MANUAL DE PROCEDIMIENTO PARA ESTUDIO

MICROBIOLOGICO
 UROCULTIVO
Instrucciones para la toma de muestra:

a-DIETA:

1-No tomar antibiticos 48 hs antes (salvo control intratratamiento).

2-No tomar aspirinas ni vitaminas 24 hs antes.

3-No tomar jugos ctricos ni comerlos 12 hs antes.

4-No ingerir lquidos en exceso.

Indicar al paciente que vace su vejiga antes de acostarse.

b) HIGIENE:

Sexo femenino: lavado profundo de genitales externos con agua y jabn neutro, colocar tapn
vaginal.

Sexo masculino: lavado de la zona balanoprepucial y glande con prepucio retrado. En los
circuncidados se lava tambin sobre el glande y la zona perimeato.

c) RECOLECCION

-Pacientes que controlan esfnteres.

Tcnica de chorro medio: de la primera orina de la maana desechar la primera porcin de la

miccin juntar la segunda y desechar la tercera.

Recoger la orina con un tiempo mnimo de retencin de 3 horas.

NO ACEPTAR BOLSITAS COLECCTORAS PARA LOS LACTANTES.

-Pacientes lactantes y adultos que no controlan esfnteres.

Tcnica al acecho: en lactantes se retiran los paales y se lava la zona anal y perianal con agua y
jabn, de inmediato enjuagar y mantener al acecho con frasco estril de boca ancha y esperar
que el nio orine recolectando la parte media de la miccin.

Conviene cambiar el frasco cada 30 minutos si se mantiene abierto. Tratar de obtener 2 muestras
en un lapso de 24 horas.
Puncin sonda vesical (PSV): en pacientes sondado por puncin de la sonda con aguja y jeringa
estril, previa desinfeccin del rea donde se va a efectuar la puncin.

Puncin suprapbica: se reserva casi exclusivamente para neonatos y nios pequeos o en

ocasiones para adultos en quienes se sospecha una infeccin urinaria clnicamente pero cuya
muestra de orina recogida con la tcnica del chorro medio no ha permitido establecer un
diagnstico. nica metodologa para investigar bacterias anaerobias.

d) Conservacin y transporte de la muestra:

La orina deber ser refrigerada en heladera entre 4-8 C, desde que se obtiene hasta que se
procesa. Si la orina debe transportarse a distancia debe disponerse de un recipiente de material
aislante en el que se colocar el frasco rodendolo de refrigerante o cubitos de hielo. Puede
permanecer 48hs en la heladera

NOTA: en caso de que el frasco est mojado con la muestra, o no sea transportado en forma
refrigerada, explicar al paciente que no se puede recibir y pedir nueva muestra.

PROCESAMIENTO

Siembra: Homogeneizar la orina, la siembra se realiza en medio Cistina lactosa deficiente en

electrolitos (CLDE). Este medio permite desarrollo tanto de gram positivos como de gram
negativos, adems de cndida. Tambin en pacientes embarazadas se incorpora el medio Agar
sangre. La siembra se realiza con ansa calibrada, la tcnica es para recuento. Se incuba a 35C
(24-72hs).

Para el sedimento centrifugar aproximadamente 10ml en un tubo cnico a 2500rpm 5 minutos,

volcar el sobrenadante y observar al microscopio para determinar la presencia de leucocitos,
clulas epiteliales, hemates. No informar escasas, regular o abundante, s en cantidad. El punto
de corte para la respuesta inflamatoria positiva es de 5 leucocitos por campo. Determinar
caracteres fsico-qumicos que incluyen: aspecto, pH, densidad y presencia de protenas. Realizar
el GOT.

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

Para interpretar los resultados tener en cuenta la presencia de las infecciones polimicrobianas
que se producen habitualmente en enfermos sometidos a cateterismos o a ciertos tipos de
tratamientos invasivos.

No olvidar que las infecciones monomicrobianas representan ms del 95% y dentro de stas las
causadas por enterobacterias ocupan un lugar de privilegio.
CRITERIOS PARA RELACIONAR LOS HALLAZGOS MICROBIANOS CON EL DIAGNSTICO DE IU

a- Cultivos monomicrobianos
En pacientes adultos se deben valorar los sntomas, sedimento y el recuento de colonias.
Este ltimo dato vara segn el tipo de pacientes.

Criterios de informe de un cultivo de orina monomicrobiano en pacientes adultos

(chorro medio)

Recuento Criterio de informe segn leucocituria en el sedimento

(UFC/ml) (N/campo 400X)
Mujeres >5 <5
>10 Bacteriuria significativa (BS) Probable BS (informar especie
antibiograma y consignar a modo de
observacin, que llama la atencin
la escasa reaccin inflamatoria
10 - 10 Bacteriuria significativa Solicitar nueva muestra

10 Bacteriuria significativa Informar ausencia de desarrollo

microbiano

Hombres
>10 Bacteriuria significativa Probable BS (informar especie,
antibiograma y consignar a modo de
observaci{on, que llama la atencin
la escasa reaccin inflamatoria

10 - 10 Bacteriuria significativa Informar ausencia de desarrollo

microbiano

1. Cualquier edad, sexo y tipo de muestra con un recuento > 10 5 UFC/ml; correspondencia
con el GRAM y ms de 5 polimorfonucleares en 400X equivale a un cultivo positivo.
2. Adulto con ms de 102 UFC/ml de bacilos gram negativos o ms de 104 UFC/ml cocos gram
positivos en cultivo puro; correspondencia con GRAM y ms de 10 polimorfonucleares en
400X equivale a un cultivo positivo.
3. Nios con ms de 103 UFC/ml en cultivo puro y correspondencia con el GRAM, evaluar
como un cultivo positivo.
4. Puncin sonda vesical (PSV) con ms de 103 UFC/ml en cultivo puro y correspondencia
con GRAM.
 5. Puncin suprapbica (PSP) con 102 UFC/ml o cualquier recuento.

En PSV no valorar Cndida spp, si no es una sonda recin colocada

Nota: siempre deben ser evaluados los resultados obtenidos en el cultivo segn la clnica,
edad, sexo, caracterstica de la muestra (densidad-ph-sedimento), caracterstica de las cepas
aisladas, para conferir o no el rol etiolgico.

IDENTIFICACIN

Las colonias desarrolladas son estudiadas por pruebas bioqumicas basadas en la investigacin
de productos del metabolismo que actan sobre diferentes sustratos.

Se realizan las siguientes pruebas bioqumicas para bacilos gram negativos: OXIDASA, TSI,
CITRATO, FA, SIM, UREA, MIO, LIA, RM/VP. Tambin la utilizacin de Chromo IU.

Si hay desarrollo de cocos gram positivos se realiza: CATALASA, se observa la hemlisis en agar
sangre, produccin de coagulasa, utilizacin de MANITOL, RM/VP, PYR, BILIS ESCULINA Y UREA,
sensibilidad a la novobiocina.

ANTIBIOGRAMA

Se realiza segn los esquemas establecidos en las siguientes figuras puestas para la evaluacin
de los diferentes mecanismos fenotpicos de resistencia y la lectura de los halos se comparan con
el manual del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) - 2011

ENTEROBACTERIAS (PLACA 1 AJUSTARSE AL ESQUEMA OBLIGATORIAMENTE)

ENTEROBACTERIAS (ITU-INTERNADOS) AJUSTAR ESQUEMA PLACA 1 Y 2

PSEUDOMONAS (AJUSTAR ESQUEMA PLACA 1)

STAPHYLOCOCCUS SPP. (AJUSTAR ESQUEMA PLACA 1)

 INFORME

Muestra obtenida por:

Chorro medio
Sonda
Puncin suprapbica
Cateterismo vesical
Nefrostoma

pH. Densidad..

Examen en fresco

Sedimento (400X) clulas epiteliales planas por campo

Clulas redondas. por campo
Hemates por campo
Cilindros. Por campo
Leucocitos a) por campo (400X)
b) /mm3 (Cmara de Neubauer - optativo)
Gram (informar cualitativamente) optativo
Cultivo
Negativo
Recuento de colonias
Opciones a) negativo
b) no se obtuvo desarrollo
c) <102 UFC/ml (optativo)
Positivo

Recuento de colonias.UFC/ml

Identificacin 1).. 2)..

Pruebas de sensibilidad

Observaciones: - muestra con probable contaminacin

- se solicita nueva muestra para confirmar el diagnstico

- otras
 LQUIDOS DE PUNCIN
1- Lquido Cefalorraqudeo

TOMA DE MUESTRA

La toma de muestra corresponde al mdico y debe realizarse si es posible antes de haber

iniciado el tratamiento antibitico. Es importante recordar que junto a la toma de muestra
debe realizarse la toma de hemocultivos a fin de aumentar la probabilidad de hallazgos
bacteriolgico.

Se recogen en 2 tubos estriles, uno de los mismos para el estudio bacteriolgico. La llegada
al laboratorio debe ser inmediata puesto que el tiempo atenta contra la viabilidad de los
patgenos delicados, el transporte de la misma debe efectuarse manteniendo la muestra 35
37C.

PROCESAMIENTO

El material debe ser procesado inmediatamente, si esto no fuera posible, mantener en la

estufa a 35C y sembrar lo antes posible.

Examen macroscpico

Observar y anotar las siguientes caractersticas:

- Cantidad aproximada
- Presencia de cogulo
- Presencia de red de fibrina
- Presencia de sangre

Examen microscpico

- Centrifugar el LCR en forma estril durante 10 minutos a 1000rpm

- Separar el sobrenadante, tomar un ansada del sedimento y realizar 3 extendido para:
Fresco (tinta china), GRAM y Ziehl Neelsen.

Los hallazgos de este examen son comunicados inmediatamente al mdico.

Cultivo

Se realiza la siembra para aislamiento utilizando agar chocolate, CLDE y medio lquido (ICC +
Sangre). Se colocan la placa de Agar chocolate sembrada en atmsfera de 3-10% de CO2 a
35C (mtodo de la vela), el medio lquido y el lactosado se incuban en aerobiosis a 35C.

Observacin: se incuba hasta 72 horas.

 Lectura e interpretacin de los cultivos

Una vez producido el desarrollo bacteriano, luego de la incubacin a 35C, observar

detenidamente el tipo de colonia (morfologa, consitencia, tamao, hemolisis, aspecto).

Se realiza la coloracin de gram, segn el resultado de dicha coloracin de gram se procede

a la realizacin de pruebas bioqumicas correspondientes y se procede a su identificacin.

ANTIBIOGRAMAS

Neisseria meningitidis

Utilizando la tcnica de Kirby Bauer e incubando en la atmsfera hmeda de CO2 a 35

durante 24 horas, se realiza con los siguientes antibiticos:

Penicilina Cefotaxima Cefoxitina Cefepime Ceftazidima Tetraciclina Ciprofloxacina

Streptomicina

Streptococcus pneumoniae

Penicilina Vancomicina Eritromicina Claritromicina Telitromicina Tetraciclina

Levofloxacina Cotrimoxazol Cloranfenicol Rifampicina Clindamicina

Haemophilus influenzae

Ampicilina Ampicilina Sulbactam Amoxicilina/clavulnico Cefotaxima Cefuroxima

Cefepime Aztreonam Meropenem Ertapenem Imipenem Tetraciclina
Ciprofloxacina Trimetoprim sulfametoxazol Cloranfenicol Rifampicina

2- Hisopado Fauces

TOMA DE MUESTRA

Con ayuda de un baja lenguas, mantener baja la lengua del paciente y la garganta bien expuesta
e iluminada, frotar enrgicamente con el hisopo la parte posterior de la misma, las amgdalas y
toda parte donde haya inflamacin, exudado o ulceracin. Tener cuidado de no tocar con el
hisopo labios y lenguas.

PROCEDIMIENTO