar correctamente la limpieza del microscopio ptico
Conocer las caractersticas de los microscopios de campo claro, campo
oscuro y luz polarizada

INTRODUCCIN
El microscopio compuesto es un instrumento ptico que permite obtener imgenes
aumentadas de los objetos para hacer visibles detalles que no lo son a simple
vista.
Este instrumento es de uso rutinario en los laboratorios clnico, de investigacin y
docencia, en el campo de las ciencias biolgicas, medicas y afines; siendo
importante determinar y seleccionar el tipo de microscopio y accesorios
adecuados para diversos trabajos.
Siendo el microscopio un instrumento de precisin y de costo elevado es preciso
asegurarle un buen rendimiento y larga duracin, dndole uso y cuidados
adecuados, los que se logran teniendo conocimientos del funcionamiento de todas
y cada una de sus partes.

31
Microscopio de campo claro
Este tipo de microscopio se emplea en la mayora de exmenes de rutina, cuando
se observan microorganismos que se pueden colorear. Los microorganismos o
material de estudio coloreado aparecen oscuros frente un fondo claro.

Microscopio de campo oscuro

Las clulas y en general todos los tejidos del organismo son muy transparentes y
por lo tanto difciles de ser observados al microscopio ptico sin ser tratados con
reactivos qumicos o sustancias colorantes. Es estos casos el mayor grado de
contraste entre el objeto y su fondo es mucho ms importante que la resolucin.
La microscopia de campo oscuro se basa en el hecho de que la luz de dispersa en
los lmites entre los diversos materiales que poseen diferentes ndices de
refraccin.
En microscopia de campo oscuro se logra aumentar el contraste, iluminando el
objeto oblicuamente, es decir, evitando que los rayos de luz procedentes del
condensador lleguen al objeto directamente: esta falta de luz constituye un fondo
oscuro sobre el que resalta el objeto que aparece brillante debido a la dispersin
de la luz. Para esto se remplaza el condensador comn del microscopio por un
condensador de campo oscuro que ilumina al objeto oblicuamente.
Microscopio de luz polarizada
La forma de energa que se transmite en lnea recta y vibra solamente en un
plano, recibe el nombre de luz polarizada a diferencia de la luz normal que vibra
en todos los planos alrededor de su eje.
La microscopia de polarizacin se basa en el comportamiento de ciertas
sustancias que son pticamente activas o birrefringentes al ser observadas con luz
polarizada, las cuales hacen girar el plano de vibracin (o plano de polarizacin)
de la luz polarizada que pasa a travs de ella, a diferencia de la mayor parte de
sustancias transparentes que transmiten la luz polarizada sin alteracin alguna del
plano de vibracin o sustancias monorrefringentes.

32
El microscopio polarizador tiene utilidad en ciencias biolgicas, medicas y afines,
aunque su mayor utilidad se da en geologa y qumica de all que tambin se le
llame microscopio petrogrfico.

PROCEDIMIENTO
Materiales
Microscopio ptico
Papel lente
Alcohol isoproplico
Lamina coloreada de tejido
Lamina con muestra de sedimento urinario cubierta con cubreobjetos
Lamina con muestra de cristales de acido acetil saliclico almidn talco
cubierta con filtro de luz polarizada
Cartulina negra
Tijeras

Procedimiento 1: Partes del microscopio ptico y limpieza

- Trasladar el microscopio a la mesa de trabajo cogindolo del brazo y
apoyando la base de este en la otra mano
- Reconocer las partes del microscopio
- Conectar el microscopio.
- Limpiar con sumo cuidado las superficies de la parte ptica del microscopio:
Objetivo, ocular condensador con papel lente. Tratar de retirar el polvo,
grasa (*) y humedad que son muy perjudiciales para este sistema del
microscopio.
- Limpiar la parte mecnica del microscopio con una tela suave, cuidando las
partes mviles que deben estar lubricadas y debidamente ajustadas.
- (*) Usar alcohol isoproplico en caso de que se encuentre sucio u opaco el
lente objetivo u ocular. Embeber en algodn, pasar sobre el lente limpiando
de manera homognea y dejar que seque. Seguidamente limpiar con papel
lente.
33
Procedimiento 2: Enfoque de muestras
Enfocar el microscopio con el objetivo de menor aumento y graduando la
luz de la fuente de poder.
El condensador debe estar colocado en el punto en el cual desaparece
completamente la imagen de la fuente luminosa y se consiga observar el
campo del microscopio iluminado con uniformidad
Colocar la lamina preparada sobre la platina del microscopio enfocando con
el tornillo macromtrico primeramente y luego con el micromtrico, siempre
con el objetivo de MENOR AUMENTO. Observar la morfologa. Ir cerrando
poco a poco el diafragma hasta lograr un contraste adecuado visualizando
mejor y con mayor detalle.
Cambiar al objetivo de mayor aumento, enfocar la muestra e ir graduando el
diafragma, obteniendo un contraste adecuado para observar los detalles de
la estructura.
Cambiar al objetivo de inmersin, moviendo muy suavemente el revlver
del microscopio, adiciones una gota de aceite de inmersin sobre la lamina
de muestras permanente, utilizando la luz y el diafragma completamente
abiertos. Enfoque por medio de movimientos suaves del micromtrico hasta
diferenciar los detalles estructurales.
Esquematice lo observado
Terminadas las observaciones al microscopio convencional, limpie con
papel lente el objetivo de inmersin hasta retirar completamente el aceite de
inmersin. Deje el microscopio con el objetivo de menor aumento.
Desconecte el microscopio, cbralo y gurdelo.

Procedimiento 3: Uso del microscopio de campo oscuro

Enfocar el campo del microscopio con el objetivo de menor aumento con el
diafragma de microscopio completamente abierto y con luz fuerte.
Preparar el disco de retencin de luz de cartulina negra, segn muestra
proporcionada por los profesores y colocarlo en el soporte de los filtros.
34
 Con el objetivo de menor aumento y teniendo el diafragma completamente
abierto enfocar el campo del microscopio
Colocar la lamina de sedimento urinario u organismos de vida libre al
microscopio. Observar los componentes brillantes con un fondo oscuro.
Esquematizar lo observado

35
Procedimiento 4: Uso del microscopio de luz polarizada
Enfocar el microscopio con el objetivo de menor aumento teniendo el
diafragma completamente abierto, colocar el filtro polaroides en el soporte
para filtros debajo de la platina, el que corresponde al polarizador.
Colocar a nivel del ocular otro filtro polaroide: analizador, de tal manera
que descanse en el diafragma del ocular.
Teniendo uno de los filtros fijos girar el otro filtro sobre su eje por ejemplo el
polarizador, observar que al dar una vuelta completa se tiene dos veces el
campo del microscopio iluminado y dos veces completamente oscuro, en
forma alternada.
Teniendo el campo del microscopio completamente oscuro colocar sobre la
platina una lamina con muestra cristales de acido acetil saliclico, almidn,
talco o sedimento urinario.
Esquematizar lo observado
Recomendaciones
Conseguir el campo del microscopio completamente oscuro moviendo uno
de los filtros polaroide antes de colocar una muestra para su observacin.
En microscopia de polarizacin solo se detectan las sustancias pticamente
activas.

36
INFORME
1. Esquema de todo lo observado en Practica
2. Preguntas para resolver:
Qu funcin desempea el condensador en el microscopio?
Esquematice un microscopio compuesto y seale sus partes?
Qu es una lamina patrn de uso para micrometra?
Qu diferencias existen entre un microscopio de campo claro y uno de
campo oscuro?
Cul es la funcin del condensador de campo oscuro?
Cul es la funcin del condensador de campo oscuro?
Cul es la funcin del filtro polarizador colocado en un microscopio
convencional?
En que posicin deben encontrarse los filtros para lograr una buena
observacin de muestras al microscopio de luz polarizada?

BIBLIOGRAFA

Mendo Rubio Manuel. Instrumentacin de Laboratorio. Primera edicin.

2002.
Manual de microscopia online.
http://pagina.jccm.es/museociencias/otras%20actividades%20web/material
%20cnr%20web/manual%20de%20microscopia.pdf
Microscopia. Montalvo 2010. Online
http://histologiaunam.mx/descargas/ensenanza/portal_recursos_linea/apunt
es/2_microscopia.pdf

37
 PRACTICA N 7
USO DEL PH METRO Y AUTOCLAVE

OBJETIVOS
Conocer el correcto funcionamiento y uso del pHmetro
Poner en operacin un pHmetro
Aplicar los cuidados bsicos de un electrodo.
Realizar la medicin de PH
Conocer el correcto funcionamiento y uso del autoclave

INTRODUCCION
El mtodo ms conveniente y confiable para medir el pH de las soluciones y
fluidos biolgicos es mediante el uso de un medidor de pH comnmente
denominado potencimetro: este mide la fuerza electromotriz (f.e.m.)de una celda
formada por un electrodo de referencia, la solucin problema y un electrodo de
vidrio sensible a hidrogeniones.
Los mtodos potenciomtricos estn basados en la medida de la diferencia de
potencial (voltaje) entre dos electrodos sumergidos en una solucin, bajo
condiciones de equilibrio (corriente cero).
El instrumental necesario para las medidas potenciomtricas comprende:
Un electrodo de referencia: cuyo potencial se conoce y se mantiene
constante durante la medicin
Un electrodo indicador cuyo potencial varia en la actividad o concentracin
de la muestra
Un dispositivo para la medida de potencial

Electrodos de vidrio
El primero y ms ampliamente usado es el electrodo de membrana de vidrio que
sirve para medir la concentracin del ion H+ de la muestra lo que se expresa como
unidades de pH de una escala de pHmetro de 0 a 14.

38
El electrodo consiste en un tubo de vidrio o de
plstico en cuyo extremo presenta un pequeo
orificio de aproximadamente 0.1 mm de
dimetro. Dentro del bulbo hay una solucin
de acido clorhdrico (0.1 mol/L) conectada a un
alambre de platino por un electrodo de
Ag/AgCl reversible en presencia de
hidrogeniones. Al sumergir el bulbo en la
solucin se genera una diferencia de potencial
a travs de la delgada membrana,
proporcional al pH de la solucin problema.
El electrodo de vidrio es muy verstil ya que
no se ve afectado por los gases disueltos,
agentes oxidantes o reductores, materia
orgnica, etc. Puede ser de pequeo tamao y
combinarse con el electrodo de referencia en una sola unidad, lo que permite ser
usado para determinar pH de pequeos volmenes. Su desventaja es su elevado
costo y de que debe ser descartado si uno de sus componentes falla.

Recomendaciones para el uso y manejo del pHmetro

a) Los electrodos nuevos de vidrio deben sumergirse en HCL 0.1 mol/L por lo
menos 24 horas antes de su uso.
b) Cuando se est preparando buffers o se est realizando una titulacin,
tener presente que las soluciones deben agitarse con una varilla de vidrio o
usar un magneto, antes de introducir los electrodos y medir el pH.
c) Los cambios de temperatura afectan los valores de pH, por lo que las
soluciones buffer de referencia y las soluciones que contengan la muestra
deben medirse a la misma temperatura.
d) Los electrodos deben lavarse antes y despus de su uso y no deben
tocarse con las manos, de este modo se evita la contaminacin o la
adsorcin de sustancias (protenas) al vidrio permeable a los H+.

39
 e) El electrodo de vidrio debe mantenerse en agua o buffer y nunca dejar que
se sequen.
f) El electrodo de calomel (de referencia), debe siempre contener una
cantidad apropiada de solucin saturada de KCl.
g) Tener en cuenta el error alcalino que se observa cuando se realizan
mediciones de pH a valores por encima de PH 10 ya que el electrodo de
vidrio corriente es casi siempre permeable a los iones sodio. Si el Na+ est
presente en una solucin cuyo pH va a determinarse, el pH medido,
desciende, segn aumenta la concentracin de iones Na+, debido a que el
electrodo detecta la suma de las concentraciones de los iones H+ y NA+.
Por lo tanto la concentracin de los H+ puede parecer mayor de lo que es.

PROCEDIMIENTO N 1: MEDICION DE PH

Materiales
PHmetro de vidrio
Solucin de HCl
Solucin de NaOH
Solucin buffer de pH desconocido
Solucin de referencia de PH4
Solucin de referencia de PH9
Agua destilada en una piceta
Papel toalla absorbente
Bagueta de vidrio

Procedimiento
Realizar la identificacin de las partes del pH
Identificar el electrodo y comentar sus caractersticas, componentes y
cuidados
Lavar el electrodo con agua destilada

40
 Secar con papel absorbente el exceso de agua del electrodo. En todo
momento usar guante y no tocar el bulbo directamente
Calibrar el pHmetro. Sumergir en la solucin de pH4
Lavar el electrodo con abundante agua y secar
Calibrar el pHmetro. Sumergir en la solucin de pH9
Lavar el electrodo con abundante agua y secar
Una vez calibrado el pHmetro sumergir en la muestra problema
Realizar la anotacin del pH de la muestra
Ajustar el pH a 7.4 con las soluciones de HCl (para ajustar el pH a ese
estado mas acido) o NaOH (para ajustar el pH a un nivel mas alcalino).
Agregar los ml necesarios de cada solucin a la muestra para ajustar el ph.
Recomendacin de gota en gota segn cambie el pH

PROCEDIMIENTO N 2: ESTERILIZACION DE MATERIAL

Materiales
Autoclave
Material de vidrio (placas petri)
Papel kraff
Cinta masking tape
Cinta indicadora de autoclave
Agua destilada
Timer
Procedimiento
- Identificar las partes del autoclave
- Abrir la tapa y agregar el agua segn el nivel indicado en el autoclave
- Colocar el soporte base
- Preparar el material a esterilizar: envolver las placas petri con papel kraff y
cinta masking tape.
- Colocar la cinta indicadora sobre cada material a esterilizar
- Colocar los materiales a esterilizar dentro del autoclave
- Conectar el autoclave

41
 - Colocar la tapa y ajustar
- Abrir la vlvula de escape
- Programar el autoclave a 121C por 20 min
- Encender el autoclave
- Cuando este caliente y comience a salir aire caliente cerrar la vlvula
- Verificar que la presin comienza a subir y tomar el tiempo de esterilizacin
a partir de que llegue a 121C
- Al finalizar los 20 min, apagar el autoclave
- Esperar a que la temperatura descienda (NO ABRIR EL AUTOCLAVE)
- Esperar a que la temperatura este por lo menos menor a 55 C
- Una vez frio abrir y retirar el material que ya esta esterilizado.

* Se pueden esterilizar material de vidrio, o soluciones para uso en el

laboratorio, tambin para descontaminar material o soluciones que contiene
microorganismos para su descarte.

BIBLIOGRAFA

Snchez de Romero. Instrumentacin en Bioqumica- Fundamentos

bsicos. Primera edicion. 2000. Concytec. Lima Peru
Mendo Rubio Manuel. Instrumentacin de Laboratorio. Primera edicin.
2002.
Instrumentos de laboratorio: Usos de pHmetro. Online:
http://instrumentosdelaboratorio.org/phmetro

42
 PRCTICA N 08
USO DEL ESPECTROFOTMETRO

OBJETIVOS

Conocer el fundamento de la espectrofotometra y sus aplicaciones en el

trabajo del laboratorio clnico.
Demostrar el manejo del instrumento y describir su mantenimiento.
Describir y ejecutar la preparacin de una curva de calibracin

INTRODUCCIN
La espectroscopa de absorcin de luz visible y UV probablemente sea la tcnica
analtica ms usada en la determinacin de analitos en el laboratorio clnico. Su
medicin se lleva a cabo en el instrumento llamado espectrofotmetro, que tiene la
capacidad de leer longitudes de onda de diferentes espectros de luz, a diferencia
del colormetro, que slo percibe emisin del rango de luz visible.
La regin visible del espectro electromagntico abarca de 380 a 780 nm. La
siguiente tabla muestra la divisin de la regin visible del espectro:

Longitud de
Color absorbido Color reflejado
onda(nm)
380 Ultravioleta ----------------------------------------
380-435 Violeta Verde amarillento
435-480 Azul Amarillo
480-490 Azul verduzco Anaranjado
490-500 Verde azuloso Rojo
500-560 Verde Prpura
560-580 Verde amarillento Violeta
580-595 Amarillo Azul
595-650 Anaranjado Azul verduzco
650-780 Rojo Verde azuloso
780 Infrarrojo cercano -------------------

43
Las seales medidas en el espectrofotmetro son la absorbancia y la
transmitancia. La primera es una medida indirecta de la segunda y se relacionan
entre s siendo la transmitancia igual al logaritmo inverso de la absorbancia. Es la
Ley de Lambert-Beer la que rige los valores obtenidos por este instrumento y que
se relacionarn con las concentraciones de sustancias calibradoras que fueron
medidos previamente, y que generan la llamada curva de calibracin.

PROCEDIMIENTO
Rotular 5 tubos, del 1 al 5
Agregar 5 ml de agua destilada en el tubo N 01
En el tubo N 02, dispensar 4 ml de agua destilada y 1 ml de reactivo de
Benedict
En el tubo N 03, dispensar 3 ml de agua destilada y 2 ml de reactivo de
Benedict
En el tubo N 04, dispensar 2 ml de agua destilada y 3 ml de reactivo de
Benedict
En el tubo N 05, dispensar 5 ml de reactivo de Benedict
Incubar los tubos a temperatura ambiente por 10 minutos.
Leer en el espectrofotmetro a 610 nm y anotar los resultados obtenidos.
Graficar en papel milimetrado los valores obtenidos y crear la curva de
calibracin.

BIBLIOGRAFA

Snchez de Romero. Instrumentacin en Bioqumica- Fundamentos

bsicos. Primera edicion. 2000. Concytec. Lima Peru
Mendo Rubio Manuel. Instrumentacin de Laboratorio. Primera edicin.
2002.
Instrumentos de laboratorio: Usos de espectrofotmetro. Online:
http://instrumentosdelaboratorio.org/espectrofotmetro

44
 PRATICA N 9
CROMATOGRAFA EN PAPEL

OBJETIVO
Llevar a cabo una corrida cromatogrfica identificando las partes
fundamentales del proceso
Conocer las caractersticas y factores que influyen en la cromatografa en
papel

INTRODUCCIN
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin para la caracterizacin de
mezclas complejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia; es un
conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo objetivo
es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes.
La cromatografa es una tcnica que permite l separacin de los componentes de
una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos:
a) Retencin: efecto producido sobre los componentes de la mezcla(analito)
por una fase estacionaria, que puede ser un slido o un liquido anclado a
un soporte solido.
b) Desplazamiento: efecto ejercido sobre los componentes de la
mezcla(anlaito) por una fase mvil, que puede ser un liquido o un gas.

La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se excluyen

mutuamente:

- Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que

puedan ser usados posteriormente.

45
 - Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad analtica).
En este caso, las cantidades de material empleadas suelen ser muy
pequeas.

Conceptos bsicos en cromatografa:

- Analito es la substancia que se va a separar durante la cromatografa.
- Fase mvil es la fase que se mueve en una direccin definida. Puede ser
un lquido (cromatografa de lquidos), un gas (cromatografa de gases) o un
fluido supercrtico (cromatografa de fluidos supercrticos).
- Fase estacionaria es la sustancia que est fija en una posicin durante la
cromatografa. Un ejemplo es la capa de gel de slice en la cromatografa
en capa fina o papel filtro en la cromatografa en papel.

Cromatografa en papel:
La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para
realizar anlisis cualitativos ya que pese a no ser una tcnica muy potente no
requiere de ningn tipo de equipamiento.

La fase estacionaria est constituida por una tira de papel filtro. La muestra se
deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la solucin y
evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase mvil se
hace ascender por capilaridad colocando la tira de papel verticalmente y con la
muestra hacia abajo dentro de un recipiente que contiene fase mvil en el
fondo.

Despus de unos minutos cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado

al extremo se retira el papel y se deja secar. Si el disolvente elegido fue
adecuado y las sustancias tienen color propio se vern las manchas de distinto
color separadas. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se
somete a procesos de revelado.

46
 Hay varios factores de los cuales depende una cromatografa eficaz: la
eleccin del disolvente y la del papel de filtro.

MATERIALES

Papel filtro
Cmara cromatografica de vidrio (Beaker 250 ml con tapa o frasco
hermetico de vidrio)
Probeta de 50 ml
Pipeta de 10 ml
Tintas vegetales color: negro y verde
Tintas de acuosa (plumn): negro, amarillo, azul, verde
15 ml Alcohol etlico (solvente 1)
15 ml Alcohol : Acetona (2:1) (solvente 2)
Lpiz
Regla
Tijeras

PROCEDIMIENTO

1. Cortar 4 piezas de papel filtro con las siguientes medidas:

47
 2. Realizar 4 marcas (lpiz) a 1.5 cm de la base segn el siguiente esquema:

3. Las cuatros piezas de papel filtro sern divididas en dos grupos (A y B)

4. Se colocaran las 6 muestras en dos piezas de papel filtro por duplicado. Un
juego para cada grupo, segn esquema:

Grupo A Grupo B
(Solvente : Alcohol) (Solvente: Alcohol: Acetona)
Papel 1 Amarillo Amarillo
Azul Azul
Verde Verde
Papel 2 Negro Negro
Negro (tinta) Negro (tinta)
Verde (tinta) Verde (tinta)

5. Dos de ellas sern sometidas a solvente 1, y las otras dos al solvente 2.

6. Agregar el solvente o fase mvil a cada cmara. Grupo A: Alcohol; Grupo B:
Alcohol: Acetona. Cerrar la cmara y esperar 5 min.
7. Colocar los papeles filtros en su respectiva cmara cromatogrfica. Cerrar
la cmara
8. Esperar 1hora, aproximadamente, a que la fase mvil desplace las
muestras a travs del soporte (base solida). Hasta que alcance unos
milmetros antes de llegar al final del papel filtro.
9. Retirar los papel filtros y dejar secar

48
 10. Identificar el frente de corrida, la ubicacin de las muestras y/o de sus
componentes. Marcar con lpiz.
11. Realizar la medicin del frente de corrida y las muestras. Anotar los
resultados en la siguiente tabla

Solvente A Solvente B
(Alcohol) (Alcohol:Acetona)
Papel 1 Muestras 1___ Papel 1 Muestras 1___
Frente de Frente de
corrida:_____ corrida:_____
Muestras 2___ Muestras 2___

Muestras 3___ Muestras 3___

Papel 2 Muestras 1___ Papel 2 Muestras 1___

Frente de Frente de
corrida:_____ corrida:_____
Muestras 2___ Muestras 2___

Muestras 3___ Muestras 3___

BIBLIOGRAFIA

Braithwaite, A. Mtodos cromatogrficos, 4 ed., ED. Chapman & Hall,

Londres, 1985. Pginas 216-217, 271-272.
.
http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/cel
ular/cromatografia.htm

49
 http://www.profeonline.com/laboratorioquimico/mod_12/docs/cromatografia_
de_afinidad.pdf
http://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia/capa-fina
http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_papel
https://morralcampesino.files.wordpress.com/2016/03/cromatografia-
restrepo-pinheiro.pdf
https://es.slideshare.net/silvyvargas/2011-135-manual-cromatografia

50
 PRATICA N 10
ELECTROFORESIS EN AGAR

OBJETIVO

Llevar a cabo una corrida electroforetica identificando las partes

fundamentales del proceso.
Conocer las caractersticas y factores que influyen en la electroforesis en
gel de agar.

INTRODUCCIN
La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas segn la
movilidad de stas en un campo elctrico. La separacin puede realizarse sobre la
superficie hidratada de un soporte slido (electroforesis en papel o en acetato de
celulosa), a travs de una matriz porosa (electroforesis en gel), o bien en
disolucin (electroforesis libre). Dependiendo de la tcnica que se use, la
separacin obedece en distinta medida a la carga elctrica de las molculas y a su
masa.

La electroforesis de uso ms comn es para el anlisis de mezclas de protenas o

de cidos nucleicos la cual utiliza como soporte un gel, habitualmente de agarosa
o de poliacrilamida. Los cidos nucleicos ya disponen de una carga elctrica
negativa, que los dirigir al polo positivo, mientras que las protenas se cargan al
unirse con sustancias como el SDS (detergente) que incorpora cargas negativas
de una manera dependiente de la masa molecular de la protena. Al poner la
mezcla de molculas y aplicar un campo elctrico, stas se movern y debern ir
pasando por la malla del gel (una red tridimensional de fibras cruzadas), por lo que
las pequeas se movern mejor, ms rpidamente. As, las ms pequeas
avanzarn ms y las ms grandes quedarn cerca del lugar de partida.

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Fundamento de la prctica
La electroforesis en gel es una de las herramientas ms importantes utilizadas en
laboratorios de biologa molecular e ingeniera gentica. Mediante la conduccin
de una corriente elctrica a travs de un tampn de electrolito -como el tampn de
bicarbonato de sodio que las molculas de carga utilizada migrarn hacia la
terminal con la carga opuesta. Cuando se suspenden dentro de una matriz de
polmero -como un gel de agar-agar- las molculas se movern a diferentes
velocidades en base a su tamao.
En este experimento, las molculas de colorante cargadas negativamente se
cargan en el gel. Cuando una corriente pasa a travs del gel, las molculas migran
hacia el terminal positivo, con molculas ms pequeas movindose ms rpido
que las ms grandes. Esto separa las diferentes molculas de color.
Informacin adicional
Esta tcnica se utiliza para separar compuestos biolgicos, tales como ADN o
protenas, en base a su tamao. Al igual que los colorantes de color, el ADN y las
protenas estn cargadas negativamente, por lo que migran hacia el electrodo
positivo a diferentes velocidades en funcin de su tamao.
Los cientficos pueden usar enzimas especiales para cortar una gran cadena de
ADN en muchas piezas ms pequeas. El tamao de las piezas depender de la
secuencia de base especfica de la hebra de ADN grande. Esta tcnica se utiliza
en las huellas dactilares de ADN para identificar a las personas ya que la
secuencia gnica de cada individuo dar como resultado una "huella digital" nica
de bandas de ADN.

MATERIALES

Para la cmara electrofortica:

- Recipiente de plstico de 10x15 cm
- Peines (separadores)
Tijeras

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 Cinta adhesiva
Dos piezas de 5 pulgadas (12 cm) de alambre de acero inoxidable o cobre
Dos cables elctricos con pinzas de cocodrilo
Cinco bateras de 9 voltios

Para el gel y tampn:

Agua
Bicarbonato de sodio
Agar-agar en polvo o agarosa
Paleta o cucharilla de metal

Para las muestras:

Agua
Tintas vegetales color: negro, amarillo, azul y verde
Glicerina
Micropipeta
Tips

PROCEDIMIENTO
1. Preparacin del gel:
- Preparar bicarbonato de sodio al 0,2% disolviendo 2 gramos de
bicarbonato sdico en 1 litro de agua. Usted necesitar aproximadamente
100 mililitros para hacer el gel y 50 ml para ejecutar sus muestras.
- Preparar una solucin de gel al 3% mediante la adicin de 1,5 g de agar-
agar en polvo a 50 ml de tampn de bicarbonato de sodio. Usted necesitar
40-50 ml de solucin de gel aproximadamente. Para disolver el polvo de
agar-agar, calentar la solucin de gel. Agite la solucin hasta que las
partculas de agar-agar se disuelvan completamente. La solucin debe ser
translcida y se solidificar a temperatura ambiente.
- Una vez que la solucin est lo suficientemente fra para verter, agregue lo
suficiente a la caja para que los dientes del peine estn sumergidos

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 aproximadamente a 0,5 cm. Coloque el peine a un lado de la caja de tal
manera que quede a 1,5 cm aproximadamente del borde. Los geles ms
delgados producirn mejores separaciones.

2. Coloque los electrodos en su lugar:

- Una vez que el gel fija (aproximadamente 5-10 minutos), usted necesita
hacer el espacio para colocar un electrodo en cualquier extremo. Para
hacer sus electrodos, doblar cada pieza de alambre de acero inoxidable
para que encaje dentro de la caja a lo largo de su ancho y ganchos sobre el
lado (imagen de abajo).

- El gel real slo necesita ser la mitad de la longitud de la caja, por lo que
puede utilizar un cuchillo para cortar la mitad inferior del gel que no incluye
el peine. Teniendo cuidado de no alterar el peine, tambin cortar una tira
delgada desde la parte superior del gel para hacer espacio para un
electrodo en la parte superior de la caja.
- Su gel debe tener alrededor de 6 cm de largo y 8 cm de ancho
aproximadamente. Coloque un electrodo a lo largo del extremo superior del

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 gel y uno en el extremo inferior, usando cinta adhesiva en el exterior de la
caja si es necesario para asegurarlos en su lugar. Estos sern los
electrodos positivos y negativos.

3. Configure su fuente de alimentacin y prepare sus muestras:

- Haga una fuente de alimentacin de alto voltaje conectando las cinco
bateras de 9 voltios. Acople las dos bateras juntas insertando el terminal
positivo de uno en el terminal negativo de otro. Conecte las bateras
restantes una por una de esta manera hasta que tenga un paquete de cinco
bateras.
- Conecte un cable elctrico a cada uno de los terminales expuestos del
paquete. Ahora debe ser capaz de utilizar el paquete de bateras para
alimentar algo mediante la unin de los otros extremos de los cables
elctricos.
- Prepare cinco muestras diferentes mezclando 1-2 gotas de colorante con 1
mL de glicerina y 1 mL de agua en un pequeo tubo. Utilizamos negro, rojo,
verde, amarillo, y azul.
4. Colocacin de muestra y puesta en marcha
- Una vez que haya configurado su gel, vierta tan slo suficiente bicarbonato
de sodio para cubrir el gel solidificado. Asegrese de llenar los espacios a
la izquierda de donde se corta el gel, el gel y los cables de acero inoxidable
deben estar completamente sumergidos.
- Retire suavemente el peine tirando hacia arriba sin desgarrar el gel. Los
pozos dejados por el peine deben llenarse con tampn.
- Utilice la pipeta de punta de aguja para transferir aproximadamente 10
microlitros (l) de cada muestra a un pozo vaco. Sumergir la punta en el
tampn directamente encima del pocillo y apretar suavemente la muestra
en el pocillo. Debe caer en el pozo ya que es ms denso que el bfer
circundante. Asegrese de usar una pipeta nueva para cada muestra para
evitar la contaminacin entre muestras. Si tiene una cantidad limitada de

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 pipetas, enjuague bien la punta en un vaso de agua grande antes de
reutilizarla.
- Una vez cargadas todas las muestras, conecte los cables de la fuente de
alimentacin a los electrodos de alambre de acero inoxidable unidos a la
caja. Conecte el terminal negativo al electrodo en la parte superior del gel
(cerca de los pocillos) y el terminal positivo al electrodo en la parte inferior
del gel. Usted debe ver las burbujas que se forman a lo largo de los
electrodos cuando se hace un circuito completo.
- Deje la alimentacin conectada durante 15-20 minutos y observe lo que
sucede con cada muestra.

Datos importantes
Usted puede reciclar los pedazos de gel que usted cort antes de agregar sus
muestras. Simplemente recalentarlos en el microondas, y volvern a convertirse
en lquido.

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BIBLIOGRAFIA
- https://www.exploratorium.edu/snacks/gel-electrophoresis
- Manual de procedimientos de electroforesis de protenas y DNA. Instituto Nacional
de salud. 2003
- https://www.youtube.com/watch?v=lgmq_HsuZIU
- https://es.wikipedia.org/wiki/Electroforesis
- Snchez de Romero. Instrumentacin en Bioqumica- Fundamentos
bsicos. Primera edicion. 2000. Concytec. Lima Peru
- Mendo Rubio Manuel. Instrumentacin de Laboratorio. Primera edicin.
2002.

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 PRATICA N 11
PURIFICACION DEL AGUA PARA SU USO E LABORATORIO

OBJETIVO

Analizar la informacin proporcionada y debatir en base a la calidad del

agua requerida para su uso en laboratorio
Ampliar sus conocimientos respecto a mtodos de purificacin de agua
Desarrollar una mesa redonda de disertacin en base a la calidad del agua
y sus mtodos de purificacin

INTRODUCCIN
Para un laboratorio es vital disponer de agua pura para realizar las pruebas
de investigacin y ensayo. La presencia de elementos y otros compuestos
en partes por billn (ppb) o incluso de magnitud inferior en el agua pura,
podra comprometer los resultados de los ensayos por su interaccin con
las muestras, medios activos o componentes del sistema. El agua 100%
pura se compone exclusivamente de molculas de agua con iones de
hidrgeno e hidroxilo que estn en equilibrio (107M a 25 C), lo que le
otorga una resistividad elctrica caracterstica de 18,2 MOhm.cm. Pero el
agua tiene la capacidad de disolver casi todo tipo de compuestos qumicos
y de albergar toda forma de vida, lo que implica que su calidad est
continuamente bajo la amenaza de cinco tipos de impurezas: partculas en
suspensin, compuestos inorgnicos, molculas orgnicas, gases disueltos
y microorganismos, incluyendo sus biomolculas asociadas. Producir agua
de alta pureza para su uso en el laboratorio, implica someter al agua
potable a una serie de tratamientos de purificacin para eliminar estos
diferentes tipos de impurezas.

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Pureza del agua ultrapura
Los niveles de impurezas detectables en el agua ultrapura dependen en
gran medida de la sensibilidad de las tcnicas utilizadas y el entorno en que
la prueba se lleva a cabo. Segn las tcnicas actuales de ultratrazas, los
niveles mximos de impurezas no gaseosas presentes en el agua ultrapura
son inferiores a 1,5 g/l (ppb) para compuestos orgnicos e inferiores a 1,0
g/l para otros elementos e iones. Esto significa que el agua ultrapura tiene
un 99,99999975% de pureza.

Por qu utilizar agua ultrapura?

Aunque pueda parecer excesivo, el agua ultrapura tiene que estar libre de
todas esas impurezas si se va a emplear para aplicaciones analticas y
experimentales. Afortunadamente, el agua ultrapura no es tan costosa, ya
que su precio puede oscilar alrededor de 0,12 EUR por litro, incluyendo
todos los costes de inversin y operacin. Como el agua se puede utilizar
en muchos aspectos de un anlisis, incluyendo la preparacin de blancos,
muestras, diluciones, estndares, como eluyentes, lavado de instrumentos,
etc., la presencia de algn contaminante puede comprometer los
resultados. Los anlisis de alta sensibilidad dependen en gran medida de la
alta pureza del agua, especialmente cuando hay que medir directamente
concentraciones muy bajas o cuando se dispone de pequeas cantidades
de muestras, siendo necesario diluirlas antes del anlisis. El uso de agua
ultrapura minimiza los niveles base, permitiendo a los investigadores
obtener resultados de alta sensibilidad en los anlisis de trazas. Por
ejemplo, mediante HPLC o mediante cromatografa inica (IC)

PROCEDIMIENTO

Desarrollar una mesa redonda de anlisis y disertacin en base a la lectura:

Caractersticas de las aguas para su uso en el laboratorio (enlace:
http://filtrosyequipos.com/festa/FESTA/ultrapura/ultrapura2.pdf )

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 Responder al siguiente cuestionario:

1. Qu caractersticas presenta el agua potable y porque no puede usarse

para el anlisis del laboratorio?
2. Qu tcnicas se emplean para remover slidos e impurezas del agua?
3. Por qu es importante la esterilizacin del agua?
4. Quines establecen los criterios de calidad del agua?
5. Cmo se determina la calidad del agua, Que estndares o Medidas se
emplean?
6. Qu caractersticas posee una agua de mxima pureza?
7. Qu proceso de tratamiento se debe desarrollar para obtener agua de alta
pureza?
8. Qu pasara s se almacena agua de alta pureza por periodos largos de
tiempo. Por qu?
9. Mencione usted un resumen de la lectura o resalte los puntos ms
importantes
10. En la clasificacin de la calidad de agua. que parmetros fisicoqumicos y
microbiolgicos se utilizan? Explique

BIBLIOGRAFA
Caracterstica de las aguas para su uso en el laboratorio.
http://filtrosyequipos.com/festa/FESTA/ultrapura/ultrapura2.pdf
Como conseguir los mejores resultados con el agua ultrapura.
http://www.veoliawatertechnologies.es/vwst-
iberica/ressources/documents/1/18156,Tecnicas-de-
Laboratorio_Sept2011.pdf
Estndares de calidad del agua grado reactivo.
https://www.quiminet.com/articulos/estandares-de-calidad-en-agua-
grado-reactivo-27209.htm

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