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LABORATORIO DE BIOLOGA
INFORME DE PRCTICAS
PRCTICA N 8, 9, 10
TTULO:
INTEGRANTES:
HORARIO DE PRCTICAS
DA: MARTES
HORA: 7:10 9:00
LIMA PER
INTRODUCCION
FUNDAMENTO TEORICO
Extraccin de ADN
Cebadores (primers): es una enzima que complementa a una de las hebras de ADN ,
delimita la zona de ADN que se quiere amplificar
ADN polimerasa : enzima termoestable (Taq polimerasa) sintetiza la cadena de ADN
ADN molde : contiene la regin de ADN que se va amplificar
Buffer : ayuda al buen funcionamiento del ADN polimerasa
Despus del proceso del PCR se puede observar la concentracion del ADN mediante un
proceso que se llama electroforesis que es una tcnica molecular con la que se puede
observar la concentracin e integridad del ADN (producto de PCR). Esto proceso va a
permitir la separacin de molculas como protenas y acidos nucleicos a travs de una
matriz tamponada de pH8, va a funcionar como filtro de la matriz molecular permitiendo
separar molculas en campo elctrico ( de acuerdo al peso molecular).
Los acidos nucleicos (ADN,ARN) estn cargados negativamente gracias a los grupos fosfatos
, los fragmentos de acidos nucleicos migran hacia el polo positivo (anodo).
Una de las ventajas que plantea esta tcnica es la adaptacin del mtodo general
para determinar la presencia de una secuencia especfica en cualquier agente
patgeno, incluyendo bacterias, protozoarios, virus y helmintos, ya que, todos los
organismos invasores poseen ADN o ARN, como material gentico. De esta
manera, puede proveer resultados en el mismo da para organismos en los que
normalmente se tomaran varias semanas utilizando tecnologas convencionales.
Fundamentos de Electroforesis
Materiales:
Extraccin del ADN
Kit de extraccin de ADN
Micropipetas de 20 100, 100 - 1000 l.
Puntas de 10 -100 l y de 100 -1 000 l
Tubos ependorf de 1,5 mL
Microcentrfuga16000 rpm
Vortex.
Tubos de PCR (250 l)
PCR
Micropipetas de 20 100, 100 - 1000 l.
Puntas de 10 -100 l y de 100 -1 000 l
Tubos ependorf de 1,5 mL
Microcentrfuga16000 rpm
Tubos ependorf
Termociclador
Agua estril
Muestras de ADN
Mix de PCR (taq polimerasa, dNTPs, primer, Mg, agua)
Primers Alfa tubiluna y Beta actina.
Electroforesis
Mtodos usados:
Proceso de purificacin:
Electroforesis:
1. Preparar 50 ml de agarosa al 2% y
adicionar 20 l de colorante Sybr green,
dejar polimerizar por 10 min
aproximadamente. Sumergir el sistema
conteniendo los geles polimerizados en
su tanque (cmara electrofortica) con el
buffer TBE 1X para ADN. Al momento de
sumergir los geles en el tanque,
asegurarse que los pocillos del gel estn
totalmente saturados de buffer.
7. Remover el gel del soporte, para realizar este proceso se requiere tener mucho
cuidado, pues el gel es muy frgil y puede romperse con facilidad.
9. Dejar hasta que empiecen a aparecer las bandas y registrar el resultado final.