Microbiologa de los alimentos para consumo humano y animal.

Mtodo horizontal para la

enumeracin de estafilococos de coagulasa (enzimas) positiva (Staphylococcus aureus y
otras especies)
Parte 1: Tcnica que utiliza el medio agar de Baird-Parker. (ISO 6888-1:1999).
Prefacio
ISO (Organizacin Internacional de Normalizacin) es una federacin mundial de organismos de
normalizacin nacionales (organismos miembros de ISO). El trabajo de preparacin de las Normas
Internacionales normalmente se realiza a travs de los comits tcnicos de ISO. Cada organismo miembro
interesado en una materia para la cual se ha establecido un comit tcnico, tiene el derecho a estar
representado en dicho comit. Las organizaciones internacionales, gubernamentales y no gubernamentales,
en coordinacin con ISO, tambin participan en el trabajo. ISO colabora estrechamente con la Comisin
Electrotcnica Internacional (IEC) en todos los aspectos de normalizacin electrotcnica.
Las Normas Internacionales se redactan de acuerdo con las reglas establecidas en las Directivas ISO / IEC,
Parte 3.
Los Proyectos de Normas Internacionales adoptados por los comits tcnicos son enviados a los organismos
miembros para votacin. La publicacin como Norma Internacional requiere la aprobacin por al menos el
75% de los organismos miembros con derecho a voto.
La Norma Internacional ISO 6888-1 fue preparada por el Comit Tcnico ISO / TC 34, Productos alimenticios
agrcolas, Subcomit SC 9, Microbiologa.
Esta primera edicin de la norma ISO 6888-1, junto con la norma ISO 6888-2, anula y sustituye a la norma
ISO 6888: 1983, la cual ha sido revisada tcnicamente.
ISO 6888 consta de las siguientes partes, bajo el ttulo general de Microbiologa de los alimentos para
consumo humano y animal - Mtodo horizontal para la enumeracin de estafilococos de coagulasa positiva
(Staphylococcus aureus y otras especies):
- Parte 1: tcnica que utiliza el agar medio de Baird-Parker
- Parte 2: Tcnica de plasma de conejo utilizando un agar medio de fibringeno
Introduccin
0.1 Debido a la gran variedad de productos alimenticios, este mtodo horizontal no puede ser apropiado en
todos los detalles para ciertos productos. En este caso, los diferentes mtodos, que son especficos para
estos productos, se pueden usar si es estrictamente necesario por razones tcnicas justificadas. Sin
embargo, debe hacerse todo lo posible para aplicar este mtodo horizontal.
Cuando esta parte de la norma ISO 6888 es revisada, se tendr en cuenta toda la informacin disponible,
teniendo en cuenta el propsito por el cual se ha seguido este mtodo horizontal y las razones de las
desviaciones del mtodo en el caso de algunos productos en particular.
La armonizacin de los mtodos de prueba no puede ser inmediata y, para cierto grupo de productos, las
Normas Internacionales o nacionales ya podran existir, por lo que no aplicara su mtodo horizontal. Se
espera que cuando dichas normas sean revisadas, stas se modifiquen para que cumplan con esta parte
de la norma ISO 6888, de manera que las desviaciones que queden, eventualmente del mtodo horizontal,
sean las necesarias por razones tcnicas bien establecidas.
0.2 ISO 6888 describe dos mtodos horizontales (parte 1 y parte 2) para la enumeracin de estafilococos
de coagulasa positiva entre los cuales se encuentran las cepas enterotoxgenas. Se refiere principalmente
a Staphylococcus aureus, pero tambin con S. intermedius y ciertas cepas de S. hyicus.
En el caso general, se usar la parte 1 de la norma ISO 6888. Sin embargo, es preferible utilizar el
procedimiento descrito en la parte 2 (vase referencia [1]) solo para los productos alimenticios (como los
quesos elaborados con leche cruda y algunos productos de carne cruda) que puedan ser contaminados por:
- Estafilococos que forman colonias atpicas en un agar medio de Baird-Parker;
- Bases florales que pueden oscurecer las colonias que sean buscadas.
0.3 A los efectos de esta parte de la norma ISO 6888, la confirmacin de estafilococos se basa en una
reaccin de coagulasa positiva, pero se reconoce que algunas cepas de Staphylococcus aureus dan
reacciones dbiles de coagulasa positiva. Estas ltimas cepas se pueden confundir con otras bacterias, pero
pueden distinguirse de las dems bacterias mediante el uso de pruebas adicionales no incluidas en esta
parte de la norma ISO 6888, tales como la sensibilidad a la lisostafina, la produccin de hemolisina, de
nucleasa termoestable y de cido a partir de manitol (vase la referencia [2]).
1 Alcance
Esta parte de la norma ISO 6888 especifica un mtodo horizontal para la enumeracin de estafilococos de
coagulasa positiva en los productos destinados al consumo humano o la alimentacin de los animales,
mediante conteo de colonias obtenidas en un (medio de Baird-Parker) medio slido despus de la incubacin
aerbica a 35 C o 37 C.
2 Referencias normativas
Las siguientes normas contienen disposiciones que, mediante su referencia en este texto, constituyen
disposiciones de esta parte de la norma ISO 6888. Para las referencias fechadas, las modificaciones
posteriores, o las revisiones de cualquiera de estas publicaciones no aplica. Sin embargo, las partes en
acuerdos basados en esta parte de la norma ISO 6888 se les animan a investigar la posibilidad de aplicar
las ediciones ms recientes de los documentos normativos indicados a continuacin. Para referencias sin
fecha, la ltima edicin del documento normativo contemplado s aplica. Los miembros de ISO e IEC
mantienen registros de las normas internacionales en vigor.
ISO 6887-1, Microbiologa de los alimentos para el consumo humano y animal - Reglas para la preparacin
de la muestra de ensayo, de la suspensin inicial y diluciones decimales para examen microbiolgico - Parte
1: Reglas generales para la preparacin de la suspensin inicial y diluciones decimales.
ISO 7218, Microbiologa de los alimentos para el consumo humano y animal - Reglas generales para el
examen microbiolgico.
3 Trminos y definiciones
A los efectos de esta parte de la norma ISO 6888, se aplican los siguientes trminos y definiciones.
3.1 Estafilococos de coagulasa positiva
Las bacterias que forman colonias tpicas y / o atpicas en la superficie de un medio de cultivo selectivo y
que muestran una reaccin de coagulasa positiva cuando la prueba se realiza siguiendo el mtodo
especificado en esta parte de la norma ISO 6888
3.2 Enumeracin de estafilococos de coagulasa positiva
La determinacin del nmero de estafilococos de coagulasa-positiva encontrados por mililitro o por gramo
de muestra cuando la prueba se lleva a cabo de acuerdo con el mtodo especificado en esta parte de la
norma ISO 6888.
4- Principio
4.1 La inoculacin en la superficie de un medio de cultivo selectivo slido, se hace utilizando placas
duplicadas, con una cantidad especificada de la muestra de prueba si el producto es lquido, o con una
cantidad especificada de la suspensin inicial en el caso de otros productos.
La inoculacin, se realiza en las mismas condiciones, utilizando diluciones decimales de la muestra de
ensayo o de la suspensin inicial, con dos placas por dilucin.
4.2 la incubacin aerbica de las placas se hace a 35C o 37C1 y el examen despus de 24 o 48 horas.

1
La temperatura va de acuerdo a las partes interesadas y se indica en el reporte de la prueba.
4.3 Clculo del nmero de estafilococos de coagulasa positiva por mililitro o por gramo, de la muestra a partir
del nmero de colonias tpicas y/o atpicas obtenidas en las placas en niveles de dilucin escogidos a fin de
dar un resultado significativo, y confirmado por el resultado de un examen de coagulasa positiva.
5. Diluyente y medios de cultivo
5.1 General
Para la prctica de laboratorio actual, consulte IS0 7218.
5.2 Diluyente
Ver IS0 6887-1 y la norma especfica referente al producto a ser examinado.
5.3 Agar medio de Baird-Parker2
Nota: Comercialmente se pueden utilizar los medios disponibles. En tales casos, las instrucciones del
fabricante deben seguirse cuidadosamente.
5.3.1 Medio de base
5.3.1.1 Composiciones

Digerido pancretico de la casena 10,0g

Extracto de levadura 1,0g
Extracto de carne 5,0g
Piruvato de sodio 10,0g
L-Glicina 12,0g
Cloruro de litio 5,0g
Agar 12 g a 22g1
Agua, a un volumen final de 1000 ml
1 Dependiendo de la fuerza del gel del agar.

5.3.1.2 Preparacin
Disuelva los componentes o la base completa deshidratada en agua hirviendo.
Si es necesario, ajuste el pH de manera que despus de la esterilizacin sea de 7,2 0,2 a 25C.
Pasar el medio en cantidades de 100 ml a matraces o botellas (6.5) de capacidad adecuada.
Esterilizar el medio durante 15 minutos a 121 C.
5.3.2 Soluciones
5.3.2.1 Solucin de telurito de potasio
5.3.2.1.1 Composicin

Telurito de potasio1 (K2 TeO3) 1,0g

Agua 100ml
1 Serecomienda asegurarse de ante mano que el telurito de potasio
disponible es adecuado para esta prueba (vase 5.3.2.1.2)

5.3.2.1.2 Preparacin
Disuelva el telurito de potasio completamente en el agua con calentamiento mnimo.
El slido debe ser fcilmente soluble. Si un material insoluble blanco est presente en el agua, deseche el
polvo.

2
El agar medio es el de Baird-Parker (vase la referencia [3]) con la adicin de sulfametazina (vase la referencia [4]) si se
sospecha la presencia de Proteus.
Esterilice por filtracin mediante membranas de tamao de poro de 0,22 m
La solucin puede ser almacenada mximo por un mes a +3 C 2 C
Deseche la solucin si se forma un precipitado blanco.
5.3.2.2 Emulsin de yema de huevo (concentracin aproximada del 20% o de acuerdo a las indicaciones
del fabricante)
NOTA: Si una preparacin comercial est disponible, se debera utilizar:
Utilice huevos de gallina frescos con sus conchas intactas. Limpie los huevos con un cepillo usando un
detergente lquido. Enjuague con flujo de agua, luego desinfecte las conchas, ya sea por inmersin en etanol
(fraccin de volumen de 70%) durante 30s y djelas secar al aire libre, o por pulverizacin con alcohol
seguido de esterilizacin por llama.
Procediendo en condiciones aspticas, rompa cada huevo y separe la yema de su clara, transfirindola
desde una de las mitades de la concha hacia la otra. Coloque las yemas en un matraz estril (6.5) y aada
cuatro veces su volumen en agua esterilizada. Mzclelo bien. Caliente la mezcla en un bao de agua (6.4),
fijado a 47 C por 2 horas y djelo por 18 a 24 horas ms a +3 C 2 C para permitir la formacin de un
precipitado. Aspticamente, recoja el lquido sobrenadante en un matraz fresco que se pueda utilizar.
La emulsin se puede almacenar a +3 C 2 C por un mximo de 72 horas.
5.3.2.3.1 Composicin

Sulfametazina 0,2g
Solucin de hidrxido de sodio, c(NaOH) = 0,1 mol/l 10ml
Agua 90ml

5.3.2.3.2. Preparacin
Disuelva la sulfametazina en la solucin de hidrxido de sodio.
Diluir hasta 100 ml con el agua.
Esterilizar por filtracin mediante membranas de tamao de poro de 0,22 m.
La solucin puede ser almacenada mximo por un mes a +3 C 2 C.
5.3.3 El medio completo
5.3.3.1 Composicin

Medio de base (5.3.1) 100ml

Solucin de telurito de potasio (5.3.2.1) 1,0 ml
Emulsin de yema de huevo (5.3.2.2) 5,0ml
Solucin de sulfametazina (5.3.2.3) (si es necesario) 2,5ml

5.3.3.2 Preparacin
Fundir el medio de base, luego enfriarlo a 47 C, aproximadamente, por medio del bao de agua (6.4).
Aadir, bajo condiciones aspticas, las otras dos soluciones (5.3.2.1 y 5.3.2.2) y si es necesario (si las
especies de Proteus se sospechan en la muestra de la prueba) la solucin de sulfametazina (5.3.2.3), siendo
cada solucin previamente calentada en bao de agua a 47 C, mezclando bien despus de cada adicin.
5.3.4 Preparacin de placas de agar
Coloque la cantidad correspondiente del medio completo (5.3.3) en placas de Petri estriles con el fin de
obtener un espesor de agar de aproximadamente 4 mm y djelo solidificar.
Las placas pueden conservarse, antes de secarse, por un mximo de 24 horas a +3 C 2 C.
NOTA: Las instrucciones del fabricante deben seguirse con relacin al perodo de almacenamiento de las
placas preparadas industrialmente.
Antes de su utilizacin, se secan las placas, preferiblemente con las tapas y la superficie del agar hacia
abajo, en un horno a una temperatura entre 25 y 50 C, hasta que las gotas hayan desaparecido de la
superficie del medio.
5.4 Caldo (Medio) de infusin de cerebro corazn
5.4.1 Composicin

Digestin enzimtica de tejidos animales 10,0 g

Infusin de cerebro de ternera deshidratado 12.5 g
Infusin de corazn de res deshidratada 5,0 g
Glucosa 2,0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Fosfato disdico de hidrgeno anhidro (Na2, HPO4,) 2,5 g
Agua 1000 ml

5.4.2 Preparacin
Disolver los componentes o el medio completo deshidratado en agua. Calentarlo si es necesario.
Ajustar el pH de manera que despus de la esterilizacin sea de 7,4 0,2 a 25 C.
Transferir el medio de cultivo en cantidades de 5 ml a 10 ml a tubos o botellas de (6.5) apropiada capacidad.
Esterilizar el medio durante 15 minutos a 121C.
5.5 Plasma de conejo
Utilice plasma de conejo deshidratado comercialmente disponible y rehidrtelo de acuerdo a las
instrucciones del fabricante.
Si el plasma de conejo deshidratado no est disponible, diluya un volumen de plasma de conejo estril fresco
con tres volmenes de agua purificada.
Aada solucin de EDTA (cido etilendiaminotetraactico) para dar 0,1% de EDTA en el plasma rehidratado
o diluido si el citrato de potasio o el citrato de sodio se han utilizado como anticoagulante de plasma3.
A menos que se indique lo contrario por el fabricante, el plasma rehidratado o diluido deber ser utilizo
inmediatamente.
Antes de utilizarse, pruebe cada lote de plasma con cepas de estafilococos de coagulasa positiva y cepas
de estafilococos de coagulasa negativa.
6. Aparato y cristalera
NOTA: El aparato desechable es una alternativa aceptable para la cristalera reutilizable si se tienen
especificaciones adecuadas.
Equipos de laboratorio microbiolgico habitual (vase ISO 7218) y, en particular, los siguientes.
6.1 Aparato para la esterilizacin seca (horno) y esterilizacin hmeda (autoclave)
Ver IS0 7218.
6.2 Incubadora, para mantener de los medios inoculados, placas y tubos dentro del rango de temperatura
de 35 C 1 C o 37 C 1C.

3
El plasma oxalatado o heparinizado no requiere EDTA (vase la referencia [5]).
6.3 Armario secador o una incubadora, capaz de mantenerse a una temperatura entre 25C 1 C y 50C
1 C.
6.4 Bao de agua, o aparato similar, capaz de mantenerse a una temperatura de 47 C 2 C.
6.5 Tubos de ensayo, frascos (matraces) o botellas con tapones de rosca, de capacidad apropiada,
para la esterilizacin y el almacenamiento de medios de cultivo y la incubacin de los medios lquidos; en
particular, los tubos de hemlisis estriles, o botellas de fondo redondo de dimensiones aproximadas de 10
mm x 75 mm.
6.6 Placas de Petri, estriles, hechas de vidrio o plstico.
6.7 Alambre recto (ver ISO 7218) y pipeta Pasteur.
6.8 Pipetas graduadas de distribucin total, de las capacidades nominales de 1 ml, 2 ml y 10 ml,
graduadas en divisiones de 0,1 ml, 0,1 ml y 0,5 ml, respectivamente.
6.9 Esparcidores, estriles, hechos de vidrio o plstico.

6.10 Metro de pH, capaz de ser ledo cerca de la 0,01 unidad de pH a 25 C, lo que permite realizar
mediciones precisas de 0,1 unidad de pH.

7 Muestreos
El muestreo no es parte del mtodo especificado en esta parte de la IS0 6888. Si no existe una norma
especfica referente al muestreo del producto en cuestin, se recomienda que las partes interesadas lleguen
a un acuerdo sobre este tema.
Es importante que el laboratorio reciba una muestra que sea verdaderamente representativa y que no haya
sido daada o cambiada durante el transporte o el almacenamiento.

8 Preparacin de la muestra
Preparar la muestra de ensayo en conformidad con la Norma Internacional especfica adecuada al producto
en cuestin. Si no hay una norma internacional especfica disponible, se recomienda que las partes
interesadas lleguen a un acuerdo sobre este tema.

9 Procedimiento

9.1 Porcin de prueba, suspensin inicial y diluciones

Ver ISO 6887-1 y la norma especfica adecuada al producto afectado.

9.2 Inoculacin
9.2.1 Transferir, por medio de una pipeta estril (6.8), 0,1 ml de la muestra de ensayo si es lquido, o 0,1 ml
de la suspensin inicial (dilucin 10-1) en el caso de otros productos, a cada una de las dos placas de agar.
Repita el procedimiento para la dilucin 10-2 y para posteriores diluciones decimales, si es necesario.

9.2.2 Si para algunos productos es deseable contar nmeros bajos de estafilococos de coagulasa positiva,
los lmites de deteccin se pueden levantar por un factor de 10 mediante la inoculacin de 1,0 ml de la
muestra de ensayo si es lquido, o 1,0 ml de la suspensin inicial para otros productos, ya sea en la superficie
de una placa de agar grande (140 mm) o en la superficie de tres pequeas placas de agar (90 mm). En
ambos casos, prepare duplicados mediante el uso de dos placas de gran tamao o seis pequeos.

9.2.3 Abra cuidadosamente el inculo lo ms rpidamente posible sobre la superficie de la placa de agar,
tratando de no tocar los lados del plato con el separador (6.9). Deje que las placas se sequen con sus tapas
por aproximadamente 15 min a la temperatura del laboratorio.

9.3 Incubacin
Invertir las placas preparadas de acuerdo con 9.2.3 e incbelas durante 24 h 2 h luego volva a incubarlas
durante otras 24 h 2 h en la incubadora (6.2) a 35 C o 37 C4.

9.4 Seleccin de placas e interpretacin

9.4. Despus de incubar durante 24 h 2 h, marque en la parte inferior de las placas las posiciones de las
colonias tpicas presentes (Ver nota 1).
Re-incube todas las placas a 35 C o 37C5 por 24 h 2 h ms, y marque nuevas colonias tpicas. Tambin
marque las colonias atpicas presente (ver nota 1).
Tome para enumeracin slo aquellas placas (vase la nota 2) que contienen como mximo 300 colonias
con 150 colonias tpicas y / o atpicas en dos diluciones sucesivas. Una de las placas contendr al menos
15 colonias. Seleccione para confirmar (9.5) un nmero dado A (en general 5 colonias tpicas si slo hay
colonias tpicas, o 5 colonias atpicas si solo hay colonias atpicas, o 5 colonias tpicas y 5 colonias atpicas
si ambos tipos estn presentes en cada placa).

Si hay menos de 15 colonias tpicas y / o atpicas presentes en las placas inoculadas con producto lquido
sin diluir o la dilucin ms baja de otros productos, es posible hacer un conteo estimado como se describe
en 9.4.3 y 10.2.

NOTA 1: Las colonias tpicas son de color negro o gris, brillantes y convexas (1 mm a 1,5 mm de dimetro
despus de la incubacin por 24 horas y de 1,5 mm a 2,5 mm de dimetro despus de la incubacin por 48
h) y rodeada por una zona clara. Despus de la incubacin de al menos 24 h un anillo opalescente,
inmediatamente en contacto con las colonias, podra aparecer en la zona clara.

Las colonias atpicas pueden presentar una de las siguientes morfologas:

a) colonias negras brillante con o sin un borde blanco estrecho; la zona clara est ausente o es apenas
visible y el halo opaco est ausente o es apenas visible;

b) colonias grises libres de zonas claras.

Las colonias atpicas se forman principalmente de cepas de estafilococos de coagulasa positiva que
contaminan, por ejemplo, productos lcteos, camarones y menudos. Con menos frecuencia se forman por
cepas de estafilococos de coagulasa positiva que contaminan otros productos.

NOTA 2: Las bacterias que pertenecen a gneros distintos de estafilococos pueden dar colonias con una
apariencia de estafilococos similares. El examen microscpico de la tintura de Gram, antes de la
confirmacin, permitir a la distincin de otros gneros de estafilococos.

9.4.2 Si un inculo de 1,0 ml se extendiera a lo largo de tres placas (vase 9.2.2), el tratamiento de estas
placas sera como el de una sola en todos los procedimientos de conteo y confirmacin posteriores.

9.4.3 Para hacer un conteo estimado de un nmero menor de estafilococos de coagulasa positiva, se deben
retener todas las placas que contengan las colonias tpicas y atpicas. Seleccionar todas las colonias para
la confirmacin dentro de los lmites establecidos anteriormente.

9.5 Confirmacin (prueba de coagulasa)

De la superficie de cada colonia seleccionada (9,4), retire un inculo con un alambre estril (6,7) y transfiralo
a un tubo o una botella para infusin de cerebro corazn (5.4).

Incubar a 35C o 37C durante 24 h 2 h.

Aada aspticamente 0,1 ml de cada cultivo con 0,3 ml de plasma de conejo (5,5) (a menos que otras
cantidades estn especificadas por el fabricante) en tubos estriles de hemlisis o botellas (especificadas
en 6.5), e incbelos a 35 o 37 C.

4
La temperatura va de acuerdo a las partes interesadas y se indica en el reporte de la prueba.
5
La temperatura va de acuerdo a las partes interesadas y se indica en el reporte de la prueba.
Al inclinar el tubo, examine para la coagulacin del plasma despus de 4 horas a 6 horas de incubacin y,
si la prueba es negativa, vuelva a examinar a las 24 h de incubacin, o examine en los tiempos de incubacin
especificados por el fabricante.
Considere la prueba de coagulasa positiva si el volumen de cogulo ocupa ms de la mitad del volumen
original del lquido.
Como control negativo, para cada lote de plasma, aadir 0,1 ml de caldo de infusin de cerebro-corazn
estril (5,4) a la cantidad recomendada de plasma de conejo (5,5) e incbelo sin inoculacin. Para que la
prueba sea vlida, el plasma de control no deber mostrar signos de coagulacin.
10 Expresin de resultados
10.1 Caso general
10.1.1 Clculo del nmero a de estafilococos de coagulasa positiva identificados para cada placa
seleccionada
Calcule para cada una de las placas el nmero a de un estafilococo de coagulasa positiva identificado, de
acuerdo con la ecuacin:

= +

Dnde:
Ac es el nmero de colonias tpicas sometidas a la prueba de la coagulasa (9,5);
Anc es el nmero de colonias atpicas sometidas a la prueba de la coagulasa (9,5);
bc es el nmero de colonias tpicas que han demostrado ser coagulasa positiva;
bnc es el nmero de colonias atpicas que han demostrado ser coagulasa positiva;
cc es el nmero total de colonias tpicas visto en la placa (9.4);
cnc es el nmero total de colonias atpicas visto en la placa (9.4).
Redondear a un nmero entero (vase ISO 7218).
10.1.2 Clculo del nmero N de estafilococos de coagulas positiva identificados presentes en la
porcin de la prueba
Para esas placas que contienen un mximo de 300 colonias, con 150 colonias tpicas y / o atpicas en dos
diluciones consecutivas, calcule el nmero de estafilococos de coagulasa positiva para cada placa como se
especifica en 1 0.1 .1 y calcule, como una medida ponderada de las dos diluciones sucesivas, el nmero N
de estafilococos de coagulasa positiva identificados presentes en la muestra de ensayo, usando la siguiente
ecuacin:

=
V(1 + 0,12 )
Dnde

3es el volumen de inculo en cada plato, en mililitros;

V es el volumen de inculo en cada plato, en mililitros;

n1 es el nmero de placas seleccionadas en la primera dilucin;
n2 es el nmero de placas seleccionadas en la segunda dilucin;
 es la tasa de dilucin correspondiente a la primera dilucin seleccionada (la suspensin inicial es
d
una dilucin).
Redondear los resultados calculados con dos cifras significativas (vase IS0 7218).
Informe el resultado como el nmero de estafilococos de coagulasa positiva por mililitro (productos lquidos)
o por gramo (otros productos), expresado como un nmero entre 1,0 y 9,9 inclusive multiplicado por 10x
donde x es la potencia apropiada de 10.
10.1.3 Ejemplo
Un conteo de un producto despus de la inoculacin con 0,1 ml del producto dio los siguientes resultados:
- Para la primera dilucin seleccionada (10-2): 65 colonias tpicas y 85 colonias tpicas y ninguna colonia
atpica.
- Para la segunda dilucin seleccionada (10-3): 3 colonias tpicas y 7 colonias tpicas sin ninguna colonia
atpica.
Los siguientes nmeros fueron insertados:
- A partir de 65 colonias, 5 colonias fueron insertadas y las 5 resultaron ser positivas a la coagulasa, dando
a = 65;
- A partir de 85 colonias, 5 colonias fueron insertadas, 3 de las cuales resultaron ser positivas a la coagulasa,
dando a = 51;
- A partir de 3 colonias, las 3 fueron insertadas y resultaron ser de coagulasa positiva, dando a = 3;
- A partir de 7 colonias, 5 colonias fueron insertadas y las 5 resultaron ser positivas a la coagulasa, dando a
= 7.

65 + 51 + 3 + 7
= = 57 272
0,22 x 102
El resultado, despus de redondearlo es 5,7 x 104.
10.2 Estimacin de nmeros bajos
10.2.1 Si los dos platos correspondientes a la muestra de la prueba (los productos lquidos) o la suspensin
inicial (otros productos) contienen cada uno menos de 15 colonias identificadas, reporte el resultado de la
siguiente manera.
a) Para los productos lquidos, el nmero estimado de estafilococos de coagulasa positiva por mililitro:

=
2
Dnde

3es la suma de las colonias de estafilococos de coagulasa positivos identificados (10.1.1) en las dos
placas seleccionadas:
V es el volumen repartido en cada plato.

b) Para los dems productos, la cantidad estimada de estafilococos coagulasa positiva por gramo:

=
2
Dnde
 3es la suma de las colonias de estafilococos de coagulasa positiva identificados (10.1.1) en las dos
placas seleccionadas;
d es la tasa de dilucin de la suspensin inicial;
V es el volumen repartidos en cada placa.
10.2.2 Si las dos placas, correspondiente a la muestra de ensayo (los productos lquidos) o la suspensin
inicial (otros productos) no contienen colonias de estafilococos de coagulasa positiva y si la inoculacin se
ha realizado con 0,1 ml de muestra, informe el resultado de la siguiente manera (caso general de un 0,1 ml
de inculo);
- Menos de 10 estafilococos de coagulasa positiva por mililitro (productos lquidos);
- Menos de 10/d estafilococos de coagulasa positiva por gramo (otros productos), donde d es la tasa de
dilucin de la suspensin inicial.
Si la inoculacin se ha realizado con 1 ml de muestra, se debe reportar los resultados de la siguiente
manera:
- Menos de 1 estafilococo de coagulasa positiva por mililitro (productos lquidos);
- Menos de 1/d estafilococo de coagulasa positiva por gramo (otros productos).
11 Precisin
Ver IS0 7218.
12 informe de prueba
El informe de la prueba debe especificar:
- Toda la informacin necesaria para la identificacin completa de la muestra;
- El mtodo de muestreo utilizado, si se conoce;
- El mtodo de ensayo utilizado con referencia a esta parte de la IS0 6888;
- La temperatura de incubacin utilizada;
- Todos los detalles operativos no especificados en esta parte de la IS0 6888, o considerados
opcionales, junto con los detalles de cualquier circunstancia que pueda haber influido en los
resultados de la prueba;
- Los resultados obtenidos.