PLANTA DE TRATAMIENTO DE AGUA

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PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIN DE BACTERIAS HETERTROFAS

POR EL MTODO DE FILTRO DE MEMBRANA

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1. OBJETIVO
Establecer el procedimiento para la cuantificacin de Bacterias hetertrofas por el mtodo de
filtro de membrana.

2. ALCANCE
Abarca desde la toma de la muestra, anlisis de la muestra, expresin de resultados

3. REFERENCIA
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater

4. RESPONSABILIDAD
Los responsables de este procedimiento son:
4.1. Jefe de Control de Calidad
4.2. Tcnico de Control de Calidad.
4.3. Asistente de Control de Calidad

5. DEFINICIONES Y ABREVIATURAS
5.1. Bacterias hetertrofas
Las bacterias hetertrofas sobreviven como parsitos, creciendo dentro de otros organismos
y utilizando tanto los nutrientes como la maquinaria celular de la clula husped. Son las
que cierran el ciclo de la materia en los ecosistemas al degradar cualquier sustancia
orgnica a sus elementos inorgnicos originales. Bacterias que no puede sintetizar su propio
alimento, y tiene por tanto que alimentarse de otros seres vivos o de productos orgnicos.

5.2 Medio de cultivo

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Un medio de cultivo es una solucin acuosa en la que estn presentes todas las sustancias
necesarias para el crecimiento y multiplicacin de los microorganismos en el laboratorio,
para luego proceder a su identificacin y llevar a cabo una serie de estudios
complementarios.

6. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

Se toma la muestra de acuerdo con la Tcnica de Toma de muestra. Anexo 1
Se procede con la Tcnica de Determinacin de Bacterias Hetertrofas por el mtodo de
filtro de membrana.
El analista que realiza sta operacin debe utilizar mandil, guantes, tapa boca y toca.

7. MONITOREO
El monitoreo lo realiza:
- El Jefe de Control de Calidad
- El Tcnico de Control de Calidad.

8. REGISTRO

Responsable del Tiempo de

Nombre del Registro Disposicin Final
Control Conservacin
Cuaderno de Laboratorio Jefe de Calidad 02 aos Destruccin

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9. VERIFICACION
El Jefe de Calidad verificar el correcto llenado de los registros, evaluar los resultados y
tomara las acciones correctivas necesarias.

10. ANEXOS
Anexo N01: Tcnica de Toma de Muestra
Anexo N02: Tcnica de Preparacin de medios y material
Anexo N03: Tcnica de Determinacin de Bacterias hetertrofas por el mtodo de filtro de
membrana.
Anexo N 04 Tcnica del Recuento y Registro.

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Anexo N01:
Tcnica Toma de muestra

1. OBJETIVO
Recolectar correctamente la muestra a analizar

2. PRINCIPIO DEL METODO

La recoleccin de la muestra es un punto crtico en el procedimiento de la evaluacin de la
calidad de agua .La seleccin del punto de muestreo tendr como requisito principal que la
muestra sea representativa.

3. MATERIALES
Frasco de vidrio de 250 ml autoclavado por 15 min a 120 C con Tiosulfato de sodio al 1%.
Turunda de algodn
Mechero de alcohol
Alcohol
Pinza

4. PROCEDIMIENTO
4.1 Recoleccin de la muestra en lnea (Agua tratada)

- Una vez retirados filtros u otros accesorios se proceder a una cuidadosa limpieza con
agua o alcohol.

- Con el grifo cerrado se flamear el extremo del mismo, mediante la llama obtenida con
un poco de algodn empapado de alcohol y sostenido con unas pinzas o bien una
lmpara de soldar.

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- Se abrir el grifo para que el agua fluya abundantemente y se renueve la contenida en la

tubera que la alimenta. Se destapar el frasco esterilizado sin tocar la boca del mismo
ni el interior del tapn.

- Todos los movimientos debern realizarse sin interrupciones, al abrigo de corrientes de

aire y con las mximas precauciones de asepsia.

4.2 Pozos y depsitos

- Si se dispone de bomba de captacin se opera como se ha indicado en el caso del grifo.
- Si no existe sistema de bombeo, no es posible obtener una muestra representativa.
- Con esta salvedad se introducir en la masa de agua el frasco de muestreo o un cubo lo
ms limpio posible, sostenidos con una cuerda y tomando la muestra tras haber agitado
la superficie del agua con el mismo recipiente.
- Tambin podrn utilizarse aparatos especiales lastrados que permiten introducir el frasco
esterilizado y destaparlo a la profundidad deseada. En estos casos debern utilizarse
frascos con tapn a presin

4.3 Depsito de agua o corriente (arroyo),

En ros o cursos de agua ser preciso considerar diversos factores, tales como:
profundidad, caudal, distancia a la orilla, etc. La muestra se tomar lo ms lejos posible
de la orilla, procurando no remover el fondo y evitando los remansos o zonas de
estancamiento.

Para tomar una muestra del agua de un lago o de un ro se sujetar el frasco por el fondo
en posicin invertida, sumergindolo completamente y dndole la vuelta en sentido
contrario a la corriente (ro) o desplazndolo horizontalmente en la direccin de la boca
del frasco (lago).

5. IDENTIFICACIN DE LA MUESTRA

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En el laboratorio se le asignar un cdigo a la muestra y se registrar en un cuaderno del trabajo

6. MANEJO Y PRESERVACIN DE LAS MUESTRAS

Verificar la correcta identificacin de la muestra (cdigo asignado en el laboratorio)

La muestra deber ser transportada al laboratorio lo antes posible, caso contrario se debe
mantener la muestra por debajo de 10C

Entre el muestreo y el inicio del examen el tiempo lmite es 30 horas.

7. RECOMENDACIONES
Se debe contar con guantes de ltex, cubre bocas, lentes de proteccin, mandil durante el
muestreo.
Enjuagar el muestreador con agua destilada o desionizada entre cada muestreo
No beber ni comer alimentos durante el muestreo. No tocarse los ojos o boca sin haberse
lavado, desinfectado las manos.

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Anexo N02: Tcnica de Preparacin de soluciones y material

1. OBJETIVO
Realizar una correcta preparacin de los medios y reactivos a usarse y contar con el material
adecuado para la realizacin de este anlisis.

2. SELECCIN DEL MEDIO

Se utiliza el Agar R2A por su bajo poder nutritivo, proporciona recuentos ms elevados que las
formulas altamente nutritivas. Base para el recuento de microorganismos heterotrficos en agua
potable tratada.
2.1 Agar R2A
2.1.1 Preparacin de Agar R2 A
Suspender 18.2 g del polvo en 1 litro de agua purificada.
Mezcle bien.
Caliente agitando frecuentemente y hierva durante 1 minuto para disolver
completamente el polvo.
Autoclave a 121 C durante 15 minutos.
2.1.2 Preparacin de las placas
Viertase porciones de 5 ml de medio estril en placas Petri de 50 x 9 mm .
Las placas preparadas se dejan solidificar a temperatura ambiente.
Las placas preparadas pueden guardarse en bolsas de plstico o envases bien
cerrados en un frigorfico, aunque es mejor no conservarlas durante ms de 1 semana.

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2.1.3 Recomendacin
Analice muestras del producto final para verificar su rendimiento usando cultivos de
control tpicos y estables.
2.2 Tiosulfato de Sodio al 1%
2.2.1 Preparacin de Tiosulfato de sodio al 1%
Disolver 1g de Tisulfato de sodio con 100 ml de agua destilada
3. MATERIAL
3.1 Esterilizacin de frascos de vidrio para toma de muestra
Frascos de vidrio autoclavable, de boca ancha y con tapa rosca. Agregar 1 ml de Tiosulfato
de sodio al 1% por cada 100ml de muestra que se va a recolectar. Cubrir la tapa con papel
Kraft atarlo con el cordel. Autoclavar por 15 min a 121 C

3.2 Esterilizacin de placas Petri

Apilar 10 placas bien limpias y envolverlas con papel kraft y atarla con pavilo. Esterilizar
con aire caliente a 180C por 2 horas

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Anexo N03:
Tcnica de Determinacin de bacterias hetertrofas por el mtodo de filtro de membrana

1.1. OBJETIVO
Recuento de bacterias hetertrofas en agua por el mtodo de filtro de membrana

1.2. PRINCIPIO DEL METODO

La tcnica del filtro de membrana (FM) es altamente reproducible, puede utilizarse para estudiar
volmenes relativamente grandes de muestra y proporciona resultados numricos ms rpidos que
el mtodo de tubos mltiples .La tcnica del filtro de membrana es extraordinariamente til para
controlar las posibles situaciones de urgencia en relacin con el agua potable y para estudiar
distintas aguas naturales .

1.3. MATERIALES EQUIPOS Y REACTIVOS

EQUIPOS
Incubadora
Equipo de filtracin
Equipo generador de vacio
MATERIALES
Mechero de Bunsen
Pipetas serolgicas
Placas Petri
Membranas pre esterilizadas de 0.45 um
Almohadillas absorbentes de 48 mm de dimetro

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Pinzas sin dientes con borde plano

Frascos para el muestreo
REACTIVOS
Medio R2A-Agar
Agua destilada
Alcohol etlico 96%
Agua de dilucin estril

1.4. PROCEDIMIENTO
1.4.1 Preparacin del porta filtro

Retirar la parte superior del porta filtro y con una pinza flameada y enfrada, colocar
una membrana filtrante estril, con la cara cuadriculada volteada para arriba,
centrando la parte superior del porta filtro.

Acoplar la parte superior del porta filtro teniendo cuidado para no daar la
membrana.

1.4.2 Preparacin de la muestra para la filtracin

Homogenizar la muestra, para ello se debe agitar un nmero no menor a 25

veces, inclinando el frasco y formando un ngulo de 45 entre el brazo y el
antebrazo.

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1.4.3 Anlisis

Verter cuidadosamente en el porta filtro 100 ml de muestra, evitando que el agua

sobrepase los bordes superiores

Conectar la bomba de vaco para proceder a la filtracin

Retirar el embudo y luego con una pinza estril retirar el filtro de membrana

Apagar la bomba de vaco al finalizar la operacin. Evitar secar excesivamente la

membrana filtrante.

Separar la parte superior del porta filtro y con una pinza cuyas extremidades sern
flameadas, retirar la membrana con cuidado para que la pinza toque apenas la parte
perifrica con cuidado de la misma , fuera del rea de filtracin. Acoplar
nuevamente la parte superior del porta filtro a la parte inferior

Para cuidar la asepsia colocar cuidadosamente la membrana, con la superficie

cuadriculada volteada hacia arriba, en la placa Petri con agar R2A

Despus de la filtracin y transferencia de las membranas filtrantes a las placas

Petri, colocar las placas Petri con el agar R2A en la incubadora a 35 +/- 0.5C
durante 48horas

1.4.4 Incubacin

Microrganismo Temperatura Tiempo de incubacin

Bacterias hetertroficas 35 +/- 0.5C 48 horas

Lavar nuevamente el porta filtro con agua de dilucin estril y proceder a la prxima
filtracin.

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1.5. Recuento
Elegir placas con una densidad ptima de 20 a 200 colonias por filtro
Casos:
Si existen 1 a 2 colonias por cuadrado (contar todas las colonias)
Si existen 3 a 10 colonias por cuadrado, contar 10 cuadrados y obtener la media por cuadrado.
Si existen de 10 a 20 colonias por cuadrado. Comunicar el recuento como mayor a 2000 veces
el reciproco de la dilucin

1.6. INTERFERENCIAS

1.7. REFERENCIAS
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater

1.8 RECOMENDACIONES
El analista deber usar guantes, mandil, tapa boca, toca
Antes de iniciar el examen, desinfectar la mesa de trabajo con hipoclorito de sodio

Los portafiltros deben estar estriles en el inicio de cada serie de filtraciones y estas series
no deben ser usados por ms de 30 muestras, si hubo un intervalo de 30 minutos entre una
filtracin y otra los porta filtros deben ser esterilizados nuevamente, para evitar
contaminacin accidental

Despus de la filtracin enjuagar el porta filtro 3 veces con porciones de 20-30 ml de agua
de dilucin estril, para evitar la retencin de alguna bacteria entre las paredes internas del
mismo

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