DETERMINACION DE ACETAMINOFN EN UN FRMACO POR

ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ULTRAVIOLETA.

Juan P. Mayor Lorena Quevedo Pablo A. Patio

1325505 1324257 1325867

Programa de Tecnologa Qumica, Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Universidad de

Valle

Mayo 28 de 2016

Resumen

Con el fin de adquirir destreza en el manejo del espectrofotmetro de absorcin ultravioleta, se

determin el contenido de acetaminofn en un frmaco por medio de dos tcnicas: patrn externo y
adicin estndar, por el primer mtodo se obtuvo un total de 476 mg de acetaminofn, con un
porcentaje de error de 4.8% con respecto al valor reportado en el frmaco, por el segundo mtodo
se obtuvo un total de 469 mg con un porcentaje de error de 6.2%, para finalizar se determin
mediante una prueba t que no existan interferencias de matriz en la cuantificacin de la muestra.

Palabras clave: espectroscopia, absorcin atmica, determinacin, efectos de matriz.

_________________________________________________________________________

Clculos y Resultados
Tabla 1. Longitud de onda de mxima
A partir de la solucin patrn de absorcin.
acetaminofn se prepar 5 soluciones Longitud de
No. ABS
patrn entre 4.00 y 24.00 ppm para onda (nm)
1 250,00 0,777
elaborar la curva de calibracin de patrn
2 224,00 0,342
externo.

Inicialmente utilizando la solucin

estndar de 12 ppm se tom el espectro
ultravioleta en el rango entre 200 y 300
nm, donde de acuerdo a la tabla 1 la
mayor absorcin se observ en el punto 1
a una longitud de onda de 250 nm y 0.777
unidades de absorbancia.

1
Grafico 1. Longitud de onda de mxima 0.717, obteniendo una concentracin en la
absorcin. muestra de 11.4 ppm de acetaminofn.

Para obtener la curva de calibracin por = 0.0649 0.0215 Ecuacin 1

0.717 + 0.0215
patrn externo se mide la absorbancia de [ ] () =
0.0649
cada una de las soluciones que se reporta
en la tabla 2, posteriormente se elabora la [ ] () = 11.4
grfica 2.
A partir de la ecuacin 2 se calcul la
desviacin estndar de la concentracin.
Tabla 2. Datos curva de calibracin por
patrn externo. Los datos para realizar este clculo son
CONCENTRACIN obtenidos a travs de la curva de
ABS
(ppm) calibracin.
4 0,241
Obteniendo un resultado de 0.3 ppm de
8 0,494
acetaminofn.
12 0,772
16 0,992
1 1
24 1,544 =
1 + +(
) Ecuacin 2.

2.00 Con t igual a 3.18 con n-2 grados de

y = 0,0649x - 0,0215 libertad se determin el intervalo de
1.50 R = 0,9991
confianza al 95% obteniendo un valor de
ABS

1.00
11.4 0.9 ppm de acetaminofn.
0.50
Se calcula el contenido de acetaminofn
0.00 en la tableta que dio un valor de 476 mg.
3 8 13 18 23
CONCENTRACION (ppm)
11.4 . 50 100
Grafico 2. Curva de calibracin patrn 1000
3 22.3 558.8
externo.
= 476
Teniendo en cuenta que se pulverizo una
tableta de acetaminofn que peso 558.8 Segn la etiqueta cada tableta contiene
0.1 mg, donde se tomaron 22,3 0.1 mg 500 mg de acetaminofn, teniendo en
de esta muestra y se llevaron a un matraz cuenta este valor mediante la ecuacin 3
de 100 mL, posteriormente se tomaron 3 se calcula que el porcentaje de error por
mL de la solucin anterior y se llevaron a el mtodo de patrn externo es de 4.8%.
un matraz de 50 mL. Se calcul la
concentracin de la muestra problema a
( )
partir de la ecuacin de la recta a partir de % = x 100 Ecuacin 3

la absorbancia de la muestra que fue de

2
 |476 500|
% = x 100 = 4.8%
500

2.000
Teniendo en cuenta la ecuacin 4 se y = 0.0647x + 0.2424
calcula el lmite de cuantificacin por el 1.500 R = 0.9998
mtodo de patrn externo.

ABS
1.000

= 10 Ecuacin 4. 0.500

0.000
Se obtuvo como resultado que la 0 5 10 15 20 25
CONCENTRACION (ppm)
concentracin mnima de acetaminofn
cuantificable es de 2.70 ppm. Grafico 3. Curva de calibracin adicin
Estndar.
Mediante la ecuacin 5 se calcul el
lmite de deteccin de acetaminofn en la A partir de la ecuacin de la recta se
muestra. procedi a calcular la concentracin de
acetaminofn en la muestra problema.

= 3 Ecuacin 5

= 0.0647 + 0.2424 Ecuacin 6

Lo que dio que la concentracin mnima 0 0.2424

detectable por este mtodo es de 0.81 [ ] () =
0.0647
ppm
[ ] () = 3.74

Para obtener la grfica por el mtodo de
adicin estndar se adiciono 0.5 mL de la
muestra sin diluir a cada matraz, y
solucin patrn de acetaminofn a
diferentes concentraciones como se
muestra en la tabla 3. Se midi la
absorbancia de cada solucin estndar y
se realiz la curva de calibracin
mostrada en el grafico 3
Tabla 3. Datos curva de calibracin
adicin estndar.
CONCENTRACIN
ABS
(ppm)
0 0,240
4 0,506
8 0,752
16 1,290
24 1,790
De la igual forma que para el mtodo de
patrn externo se calcul la desviacin
estndar de la concentracin mediante la
ecuacin 2.
Los datos para realizar el clculo se
obtienen a partir de la curva de
calibracin de adicin estndar.
Obteniendo un resultado de 0.194 ppm
de acetaminofn.
Con t igual a 3.18 con n-2 grados de
libertad se determin el intervalo de
confianza al 95% obteniendo un valor de
3.74 0.62 ppm de acetaminofn.
Se calcula el contenido de acetaminofn
en la tableta que dio un valor de 469 mg.

3
3.74 . 25 100
558.8
1000 0.5 22.3
= 469
Teniendo en cuenta que cada tableta
contiene 500 mg de acetaminofn, se
calcul el porcentaje de error mediante la
ecuacin 3, que dio un valor de 6.2%.
|469 500|
% = x 100 = 6.2%
500
Teniendo en cuenta la ecuacin 4 se
calcula el lmite de cuantificacin por el
mtodo de adicin estndar, obteniendo
que la concentracin mnima de
acetaminofn cuantificable es de 1.47
ppm.
De igual forma mediante la ecuacin 5 se
determin el lmite de deteccin de
acetaminofn en la muestra que dio que la
concentracin mnima detectable por este
mtodo es de 0.44 ppm.
Anlisis de Resultados
La espectroscopa por absorcin
molecular en las regiones ultravioleta y
visible del espectro se usa ampliamente
en la determinacin cuantitativa de una
gran cantidad de especies inorgnicas,
orgnicas y biolgicas. [1]
La espectroscopia por absorcin
molecular se basa en la medicin de la
transmitancia T o de la absorbancia A de
soluciones que estn en celdas
transparentes que tienen una longitud de
trayectoria de b cm. Normalmente, la
concentracin de un analito absorbente se
relaciona en forma lineal con la
absorbancia segn la ley de Beer:
= log = log = ebc Ecuacin 7.
La absorcin de radiacin ultravioleta o
visible por parte de una especie atmica o
molecular M consiste en una excitacin
electrnica, como lo muestra la ecuacin
+ Ecuacin 8.
Donde el producto de la absorcin del
fotn hv por la especie M es una especie
excitada electrnicamente simbolizada
por M*. Luego sucede la posterior
relajacin ya que el tiempo de vida de la
especie excitada es breve (10-8 a 10-9 s).
[1]
La mayora de las aplicaciones de
espectroscopa de absorcin en
compuestos orgnicos se basan en
transiciones de los electrones n y al
estado excitado * porque la energa
requerida para estos procesos lleva las
bandas de absorcin hacia dentro de la
regin ultravioleta- visible (200 a 700
nm). Ambas transiciones y requieren la
presencia de un grupo funcional no
saturado que aporte los orbitales . [1]
como podemos observar en la estructura
del acetaminofn lo presenta.
Imagen 1. Estructura del acetaminofn.
A las molculas que contienen dichos
grupos funcionales y son capaces de
4
absorber la radiacin UV-visible se les
denomina cromforos.
Por lo regular, si desea la ms alta
sensibilidad, las medidas de absorbancia
espectrofotomtricas se hacen a una
longitud de onda correspondiente a un
pico de absorcin porque el cambio en la
absorbancia por unidad de concentracin
es mayor en este punto. Adems, la
absorbancia es casi constante con
longitud de onda a una absorcin
mxima, lo cual produce un buen
cumplimiento de la ley de Beer. [1]
Los datos para la ubicacin de longitud de
onda de mxima absorcin sirven solo
como una gua aproximada para la
identificacin, porque se ven influenciado
por los efectos del solvente, as como por
otros detalles estructurales de la
molcula. [1] por tal razn se hizo un
barrido desde 200 a 300 nm para
determinar la longitud de onda mxima
real en la muestra de acetaminofn cuyo
valor fue de 250 nm.
En la prctica se utiliz un
espectrofotmetro de doble haz de marca
Shimadzu el cual se encuentra conectado
a un computador.
Imagen 2. Diseo de un
espectrofotmetro de absorcin
ultravioleta-visible marca Shimadzu.
En la actualidad hay numerosos
espectrofotmetros de doble haz para la
regin ultravioleta-visible del espectro.
En general, estos instrumentos son ms
caros que los de haz sencillo. Cuenta con
dos compartimientos para celdas de
muestra que le permite medir
simultneamente la cantidad de energa
radiante absorbida por una matriz
(blanco) y la energa absorbida por la
muestra compuesta por la matriz y la
especie de inters. [2]
En la imagen 3 se muestran los detalles
de construccin de un espectrofotmetro
manual tpico de doble haz para la regin
UV-visible, relativamente barato. En este
instrumento la radiacin se dispersa por
medio de una red cncava, que enfoca
tambin el haz sobre un espejo en
sectores giratorio. [1]
Imagen 3. Esquema de un
espectrofotmetro manual de doble haz
para la regin UV-Visible.
El intervalo de longitudes de onda del
instrumento es de 195 a 850 nm, un
ancho de banda de 4 nm, una exactitud
fotomtrica de 0.5% de T y una
reproductibilidad de 0.2% A; la radiacin
parasita es menor de 0.1% de P0 a 240 y
340 nm. [1]
Mediante los metodos de patrn externo y
adicin estandar se calcul la
concentracin de acetaminofn en la
5
muestra y se hall para ambos el
porcentaje de error comparndolo con el |1 2 |
= 1 1
Ecuacin 7
valor tomado como real proveniente de la +
1 2

etiqueta, dando unos resultados

relativamente bajos. Se observ que por 2 + 2
1 1 2 2
= Ecuacin 8.
el mtodo de patrn externo el 1 +2

acetaminofn es cuantificable hasta 2,70

ppm y por el mtodo de adicin estndar 1 = 1 2 1 = 1 2
hasta 1,47 ppm como tambin que la
concentracin mnima detectable es 0,81
Siendo
ppm y 0,44 ppm respectivamente para
f1= 5 para patrn externo
ambos mtodos. Dando mejores lmites el
f2= 4 para adicin estndar
mtodo de adicin estndar. Al calcular
los intervalos de confianza para ambos
Donde SR1 (patrn externo) y SR2 (adicin
mtodos que es donde estar el valor
estndar) se calculan con la ecuacin 9.
desconocido con una determinada
Teniendo en cuenta que
probabilidad de acierto, se obtuvo un )2 =
(
intervalo ms pequeo para adicin
estndar. )2 =
(

Preguntas (2
= Ecuacin 9.
2
1. Existe interferencias de matriz en el
metodo analitico para cuantificar Ho (hiptesis nula): las pendientes no
acetaminofen en tabletas, usadas en la difieren entre s.
practica. Muestre los calculos que lo Hi (hiptesis alterna): las pendientes
llevan a la conclusion. difieren entre s.

Mediante la prueba t para comparacin de Se procedi a hallar la tcalc con la

pendientes entre el mtodo de patrn ecuacin 7. Dando como resultado 0,104.
externo y adicin estndar se determina si Al compararse con el tcritico 2.45 al 95 %
existe evidencia de efectos de matriz. Los de confianza, el tcalc no supera al tcritico por
datos necesarios para realizar el clculo lo tanto se acepta la hiptesis nula
se encuentran en la tabla 4. concluyendo que no hay efectos de matriz
en el mtodo analtico para cuantificar
Tabla 4. Datos necesarios para la prueba t. acetaminofn.
Mtodo Patrn externo Adicin estndar
Pendiente 0,06485473 0,064732759
Sxx 236.8 371.2

SR 0,017494787 0,009533968 2. Con base en sus conocimientos de la

estadistica basica y aplicada al analisis,
La t calculada se halla con la ecuacin 5.
6
 que recomienda para lograr mejores sistemticos como interferencias no
limites de deteccion del mtodo? espectrales de componentes de la matriz,
fluctuaciones debidas del mtodo y errores
La decisin de si un determinado analito instrumentales
est presente o no en una muestra se basa
en la comparacin con el valor crtico. Los datos para la ubicacin de longitud de
Como en cualquier otra situacin, este onda de mxima absorcin sirven solo
proceso de comparacin implica errores como una gua aproximada para la
experimentales (en la medida del blanco y identificacin, ya que se ven
en la de la muestra analizada). Dichos influenciados por diferentes factores.
errores asumimos que son aleatorios y
que siguen una distribucin normal. Al Referencias
nivel de concentracin cero, la desviacin
estndar de la concentracin (neta) se [1] Douglas A. Skoog, Principios de
expresa de forma general como: anlisis instrumental, Cengace learning,
sexta edicin, 2008, pg. 336,359, 367-
0 =
369.
Es la desviacin estndar del blanco y
[2] espectrofotmetros de doble haz
= 1 + 1 , donde m y n son el
consultado en
nmero de replicados sobre la muestra http://www.espectrometria.com/espectro
analizada y sobre el blanco, metra_ultravioleta-visible (26/05/2016)
respectivamente. = 1; 0 = en el
[3]http://www.quimica.urv.cat/quimio/ge
caso especial cuando m=1 y n es elevado.
neral/lod.pdf
En un experimento pareado, es decir,
cuando la concentracin neta se calcula
como la concentracin en la muestra
menos el blanco, entonces = 2 . Si no
se conoce , entonces debe reemplazarse
por la estimacin correspondiente, Para
obtener una estimacin fiable del LDD, se
sugiere realizar un mnimo de 10
determinaciones sobre el blanco. Deben
especificarse claramente las condiciones
de precisin (respetabilidad, precisin
intermedia) en las que se analiza el
blanco. [3]

Conclusiones

La calibracin con o patrn externo se utiliza

para compensar errores aleatorios y