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UNIVERSIDAD CIENTIFFICA DEL SUR

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

LABORATORIO DE BIOLOGA

CURSO: BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR

PROFESORA: ROGER IZIGA GOICOCHEA

INFORME DE PRCTICAS

PRCTICA N 8, 9, 10

TTULO:

EXTRACCIN DE ADN (8)


FUNDAMENTOS DE LA REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA
(PCR) (9)
FUNDAMENTOS DE ELECTROFORESIS (10)

INTEGRANTES:

o AVILA TERRONE RENZO GIANMARCO


o GUTIERREZ CASTAEDA JEREMI
o PEDROZA LEVA SEBASTIAN
o ROSALES ALVARADO PATRICIA

HORARIO DE PRCTICAS
DA: MARTES
HORA: 7:10 9:00

FECHA DE REALIZACIN DE LA PRCTICA: 23/05/17 , 30/05/17 , 06/06/17


FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 13/06/17

LIMA PER
INTRODUCCION

FUNDAMENTO TEORICO

Extraccin de ADN

La presente propuesta se fundamenta en el anlisis de ADN de cada una de las


caractersticas y causas que se presenta en las personas que necesitan que le den por
diagnosticado un problema ya sea una enfermedad o un virus en el cuerpo.
El cido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN es un tipo de cido
nucledo, una macromolcula que forma parte de todas las clulas. Contiene la informacin
gentica usada en el desarrollo y el funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de
algunos virus, y es responsable de su transmisin hereditaria.
Desde el punto de vista qumico, el ADN es un polmero de nucletidos, es decir, un poli
nucletido. Un polmero es un compuesto formado por muchas unidades simples
conectadas entre s, como si fuera un largo tren formado por vagones. En el ADN, cada
vagn es un nucletido, y cada nucletido, a su vez, est formado por un azcar.
El ADN contiene la informacin gentica de un organismo, se encuentra en el ncleo y en las
mitocondrias de la clula. Esta informacin es importante porque es transmitida a las
clulas hijas para que se conserve el linaje y el funcionamiento adecuado de un tejido u
rgano, si hay alguna mutacin podra poner el riesgo el funcionamiento de los mismos.
Tambin se transmiten las caractersticas fenotpicas de un organismo
La funcin que tiene el adn es que contiene toda la informacin desde antes de que
nazcamos, desde cmo vamos a ser hasta las enfermedades que vamos a padecer en el
futuro.

La extraccin de ADN es un tipo de metodologa que mediante del material gentico ha


permitido el desarrollo de la clonacin de secuencias de ADN para el estudio de mutaciones.
Existen diversos mtodos de extraccin de ADN como el salting-out, chelex y fenol-
cloroformo.
FENOL CLOROFORMO
Es una tcnica orgnica, donde el cloroformo permite que todo el fenol pueda se lavado. Los
pptidos y protenas son extradas en la fase orgnica y despus se realiza digestin con
proteinasa K.
CHELEX
Es una tcnica inorgnica que previene la degradacin del ADN por quelacin de los iones
metlicos durante la ebullicin al 5%. Los
reactivos no son txicos y no se
pierde ADN.
SALTING-OUT
Es una tcnica inorgnica que utiliza
reactivos bajos en toxicidad
permitiendo visualizar la malla del
ADN.
CUANTIFICACIN DE CIDOS NUCLEICOS
Una vez obtenido tanto el ADN como el ARN, se procede a evaluar su cantidad como su
calidad, para esto utilizamos una serie de tcnicas, pero la mas utilizada y la que
realizaremos es la espectrofometra. La espectrofometra es el mtodo de anlisis ptico
ms usado hoy en da, las ventajas sobre otros mtodos es que son verstiles y fciles de
usar. La espectrofometra es usada para identificar compuestos por su espectro de
absorcin y conocer la concentracin de un material o sustancia, esto ltimo nos permite
conocer la concentracin de compuestos, seguir el curso de reacciones qumicas y
enzimticas, as como determinar cidos nucleicos.

El ADN es la molcula que resguarda al material gentico sin importar el organismo


(procariota o eucariota) sin importar esto todos tienes DNA como movilizador de su
material gentico, Todas las tcnicas moleculares o enzimticas como el PCR tienen la
necesidad de manipular el material gentico para comenzar en este proceso en el
laboratorio que nos toc realizar comenzamos extrayendo sangre la cual la pasbamos tips
que son como una malla que retiene el ADN todo este proceso es gracias a un kit en estos
proceso se utilizan la proteinasak que su funcin es de romper la protenas y luego se utiliza
la ARNasa que se encarga como su propio nombre lo dice asa = romper las membranas y de
solo dejar el materia gentico.
Luego, de este proceso tenemos que cuantificar el ADN para cuantificar el ADN hay
diferentes procesos como la espectrofotometra la cual nos ayuda a medir el ADN en
microgramos y otro es la fluormetria que nos permite medir en pequeas cantidades de
ADN dando como resultado en nanogramos.
Utilizando el ADN en la extraccin comenzamos el proceso de PCR que actualmente es un
proceso utilizado en el campo de la biologa celular y molecular y en la medicina en la
biologa el PCR es un proceso en el cual nos ayuda a obtener un gran nmero de copias de
un fragmento de ADN por una amplificacin In vitro En cambio en la medicina es proceso
que nos ayuda a la deteccin de enfermedades infecciosas tambin en el diagnstico
prenatal de enfermedades genticas y el ms importante la deteccin de cncer ,en el PCR
se divide en tres procesos la desnaturalizacin (consiste en incubar en altas temperaturas al
ADN molde 90oc es la temperatura ala que debe estar y luego de esta maneras se permite
el fcil acceso de los cebadores del ADN molde ) , alineamiento (donde se debe estar a una
temperatura de 50 a 55 o los cebadores hibridan con sus secuencias complementarias del
ADN molde ) y por ltimo la etapa de elongacin (en este proceso se utiliza una
temperatura de 72oc y en la cual la ADN polimerasa sintetiza fragmentos de ADN a partir de
los cebadores que ya se han alineado ) y la deteccin de un producto de una PCR se realiza
normalmente mediante una corrida electrofortica.
En la tcnica de PCR se necesita:

Cebadores (primers): es una enzima que complementa a una de las hebras de ADN ,
delimita la zona de ADN que se quiere amplificar
ADN polimerasa : enzima termoestable (Taq polimerasa) sintetiza la cadena de ADN
ADN molde : contiene la regin de ADN que se va amplificar
Buffer : ayuda al buen funcionamiento del ADN polimerasa
Despus del proceso del PCR se puede observar la concentracion del ADN mediante un
proceso que se llama electroforesis que es una tcnica molecular con la que se puede
observar la concentracin e integridad del ADN (producto de PCR). Esto proceso va a
permitir la separacin de molculas como protenas y acidos nucleicos a travs de una
matriz tamponada de pH8, va a funcionar como filtro de la matriz molecular permitiendo
separar molculas en campo elctrico ( de acuerdo al peso molecular).
Los acidos nucleicos (ADN,ARN) estn cargados negativamente gracias a los grupos fosfatos
, los fragmentos de acidos nucleicos migran hacia el polo positivo (anodo).

Fundamentos de la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

La Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una tcnica in Vitro que imita la


habilidad natural de la clula para duplicar el ADN, generando mltiples copias de
una secuencia especfica de nucletidos o amplificando selectiva y
exponencialmente el ADN de un organismo. Por lo tanto, es un procedimiento muy
sensible que en teora, permite detectar especficamente una sola molcula del ADN
en solucin, lo que ha generado el desarrollo de muchos mtodos de diagnstico
basados en este principio.

Una de las ventajas que plantea esta tcnica es la adaptacin del mtodo general
para determinar la presencia de una secuencia especfica en cualquier agente
patgeno, incluyendo bacterias, protozoarios, virus y helmintos, ya que, todos los
organismos invasores poseen ADN o ARN, como material gentico. De esta
manera, puede proveer resultados en el mismo da para organismos en los que
normalmente se tomaran varias semanas utilizando tecnologas convencionales.

El diseo continuo de protocolos que incluyen diferentes secuencias iniciadoras,


cebadores o primers, y mltiples variaciones en la concentracin de cada uno de los
componentes de la PCR segn la secuencia de nucletidos que se desee amplifica,
se debe a que el ADN o ARN usado como blanco cambia entre especies, y por ende
los sistemas de medicin son modificados y adaptados a nuevas tecnologas que
mejoren la sensibilidad, especificidad y rapidez en la determinacin. Es as como, en
la actualidad ya estn disponibles kit de diagnstico de PCR en tiempo real.

Fundamentos de Electroforesis

La electroforesis de los cidos nucleicos es el mtodo ms empleado para separar,


identificar y purificar molculas o fragmentos de ADN y ARN. La electroforesis de
cidos nucleicos se llevan a cabo en geles de agarosa y se considera un mtodo
sencillo y altamente eficiente para separar fragmentos de ADN. Una de las
caractersticas es que los cidos nucleicos estn cargados negativamente debido a
los grupos fosfatos una vez que el ADN es expuesto al campo elctrico y en
soluciones buffers migran hacia el nodo (electrodo positivo) la velocidad de
migracin est limitada por las fuerzas de friccin ejercidas por el soporte o gel.
Cada molcula aporta una carga negativa y la relacin carga masa de cada
molcula es la misma independiente del tamao; por lo tanto la migracin o
movilidad del ADN en un gel va depender del tamao o conformacin as como
tambin del poro del gel 1
Segn (Thermo Fisher Scientific)La electroforesis es una tcnica de laboratorio
comn utilizada para identificar, cuantificar y purificar fragmentos de cido nucleico.
Las muestras se cargan en pocillos de un gel de agarosa o acrilamida y se someten
a un campo elctrico, provocando que los cidos nucleicos cargados negativamente
a moverse hacia el electrodo positivo. Fragmentos de ADN ms cortos viajarn ms
rpidamente, mientras que los fragmentos ms largos permanecern ms cercano
al origen del gel, lo que resulta en la separacin basada en el tamao.2
Segn el (Molecular, 2006) Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular La
electroforesis en gel es una tcnica muy utilizada para separar molculas o
fragmentos de molculas de cidos nucleicos. Los materiales ms comunes para
separar molculas de cidos nucleicos son polmeros como la poliacrilamida o la
agarosa. Estos geles se colocan en la cubeta de electroforesis, sumergidos en un
tampn de pH alrededor de 8. De esta forma, las molculas de DNA o RNA
sometidas a electroforesis se desplazarn al polo positivo ya que a pH superiores a
5 poseen carga negativa. Los geles se comportan como un tamiz molecular y
permiten separar molculas cargadas en funcin de su tamao y forma. As,
molculas de DNA de diferente tamao, van a emigrar de forma distinta en un gel de
electroforesis. La distancia recorrida por cada fragmento de DNA va a ser
inversamente proporcional al logaritmo de su peso molecular. Es importante la
utilizacin de las muestras de DNA problema Enfermedades genticas como el
cncer de mama, la fibrosis qustica y otras devenidas de mutaciones en el ADN
mitocondrial, son ejemplos de su uso en el diagnstico de pacientes adultos, as
como en el diagnstico preventivo del recin nacido.
Objetivos de las prcticas:

1. Extrae ADN a partir de muestras biolgicas.


2. Conoce las diferentes tcnicas de aislamiento de ADN.
3. Analiza cada proceso de la tcnica de aislamiento de ADN.
4. Conoce los fundamentos en lo que se basa la tcnica de PCR.
5. Conoce la importancia del uso de la tcnica de PCR para el diagnstico de
enfermedades en los seres humanos.
7. Explica cmo se genera un fragmento especifico de ADN genmico humano
utilizando la tcnica de PCR.
8. Aprecia la tcnica de electroforesis en gel.
9. Comprende los conceptos que estn involucrados en la separacin de cidos
nucleicos en una corrida electrofortica.
10. Observa la muestra de ADN aislada de la prctica anterior.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Materiales:
Extraccin del ADN
Kit de extraccin de ADN
Micropipetas de 20 100, 100 - 1000 l.
Puntas de 10 -100 l y de 100 -1 000 l
Tubos ependorf de 1,5 mL
Microcentrfuga16000 rpm
Vortex.
Tubos de PCR (250 l)

PCR
Micropipetas de 20 100, 100 - 1000 l.
Puntas de 10 -100 l y de 100 -1 000 l
Tubos ependorf de 1,5 mL
Microcentrfuga16000 rpm
Tubos ependorf
Termociclador
Agua estril
Muestras de ADN
Mix de PCR (taq polimerasa, dNTPs, primer, Mg, agua)
Primers Alfa tubiluna y Beta actina.

Electroforesis

Muestra de ADN obtenida de la prctica anterior.


Marcador de peso molecular.
Cmara de electroforesis y accesorios (peines, soporte, tabla
niveladora, etc).
Fuente de poder.
Micropipetas para volmenes de 0,5 - 20 l.
Guantes.
Gradilla para tubos de 1,5 mL.
Puntas para volmenes de 0,5 - 20 l.
Agarosa al 2 %.
Buffer Tris borato EDTA 1X (TBE) pH 8-8.3.
Buffer carga para ADN.
Colorante Sybr green
Transiluminador de luz UV

Mtodos usados:

Extraccin de ADN de sangre Total.

1. A un tubo ependorff, adicionar una muestra de 20 l de sangre fresca o


congelada.
2. Transferir 20 l de clulas o sangre a un tubo que contiene 20 l proteinasa K.
3. Aadir 20 l de RNasa a la muestra. Someter a vrtex por 15 segundos e incubar
a temperatura ambiente durante 2 min.
4. Aadir 100 l de Buffer lisis y homogenizar utilizando vrtex por 15 segundos.
5. Incubar a 55 C durante 10 min.
6. Aadir 100 l de etanol 96-100%. Mezclar en el vrtex por 15 segundos.
7. Incubar la lisis por 5 min a temperatura ambiente.

Proceso de purificacin:

1. Colocar la lisis (260 l) en la columna de extraccin.


2. Centrifugar la columna a 8500 rpm por 1 min, descartar el filtrado por la columna y
colocar la columna en un nuevo tubo de lavado.
3. Lavar la columna con 200ul de buffer de lavado, centrifugar a 8500 rpm por 1 min
y eliminar el filtrado.
4. Colocar la columna en un nuevo tubo de lavado, adicionar 200ul de buffer de
lavado y centrifugar la columna a velocidad mxima por 3 min para poder filtrar
cualquier residuo del buffer de lavado.
5. Colocar la columna en un nuevo tubo de recoleccin (1,5ml).
6. Aadir 100 l de Buffer de elucin a la columna.
7. Incubar a temperatura ambiente durante 1 min. Centrifugar la columna a velocidad
mxima durante 1 min a temperatura ambiente.
8. Para recuperar ms ADN, realizar una segunda etapa de elucin utilizando el
mismo volumen de buffer de elucin (opcional)
9. Incubar a temperatura ambiente por 1 min. Centrifugar a velocidad mxima por 1
min (opcional)
10. El tubo contiene ADN genmico purificado.
11. Almacenar el ADN purificado a -80C para otras aplicaciones.
P
C
R:

1. En un tubo de PCR colocar 25 l de solucin de reaccin final (mix de PCR)


2. Centrifugar brevemente para mezclar bien los componentes.
3. Colocar los ependorf con la solucin de mix de PCR en el termociclador, el cual
ya debe tener programado las condiciones de amplificacin.
4. Finalizada el proceso de amplificacin, retirar los ependorf del termociclador y
guardar las muestras a 4C si el amplificado se llegara a utilizar en un lapso de
poco tiempo. Si no fuese el caso mantener a 20C.

Electroforesis:

Asegurarse de usar guantes durante la manipulacin de las muestras, los reactivos y


el equipo.

1. Preparar 50 ml de agarosa al 2% y
adicionar 20 l de colorante Sybr green,
dejar polimerizar por 10 min
aproximadamente. Sumergir el sistema
conteniendo los geles polimerizados en
su tanque (cmara electrofortica) con el
buffer TBE 1X para ADN. Al momento de
sumergir los geles en el tanque,
asegurarse que los pocillos del gel estn
totalmente saturados de buffer.

2. Sobre un pedazo de lmina extensible


de parafilm, preparar una mezcla de 5 l
ADN con 1l de buffer carga repartida
en alcuotas de acuerdo al nmero de
muestras que se colocarn en los
pocillos (considerar el uso de un
marcador de peso molecular estndar de
ADN).
3. Con el uso de puntas de 20 l proceder a cargar cuidadosamente la muestra en
los pocillos del gel de agarosa evitando la contaminacin del pocillo contiguo.

4. Finalizada la colocacin de las muestras ADN en los pocillos, cubrir el tanque


con la tapa y conectar los cables de los electrodos en la fuente de poder.
Encender la fuente de poder y proceder a seleccionar el voltaje adecuado (puede
estar comprendido entre 75 a 120 voltios).

5. Luego de seleccionar las condiciones de voltaje, iniciar el proceso de la


electroforesis. Durante el proceso se evidenciarn dos frentes de corrida de
diferente color y distancia de migracin. Ambos colores, azul oscuro y azul claro
corresponden a los colorantes azul de bromofenol y xilenecianol, que conforman
el buffer de la muestra. El xilenecianol en geles de agarosa al 2 % migra de
manera similar a un fragmento de ADN de 160 pares de base (pb), mientras que
el azul de bromofenol a esta misma concentracin de agarosa es equivalente a
un fragmento de 45 pb.

6. Transcurrido el tiempo de corrida de la electroforesis, proceder al desmontaje del


equipo empezando con la desconexin de los electrodos de la fuente de poder,
removiendo el sistema que contiene el gel de agarosa.

7. Remover el gel del soporte, para realizar este proceso se requiere tener mucho
cuidado, pues el gel es muy frgil y puede romperse con facilidad.

8. Desplazar el gel hacia el transiluminador para el revelado, encender el equipo y


verificar que este a una longitud de onda de 420 nm.

9. Dejar hasta que empiecen a aparecer las bandas y registrar el resultado final.

10. Observar los resultados obtenidos y discutir.


RESULTADOS

1. Se pudo obtener ADN genmico purificado.


2. Luego de finalizada la electroforesis no se pudo observar la corrida de las
bandas de ADN.
DISCUSION DE RESULTADOS

La amplificacin de un gen es relevante dentro del campo de la medicina ya que


permite detectar algn tipo de anomala en el genoma, un ejemplo de esto puede
ser la alteracin en la cantidad de nucletidos y de esa manera proceder a un
tratamiento. En esta oportunidad se hizo uso del PCR, se realiz en tres sesiones
diferentes, constituyendo as los procesos de extraccin del ADN, amplificacin del
mismo o PCR propiamente dicho y electroforesis.
La PCR ha sido posible gracias a la utilizacin del ADN polimerasa de Thermus
aquaticus (Taq polimerasa), que es una enzima altamente termo resistente y capaz
de copiar el ADN a temperaturas entre 68C y 74 C, adems no se desnaturaliza a
temperaturas superiores a 94C. La desnaturalizacin del ADN forma una parte
importante para separar la doble hlice del ADN molde, por lo tanto, sin el uso de
esa polimerasa especial no hubiera sido posible replicar el ADN molde en nuestro
experimento. La solucin tampn o buffer permite el adecuado funcionamiento del
ADN polimerasa, por lo cual tampoco debi faltar en nuestro experimento. Esto
corrobora lo siguiente: Thermus aquaticus es una especie de bacteria que puede
tolerar altas temperaturas, una de varias bacterias termfilas que pertenecen al
grupo Deinococcus-Thermus. Es la fuente de la enzima resistente al calor Taq ADN
polimerasa, una de las enzimas ms importantes en la biologa molecular debido a su
uso en la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), tcnica de amplificacin de
ADN
A 20 ul de sangre se le agreg 20 ul de proteinasa K para que degrade a la protena,
quitndole el armazn de la clula, luego se aadi RNasa 20 ul, para degradar y
obtener ADN, la agregacin de proteinasa K y RNasa se debe a que se est buscando
extraer ADN por lo que buscamos degradar las protenas y el ARN. Se puede
corroborar con lo siguiente: La proteinasa K se utiliza para purificacin de cidos
nucleicos de alto peso molecular de tejido y clulas. La proteinasa K es una proteasa
activa y estable derivada del hongo E. lbum (antes T. lbum) y es usada para una
gran variedad de aplicaciones en biologa molecular. Es ideal para digestiones de
protenas en muestras biolgicas cuando se trata de purificar cidos nucleicos de
alto peso molecular.
El buffer lisis agregado de manera siguiente, tiene como objetivo lisar tanto la
membrana nuclear como la membrana celular dndonos as acceso al ADN. LA
temperatura de 55C facilita este proceso. Se corrobora lo siguiente: El buffer lisis
tiene la funcin de disolver la bicapa lipdica as como proteger al ADN de la accin
de enzimas nucleasas por accin del EDTA contenida en dicha solucin que captura
los iones magnesio y no permiten que acten como cofactores de las nucleasas.
A 260 ul de la lisis se le centrifug a 8500 rpm esto se realiza porque lo que
deseamos es el sedimentado y no los residuos, luego se lav con 200 ul de buffer de
lavado para evitar que se seale el proceso y de nuevo se centrifuga para obtener
cada vez ms pureza de ADN. Se corrobor lo siguiente: El buffer de lavado
constituye una solucin amortiguadora de pH comnmente empleada para
procedimientos bioqumicos. Esta solucin es isotnica y no-txica para las clulas
de los mamferos. El PBS se emplea como vehculo neutro para clulas, ya que no
modifica el perfil de expresin y funcionamiento celular normal. Esta solucin es
empleada comnmente para lavar clulas a travs de centrifugacin.

Se aadi 100 ul de buffer de elucin porque es una solucin reguladora de


extraccin, luego el ADN purificado se almacena a 80C. Si no se utiliza bien el buffer
de lavado nos puede ocasionar una perdida indeseada de ADN, lo que reducir la
cantidad obtenida. Se corrobora lo siguiente: El buffer de elucin permite la
purificacin de ADN en muestras de sangre, a travs de un mtodo de columna en
gel de Slice. Una vez purificado el ADN, este podr ser amplificado mediante PCR,
digerido por enzimas de restriccin, y/o sometido a las diferentes tcnicas de ADN
recombinante utilizadas en clonacin y expresin gnica.
El primer utilizado es especfico para una secuencia de ADN, al unirse esa
secuencia, determinar el lugar a partir del cual se va a sintetizar el nuevo ADN, de
esa manera el primer nos permite determinar el fragmento que se va a expandir,
finalmente se elev la temperatura a 72C (elongacin), para que el Taq polimerasa
pueda sintetizar nuevo ADN, se utiliz porque al ser esta enzima de la bacteria
Thermus aquaticus, que vive a altas temperaturas puede aguantar la temperatura de
PCR, una vez terminada este proceso se dispondr de ADN ya amplificada para la
electroforesis. Se corrobora lo siguiente: Una secuencia corta de oligonucletidos
que se une en forma complementaria especfica a una cadena nica de cido
nucleico e inicia la sntesis de esa cadena en presencia de ADN polimerasa y
nucletidos en una reaccin de PCR.

A 50 ml de gel de agarosa al 2% se le adiciona 20 ul de colorante SYBR Green; este


es debido a que este colorante acopla energticamente a los cidos nucleicos de la
ADN de manera que se incremente la emisin de fluorescencia; el fenmeno que se
da se conoce como transferencia de energa mediante resonancia de fluorescencia,
el cual ocasiona la visualizacin del ADN. Se corrobora con: El SYBR Green, esta
molcula se introduce en la estructura secundaria de la doble hlice del ADN y se
acopla energticamente a los cidos nucleicos de ste, de manera que se incrementa
notablemente su tasa de emisin fluorescente.
CONCLUSIONES

1. El mtodo de la extraccin de ADN tiene su importancia en el aislamiento


del ADN y es un requisito del proceso de la reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR).
2. Las enzimas Proteinasa K y RNasa juegan un papel importante en la
extraccin del ADN y la destruccin de otros componentes indeseados.
3. La centrifugacin es indispensable para la purificacin del ADN en el
proceso de la extraccin de dicho.
4. La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) representa un mtodo de
amplificacin y consiste de las tres fases de: Desnaturalizacin,
Hibridacin y Elongacin.
5. La velocidad de migracin electrofortica depende de la densidad de
carga de la molcula (relacin carga / peso), del voltaje aplicado y de la
porosidad del gel de electroforesis.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS (EXTRACCIN DE ADN)


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